JP3106191B1

JP3106191B1 - Ｆｇｆ−５の生理的機能制御ペプチド及び該ペプチドを含有する医薬組成物

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Publication number: JP3106191B1
Application number: JP2000006643A
Authority: JP
Inventors: 修一岡; 幸苗山崎; 亨今村; 康子藤田; 幸織山本; 幸子沖田; 和夫小沢; 玲子赤倉; 千嘉子伊藤
Original assignee: 工業技術院長
Priority date: 1999-03-30
Filing date: 2000-01-14
Publication date: 2000-11-06
Anticipated expiration: 2020-01-14
Also published as: JP2000344796A; US6417327B1

Abstract

【要約】【解決手段】ＦＧＦ−５タンパク質のアミノ酸配列、
またはＦＧＦ−５のスプライシングフォームであるＦＧ
Ｆ−５Ｓのアミノ酸配列の部分アミノ酸配列を含む、Ｆ
ＧＦ−５の生理的機能を制御することのできるペプチ
ド。【効果】本発明によれば、ＦＧＦ−５の有する種々の
生理的機能を制御することのできるペプチドが提供され
る。該ペプチドを有効成分とする医薬組成物は、頭髪や
体毛の発毛又は育毛の調節、脳神経系の栄養又は機能調
節、血小板調節、線維芽細胞、血管内皮細胞の増殖等の
ＦＧＦ−５の生理的機能を調節することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、線維芽成長因子−
５〔Fibroblast Growth Factor-5 (FGF-5)〕の有する種
々の生理的機能を制御することのできるペプチド、及び
該ペプチドを有効成分とする医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来技術】線維芽成長因子−５〔Fibroblast Growth
Factor-5 (FGF-5)〕は、中枢神経系で発現が認められる
分泌型タンパク質であり、その生理的機能として、線維
芽細胞増殖促進活性及び変異活性が知られている。ＦＧ
Ｆ−５はまた、その遺伝子を恒常的発現プロモーターの
調節下において NIH3T3 線維芽細胞に導入することによ
り、その細胞をトランスフォームさせ、細胞増殖能を変
化させることが知られている。このトランスフォームし
た細胞はＦＧＦ−５を培養上清中に分泌するが、この培
養上清は、他の線維芽細胞である Balb/c3T3の増殖活性
及び血管内皮細胞増殖活性を著しく促進する。また、大
腸菌にＦＧＦ−５遺伝子発現プラスミドを導入し発現さ
せたＦＧＦ−５ポリペプチドも、同様に Balb/c3T3の増
殖活性及び血管内皮細胞増殖活性を著しく促進する。

【０００３】さらに、ＦＧＦ−５は神経栄養因子として
の活性も知られており、神経細胞の生存を支持し、骨格
筋細胞でも発現している。この骨格筋細胞抽出物に含ま
れるＦＧＦ−５、及び大腸菌にＦＧＦ−５遺伝子発現プ
ラスミドを導入し発現させたＦＧＦ−５はいずれも、培
養運動神経の生存を著しく促進することが知られてい
る。この事実は、ＦＧＦ−５は運動神経細胞の栄養因子
であることを強く示唆する。さらに、ＦＧＧ−５はマウ
ス及びラットの脳においても発現が認められており、脳
神経初代培養細胞の実験から、脳におけるコリン作動性
及びセロトニン作動性神経細胞の栄養因子として作用す
ると考えられている。

【０００４】一方、近年ＦＧＦ−５ノックアウトマウス
が作製され、その解析より、ＦＧＦ−５が毛周期に関与
していることが示唆されている。従来より、頭髪や体毛
の発毛促進又は抑制、育毛に有効な成分のほとんどは、
合成化合物又は植物や微生物など天然物中に存在する物
質から実験動物などによってこれらの活性を有するもの
をスクリーニングして取得されたものであった。しかし
ながら、これらを有効成分とする発毛促進剤、発毛抑制
剤、育毛剤は、毛根部分の栄養環境が重要とする考え方
から、もっぱら皮膚の抗炎症・殺菌、男性ホルモンの抑
制、局所の血液循環や毛根の環境条件を改善又は阻害を
企図して主に開発されたものであって、動物の毛の産生
メカニズムの原理に着目したものはない。従って、毛周
期の制御に関与するＦＧＦ−５を利用すれば、動物の毛
の産生メカニズムの原理に着目した発毛又は育毛調節剤
を得ることが期待される。

【０００５】ＦＧＦ−５タンパク質の生成については、
ＦＧＦ−５タンパク質をコードする遺伝子が、ｍＲＮＡ
として転写され、スプライシングを経て成熟型ｍＲＮＡ
になる際に、エクソン１とエクソン２、エクソン３が順
次連結されてこれらが連続した構造となることが知られ
ている。すなわち、その翻訳フレームは、エクソン１の
中の翻訳開始コドンＡＴＧ（メチオニンをコード）から
始まり、エクソン２を経て、エクソン３の中で終了コド
ンが出現するまで連続し、結果としてヒトでは２６８ア
ミノ酸からなるタンパク質、マウスでは２６４アミノ酸
からなるタンパク質を作りだす〔Zhan, Xら、Mol. Cel
l. Biol., Vol.8, pp.3487-3495 (1988); Haub, O.
ら、Proc. Natl. Acad. Sci., USA, Vol.87, pp.8022-8
026 (1990)〕。さらに、エクソン２の欠失スプライシン
グフォーム（ＦＧＦ−５Ｓ）が見いだされ、それがヒト
及びマウスにおいて脳及び皮膚に選択的に発現してお
り、その構造が決定されている〔Ozawa, Kら、J. Biol.
Chem., Vol.273 (44), pp.29262-29271 (1998)及び特
開平８−７５９９４号〕。ＦＧＦ−５Ｓは、それ自身弱
い神経栄養因子活性を示したが、一方、ＦＧＦ−５のア
ンタゴニストとしての活性も示した〔Ozawa, Kら、J. B
iol. Chem., Vol.273 (44), pp.29262-29271 (1998)〕以上のように、ＦＧＦ−５は、細胞増殖促進の他、神経
細胞の生存や分化の支持、毛周期制御等の多様な生理的
機能に関与することから、ＦＧＦ−５の生理的機能の制
御物質の探索・解明が望まれるところである。

【０００６】一方、血小板は、生体の止血、血栓の形成
に重要な役割を担っており、よって血小板増加作用物質
は、癌化学療法時において副作用として現れる血小板減
少や、重症の感染症によって引き起こされる血小板減少
に対する血小板調節物質として、医薬品としての使用が
期待される。この血小板およびその母細胞である巨核球
は、多能性血液幹細胞から造血因子の作用により分化・
増殖・成熟して形成されるが、この巨核球分化に作用す
る造血因子がトロンボポエチンであることが近年相次い
で報告されている。しかし、トロンボポエチンの投与は
抗体産生を引き起こすことが報告され、現状ではトロン
ボポエチンの投与は血小板増加物質としては必ずしも適
していないと考えられている。従って、副作用を惹起す
ることなく巨核球分化に作用する低分子量の制御物質の
探索・解明もまた望まれるところである。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記課
題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ＦＧＦ−５タン
パク質のアミノ酸配列、又はＦＧＦ−５のスプライシン
グフォームであるＦＧＦ−５Ｓのアミノ酸配列に着目
し、これらの部分アミノ酸配列を含むペプチド断片（Ｆ
ＧＦ−５ペプチド）が、ＦＧＦ−５の生理的機能の制御
作用を有することを見い出し、本発明を完成させるに至
った。

【０００８】即ち、本発明は、以下の(a) 又は（b)に示
すペプチド； (a) 配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列の全部又
は連続する部分配列を有するペプチド、(b) 配列表の
配列番号１に示すアミノ酸配列の両末端に、１〜１０個
の任意のアミノ酸が付加されたアミノ酸配列を有し、か
つＦＧＦ−５の生理的機能制御活性を有するペプチドで
ある。

【０００９】本発明はまた、以下の(a) 又は（b)に示す
ペプチド； (a) 配列表の配列番号２に示すアミノ酸配列の全部又
は連続する部分配列を有するペプチド、(b) 配列表の
配列番号２に示すアミノ酸配列の両末端に、１〜１０個
の任意のアミノ酸が付加されたアミノ酸配列を有し、か
つＦＧＦ−５の生理的機能制御活性を有するペプチドで
ある。

【００１０】さらに、本発明は、以下の(a) 〜(c) のい
ずれかに示すペプチド； (a) 配列表の配列番号３に示すアミノ酸配列を有する
ペプチド、(b) 配列表の配列番号３に示すアミノ酸配
列において１個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を
有し、かつＦＧＦ−５の生理的機能制御活性を有するペ
プチド、(c) 配列表の配列番号３に示すアミノ酸配列
のＮ末端に、１〜１０個の任意のアミノ酸が付加された
アミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−５の生理的機能制御
活性を有するペプチドである。

【００１１】さらにまた、本発明は、以下の(a) 〜(c)
のいずれかに示すペプチド； (a) 配列表の配列番号４に示すアミノ酸配列を有する
ペプチド、(b) 配列表の配列番号４に示すアミノ酸配
列において１個のアミノ酸が置換されたアミノ酸配列を
有し、かつＦＧＦ−５の生理的機能制御活性を有するペ
プチド、(c) 配列表の配列番号４に示すアミノ酸配列
のＮ末端に、１〜１０個の任意のアミノ酸が付加された
アミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−５の生理的機能制御
活性を有するペプチドである。また、本発明は、上記い
ずれかのペプチドを含有する医薬組成物である。以下、
本発明を詳細に説明する。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明のＦＧＦ−５の生理的機能
制御活性を有するペプチド（以下、ＦＧＦ−５ペプチド
という）は、ＦＧＦ−５タンパク質のアミノ酸配列、又
はＦＧＦ−５Ｓタンパク質のアミノ酸配列中に存在し、
ＦＧＦ−５が有する生理的機能の拮抗活性（ＦＧＦ−５
アゴニスト）又はＦＧＦ−５が有する生理的機能の抑制
活性（ＦＧＦ−５アンタゴニスト）を示すことによっ
て、ＦＧＦ−５の生理的機能を制御するペプチドであ
る。

【００１３】ＦＧＦ−５の生理的機能の拮抗活性を有す
るペプチドの第１は、(a) 配列表の配列番号１に示すア
ミノ酸配列の全部又は連続する部分配列を有するペプチ
ド、又は(b) 配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列の
両末端に、１〜１０個の任意のアミノ酸が付加されたア
ミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−５機能制御活性を有す
るペプチドである。上記の連続する部分配列としては、
例えば配列番号５、配列番号６、又は配列番号９に示す
アミノ酸配列が挙げられる。

【００１４】ＦＧＦ−５の生理的機能の拮抗活性を有す
るペプチドの第２は、(a) 配列表の配列番号２に示すア
ミノ酸配列の全部又は連続する部分配列を有するペプチ
ド、又は(b) 配列表の配列番号２に示すアミノ酸配列の
両末端に、１〜１０個の任意のアミノ酸が付加されたア
ミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−５機能制御活性を有す
るペプチドである。上記の連続する部分配列としては、
例えば配列番号５、又は配列番号７に示すアミノ酸配列
が挙げられる。

【００１５】一方、ＦＧＦ−５の生理的機能の抑制活性
を有するペプチドの第１は、(a) 配列表の配列番号３に
示すアミノ酸配列を有するペプチド、(b) 配列表の配列
番号３に示すアミノ酸配列において１個のアミノ酸が置
換されたアミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−５の生理的
機能制御活性を有するペプチド、又は(c) 配列表の配列
番号３に示すアミノ酸配列のＮ末端に、１〜１０個の任
意のアミノ酸が付加されたアミノ酸配列を有し、かつＦ
ＧＦ−５機能制御活性を有するペプチドである。

【００１６】上記の１個のアミノ酸の置換としては、例
えば配列番号３に示すアミノ酸配列中のValをLeu又はAl
aに置換することが挙げられる。上記のアミノ酸配列の
Ｎ末端に、１〜１０個の任意のアミノ酸が付加されたア
ミノ酸配列としては、例えば配列番号８に示すアミノ酸
配列が挙げられる。

【００１７】ＦＧＦ−５の生理的機能の抑制活性を有す
るペプチドの第２は、(a) 配列表の配列番号４に示すア
ミノ酸配列を有するペプチド、(b) 配列表の配列番号４
に示すアミノ酸配列において１個のアミノ酸が置換され
たアミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−５の生理的機能制
御活性を有するペプチド、又は(c) 配列表の配列番号４
に示すアミノ酸配列のＮ末端に、１〜１０個の任意のア
ミノ酸が付加されたアミノ酸配列を有し、かつＦＧＦ−
５機能制御活性を有するペプチドである。

【００１８】上記の１個のアミノ酸の置換としては、例
えば配列番号４に示すアミノ酸配列中のIleをVal又はLe
uに置換することが挙げられる。上記の各ペプチドを取
得するに際しては、有機化学的に合成してもよいし、ま
たタンパク質を酵素法等の種々の方法を用いて、加水分
解して取得してもよい。

【００１９】本発明のＦＧＦ−５ペプチドによって制御
されうるＦＧＦ−５の生理的機能としては、発毛又は育
毛調節作用、脳神経系の栄養又は機能調節作用、血小板
調節作用、血管内皮細胞・繊維芽細胞・筋芽細胞・軟骨
細胞・骨芽細胞・グリア細胞の増殖や分化の促進又は抑
制作用である。

【００２０】従って、本発明のＦＧＦ−５ペプチドは、
ＦＧＦ−５アンタゴニストとして、頭髪などの発毛促進
の他、線維芽細胞腫、血管腫、骨芽腫、神経芽腫等の各
種疾患の予防・治療に有用である。また、当該ペプチド
は、ＦＧＦ−５アゴニストとして、ＦＧＦ−５と同様に
発毛の調節作用の他、神経細胞死、アルツハイマー病、
パーキンソン病、健忘症、痴呆症、心筋梗塞、血小板減
少性紫斑病等の各種疾患の予防・治療、ならびに癌化学
療法時や重症の感染症によって引き起こされる血小板減
少に対する予防・治療に有用である。

【００２１】本発明のＦＧＦ−５ペプチドは、例えば、
医学的に許容できる溶剤、賦形剤、担体、補助剤等を使
用し、自体公知の方法に従って、液剤、ローション剤、
エアゾール剤、注射剤、散剤、、顆粒剤、錠剤、座剤、
腸溶剤及びカプセル剤等の医薬組成物とすることができ
る。医薬組成物中、有効成分であるＦＧＦ−５ペプチド
の含有量は、0.0000000001〜1.0重量％程度とすればよ
い。

【００２２】該医薬組成物は、前記各疾病の予防・治療
剤又は研究用試薬として用いることができる。具体的に
は、発毛剤、育毛剤、脳神経系栄養剤、機能制御剤、学
習効果調節剤、血小板調節剤等として、例えばヒト、マ
ウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ等の哺乳類動物に対
して経口的もしくは非経口的に投与する。本医薬組成物
の投与量は、剤形、投与ルート、症状等により、適宜変
更しうるが、例えば、ヒトを含む哺乳動物に投与する場
合、当該ＦＧＦ−５ペプチドを、0.0001〜1000mgを１日
に数回適用することが例示される。

【００２３】

【実施例】以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。〔参考例１〕（リコンビナントＦＧＦ−５タンパク質の
調製）リコンビナントＦＧＦ−５は、文献記載の方法〔Ozawa,
Kら、J. Biol. Chem., Vol.273 (44), pp.29262-29271
(1998)〕により取得した。

【００２４】ICR マウス６週令メス個体より脳を摘出
し、これより RNAを抽出した。このマウス RNAにランダ
ムヘキサヌクレオチド DNAをプライマーとして、M-HLV
逆転写酵素により cDNA 混合物を得た。次に、得られた
cDNA 混合物から目的とする遺伝子を PCR反応によって
増幅した。この結果、ＦＧＦ−５タンパク質に相当する
大きさの DNAフラグメントを得、ゲル電気泳動によって
分離後、ゲルから切り出し、クローニングベクターとし
てpET-3 を用い、そのクローニングサイトに組み込むこ
とによってプラスミドを構築した。このプラスミドをベ
クターとし、大腸菌 BL21(DE3)pLysS 株を宿主として形
質転換体を得た。

【００２５】形質転換体を 40ml の LB 培地に植菌し、
37℃、16時間培養し、その後、新たな培地に移植してさ
らに培養した。インデューサーとして 1mM Isopropyl t
hiogalactoside (IPTG) を添加、更に 3時間培養した
後、6,000 回転 15 分間遠心し、菌体を得た。菌体を試
験管にとり、氷浴中、間欠的に 2分間超音波破砕を行っ
た後、12,000回転 1時間遠心し、リコンビナントＦＧＦ
−５タンパク質を含む上清を採取した。

【００２６】次に、得られたリコンビナントＦＧＦ−５
タンパク質を以下のようにして精製した。まず、ヘパリ
ンセファロースを 10mM Tris・HCl 緩衝液 (pH7.4)に懸
濁し、同溶液で洗浄する。NaClを終濃度 0.5M になるよ
うに添加した緩衝液に、前述の超音波破砕遠心上清試料
を添加し、4℃、3 時間、穏やかに撹拌した。同緩衝液
で洗浄した後、カラムにつめ、10mM Tris・HCl 緩衝液,
0.7M NaCl (pH7.4)溶液で洗浄し、続いて溶離液として
10mM Tris・HCl 緩衝液, 2M NaCl (pH7.4)溶液を用いて
目的とするリコンビナントＦＧＦ−５タンパク質を溶出
した。大腸菌 4L の培養液より、300μg のＦＧＦ−５
の部分精製標品を得ることができた。該精製標品を SDS
-PAGE で分離し、純度を検定し、試験に供するまで -80
℃で保存した。

【００２７】〔実施例１〕（ＦＧＦ−５ペプチドの調
製）以下のＦＧＦ−５ペプチド１〜５を、ペプチド合成機を
用いた化学合成法により合成し、高速液体クロマトグラ
フィー等により精製した。ペプチドのアミノ酸配列は、
プロテインシークエンサーにより解析し、最終純度８０
％以上の標品を取得した。ＦＧＦ−５ペプチド１：Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly
Ser His Glu Ala Asn Met Leu Ser Gln Val His Arg ＦＧＦ−５ペプチド２：Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly
Ser ＦＧＦ−５ペプチド３：His Glu Ala Asn Met Leu Ser ＦＧＦ−５ペプチド４：His Glu Ala Asn Met Leu Ser
Gln Val His Arg ＦＧＦ−５ペプチド５：Gln Val His Arg

【００２８】〔実施例２〕ＦＧＦ−５ペプチドによる
ＤＮＡ合成促進活性、抑制活性の測定 (1) ＤＮＡ合成抑制活性の測定 Balb/c3T3 細胞 1.5×10４ cells/500 μl を 24 ウエ
ル培養プレートに播種し、10% FCS 存在下、DMEM培地で
24 時間培養した。次に、細胞を同培地で洗浄後、0.3%
FCSを含む DMEM 培地を添加、更に 24 時間培養し、細
胞を同調させた。反応液中にヘパリン (5 μg/ml) 、実
施例１で合成したＦＧＦ−５ペプチド(10−７〜10−３
M) 及び参考例１にて調製したリコンビナントＦＧＦ−
５ (10−１０M) を含有する被験液 [FGF-5(+)] を添
加、16時間培養後、３HTdRを添加し、更に 4時間 CO２
インキュベーターで培養した。培養上清を吸引し、PB
S で細胞を洗浄した後、10% TCA、125μl を添加、室温
でインキュベートし、細胞が固定されていることを確認
した後、上清を廃棄した。 500μl の 0.5N NaOHを添加
して、更に室温で 1時間インキュベートし、3 mlのシン
チレーターを添加して、細胞へのトリチウムの取り込み
を液体シンチレーションカウンターで測定した。

【００２９】(2) ＤＮＡ合成促進活性の測定ヘパリン及び実施例１で合成したＦＧＦ−５ペプチドの
みを含有する被験液 [FGF-5(-)] を用いる以外は、(1)
と同様の手順にて細胞へのトリチウムの取り込みを液体
シンチレーションカウンターで測定した。なお、抑制・
促進活性測定のコントロールは、ヘパリン (5μg/ml)
及び参考例１にて調製したリコンビナントＦＧＦ−５(1
0−１０M) を含有する被験液で行った場合の測定値であ
る。

【００３０】(3) 結果ＦＧＦ−５ペプチド１、３、４、５によるＤＮＡ合成促
進活性、抑制活性の測定結果を、図１〜４にそれぞれ示
す。図１、２に示されるように、ＦＧＦ−５ペプチド１
及び３はいずれも、ＦＧＦ−５無添加でＤＮＡ合成を促
進した。図３、４に示されるように、ＦＧＦ−５ペプチ
ド４及び５はいずれも、ＦＧＦ−５により促進されるＤ
ＮＡ合成を抑制した。

【００３１】〔実施例３〕マウス骨髄細胞を用いた巨核
球分化増殖活性の測定下記ＦＧＦ−５ペプチド６を、実施例１と同様にして合
成した。ＦＧＦ−５ペプチド６：Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly
Ser His Glu Ala AsnMet 巨核球分化増殖活性の測定は、マウス骨髄細胞を用い、
アセチルコリンエステラーゼ活性の増加を指標として以
下のようして行った。

【００３２】ICR マウス（雄、６週令）大腿骨より骨髄
細胞を採取し、１％牛胎児血清(FCS) を含むRPMI 1640
培地に懸濁した。遠心により上清を除いた後、0.5mM DF
P （ジイソプロピルフルオロホスフェイト）及び0.1% B
SA（牛血清アルブミン）を含むRPMI 1640 培地に懸濁
し、20分間室温に静置した。次に、同培養液で２回洗浄
した後、1% Neutridoma-SP、0.1% BSAを含むRPMI 1640
培地に、細胞数2 ×10６cells/ml になるように懸濁し
た。この様にして調製した骨髄細胞懸濁液を96ウェル培
養プレートに100μl 分注し、50μlの上記ＦＧＦ−５ペ
プチド６を含有する被験液ともに37℃、5% CO２存在下
で４日間培養した。

【００３３】培養終了後、培養上清を除去し、PBS(-)で
2 回洗浄した後、0.2% (w/v)TritonX-100、0.12M NaCl
を含有する50mM HEPES緩衝液(pH7.6)180μl 、及び5.6m
M ヨウ化アセチルチオコリン溶液20μl を添加した。室
温で1 時間静置した後、各ウェルより20μl の被験液を
取り、別のウェルに移し、0.6mM 7-diethylamino-3-(4'
- maleimidylphenyl)-4-methylcoumarinのアセトニトリ
ル溶液20μl 、及び0.2% Triton X-100 、1mM EDTA、50
mM 酢酸ナトリウム溶液(pH 5.0)160 μl を添加、更に
1 時間室温にて静置し、励起波長360nm 、蛍光波長460n
mmで蛍光測定を行った。測定結果は図５に示す通りであ
り、該ペプチドが巨核球分化増殖活性を示すことが明ら
かとなった。

【００３４】〔実施例４〕マウスを用いた血小板増加活
性の測定 ICR マウス（雄、６週令、体重29-32g) を一群６匹づつ
四群に分け、上記ＦＧＦ−５ペプチド６を含有する被験
液を10日間、連続して腹腔内投与を行った。注射液とし
ては、100 μg/mlウシ血清アルブミン（フラクション
Ｖ）を含有する0.9%食塩液を用い、3.3mg/mlに溶解した
該ペプチドを、１匹当たり0.3ml づつ毎回投与した(33m
g/kg) 。同時に、ヒトリコンビナントトロンボポエチン
溶液(0.1μg/ml) 、及びヒトリコンビナントインターロ
イキン６溶液(0.1μg/ml) を作製し、同様に１匹当たり
0.3ml づつ腹腔内投与した（1 μg/kg) 。採血は毎回5
μl づつ尾静脈より行い、採血後直ちに3.8%クエン酸ナ
トリウム20μl の入った試験管で混和した。続いて、Ce
llpackで２段階に希釈し、血小板数の他、赤血球数、ヘ
マクリット値をSysmex F-820（東亜電波社製）で測定し
た。

【００３５】その結果、該ペプチドを投与したマウスの
血小板数は投与開始２〜４日後で役1.6 倍に増加し、該
ペプチドの血小板増加作用が明らかとなった。同時に、
ヒトリンコンビナントトロンボポエチン、およびヒトリ
コンビナントインターロイキン６投与群のマウスにおい
ても同様に約1.6 倍の血小板数の増加が確認された。ま
た、投与中止後４〜５日間で、血小板数は元のレベルに
まで回復した。実験中、全ての投与群でマウスの死亡
例、及び体重減少は認められなかった。以上より、該ペ
プチドは、安全性に優れた血小板調節物質としての利用
が期待される。

【００３６】

【発明の効果】本発明によれば、ＦＧＦ−５の有する種
々の生理的機能を制御することのできるペプチドが提供
される。該ペプチドを有効成分とする医薬組成物は、頭
髪や体毛の発毛又は育毛の調節、脳神経系の栄養又は機
能調節、血小板調節、線維芽細胞、血管内皮細胞の増殖
等のＦＧＦ−５の生理的機能を調節することができる。

【００３７】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Director-General of Agency of Industrial Science and Technology <120> Peptides controlling the physiological function of FGF-5 and pharmaceutical compositions comprising the same <130> 11910264 <160> 9 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 1 Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly Ser His Glu Ala Asn Met Leu Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 2 Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly Ser His Glu Ala Ser Val Leu Ser 1 5 10 <210> 3 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 3 Gln Val His Arg <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 4 Gln Ile Tyr Gly 1 <210> 5 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 5 Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly Ser 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 6 His Glu Ala Asn Met Leu Ser 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 7 His Glu Ala Ser Val Leu Ser 1 5 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 8 His Glu Ala Asn Met Leu Ser Gln Val His Arg 1 5 10 <210> 9 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <400> 9 Pro Asp Gly Lys Val Asn Gly Ser His Glu Ala Asn Met 1 5 10

【００３８】

【配列表フリーテキスト】配列番号１は、ヒトＦＧＦ−
５のアミノ酸配列の部分配列（105 〜119 に対応）を示
す。配列番号２は、マウスＦＧＦ−５のアミノ酸配列の
部分配列（103 〜117 に対応）を示す。

【００３９】配列番号３は、ヒトＦＧＦ−５Ｓのアミノ
酸配列の部分配列（120 〜123 に対応) を示す。配列番
号４は、マウスＦＧＦ−５Ｓのアミノ酸配列の部分配列
（118 〜121 に対応）を示す。

【００４０】配列番号５は、ヒトＦＧＦ−５のアミノ酸
配列の部分配列（105 〜112 に対応）またはマウスＦＧ
Ｆ−５のアミノ酸配列の部分配列（103 〜110 に対応）
を示す。配列番号６は、ヒトＦＧＦ−５のアミノ酸配列
の部分配列（113 〜119 に対応) を示す。

【００４１】配列番号７は、マウスＦＧＦ−５のアミノ
酸配列の部分配列（111 〜117 に対応) を示す。配列番
号８は、ヒトＦＧＦ−５Ｓのアミノ酸配列の部分配列
（113 〜123 に対応) を示す。配列番号９は、ヒトＦＧ
Ｆ−５のアミノ酸配列の部分配列（105 〜117 に対応）
を示す。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＦＧＦ−５ペプチド１によるＤＮＡ合成促進活
性（a)、ＤＮＡ合成抑制活性(b) の測定結果を示す。

【図２】ＦＧＦ−５ペプチド３によるＤＮＡ合成促進活
性（a)、ＤＮＡ合成抑制活性(b) の測定結果を示す。

【図３】ＦＧＦ−５ペプチド４によるＤＮＡ合成促進活
性（a)、ＤＮＡ合成抑制活性(b) の測定結果を示す。

【図４】ＦＧＦ−５ペプチド５によるＤＮＡ合成促進活
性（a)、ＤＮＡ合成抑制活性(b) の測定結果を示す。

【図５】ＦＧＦ−５ペプチド６による巨核球分化増殖活
性の測定結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＡ６１Ｐ 43/00 １０５Ｃ０７Ｋ 14/50 Ｃ０７Ｋ 14/50 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者藤田康子茨城県つくば市千現１−５−５片桐ハイツ102 (72)発明者山本幸織茨城県稲敷郡江戸崎町椎塚123−38 (72)発明者沖田幸子茨城県つくば市松代３−23−１−309 (72)発明者小沢和夫千葉県柏市豊四季台３−１−61−207 (72)発明者赤倉玲子千葉県我孫子市緑１−５−11 グリーンコーポ102号 (72)発明者伊藤千嘉子茨城県龍ヶ崎市小柴３丁目９−８ (56)参考文献特開平９−316096（ＪＰ，Ａ) 国際公開95／34664（ＷＯ，Ａ１) Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ. 273，Ｎｏ．44（1998）ｐ．29262− 29271 Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ. 272，Ｎｏ．39（1997）ｐ．24203− 24209 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 7/08 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】以下の(a) 又は(b) に示すペプチド。 (a) 配列番号９に示すアミノ酸配列からなるペプチド (b) 配列番号９に示すアミノ酸配列のＣ末端に、Leu 又
はLeu-Ser又はLeu-Ser-Gln-Val-His-Argを付加したアミ
ノ酸配列からなり、かつＦＧＦ−５の生理的機能制御活
性を有するペプチド。
【請求項２】ＦＧＦ−５の生理的機能が、発毛又は育
毛調節作用、脳神経系の栄養又は機能調節作用、血小板
調節作用、及び血管内皮細胞・繊維芽細胞・筋芽細胞・
軟骨細胞・骨芽細胞・グリア細胞の増殖及び分化作用か
ら選ばれる、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】請求項１に記載のペプチドを含有する医
薬組成物。