JP2017501711A5 - - Google Patents
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- 可変重鎖ドメイン(VH)及び可変軽鎖ドメイン(VL)を含む、二重特異性抗体またはその抗原結合性断片を作製する方法であり、二重特異性抗体のVH及びVLは共に対合して、第1のエピトープ及び第2のエピトープに特異的に結合する抗原結合部位を形成し、該方法は
(a)VH及びVLを含む抗体を提供する工程であって、VH及びVLは共に対合して、第1のエピトープには結合するが第2のエピトープには結合しない抗原結合部位を形成し、かつ、前記抗体はVLの位置32、50、または91において静電的または疎水性のアミノ酸を少なくとも一つ含む、工程、
(b)工程(a)の抗体の前記VHをコードする核酸配列を改変する工程であって、1個以上の溶媒接近可能なアミノ酸残基が改変される、工程、
(c)VL及び工程(b)で改変されたVHを発現させる工程、及び
(d)VL及び工程(c)で改変されたVHを含む二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片を選択する工程であって、VH及びVLは共に対合して、第1のエピトープ及び第2のエピトープに特異的に結合する抗原結合部位を形成する、工程
を含む、方法。 - 位置32、50、または91のアミノ酸の少なくとも2個は静電的または疎水性である、請求項1に記載の方法。
- 位置32、50及び91の3アミノ酸すべてが、静電的または疎水性である、請求項1に記載の方法。
- 静電的残基はチロシンである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 疎水性残基はトリプトファンである、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- VHをコードする核酸配列を、複数の天然に存在する重鎖アミノ酸配列の多様性に基づいて改変する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 溶媒露出残基の位置が、VHの位置33、34、50〜58、及び95〜97からなる群から選択されるアミノ酸残基位置である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(a)の抗体のVLをコードする核酸配列を改変し、ここで、1個以上の溶媒接近可能なアミノ酸残基を改変することをさらに含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 溶媒露出残基の位置は、VLの93〜96のアミノ酸から選択されるアミノ酸残基の位置である、請求項8に記載の方法。
- 工程(d)の選択の間に、改変されたVHがVLと共にファージに提示される、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(a)の抗体が、軽鎖可変領域の相補性決定領域である、アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、及びアミノ酸配列QQDYTSPWTF(配列番号11)を含むCDRL3を含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(a)の抗体が、重鎖可変領域の相補性決定領域である、アミノ酸配列DYSMH(配列番号13)を含むCDRH1、アミノ酸配列VWINTETGEPTYADDFK(配列番号17)を含むCDRH2、及びアミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3を含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(d)の二重特異性抗体の抗原結合部位が、前記第1のエピトープ及び第2のエピトープ双方を排他的に結合する、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 工程(d)の二重特異性抗体の抗原結合部位が、前記第1のエピトープ及び第2のエピトープに同時に結合する、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 第1のエピトープが1個の生物学的分子由来であり、第2のエピトープがその同じ生物学的分子由来である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 第1のエピトープが第1の生物学的分子由来であり、第2のエピトープが第2の生物学的分子由来である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 第1の生物学的分子及び第2の生物学的分子が、IL4/IL5、IL4/IL13からなる群から選択される、請求項16に記載の方法。
- 第1の生物学的分子及び第2の生物学的分子が、サイトカインである、請求項16に記載の方法。
- 第1または第2の生物学的分子が、in vivoで前記抗体に結合した場合に前記二重特異性抗体の半減期を延長できる分子である、請求項16に記載の方法。
- 第1または第2の生物学的分子が、血清アルブミンまたは胎児性Fc受容体(FcRn)である、請求項16に記載の方法。
- 第1または第2の生物学的分子が、in vivoで前記抗体に結合した場合に二重特異性抗体のエフェクター機能を高めることができる分子である、請求項16に記載の方法。
- 第1または第2の生物学的分子が、ナチュラルキラー細胞またはマクロファージ上の細胞表面タンパク質に結合する、請求項16に記載の方法。
- 細胞表面タンパク質がFc受容体またはC1qである、請求項22に記載の方法。
- 二重特異性抗体のVH及びVLが共に対合して、第1のエピトープまたは第2のエピトープに10−6以下のKDで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項1〜23のいずれか一項に記載の方法。
- 二重特異性抗体のVH及びVLが共に対合して、第1のエピトープまたは第2のエピトープに10−9以下のKDで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項24に記載の方法。
- 二重特異性抗体のVH及びVLが共に対合して、第1のエピトープまたは第2のエピトープに10−12以下のKDで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項25に記載の方法。
- 二重特異性抗体のVH及びVLが共に対合して、第1のエピトープ及び第2のエピトープに10−6以下のKDで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項1〜23のいずれか一項に記載の方法。
- 二重特異性抗体のVH及びVLが共に対合して、第1のエピトープ及び第2のエピトープに10−9以下のKDで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項27に記載の方法。
- 二重特異性抗体のVH及びVLが共に対合して、第1のエピトープ及び第2のエピトープに10−12以下のKDで特異的に結合する抗原結合部位を形成する、請求項28に記載の方法。
- 第1の生物学的分子及び第2の生物学的分子が、構造的に類似していない、請求項15〜29のいずれか一項に記載の方法。
- 選択工程(d)が、ディープシークエンシング(deep sequencing)を含む、請求項1〜30のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1に記載の方法により作製される、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 二重特異性抗体がモノクローナル抗体である、請求項32に記載の単離された二重特異性抗体。
- 断片がFabまたはscFvである、請求項32に記載の単離された二重特異性抗体。
- 二重特異性抗体がIgGである、請求項32に記載の単離された二重特異性抗体。
- 図4A、4B、4C、7A、7C、または7Dの抗体のいずれか1抗体のアミノ酸配列を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYTSPWTF(配列番号11)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYDIH(配列番号14)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列VWINTETGEPTYADDFK(配列番号17)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列EILFYGMDY(配列番号21)を含むCDRH3
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYTSPWTF(配列番号11)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYFIH(配列番号15)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列AGIVYDATGFTTYADDFK(配列番号18)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYTPFPLTF(配列番号12)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYLMH(配列番号16)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列AVIVSITGRTYYADDFK(配列番号19)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYTSPWTF(配列番号11)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYSMH(配列番号13)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列GVIFQSGATYYADDFK(配列番号22)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYTSPWTF(配列番号11)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYSMH(配列番号13)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列GIIFYTGHTYYADDFK(配列番号23)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYX1X2PWTF(配列番号24)を含むCDRL3、ここで、X1はThr、Ile、Leu、またはLysであり、X2はSerまたはHisである、
(iv)アミノ酸配列DYFIH(配列番号15)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列X1GIVYDATGFTX2YAX3X4FK(配列番号25)を含むCDRH2、ここで、X1はAlaまたはGly、X2はThr、Ile、Val、またはAla、X3はAsp、Val、またはGlu、かつ、X4はAsp、Glu、Asn、Ser、Ile、Leu、Thr、Ala、またはPheである、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYTHPWTF(配列番号27)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYFIH(配列番号15)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列GGIVYDATGFTTYAEEFK(配列番号28)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む、請求項41に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - 以下の6つのCDR:
(i)アミノ酸配列KASQSVINDAA(配列番号9)を含むCDRL1、
(ii)アミノ酸配列YTSHRYT(配列番号10)を含むCDRL2、
(iii)アミノ酸配列QQDYKHPWTF(配列番号31)を含むCDRL3、
(iv)アミノ酸配列DYFIH(配列番号15)を含むCDRH1、
(v)アミノ酸配列AGIVYDATGFTVYADDFK(配列番号32)を含むCDRH2、及び
(vi)アミノ酸配列GGIFYGMDY(配列番号20)を含むCDRH3
を含む、請求項41に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。 - アミノ酸配列GRX1TITX2DX3STSTX4(配列番号26)を含むフレームワーク領域3(FR3)をさらに含み、ここで、X1はValまたはPhe、X2はArgまたはIle、X3はThr、Phe、Met、またはPro、及びX4はAlaまたはValである、請求項42〜44のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 配列番号1、5、29、または33のアミノ酸配列から選択される軽鎖可変領域及び配列番号2、3、4、6、7、8、30、または34から選択される重鎖可変領域を含む、単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体、またはその抗原結合性断片が、IL4を500nM以下のKdで、また、IL5を約900nM以下のKdで結合する、請求項38、39、及び42〜46のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体が、IL4を100nM以下のKdで、また、IL5を約100nM以下のKdで結合する、請求項38、39、及び42〜46のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体が、IL4を10nM以下のKdで、また、IL5を約50nM以下のKdで結合する、請求項38、39、及び42〜46のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体が、IL4を500nM以下のKdで、また、IL13を約900nM以下のKdで結合する、請求項40、41、及び46のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体が、IL4を100nM以下のKdで、また、IL13を約100nM以下のKdで結合する、請求項40、41、及び46のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体が、IL4、IL5、またはIL13のその受容体への結合を阻害または阻止する、請求項36〜51のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項36〜51のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記抗体がIgG抗体である、請求項36〜51のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 前記断片が、Fab断片または一本鎖可変断片(scFv)である、請求項36〜51のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- フレームワーク配列の少なくとも一部がヒトのコンセンサスフレームワーク配列である、請求項36〜51のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全ヒト抗体である、請求項32〜51のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片。
- 請求項32〜57のいずれか一項に記載の抗体を含む医薬組成物。
- 請求項32〜57のいずれか一項に記載の単離された二重特異性抗体、またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項59に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 請求項60に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 請求項32〜57のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合性断片を作製する方法であって、請求項60に記載のベクターを含む宿主細胞を培養すること、及び前記抗体を回収すること、を含む方法。
- 被検体の喘息を治療するための医薬であって、請求項32〜57のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗体断片を含み、ここで、該医薬は、前記被検体の前記喘息を治療または予防するのに十分な期間かつ量で投与される、医薬。
- IgE拮抗薬、抗ヒスタミン薬、テオフィリン、サルブタモール、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、クロモグリク酸ナトリウム、ステロイド、及び抗炎症剤からなる群から選択される、少なくとも一つの追加の喘息治療薬がさらに投与される、請求項63に記載の医薬。
- 喘息がアレルギー性喘息である、請求項63または64に記載の医薬。
- 被検体の増殖性障害を治療するための医薬であって、請求項32〜57のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗体断片を含み、ここで、該医薬は、前記被検体の前記増殖性障害を治療または予防するのに十分な期間かつ量で投与される、医薬。
- 前記増殖性障害が癌である、請求項66に記載の医薬。
- 化学療法薬、細胞障害剤、及び抗血管新生薬からなる群から選択される追加の抗増殖剤が前記被検体にさらに投与される、請求項67に記載の医薬。
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