JP2020532991A - プログラム細胞死タンパク質１に対する抗体 - Google Patents

Abstract

ＰＤ−１、好ましくはヒトまたはマウスＰＤ−１に免疫特異的に結合し、免疫細胞増殖および活性を活性化する免疫応答を誘発または促進する、抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。ＰＤ−１は抑制免疫応答のみを促進するという既存のパラダイムに反して、開示の抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＰＤ−１に免疫特異的に結合し、免疫細胞を抑制するのではなく免疫細胞を活性化する活性化シグナルを免疫細胞に送達する。一実施形態では、開示の抗体およびその抗原結合フラグメントは、免疫細胞上に発現しているＰＤ−１に特異的に結合する。免疫細胞上のＰＤ−１への開示の抗体およびその抗原結合フラグメントの結合は、活性化シグナル、例えば、サイトカイン産生および／または免疫細胞増殖の活性化を増強または促進するシグナルを、免疫細胞内に伝達させる。ＰＤ−１を発現する免疫細胞としては、ＢおよびＴ細胞、ならびに骨髄由来細胞が挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞である。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年９月７日に出願された米国仮特許出願第６２／５５５，１５６号、２０１８年２月１日に出願された同第６２／６２４，８４３号、および２０１８年４月１３日に出願された同第６２／６５７，３２３号の利益および優先権を主張し、それらの全ては、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

配列表の参照
２０１８年８月２１日に作成され、５５．２キロバイトのサイズを有する「０６４４６６．０７１ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」と命名されたテキストファイルとして、２０１８年９月６日に提出された配列表は、米国特許法施行規則１．５２（ｅ）（５）に従って参照により本明細書に組み込まれる。

発明の技術分野
本発明は概して、免疫調節、ならびにＰＤ−１に特異的に結合する抗体およびそれらの使用方法に関する。

発明の背景
プログラム細胞死受容体タンパク質（ＰＤ−１）／プログラム細胞死受容体タンパク質リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）経路は、がん免疫療法の標的として有望な臨床的成功を示している。ＰＤ−１またはＰＤ−Ｌ１のいずれかを標的にする現在の抗体は、この相互作用を遮断し、がん細胞に対する免疫応答を高めることができる。ＰＤ−１モノクローナル抗体および他の免疫チェックポイント阻害剤を用いた臨床試験の成功は、がん免疫学において新たな道を切り開いている。しかしながら、がん患者の大きいサブセットが新しい免疫療法に応答することができないため、併用療法および予測バイオマーカーの研究が強化されている（Ｉｗａｉ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４：２６（２０１７）（非特許文献１））。

したがって、本発明の一目的は、ＰＤ−１シグナル伝達を調節するための組成物および方法を提供することである。

本発明の別の目的は、ＰＤ−１に特異的に結合し、ＰＤ−１シグナル伝達を調節する、抗体およびその抗原結合フラグメントを提供することである。

本発明の別の目的は、がんを治療するための組成物および方法を提供することである。

本発明の別の目的は、感染症を治療するための組成物および方法を提供することである。

Ｉｗａｉ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４：２６（２０１７）

ＰＤ−１、好ましくはヒトまたはマウスＰＤ−１に免疫特異的に結合し、免疫細胞増殖および活性を活性化する免疫応答を誘発または促進する、抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。一実施形態では、開示の抗体およびその抗原結合フラグメントは、免疫細胞上に発現しているＰＤ−１に特異的に結合する。免疫細胞上のＰＤ−１への開示される抗体およびその抗原結合フラグメントの結合は、活性化シグナル、例えば、サイトカイン産生および／または免疫細胞増殖の活性化を増強または促進するシグナルを、免疫細胞内に伝達させる。ＰＤ−１を発現する免疫細胞としては、ＢおよびＴ細胞、ならびに骨髄由来細胞が挙げられるが、これらに限定されない（Ｒｉｌｅｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２２９（１）：１１４−１２５（２００９））。一実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞である。

別の実施形態は、対象に、有効量の開示される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメントを投与して、対象における適応免疫応答を誘発、増強、または促進することによって、適応免疫応答の刺激、促進、または増強を、それを必要としている対象において行う方法を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、および８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、および１４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＰＤ−１に免疫特異的に結合する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖と、を有する、抗体またはその任意の抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちのいずれか１つを発現するように操作されたトランスジェニック動物を提供する。一実施形態では、動物は、マウスである。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖をコードする、核酸を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖をコードする、核酸を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、１９、および２０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、１３、および２５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖と、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖をコードする、核酸を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖をコードする、核酸を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、および３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、３６、および３７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖と、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖をコードする、核酸を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖をコードする、核酸を提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、１４、２４、２５、３５、３６、または３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの軽鎖ＣＤＲを含有する、抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、８、１８、１９、２０、２９、３０、または３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの重鎖ＣＤＲを含有する、抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、１４、２４、２５、３５、３６、または３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの軽鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、８、１８、１９、２０、２９、３０、または３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの重鎖ＣＤＲと、を含有する、抗体、またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に免疫特異的に結合する、抗体もしくはそのエピトープ結合フラグメントまたは融合タンパク質を提供する。一実施形態では、抗体は、ＰＤ−１上のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に結合する。一実施形態では、抗体は、免疫細胞の表面上に発現したＰＤ−１に結合し、かつ、免疫細胞を活性化または刺激するシグナルをＰＤ−１を通して誘発または促進する。一実施形態では、活性化または刺激される免疫細胞は、Ｔ細胞、例えばＣＤ８^＋Ｔ細胞である。

いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒト、マウス、キメラ、ヒト化、モノクローナル、二重特異性、三重特異性、または多重特異性である。

一実施形態は、開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を含む、医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、第２の治療剤および／または薬学的に許容される賦形剤を含む。例示的な第２の治療剤は、シクロホスファミドを含む。

一実施形態は、対象に、有効量の開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を投与して、対象における免疫応答を誘発、促進、または増強することによって、免疫応答の誘発、促進、または増強を、それを必要としている対象において行う方法を提供する。

一実施形態は、対象に、有効量の開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を投与して、対象におけるがんを治療することによって、がんの治療を、それを必要としている対象において行う方法を提供する。

一実施形態は、対象に、有効量の開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を投与して、対象における腫瘍負荷を低減することによって、腫瘍負荷の低減を、それを必要としている対象において行う方法を提供する。

一実施形態は、対象に、有効量の開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を投与して、対象における感染症を治療することによって、感染症の治療を、それを必要としている対象において行う方法を提供する。

モノクローナル抗体４Ｇ９とヒトＰＤ−１との間の相互作用動態を時間の関数として示すグラフである。グラフは、０、１２５、２５０、５００、５００、および１０００ｎＭにおけるヒトＰＤ−１の濃度からのトレースを示す。 モノクローナル抗体４Ｇ９とマウスＰＤ−１との間の相互作用動態を時間の関数として示すグラフである。グラフは、０、６２．５、１２５、５００、５００、および１０００ｎＭにおけるマウスＰＤ−１の濃度からのトレースを示す。 モノクローナル抗体４Ｃ１２とヒトＰＤ−１との間の相互作用動態を時間の関数として示すグラフである。グラフは、０、１２５、２５０、５００、５００、および１０００ｎＭにおけるヒトＰＤ−１の濃度からのトレースを示す。 モノクローナル抗体５Ｃ２とヒトＰＤ−１との間の相互作用動態を時間の関数として示すグラフである。グラフは、０および１０００ｎＭにおけるマウスＰＤ−１の濃度からのトレースを示す。 モノクローナル抗体５Ｃ２とマウスＰＤ−１との間の相互作用動態を時間の関数として示すグラフである。グラフは、０、６２．５、１２５、２５０、５００、５００、および１０００ｎＭにおけるヒトＰＤ−１の濃度からのトレースを示す。 アイソタイプ対照抗体または市販の抗ＰＤ−１抗体Ｊ４３で染色されたＥＬ４細胞のフローサイトメトリヒストグラムである。 二次抗体のみまたは抗体４Ｇ９、５Ｃ２、および４Ｃ１２で染色されたＥＬ４細胞のフローサイトメトリヒストグラムである。 二次抗体のみまたは抗体４Ｇ９で染色されたＥｌ４細胞のフローサイトメトリヒストグラムである。 二次抗体のみまたは抗体５Ｃ２で染色されたＥｌ４細胞のフローサイトメトリヒストグラムである。 二次抗体のみまたは抗体４Ｃ１２で染色されたＥｌ４細胞のフローサイトメトリヒストグラムである。 ＥＬ４細胞への様々な精製マウスＰＤ−１抗体の結合を示す棒グラフである。 図７Ａおよび図７Ｂは、様々な抗体で処理されたＣＤ４ Ｔ細胞からの上清中のＩＦＮγ（図７Ａ）またはＩＬ−２の濃度を示す棒グラフである。Ｘ軸は処置群であり、Ｙ軸は濃度（ｎｇ／ｍＬ）である。 図７Ａの説明を参照のこと。 ４Ｇ９または５Ｃ２抗体で処理されたヒトＣＤ４ Ｔ細胞からの上清中のＩＦＮγ濃度を示す棒グラフである。Ｘ軸は処置群を表し、Ｙ軸は濃度（ｎｇ／ｍＬ）を表す。 様々な抗体で処理されたマウスＣＤ４ Ｔ細胞におけるｐＡＫＴの細胞内染色のレベルを示す棒グラフである。Ｘ軸は処置群を表し、Ｙ軸はｐＡＫＴ（Ｓ４７３）ＭＦＩを表す。 様々な抗体中のＩｇＧ重鎖および軽鎖を示すウエスタンブロットである。 ヒトＰＤ−１−Ｆｃへの４Ｇ９および５Ｃ２抗体の結合を示す棒グラフである。Ｘ軸は抗体濃度を表し、Ｙ軸はＯＤ４５０を表す。 ＰＤ−１ ＫＯマウス（図１１Ａ）またはＰＤ−１ ＷＴマウス（図１１Ｂ）からのＣＤ４ Ｔ細胞におけるＰＤ−１への４Ｇ９および５Ｃ２抗体の結合を示すフローサイトメトリヒストグラムである。 ４Ｇ９、５Ｃ２、市販のＡｂ−１、市販のＡｂ−２で処理されたか、または未処理のＣＤ４ Ｔ細胞におけるｐＳ６発現を示す折れ線グラフである。Ｘ軸は総タンパク質の濃度（μｇ／ｍＬ）を表し、Ｙ軸はＯＤ４５０を表す。 ＴＣ−１腫瘍実験のための実験設計を示す概略図である。 Ｅ７ Ｖａｘ、４Ｇ９、ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋４Ｇ９で処理されたか、または未処理のＴＣ−１担がんマウスについての、経時的（日）な平均腫瘍体積（ｃｍ^３）を示す折れ線グラフである。Ｘ軸は時間（日）を表し、Ｙ軸は平均腫瘍体積（ｃｍ^３）を表す。 Ｅ７ Ｖａｘ、４Ｇ９、ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋４Ｇ９で処理されたか、または未処理のＴＣ−１担がんマウスについての、経時的な生存率を示す折れ線グラフである。 Ｅ７ Ｖａｘ、４Ｃ１２、５Ｃ２、ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋４Ｃ１２、Ｅ７ Ｖａｘ＋５Ｃ２で処理されたか、または未処理のＴＣ−１担がんマウスについての、経時的（日）な平均腫瘍体積（ｃｍ^３）を示す折れ線グラフである。 ＴＣ−１腫瘍実験のための実験設計の概略図である。 Ｅ７ Ｖａｘ、４Ｇ９、ＲＭＰ １−１４、Ｊ４３、Ｅ７ Ｖａｘ＋４Ｇ９、Ｅ７ Ｖａｘ＋ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋Ｊ４３で処理されたか、または未処理のＴＣ−１担がんマウスについての、経時的（日）な平均腫瘍体積（ｃｍ^３）を示す折れ線グラフである。Ｘ軸は時間（日）を表し、Ｙ軸は平均腫瘍体積（ｃｍ^３）を表す。 Ｅ７ Ｖａｘ、４Ｇ９、４Ｃ１２、５Ｃ２、ＲＭＰ １−１４、Ｊ４３、Ｅ７ Ｖａｘ＋４Ｇ９、Ｅ７ Ｖａｘ＋４Ｃ１２、Ｅ７ Ｖａｘ＋５Ｃ２、Ｅ７ Ｖａｘ＋ＲＭＰ １−１４、Ｅ７ Ｖａｘ＋Ｊ４３で処理されたか、または未処理のＴＣ−１担がんマウスの経時的な生存率を示す折れ線グラフである。Ｘ軸は時間（日）表し、Ｙ軸は生存率を表す。

発明の詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書で使用される場合、分子は、そのような結合がその同族抗原への抗体の特異性および親和性を示す場合、第２の分子に「免疫特異的に結合する」ことが可能であると言われる。抗体は、そのような結合が免疫グロブリン分子の認識部位を伴う場合、抗原の標的領域または立体構造（「エピトープ」）に免疫特異的に結合することが可能であると言われる。特定の抗原に免疫特異的に結合する抗体は、他の抗原が、例えば、免疫学的測定、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ、または当該技術分野において既知の他のアッセイによって決定されるように、抗原認識部位によって認識される何らかの配列または立体構造類似性を有する場合、より低い親和性で他の抗原に結合し得るが、全く無関係の抗原には結合しない。しかしながら、好ましくは、抗体（およびそれらの抗原結合フラグメント）は、他の抗原と交差反応しない。抗体はまた、Ｆｃ領域などの抗原認識部位を伴わない分子の他の領域／ドメイン内の結合ドメインにより、ＦｃＲ受容体など、免疫特異性ではない方法で他の分子に結合し得る。

本明細書で使用される場合、分子は、そのような結合がその同族結合リガンドへの受容体の特異性および親和性を示す場合、第２の分子に「生理学的に特異的に結合する」と言われる。分子は、２つ以上の他の分子に生理学的に特異的に結合することが可能であり得る。

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、「可変領域」抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子を示すことが意図される。「可変領域」という用語は、免疫グロブリンのそのようなドメインを、抗体によって広く共有されるドメイン（抗体Ｆｃドメインなど）と区別することが意図される。可変領域は、その残基が抗原結合を担う「超可変領域」を含む。超可変領域は、「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基（すなわち、典型的には、近似的に軽鎖可変ドメインにおける残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに近似的に重鎖可変ドメインにおける残基２７〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））、および／または「超可変ループ」からの残基（すなわち、軽鎖可変ドメインにおける残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメインにおける２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。抗体という用語は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、ラクダ化抗体（例えば、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０、Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｕｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１：２５３、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２３１：２５、国際公開第ＷＯ９４／０４６７８号および同第ＷＯ９４／２５５９１号、米国特許第６，００５，０７９号を参照）、一本鎖Ｆｖｓ（ｓｃＦｖ）（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、細胞内抗体、および抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗体に対する抗Ｉｄおよび抗−抗Ｉｄ抗体を含む）を含む。特に、そのような抗体は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、およびＩｇＡ_２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子を含む。

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、抗体の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）および任意に抗体の「可変領域」抗原認識部位を含むフレームワーク残基を含有し、抗原に免疫特異的に結合する能力を示す、抗体の１つ以上の部分を指す。そのようなフラグメントは、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、一本鎖（ＳｃＦｖ）、およびそれらの突然変異体、自然発生変異体、ならびに抗体の「可変領域」抗原認識部位および異種タンパク質（例えば、毒素、異なる抗原の抗原認識部位、酵素、受容体、または受容体リガンドなど）を含む融合タンパク質を含む。

本明細書で使用される場合、「フラグメント」という用語は、少なくとも５個の連続アミノ酸残基、少なくとも１０個の連続アミノ酸残基、少なくとも１５個の連続アミノ酸残基、少なくとも２０個の連続アミノ酸残基、少なくとも２５個の連続アミノ酸残基、少なくとも４０個の連続アミノ酸残基、少なくとも５０個の連続アミノ酸残基、少なくとも６０個の連続アミノ酸残基、少なくとも７０個の連続アミノ酸残基、少なくとも８０個の連続アミノ酸残基、少なくとも９０個の連続アミノ酸残基、少なくとも１００個の連続アミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続アミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続アミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続アミノ酸残基、少なくとも２００個の連続アミノ酸残基、または少なくとも２５０個の連続アミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。

「結合分子」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の標的と特異的に相互作用し、それに結合する分子を指すことが意図される。標的は、生体分子または小（化学）分子を含むことができる。標的分子は、抗原または抗原部分を定義し得る。結合分子の例としては、抗体（モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ならびに抗体フラグメントを含む）、融合タンパク質、および当業者に既知の他の抗原結合分子が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「調節する」という用語は、効果、結果、または活性（例えば、シグナル伝達）を変更する能力を指す。そのような調節は、作動的または拮抗的であり得る。拮抗的調節は、部分的であり得る（すなわち、無効にするのではなく、弱める）か、またはそのような活性を完全に無効にする（例えば、中和する）ことができる。調節は、抗体の結合後の受容体の内在化、または標的細胞上での受容体の発現の低減を含むことができる。作動的調節は、活性（例えば、シグナル伝達）を増強するか、またはそうでなければ増加させるもしくは増強することができる。またさらなる実施形態では、そのような調節は、誘導されるシグナル伝達の性質を変更するために、リガンドとその同族受容体との間の相互作用の性質を変更することができる。例えば、分子は、リガンドまたは受容体に結合することによって、他のリガンドまたは受容体に結合するそのような分子の能力を変更し、それによりそれらの全体的な活性を変更することができる。好ましくは、そのような調節は、測定可能な免疫系活性の少なくとも１０％の変化、より好ましくは、そのような活性の少なくとも５０％の変化、またはそのような活性の少なくとも２倍、５倍、１０倍、もしくはさらにより好ましくは、少なくとも１００倍の変化を提供するであろう。

「実質的に」という用語は、結合または示される効果の文脈で使用される場合、観察される効果が生理学的または治療的に意義があることを示すことが意図される。したがって、例えば、分子は、遮断の程度が生理学的または治療的に意義がある場合（例えば、そのような程度が、６０％超の完全性、７０％超の完全性、７５％超の完全性、８０％超の完全性、８５％超の完全性、９０％超の完全性、９５％超の完全性、または９７％超の完全性である場合）、リガンドまたは受容体の活性を実質的に遮断することが可能である。同様に、分子は、そのような免疫特異性および特徴が、６０％超の同一性、７０％超の同一性、７５％超の同一性、８０％超の同一性、８５％超の同一性、９０％超の同一性、９５％超の同一性、または９７％超の同一性である場合、別の分子と実質的に同じ免疫特異性および／または特徴を有すると言われる。）

本明細書で使用される場合、「共刺激」シグナルは、陽性の共刺激シグナル（例えば、活性の増強をもたらすシグナル）および陰性の共刺激シグナル（例えば、活性の阻害をもたらすシグナル）を包含する。

本明細書で使用される場合、「誘導体」という用語は、親抗体または参照抗体の同じ標的に免疫特異的に結合するが、親抗体もしくは参照抗体またはその抗原結合フラグメントに対する１、２、３、４、５個、またはそれ以上のアミノ酸残基の置換、付加、欠失、または修飾を含むことによって、親抗体もしくは参照抗体またはその抗原結合フラグメントとはアミノ酸配列が異なる、抗体またはその抗原結合フラグメントを指す。好ましくは、そのような誘導体は、親抗体もしくは参照抗体またはその抗原結合フラグメントと実質的に同じ免疫特異性および／もしくは特徴、または同じ免疫特異性および特徴を有するであろう。アミノ酸置換またはそのような誘導体の付加は、自然発生（すなわち、ＤＮＡコード化）または非自然発生アミノ酸残基を含むことができる。「誘導体」という用語は、例えば、エフェクターまたは結合特徴の増強または低下を示す変異体Ｆｃ領域を有する抗体などを形成するために、例えば、キメラまたはヒト化変異体、ならびに改変されたＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４領域を有する変異体を包含する。

本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」は、抗体の異なる部分が非ヒト抗体に由来する可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する抗体などの異なる免疫グロブリン分子に由来する分子である。

本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、ヒトフレームワーク領域および非ヒト（通常はマウスまたはラット）免疫グロブリンからの１つ以上のＣＤＲを含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。定常領域は、存在する必要はないが、存在する場合、それらはヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９９％、好ましくは約９５％以上同一であるべきである。したがって、ヒト化免疫グロブリンの全ての部分は、場合によってはＣＤＲを除き、天然ヒト免疫グロブリン配列の対応する部分と実質的に同一である。ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖およびヒト化重鎖免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、キメラ抗体の可変領域全体が非ヒトであるため、例えば、ヒト化抗体は、典型的なキメラ抗体を包含しないであろう。

本明細書で使用される場合、「内因性濃度」という用語は、分子が細胞（その細胞は正常細胞、がん細胞、または感染細胞であり得る）によって天然に（すなわち、発現ベクターまたは組み換えプロモーターの非存在下で）発現するレベルを指す。

本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」、「治療」、および「治療的使用」という用語は、抗ＰＤ−１抗体またはその抗原フラグメントによって悪化する疾患または障害の１つ以上の症状の除去、低減、または改善を指す。

本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、そのような症状の臨床的に意義のある除去、低減、または改善を媒介するのに十分な治療剤の量を指す。効果は、その規模がレシピエント対象の健康または予後に影響を及ぼすのに十分である場合、臨床的に意義がある。治療有効量は、疾患の発症を遅延または最小化、例えば、がんの拡散を遅延または最小化するのに十分な治療剤の量を指し得る。治療有効量は、疾患の治療または管理において治療的利益を提供する治療剤の量も指し得る。

本明細書で使用される場合、「予防剤」という用語は、そのような障害または疾患のいずれかの症状の検出前に障害または疾患の予防に使用され得る薬剤を指す。「予防有効」量は、そのような保護を媒介するのに十分な予防剤の量である。予防有効量は、疾患の予防において予防的利益を提供する予防剤の量も指し得る。

本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、細胞の異常な制御されない成長からもたらされる新生物または腫瘍を指す。本明細書で使用される場合、がんは、白血病およびリンパ腫を明示的に含む。「がん」という用語は、遠位部位に転移し、非がん細胞のものとは異なる表現型形質、例えば、軟寒天などの３次元基質におけるコロニーの形成、または３次元基底膜もしくは細胞外マトリクス調製物における管状ネットワークもしくはウェブ状マトリクスの形成を示す可能性を有する細胞を伴う疾患を指す。非がん細胞は、軟寒天においてコロニーを形成せず、３次元基底膜または細胞外マトリクス調製物において明確な球体状構造を形成する。

本明細書で使用される場合、「免疫細胞」は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、単球、樹状細胞、およびマクロファージを含むが、これらに限定されない造血起源の任意の細胞を指す。

本明細書で使用される場合、「結合価」は、分子当たりの利用可能な結合部位の数を指す。

本明細書で使用される場合、「免疫的」、「免疫学的」、または「免疫」応答という用語は、レシピエント患者におけるペプチドに対する有益な液性（抗体媒介性）および／または細胞（抗原特異的Ｔ細胞もしくはそれらの分泌産物によって媒介される）応答の発生である。そのような応答は、免疫原の投与によって誘発される活性応答、または抗体もしくは初回抗原刺激を受けたＴ細胞の投与によって誘発される受動応答であり得る。細胞免疫応答は、抗原特異的ＣＤ４^＋Ｔヘルパー細胞および／またはＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞を活性化するためのクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣ分子と会合したポリペプチドエピトープの提示によって誘導される。応答は、単球、マクロファージ、ＮＫ細胞、好塩基球、樹状細胞、星状細胞、小膠細胞、好酸球の活性化、好中球または先天性免疫の他の構成成分の活性化または動員も伴い得る。細胞媒介性免疫学的応答の存在は、増殖アッセイ（ＣＤ４^＋Ｔ細胞）またはＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球）アッセイによって決定され得る。免疫原の保護または治療効果への液性および細胞応答の相対的な寄与は、免疫化同系動物からの抗体およびＴ細胞を別々に単離し、第２の対象における保護または治療効果を測定することによって区別され得る。

本明細書で使用される場合、「免疫原性薬剤」または「免疫原」は、任意に補助剤と共に、哺乳動物への投与後にそれ自体に対する免疫学的応答を誘発することが可能である。

本明細書で使用される場合、「個体」、「宿主」、「対象」、および「患者」という用語は、本明細書で互換的に使用され、ヒト、齧歯類、例えば、マウスおよびラット、ならびに他の実験動物を含むが、これらに限定されない哺乳動物を指す。

本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、修飾（例えば、リン酸化またはグリコシル化）にかかわらず、任意の長さのアミノ酸の鎖を指す。ポリペプチドという用語は、タンパク質およびそのフラグメントを含む。ポリペプチドは、「外因性」であり得、それらが細菌細胞によって産生されるヒトポリペプチドなどの、使用される宿主細胞とは「異種」、すなわち、異質であることを意味する。ポリペプチドは、本明細書においてアミノ酸残基配列として開示される。それらの配列は、アミノ酸からカルボキシ末端への方向で左から右へと記載される。標準的な命名法に従って、アミノ酸残基配列は、以下に示されるように３文字または１文字コードのいずれかで呼ばれる。アラニン（Ａｌａ、Ａ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ、Ｄ）、システイン（Ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（Ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（Ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（Ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（Ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（Ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（Ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（Ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（Ｔｙｒ、Ｙ）、およびバリン（Ｖａｌ、Ｖ）。

本明細書で使用される場合、「変異体」という用語は、参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドとは異なるが、本質的な特性を保持するポリペプチドまたはポリヌクレオチドを指す。ポリペプチドの典型的な変異体は、別の参照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般に、相違は、参照ポリペプチドおよび変異体の配列が全体的には密接に類似しており、多くの領域において同一であるように限定される。変異体および参照ポリペプチドは、アミノ酸配列が１つ以上の修飾（例えば、置換、付加、および／または欠失）によって異なり得る。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝子コードによってコードされたものであってもなくてもよい。ポリペプチドの変異体は、対立遺伝子変異体などの自然に発生するものであってもよく、または自然に発生することが知られていない変異体であってもよい。

開示のポリペプチドの構造において修飾および変更が行われ、依然としてポリペプチドと類似する特徴を有する分子を得ることができる（例えば、保存的アミノ酸置換）。例えば、ある特定のアミノ酸は、明らかな活性の喪失なしに配列において他のアミノ酸に置換され得る。ポリペプチドの生物学的な機能的活性を定義するものがポリペプチドの相互作用能力および性質であるため、ポリペプチド配列においてある特定のアミノ酸配列置換が行われ、それにもかかわらず同様の特性を有するポリペプチドを得ることができる。

そのような変更を行う際に、アミノ酸のハイドロパシー指数が考慮され得る。ポリペプチドに相互作用的な生物学的機能を与える際のハイドロパシーアミノ酸指数の重要性は、一般に当該技術分野において理解されている。ある特定のアミノ酸が、類似するハイドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸に置換され、依然として類似する生物学的活性を有するポリペプチドをもたらすことができることが既知である。各アミノ酸には、その疎水性および電荷の特徴に基づくハイドロパシー指数が割り当てられている。それらの指数は、イソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、トレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタメート（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパルテート（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リジン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）である。

アミノ酸の相対的なハイドロパシー特徴が、結果として得られるポリペプチドの二次構造を決定し、これがポリペプチドの、酵素、基質、受容体、抗体、抗原、および補因子などの他の分子との相互作用を定義すると考えられる。アミノ酸が、類似するハイドロパシー指数を有する別のアミノ酸によって置換され、依然として機能的に同等のポリペプチドを得ることができることが当該技術分野において既知である。そのような変化において、そのハイドロパシー指数が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるものが特に好ましく、±０．５以内であるものがさらにより特に好ましい。

特にそれによって作られる生物学的機能的同等のポリペプチドまたはペプチドが、免疫学的実施形態に使用することが意図される場合、親水性に基づく同様のアミノ酸の置換も行われ得る。以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リジン（＋３．０）、アスパルテート（＋３．０±１）、グルタメート（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、プロリン（−０．５±１）、トレオニン（−０．４）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）、トリプトファン（−３．４）。アミノ酸が、類似する親水性値を有する別のものに置換され、依然として生物学的に同等の、特に免疫学的に同等のポリペプチドを得ることができることが理解される。そのような変化において、その親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内であるものが特に好ましく、±０．５以内であるものがさらにより特に好ましい。

上で概説されるように、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば、それらの疎水性、親水性、電荷、サイズなどに基づく。様々な上記の特徴を考慮する例示的な置換は、当業者に周知であり、（元の残基：例示的な置換）：（Ａｌａ：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ）、（Ａｒｇ：Ｌｙｓ）、（Ａｓｎ：Ｇｌｎ、Ｈｉｓ）、（Ａｓｐ：Ｇｌｕ、Ｃｙｓ、Ｓｅｒ）、（Ｇｌｎ：Ａｓｎ）、（Ｇｌｕ：Ａｓｐ）、（Ｇｌｙ：Ａｌａ）、（Ｈｉｓ：Ａｓｎ、Ｇｌｎ）、（Ｉｌｅ：Ｌｅｕ、Ｖａｌ）、（Ｌｅｕ：Ｉｌｅ、Ｖａｌ）、（Ｌｙｓ：Ａｒｇ）、（Ｍｅｔ：Ｌｅｕ、Ｔｙｒ）、（Ｓｅｒ：Ｔｈｒ）、（Ｔｈｒ：Ｓｅｒ）、（Ｔｉｐ：Ｔｙｒ）、（Ｔｙｒ：Ｔｒｐ、Ｐｈｅ）、および（Ｖａｌ：Ｉｌｅ、Ｌｅｕ）を含む。したがって、本開示の実施形態は、上記のようなポリペプチドの機能的または生物学的同等物を企図する。特に、ポリペプチドの実施形態は、目的のポリペプチドと約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有する変異体を含むことができる。

「配列同一性パーセント（％）」という用語は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して最大配列同一性パーセントを達成した後の、参照核酸配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸と同一である候補配列中のヌクレオチドまたはアミノ酸のパーセンテージとして定義される。配列同一性パーセントを決定する目的のアラインメントは、当該技術分野の技能の範囲内である様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータは、既知の方法によって決定され得る。

本明細書における目的のために、所与のヌクレオチドまたはアミノ酸配列Ｃの、所与の核酸配列Ｄへの、それとの、またはそれに対する配列同一性％（これは代替的には、所与の配列Ｄへの、それとの、またはそれに対するある特定の配列同一性％を有するか、または含む所与の配列Ｃと表現され得る）は、以下の通り計算される：
分率Ｗ／Ｚ×１００
式中、Ｗは、配列アラインメントプログラムによってそのプログラムのＣおよびＤのアラインメントにおいて完全な一致としてスコアリングされるヌクレオチドまたはアミノ酸の数であり、Ｚは、Ｄにおけるヌクレオチドまたはアミノ酸の総数である。配列Ｃの長さが配列Ｄの長さと等しくない場合、Ｃ対Ｄの配列同一性％がＤ対Ｃの配列同一性％とは等しくならないことが理解されるであろう。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、標準的な薬学的担体、例えば、リン酸緩衝食塩溶液、水、および乳剤、例えば、油／水または水／油乳剤、ならびに様々なタイプの湿潤剤のうちのいずれかを包含する。

本明細書で使用される場合、「抗原決定基」および「エピトープ」という用語は、互換的に使用され、抗体によって認識される構造を指す。

本明細書で使用される場合、「立体構造エピトープ」は、抗原のアミノ酸配列の不連続セクションを含むエピトープである。抗体は、抗原の３Ｄ表面特徴、形状、または三次構造に基づく立体構造エピトープに結合する。

本明細書で使用される場合、「線状エピトープ」は、抗原からのアミノ酸の連続配列によって形成されるエピトープである。線状エピトープは、典型的には、約５〜約１０個の連続アミノ酸残基を含む。抗体は、抗原の一次配列に基づく線状エピトープに結合する。

本明細書で使用される場合、「抗原結合部位」とも呼ばれる「パラトープ」は、抗原を認識し、それに結合する、抗体の一部である。

ＩＩ．組成物
ＰＤ−１に免疫特異的に結合する抗体およびその抗原結合フラグメントが提供される。ＰＤ−１は抑制免疫応答のみを促進するという既存のパラダイムに反して（Ｒｉｌｅｙ，Ｊ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２２９（１）：１１４−１２５（２００９））、開示される抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＰＤ−１に免疫特異的に結合し、免疫細胞を抑制するのではなく免疫細胞を活性化する活性化シグナルを免疫細胞に送達する。

Ａ．プログラム死受容体タンパク質１（ＰＤ−１）
開示される抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＰＤ−１に免疫特異的に結合する。抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば、以下に提供されるアミノ酸配列を有するＰＤ−１に結合することができる。

ヒトＰＤ−１およびマウスＰＤ−１のアミノ酸配列は、当該技術分野において既知であり、例えば、以下を含む。

ヒトＰＤ−１

アクセッション：ＡＪＳ１０３６０であり、これは、参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる。

マウスＰＤ−１

であり、これは、参照によりその全体が本明細書に具体的に組み込まれる。

Ｂ．抗体組成物
開示される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、任意のクラスの免疫グロブリン全体（すなわち、無傷抗体）、そのフラグメント、および抗体の少なくとも抗原結合可変ドメインを含有する合成タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、開示される抗体は、抗体軽鎖、ならびに抗体重鎖の少なくとも可変ドメインの両方を含有する。他の実施形態では、そのような分子は、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４領域（特に、ＣＨ１およびヒンジ領域、またはＣＨ１、ヒンジ、およびＣＨ２領域、またはＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域）のうちの１つ以上をさらに含むことができる。抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリン、ならびにＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、およびＩｇＧ_４を含む任意のアイソタイプから選択され得る。いくつかの実施形態では、定常ドメインは、抗体が細胞傷害活性を示すことが望ましい場合に補体結合定常ドメインであり、クラスは、典型的にはＩｇＧ_１である。他の実施形態では、そのような細胞傷害活性が望ましくない場合、定常ドメインは、ＩｇＧ_２またはＩｇＧ_４クラスのものであり得る。抗体は、２つ以上のクラスまたはアイソタイプからの配列を含むことができ、所望のエフェクター機能を最適化するための特定の定常ドメインの選択は、当該技術分野の技能の範囲内である。

可変ドメインは、抗体によって配列が異なり、各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合および特異性に使用される。しかしながら、変動性は通常、抗体の可変ドメインを通して均一に分布していない。それは典型的には、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、主として３つのＣＤＲによって接続されたベータ−シート構造を取る４つのＦＲ領域を含み、これは、ベータ−シート構造を接続し、場合によってはその一部を形成するループを形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって一緒にごく近接して保持され、他の鎖からＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。

いくつかの実施形態は、生物活性を有する抗ＰＤ−１抗体のフラグメントを提供する。フラグメントは、他の配列に付着しているかどうかにかかわらず、特定の領域または特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の選択された修飾を含んでもよく、ただし、そのフラグメントの活性が、非修飾抗体または抗体フラグメントと比較して有意に改変または低下していないことを条件とする。

別の実施形態は、ＰＤ−１に特異的な一本鎖抗体を提供する。一本鎖抗体の産生のための方法は、当業者に周知である。一本鎖抗体は、短ペプチドリンカーを使用して重鎖および軽鎖の可変ドメインを一緒に融合し、それにより単一分子上で抗原結合部位を再構成することによって作られ得る。一方の可変ドメインのＣ末端がもう一方の可変ドメインのＮ末端に１５〜２５個のアミノ酸のペプチドまたはリンカーによってテザリングされる一本鎖抗体可変フラグメント（ｓｃＦｖｓ）は、抗原結合または結合の特異性を著しく破壊することなく開発されている。リンカーは、重鎖および軽鎖がそれらの適切な立体構造配向において一緒に結合することを可能にするように選択される。

別の実施形態は、２つのｓｃＦｖを連結することによって操作され得る二価一本鎖可変フラグメント（ジ−ｓｃＦｖ）を提供する。これは、２つのＶＨおよび２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を産生し、タンデムｓｃＦｖをもたらすことによって行われ得る。ＳｃＦｖはまた、２つの可変領域が一緒に折り畳まれるには短すぎるリンカーペプチド（約５個のアミノ酸）を用いて設計され得、ｓｃＦｖを二量体化させる。このタイプは、ダイアボディとして既知である。ダイアボディは、対応するｓｃＦｖより最大４０倍低い解離定数を有することが示されており、それらがそれらの標的に対してもはるかに高い親和性を有することを意味する。さらに短いリンカー（１または２個のアミノ酸）は、三量体（トリアボディまたはトリボディ）の形成をもたらす。テトラボディもまた産生されている。それらは、それらの標的に対してダイアボディよりもさらに高い親和性を示す。

別の実施形態は、免疫細胞に活性化シグナルを誘発するＰＤ−１に特異的なモノクローナル抗体を提供する。モノクローナル抗体は、実質的に均質な抗体の集団から得られ得、すなわち、集団内の個々の抗体は、抗体分子の小さいサブセット内に存在し得る考えられる自然発生突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種由来の、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、またはそれに相同である一方で、その鎖（複数可）の残りの部分が、別の種由来の抗体、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一であるか、またはそれに相同である、「キメラ」抗体を含む（それらが所望の拮抗活性を示す限り）。

１．キメラ抗体およびヒト化抗体
別の実施形態は、開示される配列のうちの１つ以上を含むキメラ抗ＰＤ−１抗体およびその抗原結合フラグメントを提供し、ＰＤ−１に結合し、活性化シグナルを、ＰＤ−１を発現する免疫細胞に伝達させるそれらの機能的変異体もまた提供される。

キメラ抗体を産生するための方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２、Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｂｉｏ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、Ｇｉｌｌｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２、ならびに米国特許第６，３１１，４１５号、同第５，８０７，７１５号、同第４，８１６，５６７号、および同第４，８１６，３９７号を参照されたい。非ヒト種からの１つ以上のＣＤＲおよびヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を含むキメラ抗体は、例えば、ＣＤＲグラフティング（ＥＰ２３９，４００、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面形成（ＥＰ５９２，１０６、ＥＰ５１９，５９６、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７：８０５、およびＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９６９）、ならびに鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む、当該技術分野において既知の様々な技法を使用して産生され得る。

開示される抗ＰＤ−１抗体またはその抗原結合フラグメントは、ヒトもしくはヒト化抗体、またはその抗原結合フラグメントであり得る。多くの非ヒト抗体（例えば、マウス、ラット、またはウサギ由来のもの）は、ヒトにおいて自然に抗原性であり、したがってヒトに投与される場合に望ましくない免疫応答を引き起こす可能性がある。したがって、方法におけるヒトまたはヒト化抗体の使用は、ヒトに投与される抗体が望ましくない免疫応答を引き起こす可能性を低下させるのに役立つ。

免疫化後に内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することが可能であるトランスジェニック動物（例えば、マウス）が用いられ得る。例えば、キメラおよび生殖系列突然変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（Ｊ（Ｈ））遺伝子のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらすことが記載されている。そのような生殖系列突然変異体マウスにおけるヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジ後にヒト抗体の産生をもたらすであろう。

任意に、抗体は、他の種において生成され、ヒトにおける投与のために「ヒト化」される。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、またはそのフラグメント（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、または抗体の他の抗原結合部分配列など）である。ヒト化抗体は、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置き換えられる、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、レシピエント抗体でもインポートされたＣＤＲまたはフレームワーク配列でも見られない残基も含有し得る。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含有するであろう。ヒト化抗体は、最適には、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分も含有するであろう。

非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、同第ＥＰ５９２，１０６号、および同第ＥＰ５１９，５９６号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号および同第ＷＯ９３／１７１０５号、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５６５，３３２号、同第５，５８５，０８９号、同第５，７６６，８８６号、および同第６，４０７，２１３号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−１１２５、Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：３５３−３６０、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７−７９、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：８９５−９０４、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２、Ｓａｎｄｈｕ，１９９４，Ｇｅｎｅ １５０：４０９−１０、Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−９７３、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５、Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９、およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６）を参照されたい。

一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からそれに導入された１個以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合「インポート」残基と呼ばれ、これは典型的には、「インポート」可変ドメインに由来する。抗体ヒト化技法は一般に、抗体分子の１つ以上のポリペプチド鎖をコードするＤＮＡ配列を操作するための組み換えＤＮＡ技術の使用を伴う。ヒト化は、齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに用いることによって本質的に実施され得る。したがって、非ヒト抗体（またはそのフラグメント）のヒト化形態は、無傷ヒト可変ドメインに実質的に満たないものが、非ヒト種からの対応する配列によって置換された、キメラ抗体またはフラグメントである。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかのＣＤＲ残基および場合によってはいくつかのＦＲ残基が、齧歯類抗体における類似部位からの残基によって置換されている、ヒト抗体である。

ヒト化抗体の作製に使用される軽および重の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低減するために非常に重要であり得る。「最良適合」法に従って、齧歯類抗体の可変ドメインの配列は、既知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対してスクリーニングされる。齧歯類の配列に最も近いヒト配列は、次いで、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として受容される。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークがいくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る。

抗体は、抗原に対する高親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しながら、ヒト化されることがさらに重要である。この目標を達成するために、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の３次元モデルを使用する、親配列および様々な概念的ヒト化産物の分析のプロセスによって調製され得る。３次元免疫グロブリンモデルが一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択される候補免疫グロブリン配列の起こり得る３次元立体構造を例示および表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示の調査は、候補免疫グロブリン配列の機能化における残基の可能性のある役割の分析、すなわち、候補免疫グロブリンのその抗原に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。この方法では、ＦＲ残基は、所望の抗体の特徴、例えば、標的抗原（複数可）に対する増加した親和性が達成されるように、コンセンサス配列およびインポート配列から選択され、組み合わされ得る。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原結合に影響を及ぼすのに直接的かつ最も実質的に関与する。

ヒト、ヒト化、またはキメラ抗体誘導体は、ＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト免疫グロブリン（ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことができる。そのような抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分も含むことができる。そのような抗体の定常ドメインは、抗体の提案されている機能、特に必要とされ得るエフェクター機能に関して選択され得る。いくつかの実施形態では、そのような抗体の定常ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、またはＩｇＭドメインであるか、またはそれらを含むことができる。特定の実施形態では、特にＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプのヒトＩｇＧ定常ドメインは、ヒト化抗体誘導体が治療的使用を目的とし、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性などの抗体エフェクター機能が必要とされる場合に使用される。代替の実施形態では、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４アイソタイプは、治療的目的のためであり、抗体エフェクター機能が必要とされない場合に使用される。米国特許出願公開第２００５／００３７０００号および同第２００５／００６４５１４号に開示されるものなど、抗体エフェクター機能を改変する１つ以上のアミノ酸修飾を含むＦｃ定常ドメイン。

ヒト化抗体のフレームワークおよびＣＤＲ領域は、親配列に正確に対応する必要はなく、例えば、ドナーＣＤＲまたはコンセンサスフレームワークは、少なくとも１個の残基の置換、挿入、または欠失によって突然変異し得、これにより、その部位におけるＣＤＲまたはフレームワーク残基は、コンセンサスまたはドナー抗体のいずれにも対応しない。いくつかの実施形態では、そのような突然変異は、広範ではない。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％、より多くの場合は９０％、または９５％超が、親フレームワーク領域（ＦＲ）およびＣＤＲ配列の残基に対応するであろう。ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティング（欧州特許第ＥＰ２３９，４００号、国際公開第ＷＯ９１／０９９６７号、および米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５３０，１０１号、および同第５，５８５，０８９号）、ベニアリングまたは再表面形成（欧州特許第ＥＰ５９２，１０６号および同第ＥＰ５１９，５９６号、Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８、Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４、およびＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９−９７３）、鎖シャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号）、ならびに例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、同第５，７６６，８８６号、同第５，５８５，０８９号、国際公開第ＷＯ９３１７１０５号、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９−２５，Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，２０００、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１３：３５３−６０，Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，２０００、Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０：２６７−７９，Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−８４，Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９６、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９：８９５−９０４，Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ−５９７７ｓ，Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５５：１７１７−２２，Ｓａｎｄｈｕ，１９９４、Ｇｅｎｅ １５０：４０９−１０，Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９４、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９−７３，Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５，Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３、およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６に開示される技法が挙げられるが、これらに限定されない、当該技術分野において既知の様々な技法を使用して産生され得る。

多くの場合、フレームワーク領域内のフレームワーク残基は、ＣＤＲドナー抗体からの対応する残基で置換されて、抗原結合を変える、例えば、改善するであろう。これらのフレームワーク置換は、当該技術分野において周知の方法によって、例えば、抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲおよびフレームワーク残基の相互作用のモデリング、および特定の位置における異常なフレームワーク残基を同定するための配列比較によって同定される。（例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，米国特許第５，５８５，０８９号、米国公開第２００４／００４９０１４号および同第２００３／０２２９２０８号、米国特許第６，３５０，８６１号、同第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５８５，０８９号、および同第５，５３０，１０１号、ならびにＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３を参照）。

開示されるマウス抗ヒトＳｉｇｌｅｃ−１５抗体のヒト、キメラ、またはヒト化誘導体は、ヒトにおけるインビボ方法に使用され得る。マウス抗体または他の種の抗体は、多くの使用のために有利に用いられ得る（例えば、インビトロまたは原位置検出アッセイ、急性インビボ使用など）。そのようなヒトまたはヒト化抗体は、１つ以上の非ヒトＣＤＲにおけるアミノ酸残基置換、欠失、または付加を含むことができる。ヒト化抗体誘導体は、非誘導体ヒト化抗体と比較して、実質的に同じ結合、より強い結合、またはより弱い結合を有することができる。特定の実施形態では、ＣＤＲの１、２、３、４、または５個のアミノ酸残基が、置換、欠失、または付加（すなわち、変異）されている。完全ヒト抗体は、ヒト対象の治療処理に特に望ましい。

そのようなヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリを使用するファージ提示法を含む、当該技術分野において既知の様々な方法によって作製され得る（米国特許第４，４４４，８８７号および同第４，７１６，１１１号、ならびに国際公開第ＷＯ９８／４６６４５号、同第ＷＯ９８／５０４３３号、同第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９８／１６６５４号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、同第ＷＯ９６／３３７３５号、および同第ＷＯ９１／１０７４１を参照）。そのようなヒト抗体は、機能的内因性免疫グロブリンを発現させることができないが、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させることができる、トランスジェニックマウスを使用して産生され得る。

例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体は、ランダムに、またはマウス胚性幹細胞への相同組み換えによって導入され得る。あるいは、ヒト可変領域、定常領域、および多様性領域が、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子に加えて、マウス胚性幹細胞に導入され得る。マウス重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子は、相同組み換えによるヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入とは別にまたは同時に、非機能的な状態にされ得る。特に、Ｊ_Ｈ領域のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生を防止する。修飾された胚性幹細胞は、増殖され、胚盤胞中に微量注射され、キメラマウスを産生する。次いで、キメラマウスは、交配されて、ヒト抗体を発現させるホモ接合型子孫を産生する。トランスジェニックマウスは、選択された抗原、例えば、ポリペプチドの全てまたは一部分を用いる従来の方法を使用して免疫化される。抗原に対するモノクローナル抗体は、従来のハイブリドーマ技術を使用して免疫化トランスジェニックマウスから得られ得る（例えば、米国特許第５，９１６，７７１を参照）。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリン導入遺伝子は、Ｂ細胞分化中に再配置され、その後スイッチングおよび体細胞突然変異を受ける。したがって、そのような技法を使用して、治療的に有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、およびＩｇＥ抗体を産生することが可能である。ヒト抗体を産生するためのこの技術の概要については、Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ（１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））を参照されたい。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生するためのこの技術、ならびにそのような抗体を産生するためのプロトコルのさらなる考察について、例えば、国際公開第ＷＯ９８／２４８９３号、同第ＷＯ９６／３４０９６号、および同第ＷＯ９６／３３７３５号、ならびに米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、および同第５，９３９，５９８号（それらは、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。加えて、企業は、上記と同様の技術を使用して選択された抗原に対するヒト抗体を提供することに取り組むことができる。

ヒトアクセプターフレームワーク配列をコードするＤＮＡ配列としては、ヒト生殖系列ＶＨセグメントＶＨ１−１８およびＪＨ６、ならびにヒト生殖系列ＶＬセグメントＶＫ−Ａ２６およびＪＫ４からのＦＲセグメントが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、ＣＤＲのうちの１つ以上が、常用の組み換えＤＮＡ技法を使用してフレームワーク領域内に挿入される。フレームワーク領域は、自然発生もしくはコンセンサスフレームワーク領域、およびヒトフレームワーク領域であり得る（例えば、ヒトフレームワーク領域のリストについては、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９９８，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ Ｉｎ Ｔｈｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７８：４５７−４７９を参照）。

Ｃ．抗体配列
１．４Ｃ１２重鎖配列
一実施形態は、ハイブリドーマ４Ｃ１２から単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

下線付きの配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応する。二重下線の配列は、定常領域に対応する。破線の下線付きの配列は、リーダー配列に対応する。

核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内にあり得る。核酸は、染色体外であるか、または宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞の染色体に挿入され得る。

一実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一重下線は、リーダー配列に対応する。二重下線は、ＣＤＲに対応し、破線の下線は、定常領域に対応する。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する、リーダー配列なしの重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

二重下線は、ＣＤＲに対応し、破線の下線は、定常領域に対応する。

４Ｃ１２重鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、

である。

４Ｃ１２重鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、

である。

４Ｃ１２重鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、

である。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５による重鎖を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる重鎖を有する、および抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、および８からなる群から選択される３つの異なるＣＤＲを有する抗体を提供する。

２．４Ｃ１２軽鎖配列
別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

破線の下線は、リーダー配列を表す。一重下線は、ＣＤＲを表す。二重下線は、定常領域を表す。

核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内にあり得る。核酸は、染色体外であるか、または宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞の染色体に挿入され得る。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

下線は、リーダー配列を表す。二重下線は、ＣＤＲを表す。破線の下線は、定常領域を表す。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する、リーダー配列なしの軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

二重下線は、ＣＤＲを表す。破線の下線は、定常領域を表す。

４Ｃ１２軽鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、

である。

４Ｃ１２軽鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、

である。

４Ｃ１２軽鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、

である。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、および１４からなる群から選択される３つの異なるＣＤＲを有する抗体を提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖、またはそれらの軽鎖および重鎖の組み合わせを有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、および８からなる群から選択されるアミノ酸を有する３つの異なる重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、および１４からなる群から選択されるアミノ酸を有する３つの異なる軽鎖ＣＤＲとを有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

３．２Ｂ５重鎖配列
一実施形態は、ハイブリドーマ２Ｂ５から単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

下線付きの配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応する。二重下線の配列は、定常領域に対応する。破線の下線付きの配列は、リーダー配列に対応する。

核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内にあり得る。核酸は、染色体外であるか、または宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞の染色体に挿入され得る。

一実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一重下線は、リーダー配列に対応する。二重下線は、ＣＤＲに対応し、破線の下線は、定常領域に対応する。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する、リーダー配列なしの重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

二重下線は、ＣＤＲに対応し、破線の下線は、定常領域に対応する。

２Ｂ５重鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、

である。

２Ｂ５重鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、

である。

２Ｂ５重鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、

である。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７による重鎖を有する抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、１９、および２０からなる群から選択される３つの異なるＣＤＲを有する抗体を提供する。

４．２Ｂ５軽鎖配列
別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

破線の下線は、リーダー配列を表す。一重下線は、ＣＤＲを表す。二重下線は、定常領域を表す。

核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内にあり得る。核酸は、染色体外であるか、または宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞の染色体に挿入され得る。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

下線は、リーダー配列を表す。二重下線は、ＣＤＲを表す。破線の下線は、定常領域を表す。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する、リーダー配列なしの軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

二重下線は、ＣＤＲを表す。破線の下線は、定常領域を表す。

２Ｂ５軽鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、

である。

２Ｂ５軽鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、

である。

２Ｂ５軽鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、

である。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、１３、および２５からなる群から選択される３つの異なるＣＤＲを有する抗体を提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖、またはそれらの軽鎖および重鎖の組み合わせを有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、１９、および２０からなる群から選択されるアミノ酸を有する３つの異なる重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、１３、および２５からなる群から選択されるアミノ酸を有する３つの異なる軽鎖ＣＤＲとを有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

６．４Ｇ９重鎖配列
一実施形態は、ハイブリドーマ４Ｇ９から単離されたマウスモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

下線付きの配列は、相補性決定領域（ＣＤＲ）に対応する。二重下線の配列は、定常領域に対応する。破線の下線付きの配列は、リーダー配列に対応する。

核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内にあり得る。核酸は、染色体外であるか、または宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞の染色体に挿入され得る。

一実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一重下線は、リーダー配列に対応する。二重下線は、ＣＤＲに対応し、破線の下線は、定常領域に対応する。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する、リーダー配列なしの重鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

二重下線は、ＣＤＲに対応し、破線の下線は、定常領域に対応する。

４Ｇ９重鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、

である。

４Ｇ９重鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、

である。

４Ｇ９重鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、

である。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８による重鎖を有する４Ｇ９抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる重鎖を有する、４Ｇ９抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、および３１からなる群から選択される３つの異なるＣＤＲを有する４Ｇ９抗体を提供する。

７．４Ｇ９軽鎖配列
別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

破線の下線は、リーダー配列を表す。一重下線は、ＣＤＲを表す。二重下線は、定常領域を表す。

核酸は、ベクター、例えば、発現ベクター内にあり得る。核酸は、染色体外であるか、または宿主細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞の染色体に挿入され得る。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

下線は、リーダー配列を表す。二重下線は、ＣＤＲを表す。破線の下線は、定常領域を表す。

別の実施形態は、以下と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸を有する、リーダー配列なしの軽鎖を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

二重下線は、ＣＤＲを表す。破線の下線は、定常領域を表す。

４Ｇ９軽鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列は、

である。

４Ｇ９軽鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列は、

である。

４Ｇ９軽鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列は、

である。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を有する、４Ｇ９抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する核酸によってコードされる軽鎖を有する、４Ｇ９抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、３６、および３７からなる群から選択される３つの異なるＣＤＲを有する４Ｇ９抗体を提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖、またはそれらの軽鎖および重鎖の組み合わせを有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、および３１からなる群から選択されるアミノ酸を有する３つの異なる重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、３６、および３７からなる群から選択されるアミノ酸を有する３つの異なる軽鎖ＣＤＲとを有する、４Ｇ９抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。

Ｄ．ＰＤ−１活性化エピトープ
エピトープ特異的ＰＤ−１結合部分が、本明細書に開示される。一実施形態では、開示される結合部分は、ＰＤ−１に免疫特異的に結合し、ＰＤ−１媒介シグナル伝達を活性化する。

開示されるＰＤ−１エピトープは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のアミノ酸９６〜１１０によって形成され、以下のアミノ酸配列を有する。

１．抗体
一実施形態は、免疫細胞の表面上のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に免疫特異的に結合し、免疫細胞を活性化する、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを提供する。一実施形態では、好ましい免疫細胞は、Ｔ細胞、より具体的にはＣＤ８^＋Ｔ細胞である。別の実施形態では、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、免疫細胞の表面上のＰＤ−１のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に免疫特異的に結合し、かつ、免疫細胞を活性化するための活性化シグナルをＰＤ−１を通して促進または誘発する。

エピトープ特異的抗体は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、マウス抗体、キメラ抗体、またはそれらのフラグメントであり得る。例示的な抗体およびそれらの産生方法は、以下で考察される。

２．融合タンパク質
一実施形態では、エピトープ特異的ＰＤ−１結合部分は、融合タンパク質である。上記の開示されるＰＤ−１エピトープ抗体またはエピトープ結合フラグメントのうちの１つ以上の全てまたは一部は、他のポリペプチドに結合されて融合タンパク質を形成することができる。融合ポリペプチドは、直接、または第２のポリペプチドに融合されたリンカーペプチド配列を介して、第２のポリペプチドに融合された開示されるＰＤ−１エピトープ抗体またはエピトープ結合フラグメントのうちの１つ以上の全てまたは一部を含む、第１の融合パートナーを有する。融合タンパク質は、２つ以上の融合タンパク質を二量体化または多量体化するように機能するドメインを任意に含有する。ペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、別個のドメインであり得るか、あるいは融合タンパク質の他のドメイン（第１のポリペプチドまたは第２のポリペプチド）のうちの１つの中に含有され得るかのいずれかである。同様に、融合タンパク質を二量体化または多量体化するように機能するドメインは、別個のドメインであり得るか、あるいは融合タンパク質の他のドメイン（第１のポリペプチド、第２のポリペプチド、またはペプチド／ポリペプチドリンカードメイン）のうちの１つの中に含有され得るかのいずれかである。一実施形態では、二量体化／多量体化ドメインおよびペプチド／ポリペプチドリンカードメインは、同じである。

本明細書に開示される融合タンパク質は、下記式Ｉのものである：
Ｎ−Ｒ_１−Ｒ_２−Ｒ_３−Ｃ
式中、「Ｎ」は、融合タンパク質のＮ末端を表し、「Ｃ」は、融合タンパク質のＣ末端を表し、「Ｒ_１」は、開示されるＰＤ−１エピトープ抗体もしくはエピトープ結合フラグメント、またはそれらの機能的変異体もしくはフラグメントの全てまたは一部であり、「Ｒ_２」は、任意のペプチド／ポリペプチドリンカードメインであり、「Ｒ_３」は、第２のポリペプチドである。あるいは、Ｒ_３が、開示されるＰＤ−１エピトープ抗体もしくはエピトープ結合フラグメント、またはそれらの機能的変異体もしくはフラグメントの全てまたは一部であり、Ｒ_１が、第２のポリペプチドである。

二量体化または多量体化は、二量体化または多量体化ドメインを通して２つ以上の融合タンパク質の間または中で発生し得る。あるいは、融合タンパク質の二量体化または多量体化は、化学架橋によって発生し得る。形成される二量体または多量体は、ホモ二量体／ホモ多量体またはヘテロ二量体／ヘテロ多量体であり得る。

３．アプタマー
いくつかの実施形態では、エピトープ特異的結合部分は、アプタマーである。アプタマーは、好ましくは特異的な方法で標的分子と相互作用する分子である。一実施形態では、アプタマーは、免疫細胞の表面上のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に結合し、かつ、免疫細胞を活性化するための活性化シグナルをＰＤ−１を通して促進または誘発する。典型的には、アプタマーは、ステムループまたはＧカルテットなどの定義された二次および三次構造に折り畳まれる１５〜５０塩基長に及ぶ小さい核酸である。アプタマーは、タンパク質、細胞、小有機分子、またはペプチドに結合することができる。アプタマーは、ＡＴＰおよびテオフィリンなどの小分子、ならびに逆転写酵素およびトロンビンなどの大分子に結合することができる。アプタマーは、１０−１２Ｍ未満の標的分子からのＫｄで非常に強固に結合することができる。アプタマーは、１０−６、１０−８、１０−１０、または１０−１２未満のＫｄで標的分子に結合することが好ましい。アプタマーは、特異性が非常に高い標的分子に結合することができる。例えば、標的分子と、分子上の単一の位置のみで異なる別の分子との間の結合親和性の１０，０００倍を超える差を有するアプタマーが単離されている。アプタマーは、バックグラウンド結合分子に対するＫｄよりも少なくとも１０、１００、１０００、１０，０００、または１００，０００倍低い、標的分子に対するＫｄを有することが好ましい。例えば、ポリペプチドの比較を行う場合、バックグラウンド分子は、異なるポリペプチドであることが好ましい。様々な異なる標的分子に結合するアプタマーの作製および使用方法の代表的な例は、当該技術分野において既知である。

４．小分子
いくつかの実施形態では、エピトープ特異的結合部分は、小分子であり得る。「小分子」という用語は一般に、約１００ダルトン超および約２，５００ダルトン未満、好ましくは１００〜２０００、より好ましくは約１００〜約１２５０、より好ましくは約１００〜約１０００、より好ましくは約１００〜約７５０、より好ましくは約２００〜約５００ダルトンの分子量を有する小有機化合物を指す。ＰＤ−１の活性化エピトープの小分子アゴニストは、常用のスクリーニング方法を使用して同定され得る。いくつかの実施形態では、スクリーニングアッセイは、試験化合物の大型ライブラリのランダムスクリーニングを含むことができる。アッセイは、ＰＤ−１誘発免疫応答またはＴ細胞の活性化の決定を含むことができる。

Ｅ．医薬組成物
開示される抗体およびその抗原結合フラグメントを含む医薬組成物が提供される。抗体およびその抗原結合フラグメントを含有する医薬組成物は、非経口（筋肉内、腹腔内、静脈内（ＩＶ）、または皮下注射）による投与のためであり得る。

いくつかのインビボアプローチでは、本明細書に開示される組成物は、対象に治療有効量で投与される。本明細書で使用される場合、「有効量」または「治療有効量」という用語は、治療されている障害の１つ以上の症状を治療、阻害、もしくは軽減するか、またはそうでなければ所望の薬理学的および／もしくは生理学的効果を提供するのに十分な投与量を意味する。正確な投与量は、対象依存変数（例えば、年齢、免疫系の健康状態など）、疾患、および行われている治療などの様々な要因に従って変動するであろう。

開示される抗体およびその抗原結合フラグメントについて、さらなる研究が行われるとき、様々な患者における様々な状態の治療に適した投与量レベルに関する情報が出現し、当業者は、レシピエントの治療の背景、年齢、および一般的な健康状態を考慮して、適切な投与を確認することが可能になるであろう。選択される投与量は、所望の治療効果、投与経路、および所望の治療期間に依存する。開示される抗体およびその抗原結合フラグメントについて、一般に、毎日、体重の０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇの投与量レベルが哺乳動物に投与される。一般に、静脈内注射または注入について、投与量はより低い場合がある。

ある特定の実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントは、例えば、直接的な治療される部位への注射によって、局所投与される。典型的には、注射は、全身投与によって達成され得るものよりも大きい増加した局在化濃度の免疫調節剤組成物をもたらす。免疫調節剤組成物は、治療される部位外でのポリペプチドの受動拡散を低減することによって、ポリペプチド組成物の局在化濃度の増加を補助するために、上記のようなマトリクスと組み合わされ得る。

１．非経口投与のための製剤
いくつかの実施形態では、開示される抗体および抗原結合フラグメントを含有する組成物は、非経口注射によって、水溶液中で投与される。製剤はまた、懸濁剤または乳剤の形態であり得る。一般に、有効量の抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、任意に薬学的に許容される希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、補助剤、および／または担体を含む、医薬組成物が提供される。そのような組成物は、任意に下記：希釈剤、滅菌水、様々な緩衝剤含有量（例えば、トリス−ＨＣｌ、アセテート、ホスフェート）、ｐＨ、およびイオン強度の緩衝食塩水；ならびに添加剤、例えば、洗浄剤および可溶化剤（例えば、ＴＷＥＥＮ ２０（ポリソルベート−２０）、ＴＷＥＥＮ ８０（ポリソルベート−８０））、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、ならびに防腐剤（例えば、チメルソール、ベンジルアルコール）およびバルク化物質（例えば、ラクトース、マンニトール）について１つ以上を含む。非水性溶媒またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油およびコーン油などの植物油、ゼラチン、ならびにエチルオレエートなどの注射可能な有機エステルである。製剤は、凍結乾燥され、使用直前に再溶解／再懸濁され得る。製剤は、例えば、細菌保持フィルタを通した濾過によって、滅菌剤を組成物に組み込むことによって、組成物を照射することによって、または組成物を加熱することによって、滅菌され得る。

２．経口投与のための製剤
いくつかの実施形態では、抗体組成物は、経口送達のために製剤化される。抗体の経口剤形は、タンパク質分解に抵抗し、感染症の治療のために胃腸管内に局所的により大きい割合の免疫反応性抗体を送達することができるか、または全身状態の治療もしくは予防のために抗体の吸収を可能にすることができる（Ｒｅｉｌｌｙ，ＲＭ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．，３２（４）：３１３−２３（１９９７）、Ｖｉｃｔｏｒｉａ Ｓ Ｊａｓｉｏｎ ａｎｄ Ｂｒｕｃｅ Ｐ Ｂｕｒｎｅｔｔ，Ｎｕｔｒ Ｊ．；１４：２２（２０１５）、およびＰｈｉｌｉｐｐａｒｔ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ（Ｓｔｕｔｔｇ）６６（０３）：１１３−１２０（２０１６））。

経口固体剤形は、一般に、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．１９９０（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ Ｐａ．１８０４２）ａｔ Ｃｈａｐｔｅｒ ８９に記載されている。固体剤形には、錠剤、カプセル剤、丸剤、トローチ剤もしくはロゼンジ剤、カシェ剤、ペレット剤、散剤、または顆粒剤、あるいは材料をポリ乳酸、ポリグリコール酸などのポリマー化合物の微粒子状調製物に、またはリポソームに組み込むものが含まれる。そのような組成物は、開示されるものの物理状態、安定性、インビボ放出率、およびインビボクリアランス率に影響を及ぼし得る。例えば、本明細書に参照により組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．１８０４２）ｐａｇｅｓ １４３５−１７１２を参照されたい。組成物は、液体形態で調製され得るか、または乾燥粉末（例えば、凍結乾燥）形態であり得る。組成物を製剤化するために、リポソームまたはプロテイノイドカプセル化が使用され得る。リポソームカプセル化が使用され得、リポソームは、様々なポリマーで誘導体化され得る（例えば、米国特許第５，０１３，５５６号）。また、Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｋ．Ｉｎ：Ｍｏｄｅｒｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ ａｎｄ Ｃ．Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ Ｃｈａｐｔｅｒ １０，１９７９も参照されたい。一般に、製剤は、ペプチド（またはその化学修飾形態）および胃環境においてペプチドを保護し、腸において生物学的活性材料を放出する不活性成分を含むであろう。

抗体およびその抗原結合フラグメントは、誘導体の経口送達が有効であるように化学修飾され得る。一般に、企図される化学修飾は、少なくとも１つの部分の構成成分分子自体への付着であり、部分は、胃もしくは腸からの血流への取り込み、または直接的な腸粘膜への取り込みを可能にする。また望ましいものは、構成成分（複数可）の全体的な安定性の増加および体内の循環時間の増加である。ＰＥＧ化は、薬学的な使用のための例示的な化学修飾である。使用され得る他の部分には、プロピレングリコール、エチレングリコールおよびプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリプロリン、ポリ−１，３−ジオキソラン、およびポリ−１，３，６−チオキソカンが含まれる［例えば、Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ ａｎｄ Ｄａｖｉｓ（１９８１）“Ｓｏｌｕｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ Ａｄｄｕｃｔｓ，”ｉｎ Ｅｎｚｙｍｅｓ ａｓ Ｄｒｕｇｓ．Ｈｏｃｅｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｒｏｂｅｒｔｓ，ｅｄｓ．（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．）ｐｐ．３６７−３８３、およびＮｅｗｍａｒｋ，ｅｔ ａｌ．（１９８２）Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−１８９を参照されたい］。

別の実施形態は、不活性希釈剤；湿潤剤、乳化剤、および懸濁剤などの補助剤；ならびに甘味剤、香味剤、および芳香剤を含む他の構成成分を含有し得る、薬学的に許容される乳剤、液剤、懸濁剤、およびシロップ剤を含む、経口投与のための液体剤形を提供する。

経口製剤について、放出の位置は、胃、小腸（十二指腸、空腸、もしくは回腸）、または大腸であり得る。いくつかの実施形態では、放出は、薬剤（もしくは誘導体）の保護によって、または腸内などの胃環境を超えた薬剤（もしくは誘導体）の放出によってのいずれかで、胃環境の有害作用を回避するであろう。完全な胃の抵抗性を確実にするために、少なくともｐＨ５．０まで不浸透性のコーティングは必須である。腸溶コーティングとして使用されるより一般的な不活性成分の例は、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ ５０、ＨＰＭＣＰ ５５、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ３０Ｄ（商標）、Ａｑｕａｔｅｒｉｃ（商標）、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ（商標）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｓ（商標）、およびＳｈｅｌｌａｃ（商標）である。これらのコーティングは、混合フィルムとして使用され得る。

３．制御送達ポリマーマトリクス
本明細書に開示される抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、制御放出製剤で投与され得る。抗体およびその抗原結合フラグメントは、拡散機構または浸出機構のいずれか、例えば、ガムによる放出を可能にする不活性マトリクスに組み込まれ得る。ゆっくり変性するマトリクスも製剤に組み込まれ得る。制御放出の別の形態は、Ｏｒｏｓ治療システム（Ａｌｚａ Ｃｏｒｐ．）に基づき、すなわち、抗体またはその抗原結合フラグメントは、水を入れて浸透効果によって薬物を単一の小開口を通して押し出すことを可能にする半透膜に封入される。

制御放出ポリマーデバイスは、ポリマーデバイス（ロッド、シリンダー、フィルム、ディスク）の埋め込みまたは注射（マイクロ粒子）後の全身長期放出のために作製され得る。マトリクスは、薬剤が固体ポリマーマトリクスまたはマイクロカプセル内で分散される場合、コアがポリマーシェルとは異なる材料を有し、ペプチドがコアにおいて分散または懸濁され、これが本質的に液体または固体であり得る場合、マイクロスフェアなどのマイクロ粒子の形態であり得る。本明細書で具体的に定義されない限り、マイクロ粒子、マイクロスフェア、およびマイクロカプセルは、互換的に使用される。あるいは、ポリマーは、数ナノメートル〜４センチメートルまでの範囲の薄いスラブもしくはフィルム、粉砕もしくは他の標準的な技法によって製造される粉末、またはハイドロゲルなどのゲルとしても鋳造され得る。

非生分解性または生分解性のいずれかのマトリクスは、融合ポリペプチドまたは融合ポリペプチドをコードする核酸の送達に使用され得るが、いくつかの実施形態では、生分解性マトリクスが好ましい。これらは天然または合成ポリマーであり得るが、いくつかの実施形態は、分解および放出プロファイルのより良好な特徴付けによって、合成ポリマーが好ましい。ポリマーは、放出が望ましい期間に基づいて選択される。場合によっては、線形放出が最も有用であり得るが、他では、パルス放出または「バルク放出」がより有効な結果を提供し得る。ポリマーは、（典型的には最大約９０重量％の水を吸収する）ハイドロゲルの形態であり得、任意に多価イオンまたはポリマーと架橋され得る。

マトリクスは、溶媒蒸発、スプレー乾燥、溶媒抽出、および当業者に既知の他の方法によって形成され得る。生体分解可能なマイクロスフェアは、例えば、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ａｎｄ Ｌａｎｇｅｒ，Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，５：１３−２２（１９８７）、Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，６：２７５−２８３（１９８７）、およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．，３５：７５５−７７４（１９８８）によって記載されるように、薬物送達のためのマイクロスフェアを作製するために開発された方法のうちのいずれかを使用して調製され得る。

デバイスは、埋め込みまたは注射の範囲を治療するための局所放出のために製剤化され得、これは典型的には、全身の治療、または全身送達のための投与量よりもはるかに低い投与量を送達するであろう。これらは、筋肉、脂肪内へと皮下に埋め込まれ得るかもしくは注射され得るか、または嚥下され得る。

ＩＩＩ．製造方法
Ａ．抗体の作製方法
開示される抗体は、細胞培養、ファージ、またはウシ、ウサギ、ヤギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ヒツジ、イヌ、ネコ、サル、チンパンジー、類人猿が挙げられるが、これらに限定されない様々な動物において生成され得る。一実施形態では、様々な動物は、ヒトまたはヒト化抗体を産生するように遺伝子操作されたトランスジェニック動物であり得る。したがって、一実施形態では、抗体は、哺乳動物抗体である。ファージ技法は、初期抗体を単離するために、または改変された特異性もしくは親和性特徴を有する変異体を生成するために使用され得る。そのような技法は、常用であり、当該技術分野において周知である。一実施形態では、抗体は、当該技術分野において既知の組み換え手段によって産生される。例えば、組み換え抗体は、抗体をコードするＤＮＡ配列を含むベクターで宿主細胞を形質転換することによって産生され得る。１つ以上のベクターが、宿主細胞中に少なくとも１つのＶＬおよび１つのＶＨ領域を発現させるＤＮＡ配列を形質転換するために使用される。抗体生成および産生の組み換え手段の例示的な記載としては、Ｄｅｌｖｅｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ：Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（Ｗｉｌｅｙ，１９９７）、Ｓｈｅｐｈａｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９３）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、最新版）が挙げられる。

開示される抗体は、所望の機能を媒介する際の抗体のより大きい有効性を増加させるように、組み換え手段によって修飾され得る。したがって、抗体が組み換え手段を使用して置換によって修飾され得ることは、本発明の範囲内である。典型的には、置換は、保存的置換であるであろう。例えば、抗体の定常領域内の少なくとも１つのアミノ酸は、異なる残基で置き換えられ得る。例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、米国特許第６，１９４，５５１号、出願第ＷＯ９９５８５７２号、およびＡｎｇａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３０：１０５−０８（１９９３）を参照されたい。アミノ酸における修飾には、アミノ酸の欠失、付加、および置換が含まれる。場合によっては、そのような変化は、望ましくない活性、例えば、補体依存性細胞傷害を低減するために行われる。しばしば、抗体は、検出可能なシグナルを提供する物質に共有結合的または非共有結合的のいずれかで結合することによって標識される。幅広い標識および共役技法が既知であり、科学文献および特許文献の両方で広く報告されている。これらの抗体は、タンパク質、ポリペプチドへの結合についてスクリーニングされ得る。例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）を参照されたい。

例えば、所望の生物活性を有する好適な抗体は、増殖、移動、付着、軟寒天成長、血管新生、細胞間コミュニケーション、アポトーシス、輸送、シグナル伝達が挙げられるが、これらに限定されないインビトロアッセイ、および腫瘍成長の阻害などのインビボアッセイを使用して同定され得る。本明細書に提供される抗体は、診断用途にも有用であり得る。捕捉または非中和抗体として、それらは、抗原の受容体結合または生物活性を阻害することなく特異的抗原に結合する能力についてスクリーニングされ得る。中和抗体として、抗体は、競合結合アッセイに有用であり得る。

開示される組成物および方法に使用され得る抗体は、任意のクラスの免疫グロブリン全体（すなわち、無傷抗体）、そのフラグメント、および抗体の少なくとも抗原結合可変ドメインを含有する合成タンパク質を含む。可変ドメインは、抗体によって配列が異なり、各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合および特異性に使用される。しかしながら、変動性は通常、抗体の可変ドメインを通して均一に分布していない。それは典型的には、軽鎖および重鎖可変ドメインの両方における相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインは各々、主として３つのＣＤＲによって接続されたベータ−シート構造を取る４つのＦＲ領域を含み、これは、ベータ−シート構造を接続し、場合によってはその一部を形成するループを形成する。各鎖におけるＣＤＲは、ＦＲ領域によって一緒にごく近接して保持され、他の鎖からＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。

生物活性を有する抗体のフラグメントもまた開示される。フラグメントは、他の配列に付着しているかどうかにかかわらず、特定の領域または特定のアミノ酸残基の挿入、欠失、置換、または他の選択された修飾を含み、ただし、そのフラグメントの活性が、非修飾抗体または抗体フラグメントと比較して有意に改変または低下していないことを条件とする。

技法は、開示される抗体およびその抗原結合フラグメントに基づいた一本鎖抗体の産生にも適応され得る。一本鎖抗体の産生のための方法は、当業者に周知である。一本鎖抗体は、短ペプチドリンカーを使用して重鎖および軽鎖の可変ドメインを一緒に融合し、それにより単一分子上で抗原結合部位を再構成することによって作られ得る。一方の可変ドメインのＣ末端がもう一方の可変ドメインのＮ末端に１５〜２５個のアミノ酸のペプチドまたはリンカーによってテザリングされる一本鎖抗体可変フラグメント（ｓｃＦｖｓ）は、抗原結合または結合の特異性を著しく破壊することなく開発されている。リンカーは、重鎖および軽鎖がそれらの適切な立体構造配向において一緒に結合することを可能にするように選択される。

一実施形態は、２つのｓｃＦｖを連結することによって操作され得る二価一本鎖可変フラグメント（ジ−ｓｃＦｖ）を提供する。これは、２つのＶＨおよび２つのＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖を産生し、タンデムｓｃＦｖをもたらすことによって行われ得る。ＳｃＦｖはまた、２つの可変領域が一緒に折り畳まれるには短すぎるリンカーペプチド（約５個のアミノ酸）を用いて設計され得、ｓｃＦｖを二量体化させる。このタイプは、ダイアボディとして既知である。ダイアボディは、対応するｓｃＦｖより最大４０倍低い解離定数を有することが示されており、それらがそれらの標的に対してもはるかに高い親和性を有することを意味する。さらに短いリンカー（１または２個のアミノ酸）は、三量体（トリアボディまたはトリボディ）の形成をもたらす。テトラボディもまた産生されている。それらは、それらの標的に対してダイアボディよりもさらに高い親和性を示す。

別の実施形態は、実質的に均質な抗体の集団から得られるモノクローナル抗体を提供し、すなわち、集団内の個々の抗体は、抗体分子の小さいサブセット内に存在し得る考えられる自然発生突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種由来の、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一であるか、またはそれに相同である一方で、その鎖（複数可）の残りの部分が、別の種由来の抗体、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体、ならびにそのような抗体のフラグメントにおける対応する配列と同一であるか、またはそれに相同である、「キメラ」抗体を含む（それらが所望の拮抗活性を示す限り）。

モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を産生する任意の手順を使用して作製され得る。ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適切な宿主動物が典型的には、免疫化剤で免疫化されて、免疫化剤に特異的に結合する抗体を産生するか、または産生することが可能であるリンパ球を誘導する。あるいは、リンパ球は、インビトロで免疫化され得る。

開示される抗体はまた、組み換えＤＮＡ法によって作製され得る。開示される抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能であるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離および配列され得る。抗体または活性抗体フラグメントのライブラリもまた、ファージ提示技法を使用して生成およびスクリーニングされ得る。

タンパク質化学を使用した抗体の作製方法もまた、当該技術分野において既知である。抗体を含むタンパク質を産生する一方法は、タンパク質化学技法によって２つ以上のペプチドまたはポリペプチドを一緒に連結することである。例えば、ペプチドまたはポリペプチドは、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメチルオキシカルボニル）またはＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）化学のいずれかを使用して、現在利用可能な実験設備を使用して化学的に合成され得る。（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）。当業者は、抗体に対応するペプチドまたはポリペプチドが、例えば、標準的な化学反応によって合成され得ることを容易に理解することができる。例えば、ペプチドまたはポリペプチドは、合成され得、合成樹脂から開裂されず、一方、抗体のもう一方のフラグメントは、合成され、その後に樹脂から開裂され、それによりもう一方のフラグメント上では機能的に遮断されている末端基を曝露することができる。ペプチド縮合反応によって、これらの２つのフラグメントは、それらのカルボキシル末端およびアミノ末端のそれぞれにおけるペプチド結合を介して共有結合されて、抗体またはそのフラグメントを形成することができる。あるいは、ペプチドまたはポリペプチドは独立して、上記のようにインビボで合成される。いったん単離されると、これらの独立したペプチドまたはポリペプチドは連結されて、同様のペプチド縮合反応を介して抗体またはその抗原結合フラグメントを形成し得る。

例えば、クローンまたは合成ペプチドセグメントの酵素的ライゲーションは、比較的短いペプチドフラグメントが結合されて、より大きいペプチドフラグメント、ポリペプチド、または全タンパク質ドメインを産生することを可能にする。あるいは、より短いペプチドフラグメントから大きいペプチドまたはポリペプチドを合成的に構築するために、合成ペプチドのネイティブケミカルライゲーションが利用され得る。この方法は、２段階化学反応からなる。第１のステップは、非保護合成ペプチド−アルファ−チオエステルと、アミノ末端Ｃｙｓ残基を含有する別の非保護ペプチドセグメントとを化学選択的に反応させて、初期共有結合生成物としてチオエステル連結中間体を得ることである。反応条件の変更なく、この中間体は、自発的で迅速な分子内反応を受けて、ライゲーション部位において天然ペプチド結合を形成する。

Ｂ．単離核酸分子の産生方法
一実施形態は、開示される抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸を提供する。核酸は、抗体全体、またはその抗原結合フラグメント、またはその軽鎖、重鎖、組み合わせ、またはそのＣＤＲをコードすることができる。

単離核酸分子は、一般的な分子クローニングおよび化学核酸合成技法が挙げられるが、これらに限定されない標準的な技法によって産生され得る。例えば、変異体ポリペプチドをコードする単離核酸を得るために、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技法が使用され得る。ＰＣＲは、標的核酸が酵素的に増幅される技法である。典型的には、目的の領域の末端またはそれを越えた領域からの配列情報が、増幅されるテンプレートの反対側の鎖と配列が同一であるオリゴヌクレオチドプライマーを設計するために用いられ得る。ＰＣＲは、総ゲノムＤＮＡまたは総細胞ＲＮＡからの配列を含む、ＤＮＡならびにＲＮＡからの特異的配列を増幅するために使用され得る。プライマーは典型的には、１４〜４０ヌクレオチド長であるが、１０ヌクレオチド〜数百ヌクレオチド長に及ぶことができる。一般のＰＣＲ技法は、例えば、ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｅｄ．ｂｙ Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈ ａｎｄ Ｄｖｅｋｓｌｅｒ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９５に記載されている。ＲＮＡをテンプレート源として使用する場合、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）鎖を合成するために、逆転写酵素が使用され得る。リガーゼ連鎖反応、鎖置換増幅、自家持続配列複製、または核酸配列ベースの増幅もまた、単離核酸を得るために使用され得る。例えば、Ｌｅｗｉｓ（１９９２）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｎｅｗｓ １２：１、Ｇｕａｔｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：１８７４−１８７８、およびＷｅｉｓｓ（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１２９２−１２９３を参照されたい。

単離核酸は、単一の核酸分子として、または一連のオリゴヌクレオチドとしてのいずれかで化学的に合成され得る（例えば、３’→５’方向への自動化ＤＮＡ合成のためのホスホロアミダイト技術を使用して）。例えば、所望の配列を含有する長いオリゴヌクレオチド（例えば、１００ヌクレオチド超）の１つ以上の対が合成され得、各対は、このオリゴヌクレオチド対がアニールされる場合に二重鎖が形成されるように、相補性の短いセグメント（例えば、約１５ヌクレオチド）を含有する。ＤＮＡポリメラーゼが使用されて、オリゴヌクレオチドを伸長させて、オリゴヌクレオチド対当たり単一の二本鎖核酸分子をもたらすことができ、それは次いで、ベクターにライゲーションされ得る。単離核酸はまた、突然変異誘発によって得られ得る。タンパク質をコードする核酸は、ＰＣＲを介したオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発および／または部位特異的突然変異誘発を含む、標準的技法を使用して変異され得る。Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｃｈａｐｔｅｒ ８，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ，１９９２を参照されたい。

ＩＶ．使用方法
開示される抗体およびその抗原結合フラグメントは、免疫応答の調節を、それを必要としている対象において行うために使用され得る。一実施形態は、第２の治療剤を任意に含めて、開示される抗体およびその抗原フラグメントを投与することによって、ＰＤ−１を発現する免疫細胞、例えばＴ細胞を活性化して、ＰＤ−１を発現する免疫細胞を増殖させ、その生物学的活性を増強する方法を提供する。

Ａ．免疫応答刺激
１．治療戦略
対象における免疫応答を誘発または増強する方法が提供される。典型的には、方法は、ＰＤ−１に免疫特異的に結合し、かつ、免疫細胞を活性化するための刺激または活性化シグナルをＰＤ−１を通して誘発、促進、または増強するために、対象に、有効量の開示される抗体およびその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を投与する工程を含む。免疫応答は、例えば、免疫細胞、Ｔ細胞増殖によるＴ細胞活性化、サイトカインの分泌を誘発、促進、または増強し得る。開示される抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｔ細胞枯渇および／またはＴ細胞アネルギーを克服するために有効量で、それを必要としている対象に投与され得る。Ｔ細胞枯渇またはＴ細胞アネルギーの克服は、既知の技法を使用してＴ細胞機能を測定することによって決定され得る。

方法は、刺激免疫応答を誘発、促進、または増強するために、インビボまたはエクスビボで使用され得る。

いくつかの実施形態では、抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗体またはその抗原結合フラグメントをコードする核酸は、対象に直接投与される。いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、エクスビボで細胞（例えば、免疫細胞）と接触させられ、処理細胞は、対象に投与される（例えば、養子移入）。抗体またはその抗原結合フラグメントは、より強固な免疫応答が可能になることを可能にすることができる。開示される組成物は、免疫細胞上のＰＤ−１を通して活性化シグナルを引き起こし、Ｔ細胞を伴う免疫応答を刺激または増強するために有用である。

２．治療される対象
ａ．がんの治療
開示される抗体およびその組成物ならびに方法は、がんを治療するために使用され得る。概して、これら作用物質は、ＰＤ−１を通して活性化シグナルを誘発、促進、または増強する量の開示される抗体またはその抗原結合フラグメントを対象に投与することによって、対象におけるがんに対する免疫応答を刺激または増強するために使用される。方法は、がんの１つ以上の症状を低減することができる。

開示される抗体またはそのフラグメントによって活性化される免疫細胞は、対象における細胞を死滅させ、腫瘍負荷を低減することができる。「がん細胞」という用語は、前悪性および悪性の両方のがん細胞を包含するよう意図される。いくつかの実施形態では、がんは、局所にとどまっている良性腫瘍を指す。他の実施形態では、がんは、隣接する身体構造に侵入し、破壊し、遠位部位に広がっている悪性腫瘍を指す。さらに他の実施形態では、がんは、特定のがん抗原に関連する（例えば、汎がん抗原（ＫＳ １／４）、卵巣がん抗原（ＣＡ１２５）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＨＥＲ２／ｎｅｕなど）。

本明細書に開示される方法および抗体組成物は、以下が挙げられる（が、これらに限定されない）様々ながんおよび他の異常増殖疾患の治療または予防に有用である：膀胱、乳房、結腸、腎臓、肝臓、肺、卵巣、膵臓、胃、頸部、甲状腺、および皮膚を含むがん；扁平上皮細胞がんを含む；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫を含む、リンパ球系列の造血器腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病および前骨髄球性白血病を含む骨髄細胞系列の造血器腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉由来の腫瘍；悪性黒色腫、精上皮腫、奇形癌腫、神経芽腫、および神経膠腫を含む他の腫瘍；星状細胞腫、神経芽腫、神経膠腫、および神経鞘腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；繊維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含む間葉由来の腫瘍；ならびに悪性黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、精上皮腫、甲状腺濾胞がん、および奇形癌腫を含む他の腫瘍。

アポトーシスの異常によって引き起こされるがんもまた、開示される方法および組成物によって治療され得る。そのようながんとしては、濾胞性リンパ腫、ｐ５３突然変異を伴うがん、乳房、前立腺および卵巣のホルモン依存性腫瘍、ならびに家族性腺腫性ポリポージスなどの前がん病変、ならびに骨髄異形成症候群が挙げられ得るが、これらに限定されない。特定の実施形態では、悪性腫瘍もしくは増殖異常変化（異形成および形成異常など）、または過剰増殖性障害が、本方法および組成物によって、卵巣、膀胱、乳房、結腸、肺、皮膚、膵臓、または子宮において治療または予防される。他の特定の実施形態では、肉腫、悪性黒色腫、または白血病が、本方法および組成物によって治療または予防される。

本明細書に開示される方法および組成物によって治療または予防され得る特定のがんおよび関連障害としては、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、例えば、骨髄芽球性、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、赤白血病の白血病、および骨髄異形成症候群、慢性骨髄性（顆粒性）白血病、慢性リンパ性白血病、有毛細胞性白血病などであるがこれらに限定されない慢性白血病が挙げられるが、これらに限定されない白血病；真性多血症；ホジキンまたは非ホジキンリンパ腫（例えば、びまん性未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陰性、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；びまん性未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性、大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）；未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）陽性、ＡＬＫ＋未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ）などであるがこれらに限定されないリンパ腫）；くすぶり型多発性骨髄腫、非分泌性骨髄腫、骨硬化性骨髄腫、形質細胞白血病、孤立性形質細胞腫および髄外性形質細胞腫などであるがこれらに限定されない多発性骨髄腫；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症；良性単クローン性ガンマグロブリン血症；重鎖病；骨肉腫（ｂｏｎｅ ｓａｒｃｏｍａ）、骨肉腫（ｏｓｔｅｏｓａｒｃｏｍａ）、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性骨巨細胞腫、骨線維肉腫、脊索腫、骨膜肉腫、軟部組織肉腫、管肉腫（血管肉腫）、繊維肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ肉腫、神経鞘腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫などであるがこれらに限定されない骨および結合組織肉腫；神経膠腫、星状細胞腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、希突起神経膠腫、非神経膠腫瘍、聴神経腫、頭蓋咽頭腫、髄芽腫、髄膜腫、松果体細胞腫、松果体芽腫、原発性脳リンパ腫などであるがこれらに限定されない脳腫瘍；腺がん、小葉（小細胞）がん、管内がん、髄様乳がん、粘液性乳がん、管状乳がん、乳頭状乳がん、パジェット病、および炎症性乳がんなどであるがこれらに限定されない乳がん；褐色細胞腫および副腎皮質がんが挙げられるが、これらに限定されない副腎がん；乳頭状または濾胞性甲状腺がん、髄様甲状腺がん、および未分化甲状腺がんなどであるがこれらに限定されない甲状腺がん；インスリノーマ、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、ビポーマ、ソマトスタチン分泌腫瘍、およびカルチノイドまたは膵島細胞腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない膵がん；クッシング病、プロラクチン分泌性腫瘍、先端巨大症、および尿崩症が挙げられるが、これらに限定されない下垂体がん；虹彩黒色腫、脈絡膜黒色腫、および線毛体黒色腫などの眼内黒色腫、ならびに網膜芽細胞腫が挙げられるが、これらに限定されない眼がん；扁平上皮がん、腺がん、および悪性黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない膣がん；扁平上皮がん、悪性黒色腫、腺がん、基底細胞がん、肉腫、およびパジェット病が挙げられるが、これらに限定されない外陰がん；扁平上皮がんおよび腺がんが挙げられるが、これらに限定されない子宮頸がん；子宮内膜がんおよび子宮肉腫が挙げられるが、これらに限定されない子宮がん；卵巣上皮がん、境界腫瘍、胚細胞腫瘍、および間質腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない卵巣がん；扁平上皮がん、腺がん、腺様嚢胞がん、粘表皮がん、腺扁平上皮がん、肉腫、悪性黒色腫、形質細胞腫、疣贅性がん、および燕麦細胞（小細胞）がんが挙げられるが、これらに限定されない食道がん；腺がん、菌状（ポリープ状）、潰瘍化、表層進展性、びまん性拡大型、悪性リンパ腫、脂肪肉腫、繊維肉腫、およびがん肉腫が挙げられるが、これらに限定されない胃がん；結腸がん；直腸がん；肝細胞がんおよび肝芽腫が挙げられるが、これらに限定されない肝臓がん、腺がんが挙げられるが、これに限定されない胆嚢がん；乳頭状、結節性、およびびまん性が挙げられるが、これらに限定されない胆管がん；非小細胞肺がん、扁平上皮がん（類表皮がん）、腺がん、大細胞がん、および小細胞肺がんが挙げられるが、これらに限定されない肺がん；胚細胞腫瘍、精上皮腫、未分化、古典的（典型的）、精母細胞、非セミノーマ、胎生期がん、奇形腫がん、絨毛がん（卵黄嚢腫瘍）が挙げられるが、これらに限定されない精巣がん、腺がん、平滑筋肉腫、および横紋筋肉腫が挙げられるが、これらに限定されない前立腺がん；陰茎がん；扁平上皮がんが挙げられるが、これに限定されない口腔がん；基底がん；腺がん、粘表皮がん、および腺様嚢胞が挙げられるが、これらに限定されない唾液腺がん；扁平上皮がんおよび疣贅性が挙げられるが、これらに限定されない咽頭がん；基底細胞がん、扁平上皮がん、および悪性黒色腫、表層進展性悪性黒色腫、結節性悪性黒色腫、悪性黒子悪性黒色腫、末端黒子型悪性黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない皮膚がん；腎細胞がん、腺がん、副腎腫、繊維肉腫、移行上皮がん（腎盤および／または尿管）；ウィルムス腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない腎臓がん；移行細胞がん、扁平上皮がん、腺がん、がん肉腫が挙げられるが、これらに限定されない膀胱がんが挙げられるが、これらに限定されない。加えて、がんとしては、粘液肉腫、骨肉腫、内皮肉腫、リンパ管内皮肉腫、中皮腫、滑膜腫、血管芽細胞腫、上皮がん、嚢胞腺がん、気管支原生がん、汗腺がん、脂腺がん、乳頭状がん、および乳頭腺がんが挙げられる（そのような疾患の総説については、Ｆｉｓｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２ｄ Ｅｄ．，Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ａｎｄ Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｉｎｆｏｒｍｅｄ Ｄｅｃｉｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｂｏｏｋ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ，Ｖｉｋｉｎｇ Ｐｅｎｇｕｉｎ，Ｐｅｎｇｕｉｎ Ｂｏｏｋｓ Ｕ．Ｓ．Ａ．，Ｉｎｃ．，Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａを参照）。

ｂ．感染症の治療
開示される抗体組成物および方法は、感染症および感染性疾患を治療するために使用され得る。概して、これら作用物質は、ＰＤ−１を通して活性化または刺激シグナルを送る量の開示される抗体またはその抗原結合フラグメントのうちの１つ以上を対象に投与することによって、対象における感染症に対する免疫応答を刺激または増強するために使用される。方法は、感染症の１つ以上の症状を低減することができる。

感染症または疾患は、細胞内に入り、すなわち、細胞傷害性Ｔリンパ球によって攻撃される細菌、ウイルス、原生動物、蠕虫、または他の微生物病原体によって引き起こされ得る。

感染症または疾患は、急性または慢性であり得る。急性感染症は、典型的には、短期間の感染症である。急性微生物感染症の間、免疫細胞は、免疫調節受容体を発現させ始める。したがって、いくつかの実施形態では、方法は、急性感染症に対する免疫刺激応答を高めることを含む。

感染症は、例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｂａｕｍａｎｎｉｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、またはＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍによって引き起こされ得るが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、開示される抗体組成物は、慢性感染症、例えば、Ｔ細胞枯渇またはＴ細胞アネルギーが生じ、感染症を長期間にわたって宿主にとどまらせる感染症を治療するために使用される。

治療される例示的な感染症は、肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトＴリンパ好性ウイルス（ＨＴＬＶ）、ヘルペスウイルス、エプスタイン−バーウイルス、またはヒトパピローマウイルスによって引き起こされる慢性感染症である。

ウイルス感染症は、主にＴ細胞によって除去されるため、Ｔ細胞活性の増加は、感染性ウイルス因子のより迅速かつ徹底的な除去が動物またはヒト対象に有益である状況で治療的に有用である。したがって、開示される組成物は、免疫不全（例えば、ＨＩＶ）、乳頭腫（例えば、ＨＰＶ）、ヘルペス（例えば、ＨＳＶ）、脳炎、インフルエンザ（例えば、ヒトインフルエンザウイルスＡ）、および感冒（例えば、ヒトライノウイルス）、ならびに例えば、ＨＴＬＶ、肝炎ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ワクシニアウイルス、および狂犬病ウイルスによって引き起こされる他のウイルス感染症が挙げられるが、これらに限定されない局所または全身ウイルス感染症の治療のために投与され得る。分子は、局所投与されて、ヘルペス病変もしくは帯状疱疹、または生殖器疣などのウイルス性皮膚疾患を治療することができる。分子はまた、全身投与されて、ＡＩＤＳ、インフルエンザ、感冒、または脳炎が挙げられるが、これらに限定されない全身性ウイルス疾患を治療することができる。

治療され得る代表的な感染症としては、Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ、Ａｎａｂａｅｎａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｂｄｅｌｌｏｖｉｂｒｉｏ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃａｕｌｏｂａｃｔｅｒ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｈｌｏｒｏｂｉｕｍ、Ｃｈｒｏｍａｔｉｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｃｙｔｏｐｈａｇａ、Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ、Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、ＨｅｍｏｐｈｉｌｕｓインフルエンザＢ型（ＨＩＢ）、Ｈｙｐｈｏｍｉｃｒｏｂｉｕｍ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｌｅｐｔｓｐｉｒｏｓｉｓ、Ｌｉｓｔｅｒｉａ、Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ Ａ、Ｂ、およびＣ、Ｍｅｔｈａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｙｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｎｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｏｓｃｉｌｌａｔｏｒｉａ、Ｐｒｏｃｈｌｏｒｏｎ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、Ｐｈｏｄｏｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔａ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、Ｓｕｌｆｏｌｏｂｕｓ、Ｔｈｅｒｍｏｐｌａｓｍａ、Ｔｈｉｏｂａｃｉｌｌｕｓ、およびＴｒｅｐｏｎｅｍａ、Ｖｉｂｒｉｏ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｎｏｃａｒｄｉａ ａｓｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｒｉｃｋｅｔｓｉｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｙｐｈｉ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ ｖａｇｉｎａｌｉｓおよびＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉが挙げられるが、これらに限定されない微生物によって引き起こされる感染症が挙げられるが、これらに限定されない。

開示される組成物および方法を使用して治療され得る他の微生物としては、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａなどの細菌；コレラ、破傷風、ボツリヌス中毒症、炭疽、ペスト、およびライム病と関連する病原体；またはＣａｎｄｉｄａ（ａｌｂｉｃａｎｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓなど）、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｎｉｇｅｒなど）、Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ（ｍｕｃｏｒ、ａｂｓｉｄｉａ、ｒｈｉｚｏｐｈｕｓ）、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ（ｓｃｈｅｎｋｉｉ）、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ（ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ（ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ（ｉｍｍｉｔｉｓ）およびＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ（ｃａｐｓｕｌａｔｕｍａ）、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ、ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ ｃｏｌｉ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ ｆｏｗｌｅｒｉ、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ ｓｐ．、Ｇｉａｒｄｉａ ｌａｍｂｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ種、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ、Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉなど）、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ、Ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ、Ｎａｅｇｌｅｒｉａ、Ａｃａｎｔｈａｍｏｅｂａ、Ｇｉａｒｄｉａ、Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ、Ｂａｂｅｓｉａ、もしくはＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａなどの真菌もしくは寄生病原体が挙げられる。

Ｖ．免疫応答を高めるための併用療法
開示される抗体およびその抗原結合フラグメントならびにその組成物は、単独で、または１つ以上の追加の治療剤と組み合わせて、それを必要としている対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントならびに追加の治療剤は、別々であるが同時に投与される。抗体およびその抗原結合フラグメントならびに追加の治療剤はまた、同じ組成物の一部としても投与され得る。他の実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントならびに第２の治療剤は、別々に、かつ異なる時間においてであるが、同じ治療計画の一部として投与される。追加の治療剤は、開示される抗体およびその抗原結合フラグメントの投与の前、後、またはそれと交互に投与され得る。

対象は、第２の治療剤の投与の１、２、３、４、５、６時間以上、または１、２、３、４、５、６、７日以上前に第１の治療剤を投与され得る。いくつかの実施形態では、対象は、第２の薬剤の第１の投与前１、２、３、４、５、６、７、１４、２１、２８、３５、または４８日毎に第１の薬剤の１つ以上の用量を投与され得る。抗体およびその抗原結合フラグメントは、第１または第２の治療剤であり得る。

抗体およびその抗原結合フラグメントならびに追加の治療剤は、治療計画の一部として投与され得る。例えば、第１の治療剤が４日毎に対象に投与され得る場合、第２の治療剤は、１日目、２日目、３日目、もしくは４日目、またはそれらの組み合わせにおいて投与され得る。第１の治療剤または第２の治療剤は、全治療計画全体を通し繰り返し投与され得る。

例示的な追加の治療剤としては、サイトカイン、化学療法薬、放射性核種、他の免疫治療薬、酵素、抗生物質、抗ウイルス剤（特に、単独で、あるいはＨＩＶまたはＢもしくはＣ型肝炎の治療のためのヌクレオシドと組み合わせたプロテアーゼ阻害剤）、抗寄生虫剤（蠕虫、原生動物）、成長因子、成長阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、抗体およびその生物活性フラグメント（ヒト化、一本鎖、およびキメラ抗体を含む）、抗原およびワクチン製剤（補助剤を含む）、ペプチド薬、抗炎症薬、先天性免疫系を活性するためにトル様受容体に結合するリガンド（ＣｐＧオリゴヌクレオチドが挙げられるが、これに限定されない）、適応免疫系を動員および最適化する分子、細胞傷害性Ｔリンパ球の作用を活性化または上方制御する他の分子、ナチュラルキラー細胞およびヘルパーＴ細胞、ならびに抑制因子または制御性Ｔ細胞を不活性化または下方制御する他の分子が挙げられるが、これらに限定されない。

追加の治療剤は、治療される状態、障害、または疾患に基づいて選択される。例えば、免疫調節剤は、免疫応答を増強もしくは促進するか、または免疫応答を低減または阻害するように機能する１つ以上の追加の薬剤と同時投与され得る。

Ａ．抗菌剤
一実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントは、抗生物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗寄生虫剤、または精油などの抗菌剤と組み合わせて対象に投与され得る。別の実施形態では、開示される抗体およびその抗原結合フラグメントは、疾患の治療および予防、また大きい火傷、開放骨折、偶発的切断、または他の創傷のようなひどい外傷性損傷の状況下で、防止または予防の役割に使用され得る。

いくつかの実施形態では、対象は、さらなる細菌、真菌、またはウイルス性合併症を予防するために、入院時に抗体およびその抗原結合フラグメントならびに／または抗菌剤を投与される。抗生物質は、標的病原体を標的にすることができ、抗体およびその抗原結合フラグメントは、免疫系を刺激して高められた応答を提供して、さらなる感染症または疾患を治療または予防することができる。

１．化学療法薬
抗体およびその抗原結合フラグメントは、１つ以上の化学療法薬およびアポトーシス促進剤と組み合わされ得る。代表的な化学療法薬としては、アムサクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カペシタビン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、クリサンパスターゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、フルダラビン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシカルバミド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、リポソームドキソルビシン、リポソームダウノルビシン、ロムスチン、メルファラン、メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、マイトマイシン、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、ペントスタチン、プロカルバジン、ラルチトレキセド、サトラプラチン、ストレプトゾシン、テガフール−ウラシル、テモゾロマイド、テニポシド、チオテパ、チオグアニン、トポテカン、トレオスルファン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。代表的なアポトーシス促進剤としては、フルダラビンタウロスポリン、シクロヘキシミド、アクチノマイシンＤ、ラクトシルセラミド、１５ｄ−ＰＧＪ（２）、およびこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。

２．他の免疫調節剤
ａ．ＰＤ−１アンタゴニスト
いくつかの実施形態では、抗体およびその抗原結合フラグメントは、ＰＤ−１アンタゴニストと同時投与される。プログラム死−１（ＰＤ−１）は、Ｔ細胞上で誘発されたときに負の免疫応答を送達する受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーである。ＰＤ−１とそのリガンドのうちの１つ（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣ）との間の接触は、Ｔ細胞増大ならびに／またはＴ細胞応答の強度および／もしくは持続時間を減少させる阻害応答を誘発する。好適なＰＤ−１アンタゴニストは、米国特許第８，１１４，８４５号、同第８，６０９，０８９号、および同第８，７０９，４１６号に記載されており、これらは、参照によりそれらの全体が本明細書に具体的に組み込まれ、ＰＤ−１のリガンドに結合し、遮断してＰＤ−１受容体へのリガンドの結合に干渉するかもしくは阻害するか、またはＰＤ−１受容体を通した阻害シグナル伝達を誘発することなく、ＰＤ−１受容体に直接結合し遮断するかのいずれかを行う、化合物または薬剤を含む。

いくつかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、阻害シグナル伝達を引き起こすことなくＰＤ−１受容体に直接結合し、またＰＤ−１受容体のリガンドに結合して、ＰＤ−１受容体を通したシグナル伝達の誘因からリガンドを低減または阻害する。ＰＤ−１受容体に結合し、阻害シグナルの伝達を引き起こすリガンドの数および／または量を低減することによって、より少ない細胞が、ＰＤ−１シグナル伝達によって送達される負のシグナルによって弱められ、より強固な免疫応答が達成され得る。

ＰＤ−１シグナル伝達は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によって示されるペプチド抗原にごく近接しているＰＤ−１リガンド（Ｂ７−Ｈ１またはＢ７−ＤＣなど）に結合することによって引き起こされると考えられている（例えば、Ｆｒｅｅｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ，１０５：１０２７５−１０２７６（２００８）を参照）。したがって、Ｔ細胞膜上のＰＤ−１およびＴＣＲの共ライゲーションを防止するタンパク質、抗体、または小分子も、有用なＰＤ−１アンタゴニストである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ−１受容体アンタゴニストは、特に、ＴＣＲとＰＤ−１の共ライゲーションがそのような結合の後に続かない場合、ＰＤ−１のリガンドまたはＰＤ−１自体に結合することによって、ＰＤ−１受容体シグナル伝達を低減するか、またはそれに介入し、それにより、ＰＤ−１受容体を通した阻害シグナル伝達を引き起こさない、小分子アンタゴニストまたは抗体である。本発明の方法によって企図される他のＰＤ−１アンタゴニストとしては、ＰＤ−１またはＰＤ−１のリガンドに結合する抗体、および他の抗体が挙げられる。

好適な抗ＰＤ−１抗体としては、以下の米国特許第７３３２５８２号、同第７４８８８０２号、同第７５２１０５１号、同第７５２４４９８号、同第７５６３８６９号、同第７９８１４１６号、同第８０８８９０５号、同第８２８７８５６号、同第８５８０２４７号、同第８７２８４７４号、同第８７７９１０５号、同第９０６７９９９号、同第９０７３９９４号、同第９０８４７７６号、同第９２０５１４８号、同第９３５８２８９号、同第９３８７２４７号、同第９４９２５３９号、同第９４９２５４０号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されず、それらの全ては、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

また、Ｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１４：３０４４３０５１（２００８）も参照されたい。

例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体としては、以下の米国特許第８３８３７９６号、同第９１０２７２５号、同第９２７３１３５号、同第９３９３３０１号、および同第９５８０５０７号に記載されるものが挙げられるが、これらに限定されず、それらの全ては、参照によりそれらの全体が具体的に本明細書に組み込まれる。

抗Ｂ７−ＤＣ（抗ＰＤ−Ｌ２とも称される）抗体に関しては、米国特許第７，４１１，０５１号、同第７，０５２，６９４号、同第７，３９０，８８８号、同第８１８８２３８号、および同第９２５５１４７号を参照されたい。

他の例示的なＰＤ−１受容体アンタゴニストとしては、ＰＤ−Ｌ２ポリペプチド（これらの相同体および変異体を含む）、ならびに上記のうちのいずれかの活性フラグメント、およびこれらのうちのいずれかを組み込む融合タンパク質が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、ヒトＩｇＧなどの抗体のＦｃ部分に結合されたＢ７−ＤＣの可溶性部分を含み、ヒトＢ７−ＤＣの膜貫通部分の全てまたは一部を組み込まない。

ＰＤ−１アンタゴニストはまた、例えば、マウスまたはヒトなどの霊長類からの、哺乳動物ＰＤ−Ｌ１のフラグメントであり得、フラグメントは、ＰＤ−１に結合し遮断するが、ＰＤ−１を通した阻害シグナル伝達をもたらさない。フラグメントはまた、融合タンパク質、例えばＩｇ融合タンパク質の一部であり得る。

他の有用なポリペプチドであるＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１受容体のリガンドに結合するものを含む。これらは、ＰＤ−Ｌ１またはＢ７−ＤＣなどのＰＤ−１リガンドに結合し、内因性ＰＤ−１受容体への結合を防止し、それにより阻害シグナル伝達を防止することができる、ＰＤ−１受容体タンパク質、またはその可溶性フラグメントを含む。ＰＤ−Ｌ１はまた、タンパク質Ｂ７．１に結合することが示されている（Ｂｕｔｔｅ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ．２７，ｐｐ．１１１−１２２，（２００７））。そのようなフラグメントはまた、天然リガンドへの結合を増加させるＡ９９Ｌ突然変異などの突然変異を含む、ＰＤ−１タンパク質の可溶性ＥＣＤ部分を含む（Ｍｏｌｎａｒ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，１０５：１０４８３−１０４８８（２００８））。ＰＤ−Ｌ１リガンドに結合し、内因性ＰＤ−１受容体への結合を防止し、それにより阻害シグナル伝達を防止することができるＢ７−１またはその可溶性フラグメントもまた有用である。

ＰＤ−１およびＰＤ−Ｌ１アンチセンス核酸、ＤＮＡおよびＲＮＡの両方、ならびにｓｉＲＮＡ分子はまた、ＰＤ−１アンタゴニストとも呼ばれる。そのようなアンチセンス分子は、Ｔ細胞上のＰＤ−１の発現、ならびにＰＤ−Ｌ１および／またはＰＤ−Ｌ２などのＴ細胞リガンドの産生を防止する。例えば、ｓｉＲＮＡ（例えば、約２１ヌクレオチド長の（ＰＤ−１をコードする遺伝子に特異的である）、またはＰＤ−１リガンドをコードする（オリゴヌクレオチドが容易に商業的に購入され得る）は、ポリエチレンイミンなどの担体との複合体を形成し（Ｃｕｂｉｌｌｏｓ−Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１９（８）：２２３１−２２４４（２００９）を参照）、ＰＤ−１ならびにＰＤ−１のリガンドを発現させ、かつこれらの受容体およびリガンドの発現を低減する細胞によって容易に取り込まれて、Ｔ細胞における阻害シグナル伝達の減少を達成して、それによりＴ細胞を活性化する。

ｂ．ＣＴＬＡ４アンタゴニスト
免疫応答におけるＴ細胞の効果を媒介するのに有用な他の分子もまた、追加の治療剤として企図される。いくつかの実施形態では、分子は、ＣＴＬＡ４のアンタゴニスト、例えば、アンタゴニスト抗ＣＴＬＡ４抗体である。本発明の方法での使用について企図される抗ＣＴＬＡ４抗体の一例は、ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４３６９０（Ｆｉｓｃｈｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ／２００７／０５６５３９）に記載される抗体を含む。

抗ＰＤ−１、抗Ｂ７−Ｈ１、および抗ＣＴＬＡ４抗体の投与量は、当該技術分野において既知であり、例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得、より短い範囲は、１〜５０ｍｇ／ｋｇまたは１０〜２０ｍｇ／ｋｇである。ヒト対象の適切な用量は、５〜１５ｍｇ／ｋｇであり得、１０ｍｇ／ｋｇの抗体（例えば、ヒト抗ＰＤ−１抗体）が具体的な実施形態である。

本発明の方法に有用な抗ＣＴＬＡ４抗体の具体的な例は、例えば、約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるヒト抗ＣＴＬＡ４抗体のイピリムマブ、および例えば、約１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与されるヒト抗ＣＴＬＡ４抗体である。２００９年１２月にオンラインで公開されたＳａｍｍａｒｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，３（２）：１３５−１３７（２０１０）も参照されたい。

他の実施形態では、アンタゴニストは、小分子である。一連の小有機化合物は、Ｂ７−１リガンドに結合して、ＣＴＬＡ４への結合を防止することが示されている（Ｅｒｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７７：７３６３−７３６８（２００２）を参照）。そのような小有機物は、単独で、または抗ＣＴＬＡ４抗体と一緒に投与されて、Ｔ細胞の阻害シグナル伝達を低減し得る。

３．増強剤
いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、増強剤を含む。増強剤は、場合により２つ以上の機序によって、免疫応答上方制御剤の有効性を高めるように作用するが、正確な作用機序は、本発明の広い実施に不可欠ではない。

いくつかの実施形態では、増強剤は、シクロホスファミドである。シクロホスファミド（ＣＴＸ、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））は、オキサアザホスホリン剤であり、類似体としては、イホスファミド（ＩＦＯ、Ｉｆｅｘ）、ペルホスファミド、トロホスファミド（ｔｒｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）（トロホスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；Ｉｘｏｔｅｎ）、ならびにそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、プロドラッグ、および代謝産物が挙げられる（その全体が組み込まれる米国特許出願第２００７／０２０２０７７号）。イホスファミド（ＭＩＴＯＸＡＮＡ（登録商標））は、シクロホスファミドの構造類似体であり、その作用機序は、シクロホスファミドのものと同一または実質的に同様であるとみなされる。ペルホスファミド（４−ヒドロペルオキシシクロホスファミド）およびトロホスファミドもまた、シクロホスファミドに構造的に関連したアルキル化剤である。例えば、ペルホスファミドは、ＤＮＡをアルキル化し、それによりＤＮＡ複製ならびにＲＮＡおよびタンパク質合成を阻害する。新しいオキサアザホスホリン誘導体は、選択性および応答を改善し、宿主毒性を低減しようとする試みで設計および評価されている（Ｌｉａｎｇ Ｊ，Ｈｕａｎｇ Ｍ，Ｄｕａｎ Ｗ，Ｙｕ ＸＱ，Ｚｈｏｕ Ｓ．Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｎｅｗ ｏｘａｚａｐｈｏｓｐｈｏｒｉｎｅ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｄｅｓ．２００７；１３（９）：９６３−７８．Ｒｅｖｉｅｗ）。これらは、マホスファミド（ＮＳＣ ３４５８４２）、グルフォスファミド（Ｄ１９５７５、ベータ−Ｄ−グルコシルイソホスホルアミドマスタード）、Ｓ−（−）−ブロモフォスファミド（ＣＢＭ−１１）、ＮＳＣ ６１２５６７（アルドホスファミドペルヒドロチアジン）、およびＮＳＣ ６１３０６０（アルドホスファミドチアゾリジン）を含む。マホスファミドは、４−ヒドロキシ−ＣＰＡの化学的に安定した４−チオエタンスルホン酸塩であるオキサアザホスホリン類似体である。グルフォスファミドは、ＩＦＯのアルキル化代謝産物であるイソホスホルアミドマスタードがベータ−Ｄ−グルコース分子にグリコシド連結されたＩＦＯ誘導体である。追加のシクロホスファミド類似体は、「Ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ａｎａｌｏｇｓ ｕｓｅｆｕｌ ａｓ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ａｇｅｎｔｓ」と題する米国特許第５，１９０，９２９号に記載され、それは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

ＣＴＸ自体は非毒性であるが、その代謝産物の一部は、ＤＮＡ架橋を誘発する細胞傷害性アルキル化剤であり、より高い用量では鎖が破壊する。多くの細胞は、それらが高レベルの解毒酵素アルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ）を発現させるため、ＣＴＸに耐性がある。リンパ球（造血幹細胞ではない）が低レベルのＡＬＤＨのみを発現させるため、ＣＴＸは、増殖リンパ球を標的にし、サイクリング細胞は、ＤＮＡアルキル化剤に最も感受性がある。

一実施形態では、低用量のＣＴＸが開示される抗体およびその抗原結合フラグメントと組み合わせて使用される。低用量のＣＴＸ（２００ｍｇ／ｋｇ未満）は、がんのヒトおよびマウスモデルにおける抗腫瘍免疫応答の刺激を含む、免疫刺激効果を有することができる（Ｂｒｏｄｅ ＆ Ｃｏｏｋｅ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１０９−１２６（２００８））。これらの低用量は、治療量以下であり、直接的な抗腫瘍活性を有しない。対照的に、高用量のＣＴＸは、抗腫瘍応答を阻害する。いくつかの機序が、抗腫瘍免疫応答の増強作用におけるＣＴＸの役割を説明し得る。（ａ）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ（および具体的に、特に抑制的であり得る増殖Ｔｒｅｇ）の枯渇、（ｂ）Ｂリンパ球の枯渇、（ｃ）腫瘍細胞成長の抑制をもたらす一酸化窒素（ＮＯ）の誘発、（ｄ）ＣＤ１１ｂ＋Ｇｒ−１＋ＭＤＳＣの動員および拡大。これらの一次効果は、多くの二次効果を有し、例えば、以下のＴｒｅｇ枯渇マクロファージは、より多くのＩＦＮ−γおよびより少ないＩＬ−１０を産生する。ＣＴＸはまた、Ｉ型ＩＦＮ発現を誘発し、リンパ球の恒常的増殖を促進することが示されている。

Ｔｒｅｇ枯渇は、ほとんどの場合、ＣＴＸが抗腫瘍免疫応答を強化する機序として挙げられる。この結論は、部分的に養子移入実験の結果に基づく。ＡＢ１−ＨＡ腫瘍モデルにおいて、９日目のＣＴＸ処置は、７５％の治癒率をもたらす。１２日目の精製Ｔｒｅｇの移入は、ＣＴＸ応答のほぼ完全に阻害した（ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｏｓｔ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５８：１２１９−１２２８（２００９））。同様の結果が、ＨＨＤ２腫瘍モデルにおいて見られ、ＣＴＸ前処置後のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇの養子移入は、ワクチンに対する治療応答を除去した（Ｔａｉｅｂ，Ｊ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７６：２７２２−２７２９（２００６））。

多くのヒト臨床試験は、低用量ＣＴＸが、抗腫瘍免疫応答の促進のための安全で、良好な耐容性を示し、かつ有効な薬剤であることを実証している（Ｂａｓ，＆ Ｍａｓｔｒａｎｇｅｌｏ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４７：１−１２（１９９８））。

一実施形態では、抗腫瘍免疫応答を強化するためのＣＴＸの最適な用量は、Ｔｒｅｇレベルを正常範囲未満に低下させることによって全Ｔ細胞計数を下げるが、治療量以下である用量である（Ｍａｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３６８９−３６９７（２００１）を参照）。

いくつかの実施形態では、ＣＴＸは、３００ｍｇ／ｍ^２の用量で免疫増強剤として使用される。別の実施形態では、平均の雄（６フィート、１７０ポンド（７８ｋｇ）、１．９８ｍ^２の体表面積を有する）３００ｍｇ／ｍ^２に対して、ＣＴＸの用量は、８ｍｇ／ｋｇ、または６２４ｍｇの総タンパク質である。がんのマウスモデルにおいて、１５〜１５０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で有効性が見られ、これは、３０ｇのマウスにおける０．４５〜４．５ｍｇの総タンパク質に関連する（Ｍａｃｈｉｅｌｓ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：３６８９−３６９７（２００１）、Ｈｅｎｇｓｔ ｅｔ ａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４１：２１６３−２１６７（１９８１）、Ｈｅｎｇｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４０：２１３５−２１４１（１９８０））。

ヒト患者などの霊長類などのより大きい哺乳動物について、そのようなｍｇ／ｍ^２用量が使用され得るが、有限の時間間隔で投与される単位用量もまた使用され得る。そのような単位用量は、有限期間にわたって毎日投与されてもよく、最大３日、または最大５日、または最大７日、または最大１０日、または最大１５日、または最大２０日、または最大２５日などは全て、本発明によって具体的に企図される。同じ計画が、本明細書に列挙される他の増強剤にも適用され得る。

他の実施形態では、増強剤は、スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標））、抗ＴＧＦβ、またはイマチニブ（ＧＬＥＥＶＡＣ（登録商標））などの制御性Ｔリンパ球（Ｔ−ｒｅｇ）の活性および／または数を低減する薬剤である。列挙された治療計画はまた、補助剤の投与も含み得る。

有用な増強剤としては、有糸分裂阻害剤、例えば、パクリタキソール、アロマターゼ阻害剤（例えば、Ｌｅｔｒｏｚｏｌｅ）、および血管新生阻害剤（ＶＥＧＦ阻害剤、例えば、Ａｖａｓｔｉｎ、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ）（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｌｏｃｋａｄｅ ｒｅｄｕｃｅｓ ｉｎｔｒａｔｕｍｏｒａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ａ ＧＭ−ＣＳＦ−ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００６ Ｎｏｖ １５；１２（２２）：６８０８−１６を参照）、アントラサイクリン、オキサリプラチン、ドキソルビシン、ＴＬＲ４アンタゴニスト、およびＩＬ−１８アンタゴニストも挙げられる。

ＶＩ．トランスジェニック動物
一実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、および８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、および１４によるアミノ酸を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するトランスジェニック動物を提供する。一実施形態では、トランスジェニック動物は、齧歯類、例えばマウスである。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、１９、および２０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、１３、および２５からなる群から選択されるアミノ酸を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するトランスジェニック動物を提供する。一実施形態では、トランスジェニック動物は、齧歯類、例えばマウスである。

別の実施形態は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、および３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、３６、および３７によるアミノ酸を有する軽鎖ＣＤＲと、を有する、抗体またはその抗原結合フラグメントを産生するトランスジェニック動物を提供する。一実施形態では、トランスジェニック動物は、齧歯類、例えばマウスである。

抗体を産生するトランスジェニック動物の作製方法は、当該技術分野において既知である。例えば、Ａ．Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，６（５）：５６１−６（１９９５）およびＢｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，．Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）．，６３（２）：１０１−１０８（２０１５）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｆｒｏｍ ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｔｏ ｐａｎｉｔｕｍｕｍａｂ，ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｆｕｌｌｙ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔ ｆｒｏｍ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ．”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５（１０）：１１３４−４３ （２００７）、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ．（２００５）“Ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ａｎｉｍａｌｓ．”Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３（９）：１１１７−２５、ならびに米国特許第９，７０８，６３５号、同第９，６８６，９７０号、同第９，４９９，８３８号、同第９，４４５，５８１号、同第９，３８８，４４６号、同第８，８３５，７１２号、同第８，７０３，４８５号、同第８，２３２，４４９号、同第７，７９５，４９４号、および同第５，９３９，５９８号を参照されたい。

実施例１：抗ＰＤ−１抗体産生
結果
抗ＰＤ−１抗体の産生は、クローン４Ｇ９、４Ｃ１２、および５Ｃ２を産生し、これらを特徴付けのために選択した。

実施例２：抗ＰＤ−１抗体とＰＤ−１との間の相互作用動態
材料および方法
クローン４Ｇ９、４Ｃ１２、および５Ｃ２からの抗体を、ＧＥから入手可能なＢｉｏｃｏｒｅ（商標）システムを使用して特徴付けた。分析物は、マウスまたはヒトＰＤ−１であり、リガンドは、抗ＰＤ−１抗体であった。分析物濃度は、示される場合、０、６２．５、１２５、２５０、５００、および１０００ｎＭであった。

結果
図１および表１は、ヒトＰＤ−１との４Ｇ９の相互作用分析を示す。平衡会合定数（Ｋ_Ａ）は、９．５２×１０^５（１／Ｍ）であった。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、１．０５×１０^−６（Ｍ）であった。

（表１）ヒトＰＤ−１との４Ｇ９の相互作用分析

図２および表２は、マウスＰＤ−１との４Ｇ９の相互作用分析を示す。平衡会合定数（Ｋ_Ａ）は、１．９４×１０^５（１／Ｍ）であった。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、５．１５×１０^−６（Ｍ）であった。

（表２）マウスＰＤ−１との４Ｇ９の相互作用分析

図３および表３は、ヒトＰＤ−１との４Ｃ１２の相互作用分析を示す。平衡会合定数（Ｋ_Ａ）は、３．１４×１０^６（１／Ｍ）であった。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、３．１９×１０^−７（Ｍ）であった。

（表３）ヒトＰＤ−１との４Ｃ１２の相互作用分析

図４および表４は、ヒトＰＤ−１との５Ｃ２の相互作用分析を示す。平衡会合定数（Ｋ_Ａ）は、２．０２×１０^５（１／Ｍ）であった。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、４．９５×１０^−６（Ｍ）であった。

（表４）ヒトＰＤ−１との５Ｃ２の相互作用分析

図５および表５は、マウスＰＤ−１との５Ｃ２の相互作用分析を示す。平衡会合定数（Ｋ_Ａ）は、１．１８×１０^６（１／Ｍ）であった。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）は、８．５０×１０^−７（Ｍ）であった。

（表５）マウスＰＤ−１との５Ｃ２の相互作用分析

実施例３：ＥＬ４細胞への抗ＰＤ−１抗体の結合
材料および方法
ＰＤ−１を構成的に発現するマウスＥＬ４細胞を蛍光活性化セルソーターで使用して、細胞への４Ｇ９、５Ｃ２、および４Ｃ１２の結合を評価した。

結果
図６Ａは、市販の抗ＰＤ−１がＥＬ４細胞に結合し、対照アイソタイプ抗体がＥＬ４細胞に結合しないことを示すフローサイトメトリヒストグラムである。図６Ｂは、４Ｇ９、５Ｃ２、および４Ｃ１２がＥＬ４細胞に結合し、二次抗体単独が結合しないことを示すフローサイトメトリヒストグラムである。図６Ｃは、４Ｇ９抗ＰＤ−１抗体がＥＬ４細胞に結合し、二次抗体単独が結合しないことを示すフローサイトメトリヒストグラムである。図６Ｄは、５Ｃ２抗ＰＤ−１抗体がＥＬ４細胞に結合し、二次抗体単独が結合しないことを示すフローサイトメトリヒストグラムである。図６Ｅは、４Ｃ１２抗ＰＤ−１抗体がＥＬ４細胞に結合し、二次抗体単独が結合しないことを示すフローサイトメトリヒストグラムである。

実施例４：抗ＰＤ−１抗体のアゴニスト活性
材料および方法
マウスＣＤ４ Ｔ細胞
精製したマウスＣＤ４ Ｔ細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ａｂで４８時間刺激し、次いで抗ＰＤ−１ Ａｂ（１０ｕｇ／ｍＬ）を添加して、さらに４８時間プロテインＡビーズと共に培養した。いくつかの試料において、抗ＰＤ−Ｌ１ Ａｂを添加して、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断して、試験Ａｂのアゴニスト効果を分析した。ＣＢＡアッセイを使用して、上清中のＩＦＮγおよびＩＬ−２濃度を検出した。

ヒトＣＤ４ Ｔ細胞
精製したヒトＣＤ４ Ｔ細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ Ａｂで４８時間刺激し、次いで抗ＰＤ−１ Ａｂ（１または１０ｕｇ／ｍＬ）を添加して、さらに４８時間プロテインＡビーズと共に培養した。ＣＢＡアッセイを使用して、上清中のＩＦＮγ濃度を検出した。

結果
図７Ａおよび７Ｂは、抗ＰＤ−１抗体５Ｃ２、４Ｃ１２、および４Ｇ９で処理された刺激ＣＤ４ Ｔ細胞が、未処理細胞または抗ＰＤ−Ｌ１抗体で処理された細胞と比較して、上清中でＩＦＮγおよびＩＬ−２の濃度がより高かったことを示す。図７Ｃは、抗ＰＤ−１抗体４Ｇ９および５Ｃ２で処理された刺激ヒトＣＤ４ Ｔ細胞が、未処理細胞またはアイソタイプ対照抗体で処理された細胞と比較して、ＩＦＮγ上清の濃度がより高かったことを示す。

実施例５：ハイブリドーマはＡｋｔリン酸化を増強する
材料および方法
ｐＡＫＴ（Ｓ４７３）の細胞内染色をＴ細胞活性化のマーカーとして使用した。

結果
ペプチドＥで免疫化されたマウスからのハイブリドーマは、マウスＣＤ４ Ｔ細胞におけるＡｋｔ（Ｓ４７３）のリン酸化を増強した（図８）。

実施例６：３つの抗ＰＤ−１抗体の特徴付け
材料および方法
ハイブリドーマ５Ｃ２、４Ｃ１２、および４Ｇ９からの精製した抗体を特徴付けた。

結果
３つの抗ＰＤ−１抗体の各々のアイソタイプを決定した。５Ｃ２および４Ｃ１２は両方、ＩｇＧ１アイソタイプであり、４Ｇ９は、ＩｇＧ２ｂアイソタイプであることがわかった（図９）。ハイブリドーマシークエンシングは、５Ｃ２および４Ｃ１２抗体に対して１００％の配列同一性を示した。

実施例７：４Ｇ９および５Ｃ２はヒトＰＤ−１に特異的に結合する
材料および方法：
ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ヒトＰＤ−１−Ｆｃへの４Ｇ９および５Ｃ２の結合を決定した。

結果：
図１０は、ヒトＰＤ−１−Ｆｃへの４Ｇ９および５Ｃ２抗体の結合を評価するためのＥＬＩＳＡアッセイの結果を示す。４Ｇ９および５Ｃ２は両方、ヒトＰＤ−１に特異的に結合する。図１１Ａは、４Ｇ９および５Ｃ２がＰＤ−１ ＫＯ ＣＤ４ Ｔ細胞に結合しないが、野生型マウスからのＣＤ４ Ｔ細胞に結合することを示す、フローサイトメトリヒストグラムである（図１１Ｂ）。

実施例８：シグナル伝達
材料および方法：
マウスＣＤ４ Ｔ細胞を４８時間予め刺激して、次いで精製した４Ｇ９および５Ｃ２抗体で処理されるＰＤ−１発現を確実にした。ＥＬＩＳＡキット（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈ）を使用して、ｐＳ６の濃度を決定した。

結果：
遮断抗体（ＲＭＰ１−１４およびＪ４３）とは対照的に、４Ｇ９および５Ｃ２は、Ｓ６経路を通してＴ細胞を活性化した。（ＰＤ−１発現を確実にするために）４８時間予め刺激したマウスＣＤ４ Ｔ細胞を、精製した４Ｇ９および５Ｃ２抗体で処理することによって、線形範囲内のｐＳ６が有意に増加した（ＥＬＩＳＡキット、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈ、未処理と比較して＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。この現象は、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１相互作用を遮断する市販のＡｂ−１（ＲＭＰ１−１４）およびＡｂ−２（Ｊ４３）による処理がｐＳ６増加をもたらさないため、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１遮断よりもむしろ直接的活性化によるものである。

実施例８：インビボ有効性評価
材料および方法：
図１３Ａは、この実験で使用されるＴＣ−１腫瘍モデルの概略図である。簡単に述べると、０日目に、ＴＣ−１腫瘍細胞をマウスに皮下注射した。腫瘍注射後１０日目（Ｄ１０）、１７日目（Ｄ１７）、および２４日目（Ｄ２４）に、マウスをワクチン（Ｅ７＋ＰＡＤＲＥ＋Ｑｕｉｌ Ａ）で処理した。１０日目、１４日目、１７日目、２１日目、２４日目、および２８日目に、マウスを抗ＰＤ−１抗体で処理した。

結果：
抗ＰＤ−１抗体４Ｇ９、４Ｃ１２、および５Ｃ２は、Ｅ７ワクチンと組み合わされたときに腫瘍体積を低減し、生存率を高めた（図１３Ｂ〜１３Ｄ）。

実施例９：インビボ有効性評価−抗ＥｐＥ抗体
材料および方法：
エピトープＥに対する抗体を生成し、上の実施例８および図１４Ａに記載のＴＣ−１腫瘍モデルで試験した。

結果：
エピトープＥに対して生成された抗体、４Ｇ９で処理されたマウスは、伝統的なチェックポイント阻害剤、抗ＰＤ１遮断抗体ＲＭＰ１−１４およびＪ４３と比較して、有意により低い腫瘍体積およびより高い生存率を示した（図１４Ｂ〜１４Ｃ）。

Claims (44)

1. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、および８に記載のアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）と
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、および１４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと
   を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
2. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖を含む、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
3. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を含む、請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
4. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖と
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖と
   を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
5. 請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するように操作された、トランスジェニック動物。
6. 齧歯類である、請求項５に記載のトランスジェニック動物。
7. 齧歯類がマウスである、請求項６に記載のトランスジェニック動物。
8. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４または５と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖をコードする、核酸。
9. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０または１１と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖をコードする、核酸。
10. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、１９、および２０に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと
    ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、１３、および２５に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと
    を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
11. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖を含む、請求項１０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
12. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を含む、請求項１０または１１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
13. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖と
    ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖と
    を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
14. 請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するように操作された、トランスジェニック動物。
15. 齧歯類である、請求項１４に記載のトランスジェニック動物。
16. 齧歯類がマウスである、請求項１５に記載のトランスジェニック動物。
17. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６または１７と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖をコードする、核酸。
18. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２または２３と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖をコードする、核酸。
19. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９、３０、および３１に記載のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲと
    ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５、３６、および３７に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲと
    を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
20. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖を含む、請求項１９に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
21. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖を含む、請求項１９または２０に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
22. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖と
    ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖と
    を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
23. 請求項１９〜２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを発現するように操作された、トランスジェニック動物。
24. 齧歯類である、請求項２３に記載のトランスジェニック動物。
25. 齧歯類がマウスである、請求項２４に記載のトランスジェニック動物。
26. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７または２８と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する重鎖をコードする、核酸。
27. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３または３４と少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、または１００％の配列同一性を有する軽鎖をコードする、核酸。
28. ヒト、マウス、キメラ、ヒト化、モノクローナル、二重特異性、三重特異性、または多重特異性である、請求項１〜４、１０〜１３、または１９〜２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
29. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、１４、２４、２５、３５、３６、または３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの軽鎖ＣＤＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
30. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、８、１８、１９、２０、２９、３０、または３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの重鎖ＣＤＲを含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
31. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、１３、１４、２４、２５、３５、３６、または３７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの軽鎖ＣＤＲと
    ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、７、８、１８、１９、２０、２９、３０、または３１からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する３つの重鎖ＣＤＲと
    を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
32. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に免疫特異的に結合する、抗体もしくはそのエピトープ結合フラグメントまたは融合タンパク質。
33. 免疫細胞がＴ細胞である、請求項３２に記載の抗体もしくはそのエピトープ結合フラグメントまたは融合タンパク質。
34. 前記Ｔ細胞がＣＤ８^＋Ｔ細胞である、請求項３３に記載の抗体もしくはそのエピトープ結合フラグメントまたは融合タンパク質。
35. 前記抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは融合タンパク質がＰＤ−１に結合する、請求項３２に記載の抗体もしくはそのエピトープ結合フラグメントまたは融合タンパク質。
36. 免疫細胞の表面上に発現したＰＤ−１上のＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８に免疫特異的に結合し、かつ、免疫細胞を活性化または刺激するシグナルをＰＤ−１を通して誘発または促進する、抗体もしくはそのエピトープ結合フラグメントまたは融合タンパク質。
37. 請求項１〜４、１０〜１３、１９〜２２、または２９〜３６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、医薬組成物。
38. 第２の治療剤をさらに含む、請求項３７に記載の医薬組成物。
39. 薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、請求項３７または３８に記載の医薬組成物。
40. 第２の治療剤がシクロホスファミドを含む、請求項３８に記載の医薬組成物。
41. 免疫応答の誘発、促進、または増強を、それを必要としている対象において行う方法であって、
    該対象における免疫応答を誘発、促進、または増強するために、該対象に、有効量の請求項１〜４、１０〜１３、１９〜２２、もしくは２９〜３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、前記方法。
42. がんの治療を、それを必要としている対象において行うための方法であって、
    該対象におけるがんを治療するために、該対象に、有効量の請求項１〜４、１０〜１３、１９〜２２、もしくは２９〜３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、前記方法。
43. 腫瘍負荷の低減を、それを必要としている対象において行うための方法であって、
    該対象における腫瘍負荷を低減するために、該対象に、有効量の請求項１〜４、１０〜１３、１９〜２２、もしくは２９〜３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、前記方法。
44. 感染症の治療を、それを必要としている対象において行うための方法であって、
    該対象における該感染症を治療するために、該対象に、有効量の請求項１〜４、１０〜１３、１９〜２２、もしくは２９〜３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合フラグメントまたは請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程を含む、前記方法。

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