JP2012120536A5 - - Google Patents
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- 配列番号2のポリペプチド配列をコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド分子を含むベクターで形質転換されたC.glutamicumおよびE.coliからなる群から選択される宿主細胞を培地中で培養する工程を含むリジンの生成方法であって、前記宿主細胞が前記培地中でリジンを生成する、方法。
- 前記宿主細胞が、1つ以上の追加のリジン生合成経路酵素をコードする1つ以上の遺伝子をさらに過剰発現する、請求項1に記載の方法。
- 前記1つ以上の追加の遺伝子が、1つ以上のプロモーター配列に直接的または間接的に操作可能に結合される、請求項2に記載の方法。
- 前記操作可能に結合されたプロモーター配列が、前記1つ以上の遺伝子に対して異種性、内因性、またはハイブリッドの配列である、請求項3に記載の方法。
- 前記プロモーター配列が、C.glutamicumに内因性の遺伝子の5’末端由来のプロモーター配列、C.glutamicumで複製するプラスミド由来のプロモーター配列、C.glutamicumで操作可能であるファージのゲノム由来のプロモーター配列の1つ以上である、請求項4に記載の方法。
- 1つ以上のリジン生合成経路酵素をコードする前記1つ以上の遺伝子が、
(a)アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性;
(b)ジヒドロジピコリン酸シンターゼ活性;
(c)ジヒドロジピコリン酸レダクターゼ活性;
(d)ジアミノピメリン酸デヒドロゲナーゼ活性;および
(e)ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性
をコードする遺伝子からなる群から選択される、請求項2に記載の方法。 - 前記単離ポリヌクレオチド分子が、
(a)配列番号4のasdアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(b)配列番号6のdapAアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(c)配列番号8のdapBアミノ酸配列をコードする核酸分子:
(d)配列番号10のddhアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(e)配列番号21の’lysAアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(f)配列番号14のlysAアミノ酸配列をコードする核酸分子;および
(g)配列番号16のORF2アミノ酸配列をコードする核酸分子
からなる群から選択される少なくとも1つの核酸分子をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記単離ポリヌクレオチド分子が、
(a)配列番号4のasdアミノ酸配列コードする核酸分子;
(b)配列番号6のdapAアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(c)配列番号8のdapBアミノ酸配列をコードする核酸分子;および
(d)配列番号16のORF2アミノ酸配列をコードする核酸分子
さらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記単離ポリヌクレオチド分子が:
(a)配列番号4のasdアミノ酸配列コードする核酸分子;
(b)配列番号6のdapAアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(c)配列番号8のdapBアミノ酸配列をコードする核酸分子:
(d)配列番号10のddhアミノ酸配列をコードする核酸分子;および
(e)配列番号16のORF2アミノ酸配列をコードする核酸分子
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記単離ポリヌクレオチド分子が、
(a)配列番号4のasdアミノ酸配列コードする核酸分子;
(b)配列番号6のdapAアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(c)配列番号8のdapBアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(d)配列番号10のddhアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(e)配列番号21の’lysAアミノ酸配列をコードする核酸分子;および
(f)配列番号16のORF2アミノ酸配列をコードする核酸分子
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記単離ポリヌクレオチド分子が、
(a)配列番号4のasdアミノ酸配列コードする核酸分子;
(b)配列番号6のdapAアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(c)配列番号8のdapBアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(d)配列番号10のddhアミノ酸配列をコードする核酸分子;
(e)配列番号14のlysAアミノ酸配列をコードする核酸分子;および
(f)配列番号16のORF2アミノ酸配列をコードする核酸分子.
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記単離ポリヌクレオチド分子が、pK184−KDABを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記単離ポリヌクレオチド分子が、pD11−KDABH’Lを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記単離ポリヌクレオチド分子が、pD2−KDABHLを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記宿主細胞が、Brevibacterium flavum NRRL−B30218、Brevibacterium flavum NRRL−B30219、Brevibacterium lactofermentum NRRL−B30220、Brevibacterium lactofermentum NRRL−B30221、Brevibacterium lactofermentum NRRL−B30222、Brevibacterium flavum NRRL−B30234、およびBrevibacterium lactofermentum NRRL−B30235からなる群から選択されるBrevibacterium flavumである、請求項1に記載の方法。
- 前記宿主細胞が、、Escherichia coli DH5αMCRNRR−B30228である、請求項1に記載の方法。
- 前記宿主細胞が、C.glutamicum NRRL−B30236およびC.glutamicum NRRL−B30237からなる群から選択されるC.glutamicum株である、請求項1に記載の方法。
- 前記1つ以上のプロモーター配列が、配列番号17と少なくとも95%の配列相同性を有する、請求項3に記載の方法。
- 前記プロモーター配列が、配列番号17のヌクレオチド配列を有する、請求項18に記載の方法。
- 前記活性が、アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性である、請求項6に記載の方法。
- 前記活性が、ジヒドロジピコリン酸シンターゼ活性である、請求項6に記載の方法。
- 前記活性が、ジヒドロジピコリン酸レダクターゼ活性である、請求項6に記載の方法。
- 前記活性が、ジアミノピメリン酸デヒドロゲナーゼ活性である、請求項6に記載の方法。
- 前記活性が、ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性である、請求項6に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号3のasdポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号6のdapAポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号8のdapBポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号10のddhポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号21の’lysAポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号14のlysAポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記追加のCorynebacterium種リジン経路遺伝子が、配列番号16のORF2ポリペプチドをコードする、請求項7に記載の方法。
- 前記アスパラギン酸セミアルデヒドデヒドロゲナーゼ活性が、配列番号3のポリヌクレオチドによってコードされるasdポリペプチドによって生ずる、請求項6に記載の方法。
- 前記ジヒドロジピコリン酸シンターゼ活性が、配列番号5のポリヌクレオチドによってコードされるdapAポリペプチドによって生ずる、請求項6に記載の方法。
- 前記ジヒドロジピコリン酸レダクターゼ活性が、配列番号7のポリヌクレオチドによってコードされるdapBポリペプチドによって生ずる、請求項6に記載の方法。
- 前記ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性が、配列番号9のポリヌクレオチドによってコードされるddhポリペプチドによって生ずる、請求項6に記載の方法。
- 前記ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性が、配列番号20のポリヌクレオチドによってコードされる’lysAポリペプチドによって生ずる、請求項6に記載の方法。
- 前記ジアミノピメリン酸デカルボキシラーゼ活性が、配列番号13のポリヌクレオチドによってコードされるlysAポリペプチドによって生ずる、請求項6に記載の方法。
- 前記ベクター由来の配列番号2のポリペプチド配列をコードする前記配列が、前記宿主細胞の染色体に組み込まれる、請求項1に記載の方法。
- 前記培地からリジンを精製する工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
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