JP2015513528A - 核酸送達の区画化方法ならびにその組成物および使用 - Google Patents
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Abstract
Description
2012年2月7日出願の“核酸送達の区画化方法ならびにその組成物および使用”なる名称の米国仮出願番号61/633,287に基づく優先権を主張する。
本出願は、米国仮出願番号61/633,287に基づく優先権を主張し、これと同日に出願した“核酸送達の区画化方法ならびにその組成物および使用”なる表題の米国特許出願番号(Attorney Docket No. 33809.00551.US01/551)に関する。
許容される限り、上記関連出願の各々の発明を、その全体を引用することにより本願明細書に包含させる。
電子版の配列表をここに提出し、その内容を、その全体を引用することにより本願明細書に包含させる。2013年2月7日に電子ファイルを作成しており、そのサイズは3キロバイトであり、ファイル名551seqPC1.txtである。
ここに提供されるのは、核酸分子を対象の区画化された組織または臓器に送達する方法である。またここで提供されるのは、区画化された組織または臓器の実質(parenchyma)に核酸分子を送達するための使用および方法である。本方法および使用は疾患および状態の処置におよび産業用途、農業用途および動物用途に使用できる。またここで提供されるのは、組織または臓器の実質に投与するために調製された、アデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスまたは他の組み換えウイルスを含む組成物である。
遺伝子治療は、核酸分子を対象に投与し、該個体内の遺伝子を補うまたは変える治療方法である。特に、遺伝子治療は疾患処置の目的で使用される。遺伝子治療は遺伝子の変異または欠失により発症する遺伝子疾患の根本的処置であると見なされる。治療を必要とする対象へタンパク質をコードする遺伝子を導入するための種々の方法が試みられているが、満足な治療効果が得られた例は殆どない。それゆえに、遺伝子治療適用のために対象に核酸分子を送達する新たな方法が必要とされている。
ここに提供されるのは、対象に核酸分子を送達する方法である。本方法は、疾患および状態を処置するための適用を含む遺伝子治療適用ならびに産業用途、農業用途および動物用途に使用できる。ここに記載するように、本方法は、a)宿主の体循環から組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分を区画化し;そしてb)送達剤(delivered agent)を組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分に直接投与することを含み、該送達剤は核酸分子を含み、これにより送達剤は区画化された組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の実質細胞に入る。組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の区画化は送達剤投与前に、同時にまたは後に実施し得る。一般的に、組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の区画化は、送達剤投与前に、典型的に核酸分子含有送達剤送達前最大5分、4分、3分、2分、1分または30秒に開始する。
概要
A. 定義
B. 核酸送達および遺伝子治療
1. 現存する遺伝子治療方法
2. 区画化された組織または臓器への直接送達
C. 核酸送達の区画化方法
1. 組織または臓器の区画化
a. 肝臓
b. 他の臓器
2. 送達剤投与による核酸送達
a. 送達方法および投与経路
b. 送達を促進するための方法
c. 投与量および送達レジメン
3. 区画化の終了/解放
D. 送達剤
1. 核酸分子
2. 核酸分子を含む媒体および構築物
a. ウイルスおよびウイルスベクター
i. アデノウイルス
ii.アデノ随伴ウイルス(AAV)
iii. レトロウイルス
iv. レンチウイルス
b. 非ウイルスベクター
ナノ粒子
c. 全細胞
3. 遺伝子治療剤の例
E. 組成物、系およびキット
1. 投与製剤
2. 組み合わせ
3. 製品およびキット
F. 送達、発現または有効性の評価
1. 送達剤のモニタリング
2. 宿主毒性および免疫活性化
G. 適用および使用方法
1. 疾患および障害処置
a. 血友病AおよびB
b. 家族性高コレステロール血症
c. I型糖尿病
d. アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)欠損
e. 血管形成および癌
f. 自己免疫性および炎症性障害(例えば多発性硬化症)
g. 急性間欠性ポルフィリン症(AIP)
h. サンフィリポ症候群(ムコ多糖症III型;MPS III)
i. リポタンパク質リパーゼ欠損(LPLD)
2. タンパク質発現および製造
3. 獣医および農業用途
H. 実施例
特に断らない限り、ここで使用する全ての技法および科学用語は、本発明が属する技法分野の当業者に一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書の全体にわたり記載されている全ての特許、特許出願、公開された出願および刊行物、Genbank配列、データベース、ウェブサイトおよび他の公開された資料は、特に断らない限り、その全体を引用により本明細書に包含させる。ここでの用語について複数の定義が存在するならば、本章のものが優先する。URLまたは他のそのような識別子またはアドレスが引用されているとき、このような識別子は変わることがあり、インターネット上の特定の情報は導入され、また削除され得るが、同等の情報をインターネットでの検索により取得することができる。それらの引用は、当該情報の利用可能性および公的流布を証するものである。
ここに提供されるのは、全身循環からの臓器の血管隔離により、全身脈管構造から区画化されている臓器または臓器の部分へ、送達剤(核酸分子であるかそれを含む)を対象に送達する方法である。特に、ここに提供されるのは、外来性に送達された核酸分子の発現が、臓器またはその部分への送達剤(核酸分子であるかそれを含む)の投与により、該臓器またはその部分が一時的に区画化(すなわち、血管を奪われているまたは隔離されている)されているとき、持続性および安定であり得るとの発見に基づく方法である。さらに、核酸送達の区画化方法の実施は、先に達成されなかった直線的動態学的投与量−応答を達成する。送達される核酸分は、対象への治療ポリペチドをコードする核酸を含む治療核酸であり得る。それゆえに、本方法は、選択ポリペチドのインビボでの細胞性発現に使用できる。ある例においては、本ペプチド剤は、ポリペチドが対象における障害または状態を処置するかまたは回復させるかまたは他の点で対象のクオリティ・オブ・ライフを改善する、治療現場で有用であり得る。他の例において、本ペプチド剤は、農業現場で、例えば、肉生産の質または量を改善する適用で有用であり得る。
バイオテクノロジーの基本的挑戦は、インビボで細胞に遺伝子情報を送達する手法の開発である。疾患処置を目的としたまたは生物医学的研究のための体細胞への遺伝子物質の意図した送達は遺伝子治療と呼ばれている。遺伝子治療は、体細胞性および遺伝性遺伝子疾患を含む疾患処置に相当な進歩をもたらす見込みがある。成功するためには、核酸分子は、患部細胞に、有効かつ安全な方法で相当治療上意味のある割合で送達されなければならない。続いて、送達された核酸分子は、不在のまたは部分的または非機能的内在性遺伝子を補い、有利な機能を提供するかまたはドミナントネガティブな内在性遺伝子または感染性生物の遺伝子の活性を遮断する。
ここに提供されるのは、脈管構造、リンパおよび/または導管からの隔離により区画化した臓器またはその部分の細胞への送達剤の直接投与による、核酸分子の区画化送達の方法である。本発明方法において、本方法は、1)体循環との連絡を妨げまたは実質的に妨げるために臓器またはその部分へのまたはそこからの血流を遮断する;2)送達剤を組織またはその部分の組織実質細胞に直接投与する;および3)選択した薬剤の細胞内取り込みを可能にするのに十分な時間血管隔離を維持することを特徴とする。これらの特徴の効果は、送達剤、例えばウイルスベクターが、全身免疫応答が開始せず、全身毒性が避けられ、他の非標的化臓器または組織の汚染がないように、全身循環に暴露されないことを可能にする。さらに、送達剤を区画化された組織または臓器の実質細胞に直接投与することにより、細胞取り込みが最大化される。本薬剤の細胞取り込み最大化は、組織または臓器区画化解放により、実質的に全ての送達された核酸分子が細胞における導入遺伝子発現に利用可能であり、体循環に漏れ出る送達剤の量が減少するかまたは排除されることを可能にる。それゆえに、ここに提供する方法は、標的臓器内の所望の細胞のみのターゲティングおよび長時間にわたる導入遺伝子の発現を可能にする。
ここに提供されるのは、対象への選択された送達剤の投与により核酸分子を送達する方法であって、(1)脈管構造、リンパおよび/または管導系からの隔離またはほぼ完全な隔離により組織、臓器またはその部分を区画化し;(2)選択された送達剤を直接該区画化臓器またはその部分に投与し;(3)区画化を、送達剤投与後十分な時間維持し、隔離を開放し、例えば、臓器またはその部分への血液循環を回復させる各工程を含む方法である。本方法において、組織または臓器またはその部分の区画化は、10%未満の送達剤が体循環に曝されるおよび/または臓器またはその部分の細胞による80%を超える選択された送達剤の細胞取り込みを可能にするのに十分な時間、核酸送達剤の投与後維持する。ここで提供する方法は、60日間を超えて、90日間を超えて、6ヶ月を超えて、9ヶ月を超えてまたは1年を超えて組織または臓器またはその部分での導入遺伝子産物の持続性発現を提供する。
ここで提供する方法の第一段階として、組織、臓器またはその部分を、脈管構造系からの隔離により区画化する。ある例においては、区画化はまた導管系および/またはリンパ系からの隔離によりさらに達成される。区画化の開始後、選択された送達剤を投与し、選択された送達剤の細胞取り込みを可能にする十分な時間が経過するまで臓器またはその部分を血管循環を回復させるために解放または終了しない。
ヒトおよび他の動物において、肝臓は赤みがかった褐色の分葉臓器である。肝臓は、解毒、タンパク質合成および消化に必要な生化学物質の製造を含む、広範囲な機能を有する。本発明方法を使用して、肝臓は、いくつかの理由のために送達剤を送達する標的として特に良好な臓器である。体内で最大の臓器であり(全体重の2%〜3%)、容易に利用でき、区画化可能な少なくとも1個の葉があり、細胞代謝回転がかなり遅く、タンパク質スクリーニングの能力があり、長時間の無酸素および低酸素症に耐える。さらに、肝臓は、血清タンパク質の代謝および合成におけるその中心的役割のために、核酸分子の送達のための重要な標的臓器である。多数の疾患が知られており、そのいくつかは肝臓特異的遺伝子産物欠損が原因であり、分泌されたまたは細胞内のタンパク質の肝臓製造から利点を得る。これらは、例えば、家族性高コレステロール血症、血友病、ゴーシェおよびファブリー病および尿素サイクル障害および糖原病を含む。それにも係らず、これらの利点にもかかわらず、核酸の肝臓への標的送達は、送達された核酸の長期遺伝子発現の達成が不可能であることにより阻害されている。
ここに提供する方法を、核酸またはコードされたポリペチドの標的、臓器およびその脈構造の利便性、処置する障害または疾患、コードされたポリペチドの性質および他の因子を含む、種々の因子により広範な臓器で使用できる。肝臓に加えて、血隔離および区画化を行うための標的化臓器またはその部分はCNS(脳または脊髄)、末梢神経系(例えば、神経)、膵臓、胆嚢、内分泌腺(下垂体、副腎、甲状腺など)、心血臓器(例えば、心臓および血)、皮膚、泌尿生殖器臓器(腎臓、子宮、子宮頸、前立腺および尿道)、呼吸器系の臓器(例えば、肺または気道)、骨、筋肉および腸であり得る。当業者がさらなる標的臓器およびその葉を認識するとおり、この一覧は網羅的であることを意図しない。
本発明方法において、核酸を、組織細胞に直接送達剤を投与することにより、臓器または組織またはその部分における細胞に送達する。送達剤は、臓器またはその部分の区画化と同時に、断続的にまたは後に投与できる。典型的に、本発明方法において、送達剤を、臓器またはその部分の区画化の開始直後、例えば臓器またはその部分の区画化開始後、10分以内または最大10分および一般的に最大5分に投与する。例えば、送達剤を、対象に区画化開始後最大30秒、1分、2分、3分、4分または5分、6分、7分、8分、9分または10分に送達する。
核酸分子の送達剤の投与による送達は、そこからの遺伝子発現に対象の区画化した臓器またはその部分の細胞、特に関連する標的組織細胞に送達剤をに送達できる任意の方法または投与経路による。例えば、送達は実質細胞に直接である。肝臓の場合、標的実質細胞は肝細胞であり、一方非実質細胞は血管内皮細胞、クッパー細胞および支持間質細胞を含む。
一般的に本発明方法は、動脈、静脈および他の関連脈管構造およびまた導管系およびリンパ系の管への注射を避ける注射方法を利用する。実質注射による送達剤の送達は、周囲脈管構造および関連構造から実質組織および細胞を区別する造影手法の使用により補助され得る。造影は注射直前に、注射と同時におよび/または注射後に実施。このような造影手法は、磁気共鳴画像法(MRI)、超音波およびドップラー超音波検査を含む超音波検査手法を含むが、これらに限定されない。例えば、B-glow、3−D造影またはカラードップラーを使用できる。必要であれば、造影剤を注射して、造影を促進し得る。例えば、このような方法はまた血管または管系の管腔への本剤の進入の可能性を最小化するためにも使用できる。
投与する送達剤の量または投与量は、特定の適用に基づき経験的に決定できる。本発明方法のために、用量−応答動態は、投与した送達剤の量、例えばウイルス、例えばアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスまたは他のウイルスと、産生される導入遺伝子産物の間に直接相関関係があるように直線的である。例えば、形質導入ウイルスの40ゲノムが、治療量のタンパク質産生に十分であることが判明した(例えばNathwani et al. (2002) Blood, 100:1662参照)。それゆえに、本発明方法において、本方法は、治療的量のコードされるタンパク質を産生するために、細胞、例えば、肝細胞のウイルス形質導入による十分なゲノムコピー数を達成するために、低量のウイルスの投与を可能とする。例えば、量は、細胞あたりウイルスの40またはそれ以上のゲノムでの細胞の形質導入に十分である。本発明方法は、さらに細胞あたりのゲノムコピーを増幅し、それによりさらに現存する方法より低投与量で産物の持続性発現を高める。それゆえに、本方法の使用により、注射した粒子の量、細胞内ゲノムおよび発現されるタンパク質の量の厳密な相関が可能である。
送達剤の送達後、組織または臓器またはその部分の区画化を、送達剤の十分な取り込みを可能にするおよび/または体循環への送達剤の暴露を最小化するのに十分な時間維持する。例えば、区画化は、体循環を避けながら、細胞への送達剤の挿入を可能にするのに十分な時間である。この区画化の効果は、毒性および免疫活性化が最小化されることを意味する。一般的に、組織または臓器またはその部分の区画化を、毒性および免疫活性化(例えば局所または全身サイトカイン発現、炎症性浸潤、例えば好中球およびリンパ球浸潤および/または組織酵素群で評価して)を制限する、最小化するまたは回避するために維持する。投与する特定の送達剤、標的組織または臓器またはその部分、処置する対象または特定の適用を含む因子に基づき区画化を維持する厳密な時間を決定するのは当業者のレベルの範囲内である。遺伝子発現を評価するための方法および手法および免疫活性化および毒性と関連するパラメータは当業者に知られ、この例はセクションFに記載する。
本発明方法、使用または組成物において使用するための送達剤は、任意の核酸分子を含む任意の所望の核酸分子または媒体、構築物または複合体であり得る。特に、送達剤は核酸分子であるかまたは核酸分子を含み、当該核酸分子は所望の機能を有するかまたは所望の機能を有する選択ポリペチドをコードする。送達剤は、DNA(例えば、二本鎖環状または直鎖状)、RNA、リボザイムまたはアプタマーであり得る。さらに送達剤は、ネイキッドDNA、マイクロRNA、低分子干渉RNAまたはアンチセンス核酸を含むが、これらに限定されない任意の形態であり得る。送達剤は、異種核酸分子を含む構築物として提供され得る。インビトロまたはインビボで核酸の細胞への送達について当業者に知られた多くの構築物がある。このような構築物は、ウイルスベースの送達系および非ウイルスベースの送達系を含む。例えば、送達剤は、ナノ粒子(例えば、標的または放射標識ナノ粒子)、プラスミドまたはベクター(例えば、ウイルスベクターまたは発現ベクター)で送達される核酸分子を含む構築物であり得る。このような構築物は当分野で周知であり、ここに記載する組成物および方法での使用に容易に適応可能である。
本発明方法、使用または組成物において使用される特定の送達剤は、核酸分子であるかまたはそれを含み、それにより、その送達および/または発現が、標的臓器に存在するときまたは血流に分泌されたとき有用である活性または性質を発揮する。例えば、核酸分子の送達および/または発現は、不在または欠損(例えば部分的または非機能的)遺伝子産物を置換し、遺伝子産物の過剰産生を達成し、DNAワクチンとして作用し、所望の効果または治療的活性を有するポリペチドをコードしまたは遺伝子発現を阻害する。例えば、核酸分子は、所望の効果または治療的結果のためのポリペチドをコードするために選択されたものであり得る。他の例では、核酸分子は、遺伝子または遺伝子産物の核酸ベースの阻害剤、例えば遺伝子の転写または翻訳の阻害剤である。例えば、送達剤は、短干渉RNA(siRNA)配列、アンチセンス配列またはマイクロ−RNA(miRNA)配列であり得る。さらなる例において、送達剤を、予防的タンパク質を送達するために予防的に使用できる。さらなる例では、核酸分子の送達および/または発現は、例えば、肉生産を改善するため(例えば、ミオスタチン産生遮断による)、農業用途で使用するためのタンパク質をコードし得る。処置する特定の適用または特定の疾患または障害、例えばセクションGに記載するいずれか、により核酸分子を選択するのは当業者のレベルの範囲内である。
核酸分子は、送達のためのベクター、構築物または他の媒体中に提供され得る。この例は、ウイルスベクター、非ウイルスベクター、ナノ粒子または細胞自体である。送達のためのこのような構築物または媒体の製造方法は当業者に周知である。例えば、核酸分子は、当業者に周知の標準的方法を使用して、非ウイルスまたはウイルスベクターに導入できる。いくつかの例では、通例の分子生物学および組み換えDNA手法を使用できる(例えばAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York, N.Y., 1998, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)参照)。他の例においては、核酸分子を、何らかの適当な制御配列または配列の制御下にあるように導入できる。他の例において、核酸分子を、調節エレメント、例えばプロモーターまたはエンハンサーを含む発現カセットの一部として導入できる。適当な調節エレメントは、例えば、所望の発現レベルに基づき、当業者が選択できる。具体例において、調節エレメントは、遺伝子発現を組織特異的細胞に制限するための組織特異的プロモーター、例えば肝臓特異的プロモーターを包含するように選択できる。
ウイルスを本発明方法、使用および組成物において送達剤として使用でき、これにより外来核酸配列をウイルスベクターに挿入する。ウイルスは、宿主細胞へのウイルスDNA伝達に効率的であり、感染でき、ウイルス付着タンパク質(例えばカプシドまたは糖タンパク質)により特異的標的細胞に取り込まれ、そして非必須遺伝子を除去し、異種核酸分子を付加するように操作できるため、インビボでの核酸分子に有用である。多くのウイルスベクターが当業者に知られる。本発明方法で使用できるウイルスの例は、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、アルファウイルス、バキュロウイルス、ヘパドナウイルス、バキュロウイルス、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、オルトミクソウイルス、パポーバウイルス、パラミクソウイルスおよびパルボウイルスを含むが、これらに限定されない。具体例において、ウイルスはアデノウイルスである。ウイルスの選択は当業者のレベルの範囲内であり、多くの因子、例えばウイルスDNAの複製または組込みに対する要求、ウイルスの指向性および/またはウイルスの免疫原性による。このようなウイルスおよびその誘導体は周知であり、当業者が利用可能である。例えば、多くがAmerican Type Culture Collection(ATCC, Rockville, Md.)または業者(例えばVector Biolabs, Philadelphia, PA; Applied Biological Materials, Inc., Richmond, British Columbia, Canada)から入手可能である。
アデノウイルスは、本発明方法、使用および組成物において興味のある核酸分子を含む送達剤として使用できるウイルスベクターである。アデノウイルスは、約36kbのゲノムを有する核DNAウイルスであり、古典的遺伝学および分子生物学を通して十分特徴づけされている(Horwitz, M. S., “Adenoviridae and Their Replication,” in Virology, 2nd edition, Fields, B. N., et al., eds., Raven Press, New York, 1990)。ゲノムは、2種のウイルスタンパク質の一過性産生に照らして、早期(E1〜E4として知られる)および後期(L1〜L5として知られる)転写単位に分類される。これらの事象の分界はウイルスDNA複製である。
。さらに、アデノウイルスE4領域の部分を有する欠損アデノウイルスの産生に有用な細胞株が報告されている(例えば国際公開出願番号WO96/22378参照)。E3もベクターから欠失させ得るが、ベクター産生に必要ではないため、補完産生細胞から除いてもよい。
本発明方法、組成物および使用において送達剤として使用するウイルスベクターはアデノ随伴ウイルス(AAV)を含む。AAVは一本鎖ヒトDNAパルボウイルスであり、そのゲノムのサイズは4.6kbである。AAVゲノムはrep遺伝子およびcap遺伝子の2個の主要な遺伝子を含む。rep遺伝子はrepタンパク質をコードする(Rep76、Rep68、Rep52およびRep40)。cap遺伝子はAAV複製、レスキュー、転写および組込みをコードし、一方capタンパク質はAAVウイルス粒子を形成する。AAVは、AAVが増殖性感染(すなわち宿主細胞でそれ自体の複製)をすることを可能にする必須遺伝子産物の供給を、アデノウイルスまたは他のヘルパーウイルス(例えばヘルペスウイルス)に依存することに由来して名づけられている。ヘルパーウイルス非存在下で、AAVは、ヘルパーウイルス、通常アデノウイルスで宿主細胞の重感染によりレスキューされるまで、プロウイルスとして宿主細胞の染色体に統合される(Muzyczka (1992) Curr. Top. Micro. Immunol., 158:97-129)。
本発明方法、組成物および使用において送達剤として使用するウイルスベクターはレトロウイルスベクターを含む(例えば、Miller (1992) Nature, 357:455-460参照)。レトロウイルスベクターは、再配列されていない、単一配列遺伝子を、広範な齧歯類、霊長類およびヒト体細胞に送達する能力により、核酸の細胞への送達によく適合する。レトロウイルスベクターは宿主細胞のゲノム内に統合される。他のウイルスベクターと異なり、これらは分裂細胞にのみ感染する。
レンチウイルスは、レトロウイルスのサブクラスである。レンチウイルスの例はHIV、SIVおよびFIVである。他のレトロウイルスと異なり、レンチウイルスは非分裂細胞のゲノムに統合できる。それゆえに、例えば、レンチウイルスベクターは、一次肝細胞に効率的に遺伝子を送達することおよび永久に非分裂一次肝細胞のゲノムに統合することが報告されている(Lewis and Emerman (1994) J. Virol., 68:510-6)。レンチウイルスベクターはまたMMLVレトロウイルスベクターと同じ転写サイレンシング機構を苦にしない。レンチウイルスは、核移入機構と相互作用し、ヌクレオポアを介するウイルス組込み前複合体の活性輸送を仲介する、いくつかのウイルス粒子タンパク質、例えばマトリックスまたはVPR、に包含される核親和性決定基を有する点で、他のレトロウイルスと異なる。それゆえに、レンチウイルスの宿主細胞のゲノムへの組込みは細胞分裂に依存しない。
非ウイルスベースの薬剤を本発明方法、使用および組成物において送達剤として使用できる。これらは非ウイルス発現ベクターを含む。非ウイルス発現ベクターは、目的とする核酸、例えばポリペチド、アンチセンスDNAまたはsiRNAをコードする核酸を含み、ここで、該核酸類は発現制御配列(例えばプロモーター)に操作可能に結合している。適切なベクター骨格は、例えば、当分野で通常使用されているもの、例えばプラスミド、ミニサークル類および人工染色体(例えば哺乳動物人工染色体(MACs)、細菌人工染色体(BACs)、酵母人工染色体(YACs)または植物人工染色体(PACs)を含む。多くのベクターおよび発現系がNovagen(Madison, WI)、Clontech(Palo Alto, CA)、Stratagene(La Jolla, CA)およびInvitrogen/Life Technologies(Carlsbad, CA)から入手可能である。
非ウイルスベース送達剤は、核酸分子が目的とする細胞への特異的ターゲティングのための、ターゲティング分子を含む特定の担体に被包されているかまたはコンジュゲートしている、ナノ粒子(一般的に3〜200nm)を含む。遺伝子治療のためのナノ粒子の産生は当分野で周知である(例えばCho et al. (2008) Clin. Cancer. Res., 14:1310; Jin et al. (2007) Biotechnol. Prog., 23:32-41参照)。ナノ粒子は、例えばポリ(L−グルタミン酸(PGA)、ポリアミドアミン(PAMAM)、ポリ(エチレングリコール)(PEG)およびポリエチレンイミン(PEI)からの逐次重合により、ポリマー、例えばポリマー担体(例えばポリ乳酸、多糖、ポリ(シアノアクリレート、ポリ(ラクチド−コ−グリコリド))またはデンドリマーを産生するための分枝ポリマーとして製造できる。使用できる生分解性ポリマーは、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳−グリコール酸(PLGA)またはポリ(メチルメタクリレートを含む)(PMMA)。他のタイプのナノ粒子を、リポソームを使用して種々の脂質混合物として、酸化鉄を使用して磁気ナノ粒子として、SiO2を使用してシリカナノ粒子としてまたは塩化金酸またはクエン酸ナトリウムを使用して金ナノ粒子として産生できる。ナノ粒子系は当業者に周知である。
本発明方法を、エクスビボで送達された核酸を送達剤として含む細胞を送達に使用できる。例えば、外来性異種核酸を導入した患者またはドナーから隔離した細胞を、本発明方法により患者に直接的に挿入できる。本方法の利点は、細胞に対する免疫応答が血管区画化により低減されていることである。それゆえに、ここに提供されるのは、ここに記載するとおり、遺伝子改変した1個または複数個の細胞を、対象における区画化臓器またはその部分に投与する方法である。方法は、臓器またはその部分を区画化し、遺伝子改変した1個または複数個の細胞を区画化臓器またはその部分に投与し、区画化を、遺伝子改変した1個または複数個の細胞の投与後一定期間維持し、臓器またはその部分への血管循環を回復させることを含む。送達する細胞の量は所望の効果、特定の核酸、処置する対象および他の類似因子により、当業者により決定され得る。
本発明の方法、使用または組成物において使用するための核酸分子含有送達剤は、目的とする核酸、例えば当業者に知られた任意の遺伝子治療薬剤をコードする任意のウイルスまたは非ウイルスベクターであり得る。処置する特定の疾患または状態により適当な遺伝子治療薬剤を選択するのは当業者のレベルの範囲内である。何百もの遺伝子治療剤が治験中であり、そのいくつかは欧州で販売承認を受けている(例えばGlybera(登録商標), AdLPL)およびChina(例えばrAd53, Gendicine(登録商標))(例えばSheridan (2011) Nature Biotechnology, 29:121参照)。
ここでの区画化方法により組織または臓器またはその部分に送達するために使用する送達剤を含む組成物を提供する。ここに提供する組成物は、インビボ投与に適する。組成物は、実質投与用に製剤される。典型的に、ここでの組成物は注射剤として提供される。注射剤は慣用の形態で、溶液または懸濁液、注射前に溶液または懸濁液に溶解するのに適する固体形態またはエマルジョンとして製造できる。一般に、ここに提供される送達剤組成物は、液体形態である。
ここに提供されるのは、静脈内投与される同じ送達剤の量より100分の1以下である量の送達剤を含む、組織または臓器への実質投与用に製剤された組成物である。例えば、組成物は、標的臓器または組織に静脈内投与される同じ送達剤の量より100分の1、200分の1、300分の1、400分の1、500分の1、600分の1、700分の1、800分の1、900分の1、1000分の1、5000分の1、10000分の1以下である量の送達剤を含む、組織または臓器への実質投与用で提供される。本組成物は単回投与製剤または複数回投与製剤として提供され得る。
実質投与用に製剤した送達剤を含む組成物は、他の薬剤との組み合わせで提供できる。他の薬剤は、実質細胞による送達剤の侵入の効率を高めるかまたは促進するまたは送達剤に対する免疫応答を修飾する薬剤である。
組成物または組み合わせは、貯蔵および/または使用のためにパッケージできる。試剤のパッケージングに使用するためのパッケージング物質は当業者に周知である。パッケージング物質の例は、アンプル、ビン、チューブ、バイアル、容器、シリンジおよび選択製剤および実質投与に適するあらゆるパッケージング物質を含む。例えば、組成物または組み合わせをアンプル、使い捨てシリンジまたはガラス、可塑性または他の適切な物質から製造された複数または単回用量バイアルを含む。パッケージング物質は、実質投与目的での投与を促進するために針または他の注射デバイスを含み得る。包装の選択は特定の送達剤による。一般に、パッケージングはその中に含まれる組成物と非反応性である。また、組成物およびパッケージング物質は無菌である。
ここでの区画化方法の実施に際し、送達剤の送達、核酸分子の発現を確認するためおよび/または本方法の実施を他に確認するために、任意の数のパラメータをモニターまたは評価できる。例えば、送達剤の細胞への侵入、実質または体循環への送達剤の存在を評価でき、コードされるポリペチドの発現を評価でき、組織の毒性をモニターまたは評価できおよび/または免疫系の活性化を決定できる。当業者このような方法および手法を熟知する。このような方法および手法を所望により実施してよい。
例えば、ここでの区画化方法を使用した送達剤の送達または投与により、対象における送達剤の存在を評価または検出できる。例えば、血管隔離前、途中および後の送達剤の全身放出または導入遺伝子産物の末梢血への発現を測定するためのここに例示するアッセイを実施できる。典型的に、本発明方法において、10%未満および一般的に5%、4%、3%、2%または1%未満の導入遺伝子産物が、本発明方法を使用したここでの組織または部分への送達剤への直接投与後に、体循環で検出される。
送達剤投与により開始される組織毒性および免疫応答を評価できる。例えば、毒性を、根底にある組織または臓器またはその部分の病理組織学により評価できる。組織サンプルをバイオプシーにより得て、組織学的分析のために、典型的にヘマトキシリンおよびエオシンを使用して染色し得る。細胞異常性を評価できる。例えば、組織病理学的分析は、免疫活性化と関連する炎症性細胞浸潤、例えばリンパ性または好中球浸潤を同定できる。同じ対象の同じ組織または臓器の区画化されていない領域との比較もなし得る。他の例において、本発明方法により処置されていないコントロール対象からの組織を使用できる。
ここで提供する区画化方法は、導入遺伝子産物の持続性で長期の高レベル発現を可能にする。従って、欠損遺伝子産物を置き換えるための適用または治療剤を外因的に投与するための適用を含む医学適用;移植用臓器産生;トランスジェニック動物での治療的タンパク質(例えばバイオリアクター);および農業、動物および産業用途を含むが、これらに限定されない多様な適用において、本方法を使用できる。例えば、選択ポリペチドのインビボでの細胞発現のために方法を使用できる。ある例においては、本ペプチド剤は、ポリペチドが対象における障害または状態を処置するまたは回復させるかまたは対象のクオリティ・オブ・ライフを他に改善する治療現場で有用であり得る。他の例において、本ペプチド剤は、農業用途、例えば、肉生産の品質または量を改善する適用で有用であり得る。
ここに提供されるのは、ここで提供する区画化方法を使用して対象に核酸分子を送達することによる、疾患、障害または状態の処置方法である。処置する疾患、障害または状態は、外因的に送達した核酸分子による処置に適するあらゆるものである。例えば、このような疾患または状態は、状態と関連する遺伝子の発現の減少または上昇、状態と関連する遺伝子産物の活性の減少または上昇により処置が達成されるまたは状態と関連する変更(例えば疾患または状態と関連する徴候、症状または作用)と他に対抗するあらゆるものを含む。例えば、遺伝子治療を一遺伝子性疾患(例えば血友病AおよびB、I型糖尿病、アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)、嚢胞性線維症、筋ジストロフィーおよび多くのその他)を含む遺伝子欠損と関連する疾患または状態の処置に使用できまたは疾患または状態(例えば癌)の回復と関連する治療タンパク質のコードにより疾患または状態の処置にを使用できる。
ここでの区画化方法および物質により処置できる状態の例は、血友病である。AおよびBの2種の血友病がある。血友病Aの患者は第VIII因子として知られるタンパク質を欠き、血友病Bの患者は第IX因子を欠く。これらの血凝固因子の例レベルまたは完全な非存在が、傷を負ったときまたは血管構造が損われたとき、出血を止める患者の能力の重度の障害をもたらす。これは、致命的結果となり得る長時間の出血をもたらす。血友病の現在の処置は、血液製剤または必要な血液因子の組み換え変異体の定期的輸血である。しかしながら、ドナー血液のスクリーニングの改善にもかかわらず、血液または血液製剤輸血を介したウイルス感染の危険性は問題のままである。さらに、血液製剤由来および組み換え由来第VIII因子または第IX因子治療で、凝固因子の活性を遮断する抗体の発生が、幾分かの患者で処置合併症である。血友病は、第VIII因子または第IX因子レベルの中程度の上昇が、血友病AまたはBそれぞれの多くの臨床的帰結の改善に十分であることが示されているため、遺伝子治療の理想的候補と考えられている。
ここでの区画化方法および物質により処置できる状態の例は、家族性高コレステロール血症である。家族性高コレステロール血症は、低密度リポタンパク質受容体(LDLR)遺伝子における変異による常染色体優性障害である。血漿コレステロール低下は冠動脈疾患のリスクを下げるが、家族性高コレステロール血症の患者は、一般的に医学的処置にほとんど応答しない。家族性高コレステロール血症を有する対象は、低密度リポタンパク質受容体をコードする核酸の投与により処置されている(例えば Grossman et al. (1995) Nat. Med., 1:1148-1154; Shichiri et al. (2003) Gene Ther., 10:827-31; Yang et al. (1994) Immunity, 1:433-442; Yang et al. (1995) J. Virol., 69:2004-2015; Yang et al. (2004) Biochem. J., 379:89-97参照)。同様に、ここでの区画化方法を使用して、LDLRの遺伝子を含む送達剤を使用して、家族性高コレステロール血症を処置できる。これは、本発明方法を使用して、区画化された組織または臓器、例えば、区画化肝臓、例えば肝臓の小部分に、LDLRをコードする送達剤の組み換えウイルス(例えばアデノウイルス)またはある他のタイプのベクターを直接送達することにより達成できる。
ここでの区画化方法および物質により処置できる状態のさらなる例はI型糖尿病である。I型糖尿病は、インスリン産生の不全によりもたらされ、これは、血糖値の顕著な上昇に至る。さらに、持続性高血糖値は、患者のクオリティ・オブ・ライフおよび寿命をひどく減少させる、重度の帰結に至る。糖尿病は現在治癒しない慢性疾患である。
ここでの区画化方法および物質により処置できる状態のさらなる例は一般的一遺伝子性肺疾患アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)欠損である。AATは、肝臓により産生され、循環に分泌され、そこで、肺への道を発見し、そこで、肺胞壁のエラスチン繊維および他の結合組織成分が好中球エラスターゼにより分解されることから保護する。AAT欠損は、気腫による患者の死をもたらし得る。AATをコードする遺伝子が単離され、組み換えヒトAATタンパク質を用いる外来性投与は現在の治療の一つである。
ここでの区画化方法により処置できる疾患または状態の例は血管形成である。血管形成は、先在する脈管構造から新規毛細血管が形成される過程である。内皮細胞の増殖と遊走が関与する複雑な過程である。血管形成は、生殖、胚発育および創傷治癒に基礎的役割を有する。しかしながら、未制御の血管形成は、多くの疾患、例えば固形腫瘍増殖および転移、関節炎、糖尿病および失明のいくつかの形態の進行に中心的役割を有する。例えば、血管形成は、腫瘍を増殖でき、転移を促進する腫瘍への血液供給の形成により、癌の増殖および拡散に役割を有する。それゆえに、癌および血管形成が役割を有する他の疾患の処置に抗血管形成剤を使用できる。
ここでの区画化方法により処置できる疾患または状態の例は自己免疫性および炎症性障害、例えば多発性硬化症(MS)、リウマチ性関節炎、骨関節症、糖尿病、クローン病、シェーグレン症候群、嚢胞性線維症、筋炎および狼瘡である。例えば、MSは、脳および脊髄の軸索の周りの脂肪性髄鞘が損傷される、中枢神経系(CNS)の自己免疫性炎症性疾患である。その結果、軸索がもはやシグナルを伝達できなくなる。
ここでの区画化方法により処置できる疾患または状態の例は急性間欠性ポルフィリン症(AIP)である。AIPは、ヘム合成経路の第三酵素であるポルフォビリノーゲンデアミナーゼ(PBGD)の欠損により特徴付けられる遺伝性代謝疾患である。酵素活性は、本遺伝子形質を受け継ぐ者では正常の〜50%である。本疾患は、常染色体優性方法で遺伝性であり、最も一般的な急性ポルフィリン症である。全人種で起こるが、欧州北部、主にスウェーデン、英国およびアイルランドで最も蔓延している。米国および他の国での有病率は5/100,000と推定され、スウェーデン北部では60〜100/100,000ほども高い。今日まで、PBGD遺伝子における225を超える変異が記載されている。顕性な臨床的特徴は、腹痛および内臓神経および循環障害を含む、全ての神経系の機能不全による急性間欠性発作である。腹痛は症例の85〜95%で報告され、最も一般的な性質であり、神経学的変化が続くか、または合併する。AIPが認識されず、有害薬物、例えば発作により誘発され得る肝臓チトクロムP450酵素群により代謝される薬物が中止されないならば、呼吸器および球麻痺への進行および死となり得る。突然死も、心臓不整脈の結果として起こり得る。一次肝癌および腎臓機能障害が同様に起こることがある。
ここでの区画化方法および物質により処置できる状態の例は、サンフィリポ症候群である。サンフィリポ症候群またはムコ多糖症III型(MPS III)は、常染色体劣性遺伝欠損が、部分的に分解された硫酸ヘパランのオリゴ糖の蓄積を起こす、リソソーム貯蔵疾患である。70,000人の出生児あたり約1人で起こる。サンフィリポ症候群は、幼児期の学習能力低下、成長遅延または阻止、発育遅延および精神状態悪化と関連する。サンフィリポ症候群に、次の4種のサブタイプがある:サンフィリポタイプA(MPS IIIAは、酵素ヘパランN−スルファターゼが不在であるまたは変更されているときに起こる;サンフィリポタイプB(MPS IIIB)は、酵素アルファ−N−アセチルグルコサミニダーゼ(NaGlu)が不在であるか、変更されているかまたは十分産生されないとき起こる;サンフィリポC(MPS IIIC)は、酵素アセチル−コアルファ−グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼが不在であるか、変更されているかまたは十分産生されないとき起こる;およびサンフィリポタイプD(MPS IIID)は、酵素N−アセチルグルコサミン6−スルファターゼが不在であるか、変更されているかまたは十分産生されないとき起こる。例えば、サンフィリポタイプBは、酵素アルファ−N−アセチルグルコサミニダーゼの欠損を起こし得る、NaGlu遺伝子の変異が原因である。
ここでの区画化方法および物質により処置できる状態の例は、リポタンパク質リパーゼ欠損(LPLD;別名1型高脂血症、一次高リポタンパク血症または家族性高カイロミクロン血症)である。LPLDは、リポタンパク質リパーゼ(LPL)をコードする遺伝子の改変が原因である。LPLの不在またはLPLの欠損により、長鎖脂肪酸類代謝欠損により血中脂肪レベルが上昇する。LPLDに関連する症状は、例えば、腹痛および膵炎を含む。LPLDはまた高血中トリグリセリドレベルとも関連し、これにより対象は早発性糖尿病および粥状動脈硬化に罹患しやすくなり得る。
ここに提供されるのは、動物においてポリペチドを製造する方法である。動物における、治療的タンパク質または栄養補助食品を含む、タンパク質の治療的産生は当業者に周知である。例えば、組織プラスミノーゲン活性化因子、(t−PA)、インスリン、成長ホルモンおよび凝血因子のような産物が動物、例えばウシ、ヒツジまたはヤギで産生されている(例えばMercier J.C. (1987) Exploiting New Technologies in Animal Breeding, p. 122-131, Oxford University Press; Lillico et al. (2005) Drug Discovery Today, 10:191-196; Echelard et al. (2006) Biopharm International, 19:36; Prather et al. (2003) Theriogenology, 59:115-123)。目的とする産物を発現するウイルスベクターを使用する昆虫細胞における遺伝子産物の製造も記載されている(例えば米国公開出願番号US2011/0119777参照)。
ここで提供する方法を、動物における遺伝子治療適用および特に獣医、農業または産業用途に使用できる。このような例において、本発明方法において送達するための送達剤は、動物における生産性向上および/または疾患制御に有効な核酸分子をコードする。動物における適用は、所望の形質を有する動物の改変または産生、動物の質の向上(例えば筋肉、乳、羊毛)、疾患に対する抵抗性の増加または産業用途のための産物(例えば絹)の産生のための適用を含むが、これらに限定されない。例えば、遺伝子治療適用は、動物における毛生産を増強するか、動物における羊毛生産量を増やすか、動物の成長を促すまたは栄養素合成もしくは利用を制御するものを含む。このような例において、核酸分子は、動物における筋肉生産量を増やす、動物における毛生産量を増やす、動物における羊毛生産量を増やす、動物の成長を促すまたは栄養素合成もしくは利用に関わるタンパク質をコードする。
次の実施例は説明目的でのみ包含させ、本発明の範囲を限定することを意図しない。
尾状葉へのアデノウイルス形質導入のための区画化
アデノウイルスを、実質クランプを使用して脈管構造から隔離することにより区画化した尾状葉に注射した。Ad−CMV−Lucと命名したアデノウイルスは、David T. Curiel(University of Alabama、例えばBass et al. (1995) Cancer Gene Ther., 2:97-104;公開国際PCT出願番号WO1995/026411参照)から提供された。Ad−CMV−Lucはヒトアデノウイルス5型由来であり、サイトメガロウイルス(CMV)プロモーターにより駆動されるルシフェラーゼ遺伝子を含む。特に、アデノウイルス形質導入分析のために、E1領域欠失によりアデノウイルスを複製欠損とした。この欠失E1領域に、レポーター遺伝子ルシフェラーゼ(Adluc)をクローン化し、ヒトサイトメガロウイルスプロモーターにより駆動されるように構築した(命名rAd−CMV−ルシフェラーゼまたはAd.CMV.Luc)。
肝臓炎症の組織学的分析を行った。肝臓炎症における区画化およびi.v.輸注の効果を比較するために、72時間目に得た肝臓切片を好中球浸潤の徴候について分析した。i.v.コントロールからのサンプルで行った肝臓組織学は、特に門脈周囲領域における、激しい限局性肝細胞壊死を示した。これらの限局性壊死性領域は好中球に浸潤されていた。肝細胞壊死、非実質細胞または浸潤炎症性細胞は、区画化動物で得た組織には全くなかった。
全身解放を最小化するためのクランプ時間の決定
A. クランプ解放後の全身ウイルス発現
注射組織へのアデノウイルスの区画化を行うためのクランピング時間の最適な長さを決定するために、実施例1に記載の外科手技を行い、続いて1mLインスリンシリンジを使用して、総体積50μlに懸濁した1×1010pfu Ad.CMV.Lucを尾状葉の実質に注射した。止血微小鉗子クランプをアデノウイルス注射後7分、15分、30分および60分に茎から解放した(n=6/時点)。クランプ解放1分後、200μlの末梢血を大静脈から回収し、PCR用に処理した。ルシフェラーゼ遺伝子を次のプライマーを使用して増幅した:センス5’−ATGGAAGACGCCAAAAAネコAAAG−3’(配列番号1およびアンチセンス5’−AAAACCGGGAGGタグATGAGATGT−3’(配列番号2)、20μlの総反応体積中。PCR条件は:94℃で5分、続いて25サイクルを94℃で30秒、55℃で30秒および72℃で30秒および7分、72℃伸張であった。
30分のクランプ時間後の末梢血におけるアデノウイルスDNAの存在を評価する上記結果を確認するために、30分のクランプ時間中および後の末梢血に存在するアデノウイルスを測定するための経時変化研究を行った(n=3)。特に、尾状葉をクランプしたら、実施例1に記載の外科手技を行い、続いて1mLインスリンシリンジを使用して、50μlの総体積に懸濁した1×1010pfu Ad.CMV.Lucを尾状葉の実質に注射した。次いで、アデノウイルス注射後1分、3分および5分(クランピング中)およびクランプ解放後1分、3分および5分(クランプ解放後)に大静脈から100μl採血した。クランプを30分設置した。血液サンプルを、上記のとおりPCRによりルシフェラーゼ遺伝子を増幅することによりアデノウイルスDNAの存在について分析した。10μlのAd.CMV.Lucアデノウイルスをポジティブコントロールとして使用した(C+)。
導入遺伝子発現の用量−応答動態
タンパク質発現とアデノウイルス投与の相関を決定するために、用量応答曲線を作成した。実施例1に記載する外科手技およびクランピング手技に従った(n=6/用量群)。各群は、先に記載したとおり、50μL PBS中1×103、1×106、1×109または1×1012pfu Ad.CMV.Lucを注射された。コントロール群のラットは外科的手技にフされ、100μL PBSの総体積の対応するアデノウイルス用量を直接的に大静脈に注射された(n=6/用量群)。注射後、ラットを実施例1に記載のとおり縫合し、回復させた。術後72時間で、ラットを実施例1に記載のとおり屠殺し、実施例1に記載のとおり肝臓の尾状葉を改修し、ルシフェラーゼ活性アッセイのために処理した。ルシフェラーゼ活性がサンプルに存在するルシフェラーゼタンパク質の合成量に比例するため、この計量を、合成された遺伝子導入タンパク質の指標として使用した。
導入遺伝子発現の期間
導入遺伝子発現の持続性を、アデノウイルス投与後漸進的時点での導入遺伝子発現(ルシフェラーゼ活性)の測定により決定した。この目的で、ラット(n=6/時点)を実施例1に記載する外科手技に付し、実施例1に示すとおりのプロトコルに従い、尾状葉クランプ後、50μl PBS中の1×109pfuのAd.CMV.Lucを各動物の尾状葉に注射した。コントロール群のラット(n=5)を実験群と同じ外科的手技に付したが、100μl PBSの1×109pfu of Ad.CMV.Lucを大静脈へ静脈内(IV)注射した。アデノウイルス投与後、ラットを実施例1に記載のとおり縫合し、回復させた。時点あたりの5匹のラットを、上記のとおり、アデノウイルス注射後30日、60日、90日、120日、150日、180日および365日に屠殺した。次いで、実施例1に記載のとおり肝臓の尾状葉を回収し、アッセイルシフェラーゼ活性のための処理した。
サイトカインmRNA発現
区画化尾状核葉へのアデノウイルス送達により肝臓に誘発されるサイトカイン発現レベルおよび大静脈へのアデノウイルス送達により末梢血に誘発されるサイトカイン発現レベルを決定した。簡単にいうと、尾状葉をクランプし、実施例1に記載の外科手技を行い 続いて実施例1に記載のとおり、50μlリン酸緩衝化食塩水(PBS)中の1×109pfu組み換えAd.CMV.Lucを尾状葉の実質に注射した。コントロール群として、動物に、実施例1に記載のとおり、総体積50μl PBS中の1×109pfu Ad.CMV.Lucを大静脈に注射した。
死亡したブタ肝臓でのエキソビボクランピング試験
予備的エクスビボ試験をブタ肝臓で行った。サイズ、重量および肉眼的解剖学がヒトに極めて似ているため、ブタを動物モデルとして選択した。新鮮な全/完全肝臓を地元の肉屋から得た。腹腔鏡下デバイスを使用して、左中葉をクランプし、5ml ブロモフェノールブルーを実質に注射した。30分後、クランプを外し、クランプが設置されていた両側の組織を切開し、青色色素の存在について分析した。青色色素は注射した組織に近位の側のクランピング境界で見られたが、青色色素は注射部位に遠位のクランピング境界の端の組織に浸透していなかった。それゆえに、クランピングデバイスは、デバイスの遠位側に溶液が伝わるのを阻止することにより、色素を区画化できた。
ブタにおけるアデノウイルス形質導入の区画化
実施例1に記載した手技を次いで実施例6に記載したクランピングデバイスを使用してブタで試験した。ブタを標準条件下、12時間昼/夜サイクルで飼育し、水および餌を自由に与えた。ブタを一般的麻酔下に置き、腹部領域の滅菌洗浄の後、5cm 剣状骨下方中央切開を行った。次いで肝臓の左中葉を位置づけし、暴露し、実施例5に記載した外科的クランプを左中葉の遠位部分に置いた。次いでrAd−CMV−ルシフェラーゼの1×109感染性ウイルス粒子を含む500μLのリン酸緩衝化溶液(PBS)を、インスリンシリンジを使用した隔離した左中葉の実質に注射した。
区画化肝臓葉への送達後の血中の可溶性レポータータンパク質発現
可溶性タンパク質が発現され、血中で検出され得るかを決定するために、可溶性タンパク質を発現するアデノウイルスを、実質クランプを使用して区画化したラットの尾状葉に注射した。Ad−ALB−AFPと命名したアデノウイルスはヒトアデノウイルス5型由来であり、ラットアルブミンプロモーター配列により駆動されるラットアルファフェトプロテイン(AFP)遺伝子をコードする(Herbomel et al. (1989) Molecular and Cellular Biology, 9:4750-4758; Tronche et al. (1989) Molecular and Cellular Biology, 9:4759-4766)。アデノウイルスは、E1領域欠失により複製欠損とした。この欠失E1領域に、レポーター遺伝子アルファフェトプロテイン(AFP)をクローン化し、肝臓への特異性のためにラットアルブミン(ALB)プロモーターにより駆動されるように構築した。ALBプロモーター制御下にラットAFPをコードするpUC57プラスミドをGenscript(Piscataway, NJ)により合成した。pUC57プラスミドからのAFP発現カセットをデュアルベーシックアデノウイルスシャトルベクターにサブクローン化し、Ad5(DE1/DE3)ベクター(Vector Biolabs, Philadelphia, PA)と組み換えた。アデノウイルスをHEK293細胞にパッケージし、塩化セシウム超遠心分離法で精製した。ALB−AFPウイルスを、50μLの総体積中3.25×109でと投与した。注射後5日目、動物を屠殺し、肝臓を回収した。
Claims (125)
- 治療核酸により処置可能な疾患または状態の処置に使用するための組成物であって:
該組成物は核酸分子を区画化された組織、臓器または組織もしくは臓器の部分への直接実質投与により投与されるものであり、ここで、該部分は区画化および該組成物の投与を実施するのに十分なサイズであり;
該組成物は直接実質投与用に製剤され;
該組成物は送達剤を含み;そして
該送達剤は治療核酸分子を含む、
組成物。 - 治療核酸により処置可能な疾患または状態を処置するための医薬の製造における組成物の使用であって:
該組成物は核酸分子を区画化された組織、臓器または組織もしくは臓器の部分に直接実質投与により投与するためのものであり、ここで、該部分は区画化および該組成物の投与を実施するのに十分なサイズであり;
該組成物は直接実質投与用に製剤され;
該組成物は送達剤を含み;そして
該送達剤は治療核酸分子を含む、
該使用。 - 治療核酸により処置可能な疾患または状態が遺伝子欠損、外来性遺伝子産物により回復する疾患または状態および病因に遺伝子産物の発現の異常または変更がある疾患または状態から選択される、請求項1または請求項2に記載の使用または組成物。
- 治療核酸が疾患または状態を処置する、対象における異種ポリペチドを過剰産生する、動物における筋肉生産量を増やす、動物の成長を促すまたは動物における栄養素合成または利用をもたらす、請求項1〜3のいずれかに記載の使用または組成物。
- 核酸分子がポリペチドをコードする、請求項1〜4のいずれかに記載の使用または組成物。
- コードされたポリペチドが酵素、ホルモン、凝固因子または凝血因子、サイトカイン、増殖因子またはその活性部分、抗体またはその抗原部分、血管形成モジュレーター、免疫調節剤、疼痛モジュレーター、受容体またはその活性部分、輸送タンパク質、制御タンパク質、抗原およびアレルゲンから選択される、請求項5に記載の使用または組成物。
- コードされたポリペチドがアデノシンデアミナーゼ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子(CTFR)、ガルスルファーゼ、ラロニダーゼ、N−アセチルガラクトサミン−6−スルファターゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、酸アルファグルコシダーゼ、イミグルセラーゼ、アルグルコシダーゼアルファ、甲状腺刺激ホルモン、成長ホルモン、インスリン、甲状腺ホルモン、エリスロポエチン(EPO)、インターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−7、IFN、TNF、IL−12、IL−18、flt3、NP2、骨形成タンパク質(BMP)、上皮細胞増殖因子(EGF)、エリスロポエチン(EPO)、線維芽細胞増殖因子(FGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、インシュリン様増殖因子(IGF)、血小板由来増殖因子(PDGF)、トランスフォーミング増殖因子αおよびβ、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、上皮細胞増殖因子受容体(EGFR)、線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)、トランスフォーミング増殖因子受容体(TGFR)、血管内皮細胞増殖因子受容体(VEGFR)、プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、第VIII因子、第IX因子、フォン・ヴィルブランド因子、成長ホルモン、METH−1、METH−2、TrpRSフラグメント、プロリフェリン関連タンパク質、プロラクチンフラグメント、PEDF、バソスタチン、アンジオスタチン、エンドスタチン、キニノスタチン、フィブリノーゲン−Eフラグメント、トロンボスポンジン、タムスタチン、カンスタチン、レスチン、sFlt−1、sFlk、sNRP1、IP−10、PF−4、Gro-beta、IFN−ガンマ、IFN、FGF、FGFR、FGFRアンタゴニスト(sFGFR)、sEphB4およびセフリンB2、PDGF、TGFおよびIGF−1、HSV−TK、カルボキシペプチダーゼG2(CPG2)、カルボキシルエステラーゼ(CA)、シトシンデアミナーゼ(CD)、チトクロムP450(cyt−450)、デオキシシチジンキナーゼ(dCK)、ニトロレダクターゼ(NR)、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ(PNP)、チミジンホスホリラーゼ(TP)、水痘帯状疱疹ウイルスチミジンキナーゼ(VZV−TK)、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(XGPRT)、アスパルチルグルコサミニダーゼ、α−ガラクトシダーゼA、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ、リソソーム膜貫通型タンパク質、システイントランスポーター、酸セラミダーゼ、酸α−L−フコシダーゼ、保護タンパク質/カテプシンA、酸β−グルコシダーゼまたはグルコセレブロシダーゼ、酸β−ガラクトシダーゼ、イズロン酸−2−スルファターゼ、α−L−イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸α−マンノシダーゼ、酸β−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N−アセチルガラクトサミン−6−硫酸スルファターゼ、N−アセチルグルコサミン−1−ホスホトランスフェラーゼ、酸スフィンゴミエリナーゼ、NPC−1、β−ヘキソサミニダーゼB、ヘパランN−スルファターゼ、α−N−アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル−CoA:αグルコサミニドN−アセチルトランスフェラーゼ、N−アセチルグルコサミン−6−硫酸スルファターゼ、β−グルクロニダーゼ、酸リパーゼ、ネプリライシン、インスリン分解酵素インスリジン、thimetオリゴペプチダーゼ、IGF−1、カルビンディンD28、パルブアルブミン、HIF1−アルファ、SIRT−2、VEGF、SMN−1、SMN−2、GDNF、毛様体神経栄養因子(CNF)、低密度リポタンパク質(LDLR)、アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)、UDP−グルクロニル−トランスフェラーゼ、UGT1A1、グルコース−6ホスファターゼ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ、ガラクトース−1−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、分枝鎖アルファ−ケト酸デヒドロゲナーゼ、フマリルアセト酢酸ヒドラーゼ、メチルマロニル−CoAムターゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、アデノシンデアミナーゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ビオチニダーゼ、ベータ−グルコセレブロシダーゼ、ベータ−グルクロニダーゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼおよびp53から選択される、請求項5または請求項6に記載の使用または組成物。
- 治療核酸により処置可能な疾患または状態が関節炎、慢性疼痛、HIV関連AIDS、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、遺伝性酵素欠損、遺伝性免疫欠損、癌、レトロウイルス感染、血友病、糖尿病、筋ジストロフィー、心血管障害、嚢胞性線維症、神経変性障害、外傷、疼痛、鎌状赤血球貧血、自己免疫性疾患、炎症性疾患および高血圧から選択される、請求項1〜7のいずれかに記載の使用または組成物。
- ポリペプチドをコードする治療核酸分子が血友病Aを処置するための第VIII因子;血友病Bを処置するための第IX因子;I型糖尿病を処置するためのインスリン遺伝子;アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)欠損を処置するためのアルファ−1−アンチトリプシン(AAT);ヘモクロマトーシスを処置するためのヘモクロマトーシスタンパク質(HFE);ウィルソン病を処置するための銅輸送ATPase 2;クリグラー・ナジャー症候群I型を処置するためのUDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1A1(UGT1A1);オルニチントランスカルバミラーゼ欠損、II型を処置するためのオルニチントランスカルバミラーゼ(OTC);家族性高コレステロール血症を処置するための低密度リポタンパク質受容体(LDLR);無フィブリノーゲン血症を処置するためのフィブリノーゲンアルファ(FGA)、ベータ(FGB)またはガンマ(FGB);糖原病(GSD)Ia型を処置するためのグルコース−6−ホスフェート−α;GSD Ib型を処置するためのG6PT;GSD II型(ポンペ)を処置するための酸−α−グルコシダーゼ;ムコ多糖症(MPSI)を処置するためのα−L−イズロニダーゼ;MPS IIIAを処置するためのスルファミダーゼ;MPS IIIBを処置するためのα−N−アセチルグルコサミニダーゼ(NaGlu);MPS VIIを処置するためのβ−グルクロニダーゼ;ファブリー病を処置するためのα−ガラクトシダーゼA;ゴーシェ病を処置するためのグルコセレブロシダーゼ;ニーマン・ピック症候群を処置するための酸スフィンゴミエリナーゼ;フェニルケトン尿症を処置するためのフェニルアラニンヒドロキシラーゼ;肝線維症を処置するためのTIMPアンタゴニストまたは抗HSC分子;肝虚血再灌流傷害を処置するための抗ROS分子;アルツハイマー病を処置するためのアミロイド−ベータ分解酵素ネプリライシン、インスリン分解酵素インスリジンまたはthimetオリゴペプチダーゼ;筋萎縮性側索硬化症(ALS)を処置するためのインスリン増殖因子−1(IGF−1)、カルビンディンD28、パルブアルブミン、HIF1−アルファ、SIRT−2、VEGF、SMN−1、SMN−2、GDNFまたは毛様体神経栄養因子(CNF);ガラクトース血症を処置するためのガラクトース−1−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ;メープルシロップ尿症を処置するための分枝鎖アルファ−ケト酸デヒドロゲナーゼ;チロシン血症I型を処置するためのフマリルアセト酢酸ヒドラーゼ;メチルマロン酸血症を処置するためのメチルマロニル−CoAムターゼ;シトルリン血症を処置するためのアルギニノコハク酸シンテターゼ;痛風およびレッシュ・ナイハン症候群を処置するためのヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ;スライ症候群を処置するためのベータ−グルクロニダーゼ;ツェルウェーガー症候群を処置するためのペルオキシソーム膜タンパク質70kDa;ヒト免疫不全ウイルス(HIV)感染を処置するためのエンフュービルタイド;複合免疫不全(SCID)を処置するためのアデノシンデアミナーゼ(ADA);嚢胞性線維症を処置するためのCFTR;急性間欠性ポルフィリン症を処置するためのポルフォビリノーゲンデアミナーゼ(PBDG);多発性硬化症を処置するためのインターフェロン−ベータ;リポタンパク質リパーゼ欠損(LPLD)を処置するためのリポタンパク質リパーゼ;癌を処置するためのp53;およびパーキンソン病を処置するためのグルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)から選択される、請求項1〜8のいずれかに記載の使用または組成物。
- 動物における筋肉生産増強、動物における毛成長増加、動物における羊毛生産増強、動物の成長促進または動物における栄養素合成もしくは利用を促進するために使用する組成物であって:
該組成物は区画化された組織、臓器または組織もしくは臓器の部分に直接実質投与により投与されるものであり、ここで、該部分は区画化および組成物の投与を実施するのに十分なサイズであり;
該組成物は直接実質投与用に製剤され;
該組成物は送達剤を含み;そして
該送達剤は動物における筋肉生産量を増やす、動物における毛成長を増加する、動物における羊毛生産量を増やす、動物の成長を促すまたは栄養素合成もしくは利用に関与するポリペチドをコードする核酸分子を含む、
使用。 - 動物における筋肉生産増強、動物における毛成長増加、動物における羊毛生産増強、動物の成長促進または動物における栄養素合成もしくは利用を促進するための医薬の製造における組成物の使用であって:
該組成物は区画化された組織、臓器または組織もしくは臓器の部分に直接実質投与により投与されるものであり、ここで、該部分は区画化および組成物の投与を実施するのに十分なサイズであり;
該組成物は直接実質投与用に製剤され;
該組成物は送達剤を含み;そして
該送達剤は動物における筋肉生産量を増やす、動物における毛の成長を増加する、動物における羊毛生産量を増やす、動物の成長を促すまたは栄養素合成もしくは利用に関与するポリペチドをコードする核酸分子を含む、
使用。 - コードされたポリペチドが:
ミオスタチン阻害因子である動物における筋肉生産量を増やすポリペチド;
成長ホルモン、IGF−1、成長ホルモン放出因子またはニワトリSkiである動物の成長を促すポリペプチド;および
セリントランスアセチラーゼおよびo−アセチルセリンスルフヒドリラーゼである栄養素合成もしくは利用に関わるポリペチドから選択される、請求項10または請求項11に記載の使用または組成物。 - ミオスタチン阻害因子がフォリスタチンである、請求項12に記載の使用または組成物。
- 区画化された組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分が体循環から隔離され、これにより組織または臓器またはその部分への血液供給および血流が減少するかまたは排除されるように組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分に繋がるまたは通り抜ける動脈、静脈、導管および/または血管が遮断される、請求項1〜13のいずれかに記載の使用または組成物。
- 区画化された組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分が実質性にクランプされている、請求項1〜14のいずれかに記載の使用または組成物。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分が肝臓、脳、脊髄、膵臓、心臓、皮膚、腎臓、肺、血管、骨、筋肉、子宮、子宮頸、前立腺、尿道および腸から選択される、請求項1〜15のいずれかに記載の使用または組成物。
- 組成物が核酸分子の区画化肝臓または肝臓の部分への直接実質投与により投与されるものである、請求項1〜16のいずれかに記載の使用または組成物。
- 肝臓の区画化部分が葉、葉のセグメントもしくは部分または肝臓のセグメントから選択される、請求項17に記載の使用または組成物。
- 葉または葉の部分が右葉、左葉、方形葉および尾状葉またはその部分から選択される、請求項18に記載の使用または組成物。
- 送達剤が核酸分子を含む一本鎖DNA、直鎖状DNA、環状DNA、非ウイルスベクター、ウイルス、ウイルス様粒子、ミニサークル、ナノ粒子および細胞全体から選択される、請求項1〜19のいずれかに記載の使用または組成物。
- 送達剤が非ウイルスベクターであり、該非ウイルスベクターが発現ベクターである、請求項20に記載の使用または組成物。
- 送達剤がナノ粒子であり、該ナノ粒子が標的化されているか放射標識されている、請求項20に記載の使用または組成物。
- 送達剤がウイルスである、請求項20に記載の使用または組成物。
- 送達剤がウイルスであり、該ウイルスがアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、レトロウイルス、ワクシニアウイルスおよび単純ヘルペスウイルスから選択される、請求項23に記載の使用または組成物。
- ウイルスが核酸分子を含み、該核酸分子がウイルスゲノムに異種である、請求項23または請求項24に記載の使用または組成物。
- レトロウイルスがレンチウイルスである、請求項23〜25のいずれかに記載の使用または組成物。
- ウイルスがアデノウイルスである、請求項23〜25のいずれかに記載の使用または組成物。
- 組成物が核酸分子の区画化肝臓または肝臓の部分への直接実質投与により投与されるものであり、ここで、該部分は区画化および組成物の投与を実施するのに十分なサイズであり;
本組成物が直接実質投与用に製剤され;
本組成物が治療核酸分子を含むアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスを含み、核酸分子がウイルスゲノムに異種である、請求項1〜27のいずれかに記載の使用または組成物。 - 血清型がアデノウイルス2型またはアデノウイルス5型である、請求項27または請求項28に記載の使用または組成物。
- アデノウイルスがE1、E2a、E2b、E3またはE4コード領域における欠失を含む、請求項27〜29のいずれかに記載の使用または組成物。
- アデノウイルスがE1コード領域における欠失を含む、請求項27〜30のいずれかに記載の使用または組成物。
- 核薬剤分子がDNA分子、RNA分子およびアプタマーから選択される、請求項1〜20のいずれかに記載の使用または組成物。
- 核酸分子がマイクロRNA、低分子干渉RNA、リボザイムおよびアンチセンス核酸から選択される、請求項32に記載の使用または組成物。
- 送達剤が実質細胞への進入を促進するために脂質、ポリマー試剤または他の薬剤と製剤されている、請求項1〜33のいずれかに記載の使用または組成物。
- 送達剤が送達剤の細胞取り込みを促進する薬剤と製剤されている、請求項1〜34のいずれかに記載の使用または組成物。
- 送達剤がウイルスであり、薬剤がウイルス特異的細胞表面受容体の転写エンハンサーである、請求項35に記載の使用または組成物。
- 薬剤がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤である、請求項36に記載の使用または組成物。
- HDAC阻害剤がトリスコスタチンA、ボリノスタット(SAHA)、ベリノスタット(PXD101)、LAQ824、パノビノスタット(LBH589)、エンチノスタット(MS−275)、C199、モセチノスタット(MGCD0103)、ロミデプシン(Istodax)、バルプロ酸、PCI−24781、SB939、レスミノスタット、ギビノスタット、CUDC−101、AR−42、CHR−2845、CHR−3996、4SC−202、CG200745、KevetrinおよびトリコスタチンA(TSA)から選択される、請求項37に記載の使用または組成物。
- 組成物中の送達剤の量が同じ目的で静脈内投与するために製剤された組成物の同じ送達剤の量の100分の1以下である、請求項1〜38のいずれかに記載の使用または組成物。
- 組成物中の送達剤の量が静脈内投与用に製剤された組成物の同じ送達剤の量の200分の1、500分の1、1000分の1、5000分の1、10000分の1以下である、請求項39に記載の使用または組成物。
- 送達剤が異種核酸分子をそのゲノムに含むアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスであり;
組成物中のアデノウイルスの量が正確にまたは約2×103pfu/mL〜1×1014pfu/mL、2×103pfu/mL〜1×1012pfu/mL、2×103pfu/mL〜2×1011pfu/mL、1×104pfu/mL〜5×1011pfu/mL、1×105pfu/mL〜1×1011pfu/mL、2×106pfu/mL〜2×1010pfu/mLまたは1×108〜1×1010pfu/mLであるか;または正確にまたは約2×103粒子/mL〜1×1014粒子/mL、2×103粒子/mL〜1×1012粒子/mL、2×103粒子/mL〜2×1011粒子/mL、1×104粒子/mL〜5×1011粒子/mL、1×105粒子/mL〜1×1011粒子/mL、2×106粒子/mL〜2×1010粒子/mLまたは1×108〜1×1010粒子/mLである、請求項1〜40のいずれかに記載の使用または組成物。 - 組成物の体積が正確にまたは約0.02mL〜100mL、0.05mL〜50mL、1mL〜10mL、0.05mL〜5mLまたは0.02mL〜1mLである、請求項1〜41のいずれかに記載の使用または組成物。
- 1回服用量投与用に製剤されている、請求項1〜42のいずれかに記載の使用または組成物。
- 多回服用量投与用に製剤されている、請求項1〜42のいずれかに記載の使用または組成物。
- 送達剤がそのゲノムに異種核酸分子を含むアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスであり;
組成物が1回量投与用であり;そして
組成物中のアデノウイルスの量が正確にまたは約10〜1×1012粒子、10〜1×106粒子、1×103〜1×1012粒子、1×106〜1×1010粒子または1×107〜1×109粒子;または正確にまたは約10〜1×1012pfu、10〜1×106pfu、1×103〜1×1012pfu、1×106〜1×1010pfuまたは1×107〜1×109pfu;または1×1012粒子、1×1011粒子、1×1010粒子、1×109粒子、1×108粒子、1×107粒子、1×106粒子、1×105粒子、1×104粒子、1×103粒子以下;または1×1012pfu、1×1011pfu、1×1010pfu、1×109pfu、1×108pfu、1×107pfu、1×106pfu、1×105pfu、1×104pfu、1×103pfu以下である、請求項1〜44のいずれかに記載の使用または組成物。 - ヒト患者への投与のために製剤されている、請求項1〜45のいずれかに記載の使用または組成物。
- 18歳未満のヒト小児への投与のために製剤されている、請求項1〜46のいずれかに記載の使用または組成物。
- 胎児への投与のために製剤されている、請求項1〜47のいずれかに記載の使用または組成物。
- 対象に核酸分子を送達する方法であって:
a)宿主の体循環から組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分を区画化し、ここで、該部分は区画化するためおよび本薬剤の送達をもたらすために十分なサイズであり;そして
b)送達剤を組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分に直接投与し、ここで、該送達剤が核酸分子を含み、これにより送達剤が区画化された組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の実質細胞に入る、方法。 - 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の区画化を、送達剤の投与前、同時または後に行う、請求項49に記載の方法。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の区画化を送達剤投与前に行い;そして
送達剤を組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の区画化後に投与する、請求項49または請求項50に記載の方法。 - 送達剤投与が組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の区画化後最大5分、4分、3分、2分、1分または30秒である、請求項49〜51のいずれかに記載の方法。
- 区画化を組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分における任意の1つ以上の動脈、静脈、導管および/または血管の遮断により達成し、これにより組織または臓器またはその部分への血液供給および血流が減少するかまたは排除される、請求項49〜52のいずれかに記載の方法。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分に繋がるまたは通り抜ける全動脈、静脈、導管および/または血管が遮断される、請求項53に記載の方法。
- 動脈、静脈、導管および/または血管の遮断を用手圧迫、実質クランプ、動脈または静脈クランプ、閉塞用バルーンカテーテル、縫合器、バンド、止血帯およびケーブルから選択されるデバイスまたは手法により行う、請求項53または請求項54に記載の方法。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分を実質クランプでのクランピングにより区画化する、請求項49〜55のいずれかに記載の方法。
- クランプが腹腔鏡下クランプである、請求項56に記載の方法。
- 組織または臓器またはその部分の区画化後、さらに組織または臓器またはその部分中の血液を減少させるかまたは排除するための吸引の適用を含む、請求項49〜57のいずれかに記載の方法。
- さらに:
c)送達剤投与後、組織、臓器または組織もしくは臓器の部分と体循環の連絡を回復することを含む、請求項49〜58のいずれかに記載の方法。 - 体循環との連絡回復が動脈、静脈、導管および/または血管を遮断するために使用したデバイスまたは技法の撤去を含む、請求項59に記載の方法。
- 連絡回復段階が送達剤投与後の所定時間に行われる、請求項59または請求項60に記載の方法。
- 所定時間が投与された送達剤が実質細胞に進入するのに十分であり、これにより連絡回復後、20%を超えない送達剤が実質細胞に入らないかまたは20%を超えない送達剤が体循環に曝される、請求項61に記載の方法。
- 15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%または5%を超えない送達剤が体循環に曝される、請求項62に記載の方法。
- 所定時間が送達剤投与後1分〜120分である、請求項61〜63のいずれかに記載の方法。
- 所定時間が送達剤投与後少なくとも丁度もしくは少なくとも約または正確に丁度もしくは約30分である、請求項61〜64のいずれかに記載の方法。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分が肝臓、脳、脊髄、膵臓、心臓、皮膚、腎臓、肺、血管、骨、筋肉、子宮、子宮頸、前立腺、尿道および腸から選択される、請求項49〜65のいずれかに記載の方法。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分が肝臓である、請求項49〜66のいずれかに記載の方法。
- 組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分が肝臓であり;
体循環との連絡回復前の所定時間が少なくとも丁度もしくは少なくとも約または正確に丁度もしくは約30分である、請求項49〜67のいずれかに記載の方法。 - 組織または臓器の部分が区画化されている、請求項49〜68のいずれかに記載の方法。
- 肝臓の部分が区画化され、その部分が葉、葉のセグメントもしくは部分または肝臓のセグメントである、請求項69に記載の方法。
- 葉または葉の部分が右葉、左葉、方形葉および尾状葉から選択されるかまたはその部分である、請求項70に記載の方法。
- 送達剤が核酸分子を含む非ウイルスベクター、ウイルス、ウイルス様粒子、ミニサークル、ナノ粒子および細胞全体から選択される、請求項49〜71のいずれかに記載の方法。
- 送達剤がナノ粒子であり、該ナノ粒子が標的化されているか放射標識されている、請求項72に記載の方法。
- 送達剤がウイルスであり、該ウイルスがアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、レトロウイルス、ワクシニアウイルスおよび単純ヘルペスウイルスから選択される、請求項72に記載の方法。
- レトロウイルスがレンチウイルスである、請求項74に記載の方法。
- ウイルスがアデノウイルスである、請求項74に記載の方法。
- 血清型がアデノウイルス2型またはアデノウイルス5型である、請求項74に記載の方法。
- アデノウイルスがE1、E2a、E2b、E3またはE4コード領域における欠失を含む、請求項76または請求項77に記載の方法。
- ウイルスが核酸分子を含み、核酸分子がウイルスゲノムに異種である、請求項74〜78のいずれかに記載の方法。
- 核酸分子がポリペチドをコードし、これにより該ポリペプチドが発現される、請求項49〜79のいずれかに記載の方法。
- コードされたポリペチドが酵素、ホルモン、凝固因子または凝血因子、サイトカイン、増殖因子または活性その部分、抗体または抗原結合抗体の部分、血管形成モジュレーター、免疫調節剤、疼痛モジュレーター、受容体またはその活性部分、輸送タンパク質、制御タンパク質、抗原およびアレルゲンから選択される、請求項80に記載の方法。
- コードされたポリペチドがアデノシンデアミナーゼ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子(CTFR)、ガルスルファーゼ、ラロニダーゼ、N−アセチルガラクトサミン−6−スルファターゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、酸アルファグルコシダーゼ、イミグルセラーゼ、アルグルコシダーゼアルファ、甲状腺刺激ホルモン、成長ホルモン、インスリン、甲状腺ホルモン、エリスロポエチン(EPO)、インターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−7、インターフェロン−α(IFN−α)、IFN−β、IFN−γ)、TNF、IL−12、IL−18、flt3、NP2、骨形成タンパク質(BMP)、上皮細胞増殖因子(EGF)、エリスロポエチン(EPO)、線維芽細胞増殖因子(FGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、インシュリン様増殖因子(IGF)、血小板由来増殖因子(PDGF)、トランスフォーミング増殖因子αまたはβ、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、上皮細胞増殖因子受容体(EGFR)、線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)、FGFRアンタゴニスト(sFGFR)、トランスフォーミング増殖因子受容体(TGFR)、血管内皮細胞増殖因子受容体(VEGFR)、プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、第VIII因子、第IX因子、フォン・ヴィルブランド因子、成長ホルモン、METH−1、METH−2、TrpRSフラグメント、プロリフェリン関連タンパク質、プロラクチンフラグメント、PEDF、バソスタチン、アンジオスタチン、エンドスタチン、キニノスタチン、フィブリノーゲン−Eフラグメント、トロンボスポンジン、タムスタチン、カンスタチン、レスチン、sFlt−1、sFlk、sNRP1、IP−10、PF−4、Gro-beta、sEphB4およびセフリンB2、IGF−1、HSV−TK、カルボキシペプチダーゼG2(CPG2)、カルボキシルエステラーゼ(CA)、シトシンデアミナーゼ(CD)、チトクロムP450(cyt−450)、デオキシシチジンキナーゼ(dCK)、ニトロレダクターゼ(NR)、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ(PNP)、チミジンホスホリラーゼ(TP)、水痘帯状疱疹ウイルスチミジンキナーゼ(VZV−TK)、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(XGPRT)、アスパルチルグルコサミニダーゼ、α−ガラクトシダーゼA、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ、リソソーム膜貫通型タンパク質、システイントランスポーター、酸セラミダーゼ、酸α−L−フコシダーゼ、保護タンパク質/カテプシンA、酸β−グルコシダーゼまたはグルコセレブロシダーゼ、酸β−ガラクトシダーゼ、イズロン酸−2−スルファターゼ、α−L−イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸α−マンノシダーゼ、酸β−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N−アセチルガラクトサミン−6−硫酸スルファターゼ、N−アセチルグルコサミン−1−ホスホトランスフェラーゼ、酸スフィンゴミエリナーゼ、NPC−1、β−ヘキソサミニダーゼB、ヘパランN−スルファターゼ、α−N−アセチルグルコサミニダーゼ(NaGlu)、アセチル−CoA:αグルコサミニドN−アセチルトランスフェラーゼ、N−アセチルグルコサミン−6−硫酸スルファターゼ、β−グルクロニダーゼ、酸リパーゼ、ネプリライシン、インスリン分解酵素インスリジン、thimetオリゴペプチダーゼ、IGF−1、カルビンディンD28、パルブアルブミン、HIF1−アルファ、SIRT−2、SMN−1、SMN−2、GDNF、毛様体神経栄養因子(CNF)、低密度リポタンパク質(LDLR)、リポタンパク質リパーゼ(LDL)、アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)、UDP−グルクロニル−トランスフェラーゼ、UGT1A1、グルコース−6ホスファターゼ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ、ガラクトース−1−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、分枝鎖アルファ−ケト酸デヒドロゲナーゼ、フマリルアセト酢酸ヒドラーゼ、メチルマロニル−CoAムターゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、アデノシンデアミナーゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ビオチニダーゼ、ベータ−グルコセレブロシダーゼ、ベータ−グルクロニダーゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ(PBDG)およびp53から選択される、請求項80または請求項81に記載の方法。
- 核酸分子が治療的生産物をコードする治療核酸分子であり、それにより核酸分子の送達が疾患または状態の処置に有用である、請求項80〜82のいずれかに記載の方法。
- 疾患または状態が関節炎、慢性疼痛、HIV関連AIDS、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、遺伝性酵素欠損、遺伝性免疫欠損、癌、レトロウイルス感染、血友病、糖尿病、筋ジストロフィー、心血管障害、嚢胞性線維症、神経変性障害、外傷、疼痛、鎌状赤血球貧血、自己免疫性疾患、炎症性疾患および高血圧から選択される、請求項83に記載の方法。
- 核酸分子が血友病Aの処置のための第VIII因子;血友病Bの処置のための第IX因子;I型糖尿病の処置のためのインスリン遺伝子;アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)欠損の処置のためのアルファ−1−アンチトリプシン(AAT);ヘモクロマトーシスの処置のためのヘモクロマトーシスタンパク質(HFE);ウィルソン病の処置のための銅輸送ATPase 2;クリグラー・ナジャー症候群I型の処置のためのUDPグルクロノシルトランスフェラーゼ1A1(UGT1A1);オルニチントランスカルバミラーゼ欠損、II型の処置のためのオルニチントランスカルバミラーゼ(OTC);家族性高コレステロール血症の処置のための低密度リポタンパク質受容体(LDLR);無フィブリノーゲン血症の処置のためのフィブリノーゲンアルファ(FGA)、ベータ(FGB)またはガンマ(FGB);糖原病(GSD)Ia型の処置のためのグルコース−6−ホスフェート−α;GSD Ib型の処置のためのG6PT;GSD II型(ポンペ)の処置のための酸−α−グルコシダーゼ;ムコ多糖症(MPSI)の処置のためのα−L−イズロニダーゼ;MPS IIIAの処置のためのスルファミダーゼ;MPS IIIBの処置のためのα−N−アセチルグルコサミニダーゼ(NaGlu);MPS VIIの処置のためのβ−グルクロニダーゼ;ファブリー病の処置のためのα−ガラクトシダーゼA;ゴーシェ病の処置のためのグルコセレブロシダーゼ;ニーマン・ピック症候群の処置のための酸スフィンゴミエリナーゼ;フェニルケトン尿症の処置のためのフェニルアラニンヒドロキシラーゼ;肝線維症の処置のためのTIMPアンタゴニストまたは抗HSC分子;肝虚血再灌流傷害の処置のための抗ROS分子;アルツハイマー病の処置のためのアミロイド−ベータ分解酵素ネプリライシン、インスリン分解酵素インスリジンまたはthimetオリゴペプチダーゼ;筋萎縮性側索硬化症(ALS)の処置のためのインスリン増殖因子−1(IGF−1)、カルビンディンD28、パルブアルブミン、HIF1−アルファ、SIRT−2、VEGF、SMN−1、SMN−2、GDNFまたは毛様体神経栄養因子(CNF);ガラクトース血症の処置のためのガラクトース−1−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ;メープルシロップ尿症の処置のための分枝鎖アルファ−ケト酸デヒドロゲナーゼ;チロシン血症I型の処置のためのフマリルアセト酢酸ヒドラーゼ;メチルマロン酸血症の処置のためのメチルマロニル−CoAムターゼ;シトルリン血症の処置のためのアルギニノコハク酸シンテターゼ;痛風およびレッシュ・ナイハン症候群の処置のためのヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ;スライ症候群の処置のためのベータ−グルクロニダーゼ;ツェルウェーガー症候群の処置のためのペルオキシソーム膜タンパク質70kDa;免疫不全ウイルス(HIV)感染の処置のためのエンフュービルタイド;複合免疫不全(SCID)の処置のためのアデノシンデアミナーゼ(ADA);嚢胞性線維症の処置のためのCFTR;急性間欠性ポルフィリン症の処置のためのポルフォビリノーゲンデアミナーゼ(PBDG);多発性硬化症の処置のためのインターフェロン−ベータ;リポタンパク質リパーゼ欠損(LPLD)の処置のためのリポタンパク質リパーゼ;癌の処置のためのp53;およびパーキンソン病の処置のためのグルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)から選択されるタンパク質をコードする、請求項83または請求項84に記載の方法。
- 動物における筋肉生産量を増やす、動物における毛生産量を増やす、動物における羊毛生産量を増やす、動物の成長を促すまたは栄養素合成もしくは利用に関与するポリペチドをコードする、請求項80に記載の方法。
- コードされたポリペチドが:
ミオスタチン阻害因子である動物における筋肉生産量を増やすポリペチド;
成長ホルモン、IGF−1、成長ホルモン放出因子またはニワトリSkiである動物の成長を促すポリペプチド;および
セリントランスアセチラーゼおよびo−アセチルセリンスルフヒドリラーゼである栄養素合成もしくは利用に関わるポリペチドから選択される、請求項86に記載の方法。 - ミオスタチン阻害因子がフォリスタチンである、請求項87に記載の方法。
- 核酸分子がDNA分子、RNA分子およびアプタマーから選択される、請求項49〜88のいずれかに記載の方法。
- 核酸分子がマイクロRNA、低分子干渉RNA、リボザイムおよびアンチセンス核酸から選択される、請求項89に記載の方法
- 送達剤投与前に実質組織を同定するための組織または臓器の造影を含む、請求項49〜90のいずれかに記載の方法。
- 造影が磁気共鳴画像法(MRI)、超音波検査(超音波)またはコンピュータ断層撮影(ct)である、請求項91に記載の方法。
- 送達剤が実質細胞への進入を促進するための脂質、ポリマー試剤または他の薬剤と製剤されている、請求項49〜92のいずれかに記載の方法。
- 送達剤が実質細胞への進入を促進するための物理的方法の存在下で送達される、請求項49〜93のいずれかに記載の方法。
- 物理的方法がエレクトロポレーション、ソノポレーション、水力学的圧、超音波および遺伝子銃から選択される、請求項94に記載の方法。
- 送達剤の細胞取り込みを促進する薬剤の投与をさらに含み、該薬剤が送達剤の投与前、同時または後に投与される、請求項49〜95のいずれかに記載の方法。
- 薬剤がウイルス特異的細胞表面受容体または治療的導入遺伝子の転写エンハンサーである、請求項96に記載の方法。
- 薬剤がヒストンデアセチラーゼ(HDAC)阻害剤である、請求項97に記載の方法。
- 投与される送達剤の量が同じ目的で静脈内投与する同じ送達剤の量の100倍以下である、請求項49〜98のいずれかに記載の方法。
- 送達剤が異種核酸分子をそのゲノムに含むアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスであり;
投与される送達剤の量が:
正確にまたは約10〜1×1012粒子、10〜1×106粒子、1×103〜1×1012粒子、1×106〜1×1010粒子または1×107〜1×109粒子;正確にまたは約10〜1×1012pfu、10〜1×106pfu、1×103〜1×1012pfu、1×106〜1×1010pfuまたは1×107〜1×109pfu;または1×1012粒子、1×1011粒子、1×1010粒子、1×109粒子、1×108粒子、1×107粒子、1×106粒子、1×105粒子、1×104粒子、1×103粒子以下;または1×1012pfu、1×1011pfu、1×1010pfu、1×109pfu、1×108pfu、1×107pfu、1×106pfu、1×105pfu、1×104pfu、1×103pfu以下である、請求項49〜99のいずれかに記載の方法。 - 送達剤を区画化された組織、臓器または組織もしくは臓器の部分における1以上の座位に投与する、請求項49〜100のいずれかに記載の方法。
- さらに、組織、臓器または組織もしくは臓器の部分と体循環の連絡回復前に細胞外である組織もしくは臓器または組織もしくは臓器の部分の実質からの送達剤の排除を含む、請求項49〜101のいずれかに記載の方法。
- 複数回繰り返す、請求項49〜102のいずれかに記載の方法。
- その後の本方法の反復において、送達剤を同じ区画化部位または異なる区画化部位に投与する、請求項103に記載の方法。
- 対象がマウス、ラット、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマおよびヒトから選択される、請求項49〜104のいずれかに記載の方法。
- 対象が18歳未満のヒト小児またはヒト胎児である、請求項49〜105のいずれかに記載の方法。
- 対象が遺伝子欠損を有することが診断されている、請求項49〜106のいずれかに記載の方法。
- 腹腔鏡検査により行う、請求項49〜107のいずれかに記載の方法。
- アデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルス組成物を含む容器であって:
該組成物は直接実質投与用に製剤され;
アデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスはそのゲノムに異種核酸分子を含み;
該組成物中のアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスの量は、同じ目的で同じアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスを静脈内投与する量の100倍以下である1回服用量投与のための量であり;
容器が無菌であり、密閉されている、容器。 - 組成物中のアデノウイルスまたはアデノ随伴ウイルスの量が:
1×109pfu未満であり、少なくとも正確にまたは少なくとも約10pfu、1×102pfu、1×103pfu、1×104pfu、1×105pfu、1×106pfu、1×107pfuまたは1×108pfu以上;1×109粒子未満であり、少なくとも正確にまたは少なくとも約10粒子、1×103粒子、1×103粒子、1×104粒子、1×105粒子、1×106粒子、1×107粒子、1×108粒子以上である、請求項109に記載の容器。 - 1×102pfu〜1×106pfu;または1×102粒子〜1×106粒子を含む、請求項109または請求項110に記載の容器。
- 0.02mL〜100mL、0.05mL〜50mL、1mL〜10mL、0.05mL〜5mLまたは0.02mL〜1mLの体積を有する、請求項109〜111のいずれかに記載の容器。
- シリンジまたはバイアルである、請求項109〜112のいずれかに記載の容器。
- 組成物の注射用針を含むシリンジである、請求項113に記載の容器。
- 毛管作用により組成物を投与するためのキャピラリーデバイスである、請求項109〜113のいずれかに記載の容器。
- 送達剤がアデノウイルスである、請求項109〜115のいずれかに記載の容器。
- 血清型がアデノウイルス2型またはアデノウイルス5型である、請求項116に記載の容器。
- アデノウイルスがE1、E2a、E2b、E3またはE4コード領域における欠失を含む、請求項116または請求項117に記載の容器。
- 核酸分子がポリペチドをコードする、請求項109〜118のいずれかに記載の容器。
- 核酸分子が治療的生産物をコードする治療核酸である、請求項119に記載の容器。
- コードされたポリペチドが酵素、ホルモン、凝固因子または凝血因子、サイトカイン、増殖因子または活性その部分、抗体または抗原結合その部分、血管形成モジュレーター、免疫調節剤、疼痛モジュレーター、受容体またはその活性部分、輸送タンパク質、制御タンパク質、抗原およびアレルゲンから選択される、請求項119または請求項120に記載の容器。
- コードされたポリペチドがアデノシンデアミナーゼ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子(CTFR)、ガルスルファーゼ、ラロニダーゼ、N−アセチルガラクトサミン−6−スルファターゼ、フェニルアラニンアンモニアリアーゼ、酸アルファグルコシダーゼ、イミグルセラーゼ、アルグルコシダーゼアルファ、甲状腺刺激ホルモン、成長ホルモン、インスリン、甲状腺ホルモン、エリスロポエチン(EPO)、インターロイキン−1(IL−1)、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−7、インターフェロン−α(IFN−α)、IFN−β、IFN−γ、腫瘍壊死因子(TNF)、IL−12、IL−18、fms様チロシンキナーゼ3(flt3)、ニューロピリン−2(NP2)、骨形成タンパク質(BMP)、上皮細胞増殖因子(EGF)、エリスロポエチン(EPO)、線維芽細胞増殖因子(FGF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、肝細胞増殖因子(HGF)、インシュリン様増殖因子(IGF)、血小板由来増殖因子(PDGF)、トランスフォーミング増殖因子αまたはβ、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、上皮細胞増殖因子受容体(EGFR)、線維芽細胞増殖因子受容体(FGFR)、FGFRアンタゴニスト(sFGFR)、トランスフォーミング増殖因子受容体(TGFR)、血管内皮細胞増殖因子受容体(VEGFR)、プラスミノーゲン活性化因子、ウロキナーゼ、第VIII因子、第IX因子、フォン・ヴィルブランド因子、成長ホルモン、メタロプロテイナーゼトロンボスポンジンモチーフ1(METH−1)、METH−2、トリプトファニル−tRNAシンテターゼ(TrpRS)フラグメント、プロリフェリン関連タンパク質、プロラクチンフラグメント、PEDF、バソスタチン、アンジオスタチン、エンドスタチン、キニノスタチン、フィブリノーゲン−Eフラグメント、トロンボスポンジン、タムスタチン、カンスタチン、レスチン、可溶性fms様チロシンキナーゼ−1(sFlt−1)、可溶性血管内皮細胞増殖因子受容体(sFlk)、可溶性ニューロピリン−1(sNRP1)、インターフェロンガンマ誘発タンパク質10(IP−10)、血小板第4因子(PF−4)、Gro-beta、可溶性エフリンB型受容体4(sEphB4)およびセフリンB2、IGF−1、HSV−TK、カルボキシペプチダーゼG2(CPG2)、カルボキシルエステラーゼ(CA)、シトシンデアミナーゼ(CD)、チトクロムP450(cyt−450)、デオキシシチジンキナーゼ(dCK)、ニトロレダクターゼ(NR)、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ(PNP)、チミジンホスホリラーゼ(TP)、水痘帯状疱疹ウイルスチミジンキナーゼ(VZV−TK)、キサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(XGPRT)、アスパルチルグルコサミニダーゼ、α−ガラクトシダーゼA、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ、トリペプチジルペプチダーゼ、リソソーム膜貫通型タンパク質、システイントランスポーター、酸セラミダーゼ、酸α−L−フコシダーゼ、保護タンパク質/カテプシンA、酸β−グルコシダーゼまたはグルコセレブロシダーゼ、酸β−ガラクトシダーゼ、イズロン酸−2−スルファターゼ、α−L−イズロニダーゼ、ガラクトセレブロシダーゼ、酸α−マンノシダーゼ、酸β−マンノシダーゼ、アリールスルファターゼB、アリールスルファターゼA、N−アセチルガラクトサミン−6−硫酸スルファターゼ、N−アセチルグルコサミン−1−ホスホトランスフェラーゼ、酸スフィンゴミエリナーゼ、NPC−1、β−ヘキソサミニダーゼB、ヘパランN−スルファターゼ、α−N−アセチルグルコサミニダーゼ(NaGlu)、アセチル−CoA:αグルコサミニドN−アセチルトランスフェラーゼ、N−アセチルグルコサミン−6−硫酸スルファターゼ、β−グルクロニダーゼ、酸リパーゼ、ネプリライシン、インスリン分解酵素インスリジン、thimetオリゴペプチダーゼ、IGF−1、カルビンディンD28、パルブアルブミン、低酸素症誘発因子1−アルファ(HIF1−アルファ)、サーチュイン−2(SIRT−2)、生存運動神経タンパク質−1(SMN−1)、SMN−2、グリア細胞由来神経栄養因子(GDNF)、毛様体神経栄養因子(CNF)、低密度リポタンパク質(LDLR)、リポタンパク質リパーゼ(LDL)、アルファ−1−アンチトリプシン(AAT)、UDP−グルクロニル−トランスフェラーゼ群(UGT)、UGT1A1、グルコース−6ホスファターゼ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ、ガラクトース−1−リン酸ウリジルトランスフェラーゼ、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、分枝鎖アルファ−ケト酸デヒドロゲナーゼ、フマリルアセト酢酸ヒドラーゼ、メチルマロニル−CoAムターゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、アルギニノコハク酸シンテターゼ、アデノシンデアミナーゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ、ビオチニダーゼ、ベータ−グルコセレブロシダーゼ、ベータ−グルクロニダーゼ、ポルフォビリノーゲンデアミナーゼ(PBDG)およびp53から選択される、請求項119〜121に記載の容器。
- 核酸分子が動物における筋肉生産量を増やす、動物における毛成長を増加する、動物における体毛生産量を増やす、動物の成長を促すまたは栄養素合成もしくは利用に関わるポリペチドをコードする、請求項119に記載の容器。
- コードされたポリペチドが:
ミオスタチン阻害因子である動物における筋肉生産量を増やすポリペチド;
成長ホルモン、IGF−1、成長ホルモン放出因子またはニワトリSkiである動物の成長を促すポリペプチド;および
セリントランスアセチラーゼおよびo−アセチルセリンスルフヒドリラーゼである栄養素合成もしくは利用に関わるポリペチドから選択される、請求項123に記載の容器。 - ミオスタチン阻害因子がフォリスタチンである、請求項124に記載の容器。
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