JP5929191B2 - 表面親水性基材の製造方法 - Google Patents
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Description
特許文献1では、最初に、物品の表面に共有結合した光開始剤分子を付与し、次いで、重合性マクロモノマーの層でコーティングし、次いで、それを熱処理または照射処理に付して、それによりマクロモノマーをグラフト重合して新規な物品表面を形成することが記載されている。物品表面への光開始剤分子の共有結合は、まず、物品表面をプラズマ処理して表面に官能基を付与し、次いで該官能基を官能性光開始剤の共反応性基と反応させることにより形成される。
親水性主鎖と該親水性主鎖と連結された少なくとも1つの放射線反応性官能基とを備える親水性有機化合物を、放射線照射下において前記官能基と共有結合を形成することが可能な材料を含む表面を備えた基材の、該表面上に配置する、親水性有機化合物配置工程と、
前記親水性有機化合物が配置された状態の前記基材の表面上に放射線を照射することにより、前記基材の表面に共有結合により連結された前記親水性主鎖を含む、物質の吸着を抑制する親水性層を形成する、放射線照射工程と、
を含む前記方法。
(2)前記親水性有機化合物が、親水性主鎖と連結された少なくとも2つの放射線反応性官能基を備える、(1)の方法。
(3)前記放射線反応性官能基が、アクリロイル基及びメタクリロイル基からなる群から選択される、(1)又は(2)の方法。
(4)前記親水性主鎖が、ポリアルキレングリコール鎖を含む、(1)〜(3)のいずれかの方法。
(5)容器本体部材と(1)〜(4)のいずれかの方法により製造された表面親水性基材とを少なくとも備える細胞及び培地を収容するための容器部
を備える細胞培養容器の製造方法であって、
以下の工程:
前記表面親水性基材を、容器本体部材の表面に、細胞及び培地を収容するための空間側に親水性層が向くように配置して接合する接合工程
を含む前記方法。
(6)前記表面親水性基材がフィルム状の表面親水性基材であり、
予め用意された、ロール状に巻かれた長尺状の前記表面親水性基材を繰り出し、繰り出された前記表面親水性基材を、前記容器本体部材に接合される形状にカットするカット工程
を更に含む、(5)の方法。
(7)1以上の凹部が形成された基材を備える試験用容器であって、
前記凹部が、内壁により包囲される空間の横断面積が、深さが増すほど小さくなるように形成された底部形状を有し、
前記基材の、前記凹部の底部の内壁を構成する表面が、該表面に共有結合により連結されたポリアルキレングリコール鎖を含む、物質の吸着を抑制する親水性層により被覆されていることを特徴とする、試験用容器。
<基材の材料>
本発明において親水性有機化合物が適用され配置される基材は、その表面の少なくとも一部が、放射線照射下において、親水性有機化合物が有する放射線反応性官能基と共有結合を形成することが可能な材料を含む基材である限り特に限定されない。表面のみが当該特徴を有する材料により構成されていてもよいし、基材全体が当該特徴を有する材料により構成されていてもよい。基材の表面の全領域が当該特徴を有する材料により構成されていてもよいし、基材の表面の一部の領域のみが当該特徴を有する材料により構成されていてもよい。
親水性有機化合物配置工程に供される基材の全体形状は、最終的な表面親水性基材の用途に応じた任意の形状であってよい。
次に、本発明に用いる、親水性主鎖と該親水性主鎖と連結された少なくとも1つの放射線反応性官能基とを備える親水性有機化合物について説明する。
1以上のアルキレングリコール単位:
−[R−O]−(Rはアルキレンを指す)
からなるアルキレングリコール鎖、
1以上のアクリルアミド単位:
−[CH2−CH(CONH2)]−
からなるアクリルアミド鎖、
1以上のメタクリルアミド単位:
−[CH2−C(CH3)(CONH2)]−
からなるメタクリルアミド鎖、
等が挙げられる。
A−O−[R−O]m−B
では、Aはリンカー(−O−)を介して間接的に、Bは直接的に、アルキレングリコール鎖に結合しているということができる。
A−O−[CH2−CH2−O]m−B
[式中、A及びBは独立に、アクリロイル基及びメタクリロイル基からなる群から選択され;mは重合度を示す1以上の整数である]
で表される化合物である。
親水性有機化合物としては1種を使用してもよいし、複数種を混合して使用してもよい。
表面親水性基材の製造方法は、親水性有機化合物配置工程と、放射線照射工程とを少なくとも含む。以下、各工程について詳述する。
親水性有機化合物配置工程は、親水性有機化合物を、基材の表面の所定領域に配置する工程である。
塗布用組成物中の親水性有機化合物の含有量は特に限定されないが、好ましくは、塗布用組成物全量あたり親水性有機化合物を1〜50重量%とすることができる。
塗布用組成物の粘度は5×10−3Pa・s〜10Pa・sであることが好ましい。
放射線照射工程は、親水性有機化合物が配置された状態の基材の表面上に放射線を照射することにより、基材の表面に共有結合により結合された親水性主鎖を含む親水性層を形成する工程である。
放射線照射工程後の親水性層が形成された基材の表面に対して、適宜、洗浄、乾燥等を行うことができる。
本発明の方法により製造される表面親水性基材の好適な実施形態の一例は、図8〜10に示す、板状の基材800に形成された1以上の凹部801の内壁面に親水性層902が設けられた、表面親水性基材810である。表面親水性基材810は一般的にマイクロウェルプレートと称される試験用容器である。図示していないが、表面親水性基材810は蓋等の他の部材と組み合わされて試験用容器を構成することができる。表面親水性基材810のI−I’断面を図9Cに示す。各凹部801は、上方向に開放され、下方向が閉塞した形状であり、その底部が、内壁により包囲される空間の横断面積(該空間を、凹部の中心軸に垂直な面で切った断面の面積)が、深さが増すほど小さくなるように形成されている。より具体的には、凹部801の底部の表面は、その縦断面(前記中心軸に沿った面で切った断面)が、外側に凸の、丸みを帯びた弧を描いており、全体として略U字型を呈する。基材800の、各凹部801の底部の内壁を構成する表面は、ポリアルキレングリコール鎖を含む、物質の吸着性が低い親水性層902により被覆されている。親水性層902は、凹部801の底部内壁を構成する基材表面に、共有結合により固定されている。このような底部形状を備えた凹部801は、スフェロイド培養に適している。図10(凹部801の1つのみを拡大した断面図)に示すように、凹部801に培養液1000を満たし細胞培養を行うと、培養された細胞は凹部801の内壁面に接着せず、凹部の最深部において凝集し、球状の細胞凝集体であるスフェロイド1001を形成する。
細胞培養容器に親水性層を付与する場合、細胞培養容器の容器部を形成する容器本体部材自体を「基材」として使用し、本発明の方法により、容器本体部材の所定の表面に直接、親水性層を設けることが可能である。しかしながら、効率的な細胞培養容器の製造のためには、はじめに、フィルム状、板状等の形状の、処理が容易な基材の表面に、本発明の方法により親水性層を設けて表面親水性基材とし、次いで、得られた表面親水性基材を、必要に応じて適当な寸法にカットしてから、容器本体部材に接合することが好ましい。そこでこの実施形態に係る、細胞培養容器の製造方法について以下に説明する。
まず本発明において製造される細胞培養容器の全体の形状について説明する。
本発明により製造される細胞培養容器は、細胞及び培地を収容するための容器部を少なくとも備え、さらに適宜蓋等を備える。
表面親水性基材140の厚さ方向に沿った断面は、図5に示すように、基材層502、及び該基材層502上に形成された親水性層501を少なくとも備える。表面親水性基材140は、フィルム又は板状体である。
表面親水性基材140の製造方法については既に述べた通りである。
表面親水性基材140は、容器本体部材103、109の所定の表面に、細胞及び培地を収容するための空間130の側に親水性層501が向くように配置して接合し、固定化することができる。
フィルム状の表面親水性基材140は、図6A及び6Bに示すように、親水性層501及び基材層502を備える長尺状のフィルム状表面親水性基材600から切り出して製造することができる。ロール状に巻かれた長尺状のフィルム状表面親水性基材600を適宜繰り出し、繰り出された表面親水性基材600を、容器本体部材103に接合される所定形状の枚葉片にカットして、枚葉状の表面親水性基材140を得ることができる(カット工程)。表面親水性基材140が切り取られたあとの長尺状のフィルム状表面親水性基材600の残部を再びロール状に巻き取るロール・ツー・ロール方式による処理も可能である。カット工程は長尺状のフィルム状表面親水性基材600から枚葉状の表面親水性基材140を裁断により切り出す工程であってもよいし、長尺状のフィルム状表面親水性基材600として、表面親水性基材140を切り取り可能なようにミシン目、ハーフカット線等の切れ目を予め設けたものを使用し、カット工程はこれらの切れ目に沿って表面親水性基材140を取り外す工程であってもよい。
501,902・・・親水性層
901・・・親水性有機化合物の層
140,210,350,810・・・表面親水性基材
103,109,203,760,761・・・容器本体部材
Claims (4)
- 容器本体部材と、物質の吸着を抑制する親水性層を表面に備える表面親水性基材とを少なくとも備える、細胞及び培地を収容するための容器部
を備える細胞培養容器の製造方法であって、
前記表面親水性基材がフィルム状の表面親水性基材であり、
前記表面親水性基材を、
親水性主鎖と該親水性主鎖と連結された少なくとも1つの放射線反応性官能基とを備える親水性有機化合物を、放射線照射下において前記官能基と共有結合を形成することが可能な材料を含む表面を備えた基材の、該表面上に配置する、親水性有機化合物配置工程と、
前記親水性有機化合物が配置された状態の前記基材の表面上に放射線を照射することにより、前記基材の表面に共有結合により連結された前記親水性主鎖を含む、物質の吸着を抑制する親水性層を形成する、放射線照射工程と、
を含む方法により製造し、
前記容器部を、
以下の工程:
予め用意された、ロール状に巻かれた長尺状の前記表面親水性基材を繰り出し、繰り出された前記表面親水性基材を、前記容器本体部材に接合される形状にカットするカット工程、及び
前記表面親水性基材を、容器本体部材の表面に、細胞及び培地を収容するための空間側に親水性層が向くように配置して接合する接合工程
を含む方法により製造する
ことを含む、前記細胞培養容器の製造方法。 - 前記親水性有機化合物が、親水性主鎖と連結された少なくとも2つの放射線反応性官能基を備える、請求項1の方法。
- 前記放射線反応性官能基が、アクリロイル基及びメタクリロイル基からなる群から選択される、請求項1又は2の方法。
- 前記親水性主鎖が、ポリアルキレングリコール鎖を含む、請求項1〜3のいずれか1項の方法。
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