JP2014524746A - Rspo結合剤およびその使用法 - Google Patents
Rspo結合剤およびその使用法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014524746A JP2014524746A JP2014520383A JP2014520383A JP2014524746A JP 2014524746 A JP2014524746 A JP 2014524746A JP 2014520383 A JP2014520383 A JP 2014520383A JP 2014520383 A JP2014520383 A JP 2014520383A JP 2014524746 A JP2014524746 A JP 2014524746A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- tumor
- rspo2
- cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3015—Breast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3023—Lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/461—Igs containing Ig-regions, -domains or -residues form different species
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57449—Specifically defined cancers of ovaries
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Abstract
Description
発明の分野
本発明の分野は、概して、R-Spondinタンパク質(RSPO)、特にヒトR-Spondinタンパク質(RSPO1、RSPO2、およびRSPO3を含む)に結合する抗体および他の剤、ならびに癌などの疾患を処置するために該抗体または他の剤を使用する方法に関する。
R-Spondin(RSPO)ファミリーのタンパク質は、脊椎動物の間で保存されており、4つのメンバーRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4を含む。これらのタンパク質は、蓋板特異的スポンジン、hPWTSR(hRSPO3)、THS2D(RSPO3)、Cristin1-4、およびFutrin1-4をはじめとした種々の名称で呼ばれている。RSPOは、全体的におよそ40〜60%の配列相同性およびドメイン構成を共有する小さな分泌タンパク質である。全てのRSPOタンパク質が、N末端に2つのフューリン様システインリッチドメインを含み、続いてトロンボスポンジンドメインおよび塩基性の荷電C末端テイルを含む(Kim et al, 2006, Cell Cycle, 5: 23-26(非特許文献1))。
本発明は、RSPOタンパク質に結合する結合剤(例えば、抗体)、ならびにその結合剤を含む組成物(例えば、薬学的組成物)を提供する。ある特定の態様において、RSPO結合剤は、抗体、抗体断片、およびそのような抗体に関連する他のポリペプチドなどの新規ポリペプチドである。ある特定の態様において、結合剤は、ヒトRSPO1、RSPO2、および/またはRSPO3に特異的に結合する抗体である。本発明はさらに、腫瘍を有する対象にRSPO結合剤を投与することによって腫瘍の成長を阻害する方法を提供する。本発明はさらに、癌を処置する必要のある対象にRSPO結合剤を投与することによって癌を処置する方法を提供する。いくつかの態様において、癌を処置する方法または腫瘍成長を阻害する方法は、RSPO結合剤で癌幹細胞を標的化する工程を含む。ある特定の態様において、該方法は、腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させる工程、腫瘍内の癌幹細胞の数を減少させる工程、腫瘍の腫瘍形成能を低下させる工程、および/または腫瘍内の癌幹細胞の数もしくは発生頻度を低下させることによって腫瘍の腫瘍形成能を低下させる工程を含む。
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3を含む抗体である。いくつかの態様において、抗体はさらに、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3を含む。ある特定の態様において、RSPO1結合剤は、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3を含む抗体である。ある特定の態様において、RSPO1結合剤は、(a)TGYTMH(SEQ ID NO: 12)を含む重鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(b)
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(c)
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(d)
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(e)WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;および(f)QQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む抗体である。いくつかの態様において、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3を含む。いくつかの態様において、抗体はさらに、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3を含む。ある特定の態様において、RSPO2結合剤は、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3を含む抗体である。ある特定の態様において、RSPO2結合剤は、(a)SSYAMS(SEQ ID NO: 29)を含む重鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(b)
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(c)
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(d)
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(e)WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;および(f)QQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む抗体である。いくつかの態様において、アミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換である。
本発明は、RSPOタンパク質(例えば、ヒトRSPO1、RSPO2、および/またはRSPO3)に結合する抗体などのポリペプチドを含むがそれに限定されるわけではない新規剤を提供する。そのRSPO結合剤には、β-カテニンシグナル伝達のアンタゴニストが含まれる。関連するポリペプチドおよびポリヌクレオチド、RSPO結合剤を含む組成物、ならびにRSPO結合剤を作製する方法も提供される。新規RSPO結合剤を使用する方法(例えば、腫瘍成長を阻害する方法、癌を処置する方法、腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させる方法、β-カテニンシグナル伝達を阻害する方法、ならびに/または処置するための対象を特定するおよび/もしくは選択する方法)がさらに提供される。
本発明の理解を促すために、いくつかの用語および句を下記で定義する。
本発明は、ヒトRSPOタンパク質に結合する剤を提供する。これらの剤は、本明細書において「RSPO結合剤」と呼ばれる。いくつかの態様において、RSPO結合剤は、抗体である。いくつかの態様において、RSPO結合剤は、ポリペプチドである。ある特定の態様において、RSPO結合剤は、RSPO1に結合する。ある特定の態様において、RSPO結合剤は、RSPO2に結合する。ある特定の態様において、RSPO結合剤は、RSPO3に結合する。ある特定の態様において、RSPO剤は、少なくとも1種の他のヒトRSPOに特異的に結合する。いくつかの態様において、RSPO1結合剤によって結合される少なくとも1種の他のヒトRSPOは、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4からなる群より選択される。いくつかの態様において、RSPO2結合剤によって結合される少なくとも1種の他のヒトRSPOは、RSPO1、RSPO3、およびRSPO4からなる群より選択される。いくつかの態様において、RSPO3結合剤によって結合される少なくとも1種の他のヒトRSPOは、RSPO1、RSPO2、およびRSPO4からなる群より選択される。ヒトRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4に対する完全長アミノ酸(aa)配列は、当技術分野において公知であり、SEQ ID NO: 1(RSPO1)、SEQ ID NO: 2(RSPO2)、SEQ ID NO: 3(RSPO3)、およびSEQ ID NO: 4(RSPO4)として本明細書において提供される。
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3を含む。いくつかの態様において、RSPO1結合剤はさらに、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3を含む。いくつかの態様において、RSPO1結合剤は、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3を含む。ある特定の態様において、RSPO1結合剤は、(a)TGYTMH(SEQ ID NO: 12)を含む重鎖CDR1、
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3、ならびに(b)
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3を含む。
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(c)
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(d)
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(e)WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;および(f)QQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。ある特定の態様において、アミノ酸置換は、保存的置換である。
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3を含む。いくつかの態様において、RSPO2結合剤はさらに、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3を含む。いくつかの態様において、RSPO2結合剤は、
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3を含む。ある特定の態様において、RSPO2結合剤は、(a)SSYAMS(SEQ ID NO: 29)を含む重鎖CDR1、
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3、ならびに(b)
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3を含む。
を含む重鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(c)
を含む重鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(d)
を含む軽鎖CDR1、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;(e)WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体;および(f)QQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3、または1、2、3、もしくは4つのアミノ酸置換を含むその変異体を含む。ある特定の態様において、アミノ酸置換は、保存的置換である。
ある特定の態様において、本発明は、少なくとも1種のヒトRSPOまたはそのようなポリペプチドの断片に特異的に結合するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを包含する。用語「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」は、ポリペプチドのコード配列だけを含むポリヌクレオチド、ならびにさらなるコード配列および/または非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。例えば、本発明は、ヒトRSPOタンパク質に対する抗体をコードするかまたはそのような抗体の断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを提供する。本発明のポリヌクレオチドは、RNAの形態またはDNAの形態であり得る。DNAには、cDNA、ゲノムDNA、および合成DNAが含まれ;二本鎖または一本鎖であり得、一本鎖は、コーディング鎖または非コーディング(アンチセンス)鎖であり得る。
本発明のRSPO結合剤(ポリペプチドおよび抗体を含む)は、癌の処置などの治療的な処置方法を含むがそれに限定されるわけではない種々の応用法において有用である。ある特定の態様において、それらの剤は、β-カテニンシグナル伝達を阻害するため、腫瘍成長を阻害するため、分化を誘導するため、腫瘍体積を減少させるため、腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させるため、および/または腫瘍の腫瘍形成能を低下させるために有用である。それらの使用方法は、インビトロ、エクスビボ、またはインビボにおける方法であり得る。ある特定の態様において、RSPO結合剤またはポリペプチドまたは抗体は、ヒトRSPO1のアンタゴニストである。ある特定の態様において、RSPO結合剤またはポリペプチドまたは抗体は、ヒトRSPO2のアンタゴニストである。ある特定の態様において、RSPO結合剤またはポリペプチドまたは抗体は、ヒトRSPO3のアンタゴニストである。
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3、ならびに/または
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 16)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTPW(SEQ ID NO: 17)を含む軽鎖CDR3を含むRSPO結合剤の治療有効量を対象に投与する工程を含む。ある特定の態様において、腫瘍の成長を阻害する方法は、SSYAMS(SEQ ID NO: 29)を含む重鎖CDR1、
を含む重鎖CDR2、および
を含む重鎖CDR3、ならびに/または
を含む軽鎖CDR1、WASTRHT(SEQ ID NO: 33)を含む軽鎖CDR2、およびQQHYSTP(SEQ ID NO: 34)を含む軽鎖CDR3を含むRSPO結合剤の治療有効量を対象に投与する工程を含む。
本発明は、本明細書において記載されるRSPO結合剤(例えば、抗体)を備え、かつ本明細書において記載される方法を行うために使用することができるキットを提供する。ある特定の態様において、キットは、1つまたは複数の容器の中に入った、少なくとも1種のヒトRSPOタンパク質に対する少なくとも1つの精製抗体を備える。いくつかの態様において、該キットは、検出アッセイを行うのに必要および/または十分な構成要素の全て(対照、アッセイを行うための指示書、ならびに解析および結果の提示に必要な任意のソフトウェアの全てを含む)を備える。当業者は、本発明の開示されるRSPO結合剤が、当技術分野において周知の確立されたキット形式の1つに容易に組み込まれ得ることを容易に認識するであろう。
ヒト腫瘍内でのRSPOおよびLGRの発現
多数のヒト患者の正常組織、良性腫瘍、および悪性腫瘍試料由来のmRNAをマイクロアレイ解析(Genelogic BioExpress Datasuite)によって解析した。このデータは、腎臓、子宮内膜、および卵巣を含むいくつかの腫瘍タイプにおいて正常組織と比べて悪性組織において上昇した発現レベルのRSPO1を明らかにした。RSPO1は、卵巣癌において頻繁に過剰発現されることが注目された(図1A)。さらに、このデータは、卵巣、膵臓、および肺を含むいくつかの腫瘍タイプにおいて正常組織と比べて悪性組織における上昇した発現レベルのRSPO3を示唆した(図1C)。さらに、LGR5およびLGR6が、正常組織と比べて、悪性の乳房腫瘍、結腸腫瘍、肺腫瘍、および卵巣腫瘍において過剰発現されるが、LGR4は、肺腫瘍において過剰発現されることが見出された。LGR5およびLGR6の過剰発現は、他の乳房腫瘍のサブタイプと比べてトリプルネガティブ(ERnegPRnegHER2neg)乳房腫瘍に限定されると見られた。
LGR5へのRSPOタンパク質の結合
標準的な組換えDNA法を使用して、N末端のFLAGタグおよびCD4の膜貫通ドメインおよびC末端GFPタンパク質タグにヒトLGR5のアミノ酸22〜564をライゲートすることによって、細胞表面LGR5タンパク質を作製した(FLAG-LGR5-CD4TM-GFP)。標準的な組換えDNA法を使用して、RSPO-Fcコンストラクトを作製した。詳細には、完全長ヒトRSPO1、RSPO2、RSPO3、およびRSPO4を、ヒトFc領域にインフレームでライゲートし、バキュロウイルスを使用して組換えRSPO-Fcタンパク質を昆虫細胞内で発現させた。プロテインAクロマトグラフィーを使用して、その融合タンパク質を昆虫培地から精製した。
β-カテニンシグナル伝達の阻害についてのインビトロ試験
細胞懸濁液を調製するために、NOD/SCIDマウスにおいて増殖された新鮮ヒト肺腺癌異種移植片腫瘍(表2中の肺腫瘍#1)を細かく刻み、300U/mlのコラゲナーゼ3型(Worthington, Lakewood, NJ)および200U/mlのDNase I(Worthington, Lakewood, NJ)を含む培地199(Invitrogen, Carlsbad, CA)中で37℃において1〜2時間消化した。その肺腫瘍細胞を40μmナイロンストレーナー(BD Falcon, Franklin Lakes, NJ)で濾過し、82×gで5分間遠沈した。赤血球をACK緩衝液(0.8%塩化アンモニウム、0.1mM EDTA、10mM炭酸水素ナトリウム、0.1N HC1)中で溶解し、洗浄し、HBSS(Mediatech, Manassas, VA)、25mM HEPES緩衝液(Mediatech, Manassas, VA)、および2%熱失活ウシ胎児血清(HI-FBS; Invitrogen, Carlsbad, CA)からなる培地中において150×gで5分間遠心した。死細胞および残骸を、82×gでの8分間のHI-FBS上での遠心分離によって除去した。マウス間質細胞を、SM中の5μg/mlのビオチンコンジュゲート抗H-2Kdおよび2.5μg/mlの抗マウスCD45モノクローナル抗体(BioLegend, San Diego, CA)で染色した後、106細胞/mlあたり50μlのMagnaBindストレプトアビジンビーズ(Thermo Scientific, Waltham, MA)を使用して枯渇させた。
可溶性LGR5によるRSPO活性の阻害についてのインビトロ試験
ヒト肺腫瘍#1細胞の馴化培地を、実施例3に記載されたように調製し、可溶性LGR5-FcおよびRSPO2-Fcを、実施例2に記載されたように作製した。
抗RSPO1モノクローナル抗体の作製
組換えヒトRSPO1タンパク質のアミノ酸31〜263(R&D Systems, Minneapolis, MN)に対する抗体を作製した。標準的な手法を使用して、マウス(n=3)をRSPO1タンパク質で免疫した。個別のマウス由来の血清を、最初の免疫のおよそ70日後にFACS解析を使用してRSPO1に対してスクリーニングした。最も高い抗体価を有する動物を最後の抗原追加免疫のために選択し、その最後の抗原追加免疫の後、脾臓細胞をハイブリドーマ作製のために単離した。SP2/0細胞をマウス脾臓細胞に対する融合パートナーとして使用した。ハイブリドーマ細胞を、96ウェルプレートの1ウェルあたり1個の細胞で播種し、上清をFACS解析によってヒトRSPO1に対してスクリーニングした。
RSPO1によるβ-カテニンシグナル伝達の誘導を阻害する抗RSPO1モノクローナル抗体の識別
HEK-293細胞を、6xTCF-ルシフェラーゼレポーターベクター(TOPflash, Millipore, Billerica, MA)でトランスフェクトした。24〜48時間後、トランスフェクトされたHEK-293細胞を、抗RSPO1抗体89M2、89M4、89M5、89M7、89M19、および89M25、または2つの無関係な対照抗体254M14および254M26(10μg/ml〜0.625μg/mlの2倍希釈物)の存在下においてWnt3a(5ng/ml)とヒトRSPO1(10ng/ml, R&D BioSystems)との組み合わせとともにインキュベートした。該細胞を16時間インキュベートし、ルシフェラーゼ活性を、Steady-Glo(登録商標)Luciferase Assay Systemを製造者の指示書(Promega, Madison, WI)に従って使用して測定した。
抗RSPO1抗体はLGR5への可溶性RSPO1の結合を遮断する
HEK-293細胞を、FLAG-LGR5-CD4TM-GFPコンストラクト(先の実施例2に記載されたもの)で一過性にトランスフェクトした。48時間後、トランスフェクトされた細胞を、2%FBSおよびヘパリンを含む氷冷PBSに懸濁し、RSPO1-Fcタンパク質(10μg/ml)および抗体89M2、89M4、89M5、89M7、89M19、または89M25(10μg/ml)の存在下において氷上でインキュベートした。100μlのPEコンジュゲート抗ヒトFc二次抗体との第2のインキュベーションを行うことにより、RSPO1-Fc融合タンパク質に結合された細胞を検出した。細胞をFACSCalibur装置(BD Biosciences, San Jose, CA)において解析し、FlowJoソフトウェアを使用してデータを処理した。
抗RSPO1抗体の結合親和性
抗体89M4、89M5、89M7、および89M25のKDを、Biacore LifeSciences(GE Healthcare)製のBiacore2000システムを使用して測定した。組換えヒトRSPO1-FcまたはマウスRSPO1-Fcタンパク質を、標準的なアミンベースの化学反応(NHS/EDC)を用いてCM5チップ上に固定化した。前記抗体を、100nMから0.78nMまでHBS-P(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、0.005%v/v Surfactant P20)で2倍段階希釈し、そのチップ表面の上に注入した。動態学的データを経時的に収集し、連立の全体近似式を用いて当てはめることにより、各抗体に対する親和性定数(KD値)を得た。
抗RSPO1抗体によるインビボにおける卵巣腫瘍成長の阻害
分離されたOV19卵巣腫瘍細胞(1×105細胞)を、6〜8週齢のNOD/SCIDマウスの乳房脂肪パッドに注入した。腫瘍が134mm3という平均体積に達するまで、45日間成長させた。そのマウスを無作為化し(1群あたりn=10)、抗RSPO1抗体89M5、89M25、タキソール、89M5とタキソールとの併用、89M25とタキソールとの併用、または対照抗体1B7.11で処置した。抗体を15mg/kgで1週間に1回投与し、タキソールを7.5mg/mlで1週間に1回投与した。それらの抗体およびタキソールの投与は、腹腔内への注射によって行われた。腫瘍成長をモニターし、記載の時点において電子ノギスを用いて腫瘍体積を測定した。データは、平均値±S. E. M.として表される。
抗RSPO1モノクローナル抗体89M5のエピトープマッピング
抗体89M5に結合するRSPO1の特異的な領域をさらに特徴付けるために、エピトープマッピング実験を行った。ヒトRSPO1の種々の領域を含む一連のコンストラクトを、標準的な組換えDNA技術を使用して作製した(図9Aを参照のこと)。それらのコンストラクトは、各々が、N末端のFLAGタグ、それに続いてRSPO1タンパク質の一部を含み、そしてヒトCD4の膜貫通および細胞内ドメインが融合された、融合タンパク質だった。いくつかのバージョンでは、それらの融合タンパク質は、C末端の緑色蛍光タンパク質タグも含む。
抗RSPO2モノクローナル抗体の作製
組換えヒトRSPO2タンパク質のアミノ酸22〜205(R&D Systems, Minneapolis, MN)に対する抗体を作製した。標準的な手法を使用して、マウス(n=3)をRSPO2タンパク質で免疫した。個別のマウス由来の血清を、最初の免疫のおよそ70日後にFACS解析を使用してRSPO2に対してスクリーニングした。最も高い抗体価を有する動物を最後の抗原追加免疫のために選択し、その最後の抗原追加免疫の後、脾臓細胞をハイブリドーマ作製のために単離した。SP2/0細胞をマウス脾臓細胞に対する融合パートナーとして使用した。ハイブリドーマ細胞を、96ウェルプレートの1ウェルあたり1個の細胞で播種し、上清をFACS解析によってヒトRSPO2に対してスクリーニングした。
RSPO2によるβ-カテニンシグナル伝達の誘導を阻害する抗RSPO2モノクローナル抗体の識別
HEK-293細胞を、6xTCF-ルシフェラーゼレポーターベクター(TOPflash, Millipore, Billerica, MA)でトランスフェクトした。24〜48時間後、トランスフェクトされたHEK-293細胞を、抗RSPO2抗体130M23、130M24、130M25、130M26、130M27、および130M28の存在下において、Wnt3a(5ng/ml)とヒトRSPO2(10ng/ml, R&D BioSystems)またはヒトRSPO3(10ng/ml, R&D BioSystems)との組み合わせとインキュベートした。細胞を、Wnt3aとRSPOとの組み合わせ、Wnt3aのみとともに、または対照として添加無しでインキュベートした。該細胞を16時間インキュベートし、ルシフェラーゼ活性を、Steady-Glo(登録商標)Luciferase Assay Systemを製造者の指示書(Promega, Madison, WI)に従って使用して測定した。
抗RSPO2抗体はLGR5への可溶性RSPO2の結合を遮断する
HEK-293細胞を、FLAG-LGR5-CD4TM-GFPコンストラクト(先の実施例2に記載されたもの)で一過性にトランスフェクトした。48時間後、トランスフェクトされた細胞を、2%FBSおよびヘパリンを含む氷冷PBSに懸濁し、RSPO2-Fcタンパク質(10μg/ml)、ならびに抗体130M23、130M24、130M25、130M26、130M27、および130M28の存在下において氷上でインキュベートした。100μlのPEコンジュゲート抗ヒトFc二次抗体との第2のインキュベーションを行うことにより、RSPO2-Fc融合タンパク質に結合された細胞を検出した。細胞をFACSCalibur装置(BD Biosciences, San Jose, CA)において解析し、FlowJoソフトウェアを使用してデータを処理した
抗RSPO3モノクローナル抗体の作製
組換えヒトRSPO3タンパク質のアミノ酸22〜272(R&D Systems, Minneapolis, MN)に対する抗体を作製する。標準的な手法を使用して、マウス(n=3)をRSPO3タンパク質で免疫する。個別のマウス由来の血清を、最初の免疫のおよそ70日後にFACS解析を使用してRSPO3に対してスクリーニングする。最も高い抗体価を有する動物を最後の抗原追加免疫のために選択し、その最後の抗原追加免疫の後、脾臓細胞をハイブリドーマ作製のために単離する。SP2/0細胞をマウス脾臓細胞に対する融合パートナーとして使用する。ハイブリドーマ細胞を、96ウェルプレートの1ウェルあたり1個の細胞で播種し、上清をFACS解析によってヒトRSPO3に対してスクリーニングする。
抗RSPO2抗体130M23の結合親和性
130M23のKDを、Biacore LifeSciences(GE Healthcare)製のBiacore2000システムを使用して測定した。組換えヒトRSPO2-FcまたはマウスRSPO2-Fcタンパク質を、標準的なアミンベースの化学反応(NHS/EDC)を用いてCM5チップ上に固定化した。抗体を、100nMから0.78nMまでHBS-P(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、0.005%v/v Surfactant P20)で2倍段階希釈し、そのチップ表面の上に注入した。動態学的データを経時的に収集し、連立の全体近似式を用いて当てはめることにより、各抗体に対する親和性定数(KD値)を得た。
抗RSPO2抗体によるRSPO活性の阻害についてのインビトロ試験
ヒト肺腫瘍LU2細胞の馴化培地を、実施例3に記載されたように調製し、可溶性LGR5-Fcを、実施例2に記載されたように作製した。
抗RSPO抗体によるインビボにおける膵腫瘍成長の阻害
分離されたPN31膵腫瘍細胞(1×105細胞)を、6〜8週齢のNOD/SCIDマウスの側腹部に皮下注入した。腫瘍が120mm3という平均体積に達するまで、61日間成長させた。そのマウスを無作為化し(1群あたりn=10)、抗RSPO1抗体89M5、抗RSPO2抗体130M23、ゲムシタビン、89M5とゲムシタビンとの併用、130M23とゲムシタビンとの併用、または対照抗体1B7.11で処置した。抗体を15mg/kgで1週間に1回投与し、ゲムシタビンを30mg/mlで1週間に1回投与した。該抗体およびゲムシタビンの投与は、腹腔内への注射によって行われた。腫瘍成長をモニターし、特定の時点において電子ノギスを用いて腫瘍体積を測定した。データは、平均値±S. E. M.として表される。
Wnt経路阻害剤との併用での抗RSPO抗体によるインビボにおける膵腫瘍成長の阻害
分離されたPN7膵腫瘍細胞(1×105細胞)を、6〜8週齢のNOD/SCIDマウスの側腹部に皮下注入した。腫瘍が130mm3という平均体積に達するまで、25日間成長させた。そのマウスを無作為化し(1群あたりn=10)、抗RSPO2抗体130M23、抗FZD抗体18R5、ゲムシタビン、130M23とゲムシタビンとの併用、18R5とゲムシタビンとの併用、130M23と18R5との併用、130M23と18R5とゲムシタビンとの併用、または対照抗体1B7.11で処置した。抗RSPO2抗体130M23を10mg/kgで1週間に1回投与し、抗FZD抗体18R5を20mg/kgで1週間に1回投与し、ゲムシタビンを30mg/mlで1週間に1回投与した。それらの抗体およびゲムシタビンの投与は、腹腔内への注射によって行われた。腫瘍成長をモニターし、特定の時点において電子ノギスを用いて腫瘍体積を測定した。データは、平均値±S. E. M.として表される。平行実験セットは、ゲムシタビンとの併用でのFZD8-Fc可溶性受容体(10mg/kg)、ならびに130M23およびゲムシタビンとの併用でのFZD8-Fcで処置されたマウスを含んだ。
RSPO抗体のヒト化
ヒトRSPO1およびRSPO2に対するヒト化抗体を作製した。マウスモノクローナル抗体89M5および130M23の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を、Larrick, J.M., et al., 1989, Biochem. Biophys. Res. Comm. 160: 1250およびJones, S.T. & Bendig, M.M., 1991, Bio/Technology 9: 88に記載されているように本質的に縮重PCRを使用してハイブリドーマ株から単離し、配列決定した。次いで、親の89M5または130M23抗体のアミノ酸配列とおそらく構造的に似ているヒト重鎖および軽鎖可変フレームワーク領域を、新規の合成フレームワークの設計を行うのを助ける参照ヒトフレームワーク領域とみなした。マウスフレームワークとの類似性を有するヒトフレームワーク領域を同定するために、89M5および130M23のマウス重鎖および軽鎖可変ドメインによってコードされる予測タンパク質配列を、Genbankに寄託されたヒト配列に対するBLAST検索を使用して、発現されるヒトcDNAによってコードされるヒト抗体配列と比較した。候補ヒト化フレームワーク重鎖と親マウスモノクローナル抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域とのアミノ酸の差異を、起こりうる重要性について評価し、部位における差異の各々が可変領域の適切なフォールディングおよび機能に寄与するかに関して判定した。この解析は、他の抗体断片の解析された結晶構造(例えば、Trakhanov et al, Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1999, 55: 122-28に記載されているようなFab2E8の構造、ならびに他のタンパク質の結晶構造(例えば、タンパク質データバンクの構造1ADQおよび1GIG))を検討することによって導かれた。Jmol、quick PDB、およびPymolを含むコンピュータソフトウェアを使用して構造をモデル化した。所与の部位におけるアミノ酸がβ-シートのフレームワークのパッキングに与える潜在的な影響、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との相互作用、アミノ酸側鎖の溶媒への露出の程度、およびアミノ酸がCDRループの位置決めに影響する可能性を考慮した。この解析から、ヒトIgG2定常領域にインフレームで融合された候補重鎖可変領域およびヒトIgKC1定常領域にインフレームで融合された候補軽鎖可変領域を想像し、化学的に合成した。その候補重鎖および軽鎖は、i)天然のヒトフレームワークに似るように設計された合成フレームワークおよびii)親89M5または130M23マウス抗体CDRを含む。
ヒト化89M5およびヒト化130M23の結合親和性
h89M5-H2L2のKDを、Biacore LifeSciences(GE Healthcare)製のBiacore2000システムを使用して測定した。組換えヒトRSPO1-FcまたはマウスRSPO1-Fcタンパク質を、標準的なアミンベースの化学反応(NHS/EDC)を用いてCM5チップ上に固定化した。それらの抗体を100nMから0.78nMまでHBS-P(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、0.005%v/v Surfactant P20)で2倍段階希釈し、そのチップ表面の上に注入した。動態学的データを経時的に収集し、連立の全体近似式を用いて当てはめることにより、各抗体に対する親和性定数(KD値)を得た。
抗RSPO抗体のFACS結合
HEK293細胞を、FLAG-RSPO1フューリン-CD4TM-GFPをコードする発現ベクターで一過性にトランスフェクトした。実施例5に記載されたように、FLAG-RSPO1フューリン-CD4TM-GFPは、ヒトRSPO1のN末端のフューリン様ドメインの細胞表面発現を可能にするキメラ融合タンパク質である。FLAG-RSPO1フューリン-CD4TM-GFPをトランスフェクトされた細胞を、抗RSPO1抗体89M5またはヒト化抗RSPO1抗体h89M5-H2L2の存在下においてインキュベートした。各抗体の5倍段階希釈物を、RSPO1を発現している細胞に結合する能力について調べた。結合した抗体を明らかにするために細胞をPhycoerythrinコンジュゲート抗IgGで染色した。細胞をFACSCalibur装置(BD Biosciences, San Jose, CA)において解析し、FlowJoソフトウェアを使用してデータを処理した。
化学療法剤との併用での抗RSPO抗体によるインビボにおける乳房腫瘍成長の阻害
分離されたOMP-B39乳房腫瘍細胞(4×105細胞)を、6〜8週齢のNOD/SCIDマウスの側腹部に皮下注入した。OMP-039は、高レベルのRSPO2発現を有するトリプルネガティブ乳癌腫瘍である。さらに、RSPO1のレベルは、実施例1において特徴付けられた他の乳房腫瘍よりも高い(表2を参照のこと)。腫瘍が120mm3という平均体積に達するまで、39日間成長させた。そのマウスを無作為化し(1群あたりn=10)、抗RSPO1抗体89M5と抗RSPO2抗体130M23との併用、シスプラチン、抗RSPO1とRSPO2抗体とシスプラチンとの併用、または対照抗体で処置した。抗体を15mg/kgで1週間に1回投与し、シスプラチンを1.5mg/mlで1週間に2回投与した。それらの抗体およびシスプラチンの投与は、腹腔内への注射によって行われた。腫瘍成長をモニターし、記載の日に電子ノギスを用いて腫瘍体積を測定した。データは、平均値±S. E. M.として表される。
シグナル配列を有するヒトRSPO1タンパク質配列(SEQ ID NO: 1)
シグナル配列を有するヒトRSPO2タンパク質配列(SEQ ID NO: 2)
シグナル配列を有するヒトRSPO3タンパク質配列(SEQ ID NO: 3)
シグナル配列を有するヒトRSPO4タンパク質配列(SEQ ID NO: 4)
予測シグナル配列を有しないヒトRSPO1タンパク質配列(SEQ ID NO: 5)
ヒトRSPO1フューリン様ドメイン1(SEQ ID NO: 6)
ヒトRSPO1フューリン様ドメイン2(SEQ ID NO: 7)
ヒトRSPO1トロンボスポンジンドメイン(SEQ ID NO: 8)
ヒトRSPO1アミノ酸31〜263(SEQ ID NO: 9)
89M5重鎖可変領域(SEQ ID NO: 10)
89M5軽鎖可変領域(SEQ ID NO: 11)
89M5重鎖CDR1(SEQ ID NO: 12)
TGYTMH
89M5重鎖CDR2(SEQ ID NO: 13)
89M5重鎖CDR3(SEQ ID NO: 14)
89M5軽鎖CDR1(SEQ ID NO: 15)
89M5軽鎖CDR2(SEQ ID NO: 16)
WASTRHT
89M5軽鎖CDR3(SEQ ID NO: 17)
QQHYSTPW
FLAGタグ(SEQ ID NO: 18)
DYKDDDDK
89M5重鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 19)
89M5軽鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 20)
下線が引かれた予測シグナル配列を有する89M5重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 21)
下線が引かれた予測シグナル配列を有する89M5軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 22)
89M5重鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 23)
89M5軽鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 24)
予測シグナル配列を有しない89M5重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 25)
予測シグナル配列を有しない89M5軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 26)
130M23重鎖可変領域(SEQ ID NO: 27)
130M23軽鎖可変領域(SEQ ID NO: 28)
130M23重鎖CDR1(SEQ ID NO: 29)
SSYAMS
130M23重鎖CDR2(SEQ ID NO: 30)
130M23重鎖CDR3(SEQ ID NO: 31)
130M23軽鎖CDR1(SEQ ID NO: 32)
130M23軽鎖CDR2(SEQ ID NO: 33)
WASTRHT
130M23軽鎖CDR3(SEQ ID NO: 34)
QQHYSTP
130M23重鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 35)
130M23軽鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 36)
下線が引かれた予測シグナル配列を有する130M23重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 37)
下線が引かれた予測シグナル配列を有する130M23軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 38)
130M23重鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 39)
130M23軽鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 40)
予測シグナル配列を有しない130M23重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 41)
予測シグナル配列を有しない130M23軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 42)
予測シグナル配列を有しないヒトRSPO2タンパク質配列(SEQ ID NO: 43)
ヒトRSPO2アミノ酸22〜205(SEQ ID NO: 44)
ヒトRSPO2フューリン様ドメイン1(SEQ ID NO: 45)
ヒトRSPO2フューリン様ドメイン2(SEQ ID NO: 46)
ヒトRSPO2トロンボスポンジンドメイン(SEQ ID NO: 47)
予測シグナル配列を有しないヒトRSPO3タンパク質配列(SEQ ID NO: 48)
ヒトRSPO3フューリン様ドメイン1(SEQ ID NO: 49)
ヒトRSPO3フューリン様ドメイン2(SEQ ID NO: 50)
ヒトRSPO3トロンボスポンジンドメイン(SEQ ID NO: 51)
h89M5-H2L2重鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 52)
下線が引かれた予測シグナル配列を有するh89M5-H2L2重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 53)
h89M5-H2L2重鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 54)
h89M5-H2L2重鎖可変領域アミノ酸配列(SEQ ID NO: 55)
h89M5-H2L2軽鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 56)
下線が引かれた予測シグナル配列を有するh89M5-H2L2軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 57)
h89M5-H2L2軽鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 58)
h89M5-H2L2軽鎖可変領域アミノ酸配列(SEQ ID NO: 59)
h130M23-H1L2重鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 60)
下線が引かれた予測シグナル配列を有するh130M23-H1L2重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 61)
h130M23-H1L2重鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 62)
h130M23-H1L2重鎖可変領域アミノ酸配列(SEQ ID NO: 63)
h130M23-H1L2軽鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 64)
下線が引かれた予測シグナル配列を有するh130M23-H1L2軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 65)
h130M23-H1L2軽鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 66)
h130M23-H1L2軽鎖可変領域アミノ酸配列(SEQ ID NO: 67)
予測シグナル配列を有しないh89M5-H2L2重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 68)
下線が引かれた予測シグナル配列を有しないh89M5-H2L2軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 69)
下線が引かれた予測シグナル配列を有しないh130M23-H1L2重鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 70)
下線が引かれた予測シグナル配列を有しないh130M23-H1L2軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 71)
h130M23-H1L6軽鎖ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 72)
下線が引かれた予測シグナル配列を有するh130M23-H1L6軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 73)
下線が引かれた予測シグナル配列を有しないh130M23-H1L6軽鎖アミノ酸配列(SEQ ID NO: 74)
h130M23-H1L6軽鎖可変領域ヌクレオチド配列(SEQ ID NO: 75)
h130M23-H1L6軽鎖可変領域アミノ酸配列(SEQ ID NO: 76)
Claims (173)
- (a)(a)SEQ ID NO: 10に対して少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)(b)SEQ ID NO: 11に対して少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含み、ヒトRSPO1に特異的に結合する、単離された抗体。 - (a)(a)SEQ ID NO: 10に対して少なくとも95%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)(b)SEQ ID NO: 11に対して少なくとも95%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項2記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 10を含む重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 11を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項2記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 10から本質的になる重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO: 11から本質的になる軽鎖可変領域
を含む、請求項2記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 55に対して少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 59に対して少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含み、ヒトRSPO1に特異的に結合する、単離された抗体。 - (a)SEQ ID NO: 55に対して少なくとも95%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 59に対して少なくとも95%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項6記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 55を含む重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 59を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項6記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 55から本質的になる重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO: 59から本質的になる軽鎖可変領域
を含む、請求項6記載の抗体。 - RSPO1への特異的結合について請求項1〜9のいずれか一項記載の抗体と競合する、単離された抗体。
- 請求項1〜10のいずれか一項記載の抗体と同じRSPO1上のエピトープに結合する、単離された抗体。
- 請求項1〜10のいずれか一項記載の抗体に結合されるRSPO1上のエピトープと重複するRSPO1上のエピトープに結合する、単離された抗体。
- 組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、または二重特異性抗体である、請求項1〜12のいずれか一項記載の抗体。
- ヒト化抗体である、請求項1〜13のいずれか一項記載の抗体。
- ヒト抗体である、請求項1〜13のいずれか一項記載の抗体。
- IgG1抗体またはIgG2抗体である、請求項1〜14のいずれか一項記載の抗体。
- 抗原結合部位を含む抗体断片である、請求項1〜14のいずれか一項記載の抗体。
- ATCC寄託番号PTA-11970を有するハイブリドーマ細胞株によって産生される、モノクローナル抗体。
- ヒト化型の、請求項18記載の抗体。
- 少なくとも1つのロイシンリッチリピート含有Gタンパク質共役受容体(LGR)へのRSPO1の結合を阻害する、請求項1〜19のいずれか一項記載の抗体。
- 前記LGRが、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される、請求項20記載の抗体。
- 前記LGRが、LGR5である、請求項21記載の抗体。
- RSPO1シグナル伝達を阻害する、請求項1〜22のいずれか一項記載の抗体。
- β-カテニンの活性化を阻害する、請求項1〜23のいずれか一項記載の抗体。
- β-カテニンシグナル伝達を阻害する、請求項1〜24のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍成長を阻害する、請求項1〜25のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍内の分化マーカーの発現を誘導する、請求項1〜26のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍内の細胞の分化を誘導する、請求項1〜27のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させる、請求項1〜28のいずれか一項記載の抗体。
- SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 68、およびSEQ ID NO: 69からなる群より選択される配列を含む、ポリペプチド。
- 抗体である、請求項30記載のポリペプチド。
- 請求項1〜31のいずれか一項記載の抗体またはポリペプチドを含むかまたは産生する、細胞。
- ATCC寄託番号PTA-11970を有する、ハイブリドーマ細胞株。
- 請求項1〜31のいずれか一項記載の抗体またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
- SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 56、およびSEQ ID NO: 58からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
- 請求項34または請求項35記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項34もしくは請求項35記載のポリヌクレオチドまたは請求項36記載のベクターを含む、細胞。
- 請求項1〜31のいずれか一項記載の抗体またはポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
- 腫瘍の成長を阻害する方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の有効量と該腫瘍を接触させる工程を含む、方法。
- 対象における腫瘍の成長を阻害する方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 対象における腫瘍細胞の分化を誘導する方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 対象における腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させる方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 細胞におけるβ-カテニンシグナル伝達を阻害する方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の有効量と該細胞を接触させる工程を含む、方法。
- 前記細胞が腫瘍細胞である、請求項43記載の方法。
- 前記腫瘍が、結腸直腸腫瘍、卵巣腫瘍、膵腫瘍、肺腫瘍、肝腫瘍、乳房腫瘍、腎腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸管腫瘍、黒色腫、子宮頸部腫瘍、膀胱腫瘍、神経膠芽腫、および頭頸部腫瘍からなる群より選択される、請求項39〜42または44のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍が膵腫瘍である、請求項45記載の方法。
- 前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項45記載の方法。
- 対象における癌を処置する方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 前記癌が、結腸直腸癌、卵巣癌、膵癌、肺癌、肝臓癌、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、胃腸管癌、黒色腫、子宮頸癌、膀胱癌、神経膠芽腫、および頭頸部癌からなる群より選択される、請求項48記載の方法。
- 前記癌が、結腸直腸癌または膵癌である、請求項49記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、大腸腺腫症(APC)遺伝子における不活性化変異を含む、請求項50記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、APC遺伝子における不活性化変異を含まない、請求項50記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、野生型APC遺伝子を含む、請求項50記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、β-カテニン遺伝子における活性化変異を含まない、請求項50記載の方法。
- 前記癌が卵巣癌である、請求項49記載の方法。
- 前記腫瘍または前記癌が、正常組織におけるRSPO1のレベルと比べて上昇したレベルのRSPO1を発現する、請求項39〜42または44〜55のいずれか一項記載の方法。
- 前記対象が、腫瘍または癌を除去されたことがある、請求項40〜42または45〜56のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍または癌におけるRSPO1発現のレベルを測定する工程をさらに含む、請求項39〜42または44〜57のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍または癌が、APC遺伝子における不活性化変異を有しているかを判定する工程をさらに含む、請求項39〜42または44〜58のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍または癌が、β-カテニン遺伝子における活性化変異を有しているかを判定する工程をさらに含む、請求項39〜42または44〜59のいずれか一項記載の方法。
- RSPO1発現のレベルを測定する前記工程が、前記抗体による処置または該抗体との接触の前に行われる、請求項58記載の方法。
- 前記腫瘍または癌が、上昇したレベルのRSPO1発現を有する場合、前記抗体を、
(a)前記対象に投与するか;または
(b)該腫瘍もしくは腫瘍細胞と接触させる、
請求項61記載の方法。 - 対象における疾患を処置する方法であって、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を投与する工程を含み、該疾患が、β-カテニンの活性化に関連する、方法。
- 少なくとも一種のさらなる治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項39〜63のいずれか一項記載の方法。
- 前記さらなる治療剤が、化学療法剤である、請求項64記載の方法。
- 前記さらなる治療剤が、血管新生阻害剤である、請求項64記載の方法。
- 前記対象がヒトである、請求項39〜42または45〜66のいずれか一項記載の方法。
- RSPO1に結合する抗体による処置のためのヒト対象を選択する方法であって、該対象が、上昇した発現レベルのRSPO1を有する腫瘍を有しているかを判定する工程を含み、該腫瘍が、上昇した発現レベルのRSPO1を有する場合、該対象が、RSPO1に特異的に結合する抗体による処置のために選択される、方法。
- 前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項68記載の方法。
- RSPO1の前記発現レベルが、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって試料中で測定される、請求項58、68、または69のいずれか一項記載の方法。
- RSPO1に結合する抗体による処置のためのヒト対象を選択する方法であって、該対象が、APC遺伝子における不活性化変異を含む腫瘍を有しているかを判定する工程を含み、該腫瘍が、該APC遺伝子における不活性化変異を有する場合、該対象が、RSPO1に特異的に結合する抗体による処置のために選択される、方法。
- 前記腫瘍が結腸直腸腫瘍である、請求項71記載の方法。
- APC遺伝子における不活性化変異が、PCRベースのアッセイ、ハイブリダイゼーションアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって試料中で判定される、請求項59、71、または72のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料が、新鮮腫瘍試料、凍結腫瘍試料、またはホルマリン固定パラフィン包埋試料である、請求項70または請求項73記載の方法。
- 前記抗体が、請求項1〜29のいずれか一項記載の抗体である、請求項68〜74のいずれか一項記載の方法。
- (a)SEQ ID NO: 27に対して少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 28に対して少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含み、ヒトRSPO2に特異的に結合する、単離された抗体。 - (a)SEQ ID NO: 27に対して少なくとも95%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 28に対して少なくとも95%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項77記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 27を含む重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 28を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項77記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 27から本質的になる重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO: 28から本質的になる軽鎖可変領域
を含む、請求項77記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 63に対して少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 67もしくはSEQ ID NO: 76に対して少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含み、ヒトRSPO2に特異的に結合する、単離された抗体。 - (a)SEQ ID NO: 63に対して少なくとも95%の配列同一性を有する重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 67もしくはSEQ ID NO: 76に対して少なくとも95%の配列同一性を有する軽鎖可変領域
を含む、請求項81記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 63を含む重鎖可変領域;および/または
(b)SEQ ID NO: 67もしくはSEQ ID NO: 76を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項81記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 63から本質的になる重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO: 67から本質的になる軽鎖可変領域
を含む、請求項81記載の抗体。 - (a)SEQ ID NO: 63から本質的になる重鎖可変領域;および
(b)SEQ ID NO: 76から本質的になる軽鎖可変領域
を含む、請求項81記載の抗体。 - RSPO2に対する特異的結合について請求項76〜85のいずれか一項記載の抗体と競合する、単離された抗体。
- 請求項76〜86のいずれか一項記載の抗体と同じRSPO2上のエピトープに結合する、単離された抗体。
- 請求項76〜86のいずれか一項記載の抗体に結合されるRSPO2上のエピトープと重複するRSPO2上のエピトープに結合する、単離された抗体。
- 組換え抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、または二重特異性抗体である、請求項76〜88のいずれか一項記載の抗体。
- ヒト化抗体である、請求項76〜89のいずれか一項記載の抗体。
- ヒト抗体である、請求項76〜89のいずれか一項記載の抗体。
- IgG1抗体またはIgG2抗体である、請求項76〜91のいずれか一項記載の抗体。
- 抗原結合部位を含む抗体断片である、請求項76〜92のいずれか一項記載の抗体。
- ATCC寄託番号PTA-12021を有するハイブリドーマ細胞株によって産生される、モノクローナル抗体。
- ヒト化型の、請求項94記載の抗体。
- 少なくとも1つのロイシンリッチリピート含有Gタンパク質共役受容体(LGR)へのRSPO2の結合を阻害する、請求項76〜95のいずれか一項記載の抗体。
- 前記LGRが、LGR4、LGR5、およびLGR6からなる群より選択される、請求項96記載の抗体。
- 前記LGRがLGR5である、請求項97記載の抗体。
- RSPO2シグナル伝達を阻害する、請求項76〜98のいずれか一項記載の抗体。
- β-カテニンの活性化を阻害する、請求項76〜99のいずれか一項記載の抗体。
- β-カテニンシグナル伝達を阻害する、請求項76〜100のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍成長を阻害する、請求項76〜101のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍内の分化マーカーの発現を誘導する、請求項76〜102のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍内の細胞の分化を誘導する、請求項76〜103のいずれか一項記載の抗体。
- 腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させる、請求項76〜104のいずれか一項記載の抗体。
- SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71、SEQ ID NO: 73、SEQ ID NO: 74、およびSEQ ID NO: 76からなる群より選択される配列を含む、ポリペプチド。
- 抗体である、請求項106記載のポリペプチド。
- 請求項76〜107のいずれか一項記載の抗体またはポリペプチドを含むかまたは産生する、細胞。
- ATCC寄託番号PTA-12021を有する、ハイブリドーマ細胞株。
- 請求項76〜107のいずれか一項記載の抗体またはポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
- SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 60、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 72、およびSEQ ID NO: 75からなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド分子。
- 請求項110または請求項111記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項110もしくは請求項111記載のポリヌクレオチドまたは請求項112記載のベクターを含む、細胞。
- 請求項76〜107のいずれか一項記載の抗体またはポリペプチドおよび薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
- 腫瘍の成長を阻害する方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の有効量と該腫瘍を接触させる工程を含む、方法。
- 対象における腫瘍の成長を阻害する方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 対象における腫瘍細胞の分化を誘導する方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 対象における腫瘍内の癌幹細胞の発生頻度を低下させる方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 細胞におけるβ-カテニンシグナル伝達を阻害する方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の有効量と該細胞を接触させる工程を含む、方法。
- 前記細胞が腫瘍細胞である、請求項119記載の方法。
- 前記腫瘍が、結腸直腸腫瘍、卵巣腫瘍、膵腫瘍、肺腫瘍、肝腫瘍、乳房腫瘍、腎腫瘍、前立腺腫瘍、胃腸管腫瘍、黒色腫、子宮頸部腫瘍、膀胱腫瘍、神経膠芽腫、および頭頸部腫瘍からなる群より選択される、請求項115〜118または120のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍が膵腫瘍である、請求項121記載の方法。
- 前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項121記載の方法。
- 対象における癌を処置する方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を該対象に投与する工程を含む、方法。
- 前記癌が、結腸直腸癌、卵巣癌、膵癌、肺癌、肝臓癌、乳癌、腎臓癌、前立腺癌、胃腸管癌、黒色腫、子宮頸癌、膀胱癌、神経膠芽腫、および頭頸部癌からなる群より選択される、請求項124記載の方法。
- 前記癌が結腸直腸癌である、請求項125記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、大腸腺腫症(APC)遺伝子における不活性化変異を含む、請求項126記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、APC遺伝子における不活性化変異を含まない、請求項126記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が野生型APC遺伝子を含む、請求項126記載の方法。
- 前記結腸直腸癌が、β-カテニン遺伝子における活性化変異を含まない、請求項126記載の方法。
- 前記癌が膵癌である、請求項125記載の方法。
- 前記腫瘍または前記癌が、正常組織におけるRSPO2のレベルと比べて上昇したレベルのRSPO2を発現する、請求項115〜118または120〜131のいずれか一項記載の方法。
- 前記対象が、腫瘍または癌を除去されたことがある、請求項116〜118または121〜132のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍または癌におけるRSPO2の発現レベルを測定する工程をさらに含む、請求項115〜118または120〜133のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍または癌が、APC遺伝子における不活性化変異を有しているかを判定する工程をさらに含む、請求項115〜118または120〜134のいずれか一項記載の方法。
- 前記腫瘍または癌が、β-カテニン遺伝子における活性化変異を有しているかを判定する工程をさらに含む、請求項115〜118または120〜135のいずれか一項記載の方法。
- RSPO2発現のレベルを測定する前記工程が、前記抗体による処置または前記抗体との接触の前に行われる、請求項134記載の方法。
- 前記腫瘍または癌が、上昇した発現レベルのRSPO2を有する場合に、前記抗体を、
(a)前記対象に投与するか;または
(b)該腫瘍もしくは腫瘍細胞と接触させる、
請求項137記載の方法。 - 対象における疾患を処置する方法であって、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体の治療有効量を投与する工程を含み、該疾患が、β-カテニンの活性化に関連する、方法。
- 少なくとも一種のさらなる治療剤を投与する工程をさらに含む、請求項115〜139のいずれか一項記載の方法。
- 前記さらなる治療剤が、化学療法剤である、請求項140記載の方法。
- 前記さらなる治療剤が、Wnt経路阻害剤である、請求項140記載の方法。
- 前記対象がヒトである、請求項116〜118または121〜142のいずれか一項記載の方法。
- RSPO2に結合する抗体による処置のためのヒト対象を選択する方法であって、該対象が、上昇した発現レベルのRSPO2を有する腫瘍を有しているかを判定する工程を含み、該腫瘍が、上昇した発現レベルのRSPO2を有する場合、該対象が、RSPO2に特異的に結合する抗体による処置のために選択される、方法。
- 前記腫瘍が膵腫瘍である、請求項144記載の方法。
- 前記腫瘍が乳房腫瘍である、請求項144記載の方法。
- 前記腫瘍が肺腫瘍である、請求項144記載の方法。
- 前記腫瘍が黒色腫腫瘍である、請求項144記載の方法。
- 前記腫瘍が結腸直腸腫瘍である、請求項144記載の方法。
- RSPO2の前記発現レベルが、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって試料中で測定される、請求項134または144〜149のいずれか一項記載の方法。
- RSPO2に結合する抗体による処置のためのヒト対象を選択する方法であって、該対象が、APC遺伝子における不活性化変異を含む腫瘍を有しているかを判定する工程を含み、該腫瘍が、該APC遺伝子における不活性化変異を有する場合、該対象が、RSPO2に特異的に結合する抗体による処置のために選択される、方法。
- 前記腫瘍が結腸直腸腫瘍である、請求項151記載の方法。
- APC遺伝子における不活性化変異が、PCRベースのアッセイ、ハイブリダイゼーションアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって試料中で判定される、請求項135、151、または152のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料が、新鮮腫瘍試料、凍結腫瘍試料、またはホルマリン固定パラフィン包埋試料である、請求項150または請求項153記載の方法。
- 前記抗体が、請求項76〜105のいずれか一項記載の抗体である、請求項144〜154のいずれか一項記載の方法。
- SEQ ID NO: 25の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 26の軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体。
- SEQ ID NO: 41の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 42の軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体。
- SEQ ID NO: 68の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 69の軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体。
- SEQ ID NO: 70の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 71の軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体。
- SEQ ID NO: 70の重鎖アミノ酸配列およびSEQ ID NO: 74の軽鎖アミノ酸配列を含む、抗体。
- RSPO3に結合する抗体による処置のためのヒト対象を選択する方法であって、該対象が、上昇した発現レベルのRSPO3を有する腫瘍を有しているかを判定する工程を含み、該腫瘍が、上昇した発現レベルのRSPO3を有する場合、該対象が、RSPO3に特異的に結合する抗体による処置のために選択される、方法。
- 前記腫瘍が肺腫瘍である、請求項161記載の方法。
- 前記腫瘍が乳房腫瘍である、請求項161記載の方法。
- 前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項161記載の方法。
- 前記腫瘍が結腸直腸腫瘍である、請求項161記載の方法。
- RSPO3の前記発現レベルが、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって試料中で測定される、請求項161〜165のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料が、新鮮腫瘍試料、凍結腫瘍試料、またはホルマリン固定パラフィン包埋試料である、請求項166記載の方法。
- RSPO4に結合する抗体による処置のためのヒト対象を選択する方法であって、該対象が、上昇した発現レベルのRSPO4を有する腫瘍を有しているかを判定する工程を含み、該腫瘍が、上昇した発現レベルのRSPO4を有する場合、該対象が、RSPO4に特異的に結合する抗体による処置のために選択される、方法。
- 前記腫瘍が肺腫瘍である、請求項168記載の方法。
- 前記腫瘍が乳房腫瘍である、請求項168記載の方法。
- 前記腫瘍が卵巣腫瘍である、請求項168記載の方法。
- RSPO3の前記発現レベルが、PCRベースのアッセイ、マイクロアレイ解析、またはヌクレオチド配列決定によって試料中で測定される、請求項168〜171のいずれか一項記載の方法。
- 前記試料が、新鮮腫瘍試料、凍結腫瘍試料、またはホルマリン固定パラフィン包埋試料である、請求項172記載の方法。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161508403P | 2011-07-15 | 2011-07-15 | |
US61/508,403 | 2011-07-15 | ||
US201161521547P | 2011-08-09 | 2011-08-09 | |
US61/521,547 | 2011-08-09 | ||
US201161570629P | 2011-12-14 | 2011-12-14 | |
US61/570,629 | 2011-12-14 | ||
PCT/US2012/046746 WO2013012747A1 (en) | 2011-07-15 | 2012-07-13 | Rspo binding agents and uses thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017094648A Division JP2017169578A (ja) | 2011-07-15 | 2017-05-11 | Rspo結合剤およびその使用法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014524746A true JP2014524746A (ja) | 2014-09-25 |
JP2014524746A5 JP2014524746A5 (ja) | 2015-09-03 |
JP6185463B2 JP6185463B2 (ja) | 2017-08-23 |
Family
ID=47558408
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014520383A Expired - Fee Related JP6185463B2 (ja) | 2011-07-15 | 2012-07-13 | Rspo結合剤およびその使用法 |
JP2017094648A Ceased JP2017169578A (ja) | 2011-07-15 | 2017-05-11 | Rspo結合剤およびその使用法 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017094648A Ceased JP2017169578A (ja) | 2011-07-15 | 2017-05-11 | Rspo結合剤およびその使用法 |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8802097B2 (ja) |
EP (2) | EP3401329A1 (ja) |
JP (2) | JP6185463B2 (ja) |
KR (1) | KR20140048276A (ja) |
CN (2) | CN104023746B (ja) |
AU (1) | AU2012284254B2 (ja) |
BR (1) | BR112014000765A2 (ja) |
CA (1) | CA2841745A1 (ja) |
CL (1) | CL2014000114A1 (ja) |
IL (1) | IL230429A0 (ja) |
MX (1) | MX349198B (ja) |
RU (1) | RU2014101669A (ja) |
WO (1) | WO2013012747A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201400525B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020532991A (ja) * | 2017-09-07 | 2020-11-19 | オーガスタ ユニバーシティ リサーチ インスティテュート,インコーポレーテッド | プログラム細胞死タンパク質1に対する抗体 |
Families Citing this family (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2093298A3 (en) | 2003-10-10 | 2009-09-23 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Compositions for diagnosis and therapy of diseases associated with aberrant expression of Futrins (R-Spondins) |
SI2066694T1 (sl) | 2006-09-29 | 2016-02-29 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Sestavki in postopki za diagnosticiranje in zdravljenje raka |
HUE027179T2 (en) | 2006-10-20 | 2016-10-28 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Oeffentlichen Rechts | Angiogenesis and vasculogenesis modulator for Rspond |
HUE027154T2 (en) | 2007-07-02 | 2016-08-29 | Oncomed Pharm Inc | Preparations and procedures for the treatment and diagnosis of cancer |
US8993000B2 (en) * | 2009-11-17 | 2015-03-31 | National University Corporation Okayama University | Method for inducing differentiation of dental pulp cells into odontoblasts |
US8551479B2 (en) | 2010-09-10 | 2013-10-08 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating melanoma |
KR20140048276A (ko) | 2011-07-15 | 2014-04-23 | 온코메드 파마슈티칼스, 인크. | Rspo 결합제 및 이의 용도 |
KR20150036603A (ko) | 2012-07-13 | 2015-04-07 | 온코메드 파마슈티칼스, 인크. | Rspo3 결합제 및 그의 용도 |
AU2014244444A1 (en) * | 2013-03-14 | 2015-09-24 | Amgen Inc. | CHRDL-1 antigen binding proteins and methods of treatment |
RU2016114074A (ru) * | 2013-10-18 | 2017-11-23 | Дженентек, Инк. | Анти-rspo антитела и способы применения |
CN103724415B (zh) * | 2013-12-31 | 2015-05-27 | 中山大学 | 斜带石斑鱼性别调控基因Rspo1及其制备方法和应用 |
CA2952315A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | Genentech, Inc. | Notch pathway inhibition |
EP3180027A4 (en) * | 2014-08-15 | 2018-01-10 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Rspo1 binding agents and uses thereof |
TW201628648A (zh) * | 2014-09-16 | 2016-08-16 | 安可美德藥物股份有限公司 | 纖維變性疾病之治療 |
MA41123A (fr) * | 2014-12-02 | 2017-10-10 | Oncomed Pharm Inc | Polythérapie pour le traitement du cancer |
WO2017040660A1 (en) * | 2015-08-31 | 2017-03-09 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for treatment of disease |
WO2017070567A1 (en) * | 2015-10-21 | 2017-04-27 | The Research Foundation For The State University Of New York | Klebsiella pneumoniae antibodies and methods to treat klebsiella pneumoniae infections |
MX2018004988A (es) * | 2015-10-23 | 2018-11-09 | Merus Nv | Moleculas de union que inhibe el crecimiento de cancer. |
CN106913880B (zh) * | 2015-12-24 | 2021-02-12 | 上海交通大学 | 一种含有rspo1的靶向给药系统及其制备与应用 |
BR112018067522A2 (pt) | 2016-03-01 | 2019-02-05 | Univ Of Rijeka Faculty Of Medicine | anticorpos específicos para receptor de poliovírus humano (pvr) |
CN105925576B (zh) * | 2016-03-24 | 2018-04-20 | 嘉兴市第一医院 | 针对哺乳动物R‑Spondin3基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及载体和应用 |
EP3443004A1 (en) | 2016-04-14 | 2019-02-20 | H. Hoffnabb-La Roche Ag | Anti-rspo3 antibodies and methods of use |
US20190224339A1 (en) * | 2016-04-29 | 2019-07-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
JP2020530028A (ja) | 2017-08-09 | 2020-10-15 | メルス ナムローゼ フェンノートシャップ | EGFR及びcMETに結合する抗体 |
CN109529040B (zh) * | 2017-09-21 | 2020-11-13 | 华东师范大学 | LGR4和R-spondin结合抑制剂及其在肿瘤治疗中的用途 |
JP7370997B2 (ja) | 2017-12-07 | 2023-10-30 | ナショナル ヘルス リサーチ インスティテューツ | 抗rspo3抗体 |
US20220227848A1 (en) * | 2018-02-07 | 2022-07-21 | Nordic Bioscience A/S | Type XXIII Collagen Assay |
CN110339364B (zh) * | 2018-04-02 | 2021-02-12 | 上海邦耀生物科技有限公司 | Lgr4/rspo阻断剂与抗免疫检查点抑制剂联合用于肿瘤的免疫治疗 |
CN110467663B (zh) * | 2019-06-18 | 2022-05-10 | 华南农业大学 | Rspo3基因在母猪卵巢颗粒细胞中的应用 |
AU2019460208A1 (en) * | 2019-08-05 | 2022-03-17 | Genex Health Co., Ltd | Method for culturing primary cells of lung cancer solid tumor and primary tumor cells of lung cancer pleural effusion, and supporting reagent |
WO2021247497A1 (en) * | 2020-06-03 | 2021-12-09 | Children's Hospital Medical Center | Compositions and methods comprising r-spondins for treatment of tumors |
CN112457400B (zh) * | 2020-12-09 | 2022-03-08 | 福州迈新生物技术开发有限公司 | 抗β-catenin蛋白单克隆抗体、细胞系及其制备方法和应用 |
KR102551095B1 (ko) * | 2023-03-21 | 2023-07-04 | 순천향대학교 산학협력단 | 신규한 항-인간 알스폰딘2 항체 및 이의 용도 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070244061A1 (en) * | 2003-10-10 | 2007-10-18 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Compositions for Diagnosis and Therapy of Diseases Associated with Aberrant Expression of Futrins (R-Spondisn) and/or Wnt |
Family Cites Families (130)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4588585A (en) | 1982-10-19 | 1986-05-13 | Cetus Corporation | Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US5681718A (en) | 1986-03-14 | 1997-10-28 | Celltech Limited | Methods for enhanced production of tissue plasminogen activator in cell culture using alkanoic acids or salts thereof |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
US5567610A (en) | 1986-09-04 | 1996-10-22 | Bioinvent International Ab | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5229275A (en) | 1990-04-26 | 1993-07-20 | Akzo N.V. | In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies |
GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
US6172197B1 (en) | 1991-07-10 | 2001-01-09 | Medical Research Council | Methods for producing members of specific binding pairs |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5633425A (en) | 1990-08-29 | 1997-05-27 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
US5661016A (en) | 1990-08-29 | 1997-08-26 | Genpharm International Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes |
ES2108048T3 (es) | 1990-08-29 | 1997-12-16 | Genpharm Int | Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos. |
US5625126A (en) | 1990-08-29 | 1997-04-29 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
EP0564531B1 (en) | 1990-12-03 | 1998-03-25 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with altered binding properties |
ES2227512T3 (es) | 1991-12-02 | 2005-04-01 | Medical Research Council | Produccion de anticuerpos contra auto-antigenos a partir de repertorios de segmentos de anticuerpos fijados en un fago. |
US20070124581A1 (en) | 1992-05-17 | 2007-05-31 | Reena Khare | Cell adhesion and extracellular matrix proteins |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
WO1997008320A1 (en) | 1995-08-18 | 1997-03-06 | Morphosys Gesellschaft Für Proteinoptimierung Mbh | Protein/(poly)peptide libraries |
US6706484B1 (en) | 1995-08-18 | 2004-03-16 | Morphosys Ag | Protein/(poly)peptide libraries |
CA2288343A1 (en) | 1997-04-25 | 1998-11-05 | Genetics Institute, Inc. | Secreted proteins and polynucleotides encoding them |
US6004528A (en) | 1997-09-18 | 1999-12-21 | Bergstein; Ivan | Methods of cancer diagnosis and therapy targeted against the cancer stemline |
JP2001517441A (ja) | 1997-09-24 | 2001-10-09 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | Gタンパク質共役糖タンパク質ホルモン受容体hg38 |
US20020065394A1 (en) | 1998-03-18 | 2002-05-30 | Kenneth Jacobs | Secreted proteins and polynucleotides encoding them |
DE69941330D1 (de) | 1998-03-26 | 2009-10-08 | Univ R | Neue g-protein-gekoppelte rezeptoren aus säugetieren mit extrazellulären leucin-reicher region |
US6485972B1 (en) | 1998-10-15 | 2002-11-26 | President And Fellows Of Harvard College | WNT signalling in reproductive organs |
US20030166047A1 (en) | 1999-05-06 | 2003-09-04 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Lgr6 nucleic acids and uses thereof |
ES2353268T3 (es) | 1999-07-02 | 2011-02-28 | Morphosys Ag | Generacion de elementos de union especifica que se unen a (poli)peptidos codificados por fragmentos de adn genomico o est. |
WO2001007611A2 (en) | 1999-07-26 | 2001-02-01 | Genentech, Inc. | Novel polynucleotides and method for the use thereof |
WO2001057190A2 (en) | 2000-02-03 | 2001-08-09 | Hyseq, Inc. | Novel nucleic acids and polypeptides |
US6824973B2 (en) | 2000-02-03 | 2004-11-30 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Method of promoting stem cell proliferation or survival by contacting a cell with a stem cell factor-like polypeptide |
AU5301201A (en) | 2000-03-31 | 2001-10-15 | Gen Hospital Corp | Methods of modulating hair growth |
CA2405104A1 (en) | 2000-04-05 | 2001-10-18 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Methods and materials relating to stem cell growth factor-like polypeptides and polynucleotides |
EP1156062A1 (en) | 2000-05-12 | 2001-11-21 | GPC Biotech AG | Immunomodulatory human MHC class II antigen-binding peptides/proteins |
AU2001263006A1 (en) | 2000-05-18 | 2001-11-26 | Hyseq, Inc. | Novel nucleic acids and polypeptides |
US20030139341A1 (en) | 2000-05-30 | 2003-07-24 | Shyam Ramakrishnan | Regulation of human lgr4-like g protein -coupled receptor |
US6984522B2 (en) | 2000-08-03 | 2006-01-10 | Regents Of The University Of Michigan | Isolation and use of solid tumor stem cells |
US8044259B2 (en) | 2000-08-03 | 2011-10-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells |
ES2649037T3 (es) | 2000-12-12 | 2018-01-09 | Medimmune, Llc | Moléculas con semividas prolongadas, composiciones y usos de las mismas |
US6768004B2 (en) | 2001-01-11 | 2004-07-27 | Mueller Sybille | Nucleotide sequences encoding variable regions of heavy and light chains of monoclonal antibody 1F7, an anti-idiotypic antibody reactive with anti-HIV antibodies |
US20040077048A1 (en) | 2002-01-30 | 2004-04-22 | Warren Bridget A. | Protein modification and maintenance molecules |
US20100292155A1 (en) | 2001-03-05 | 2010-11-18 | Arca Biopharma, Inc. | Methods and materials relating to stem cell growth factor-like polypeptides and polynucleotides |
US20030032034A1 (en) | 2001-03-05 | 2003-02-13 | Tang Y. Tom | Methods and materials relating to stem cell growth factor-like polypeptides and polynucleotides |
US7411052B2 (en) | 2001-03-05 | 2008-08-12 | Nuvelo, Inc. | Methods and materials relating to stem cell growth factor-like polypeptides and polynucleotides |
JP4251983B2 (ja) | 2001-06-11 | 2009-04-08 | 協和発酵キリン株式会社 | 造血幹細胞または造血前駆細胞の増殖または生存を支持し得るポリペプチドおよびそれをコードするdna |
WO2002102854A2 (en) | 2001-06-20 | 2002-12-27 | Morphosys Ag | Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof |
US20030022217A1 (en) | 2001-07-02 | 2003-01-30 | Pe Corporation (Ny) | Isolated human secreted proteins, nucleic acid molecules encoding human secreted proteins, and uses thereof |
CA2458818A1 (en) | 2001-08-30 | 2003-04-10 | Nuvelo, Inc. | Methods and materials relating to stem cell growth factor-like polypeptides and polynucleotides |
WO2003029437A2 (en) | 2001-10-03 | 2003-04-10 | Incyte Genomics Inc. | Secreted proteins |
US20070237770A1 (en) | 2001-11-30 | 2007-10-11 | Albert Lai | Novel compositions and methods in cancer |
US20040197778A1 (en) | 2002-12-26 | 2004-10-07 | Sagres Discovery, Inc. | Novel compositions and methods in cancer |
JP2005511754A (ja) | 2001-12-07 | 2005-04-28 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | 乳癌幹細胞の予測的同定および特徴づけ |
EP1504099A4 (en) | 2001-12-10 | 2006-05-10 | Nuvelo Inc | NEW NUCLEIC ACIDS AND POLYPEPTIDES |
US7193069B2 (en) | 2002-03-22 | 2007-03-20 | Research Association For Biotechnology | Full-length cDNA |
US7439332B2 (en) | 2002-04-26 | 2008-10-21 | Kirin Pharma Kabushiki Kaisha | Polypeptide having an activity to support proliferation or survival of hematopoietic stem or progenitor cells |
EP1380644A1 (en) | 2002-07-08 | 2004-01-14 | Kylix B.V. | The use of specified TCF target genes to identify drugs for the treatment of cancer, in particular colorectal cancer, in which TCF/beta-catenin/WNT signalling plays a central role |
GB0216648D0 (en) | 2002-07-18 | 2002-08-28 | Lonza Biologics Plc | Method of expressing recombinant protein in CHO cells |
US7365168B2 (en) | 2002-10-15 | 2008-04-29 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
WO2004074436A2 (en) | 2003-02-19 | 2004-09-02 | Incyte Corporation | Methods of use of a gpcr in the diagnosis and treatment of colon and lung cancer |
US20050003405A1 (en) | 2003-04-30 | 2005-01-06 | Hua-Chien Chen | Treatment and diagnostics of cancer |
JP2007516693A (ja) | 2003-06-09 | 2007-06-28 | ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミシガン | 癌の治療および診断のための組成物および方法 |
WO2005110009A2 (en) | 2003-07-22 | 2005-11-24 | Immunex Corporation | COMPOSITIONS AND METHODS RELATING TO TSP-30a, b, c AND d |
DE10339820A1 (de) | 2003-08-22 | 2005-03-17 | Hinzmann, Bernd, Dr. | Verwendung von an GPR49 bindenden Substanzen zur Diagnose und Behandlung von Krebs |
US9046537B2 (en) | 2003-09-22 | 2015-06-02 | Enzo Biochem, Inc. | Method for treating inflammation by administering a compound which binds LDL-receptor-related protein (LRP) ligand binding domain |
WO2005040828A2 (en) | 2003-10-24 | 2005-05-06 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with g protein-coupled receptor 49 (gpr49) |
EP1697415A1 (en) | 2003-11-12 | 2006-09-06 | Biogen Idec MA Inc. | NEONATAL Fc RECEPTOR (FcRn)-BINDING POLYPEPTIDE VARIANTS, DIMERIC Fc BINDING PROTEINS AND METHODS RELATED THERETO |
RU2343158C2 (ru) | 2004-01-27 | 2009-01-10 | Ньювело, Инк. | Желудочно-кишечный пролиферативный фактор и его применения |
AU2005209909B8 (en) | 2004-02-03 | 2009-01-15 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for characterizing, regulating, diagnosing, and treating cancer |
EP1725585A2 (en) | 2004-03-10 | 2006-11-29 | Lonza Ltd | Method for producing antibodies |
US20080312425A1 (en) | 2004-08-30 | 2008-12-18 | Lonza Biologics Plc. | Ion Exchange Chromatography and Purification of Antibodies |
US7572456B2 (en) | 2004-09-13 | 2009-08-11 | Macrogenics, Inc. | Humanized antibodies against West Nile Virus and therapeutic and prophylactic uses thereof |
CA2591665C (en) | 2004-12-20 | 2015-05-05 | Crucell Holland B.V. | Binding molecules capable of neutralizing west nile virus and uses thereof |
US7439327B2 (en) | 2005-01-18 | 2008-10-21 | Nuvelo, Inc. | Stem cell factor-like proteins and uses thereof |
WO2006110585A2 (en) | 2005-04-07 | 2006-10-19 | Novartis Vaccines And Diagnostics Inc. | Cancer-related genes (prlr) |
EP1917022A2 (en) | 2005-07-26 | 2008-05-07 | Kirin Pharma Kabushiki Kaisha | Anti-tumor agents comprising r-spondins |
WO2007030290A2 (en) | 2005-09-07 | 2007-03-15 | Maine Medical Center Research | Cristin/r-spondin ligands active in the wnt signaling pathway and methods, compositions and kits relating thereto |
CA2623413A1 (en) | 2005-10-07 | 2007-09-07 | Nuvelo, Inc. | Stem cell factor-like protein scfa1 and uses thereof |
US7723112B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-05-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating and diagnosing cancer |
US7723477B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-05-25 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for inhibiting Wnt-dependent solid tumor cell growth |
GB0603683D0 (en) | 2006-02-23 | 2006-04-05 | Novartis Ag | Organic compounds |
EP2380908A1 (en) | 2006-06-02 | 2011-10-26 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Hepatocyte growth factor (hgf) binding proteins |
WO2007143090A2 (en) | 2006-06-02 | 2007-12-13 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Hepatocyte growth factor (hgf) binding proteins |
PL2032166T3 (pl) | 2006-06-13 | 2013-09-30 | Oncomed Pharm Inc | Kompozycje i sposoby diagnozowania i leczenia nowotworów |
KR101528939B1 (ko) | 2006-07-18 | 2015-06-15 | 사노피 | 암 치료를 위한 epha2에 대한 길항제 항체 |
JP2008044926A (ja) | 2006-08-14 | 2008-02-28 | Trustees Of Columbia Univ In The City Of New York | Wnt信号伝達に関係した分泌タンパク質 |
CA2662041A1 (en) | 2006-09-08 | 2008-03-13 | Genentech, Inc. | Wnt antagonists and their use in the diagnosis and treatment of wnt-mediated disorders |
SI2066694T1 (sl) | 2006-09-29 | 2016-02-29 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Sestavki in postopki za diagnosticiranje in zdravljenje raka |
HUE027179T2 (en) | 2006-10-20 | 2016-10-28 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Oeffentlichen Rechts | Angiogenesis and vasculogenesis modulator for Rspond |
WO2008075796A1 (ja) | 2006-12-21 | 2008-06-26 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | 血球回復促進剤 |
WO2008088524A2 (en) | 2006-12-28 | 2008-07-24 | Nuvelo, Inc. | Thrombospondin-domain-deficient r-spondin 1 protein as gastrointestinal tract epithelial proliferation factor |
US7691980B2 (en) | 2007-01-09 | 2010-04-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced capacity and purification of antibodies by mixed mode chromatography in the presence of aqueous-soluble nonionic organic polymers |
US20100330089A1 (en) | 2007-06-12 | 2010-12-30 | Wyeth | Anti-cd20 therapeutic compositions and methods |
HUE027154T2 (en) | 2007-07-02 | 2016-08-29 | Oncomed Pharm Inc | Preparations and procedures for the treatment and diagnosis of cancer |
US20120082659A1 (en) | 2007-10-02 | 2012-04-05 | Hartmut Land | Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations |
EP2188630A4 (en) | 2007-10-02 | 2010-11-03 | Univ Rochester | METHODS AND COMPOSITIONS ASSOCIATED WITH SYNERGIC RESPONSES TO ONCOGENIC MUTATIONS |
CA2705509A1 (en) | 2007-11-14 | 2009-05-22 | Forerunner Pharma Research Co., Ltd. | Diagnosis and treatment of cancer using anti-gpr49 antibody |
EP2242762B1 (en) | 2008-01-18 | 2015-12-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Enhanced purification of antibodies and antibody fragments by apatite chromatography |
US8187601B2 (en) | 2008-07-01 | 2012-05-29 | Aveo Pharmaceuticals, Inc. | Fibroblast growth factor receptor 3 (FGFR3) binding proteins |
WO2010016766A2 (en) | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Koninklijke Nederlandse Akademie Van Wetenschappen | Antibodies recognizing endogenous human lgr5 and/or lgr6 |
SG190568A1 (en) | 2008-09-26 | 2013-06-28 | Oncomed Pharm Inc | Frizzled-binding agents and uses thereof |
CN103408664B (zh) | 2008-10-31 | 2015-11-25 | 东丽株式会社 | 抗人cxcl1单克隆抗体或其片段 |
WO2010121923A1 (en) | 2009-04-15 | 2010-10-28 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Rspondin-3 inhibition in bone disorders |
JP2012525149A (ja) | 2009-04-27 | 2012-10-22 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ヘテロ多量体分子を作製するための方法 |
WO2010129284A1 (en) | 2009-04-27 | 2010-11-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Inhibition of hair follicle growth by the wnt inhibitor dkk1 |
US20120114646A1 (en) | 2009-06-18 | 2012-05-10 | Wyeth Llc | Lyophilized formulations for small modular immunopharmaceuticals |
WO2011009090A1 (en) | 2009-07-16 | 2011-01-20 | Xoma Technology Ltd. | Antibodies to high molecular weight melanoma associated antigen |
US8709424B2 (en) | 2009-09-03 | 2014-04-29 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Anti-GITR antibodies |
EP2515933B1 (en) | 2009-12-23 | 2016-03-30 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Receptors of rspo2 and rspo3 |
WO2011085289A1 (en) | 2010-01-11 | 2011-07-14 | Arizona Board Of Regents, A Body Corporate Of The State Of Arizona, Acting For And On Behalf Of Arizona State University | Production of a monoclonal antibody therapeutic against west nile virus in plants |
CA2786745A1 (en) | 2010-01-12 | 2011-07-21 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Wnt-binding agents and uses thereof |
TWI535445B (zh) | 2010-01-12 | 2016-06-01 | 安可美德藥物股份有限公司 | Wnt拮抗劑及治療和篩選方法 |
KR20120117931A (ko) | 2010-02-12 | 2012-10-24 | 온코메드 파마슈티칼스, 인크. | 폴리펩타이드를 발현하는 세포를 확인 및 분리하는 방법 |
US20150024952A1 (en) | 2010-12-28 | 2015-01-22 | Arlet Alarcon | Molecular profiling for cancer |
GB201106395D0 (en) | 2011-04-14 | 2011-06-01 | Hubrecht Inst | Compounds |
AU2012248158C1 (en) | 2011-04-28 | 2017-02-02 | Sbi Biotech Co., Ltd. | Anti-human receptor-type protein tyrosine phosphatase sigma antibody |
KR20140048276A (ko) | 2011-07-15 | 2014-04-23 | 온코메드 파마슈티칼스, 인크. | Rspo 결합제 및 이의 용도 |
CN109111523B (zh) | 2011-10-14 | 2022-06-07 | 诺华股份有限公司 | 用于Wnt途径相关疾病的抗体和方法 |
US10598653B2 (en) | 2011-11-01 | 2020-03-24 | Bionomics Inc. | Methods of blocking cancer stem cell growth |
AU2012332590B2 (en) | 2011-11-01 | 2016-10-20 | Bionomics, Inc. | Anti-GPR49 antibodies |
AU2013216753B2 (en) | 2012-02-11 | 2017-09-21 | Genentech, Inc. | R-spondin translocations and methods using the same |
AR090549A1 (es) | 2012-03-30 | 2014-11-19 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados |
KR20150036603A (ko) | 2012-07-13 | 2015-04-07 | 온코메드 파마슈티칼스, 인크. | Rspo3 결합제 및 그의 용도 |
CA2905830C (en) | 2013-03-12 | 2022-01-18 | Curegenix Inc. | Quinazoline and naphthyridine derivatives useful in the treatment of cancer |
EP3006942A4 (en) | 2013-05-30 | 2016-11-30 | Order Made Medical Res Inc | REAGENT WITH ANTI-LGR6 ANTIBODIES FOR THE DETECTION AND DIAGNOSIS OF CANCER |
RU2016114074A (ru) | 2013-10-18 | 2017-11-23 | Дженентек, Инк. | Анти-rspo антитела и способы применения |
MA41123A (fr) | 2014-12-02 | 2017-10-10 | Oncomed Pharm Inc | Polythérapie pour le traitement du cancer |
US9777052B2 (en) | 2014-12-02 | 2017-10-03 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | R-spondin variants, compositions, and methods of use |
-
2012
- 2012-07-13 KR KR1020147003901A patent/KR20140048276A/ko not_active Application Discontinuation
- 2012-07-13 CA CA2841745A patent/CA2841745A1/en not_active Abandoned
- 2012-07-13 AU AU2012284254A patent/AU2012284254B2/en not_active Ceased
- 2012-07-13 MX MX2014000555A patent/MX349198B/es active IP Right Grant
- 2012-07-13 BR BR112014000765A patent/BR112014000765A2/pt unknown
- 2012-07-13 RU RU2014101669/10A patent/RU2014101669A/ru not_active Application Discontinuation
- 2012-07-13 US US13/549,050 patent/US8802097B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2012-07-13 CN CN201280045135.9A patent/CN104023746B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2012-07-13 EP EP18162940.3A patent/EP3401329A1/en not_active Withdrawn
- 2012-07-13 EP EP12814264.3A patent/EP2731625B1/en active Active
- 2012-07-13 WO PCT/US2012/046746 patent/WO2013012747A1/en active Application Filing
- 2012-07-13 CN CN201610353524.8A patent/CN106167526A/zh active Pending
- 2012-07-13 JP JP2014520383A patent/JP6185463B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-01-13 IL IL230429A patent/IL230429A0/en unknown
- 2014-01-15 CL CL2014000114A patent/CL2014000114A1/es unknown
- 2014-01-22 ZA ZA2014/00525A patent/ZA201400525B/en unknown
- 2014-06-27 US US14/318,253 patent/US9109025B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2014-06-27 US US14/318,247 patent/US9109024B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-07-09 US US14/795,811 patent/US9644034B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2017
- 2017-04-05 US US15/480,081 patent/US20170298143A1/en not_active Abandoned
- 2017-05-11 JP JP2017094648A patent/JP2017169578A/ja not_active Ceased
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20070244061A1 (en) * | 2003-10-10 | 2007-10-18 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Compositions for Diagnosis and Therapy of Diseases Associated with Aberrant Expression of Futrins (R-Spondisn) and/or Wnt |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2020532991A (ja) * | 2017-09-07 | 2020-11-19 | オーガスタ ユニバーシティ リサーチ インスティテュート,インコーポレーテッド | プログラム細胞死タンパク質1に対する抗体 |
US11780921B2 (en) | 2017-09-07 | 2023-10-10 | Augusta University Research Institute, Inc. | Antibodies to programmed cell death protein 1 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2013012747A1 (en) | 2013-01-24 |
US20170298143A1 (en) | 2017-10-19 |
US20150010565A1 (en) | 2015-01-08 |
US20130095116A1 (en) | 2013-04-18 |
US20150010571A1 (en) | 2015-01-08 |
ZA201400525B (en) | 2015-05-27 |
AU2012284254A1 (en) | 2013-03-14 |
JP6185463B2 (ja) | 2017-08-23 |
CN106167526A (zh) | 2016-11-30 |
EP2731625A4 (en) | 2015-02-25 |
EP3401329A1 (en) | 2018-11-14 |
RU2014101669A (ru) | 2015-09-20 |
EP2731625A1 (en) | 2014-05-21 |
US9644034B2 (en) | 2017-05-09 |
US9109024B2 (en) | 2015-08-18 |
BR112014000765A2 (pt) | 2017-06-13 |
US9109025B2 (en) | 2015-08-18 |
US20160002344A1 (en) | 2016-01-07 |
NZ620100A (en) | 2016-06-24 |
US8802097B2 (en) | 2014-08-12 |
CN104023746A (zh) | 2014-09-03 |
KR20140048276A (ko) | 2014-04-23 |
MX2014000555A (es) | 2014-05-07 |
EP2731625B1 (en) | 2018-04-18 |
CL2014000114A1 (es) | 2014-08-18 |
CA2841745A1 (en) | 2013-01-24 |
AU2012284254B2 (en) | 2015-07-09 |
MX349198B (es) | 2017-07-18 |
JP2017169578A (ja) | 2017-09-28 |
CN104023746B (zh) | 2016-08-17 |
IL230429A0 (en) | 2014-03-31 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6185463B2 (ja) | Rspo結合剤およびその使用法 | |
JP6335896B2 (ja) | Rspo3結合剤およびその使用法 | |
JP2016510411A (ja) | Wnt経路インヒビターによる処置の方法およびモニタリング | |
US20150132301A1 (en) | Combination Therapy for Treatment of Cancer | |
US20170266276A1 (en) | Combination Therapy For Treatment of Cancer | |
EP3185884A1 (en) | Combination therapy for treatment of cancer | |
US20160137744A1 (en) | Met-binding agents and uses thereof | |
AU2013204484B2 (en) | RSPO binding agents and uses thereof | |
JP2017526356A (ja) | Rspo1結合剤およびその使用 | |
AU2016213742A1 (en) | RSPO binding agents and uses thereof | |
NZ620100B2 (en) | Rspo binding agents and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20150608 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150710 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150710 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160509 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160804 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161011 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170301 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170511 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170628 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170727 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6185463 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |