JP2016047902A - 高分子化合物、コーティング材、コーティング材を被覆した成形体、並びにその製造方法 - Google Patents
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Abstract
【課題】細胞培養容器の表面に対する細胞の接着、伸展増殖を防止し良好な三次元細胞凝集塊を得るための親水性処理用表面コーティング材並びにこれを表面コートした細胞培養容器並びにその製造方法を提供する。【解決手段】下式で表わされる主として側鎖にホスホコリン基を有する（メタ)アクリレートモノマー並びに側鎖にアジドシンナモイル基を有する（メタ）アクレートモノマーを共重合して得られる高分子化合物、前記高分子化合物を使用した親水性処理用表面コート材、さらに前記コート材を成形体に被覆することで得られる表面にコート材が被覆された成形体、並びに前記親水性処理用コーティング材を容器表面に表面コートする成形体の製造方法。【選択図】なし
Description
本発明は、高分子化合物、コーティング材、コーティング材を被覆した成形体並びにその製造方法に関する。
細胞培養容器は表面を親水性処理して細胞付着を防止する必要があり、これまでに様々な種類の処理がなされている。
例えば、特許文献１には、ホスホリルコリン基を有する親水性メタクリレートにブチルメタクリレートなどの疎水性メタクリレートを共重合したポリマー溶液を容器表面に塗布乾燥することで親水性としている。また、特許文献２、３にはホスホコリン基を有する親水性メタクリレートと側鎖にアジド基を有する光反応性メタクリレート、更に必要な場合は疎水性のメタクリレートなどを共重合したもので容器表面に塗布する前に表面を酸素プラズマ処理してその後ポリマーを塗布した後、ＵＶ照射してアジド基をナイトレンに変え容器表面のラジカルイオンや親水化処理ポリマー内で架橋させて強固に容器表面に結合させているものが開示されている。
特許文献１に記載の技術は、ポリマー処理は容器と共有結合で接続されていないため強い処理で容器表面から剥離または染み出しが生じる。特許文献２，３に記載の技術は、アジド基からＵＶ照射で生成するナイトレンで容器表面と共有結合できるものの、剥離、染み出しを十分に防止できない可能性がある。
本発明は、上記に鑑みてなされたものであり、容器と強固に結合し、かつ分子内でも架橋する高分子化合物、該高分子化合物を用いたコーティング材を提供することにある。
このような目的は、下記（１）から（１０）に記載の本発明により達成される。
（１）下記一般式（１）で示される構造を有することを特徴とする高分子化合物。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は互いに独立して、置換基を有しても良いフェニル基又は−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−
、−Ｏ−、もしくは−Ｓ−で示される基を表わし；Ｒ５は置換基を有しても良いフェニル基又は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−で示される基を表わし；ｌ及びｍは互いに独立して、２以上の整数を表わし；ｎは１以上の整数を表わし；ａ及びｂは互いに独立して２以上の整数を表わし；ｃは０もしくは１以上の整数を表わす。；Ｒ１を含む構造単位とＲ３を含む構造単位とＲ６を含む構造単位はランダムな順序で結合するか、またはブロック状態で結合している。）
（２）一般式（１）のＲ２、Ｒ４、Ｒ５，またはＲ７がエステル基であり、ｌ, ｍは２以上１０以下の整数であり、ｎは１以上１０以下の整数である、（１）に記載の高分子化合物。
（３）一般式（１）で示される構造を有する高分子化合物が下記一般式（２）で示される構造を有する（１）または（２）に記載の高分子化合物。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；ａ、ｂは２以上の整数であり、ｃは０もしくは１以上の整数であり；ｎは１以上１０以下の整数であり；ホスホリルコリン基を含む側鎖を有する構造単位とアジドシンナモイル基を含む構造単位とアルキレート基を含む構造単位とはランダムな順序またはブロックな順序で結合している。）
（４）一般式（１）及び（２）で示される構造の高分子化合物は、ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．３０以上０．９０以下であり、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．１０以上０．６０以下であり、ｃ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０以上０．５０以下である（１）ないし（３）いずれか１つに記載の高分子化合物。
（５）（１）ないし（４）いずれか１つに記載の高分子化合物を含むコーティング材。
（６）コーティング材によって被覆された被覆部を有する成形体であって、前記コーティング材が（５９記載のコーティング材である成形体。
（７）（６）記載の成形体用いて製造される生化学容器。
（８）（７）の生化学容器を用いて製造される細胞培養容器。
（９）成形体に（５）記載のコーティング材を塗布、乾燥する第一の工程と、光照射して前記コーティング材を硬化する第二の工程を有する、成形体の製造方法。
（１０）前記第二の工程において、光照射量が１０mJ/cm2以上１０００mJ/cm2以下である、（９）に記載の成形体の製造方法。
（１）下記一般式（１）で示される構造を有することを特徴とする高分子化合物。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は互いに独立して、置換基を有しても良いフェニル基又は−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−
、−Ｏ−、もしくは−Ｓ−で示される基を表わし；Ｒ５は置換基を有しても良いフェニル基又は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−で示される基を表わし；ｌ及びｍは互いに独立して、２以上の整数を表わし；ｎは１以上の整数を表わし；ａ及びｂは互いに独立して２以上の整数を表わし；ｃは０もしくは１以上の整数を表わす。；Ｒ１を含む構造単位とＲ３を含む構造単位とＲ６を含む構造単位はランダムな順序で結合するか、またはブロック状態で結合している。）
（２）一般式（１）のＲ２、Ｒ４、Ｒ５，またはＲ７がエステル基であり、ｌ, ｍは２以上１０以下の整数であり、ｎは１以上１０以下の整数である、（１）に記載の高分子化合物。
（３）一般式（１）で示される構造を有する高分子化合物が下記一般式（２）で示される構造を有する（１）または（２）に記載の高分子化合物。
（４）一般式（１）及び（２）で示される構造の高分子化合物は、ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．３０以上０．９０以下であり、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．１０以上０．６０以下であり、ｃ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０以上０．５０以下である（１）ないし（３）いずれか１つに記載の高分子化合物。
（５）（１）ないし（４）いずれか１つに記載の高分子化合物を含むコーティング材。
（６）コーティング材によって被覆された被覆部を有する成形体であって、前記コーティング材が（５９記載のコーティング材である成形体。
（７）（６）記載の成形体用いて製造される生化学容器。
（８）（７）の生化学容器を用いて製造される細胞培養容器。
（９）成形体に（５）記載のコーティング材を塗布、乾燥する第一の工程と、光照射して前記コーティング材を硬化する第二の工程を有する、成形体の製造方法。
（１０）前記第二の工程において、光照射量が１０mJ/cm2以上１０００mJ/cm2以下である、（９）に記載の成形体の製造方法。
本発明の高分子化合物を使用することにより、頑強性に優れたコーティング材を得ることが可能となり、さらに頑強性に優れた細胞培養容器をはじめとする成形体を得ることが
可能となる。
可能となる。
以下、本発明の高分子化合物、該高分子化合物を使用したコーティング材、コーティング材を使用した容器、また容器の製造方法について説明する。
本発明の高分子化合物は、下記一般式（１）で示される構造を有することを特徴とする高分子化合物である。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は互いに独立して、置換基を有しても良いフェニル基又は−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、もしくは−Ｓ−で示される基を表わし；Ｒ５は置換基を有しても良いフェニル基又は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−で示される基を表わし；ｌ及びｍは互いに独立して、２以上の整数を表わし；ｎは１以上の整数を表わし；ａ及びｂは互いに独立して２以上の整数を表わし；ｃは０もしくは１以上の整数を表わす。；Ｒ１を含む構造単位とＲ３を含む構造単位とＲ６を含む構造単位はランダムな順序で結合するか、またはブロック状態で結合している。）
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は互いに独立して、置換基を有しても良いフェニル基又は−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、もしくは−Ｓ−で示される基を表わし；Ｒ５は置換基を有しても良いフェニル基又は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−で示される基を表わし；ｌ及びｍは互いに独立して、２以上の整数を表わし；ｎは１以上の整数を表わし；ａ及びｂは互いに独立して２以上の整数を表わし；ｃは０もしくは１以上の整数を表わす。；Ｒ１を含む構造単位とＲ３を含む構造単位とＲ６を含む構造単位はランダムな順序で結合するか、またはブロック状態で結合している。）
親水性のホスホコリン基メタクリレートと側鎖にアジド並びに不飽和基を含有するメタクリレートを共重合した本発明の高分子化合物は、容器を酸素プラズマ処理した後ポリマーを塗布してＵＶ照射することで容器表面と共有結合をつくり、さらにアジドにＵＶ照射することにより形成されるナイトレンが分子内の不飽和結合と架橋して十分な強度を有する塗膜を形成することができる。またホスホコリン基を親水性部に用いているので初代細胞の培養も可能である。
本発明の高分子化合物は、一般式（１）のＲ２、Ｒ４、Ｒ５，またはＲ７がエステル基であり、ｌ, ｍは２以上１０以下の整数であり、ｎは１以上１０以下の整数であることが好ましい。上記構造、範囲であることで、容器との強固な結合、分子間の強固な結合、かつ最適な親水性を有することによる細胞付着防止の効果を有する高分子化合物を得ることが可能となる。
さらに、一般式（１）の好ましい形態は、下記一般式（２）記載の高分子化合物である。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；ａ、ｂは２以上の整
数であり、ｃは０もしくは１以上の整数であり；ｎは１以上１０以下の整数であり；ホスホコリン基を含む側鎖を有する構造単位とアジドシンナモイル基を含む構造単位とアルキレート基を含む構造単位とはランダムな順序またはブロックな順序で結合している。）この構造、範囲にあることで、成形体とのより強固な結合、分子間のより強固な結合、かつ最適な親水性を有することによる細胞付着の効果を有する高分子化合物を得ることが可能となる。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；ａ、ｂは２以上の整
数であり、ｃは０もしくは１以上の整数であり；ｎは１以上１０以下の整数であり；ホスホコリン基を含む側鎖を有する構造単位とアジドシンナモイル基を含む構造単位とアルキレート基を含む構造単位とはランダムな順序またはブロックな順序で結合している。）この構造、範囲にあることで、成形体とのより強固な結合、分子間のより強固な結合、かつ最適な親水性を有することによる細胞付着の効果を有する高分子化合物を得ることが可能となる。
また、一般式（１）及び（２）で示される構造の高分子化合物は、ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．３０以上０．９０以下であり、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．１０以上０．６０以下であり、ｃ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０以上０．５０以下である。各数値が上記範囲内にあることで、成形体とのさらなる強固な結合、分子間のさらなる強固な結合、かつ最適な親水性を有することによる細胞付着の効果を有する高分子化合物を得ることが可能となる。
前記高分子化合物を使用したコーティング材は、前述のとおり成形体との強固な結合、分子間の強固な結合、かつ親水性を有することによる細胞付着の効果に優れる。
なお、該コーティング材には、前記高分子化合物以外に溶剤、硬化剤、触媒、増感剤、カップリング剤、充填材などを添加してもよい。特に、溶剤としては、メタノール・エタノール・イソプロプルアルコールなどのアルコール系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、アセトンなどのケトン系溶媒などの極性溶媒、水、またはこれらの混合溶媒が好適に用いられ、その中でも水−エタノールの混合溶媒が溶解性の点で優れる。
なお、該コーティング材には、前記高分子化合物以外に溶剤、硬化剤、触媒、増感剤、カップリング剤、充填材などを添加してもよい。特に、溶剤としては、メタノール・エタノール・イソプロプルアルコールなどのアルコール系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、アセトンなどのケトン系溶媒などの極性溶媒、水、またはこれらの混合溶媒が好適に用いられ、その中でも水−エタノールの混合溶媒が溶解性の点で優れる。
また、本発明の成形体はコーティング材によって被覆された被覆部を有する。前記のとおり本発明のコーティング材は成形体と強固に結合し、コーティング材を構成する分子間の強固な結合による強度に優れる。また本発明の成形体は細胞吸着を抑制可能なものとなる。本発明の成形体としては、生化学容器、細胞培養容器等が挙げられ、特に細胞培養容器に好適に用いられる。生化学容器としては、遠沈管、試験管、保存用のボトル、チューブ、バッグ、免疫分析用容器などがある。
また細胞培養容器としては、細胞を容器内部に入れて培養するものであれば特に形態は限定しないが、例えば、各種シャーレ、マルチウェルプレート、培養フラスコ、培養バッグが対象となる。
次に、成形体へのコーティング材の接触方法を下記に記す。
また細胞培養容器としては、細胞を容器内部に入れて培養するものであれば特に形態は限定しないが、例えば、各種シャーレ、マルチウェルプレート、培養フラスコ、培養バッグが対象となる。
次に、成形体へのコーティング材の接触方法を下記に記す。
まず、成形体に前記コーティング材を塗布する。塗布する方法としては、成形体にコーティング材をピペット、ディスペンサー等により、手動または、自動化ロボットでスポット状に塗布する方法、コーティング溶液の入った漕に浸漬させ塗布する方法、ロールなどで塗布する方法が挙げられる。以下、容器にコーティング材をスポットで接触させる方法について述べる。なお、成形体はあらかじめ、低温プラズマ、コロナ放電や放射線照射処理により表面を酸化処理しておいてもよい。この処理により高分子物質との架橋において成形体側の架橋点を増やすことが出来る。
成形体に、ピペット、ディスペンサー等により、手動または、自動化ロボットでコーティング材を接触させた後、コーティング材が溶剤を含有する場合は乾燥させる。乾燥させる方法としては、乾燥機中で乾燥させる方法、減圧乾燥機中で乾燥させる方法、熱板上で乾燥させる方法等がある。なお、溶剤を含有しない場合、乾燥工程を省略することができる。
その後、前記コーティング材を塗布済みの成形体に光照射してコーティング材を硬化する。光照射する条件としては、１０mJ/cm2以上１０００mJ/cm2以下が挙げられ、５０mJ/cm2以上８００mJ/cm2以下であることが好ましく、１００mJ/cm2以上６００mJ/cm2以下であ
ることがさらに好ましい。
この条件により、ナイトレンを発生させてナイトレンと容器との結合、分子中に含まれるビニル基との反応等による架橋をさせるという効果を有する。
前記、高分子化合物と成形体が架橋することにより、成形体の表面から高分子化合物が脱離することがなくなり、安定した表面性状を得ることが出来る。
特に細胞培養容器においては、最終形態において滅菌が必須であるので、各種滅菌操作（放射線滅菌、プラズマ滅菌）によっても表面性状が変化しないという効果が得られる。
ることがさらに好ましい。
この条件により、ナイトレンを発生させてナイトレンと容器との結合、分子中に含まれるビニル基との反応等による架橋をさせるという効果を有する。
前記、高分子化合物と成形体が架橋することにより、成形体の表面から高分子化合物が脱離することがなくなり、安定した表面性状を得ることが出来る。
特に細胞培養容器においては、最終形態において滅菌が必須であるので、各種滅菌操作（放射線滅菌、プラズマ滅菌）によっても表面性状が変化しないという効果が得られる。
以下に合成例、実施例、比較例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
＜光反応性モノマーの合成＞
合成例１：モノマー（メタクリロイルオキシエチル4-アジド桂皮酸エステル：ＭＥＣＡｚ）の合成
テフロン（登録商標）製撹拌機、ジムロート冷却機、温度計、滴下漏斗を取り付けた四つ口フラスコを十分に乾燥した。この反応器に４−アジド桂皮酸１８．９ｇ（０．１０モル）とN,N-ジメチルホルムアミド１３０ｍｌを仕込み、乾燥窒素を流しながら室温下で撹拌した。４−アジド桂皮酸が完全に溶けた後、反応器を０℃付近まで冷却し、滴下漏斗を用いて塩化チオニル１３．７５ｇ（０．１１５モル）を一時間かけて滴下した。全ての塩化チオニルを滴下後、反応器を６５℃まで加熱して４時間反応を継続させた。その後、約４０℃でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧留去し、容器を移して室温で一昼夜、真空乾燥することで１９．８ｇの４−アジド桂皮酸クロライドを得た。
得られた４−アジド桂皮酸クロライド１０ｇ（０．０４８モル）をテフロン（登録商標）製撹拌機、ジムロート冷却器、温度計、滴下漏斗を取り付けた四つ口フラスコにトルエン１９０ｍｌ、２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）７．０ｇ（０．０５４モル）と一緒に仕込み、撹拌しながら５０℃に加熱した。そこにトリエチルアミン１３ｇとトルエン１９０ｍｌの混合液を滴下漏斗を用いて一時間かけて滴下した。滴下終了後更に４時間反応を継続させた。反応終了後塩酸塩を濾紙で濾捌後、濾液を５％ＨＣｌ水溶液で抽出して分液ロート下層のＨＥＭA水溶液を除いた。上層のトルエン溶液には無水の硫
酸ナトリウムを加えて脱水した後トルエンをエバポレートして除去し、真空乾燥機で一昼夜乾燥して１４．６ｇのＭＥＣＡｚモノマーを得た。
合成例１：モノマー（メタクリロイルオキシエチル4-アジド桂皮酸エステル：ＭＥＣＡｚ）の合成
テフロン（登録商標）製撹拌機、ジムロート冷却機、温度計、滴下漏斗を取り付けた四つ口フラスコを十分に乾燥した。この反応器に４−アジド桂皮酸１８．９ｇ（０．１０モル）とN,N-ジメチルホルムアミド１３０ｍｌを仕込み、乾燥窒素を流しながら室温下で撹拌した。４−アジド桂皮酸が完全に溶けた後、反応器を０℃付近まで冷却し、滴下漏斗を用いて塩化チオニル１３．７５ｇ（０．１１５モル）を一時間かけて滴下した。全ての塩化チオニルを滴下後、反応器を６５℃まで加熱して４時間反応を継続させた。その後、約４０℃でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧留去し、容器を移して室温で一昼夜、真空乾燥することで１９．８ｇの４−アジド桂皮酸クロライドを得た。
得られた４−アジド桂皮酸クロライド１０ｇ（０．０４８モル）をテフロン（登録商標）製撹拌機、ジムロート冷却器、温度計、滴下漏斗を取り付けた四つ口フラスコにトルエン１９０ｍｌ、２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）７．０ｇ（０．０５４モル）と一緒に仕込み、撹拌しながら５０℃に加熱した。そこにトリエチルアミン１３ｇとトルエン１９０ｍｌの混合液を滴下漏斗を用いて一時間かけて滴下した。滴下終了後更に４時間反応を継続させた。反応終了後塩酸塩を濾紙で濾捌後、濾液を５％ＨＣｌ水溶液で抽出して分液ロート下層のＨＥＭA水溶液を除いた。上層のトルエン溶液には無水の硫
酸ナトリウムを加えて脱水した後トルエンをエバポレートして除去し、真空乾燥機で一昼夜乾燥して１４．６ｇのＭＥＣＡｚモノマーを得た。
＜光反応性ポリマーの重合例＞
重合例１：（ＭＰＣ0.6−ＭＥＣAz0.3−ＢＭＡ0.1）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１２．７ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）９．０６ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）１．４２ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３
０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１１０ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１６．１ｇを得た。
重合例２：（ＭＰＣ0.6−ＭＥＣAz0.2−ＢＭＡ0.2）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１２．７ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）６．０４ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）２．８４ｇをエタノール９０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０
分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１０５ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析
出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１５．３ｇを得た。
重合例３：（ＭＰＣ0.6−ＭＥＣAz0.1−ＢＭＡ0.3）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１２．７ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）３．０２ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）４．２６ｇをエタノール９０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０
分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液９８ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１４．２ｇを得た。
重合例４：（ＭＰＣ0.7−ＭＥＣAz0.3）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）２０．６５ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）９．０６ｇをエタノール１
３０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１３５ｇを得た。この溶液を６００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末２２．３ｇを得た。
重合例５：（ＭＰＣ0.5−ＭＥＣAz0.2−ＨｘＭＡ0.3）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１４．２５ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）６．０４ｇ、ｎ−ヘキシル
メタクリレート（ＨｘＭA）５．１ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに
入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１１５ｇを得た。この溶液を５２０ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１９．１ｇを得た。
重合例６：（ＭＰＣ0.2−ＭＥＣＡｚ0.4−ＢＭＡ0.4）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）５．９ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）１２．０８ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）５．６８ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３
０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１０９ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１７．１ｇを得た。
重合例７：（ＭＰＣ0.2−ＭＥＣAz0.2−ＢＭＡ0.6）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）５．９ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）６．０４ｇ、ブチルメタクリレ
ート（ＢＭA）８．５２ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０
分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１０３ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１６．１ｇを得た。
比較重合例１：（ＭＰＣ0.8−ＢＭＡ0.2）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）２３．６ｇ、ブチルメタ
クリレート（ＢＭA）２．８４ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ
、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１１８ｇを得た。この溶液を５３０ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末２１．８ｇを得た。
比較重合例２：（ＭＰＣ0.5−ＢＭＡ0.5）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１４．７５ｇ、ブチルメタクリレート（ＢＭA）７．１ｇをエタノール９０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、
３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液９５ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１５．６ｇを得た。
比較重合例３：（ＭＰＣ0.3−ＢＭＡ0.7）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）８．８５ｇ、ブチルメタクリレート（ＢＭA）２１．１４ｇをエタノール１１０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入
れ、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１２２ｇを得た。この溶液を５００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末２２．９ｇを得た。
重合例１：（ＭＰＣ0.6−ＭＥＣAz0.3−ＢＭＡ0.1）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１２．７ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）９．０６ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）１．４２ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３
０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１１０ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１６．１ｇを得た。
重合例２：（ＭＰＣ0.6−ＭＥＣAz0.2−ＢＭＡ0.2）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１２．７ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）６．０４ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）２．８４ｇをエタノール９０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０
分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１０５ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析
出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１５．３ｇを得た。
重合例３：（ＭＰＣ0.6−ＭＥＣAz0.1−ＢＭＡ0.3）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１２．７ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）３．０２ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）４．２６ｇをエタノール９０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０
分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液９８ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１４．２ｇを得た。
重合例４：（ＭＰＣ0.7−ＭＥＣAz0.3）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）２０．６５ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）９．０６ｇをエタノール１
３０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１３５ｇを得た。この溶液を６００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末２２．３ｇを得た。
重合例５：（ＭＰＣ0.5−ＭＥＣAz0.2−ＨｘＭＡ0.3）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１４．２５ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）６．０４ｇ、ｎ−ヘキシル
メタクリレート（ＨｘＭA）５．１ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに
入れ、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１１５ｇを得た。この溶液を５２０ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１９．１ｇを得た。
重合例６：（ＭＰＣ0.2−ＭＥＣＡｚ0.4−ＢＭＡ0.4）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）５．９ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）１２．０８ｇ、ブチルメタクリ
レート（ＢＭA）５．６８ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３
０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１０９ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１７．１ｇを得た。
重合例７：（ＭＰＣ0.2−ＭＥＣAz0.2−ＢＭＡ0.6）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）５．９ｇ、メタクリロイルオキシエチル４-アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）６．０４ｇ、ブチルメタクリレ
ート（ＢＭA）８．５２ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、３０
分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１０３ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１６．１ｇを得た。
比較重合例１：（ＭＰＣ0.8−ＢＭＡ0.2）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）２３．６ｇ、ブチルメタ
クリレート（ＢＭA）２．８４ｇをエタノール１００ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ
、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１１８ｇを得た。この溶液を５３０ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末２１．８ｇを得た。
比較重合例２：（ＭＰＣ0.5−ＢＭＡ0.5）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）１４．７５ｇ、ブチルメタクリレート（ＢＭA）７．１ｇをエタノール９０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入れ、
３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液９５ｇを得た。この溶液を４００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末１５．６ｇを得た。
比較重合例３：（ＭＰＣ0.3−ＢＭＡ0.7）の重合
２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）８．８５ｇ、ブチルメタクリレート（ＢＭA）２１．１４ｇをエタノール１１０ｇに溶解し、四つ口フラスコに入
れ、３０分間窒素を吹き込んだ後、５０℃でｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート０．３５ｇを加えて３時間反応させた後、６０℃に上げ更に２時間反応を継続し、ポリマー溶液１２２ｇを得た。この溶液を５００ｍｌのエチルエーテル中にかき混ぜながら徐々に滴下し、析出した沈殿をろ過し、４８時間真空乾燥を実施してポリマー粉末２２．９ｇを得た。
・ 実施例１−１〜７−１、比較例１−１〜２−１
［コート処理生化学容器］
前記重合により得られたポリマー粉末を、超純水／メタノール＝５０／５０に溶解し、０．５重量％のコート液を調製した。
生化学容器として、１５ｍＬポリプロピレン製遠沈管（住友ベークライト製、ＭＳ− ）を用いた。前処理としてチューブにプラズマ処理装置 （ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製 ＳＥＲＩＥＳ７０００）を用いてプラズマ処理（酸素プラズマ５分間）を行った。
遠沈管に１５ｍＬの先に調製したポリマー溶液を加えて１時間浸漬した後、遠沈管を裏返して溶液を充分廃棄した。ついで、２５℃で１２時間一次乾燥した後、ＵＶランプで２５０ｎｍのＵＶ光を１．０ｍＷ／ｃｍ2×３０秒間照射して水溶性樹脂を硬化させた。
硬化後、超純水で３回繰り返し洗浄し、乾燥させ本発明の生化学用容器（チューブ）を得た。
［生体由来物質吸着性］
（１）ウシ血清アルブミン吸着性
タンパク質吸着測定の一例として、ウシ血清アルブミンの吸着性を次のように評価した。
まず、コート材が容器に密着しているかどうかを確認するため、各実施例及び各比較例で得られたチューブに純水を各々５．０ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間振とうさせた。
その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、ウシ血清アルブミン（２３２０９ ＰＩＥＲＣＥ社製）を０．５μｇ／ｍＬに希釈した溶液を、実施例及び各比較例で得られたチューブに各々５．０ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間インキュベートした後０．０５容量％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄した。
次にブロッキングとして３．０重量％スキムミルク入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４溶液を５．５ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間インキュベートした後０．０５容量％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄した。次にペルオキシターゼ標識坑ウシ血清
アルブミン抗体（５５２８５ ＣＡＰＰＥＬ社製）をリン酸緩衝液ｐＨ７．４で１．０μｇ／ｍＬに希釈した溶液を各チューブに５．０ｍＬずつ分注し室温で３０分インキュベートした後０．０５容量％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄し、ぺルオキシターゼ用発色キット（ＳＵＭＩＬＯＮ ＭＬ−１１２０Ｔ 住友ベークライト社製）を使用して発色させた後プレートリーダーを使用して４５０／６３０ｎｍの吸光度を測定した。
別途作成した検量線から各チューブ本体に残留したペルオキシターゼ標識坑ウシ血清アルブミン抗体＝ウシ血清アルブミンの重量を求め、吸着率を算出した。
また、コート材中の分子間架橋については次のように評価した。
各実施例及び各比較例で得られたチューブに純水：エタノール＝５０wt%：５０wt%の混合溶液を各々５．０ｍＬずつ分注し、２７℃で１時間振とうさせた。その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、上記同様ウシ血清アルブミンの吸着率を算出した。
結果を表１に示す。
なお、表1中の◎、○、×は以下を表す。
生体由来物質密着性１ ◎：吸着率が０．１％未満（アルブミン吸着は極めて少ない＝コート材の容器への密着性は非常に良好）、○：吸着率が０．１％以上1％未満（アルブ
ミン吸着はほとんど起こっていない＝コート材の容器への密着性は良好） ×：吸着率が１％以上（アルブミンの吸着が多数発生＝コート材の容器への密着性は悪い）
生体由来物質密着性２ ◎：吸着率が０．１％未満（アルブミン吸着は極めて少ない＝コート材中の分子間架橋性は非常に良好）、○：吸着率が０．１％以上1％未満（アルブミ
ン吸着はほとんど起こっていない＝コート材中の分子間架橋性は良好） ×：吸着率が１％以上（アルブミンの吸着が多数発生＝コート材中の分子間架橋性は悪い）
［コート処理生化学容器］
前記重合により得られたポリマー粉末を、超純水／メタノール＝５０／５０に溶解し、０．５重量％のコート液を調製した。
生化学容器として、１５ｍＬポリプロピレン製遠沈管（住友ベークライト製、ＭＳ− ）を用いた。前処理としてチューブにプラズマ処理装置 （ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製 ＳＥＲＩＥＳ７０００）を用いてプラズマ処理（酸素プラズマ５分間）を行った。
遠沈管に１５ｍＬの先に調製したポリマー溶液を加えて１時間浸漬した後、遠沈管を裏返して溶液を充分廃棄した。ついで、２５℃で１２時間一次乾燥した後、ＵＶランプで２５０ｎｍのＵＶ光を１．０ｍＷ／ｃｍ2×３０秒間照射して水溶性樹脂を硬化させた。
硬化後、超純水で３回繰り返し洗浄し、乾燥させ本発明の生化学用容器（チューブ）を得た。
［生体由来物質吸着性］
（１）ウシ血清アルブミン吸着性
タンパク質吸着測定の一例として、ウシ血清アルブミンの吸着性を次のように評価した。
まず、コート材が容器に密着しているかどうかを確認するため、各実施例及び各比較例で得られたチューブに純水を各々５．０ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間振とうさせた。
その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、ウシ血清アルブミン（２３２０９ ＰＩＥＲＣＥ社製）を０．５μｇ／ｍＬに希釈した溶液を、実施例及び各比較例で得られたチューブに各々５．０ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間インキュベートした後０．０５容量％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄した。
次にブロッキングとして３．０重量％スキムミルク入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４溶液を５．５ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間インキュベートした後０．０５容量％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄した。次にペルオキシターゼ標識坑ウシ血清
アルブミン抗体（５５２８５ ＣＡＰＰＥＬ社製）をリン酸緩衝液ｐＨ７．４で１．０μｇ／ｍＬに希釈した溶液を各チューブに５．０ｍＬずつ分注し室温で３０分インキュベートした後０．０５容量％ｔｗｅｅｎ２０入りリン酸緩衝液ｐＨ７．４で３回洗浄し、ぺルオキシターゼ用発色キット（ＳＵＭＩＬＯＮ ＭＬ−１１２０Ｔ 住友ベークライト社製）を使用して発色させた後プレートリーダーを使用して４５０／６３０ｎｍの吸光度を測定した。
別途作成した検量線から各チューブ本体に残留したペルオキシターゼ標識坑ウシ血清アルブミン抗体＝ウシ血清アルブミンの重量を求め、吸着率を算出した。
また、コート材中の分子間架橋については次のように評価した。
各実施例及び各比較例で得られたチューブに純水：エタノール＝５０wt%：５０wt%の混合溶液を各々５．０ｍＬずつ分注し、２７℃で１時間振とうさせた。その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、上記同様ウシ血清アルブミンの吸着率を算出した。
結果を表１に示す。
なお、表1中の◎、○、×は以下を表す。
生体由来物質密着性１ ◎：吸着率が０．１％未満（アルブミン吸着は極めて少ない＝コート材の容器への密着性は非常に良好）、○：吸着率が０．１％以上1％未満（アルブ
ミン吸着はほとんど起こっていない＝コート材の容器への密着性は良好） ×：吸着率が１％以上（アルブミンの吸着が多数発生＝コート材の容器への密着性は悪い）
生体由来物質密着性２ ◎：吸着率が０．１％未満（アルブミン吸着は極めて少ない＝コート材中の分子間架橋性は非常に良好）、○：吸着率が０．１％以上1％未満（アルブミ
ン吸着はほとんど起こっていない＝コート材中の分子間架橋性は良好） ×：吸着率が１％以上（アルブミンの吸着が多数発生＝コート材中の分子間架橋性は悪い）
・ 実施例１−２〜７−２、比較例１−２〜２−２
［コート済み細胞培養容器］
コートする細胞培養容器として、ポリスチレン製２４ウェルプレート成形品（住友ベークライト製）を準備し、酸素プラズマ処理を実施した（プラズマ装置：ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製 ＳＥＲＩＥＳ７０００）。
１ウェルにつき５００μＬの先に調製したポリマー溶液を加えて１時間浸漬した後、プレートを裏返して溶液を充分廃棄した。ついで、２５℃で１２時間一次乾燥した後、ＵＶランプで２５０ｎｍのＵＶ光を１．０ｍＷ／ｃｍ2×３０秒間照射して水溶性樹脂を硬化
させた。硬化後、超純水で３回繰り返し洗浄し、乾燥させた後、γ線を吸収線量６．０ｋＧｙで照射（ラジエ工業株式会社）して滅菌済の本発明の細胞培養容器を得た。
［細胞培養］
（１）マウスＥＳ細胞を用いた胚様体形成細胞培養の一例として、マウスＥＳ細胞を次のように評価した。
まず、コート材が容器に密着しているかどうかを確認するため、各実施例及び各比較例で得られたチューブに純水を各々５．０ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間振とうさせた。その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、マウスＥＳ細胞を培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１５％ウシ胎児血清）に７，５００ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度で分散させた細胞懸濁液を調製し、前述の細胞培養容器に２００μＬ／ウェルずつ、２４ウェルに分注し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下にて５日間培養した。
５日後各ウェルについて、胚様体の形成を顕微鏡下で確認した。
（２）マウスＥＳ細胞胚葉体の心筋への分化の確認
次いで、培養された胚様体を２４ウェルマルチプレート（住友ベークライト社製、ＭＳ−
８０２４０）に１個／ウェルずつ移し替えた後、培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１５％ウシ胎児血清）を５００μＬ／ウェルずつ分注し、５％ＣＯ２雰囲気下にて５日間培養した。
５日後、各ウェルについて、心筋細胞特有の拍動を顕微鏡下で確認した。また、コート材中の分子間架橋については次のように評価した。
各実施例及び各比較例で得られた細胞培養器に純水：エタノール＝５０wt%：５０wt%の混合溶液を各々２００μＬ／ウェルずつ、２４ウェルに分注し、２７℃で１時間振とうさせた。その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、上記同様心筋細胞特有の拍動を顕微鏡下で確認した。
結果を表２に示す。
なお、表２中の◎、○、×は以下を表す。
分化の確認１ ◎：２４ウェル中、２０ウェル以上で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材の容器への密着性は非常に良好、○：２４ウェル中、１２ウェル以上２０ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材の容器への密着性は良好、×：２４ウェル中、１２ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材の容器への密着性は悪い
分化の確認２ ◎：２４ウェル中、２０ウェル以上で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材中の分子間架橋性は非常に良好、○：２４ウェル中、１２ウェル以上２０ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材中の分子間架橋性は良好、×：２４ウェル中、１２ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材中の分子間架橋性は悪い
［コート済み細胞培養容器］
コートする細胞培養容器として、ポリスチレン製２４ウェルプレート成形品（住友ベークライト製）を準備し、酸素プラズマ処理を実施した（プラズマ装置：ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製 ＳＥＲＩＥＳ７０００）。
１ウェルにつき５００μＬの先に調製したポリマー溶液を加えて１時間浸漬した後、プレートを裏返して溶液を充分廃棄した。ついで、２５℃で１２時間一次乾燥した後、ＵＶランプで２５０ｎｍのＵＶ光を１．０ｍＷ／ｃｍ2×３０秒間照射して水溶性樹脂を硬化
させた。硬化後、超純水で３回繰り返し洗浄し、乾燥させた後、γ線を吸収線量６．０ｋＧｙで照射（ラジエ工業株式会社）して滅菌済の本発明の細胞培養容器を得た。
［細胞培養］
（１）マウスＥＳ細胞を用いた胚様体形成細胞培養の一例として、マウスＥＳ細胞を次のように評価した。
まず、コート材が容器に密着しているかどうかを確認するため、各実施例及び各比較例で得られたチューブに純水を各々５．０ｍＬずつ分注し、３７℃で１時間振とうさせた。その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、マウスＥＳ細胞を培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１５％ウシ胎児血清）に７，５００ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度で分散させた細胞懸濁液を調製し、前述の細胞培養容器に２００μＬ／ウェルずつ、２４ウェルに分注し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下にて５日間培養した。
５日後各ウェルについて、胚様体の形成を顕微鏡下で確認した。
（２）マウスＥＳ細胞胚葉体の心筋への分化の確認
次いで、培養された胚様体を２４ウェルマルチプレート（住友ベークライト社製、ＭＳ−
８０２４０）に１個／ウェルずつ移し替えた後、培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１５％ウシ胎児血清）を５００μＬ／ウェルずつ分注し、５％ＣＯ２雰囲気下にて５日間培養した。
５日後、各ウェルについて、心筋細胞特有の拍動を顕微鏡下で確認した。また、コート材中の分子間架橋については次のように評価した。
各実施例及び各比較例で得られた細胞培養器に純水：エタノール＝５０wt%：５０wt%の混合溶液を各々２００μＬ／ウェルずつ、２４ウェルに分注し、２７℃で１時間振とうさせた。その後、純水を排出し、２７℃１２時間条件下で乾燥させ、上記同様心筋細胞特有の拍動を顕微鏡下で確認した。
結果を表２に示す。
なお、表２中の◎、○、×は以下を表す。
分化の確認１ ◎：２４ウェル中、２０ウェル以上で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材の容器への密着性は非常に良好、○：２４ウェル中、１２ウェル以上２０ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材の容器への密着性は良好、×：２４ウェル中、１２ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材の容器への密着性は悪い
分化の確認２ ◎：２４ウェル中、２０ウェル以上で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材中の分子間架橋性は非常に良好、○：２４ウェル中、１２ウェル以上２０ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材中の分子間架橋性は良好、×：２４ウェル中、１２ウェル未満で胚様体の形成が認められ、かつ心筋細胞特有の拍動が確認された＝コート材中の分子間架橋性は悪い
実施例の生化学容器は、コート材が十分に容器に密着しているため、純水処理を行ってもウシ血清アルブミンの密着が起こらず、かつコート材中の分子間の架橋度が十分高いた
め、水−エタノール混合溶液でも溶解しなかった。一方、比較例の生化学容器は、コート材が十分に容器に密着しておらず、純水処理を行うことでコート材が剥離し、それが原因でウシ血清アルブミンの密着が発生した。また、コート材中の分子間の架橋度が不十分であったため、水−エタノール混合溶液で溶解した。
また、実施例の細胞培養容器は、コート材が十分に容器に密着しているため、純水処理を行っても細胞の分化が発生し、かつコート材中の分子間の架橋度が十分高いため、水−エタノール混合溶液でも溶解しなかった。一方、比較例の細胞培養容器は、コート材が十分に容器に密着しておらず、純水処理を行うことでコート材が剥離し、それが原因で細胞の分化が起こらなかった。また、コート材中の分子間の架橋度が不十分であったため、水−エタノール混合溶液で溶解した。
め、水−エタノール混合溶液でも溶解しなかった。一方、比較例の生化学容器は、コート材が十分に容器に密着しておらず、純水処理を行うことでコート材が剥離し、それが原因でウシ血清アルブミンの密着が発生した。また、コート材中の分子間の架橋度が不十分であったため、水−エタノール混合溶液で溶解した。
また、実施例の細胞培養容器は、コート材が十分に容器に密着しているため、純水処理を行っても細胞の分化が発生し、かつコート材中の分子間の架橋度が十分高いため、水−エタノール混合溶液でも溶解しなかった。一方、比較例の細胞培養容器は、コート材が十分に容器に密着しておらず、純水処理を行うことでコート材が剥離し、それが原因で細胞の分化が起こらなかった。また、コート材中の分子間の架橋度が不十分であったため、水−エタノール混合溶液で溶解した。
本発明に開示された高分子化合物を使用することにより、容器と共有結合でき、かつ分子内でも架橋するため強固なコーティング材を得ることが可能となり、さらに上記特徴を有する細胞培養容器を得ることが可能となった。
Claims (10)
- 下記一般式（１）で示される構造を有することを特徴とする高分子化合物。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は互いに独立して、置換基を有しても良いフェニル基又は−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、もしくは−Ｓ−で示される基を表わし；Ｒ５は置換基を有しても良いフェニル基又は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−で示される基を表わし；ｌ及びｍは互いに独立して、２以上の整数を表わし；ｎは１以上の整数を表わし；ａ及びｂは互いに独立して２以上の整数を表わし；ｃは０もしくは１以上の整数を表わす。；Ｒ１を含む構造単位とＲ３を含む構造単位とＲ６を含む構造単位はランダムな順序で結合するか、またはブロック状態で結合している。）
- 一般式（１）のＲ２、Ｒ４、Ｒ５，またはＲ７がエステル基であり、ｌ, ｍは２以上１０以下の整数であり、ｎは１以上１０以下の整数である、請求項１に記載の高分子化合物。
- 一般式（１）で示される構造を有する高分子化合物が下記一般式（２）で示される構造を有する請求項１または２に記載の高分子化合物。
（式中、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＨ2−ＣＨ2−又は−ＣＨ2−Ｃ（ＣＨ3）−であり、；ａ、ｂは２以上の整数であり、ｃは０もしくは１以上の整数であり；ｎは１ないし１０の整数であり；ホスホリルコリン基を含む側鎖を有する構造単位とアジドシンナモイル基を含む構造単位とアルキレート基を含む構造単位とはランダムな順序またはブロックな順序で結合している。）
- 一般式（１）及び（２）で示される構造の高分子化合物は、ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．３０以上０．９０以下であり、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０．１０以上０．６０以下であり、ｃ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が０以上０．５０以下である、請求項１ないし３いずれか１項に記載の高分子化合物。
- 請求項１ないし４いずれか１項に記載の高分子化合物を含むコーティング材。
- コーティング材によって被覆された被覆部を有する成形体であって、前記コーティング材
が請求項５記載のコーティング材である成形体。
- 請求項６記載の成形体を用いて製造される生化学容器。
- 請求項７記載の生化学容器を用いて製造される細胞培養容器。
- 成形体に請求項５記載のコーティング材を塗布、乾燥する第一の工程と、光照射して前記コーティング材を硬化する第二の工程を有する、成形体の製造方法。
- 請求項９記載の第二の工程において、光照射量が１０mJ/cm2以上１０００mJ/cm2以下である、請求項９記載の成形体の製造方法。
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