JP2012024091A - プロテアーゼインヒビター及びそれらの変異体のバクテリア発現 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】融合タンパク質を含む組成物であって、前記融合タンパク質がプロテアーゼインヒビター及び所望のペプチドを含むことを特徴とする組成物。
【選択図】図1A
Description
a) Bowman-Birk インヒビター変異体、
b) Bowman-Birk インヒビター、及び
c) 少なくとも1の変異体配列を含むスキャッフォールド
から成る群より選択されるプロテアーゼインヒビター活性を有するポリペプチドを提供する。
本発明はバクテリア種の中でプロテアーゼインヒビター及びそれらの変異体を発現することに関係する組成物及び方法を提供する。本発明は更に融合核酸、ベクター、融合ポリペプチド、及びプロテアーゼインヒビターを得る工程を提供する。
本明細書で用いる、「発現カセット」及び「発現ベクター」の語は、標的細胞の中で特定の核酸を転写させる一連の特定の核酸エレメントを持つ、組換え又は合成により生成された核酸構築体を意味する。組換え発現カセットは、プラスミド、染色体、ミトコンドリアDNA、色素体DNA、ウイスル又は核酸フラグメントに取り込ませることができる。通常、発現ベクターの組換え発現カセット部分には、転写される核酸配列及びプロモーターが含まれる。「発現カセット」の語は、本明細書において、「DNA構築体」及びこの等価物を指す場合に互換的に使用される。
phase)中にあることを意味する。しかし、エンハンサーは隣接している必要はない。結合は、適宜の制限部位における連結反応(ligation)により達成される。そのような部位が存在しない場合には、従来法にしたがって合成オリゴヌクレオチド・アダプタ、又はリンカーを用いる。
2のタンパク質プロテアーゼインヒビター、クニッツ(Kunitz)タイプトリプシンインヒビター(ダイズトリプシンインヒビター、STI)及び「ボウマン-バーク(Bowman-Birk)インヒビター(BBI)が大豆から単離されている(Birk,Int. J. Pept. Protein Res., 25:113-131 [1985]及びKennedy, Am. J. Clin. Neutr.,68:1406S-1412S [1998] 参照のこと)。これらのインヒビターは、変異体配列に対するスキャッフォールドとして提供される。加えて、変異体配列を含むスキャッフォールドの修飾に加えて、本明細書で用いられる他の所望のタンパク質はC末端に6のヒスチジン残基を含む(図1及び2を参照のこと)。
STIは、適切な化学量論的複合体を形成することによりトリプシンのタンパク質分解活性を抑制する(Liu, Chemistry and NutritionalValue of Soybean Components, In : Soybeans, Chemistry. Technology and Utilization, pp. 32-35, Aspen Publishers, Inc., Gaithersburg, Md., [1999] 参照のこと)。STIは2のジスルフィド結合を有する181アミノ酸残基からなり、荒い球形をしている(Song et al., J. Mol. Biol., 275: 347-63
[1998] 参照のこと)。トリプシン抑制ループは第一ジスルフィド結合の中に存在する。クニッツ(Kunitz)タイプのダイズトリプシンインヒビター(STI)は、プロテイナーゼインヒビターの活性の標準的メカニズムの定義を導く生化学及び動態研究における主要な物質として用いられ、プロテイナーゼの初期の研究に重要な役割を果たしてきた。
ボウマン-バーク(Bowman-Birk)インヒビター(BBI)タンパク質は、豆科の種及び各種草を含む他の植物から単離された、動態学的及び構造学的によく知られているスモールタンパク質(60-90残基)のファミリーである。それらは、通常、それぞれ独立に結合ループを含んでいる2の三環式ドメインを含む左右対称構造をしている。しかしながら、1のドメインを有するもの、及び2より多いドメインを有するものもある。ダイズ(BBI)から単離された主に8kDa以下のボウマン-バーク(Bowman-Birk)インヒビター(BBI)は、2の分離した活性サイトループを有する。ループIはトリプシン様特異性を有するプロテアーゼを抑制し、ループIIは、キモトリプシン様特異性を有するプロテアーゼを抑制する(Chen etal., J. Biol. Chem., 267:1990 1994 [1992]、Wernerand Wemmer, Biochem., 31:999-1010 [1992]、Lin et al., Eur. J. Biochem., 212: 549-555 [1993]、Voss et al.,Eur. J. Biochem. , 242: 122-131 [1996]及びBillings et al., Pro. Natl. Acad. Sci.,
89: 3120-3124 [1992] 参照のこと)。これらの結合領域はそれぞれ、各種セリンプロテイナーゼインヒビターに見られる構造である「カノニカルループ(canonicalloop)」構造を含む(Bode and Huber, Eur. J. Biochem., 204: 433-451 [1992])。STI及びBBIはダイズの種の中のみに見られ、その植物の他の部分には見られない(Birk,Int. J. Pept.Protein Res., 25: 113-131 [1985] 参照のこと)。
上で説明するように、STI及びBBIプロテアーゼインヒビターはプロテアーゼを抑制する結合ループを有する。本発明は、1以上の活性部位が修飾されている(例えば、BBIのループI及び/又はループII)プロテアーゼインヒビター変異体を提供する。幾つかの好ましい態様において、標的タンパク質と相互作用する配列でこのループを置換する。
好ましい態様において、各プロテインプロテアーゼインヒビター又はそれらの変異体は宿主バクテリア細胞により融合タンパク質として発現される。所望のタンパク質を遊離するために融合タンパク質を切断することは有用であるが、必要ではない。融合タンパク質として発現及び分泌されたプロテアーゼインヒビター及びそれらの変異体は、驚くべきことにそれらの機能を保持している。
本発明は融合タンパク質の生産に依存しているので、本発明を実施するには組み換え遺伝子の分野の既存技術を用いる。本発明に用いる一般的方法が開示されている基本テキストには、Sambrooket al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2nd ed. 1989);Kriegler, GeneTransfer and Expression : A Laboratory Manual (1990); 及びAusubel et al., eds.,Current Protocols in Molecular Biology(1994)がある。
プロテアーゼインヒビター(すなわち、「PI-コード核酸配列」)をコードしている天然又は合成のポリヌクレオチドフラグメントは、異種の核酸構築体又はベクターに取り込まれ、バクテリア細胞の中に導入され、複製される。本明細書で開示するベクター及び方法は、プロテアーゼインヒビター及びそれらの変異体を発現させる各種宿主細胞に用いるのに適している。導入された細胞内で複製され、利用可能である限り、どのようなベクターでも用いることができる。本技術分野において数多くの適したベクター及びプロモーターが知られており、市販されている。適したクローニング及び発現ベクターは、本技術分野においてよく知られている文献に記載されている(上記のSambrooket al.,及びAusbel et al.,を参照のこと。これらの文献を参照により本明細書に援用する)。適切なDNA配列は適切な方法を用いてプラスミド又はベクター(これらを集合的に「ベクター等」と言う)内に挿入される。一般的にDNA配列は当該技術分野分野において既知の標準的方法を用いて適した制限エンドヌクレアーゼ内に挿入される。
幾つかの好ましい態様において、本発明の方法は、安定に組み込まれた所望の配列(すなわち、PIコード核酸)を含む宿主細胞を提供する。しかしながら、代替的な態様において、本発明の方法は、自己複製染色体外形質転換ベクターの維持も提供する。
vivo)で転写され、得られたRNAは宿主細胞内へ本技術分野でよく知られた方法を用いて導入される。
適切な宿主細胞は任意の好適なバクテリア種を含む。幾つかの態様において、バクテリア宿主細胞は発現宿主細胞及び第一及び第二核酸の供給源として機能する。本発明の方法及び宿主細胞を用いて、驚くべきレベルの発現を得ることができる。本明細書で用いるシステムを用いて達成されるプロテアーゼインヒビターの発現及び分泌レベルは0.5
g/l以上である。
本発明は培養されたバクテリア種に対する発酵方法に関係する。バクテリア種による異種タンパク質の生産に対する発酵方法は当該技術分野でよく知られている。培養は、水溶性ミネラル塩、培地、有機成長因子、炭素源及び栄養源となる物質、酸素分子(好気性及び嫌気性バクテリアに対する)を含み、用いられる1以上の特定の微生物種の開始接種をした培地中で行われる。
好ましい態様において、一旦所望のタンパク質が発現すると、分泌タンパク質が分離される。本発明はその融合類似体から所望のタンパク質を分離する方法を提供する。本明細書で述べる方法はプロテアーゼインヒビター及びその変異体を融合類似体から分離することに用いることができる。
20: 285-286 [1995] 参照のこと)。6のヒスタグを付加されたタンパク質は、当該技術分野で知られている固定金属イオン親和クロマトグラフィー(IMAC)を用いて容易に精製することができる。
特定の使用目的のためには、本発明を用いて製造されたプロテアーゼインヒビターは高度に精製されていることが重要となる(例えば、99 %以上の精製度)。精製タンパク質が治療に用いられるときには高度に精製されていることは特に重要であるが、他の使用目的においても必要である。本発明の明細書で述べる方法は、実質的に精製された所望のタンパク質を製造する方法である。本明細書で述べる所望のタンパク質は、医薬品及びパーソナルケア製品に有用である。しかしながら、各種精製レベルのタンパク質が本発明の方法を用いて製造され、本発明の方法を用いて精製したタンパク質が特定の精製レベルであることは意図しない。
本発明の幾つかの態様において、精製工程における育成の後、ジスルフィド結合を酸化及び/又は還元する組成物、及び/又は通常の酸化還元電位を変更する組成物、及び/又は溶媒の性質を変更しタンパク質の構造及び凝集に影響を与える組成物を添加することによりタンパク質の活性が増強される。幾つかの特定の好ましい態様において、2-メルカプトエタノールのようなジスルフィド結合を還元する試薬の添加は、タンパク質の活性を高めるのに使用される。しかしながら、当該技術分野において知られているように、精製度及び緩衝液の組成に依存して、他のジスルフィド還元又は酸化試薬(例えば、DTT、
TCEP、酸化及び還元グルタチオン、システイン、 シスチン、 システアミン、 チオグリコレート、S2O3 2-、S2O4 2-、S2O5 2-、SO3 2-、S2O7 2-、Cu+、タンパク質ジスルフィド イソメラーゼ、タンパク質チオールジスルフィド オキシドレダクターゼ等)を単独で、又は組み合わせて本発明に用いることができる。単独で、又はβME等のジスルフィド酸化還元試薬と組み合わせて溶媒の性質を変更する他のアジュバンド(例えば、エタノールアミン、DMSO、TWEEN(登録商標)-80、アルギニン、尿素、等)も、タンパク質の活性を高めるために本発明に用いることができる。特定の好ましい態様において、部分的に精製されたタンパク質が緩衝液の中に溶解され(特に好ましい態様において、塩基性pHにおけるTWEEN(登録商標)-80を用いた両性イオン緩衝液)bME及びジスルフィド酸化試薬(代替的な好ましい態様は、酸化グルタチオン又は硫酸ナトリウム)を用いて活性化される。
本発明は、以下の実施例においてより詳細に説明されるが、これら実施例に本発明を限定することは意図していない。添付の図は、明細書及び本発明の不可欠な部分である。引用された全ての文献は本発明の開示のために参照により本明細書に援用される。以下の実施例は、本発明を説明するためのものであり、本発明を限定するためのものではない。
kb(キロベースペア)、kD (キロダルトン)、cDNA(転写又は相補DNA)、DNA(デオキシリボ核酸)、ssDNA(一本鎖 DNA)、dsDNA(二本鎖DNA)、dNTP(デオキシリボヌクレオチド三リン酸)、RNA(リボ核酸)、MgCl2(塩化マグネシウム)、NaCl(塩化ナトリウム)、w/v(容量対重量)、v/v(重量対重量)、g(比重)、OD(光学密度)、ダルベッコリン酸緩衝溶液(DPBS)、SOC(2% バクト-トリプトン、0.5 % バクトイースト抽出物、10 mM NaCl、2.5 mM KCl),テリフィックブロス(TerrificBroth)(TB;12 g/l バクト-トリプトン, 24 g/lグリセロール、2.31 g/l KH2PO4、及び12.54g/l K2HPO4) 、OD280(280 nmにおける光学密度) 、OD600(600nmにおける光学密度) 、A405 (405 nmにおける吸光度)、Vmax(酵素触媒反応における最大速度)、PAGE(ポリアクリルアミドゲル電気泳動)、PBS(リン酸緩衝生理食塩水 [150 mM NaCl、10 mM リン酸緩衝液、pH 7.2]) 、PBST(PBS+0.25% TWEEN(登録商標)20)、PEG(ポリエチレングリコール)、PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)、RT-PCR(逆転写PCR)、SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、Tris(トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン)、HEPES(N-[2-ヒドロキシエチル] ピペラジン-N-[2-エタンスルホン酸] )、HBS(HEPES 緩衝生理食塩水)、SDS(ドデシル硫酸ナトリウム)、bME,BME 及びβME (ベータメルカプトエタノール又は2-メルカプトエタノール)、Tris-HCl(トリス [ヒドロキシメチル]アミノメタン-クロライド)、Tricine(トリシン)(N-[トリス-(ヒドロキシメチル)-メチル]グリシン)、CHES(2-(N-シクロ-ヘキシルアミノ)エタン-スルホン酸)、TAPS(3-{[トリス-(ヒドロキシメチル)-メチル]-アミノ}-プロパンスルホン酸)、CAPS(3-
(シクロ-ヘキシルアミノ)-プロパンスルホン酸)、DMSO(ジメチルスルホキシド)、DTT(1,4-ジチオ-DL-トレイトール)、Glut 及び GSH (還元グルタチオン)、GSSG(酸化グルタチオン)、TCEP(トリス[2-カルボキシメチル]ホスフィン)、Ci(キューリ)、mCi(ミリキューリ)、μCi(マイクロキューリ)、TLC(薄層クロマトグラフィー)、Ts(トシル)、Bn(ベンジル)、Ph(フェニル)、Ms(メシル)、Et(エチル)、Me(メチル)、Taq(サーマスアクアチクス(Thermusaquaticus)DNA ポリメラーゼ)、Klenow(DNA ポリメラーゼ I ラージフラグメント(Klenow(クレノウ))フラグメント )、rpm(一分当たりの回転数)、EGTA(エチレングリコール-ビス(β-アミノメチル エーテル)N, N, N', N'-四酢酸)、EDTA(エチレンジアミン四酢酸)、bla(β-ラクタマーゼ 又は アンピシリン耐性遺伝子)、GEHealthcare (GEヘルスケア、チャルフォントストリート、ジャイルズ、UK)、DNA2.0(DNA2.0、メロンパーク、カリフォルニア)、OXOID(オキシドベージングストーク、ハンプシャー、UK)、Megazyme(メガザイム インターナショナル アイルランド社、ブレービジネスパーク、ブレー、ウィックロー、アイルランド)、Coming(コーニングライフサイエンス、コーニング、ニューヨーク)、NEN(NENライフサイエンスプロダクツ、ボストン、マサチューセッツ)、Pharma AS(ファルマAS, オスロ、ノルウェイ)、Dynal(ダイナル、オスロ、ノルウェイ)、Bio-Synthesis(バイオ-シンセシス、ルイスビル、テキサス)、ATCC(アメリカンタイプカルチャーコレクション、ロックイビル、メリーランド)、Gibco/BRL(ギブコ/BRL、グランドアイランド、ニューヨーク)、Sigma(シグマケミカル社、セントルイス、ミズリー)、Pharmacia(ファルマシア、ピスカタウェイ、ニュージャージー)、NCBI(全米バイオテクノロジー情報センター)、Applied Biosystems(アプライドバイオシステム、フォスターシティー、カリフォルニア)、Clontech(クローンテックラボラトリーズ、パロアルト、カリフォルニア)、OperonTechnologies(オペロンテクノロジイーズ社、アラメダ、カリフォルニア)、MWG Biotech(エムダブリュジーバイオテック、ハイポイント、ノースカロライナ)、Oligos
Etc(オリゴイーティーシ社、ウィルスンビル、オーランド)、Bachem (ベイケムバイオサイエンス社、キングオブプルシア、ペンシルバニア)、Difco(ディフコラボラトリーズ、デトロイト、ミシガン)、Mediatech(メディアテック、ハードン、バージニア)、Santa Cruz(サンタクルーズバイオテクノロジー、カリフォルニア)、BioVeris(バイオベリス社、ゲーサーズバーグ、メリーランド)、Oxoid(オキシド社、オグデンスブルグ、ニューヨーク)、Worthington(オージントンバイオケミカル社、フリーホールド、ニュージャージー) 、GIBCO BRL 又は Gibco BRL (ライフテクノロジー社、ゲーサーズバーグ、メリーランド)、Millipore(ミリポア、ビルリカ、マサチューセッツ)、Bio-Rad(バイオラド、ハーリーキューズ、カリフォルニア)、Invitrogen(インビトロジェン社、サンディエゴ、カリフォルニア)、NEB(ニューイングランドバイオラドズ、ベバリー、マサチューセッツ)、Sigma(シグマケミカル社、セントルイス、ミズリー)、Pierce(ピアスバイオテクノロジー、ロックフォード、イリノイ)、Takara(タカラ・バイオ社、大津、日本)、Roche(ホフマン-ラ・ロッシュ、バーゼル、スイス)、EM Science(エムイーサイエン、ギブスタウン、ニュージャージー)、Qiagen(キアゲン社、バレンシア、カリフォルニア)、Biodesign(バイオデザイン社、ソーコ、メイン)、Aptagen(アプタゲン社、ハーンダン、バージニア)、MolecularDevices(モレキュラーデバイス社、サニーベール、カリフォルニア)、R & D Systems(R & D システムズ、ミネアポリ、ミネソタ)、Stratagene(ストラタジェンクローニングシステムズ、ラホーヤ、カリフォルニア)、Marsh(マーシュバイオサイエンス、ロチェスター、ニューヨーク)、Bio-Tek(バイオテック社、ウィヌースキー、 バーモント)、Biacore(ビアコア社、ピスカタウェイ、ニュージャージー)、PeproTech(ペプロテック、ロッキーヒル、ニュージャージー)、SynPep(シンペップ、ダブリン、カリフォルニア)、及びMicrosoft(マイクロソフト社、レドモンド、ワシントン)。
この実施例では、バチルススブチルス(B. subtilis)中にBCE103-BBI融合タンパク質を生産するために行った試験を説明する。この試験に用いられるC末端にヘキサヒスチジンタグを有するプロ-BBIタンパク質をコードする合成遺伝子(Operon
Technologies)のDNA配列は以下である。
Biochemistry, Physiology, and Molecular Genetics, Sonenshein, Hoch, and Losick
(eds), American Society for Microbiology, Washington D.C., pp. 615-624 [1993])。C末端にヒスチジンタグ(His-tag)を有するダイズボウマン-バーク(Bowman-Birk)プロテアーゼインヒビター(BBI)(Swiss-ProtAccession #P01055;Odani and Ikenaka, J. Biochem., 71: 839-848 [1972]参照のこと)は、オペロンテクノロジー(OperonTechnologis)(上記DNA配列を参照のこと)により合成された。3’HindIII部位を用いてBBI遺伝子をpJM103ベクター内でクローンさせた後に、BCE103遺伝子を用いる正確なりーディングフレーム中に5’BamHI部位及び3’末端に導入された強力な転写終了因子を生成するプライマーを用いてBBI遺伝子をPCRにより増幅した(全プライマーはMWG Biotech、OligosEtc.又はOperon Technologiesにより合成された)。
μLに、80 μLの5 ng/mlのウシ脾臓トリプシン(Worthington)(アッセイ緩衝液の中へ、1 mg/mlトリプシンストック溶液を希釈することにより作製された)。便宜上、この標準物質とサンプルを96ウェルマイクロタイタープレート中に整列させた。混合及び25℃15分間のインキュベーションにより反応を行った。インキュベーションの後、0.5
mg/mlのトリプシン基質100 μL(DMSO中100 mg/mlの溶液からアッセイ緩衝液の希釈により調整)、Suc-AAPR-pNA(スクシニル-アラニン-アラインヒビター-プロリン-アルギニン-パラニトロアニリド、Bachem)を添加し、混合し、OD(A405)を15分間モニターした。ペクトラマックス250(SpectraMax250)(Moleculaer Devices)を用いて少なくとも12秒毎に一回記録をとった。記録されたデータのポイントは、各反応に対するVmaxの決定に用いた。標準曲線は、BBI濃度に対するVmaxのプロットにより作製し、4の指標曲線に当てはめた。全てのデータのフィッティングは製造会社(MolecularDevices)が提供するソフトウェアを用いて行われた。未知サンプルのBBI濃度を標準曲線を用いて計算した。代替的に、BBI活性は同じ手順を用いてウシ脾臓キモトリプシン(Worthington)抑制を検出することにより測定された(キモトリプシンは、トリプシンと同じ濃度で用い、キモトリプシン活性は、100μLの0.4 mg/mlキモトリプシン基質、スクシニル-アラニン-アラニン-プロリン-パラニトロアニリド、(Bachem)の添加により測定された)。
この実施例では、BCE103-BBIのようにBBI反応部位へ置換するペプチドを生成するための試験を説明する。これらの試験の各工程に用いるプライマー及び他の配列を以下に記載する。BCE103融合部位(BamIIIの位置)から遺伝子の終わりまでの12BBIck81配列を図3に示す。CK37281ペプチド配列(ACYNLYGWTC(配列番号9))をトリプシン及びキモトリプシン抑制ループの両方に挿入した。
をBBIの中へ移植した。構築を促進させるために、上で示すBowBeco_F 及びBowBeco_Rプライマーを用いたQuikChange(登録商標)部位直接変異誘発を用いて製造会社の説明書に記載従い、トリプシン及びキモトリプシン反応部位ループの間のBBI遺伝子(OperonTechnologiesの合成品 ; 実施例1を参照のこと)のコード領域にEcoRIサイトを導入した (0.5 pmol の各プライマーを QuikChange(登録商標)
反応に用いた。97 ℃で3分間の第一変性工程の後、68 ℃で12分間、95 ℃で30秒間及び55 ℃で1分間のPCRサイクルを18回行い、その後に68 ℃で15分間の最終伸長を行った)。
kDa付近の主要タンパク質バンドの存在により視認することができる有意なBBI部分の退縮(degradation)(50 %まで)(特にMBD倍地中で48時間以上育成した場合)が見られた。このケースにおいて、BCE103セルラーゼの力価は、野生型BBI(実施例1)に融合させて測定したの同様であるが、BBIの活性は通常の半分以下であった。
E、△epr、△ispA、△bpr、△vpr、△wprA、△mpr-ybiF、△nprB、amyE : : xylRPxylAcomK-phleo)を欠失させたバチルススブチルス(Bacillussubtilis)系統を発現宿主細胞として用いた。育成温度(35 ℃)及び通気量(200 rpm)を減らした。これらの変更により、主要融合タンパク質バンド(〜44kDa)はBCE触媒コア(〜34 kDa)と思われる分子量で存在するバンドと大差なく、SDS-PAGE上で観察された。
(2) プロテアーゼファクターXa、又は角質溶解キモトリプシンXal(第二ループ)又はhSCC1(第一ループ)に結合するためのペプチド
(3) FGF5結合反応により選択されたペプチド; 1A6 (第一又は第二ループ)、1C2 (第一又は第二ループ)、2E2 (第一又は第二ループ)、2E5(第一、第二、又は両ループ),FGFns(第一又は第二ループ)、FGFkr(第一又は第二ループ)、FGFhl(第一又は第二ループ)、FGFgy (第一又は第二ループ)、MM005(第一又は第二ループ)、MM007(第一、第二、又は両ループ)、MM009 (第二ループ)、MM010(第一、第二、又は両ループ)、MM017 (第二ループ)、FGFps1(第二ループ)、FGFps2(第一、第二、又は両ループ)、及びFGFpsB(第二ループ) 、及び
(4) TGF-1結合反応により選択されたペプチド;1A8(第二ループ)、lA12 (第二ループ), lE11 (第二ループ)、TGFpsl(第二ループ)及びMM021(第二ループ)。
育成の後の(トリプシン又はキモトリプシンの抑制による)BBIの活性は、(2の分子が融合タンパク質の中で1:1のモル比で存在する)無細胞上清中で測定されるBCE103セルラーゼの活性から予想されるものよりも通常5乃至20倍低い。BCE103-BBI融合タンパク質中のBBI活性の増加(トリプシン又はキモトリプシン抑制により測定される)は、接種の後、1-4mMの濃度のbMEをMBD成長培地に添加した後14時間育成することにより確実に得ることができる。融合タンパク質中のBBIのトリプシン又はキモトリプシン抑制活性は、結合ペプチド(例えば、VergF結合ペプチドCK37281)をキモトリプシン又はトリプシン反応部位ループにそれぞれ置換したときよりも低くなる。野生型BBIを用いて、bMEで処理することによって、抑制活性は増加させることができる。予想しないことに、これらの試験においてBBI育成の間の活性における他のチオール還元試薬(例えば、システイン、還元グルタチオン、DL-ジチオスレイトール(dithiothreitol)及びトリス[2-カルボキシメチル]フォスフィン)の影響は小さいか、無視できる程度であった。抗酸化剤(例えば、アスコルビン酸又はDL-α酢酸トコフェロール)、他のアジュバンド(例えば、イソロイシン、ダイズオイル、Tween(登録商標)-80)を培地に添加すること、又は30℃における育成も、BCE103:BBI活性の比を改善しなかった。
mMの最終濃度で添加し、振とう機上で室温、一晩インキュベートした。このサンプルは、更に磁気攪拌プレート上で激しく攪拌しながら60時間室温でインキュベートした。(βMEで処置する前後の)BCE103及び2BBIck81の力価を、それぞれ、セルラーゼアッセイ及びトリプシン抑制アッセイにより決定した。
この実施例は、BCE103-BBI融合タンパク質を切断による遊離BBI又はその変異体の放出について説明する。
(配列番号 179)である。GeneaseI部位(Gen4 リンカーは太字([]ので囲む配列)で(チロシン及びバリンの間に発生する切断)(NEB)、リンカー2は下線で示。Mprによる切断もGen4リンカーの中のバリンの後のグルタミンの後に発生させることができる。本発明で用いられる配列はBCE-(配列番号179)-BBI である。
subtilis)により製造される固有のプロテアーゼを用いてこれは育成の間に行われる。幾つかの代替的な態様において、この切断は育成の後の精製工程(例えば、酸/熱又はタンパク質分解切断)dで行われる。リンカーは育成の間の切断に感受性を有する可能性のあるものが設計され(上記、sub、cbdl、pro、shortpro、及びcbdD)、BamHI-SacIカセットとして、pJM103BBI又はp2JM103BBI発現ベクター内でクローニングされる。融合タンパク質に対するBCE103触媒ドメインの生成は実施例1で説明されるSDS-PAGEゲル上で解析された。
bpのフラグメントを、BamHI及びPstIを用いて消化し、精製し、BanHI及びPstIを用いて消化したp2JM103BBIに結合した。正確な配列をDNA配列決定法により確認し、上で述べたように、p2JM103plnk-BBI、p2JM103plnk2-BBI及びp2JM103pllnk3-BBIは、バチルススブチルス(B.subtilis)の形質転換に用いた。
subutilis)Mpr又はV8プロテアーゼ等のグルタミン酸特異プロテアーゼにより切断されやすいと予測されるグルタミン酸残渣がある(図1)。しかしながら、BsMpr又はV8プロテアーゼのいずれもがこれらの部位でBCE-BBI融合タンパク質を切断することが困難であることがわかった。従って、これらのプロテアーゼにより切断されやすい他のリンカーを設計することが必要であった。
本実施例は、BBIcK81のVegFへの結合を評価するために行う試験について述べる。BCE103-lnk2-2BBIck81融合タンパク質は実施例2で述べたように、バチルススブチルス(B. subtilis)を用いて生成された。融合タンパク質を生成し、実施例3に記載されているように、βME及び酸化グルタチオンを用いた処理により、BBIトリプシン抑制活性が増加された。融合タンパク質はBsMprプロテアーゼ(実施例4参照のこと)により切断され、Qセファロースカラムを用いたイオン交換クロマトグラフィーによりBCE103触媒ドメインから2BBIcK81を精製した。
Veris)に基づく、電気化学発光(ECL)分析を用いて解析された。抗-VegF抗体(Santa Cruz)及びVegF(Pepro Tech)は、製造会社(BioVeris)の説明書に従って電気化学発光ダイ及びビオチンでそれぞれ標識した。全ての材料は0.1 %Tween(登録商標)-80を用いてダルベッコPBS(Mediatech)中に溶解した。抗-VegF抗体の一連の希釈物(125、250、及び500ng/ml)及びVegFの一連の希釈物(100、150、200及び250 ng/ml)は、強固なECLシグナルを与える濃度を決定するためにアッセイされた。
本実施例は、融合代替パートナーを評価するための試験を説明する。pET-40(+)由来のdsbc遺伝子(大腸菌)を増殖させるのに用いるオリゴヌクレオチドプライマーのDNA配列を以下に示す。このプライマーはp2JM103-Gen4-2BBIck81内へのクローニングのために5’末端にBssHII部位を、3’末端にBanHI部位を生成する。
sbutilis)の中で高い力価で製造される他のタンパク質も融合パートナーとして用いることができる。例えば、フミコーラインソレンス(Humicolainsolens)由来の熱安定タンパク質ジスルフィドイソメラーゼ(hiPDI)は、バチスルスブレビス(Bacillus brevis)の中の免役グロブリンの軽鎖(2ジスルフィド)の融合パターンとして用いられている(Kajinoet al., Appl. Env. Microbiol. , 66:638-642 [2000])参照のこと。
Claims (12)
- 融合タンパク質を含む組成物であって、前記融合タンパク質がプロテアーゼインヒビター及び所望のペプチドを含むことを特徴とする組成物。
- 請求項1の組成物であって、前記融合タンパク質が配列番号2,4,6及び8から成る群より選択されたアミノ酸を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項2に記載の組成物であって、前記融合タンパク質が配列番号1,3,5及び7から成る群より選択される核酸配列によりコードされることを特徴とする組成物。
- 請求項1に記載の組成物であって、前記プロテアーゼインヒビターがボウマン−バーク(Bowman-Brik)インヒビター(BBI)、ダイズトリプシンインヒビター(STI)、及びエグリン(eglin)Cから成る群より選択されるプロテアーゼインヒビターであることを特徴とする組成物。
- 請求項4に記載の組成物であって、前記プロテゼーゼインヒビターがBBIであり、前記BBIがトリプシンループ及びキモトリプシンループから成る群より選択される少なくとも1のループを含むことを特徴とする組成物。
- 請求項4に記載の組成物であって、前記プロテアーゼインヒビターが前記所望のペプチドのスキャッフォールドであることを特徴とする組成物。
- 請求項5に記載の組成物であって、前記ループが前記所望のペプチドを含むことを特徴とする組成物。
- 請求項5に記載の組成物であって、前記所望のペプチドが配列番号9で定義されるアミノ酸配列を含むことを特徴とする組成物。
- 請求項5に記載の組成物であって、前記融合タンパク質が配列番号4で定義されるアミノ酸配列を有することを特徴とする組成物。
- 配列番号10及び12で定義されるポリペプチド配列から成る群から選択されるプロテアーゼインヒビターをコードする単離ポリヌクレオチド。
- スキャッフォールドタンパク質及び少なくとも1のペプチドを含む組成物であって、前記スキャッフォールドタンパク質がボウマン-バーク(Bowman-Brik)インヒビターを含むことを特徴とする組成物。
- 請求項1乃至9及び11のいずれか1項に記載の組成物であって、前記少なくとも1のペプチドが血管内皮成長因子に結合することを特徴とする組成物。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20120099303A (ko) * | 2003-11-06 | 2012-09-07 | 다니스코 유에스 인크. | 프로테아제 저해자 및 그 변이체의 사상균 내에서의 발현 |
ATE486087T1 (de) * | 2003-11-06 | 2010-11-15 | Danisco Us Inc | Fgf-5-bindende und geträgerte peptide |
EP1800136B1 (en) * | 2004-10-15 | 2011-12-07 | Danisco US Inc. | Competitive differential screening |
US9084734B2 (en) * | 2005-05-05 | 2015-07-21 | Danisco Us Inc. | Peptide personal care compositions and methods for their use |
CA2610976C (en) | 2005-06-10 | 2020-11-24 | Robbie Woodman | Use of stefin a as a scaffold protein |
AR054165A1 (es) * | 2005-07-13 | 2007-06-06 | Avidia Inc | Proteinas de union a il-6 |
GB0601684D0 (en) * | 2006-01-27 | 2006-03-08 | Reckitt Benckiser Uk Ltd | Composition, process for preparation and method of use |
WO2007092465A2 (en) * | 2006-02-07 | 2007-08-16 | Dyao Pharmaceutical Corporation | Topical delivery compositions |
EP2641608B1 (en) * | 2006-09-16 | 2015-03-04 | SOY Labs LLC | Pharmaceutical composition comprising lunasin enriched seed extract and soy flour |
US20080124355A1 (en) | 2006-09-22 | 2008-05-29 | David Gordon Bermudes | Live bacterial vaccines for viral infection prophylaxis or treatment |
US20080090745A1 (en) * | 2006-10-13 | 2008-04-17 | Fox Bryan P | Expression of Streptomyces subtilism inhibitor (SSI) proteins in Bacillus and Streptomyces sp. |
WO2008076323A2 (en) * | 2006-12-18 | 2008-06-26 | Danisco Us, Inc., Genencor Division | Laccase mediators and methods of use |
EP2097519A2 (en) | 2006-12-21 | 2009-09-09 | Danisco US, INC., Genencor Division | Compositions and uses for an alpha-amylase polypeptide of bacillus species 195 |
JP5594895B2 (ja) * | 2007-06-06 | 2014-09-24 | ダニスコ・ユーエス・インク、ジェネンコー・ディビジョン | タンパク質の能力の改良方法 |
US20090048136A1 (en) * | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Mcdonald Hugh C | Kappa-carrageenase and kappa-carrageenase-containing compositions |
CA2703951A1 (en) * | 2007-10-31 | 2009-05-07 | Danisco Us Inc. | Use and production of neutral metalloproteases in a serine protease-free background |
CN101842479A (zh) * | 2007-11-01 | 2010-09-22 | 丹尼斯科美国公司 | 用于改良宿主细胞内蛋白质生产的信号序列和共表达的分子伴侣 |
GB0722332D0 (en) * | 2007-11-14 | 2007-12-27 | Reckitt Benckiser Uk Ltd | Personal care article |
JP2011508610A (ja) * | 2008-01-29 | 2011-03-17 | ダニスコ・ユーエス・インク | バチルス属とストレプトマイセス属の種におけるストレプトマイセススブチリシン阻害剤(ssi)タンパク質の発現 |
US8236545B2 (en) | 2008-02-04 | 2012-08-07 | Danisco Us Inc., Genencor Division | TS23 alpha-amylase variants with altered properties |
US7772181B2 (en) * | 2008-10-15 | 2010-08-10 | Danisco Us Inc. | Personal care compositions comprising modified variant Bowman Birk Protease Inhibitors |
US7803902B2 (en) | 2008-10-15 | 2010-09-28 | Danisco Us Inc. | Modified variant bowman birk protease inhibitors |
AU2008362898B2 (en) | 2008-10-15 | 2013-02-28 | Danisco Us Inc. | Modified variant Bowman Birk Protease inhibitors |
US8241623B1 (en) | 2009-02-09 | 2012-08-14 | David Bermudes | Protease sensitivity expression system |
WO2010104675A1 (en) | 2009-03-10 | 2010-09-16 | Danisco Us Inc. | Bacillus megaterium strain dsm90-related alpha-amylases, and methods of use, thereof |
US20100247693A1 (en) * | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Marini Jan L | Cosmetic formulation to treat rosacea telangiectasia |
CN102388131B (zh) | 2009-04-08 | 2014-04-30 | 丹尼斯科美国公司 | 盐单胞菌属菌株WDG195相关α-淀粉酶及其使用方法 |
CN105238801A (zh) | 2009-04-24 | 2016-01-13 | 丹尼斯科美国公司 | 具有修饰的原区的蛋白酶 |
CA2760554A1 (en) * | 2009-05-01 | 2010-11-04 | Signal Investment And Management Co. | Moisturizing antimicrobial composition |
AR076941A1 (es) | 2009-06-11 | 2011-07-20 | Danisco Us Inc | Cepa de bacillus para una mayor produccion de proteina |
US20110052676A1 (en) * | 2009-09-01 | 2011-03-03 | James Vincent Gruber | Composition For Delaying Cellular Senescence |
EP2478003A4 (en) | 2009-09-15 | 2013-05-29 | Five Prime Therapeutics Inc | HAIR GROWTH METHODS USING THE EXTRACELLULAR DOMAINS OF FGFR4 |
GB0921001D0 (en) * | 2009-11-30 | 2010-01-13 | Aqua Bio Technology Asa | Products and uses |
AR079338A1 (es) | 2009-12-09 | 2012-01-18 | Danisco Us Inc | Variantes de proteasa de bacillus y acidos nucleicos que codifican dichas variantes |
EP2512501A4 (en) | 2009-12-17 | 2014-01-01 | Five Prime Therapeutics Inc | METHODS FOR PROMOTING HAIR GROWTH USING FGFR3 EXTRACELLULAR DOMAINS |
CN102770147A (zh) * | 2009-12-30 | 2012-11-07 | 索莱有限责任公司 | 从大豆工艺流中分离的纯化的库尼兹胰蛋白酶抑制剂蛋白 |
US8771669B1 (en) | 2010-02-09 | 2014-07-08 | David Gordon Bermudes | Immunization and/or treatment of parasites and infectious agents by live bacteria |
US8524220B1 (en) | 2010-02-09 | 2013-09-03 | David Gordon Bermudes | Protease inhibitor: protease sensitivity expression system composition and methods improving the therapeutic activity and specificity of proteins delivered by bacteria |
US9597379B1 (en) | 2010-02-09 | 2017-03-21 | David Gordon Bermudes | Protease inhibitor combination with therapeutic proteins including antibodies |
US9687591B2 (en) | 2010-03-31 | 2017-06-27 | Agency For Science, Technology And Research | Building stratified biomimetic tissues and organs using crosslinked ultrashort peptide hydrogel membranes |
JP5833096B2 (ja) | 2010-03-31 | 2015-12-16 | エイジェンシー フォー サイエンス, テクノロジー アンド リサーチAgency For Science,Technology And Research | 両親媒性直鎖状ペプチド/ペプトイドおよびそれを含むヒドロゲル |
US8999916B2 (en) | 2010-03-31 | 2015-04-07 | Agency For Science, Technology And Research | Crosslinked peptide hydrogels |
AR080886A1 (es) | 2010-04-15 | 2012-05-16 | Danisco Us Inc | Composiciones y metodos que comprenden proteasas variantes |
CA2798451C (en) | 2010-05-06 | 2020-10-06 | Danisco Us Inc. | Compositions and methods comprising subtilisin variants with t022a-e271f substitutions |
US8481038B2 (en) | 2010-11-15 | 2013-07-09 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Treatment of cancer with elevated dosages of soluble FGFR1 fusion proteins |
JP5933688B2 (ja) | 2011-05-05 | 2016-06-15 | ザ プロクター アンド ギャンブル カンパニー | セリンプロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 |
AR086281A1 (es) | 2011-05-05 | 2013-12-04 | Danisco Us Inc | Composiciones y metodos que comprenden variantes de serina proteasas |
AR087745A1 (es) | 2011-08-31 | 2014-04-16 | Danisco Us Inc | Composiciones y metodos que comprenden una variante de enzima lipolitica |
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BR112015010104A2 (pt) | 2012-11-05 | 2017-08-22 | Danisco Us Inc | Variante de enzima termolisina, composição e método de limpeza |
EP2935573A1 (en) | 2012-12-19 | 2015-10-28 | Danisco US Inc. | Novel mannanase, compositions and methods of use thereof |
US9593339B1 (en) | 2013-02-14 | 2017-03-14 | David Gordon Bermudes | Bacteria carrying bacteriophage and protease inhibitors for the treatment of disorders and methods of treatment |
EP3260538B1 (en) | 2013-05-29 | 2021-04-14 | Danisco US Inc. | Novel metalloproteases |
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EP3022299B1 (en) | 2013-07-19 | 2020-03-18 | Danisco US Inc. | Compositions and methods comprising a lipolytic enzyme variant |
JP6678108B2 (ja) | 2013-09-12 | 2020-04-08 | ダニスコ・ユーエス・インク | Lg12−系統群プロテアーゼ変異体を含む組成物及び方法 |
MX2016004573A (es) * | 2013-10-11 | 2016-07-21 | Genentech Inc | Inhibidores de nsp4 y metodos de uso. |
MX2016005614A (es) | 2013-11-01 | 2016-12-09 | Spherium Biomed S L | Cuerpos de inclusion para el suministro transdermico de agentes terapeuticos y cosmeticos. |
TR201906371T4 (tr) | 2013-12-13 | 2019-05-21 | Danisco Inc | Bacillus türlerinin serin proteazları. |
WO2015089447A1 (en) | 2013-12-13 | 2015-06-18 | Danisco Us Inc. | Serine proteases of the bacillus gibsonii-clade |
US9737592B1 (en) * | 2014-02-14 | 2017-08-22 | David Gordon Bermudes | Topical and orally administered protease inhibitors and bacterial vectors for the treatment of disorders and methods of treatment |
WO2015143360A2 (en) | 2014-03-21 | 2015-09-24 | Danisco Us Inc. | Serine proteases of bacillus species |
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WO2016069569A2 (en) | 2014-10-27 | 2016-05-06 | Danisco Us Inc. | Serine proteases |
EP3212662B1 (en) | 2014-10-27 | 2020-04-08 | Danisco US Inc. | Serine proteases |
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DK3268471T3 (da) | 2015-03-12 | 2019-12-02 | Danisco Us Inc | Sammensætninger og fremgangsmåder omfattende lg12-clade-proteasevarianter |
EP4219704A3 (en) | 2015-05-13 | 2023-08-23 | Danisco US Inc | Aprl-clade protease variants and uses thereof |
CN107922934A (zh) | 2015-06-17 | 2018-04-17 | 丹尼斯科美国公司 | 具有经修饰的前肽区域的蛋白酶 |
CN107849549B (zh) | 2015-06-17 | 2024-04-05 | 丹尼斯科美国公司 | 吉氏芽孢杆菌进化枝丝氨酸蛋白酶 |
CN107022432A (zh) * | 2016-01-29 | 2017-08-08 | 高露洁-棕榄公司 | 清洁组合物 |
EP3845642B1 (en) | 2016-05-05 | 2023-08-09 | Danisco US Inc. | Protease variants and uses thereof |
CA3026064A1 (en) | 2016-05-31 | 2017-12-07 | Danisco Us Inc. | Protease variants and uses thereof |
US11946080B2 (en) | 2016-06-17 | 2024-04-02 | Danisco Us Inc. | Protease variants and uses thereof |
US11129906B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-09-28 | David Gordon Bermudes | Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria |
US11180535B1 (en) | 2016-12-07 | 2021-11-23 | David Gordon Bermudes | Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria |
US20200392477A1 (en) | 2016-12-21 | 2020-12-17 | Danisco Us Inc. | Protease variants and uses thereof |
CN110312794B (zh) | 2016-12-21 | 2024-04-12 | 丹尼斯科美国公司 | 吉氏芽孢杆菌进化枝丝氨酸蛋白酶 |
US11298391B1 (en) * | 2017-04-27 | 2022-04-12 | Lorenol Laboratories, Inc. | Topical skin health improvement compositions and administrations thereof |
WO2019108599A1 (en) | 2017-11-29 | 2019-06-06 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants having improved stability |
US20210363470A1 (en) | 2018-06-19 | 2021-11-25 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants |
WO2019245704A1 (en) | 2018-06-19 | 2019-12-26 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants |
WO2020046613A1 (en) | 2018-08-30 | 2020-03-05 | Danisco Us Inc | Compositions comprising a lipolytic enzyme variant and methods of use thereof |
EP3875591A4 (en) * | 2018-10-31 | 2022-09-21 | Qingdao Vland Biotech Group Co. Ltd. | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF A WASHING ZYME WITH PROTEASE RESISTANCE |
WO2020112599A1 (en) | 2018-11-28 | 2020-06-04 | Danisco Us Inc | Subtilisin variants having improved stability |
CN114174504A (zh) | 2019-05-24 | 2022-03-11 | 丹尼斯科美国公司 | 枯草杆菌蛋白酶变体和使用方法 |
CN112062828B (zh) * | 2019-06-10 | 2022-04-29 | 温州医科大学 | Fgf-5多肽抑制剂及其生发应用 |
US20230049452A1 (en) | 2020-01-13 | 2023-02-16 | Danisco Us Inc | Compositions comprising a lipolytic enzyme variant and methods of use thereof |
EP4204553A1 (en) | 2020-08-27 | 2023-07-05 | Danisco US Inc. | Enzymes and enzyme compositions for cleaning |
CN113307857B (zh) * | 2021-01-14 | 2022-11-01 | 艾时斌 | 从表皮生长因子、凝集素和Tat蛋白衍生的支架蛋白 |
WO2023278297A1 (en) | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Danisco Us Inc | Variant lipases and uses thereof |
CN117916354A (zh) | 2021-09-03 | 2024-04-19 | 丹尼斯科美国公司 | 用于清洁的衣物洗涤组合物 |
WO2023114932A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
CA3240641A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Michelle Jackson | Automatic dishwashing composition comprising a protease |
WO2023114936A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
WO2023114939A2 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-22 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
US20230365897A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-11-16 | The Procter & Gamble Company | Fabric and home care composition including a protease |
WO2023168234A1 (en) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Danisco Us Inc. | Enzymes and enzyme compositions for cleaning |
WO2024050343A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods related thereto |
WO2024050346A1 (en) | 2022-09-02 | 2024-03-07 | Danisco Us Inc. | Detergent compositions and methods related thereto |
WO2024102698A1 (en) | 2022-11-09 | 2024-05-16 | Danisco Us Inc. | Subtilisin variants and methods of use |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002521652A (ja) * | 1998-07-20 | 2002-07-16 | ファーメクサ エイ/エス | リガンドおよびターゲット生体分子を同定するための新規な方法 |
JP2007528212A (ja) * | 2003-11-06 | 2007-10-11 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | 糸状菌におけるプロテアーゼ抑制剤及びその変異体の発現 |
Family Cites Families (55)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3755560A (en) * | 1971-06-30 | 1973-08-28 | Dow Chemical Co | Nongreasy cosmetic lotions |
DE2437090A1 (de) * | 1974-08-01 | 1976-02-19 | Hoechst Ag | Reinigungsmittel |
JPS51125468A (en) * | 1975-03-27 | 1976-11-01 | Sanyo Chem Ind Ltd | Method of preparing resins of high water absorbency |
US4152416A (en) * | 1976-09-17 | 1979-05-01 | Marra Dorothea C | Aerosol antiperspirant compositions delivering astringent salt with low mistiness and dustiness |
US4421769A (en) * | 1981-09-29 | 1983-12-20 | The Procter & Gamble Company | Skin conditioning composition |
FI69503C (fi) * | 1984-03-13 | 1986-02-10 | Neste Oy | Ytbelagd bergsbehaollare eller tunnel |
US5411873A (en) * | 1984-05-29 | 1995-05-02 | Genencor, Inc. | Process for producing heterologous polypeptides |
US4683195A (en) * | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) * | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US4965188A (en) * | 1986-08-22 | 1990-10-23 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme |
US5679543A (en) * | 1985-08-29 | 1997-10-21 | Genencor International, Inc. | DNA sequences, vectors and fusion polypeptides to increase secretion of desired polypeptides from filamentous fungi |
US4937370A (en) * | 1987-06-02 | 1990-06-26 | The Procter & Gamble Company | Novel chromophores, sunscreen compositions and methods for preventing sunburn |
US4999186A (en) * | 1986-06-27 | 1991-03-12 | The Procter & Gamble Company | Novel sunscreen agents, sunscreen compositions and methods for preventing sunburn |
US5322770A (en) * | 1989-12-22 | 1994-06-21 | Hoffman-Laroche Inc. | Reverse transcription with thermostable DNA polymerases - high temperature reverse transcription |
WO1988002025A1 (en) * | 1986-09-17 | 1988-03-24 | Sri International | Expression vectors for bacilli |
US5087372A (en) * | 1989-03-24 | 1992-02-11 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for removing heavy metal ions from contaminated water and a porous membrane usable therefor |
US5011681A (en) * | 1989-10-11 | 1991-04-30 | Richardson-Vicks, Inc. | Facial cleansing compositions |
US5073371A (en) * | 1990-11-30 | 1991-12-17 | Richardson-Vicks, Inc. | Leave-on facial emulsion compositions |
US5073372A (en) * | 1990-11-30 | 1991-12-17 | Richardson-Vicks, Inc. | Leave-on facial emulsion compositions |
US5436228A (en) * | 1990-12-12 | 1995-07-25 | Postlethwaite; Arnold E. | Chemotactic wound healing peptides |
US5429950A (en) * | 1992-03-30 | 1995-07-04 | Genencor International, Inc. | Heterologous gene expression in bacillus subtilis: fusion approach |
GB9415421D0 (en) | 1994-07-30 | 1994-09-21 | Procter & Gamble | Cosmetic compositions and processes for manufacture thereof |
MX9703895A (es) | 1994-11-28 | 1997-08-30 | Procter & Gamble | Composiciones topicas para el cuidado de la piel que contienen esteres de acido carboxilico de poliol espesado como agentes de acondicionamiento de la piel. |
BR9612547A (pt) * | 1996-03-12 | 1999-07-20 | Genencor Int | Celulasa composição vetor de expressão processo para expressar uma celulase e para tratar têxteis e celulose com base em pasta |
EP0991422A1 (en) * | 1996-04-18 | 2000-04-12 | The General Hospital Corporation | Modulating epithelial-mesenchymal interactions |
US5827508A (en) * | 1996-09-27 | 1998-10-27 | The Procter & Gamble Company | Stable photoprotective compositions |
US5976838A (en) * | 1996-12-18 | 1999-11-02 | Genetics Institute, Inc. | Secreted proteins and polynucleotides encoding them |
WO1998022085A1 (en) | 1996-11-22 | 1998-05-28 | The Procter & Gamble Company | Cosmetic compositions |
DE19735587B4 (de) * | 1997-08-16 | 2012-03-22 | Eberhard-Karls-Universität Tübingen Universitätsklinikum | Peptid mit radioprotektiver Wirkung, dieses enthaltende kosmetische oder pharmazeutische Zusammensetzung, für dieses kodierende Nukleinsäure, Herstellungsverfahren für dieses Peptid und die Verwendung als radioprotektives Agens |
US6747137B1 (en) * | 1998-02-13 | 2004-06-08 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid sequences relating to Candida albicans for diagnostics and therapeutics |
US5935556A (en) * | 1998-07-30 | 1999-08-10 | The Procter & Gamble Company | Sunscreen compositions |
US5989528A (en) | 1998-07-30 | 1999-11-23 | The Procter & Gamble Company | Sunscreen compositions |
JP3855042B2 (ja) * | 1998-09-22 | 2006-12-06 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 毛髪の鑑別法 |
US5972316A (en) * | 1998-10-16 | 1999-10-26 | The Procter & Gamble Company | UV protection compositions |
US5968485A (en) * | 1998-10-16 | 1999-10-19 | The Procter & Gamble Company | UV protection compositions |
AU1275599A (en) | 1998-10-23 | 2000-05-15 | Procter & Gamble Company, The | Skin care compositions |
GB9825854D0 (en) * | 1998-11-25 | 1999-01-20 | Univ Bristol | Peptide |
JP3106191B1 (ja) * | 1999-03-30 | 2000-11-06 | 工業技術院長 | Fgf−5の生理的機能制御ペプチド及び該ペプチドを含有する医薬組成物 |
US7090973B1 (en) * | 1999-04-09 | 2006-08-15 | Oscient Pharmaceuticals Corporation | Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics |
US20100293669A2 (en) * | 1999-05-06 | 2010-11-18 | Jingdong Liu | Nucleic Acid Molecules and Other Molecules Associated with Plants and Uses Thereof for Plant Improvement |
US20040031072A1 (en) * | 1999-05-06 | 2004-02-12 | La Rosa Thomas J. | Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement |
US6872563B1 (en) * | 1999-10-05 | 2005-03-29 | President And Fellows Of Harvard College | Compositions and methods for production of disulfide bond containing proteins in host cells |
US20020001825A1 (en) * | 2000-03-31 | 2002-01-03 | Nobuyuki Itoh | Fibroblast growth factor-like molecules and uses thereof |
EP1360500B1 (en) * | 2000-04-14 | 2010-01-13 | Genencor International, Inc. | Methods for selective targeting |
US20110131679A2 (en) * | 2000-04-19 | 2011-06-02 | Thomas La Rosa | Rice Nucleic Acid Molecules and Other Molecules Associated with Plants and Uses Thereof for Plant Improvement |
WO2002002621A2 (en) * | 2000-06-30 | 2002-01-10 | Zymogenetics, Inc. | Mammalian secreted proteins |
US6537968B1 (en) * | 2000-07-24 | 2003-03-25 | Alphamed Pharmaceuticals Corp | Treatment of lupus erythematosus |
JP4493271B2 (ja) * | 2000-12-13 | 2010-06-30 | アナフォア インコーポレイテッド | C型レクチン様ドメインの骨格構造を有する蛋白質のコンビナトリアルライブラリ |
US7214786B2 (en) * | 2000-12-14 | 2007-05-08 | Kovalic David K | Nucleic acid molecules and other molecules associated with plants and uses thereof for plant improvement |
KR20030085528A (ko) * | 2001-02-07 | 2003-11-05 | 앵스띠뛰 파스퇴르 | 포토랍두스 루미네센스 균주 tt01 게놈 및 그 용도 |
MXPA05008535A (es) * | 2003-02-11 | 2006-03-08 | Pasteur Institut | Identificacion y caracterizacion de racemasas, definicion de firmas proteinicas, y una prueba para examinar aminoacido d para seleccionar moleculas capaces de inhibir la actividad de racemasa, especialmente racemasa de prolina. |
ATE486087T1 (de) * | 2003-11-06 | 2010-11-15 | Danisco Us Inc | Fgf-5-bindende und geträgerte peptide |
US7319142B1 (en) * | 2004-08-31 | 2008-01-15 | Monsanto Technology Llc | Nucleotide and amino acid sequences from Xenorhabdus and uses thereof |
US7772181B2 (en) * | 2008-10-15 | 2010-08-10 | Danisco Us Inc. | Personal care compositions comprising modified variant Bowman Birk Protease Inhibitors |
US7803902B2 (en) * | 2008-10-15 | 2010-09-28 | Danisco Us Inc. | Modified variant bowman birk protease inhibitors |
-
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2008
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-
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-
2012
- 2012-09-10 US US13/609,116 patent/US20130065829A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002521652A (ja) * | 1998-07-20 | 2002-07-16 | ファーメクサ エイ/エス | リガンドおよびターゲット生体分子を同定するための新規な方法 |
JP2007528212A (ja) * | 2003-11-06 | 2007-10-11 | ジェネンコー・インターナショナル・インク | 糸状菌におけるプロテアーゼ抑制剤及びその変異体の発現 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN5006018468; FLECKER, P. et al.: '"Chemical synthesis, molecular cloning and expression of gene coding for a Bowman-Birk-type proteina' EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY Vol.166, No.1, 1987, P.151-156 * |
JPN5006018469; CHRISTMANN, A. et al.: '"The cystine knot of a squash-type protease inhibitor as a structural scaffold for Escherichia coli' PROTEIN ENGINEERING Vol.12, No.9, 1999, P.797-806 * |
JPN5006018471; WOLFSON, A.J. et al.: '"Modularity of protein function: chimeric interleukin1betas containing specific protease inhibitor l' BIOCHEMISTRY Vol.32, No.20, 19930525, P.5327-5331 * |
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JP2008500805A5 (ja) | ||
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