JP2012530782A5

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Publication number: JP2012530782A5
Application number: JP2012517634A
Authority: JP
Filing date: 2010-06-21
Publication date: 2013-07-18
Anticipated expiration: 2030-06-21

Claims

リフォールディングの最中に、
（ａ）０．００１〜１００の範囲を有する最終的なチオール対比および２mM以上のチオール対緩衝液強度を含むレドックス成分と、
（ｉ）変性剤；
（ii）凝集抑制剤；および
（iii）タンパク質安定化剤、
のうちの１種以上と、を含むリフォールディング緩衝液にタンパク質を接触させて、リフォールディング混合物を形成させること
〔ここで、チオール対比は、式１：

に従い計算され、並びに
レドックス緩衝液強度は、式２：

に従い計算される〕；
（ｂ）前記リフォールディング混合物をインキュベートすること；並びに
（ｃ）前記リフォールディング混合物から前記タンパク質を単離すること
を含む、非哺乳類発現系中に発現された、２．０g/L以上の濃度で多量に存在する複合多量体タンパク質をリフォールディングする方法。
前記最終的なチオール対比が、０．０５〜５０、０．１〜５０、０．２５〜５０、０．５〜５０、０．７５〜４０、１．０〜５０または１．５〜５０、２〜５０、５〜５０、１０〜５０、１５〜５０、２０〜５０、３０〜５０または４０〜５０からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
前記チオール対緩衝液強度が、２．２５mM以上、２．５mM以上、２．７５mM以上、３mM以上、５mM以上、７．５mM以上、１０mM以上または１５mM以上からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
前記タンパク質が、
（ｉ）非天然の難溶性形態、好ましくは封入体、または
（ｉｉ）可溶性形態
で存在する、請求項１に記載の方法。
前記タンパク質が、組換え体、内在性タンパク質、抗体、またはＦｃ−タンパク質結合体である、請求項１に記載の方法。
前記非哺乳類発現系が、細菌発現系および酵母発現系のうちの１つである、請求項１に記載の方法。
前記変性剤が、尿素、グアニジニウム塩、ジメチル尿素、メチル尿素およびエチル尿素からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
前記タンパク質安定化剤が、アルギニン、プロリン、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、多価アルコール、グリセロール、スクロース、ソルビトール、グルコース、トリス、硫酸ナトリウム、硫酸カリウムおよびオスモライトからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
前記凝集抑制剤が、アルギニン、プロリン、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、イオン性界面活性剤、多価アルコール、グリセロール、スクロース、ソルビトール、グルコース、トリス、硫酸ナトリウム、硫酸カリウムおよびオスモライトからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
前記チオール対が、還元型グルタチオン、酸化型グルタチオン、システイン、シスチン、システアミン、シスタミンおよびβ−メルカプトエタノールからなる群より選択される成分を少なくとも１種含む、請求項１に記載の方法。
前記インキュベーションが、無酸素条件下で実施される、請求項１に記載の方法。
前記単離が、混合物とアフィニティー分離マトリックスとの接触を含む、請求項１に記載の方法。
前記アフィニティー分離マトリックスが、プロテインＡ樹脂、または混合方式の分離マトリックスである、請求項１２に記載の方法。
前記単離が、混合物とイオン交換分離マトリックスとの接触を含む、請求項１に記載の方法。
前記単離が、さらにろ過ステップを含み、前記ろ過ステップが、好ましくは深層ろ過を含む、請求項１に記載の方法。