JP2015517464A5 - - Google Patents
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Claims (29)
- 組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を精製するプロセスであって、該プロセスは、
(a)組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を含む細菌細胞溶解物調製物を得る工程、
(b)工程(a)の細菌細胞溶解物調製物を、組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を含む可溶性画分と、不溶性画分とに分離する工程、
(c)工程(b)の可溶性画分中の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を、可溶性画分中の宿主細胞タンパク質から分離する工程、および、
(d)組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を得るために、選択的な還元条件に、工程(c)で得られた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体を晒す工程であって、ここで選択的な還元条件は、rCSPにおける分子間のジスルフィド結合を減らして分子内のジスルフィド結合を保存し、
それによって、変性又はリフォールディングする工程を含まずに精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を得る工程であって、ここで得られた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質は最も多くのN−末端システインを含み、最も多くのN−末端システインはSEQ ID NO:1に記載されている25の位置のシステインに対応しており、得られた精製組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質の約10%以下が二量体化されており、得られた精製組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質の約10%以下が高分子量凝集体として存在する、工程、
を含むプロセス。 - (e)工程(d)で得られた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を、宿主細胞タンパク質、N末端分解したrCSP、および/または、他の望ましくないrCSP種から分離する工程をさらに含む、請求項1記載のプロセス。
- 精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質が、約10%乃至約75%の全精製収率で得られる、請求項1記載のプロセス。
- 得られる精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質が、少なくとも約90%の熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質単量体を含む、請求項1記載のプロセス。
- 工程(c)の分離がクロマトグラフィーを含み、クロマトグラフィーは陰イオン交換クロマトグラフィーと混合モードクロマトグラフィーを含む、請求項1記載のプロセス。
- 混合モードクロマトグラフィーがヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーである、請求項5記載のプロセス。
- 工程(e)の分離が疎水性相互作用クロマトグラフィーを含む、請求項2記載のプロセス。
- 選択的な還元条件は穏やかな還元剤を含む、請求項1記載のプロセス。
- 穏やかな還元剤が、DTT、システイン、アセチルシステイン、グルタチオン、モノチオグリセロール(MTG)、チオグリコレート、ジチオレイトール、ジチオエリトリトール、アセチルシステイン、2−メルカプトエタノール(B−メルカプトエタノール)、TCEP−HCl(純粋な結晶のトリス(2−カルボキシエチル)ホスフィン)塩酸塩、あるいは、2−メルカプトエチルアミン−HCl(2−MEA)である、請求項8記載のプロセス。
- 穏やかな還元剤が、約0.01乃至約0.03mMの濃度のDTT、または、約0.5mM乃至約1.5mMの濃度のMTGである、請求項9記載のプロセス。
- 選択的な還元条件が、脱凝集剤をさらに含む、請求項8記載のプロセス
- 脱凝集剤が尿素、アルギニン、グアニジンHCl、または、洗剤である、請求項11記載のプロセス。
- 約0.5mM〜約1.5mMのMTGと、約10%〜約20%のアルギニンとを含む製剤バッファー中の約1mg/ml〜約50mg/ml、約1mg/ml〜約25mg/ml、約1mg/ml〜約10mg/ml、約1mg/ml〜約5mg/ml、約5mg/ml〜約50mg/ml、約5mg/ml〜約25mg/ml、または、約5mg/ml〜約10mg/mlの組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を透析する工程、及び安定したタンパク質製剤を約3℃〜約25℃の保存温度で保存する工程を含む、安定した液体の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質製剤を調製する工程をさらに含む、請求項1又は2記載のプロセス。
- 細菌細胞溶解物が、組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質をコードする核酸配列を含む発現ベクターを用いて形質転換された宿主細胞から調製される、請求項1記載のプロセス。
- 宿主細胞がシュードモナス科細胞である、請求項14記載のプロセス。
- 宿主細胞がシュードモナス属細胞である、請求項15記載のプロセス。
- 核酸配列によってコードされた組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質が、SEQ ID NO3で説明されるようなアミノ酸配列、または、SEQ ID NO3で説明されるようなアミノ酸配列に対して少なくとも90%の同一性を有するアミノ酸配列を有している、請求項14記載のプロセス。
- 組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質をコードする核酸配列が、ペリプラズム分泌シグナル配列に融合される、請求項16記載のプロセス。
- 約0.5〜約1.5mMのMTGと約10%〜約20%のアルギニンとを含む製剤バッファー中の約1〜約5、約1〜約10、約1〜約20、約1〜約30、約1〜約40、または、約1〜約50mg/mlの組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を含み、保存温度が約3℃〜約25℃である、組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質の安定した液体製剤。
- 製剤バッファーが0.5×または1×PBSを含む、請求項19記載の安定した液体製剤。
- 製剤バッファーが0.5×または1×PBSを含む、請求項13記載のプロセス。
- 製剤バッファーが、約6.0〜約7.5、約6.4〜約7.2、約6.4〜約7.0、約6.6〜約6.8、約6.4、約6.7、または、約7.0のpHを有している、請求項20記載の安定した液体製剤。
- 製剤バッファーが、約6.0〜約7.5、約6.4〜約7.2、約6.4〜約7.0、約6.6〜約6.8、約6.4、約6.7、または、約7.0のpHを有している、請求項21記載のプロセス。
- 約1〜約5mg/mlのrCSP、約1.0mMのMTG、約10%のアルギニン、1×PBSを含み、約6.0〜約7.5のpHを有し、保存温度が約4℃〜約6℃である、請求項22記載の安定した液体製剤。
- 製剤バッファーが、約1.0mMのMTG、約10%から約20%のアルギニン、1×PBSを含み、約6.4〜約7.5のpHを有し、保存温度が約4℃〜約6℃である、請求項23記載のプロセス。
- 安定した液体組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質製剤が、多くて約1%、多くて約2%、多くて約3%、多くて約4%、多くて約5%、多くて約6%、多くて約7%、多くて約8%、多くて約9%、または多くて約10%の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体;多くて約1%、多くて約2%、多くて約3%、多くて約4%、多くて約5%、多くて約6%、多くて約7%、多くて約8%、多くて約9%、または多くて約10%の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質高分子量の凝集体;および、多くて約1%、多くて約2%、多くて約3%、多くて約4%、多くて約5%、多くて約6%、多くて約7%、多くて約8%、多くて約9%、または多くて約10%の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質分解産物の少なくとも1つを含む、請求項19記載の安定した液体製剤。
- 安定した液体組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質製剤が、多くて約1%、多くて約2%、多くて約3%、多くて約4%、多くて約5%、多くて約6%、多くて約7%、多くて約8%、多くて約9%、または多くて約10%の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質二量体;多くて約1%、多くて約2%、多くて約3%、多くて約4%、多くて約5%、多くて約6%、多くて約7%、多くて約8%、多くて約9%、または多くて約10%の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質高分子量の凝集体;および、多くて約1%、多くて約2%、多くて約3%、多くて約4%、多くて約5%、多くて約6%、多くて約7%、多くて約8%、多くて約9%、または多くて約10%の組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質分解産物の少なくとも1つを含む、請求項13記載のプロセス。
- 安定した液体製剤中でrCSPを安定して維持するためのプロセスであって、該プロセスは、
約6.0〜約7.5のpHの1×PBS中に、約1〜約5、約1〜約10、約1〜約20、約1〜約30、約1〜約40、または約1〜約50mg/mlのrCSP、約0.5〜約1.5mMのMTG、および、約1%〜約20%のアルギニンを含む安定した製剤を提供する工程を含み、
rCSPは、少なくとも約7日、少なくとも約8日、少なくとも約9日、少なくとも約10日、少なくとも約11日、少なくとも約12日、少なくとも約13日、少なくとも約14日、少なくとも約15日、少なくとも約16日、少なくとも約17日、少なくとも約18日、少なくとも約19日、少なくとも約20日、少なくとも約21日、少なくとも約22日、少なくとも約23日、少なくとも約24日、少なくとも約25日、少なくとも約30日、少なくとも約60日、少なくとも約70日、少なくとも約80日、少なくとも約90日、少なくとも約6か月、または、少なくとも約1年のあいだ、約3℃〜約25℃の温度で安定して維持される、プロセス。 - 安定した液体製剤中で精製された組み換え熱帯熱マラリア原虫スポロゾイト周囲タンパク質を安定して維持する工程をさらに含み、約6.0〜約7.5のpHの0.5×または1×PBS中に、約1〜約5、約1〜約10、約1〜約20、約1〜約30、約1〜約40、または、約1〜約50mg/mlのrCSP、約0.5〜約1.5mMのMTG、および、約1〜約20%のアルギニンを含む製剤を提供する工程を含み、
rCSPは、少なくとも約7日、少なくとも約8日、少なくとも約9日、少なくとも約10日、少なくとも約11日、少なくとも約12日、少なくとも約13日、少なくとも約14日、少なくとも約15日、少なくとも約16日、少なくとも約17日、少なくとも約18日、少なくとも約19日、少なくとも約20日、少なくとも約21日、少なくとも約22日、少なくとも約23日、少なくとも約24日、少なくとも約25日、少なくとも約30日、少なくとも約60日、少なくとも約70日、少なくとも約80日、少なくとも約90日、少なくとも約6か月、または、少なくとも約1年のあいだ、約3℃〜約25℃の温度で安定して維持される、請求項1又は2記載のプロセス。
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