JP2015521628A5 - - Google Patents
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Claims (55)
- ウイルス様粒子(VLP)を精製する方法であって、
前記VLPを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップと、
pH調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清、又は濾液のpHを約5未満のpH値に調整するステップと、
前記VLPを含む精製済み溶液を生成するために、前記pH調整済み溶液から非VLP微粒子/凝集体を除去するステップと、
を含む、方法。 - 前記VLPが、少なくとも前記VLPの第一亜集団及び第二亜集団を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記非VLP微粒子/凝集体の前記除去が、前記pH調整済み溶液からVLPの前記第二亜集団を除去するステップを含み、前記精製済み溶液がVLPの前記第一亜集団を実質的に保持する、請求項2に記載の方法。
- 前記細胞可溶化物又は培養上清/濾液の前記VLPがノロウイルスVLPであり、前記第一亜集団が、完全長VP1サブユニットを有するノロウイルスVLPを含み、前記第二亜集団が、切断型VP1サブユニットを有するノロウイルスVLPを含む、請求項3に記載の方法。
- 残留汚染タンパク質に対するVLPの前記第一亜集団の比率が、少なくとも約2倍増加する、請求項3に記載の方法。
- 前記pHの前記調整が、約30分間と約48時間の間の継続時間実行される、請求項1に記載の方法。
- 前記VLPが、酸安定性VLPを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記除去が、前記精製済み溶液を生成するために、デプス濾過及びその後の追加的濾過によってpH調整済み溶液を浄化するステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 残留汚染核酸の少なくとも約98%が、前記精製の結果として、前記可溶化物、上清、又は濾液から除去される、請求項1に記載の方法。
- 1つ又は複数のクロマトグラフィプロセスを使用して、前記精製済み溶液からVLPの第一亜集団を分離するステップをさらに含み、各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項1に記載の方法。
- ウイルス様粒子(VLP)を精製する方法であって、
VLPを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップと、
多工程クロマトグラフィプロセスを使用して前記VLPを精製するステップと、を含み、
前記多工程クロマトグラフィプロセスのうち少なくとも1つのクロマトグラフィプロセスが、
前記可溶化物、上清又は濾液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、前記VLPが前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと、
溶媒及び/又は洗浄剤で前記クロマトグラフィ材料を処理するステップと、
前記処理の後、前記クロマトグラフィ材料から前記VLPを溶出させるステップと、
を含む、方法。 - 前記溶媒及び/又は洗浄剤が、TnBP、オクチルフェノール、エチレンオキシド凝縮液、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、及びコール酸ナトリウム、Triton X−100、及びリン酸トリブチルのうち1つ又は複数を含む、請求項11に記載の方法。
- 前記VLPが、ノロウイルス遺伝子群I型VLP、ノロウイルス遺伝子群II型VLP、ノロウイルス遺伝子群IV型VLP、キメラノロウイルスVLP、及びサポウイルスVLPのうち1つ又は複数である、請求項11に記載の方法。
- 残留汚染タンパク質に対する前記VLPの比率が、前記可溶化物、上清又は濾液と比較して少なくとも約10倍増加する、請求項11に記載の方法。
- 前記精製の結果、残留汚染タンパク質の少なくとも約50%が、前記可溶化物、上清又は濾液から除去される、請求項11に記載の方法。
- 前記精製中に失われる前記VLPが約50%以下である、請求項11に記載の方法。
- 各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、膜式クロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項11に記載の方法。
- 前記VLPが、細菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物、又は哺乳類細胞中で産生される、請求項11に記載の方法。
- ウイルス様粒子(VLP)を精製する方法であって、
VLPを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップであって、前記VLPが少なくとも前記VLPの第一亜集団及び第二亜集団を含む、ステップと、
pH調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清又は濾液のpHを約5未満のpHに調整するステップと、
濾過済み精製済み溶液を生成するために、濾過プロセスを使用して前記pH調整済み溶液からVLPの前記第二亜集団を除去するステップであって、前記濾過済み精製済み溶液が実質的にVLPの前記第一亜集団を保持する、ステップと、
多工程クロマトグラフィプロセスを使用して、前記濾過済み精製済み溶液からVLPの前記第一亜集団を分離するステップとを含む方法。 - 前記多工程クロマトグラフィプロセスの少なくとも1つのクロマトグラフィプロセスが、
前記濾過済み精製済み溶液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、VLPの前記第一亜集団が前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと、
前記クロマトグラフィ材料を溶媒及び/又は洗浄剤で処理するステップと、
前記クロマトグラフィ材料からVLPの前記第一亜集団を溶出するステップと、を含む、請求項19に記載の方法。 - 残留汚染タンパク質に対するVLPの前記第一亜集団の比率が、前記可溶化物、上清又は濾液と比較して少なくとも約2倍増加する、請求項20に記載の方法。
- 各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項19に記載の方法。
- 前記VLPが、ノロウイルス遺伝子群I型VLP、ノロウイルス遺伝子群II型VLP、ノロウイルス遺伝子群IV型VLP、キメラノロウイルスVLP、及びサポウイルスVLPのうち1つ又は複数である、請求項19に記載の方法。
- 前記VLPが、ノロウイルス遺伝子群I型VLPであり、前記第一亜集団が、完全長VP1サブユニットを有するノロウイルスVLPを含み、前記第二亜集団が、切断型VP1サブユニットを有するノロウイルスVLPを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記VLPが、細菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物、又は哺乳類細胞中で産生される、請求項19に記載の方法。
- 前記pHの前記調整が、約30分間と約48時間の間の継続時間実行される、請求項19に記載の方法。
- 請求項19に記載の方法によって調製されたVLPの前記第一亜集団を含む、ワクチン。
- ウイルス様粒子(VLP)を精製する方法であって、
前記VLPを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得るステップと、
pH調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清又は濾液のpHを約5未満のpH値に調整するステップと、
前記pH調整済み溶液から非VLP微粒子/凝集体を除去するステップと、を含み、前記除去するステップが、精製したデプス濾過済み溶液を生成するために、デプス濾過プロセスによって前記pH調整済み溶液を浄化するステップとを含む、方法。 - 前記デプス濾過プロセスが、前記pH調整済み溶液を1つ又は複数のデプスフィルタと接触させるステップを含み、前記デプスフィルタの少なくとも1つが、珪藻土デプスフィルタである、請求項28に記載の方法。
- 前記可溶化物、上清又は濾液と比較して、残留汚染核酸の少なくとも約95%が、前記pH調整済み溶液から除去される、請求項28に記載の方法。
- 前記可溶化物、上清又は濾液と比較して、前記pH調整済み溶液からの前記VLPの回収率が少なくとも約75%である、請求項28に記載の方法。
- 前記VLPが、少なくとも前記VLPの第一亜集団及び第二亜集団を含み、前記浄化が、前記デプス濾過済み精製済み溶液を生成するために、前記pH調整済み溶液からVLPの前記第二亜集団を分離し、前記デプス濾過済み精製済み溶液が実質的にVLPの前記第一亜集団を保持する、請求項28に記載の方法。
- 前記分離が、1つ又は複数のクロマトグラフィプロセスを使用して、前記デプス濾過済み精製済み溶液からVLPの前記第一亜集団を分離するステップをさらに含み、各クロマトグラフィプロセスが、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、サイズ排除クロマトグラフィ、アニオン交換クロマトグラフィ、カチオン交換クロマトグラフィ、混合モードクロマトグラフィ、及びアフィニティクロマトグラフィから個別に選択される、請求項32に記載の方法。
- 前記VLPが、ノロウイルス遺伝子群I型VLP、ノロウイルス遺伝子群II型VLP、ノロウイルス遺伝子群IV型VLP、キメラノロウイルスVLP、及びサポウイルスVLPのうち1つ又は複数である、請求項28に記載の方法。
- 前記VLPが、ノロウイルス遺伝子群I型VLPであり、前記第一亜集団が、完全長VP1サブユニットを有するノロウイルスVLPを含み、前記第二亜集団が、切断型VP1サブユニットを有するノロウイルスVLPを含む、請求項34に記載の方法。
- 前記VLPが、細菌細胞、昆虫細胞、酵母細胞、植物、又は哺乳類細胞中で産生される、請求項28に記載の方法。
- ノロウイルスVLPの精製済み集団を含む溶液であって、前記溶液が、サイズ排除クロマトグラフィ及びELISAで測定して、VLPに対して約80%以下の残留汚染タンパク質を含有し、前記溶液が、前記ノロウイルスVLPを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液から精製される、溶液。
- 請求項37に記載の前記溶液から調製された前記ノロウイルスVLPを含む、ワクチン。
- 前記可溶化物、上清又は濾液に対して約35%以下の残留汚染核酸を含有する、請求項37に記載の溶液。
- 前記可溶化物、上清又は濾液からの前記ノロウイルスVLPの回収率が少なくとも約50%である、請求項37に記載の溶液。
- 残留汚染タンパク質に対する前記ノロウイルスVLPの比率が、前記可溶化物、上清又は濾液と比較して少なくとも約10倍増加する、請求項37に記載の溶液。
- 前記溶液が、商業的プロセスに使用するのに適切であり、前記商業的プロセスが、少なくとも20リットルの加工ボリュームを有する、請求項37に記載の溶液。
- 少なくとも前記ノロウイルスVLPの第一亜集団及び第二亜集団を含む前記ノロウイルスVLPを含有する細胞可溶化物、培養上清、又は濾液を生成するか又は得ることと、
pH調整済み溶液を生成するために、前記可溶化物、上清、又は濾液のpHを約5未満のpHに調整することと、
実質的にノロウイルスVLPの前記第一亜集団を保持する濾過済み精製済み溶液を生成するために、濾過プロセスを使用して前記pH調整済み溶液からノロウイルスVLPの前記第二亜集団を除去することによって生成することと、
多工程クロマトグラフィプロセスを使用して、前記濾過済み精製済み溶液からノロウイルスVLPの前記第一亜集団を分離することによって生成される、請求項37に記載の溶液。 - (i)前記ノロウイルスVLPが、ノロウイルス遺伝子群I型VLPであり、前記第一亜集団が、完全長VP1サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群I型VLPを含み、前記第二亜集団が、切断型VP1サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群I型VLPを含み、又は、(ii)前記ノロウイルスVLPが、ノロウイルス遺伝子群II型VLPであり、前記第一亜集団が、完全長VP1サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群II型VLPを含み、前記第二亜集団が、切断型VP1サブユニットを有するノロウイルス遺伝子群II型VLPを含む、請求項43に記載の溶液。
- VLPの精製済み集団を含む溶液であり、前記溶液が、完全長VP1サブユニットを有する少なくとも50%のVLPを含有する、溶液。
- 前記溶液が、切断型VP1サブユニットを有するVLPを実質的に含まない、請求項45に記載の溶液。
- 前記溶液が、
pH調整済み溶液を生成するために、前記未精製溶液のpHを約5未満のpH値に調整し、
精製済み溶液として前記溶液を生成するために、前記pH調整済み溶液から切断型VP1サブユニットを有するVLPを除去することによって、前記未精製溶液から生成され、前記pH調整済み溶液が実質的に、完全長VP1サブユニットを有する前記VLPを保持する、請求項45に記載の溶液。 - 1つ又は複数のクロマトグラフィプロセスを請求項45に記載の溶液に適用することによって生成される、完全長VP1サブユニットを有するVLPの精製済み集団。
- 生きたウイルスを含有し、前記生きたウイルスによって生成されたVLPをさらに含有する溶液中において、前記生きたウイルスを除去及び/又は不活性化する方法であって、
pH調整済み溶液を生成するために、前記生きたウイルスを含有する前記溶液のpHを約5未満のpH値に調整するステップを含む、方法。 - 前記pH調整済み溶液中の前記生きたウイルスのレベルが少なくとも約104減少する、請求項49に記載の方法。
- 精製済み溶液を生成するために、前記pH調整済み溶液から非VLP微粒子/凝集体を除去するステップと、
少なくとも1つのクロマトグラフィプロセスを使用して、前記精製済み溶液を精製するステップとをさらに含み、前記少なくとも1つのクロマトグラフィプロセスが、
前記pH調整済み溶液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、前記VLPは前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと
前記クロマトグラフィ材料を溶媒及び/又は洗浄剤で処理するステップと、
前記処理の後、溶出液を生成するために、前記クロマトグラフィ材料から前記VLPを溶出するステップとを含み、
前記溶出液中の前記生きたウイルスのレベルが、前記生きたウイルスを含有する前記溶液と比較して少なくとも約102減少する、請求項49に記載の方法。 - 前記溶出液中の前記生きたウイルスのレベルが、前記生きたウイルスを含有する前記溶液と比較して少なくとも約103減少する、請求項51に記載の方法。
- 請求項51に記載の前記溶出液から生成される、ワクチン。
- 生きたウイルスを含有し、前記生きたウイルスによって生成されたVLPをさらに含有する溶液中において、前記生きたウイルスを除去及び/又は不活性化する方法であって、
少なくとも1つのクロマトグラフィプロセスを使用して前記生きたウイルスを含有する前記溶液を精製するステップを含み、前記少なくとも1つのクロマトグラフィプロセスが、
前記生きたウイルスを含有する前記溶液をクロマトグラフィ材料と接触させるステップであって、前記VLPは前記クロマトグラフィ材料に結合する、ステップと、
前記クロマトグラフィ材料を溶媒及び/又は洗浄剤で処理するステップと、
前記処理の後、溶出液を生成するために、前記クロマトグラフィ材料から前記VLPを溶出するステップと、を含む、方法。 - 前記溶出液中の前記生きたウイルスのレベルが、前記生きたウイルスを含有する前記溶液と比較して少なくとも約105減少する、請求項54に記載の方法。
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