KR20000075749A - 신규의 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 암호하는 ｄｎａ 및 그용도 - Google Patents

Abstract

사람 간질 세포주가 생산하는 폴리펩티드, 그 제조 방법, 그 폴리펩티드를 암호하는 DNA, 그 DNA로 이루어지는 벡터, 그 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 그 폴리펩티드의 항체 및 그 펩티드 또는 항체를 함유하는 약학적 조성물.

Description

신규의 폴리펩티드, 그 폴리펩티드를 암호하는 ＤＮＡ 및 그 용도{NOVEL POLYPEPTIDE, DNA ENCODING THE SAME AND USE THEREOF}

골수 간질 세포는 면역계, 조혈계 등의 골수 미소 환경의 틀을 만들어, 그들 간(幹)세포의 증식 분화 유도에 빠뜨릴 수 없는 인자, 예컨대 IL-7, SCF, IL-11, M-CSF, G-CSF, GM-CSF, IL-6, TGF-β, LIF 등의 인자를 생산, 분비하고 있는 것이 알려져 있다. 또한, 골수 간질 세포가 있는 것은 골대사에 관여한다는 것이 명백히 밝혀져 있다(Kenneth Dorshkind, Annu. Rev. Immunol, 8, 113-137, 1990 참조). 그러나, 지금까지 단리된 인자군만으로는 간질 세포의 역할을 완전히 담당해낼 수 없다. 이것은 아직 단리되지 않고 있는 인자가 존재하는 것을 시사하고 있다.

본 발명자들은 이 점에 주목하여, 어떤 종류의 간질 세포가 생산하고 있는 신규 인자(폴리펩티드), 특히 분비 단백질 및 막 단백질에 착안하여 그것을 발견해내기 위해, 예의 검토하였다.

종래, 어떤 특정한 폴리펩티드 또는 그것을 암호하는 DNA를 얻고자 하는 경우, 조직이나 세포 배양액 중에 목적으로 하는 생물 활성을 확인하고, 이어서 폴리펩티드의 단리 정제를 거쳐, 유전자를 클로닝하는 방법, 혹은 그 생물 활성을 지표로 하여 유전자를 발현 클로닝하는 방법이 일반적으로 이용되고 있었다.

그러나, 생체내 생리 활성 폴리펩티드는 다양한 생물 활성을 갖고 있는 경우가 많기 때문에, 어떤 하나의 활성을 지표로 하여 유전자를 클로닝한 결과, 그것이 이미 알려진 폴리펩티드와 동일하다는 것이 후에 와서 판명되는 사례가 증가하고 있다. 또, 골수 간질 세포가 생산하는 인자는 대부분이 미량밖에 생산되지 않아, 그것이 단리, 정제 및 생물 활성의 확인을 곤란하게 하고 있다.

최근, cDNA의 제작 기술이나 서열 기술은 급속히 발전하여, 대량의 cDNA의 서열을 신속히 행할 수 있게 되었다. 그래서 이들 기술을 이용하여, 여러가지 세포나 조직으로부터 cDNA 라이브러리를 제작하고, 랜덤하게 cDNA를 클로닝하여 염기 서열을 결정하여, 상당하는 폴리펩티드를 발현시킨 후, 그 생리 기능을 해석해 나간다고 하는 방법이 발전하고 있다. 이 방법은 생화학적, 유전자학적인 해석을 일체 필요로 하지 않고 유전자를 클로닝하여 그의 염기 서열의 정보를 얻을 수 있다고 하는 특징을 갖고 있지만, 목적으로 하는 유전자의 발견은 우발적 요소가 크다.

본 발명은 어떤 종류의 사람 간질 세포주가 생산하는 신규의 폴리펩티드 및 그 폴리펩티드를 암호하는 염기 서열을 갖는 DNA에 관한 것이다.

더욱 상세히 설명하면, 어떤 종류의 사람 간질 세포주가 생산하는 OAF065α 및 OAF065β(이하, 합해서 OAF065라 함)라고 부르는 신규의 폴리펩티드, 이들 폴리펩티드의 제조 방법, 이들 폴리펩티드를 암호하는 DNA, 이들 DNA로 이루어지는 벡터, 이들 벡터로 형질 전환된 숙주 세포, 이들 폴리펩티드의 항체, 및 이들 폴리펩티드 또는 항체를 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.

도 1은 본 발명의 폴리펩티드인 OAF065와 다른 TNF 수용체 패밀리의 아미노산 서열을 비교한 도면이다. 도면 중, hTNFR1은 사람 종양 괴사 인자 수용체 1을 나타내고, hTNFR2는 사람 종양 괴사 인자 수용체 2를 나타내고, hNGFR은 사람 신경 성장 인자 수용체를 나타내고, hFas는 사람 Fas를 나타낸다.

발명의 상세 설명

본 발명은

(1) 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드,

(2) 상기 (1)에 기재한 폴리펩티드를 암호하는 DNA,

(3) 서열 번호 2 또는 6에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA,

(4) 서열 번호 3 또는 7에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA,

에 관한 것이다.

더욱 자세히 설명하면, 본 발명은 실질적으로 순수한 형태인 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 그 동족체, 그 서열의 단편 및 그 동족체로 이루어지는 폴리펩티드에 관한 것이다.

본 발명은 또한 이들 폴리펩티드를 암호하는 DNA에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA, 및 서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열에 선택적으로 하이브리드하는 단편을 갖는 DNA에 관한 것이다.

실질적으로 순수한 형태인 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드란, 일반적으로 생산시의 폴리펩티드의 90% 이상, 예컨대 95%, 98% 또는 99%가 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드인 것을 의미한다.

서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 동족체란, 일반적으로 적어도 20개, 바람직하게는 적어도 30개, 예컨대 40개, 60개 또는 100개의 연속된 아미노산 영역에서, 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80% 또는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상 상동성인 것으로, 그와 같은 동족체는 이후 본 발명의 폴리펩티드로서 기재된다.

또한, 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 단편, 또는 이들 동족체의 단편이란, 적어도 10개 아미노산, 바람직하게는 적어도 15개 아미노산, 예컨대 20개, 25개, 30개, 40개, 50개 또는 60개 아미노산 부분을 의미한다.

서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA에 선택적으로 하이브리드하는 DNA란, 일반적으로 적어도 20개, 바람직하게는 적어도 30개, 예컨대 40개, 60개 또는 100개의 연속된 염기 서열 영역에서, 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80% 또는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상 상동성인 것으로, 이와 같은 DNA는 이후 본 발명의 DNA로서 기재된다.

서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA의 단편이란, 적어도 10개 염기, 바람직하게는 적어도 15개 염기, 예컨대 20개, 25개, 30개 또는 40개 염기 부분을 의미하며, 이와 같은 단편도 본 발명의 DNA에 포함된다.

또한, 본 발명에는 본 발명의 DNA로 이루어지는 복제 또는 발현 벡터가 포함된다. 벡터로는, 예컨대 ori 영역과, 필요에 따라 상기 DNA의 발현을 위한 프로모터, 프로모터의 제어 인자 등으로 이루어지는 플라스미드, 바이러스 또는 파지 벡터를 들 수 있다. 벡터는 하나 또는 그 이상의 선택적 마커 유전자, 예컨대 암피실린 내성 유전자를 포함하고 있어도 좋다. 벡터는 시험관내에서, 예컨대 DNA에 대응하는 RNA의 제조, 숙주 세포의 형질 전환에 이용할 수 있다.

더욱이, 본 발명에는 서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열, 또는 이들의 오픈 리딩 프레임을 갖는 DNA를 포함하는 본 발명의 DNA를 복제 또는 발현시키기 위한 벡터로 형질 전환된 숙주 세포도 포함된다. 세포로는, 예컨대 세균, 효모, 곤충 세포 또는 포유 동물 세포를 들 수 있다.

또, 본 발명에는 본 발명의 폴리펩티드를 발현시키기 위한 조건하에서, 본 발명의 숙주 세포를 배양함으로써 이루어지는 본 발명의 폴리펩티드의 제조 방법도 포함된다. 배양은 본 발명의 폴리펩티드가 발현되어, 숙주 세포로부터 제조되는 조건하에서 행해지는 것이 바람직하다.

본 발명의 DNA는 상기와 같은 벡터의 안티센스(antisense) 영역에 삽입됨으로써 안티센스 RNA를 제조할 수도 있다. 이러한 안티센스 RNA는 세포중에 존재하는 본 발명의 폴리펩티드의 레벨을 제어하는 데에 이용할 수도 있다.

본 발명은 본 발명에 있어서의 폴리펩티드의 모노클로널 또는 폴리클로널 항체도 포함한다. 또한, 본 발명에 있어서의 폴리펩티드의 모노클로널 또는 폴리클로널 항체의 제조 방법도 포함한다. 모노클로널 항체는 본 발명의 폴리펩티드, 또는 그 단편을 항원으로서 이용하여, 통상의 하이브리도마(hybridoma) 기술에 의해 제조할 수 있다. 폴리클로널 항체는 숙주 동물(예컨대, 래트나 토끼 등)에 본 발명의 폴리펩티드를 접종하여, 면역 혈청을 회수하는 통상의 방법에 의해 제조할 수 있다.

본 발명에는 본 발명의 폴리펩티드, 그 항체와 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 함유하는 약학적 조성물도 포함된다.

(1)에 기재된 본 발명의 폴리펩티드로는 서열 번호 1 또는 5로 나타내어진 아미노산 서열을 갖는 것 이외에, 그 일부가 결손된 것(예컨대, 서열 번호 1 중, 생물 활성의 발현에 필수적인 부분만으로 이루어지는 폴리펩티드 등), 그 일부가 다른 아미노산과 치환된 것(예컨대, 물성이 유사한 아미노산으로 치환된 것), 및 그 일부에 다른 아미노산이 부가 또는 삽입된 것도 포함된다.

잘 알려진 바와 같이, 하나의 아미노산을 암호하는 코돈은 1∼6 종류(예컨대, Met는 1종류, Leu는 6종류) 알려져 있다. 따라서, 폴리펩티드의 아미노산 서열을 바꾸지 않고서 DNA의 염기 서열을 바꿀 수 있다.

(2)에 특정되는 본 발명의 DNA에는 (1)의 서열 번호 1 또는 5에 기재된 폴리펩티드를 암호하는 모든 염기 서열군이 포함된다. 염기 서열을 바꿈으로써, 폴리펩티드의 생산성이 향상되는 경우가 있다.

(3)에서 특정되는 DNA는 (2)에 기재된 DNA의 한 형태이며, 천연형 서열을 나타낸다.

(4)에 기재된 DNA는 (3)에서 특정되는 DNA에 천연의 비번역 부분을 가한 서열을 나타낸다.

서열 번호 3에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA의 제작은 이하의 방법에 따라서 행해진다.

처음에 효모 SST법(미국 특허 제5,536,637호에 기재)의 개요에 관해서 설명한다.

사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae) 등의 효모가 자당 또는 라피노오스를 에너지원이나 탄소원으로서 이용하기 위해서는 인버타아제를 배지중에 분비하지 않으면 안된다(인버타아제는 라피노오스를 자당과 멜리비오스로, 자당을 프럭토스와 글루코스로 분해하는 효소임). 또한, 수많은 이미 알려진 포유류의 시그널 서열은 효모의 인버타아제를 분비시킬 수 있는 것이 알려져 있다. 이로부터, 효모의 인버타아제의 분비를 가능하게 하는 신규의 시그널 서열을 포유류의 cDNA 라이브러리로부터 라피노오스 배지상에서의 효모의 생육을 지표로 스크리닝하는 방법으로서 본 방법은 개발되었다.

번역 개시점 ATG를 삭제한 비분비형의 인버타아제 유전자 SUC2(GENBANK accession No.VO1311)를, 효모의 발현 벡터[발현용 프로모터(ADH 프로모터) 및 터미네이터(ADH 터미네이터)는 AAH5 플라스미드(Gammerer, Methods in Enzymol. 101, 192-201, 1983) 유래이고, 효모 복제 기점은 2μori, 효모 선택 마커에는 TRP1, 대장균 복제 기점은 ColE1 ori, 대장균 약제 내성 마커에는 암피실린이 사용되고 있음]에 넣어서 효모 SST용 벡터 pSUC2를 제작하였다. 그 SUC2 유전자의 상류에 포유류의 cDNA를 조합하여 효모 SSTcDNA 라이브러리를 조제하였다. 이 라이브러리로 분비형 인버타아제가 결손되어 있는 효모를 형질 전환하였다. 조합된 포유류 cDNA가 시그널 서열을 암호하고 있는 경우, 효모에서 발현된 인버타아제에 대하여도 분비 작용을 갖는다고 생각되며, 그 결과 라피노오스 배지상에서의 생육이 가능하게 된다. 따라서, 출현한 콜로니로부터 효모를 배양하여 플라스미드를 조제하고, 삽입 DNA의 염기 서열을 결정함으로써, 신규 시그널 서열의 검색을 신속하고 용이하게 하였다.

효모 SSTcDNA 라이브러리의 제작은

(1) 대상이 되는 세포로부터 mRNA를 단리하여, 특정한 제한 효소(효소 I) 부위를 연결한 랜덤 프라이머를 이용하여 2본쇄 DNA를 합성하고,

(2) 효소 I과는 다른 특정한 제한 효소(효소 Ⅱ) 부위를 포함하는 어댑터를 연결하여, 효소 I로 분해한 후, 적당한 크기로 분획하고,

(3) 효모 발현 벡터내의 시그널 펩티드를 삭제한 인버타아제 유전자의 상류에 생성된 cDNA 단편을 연결하여, 형질 전환하는 공정으로 이루어진다.

각 공정을 자세히 설명하면, 공정(1)에서는 대상이 되는 포유류의 장기나 세포주 등으로부터, 필요에 따라 적당한 자극제로 자극한 후, 공지의 방법[이하, 공지의 방법은 특별한 기재가 없으면 Molecular Cloning(Sambrook, J., Fritsch, E. F. 및 Maniatis, T. 저서, Cold Spring Harbor Laboratory Press에서 1989년에 발간) 또는 Current Protocol In Molecular Biology(F. M. Ausubel 등 편저, John Wiley ＆ Sons, Inc.에서 발간)에 기재된 방법에 따라서 행해짐]에 따라서 mRNA의 단리가 행해진다.

대상이 되는 세포로는 HAS303(사람 골수 간질 세포주: 도쿄의과대학 제1내과 外山圭 조교수, 相澤信 조수로부터 공여. J. Cell. Physiol., 148, 245- 251, 1991 및 Experimental Hematol., 22, 482-487, 1994에 기재) 또는 HUVEC(사람 제대 정맥 혈관 내피 세포: ATCC No. CRL-1730)를 들 수 있다. 랜덤 프라이머를 이용하는 2본쇄 cDNA의 합성은 공지의 방법에 의해 행해진다.

어댑터에 연결되는 제한 효소(효소 I) 부위와 다음 공정(2)에서 이용되는 제한 효소(효소 Ⅱ) 부위는 서로 다른 것이라면 무엇을 이용하더라도 좋다. 바람직하게는 효소 I로서 EcoRI, 효소 Ⅱ로서는 XhoI을 이용하는 것이 좋다.

공정(2)에서는 T4DNA 폴리머라아제로 말단을 평활화하고, 효소 Ⅱ 어댑터를 연결한 후, 효소 I로 분해 아가로오스 전기 영동(AGE)에 의해 300∼800 bp의 cDNA를 분획한다. 효소 Ⅱ는 상기한 것과 같이 효소 I과 다르다면 무엇이나 좋다.

공정(3)은 효모 발현용 플라스미드 벡터에 연결된 시그널 펩티드를 삭제한 인버타아제 유전자의 상류에 (2)에서 얻어진 cDNA 단편을 넣어서 대장균을 형질 전환하는 공정이다. 여기서 효모 발현용 플라스미드 벡터로서는 여러가지의 것이 알려져 있지만, 예컨대 대장균내에서도 기능하는 YEp24 등이 이용된다. 적합하게는 전술한 플라스미드 pSUC2가 이용된다.

형질 전환을 위한 숙주 대장균주는 이미 많은 것이 알려져 있고, 바람직하게는 컴피턴트(competent) 세포 DH10B이다. 또한, 형질 전환 방법은 공지의 어느 것을 이용하더라도 좋지만, 바람직하게는 일렉트로포레이션법(electroporation)에 의해 행해진다. 형질 전환체는 통상의 방법으로 배양한 후, 이로부터 효모 SST용의 cDNA 라이브러리를 얻을 수 있다.

이 cDNA 라이브러리는 모든 클론이 상기 단편을 포함하고 있다는 뜻은 아니며, 또 전부가 미지(신규)의 시그널 펩티드를 암호하는 유전자 단편이라고는 할 수 없다. 그래서, 이어서 그 라이브러리로부터 미지의 시그널 펩티드를 암호하는 유전자 단편을 스크리닝할 필요가 있다.

즉, cDNA 라이브러리를 인버타아제 유전자를 갖고 있지 않은 효모 사카로마이세스 세레비시에(예컨대, YT455주 등) 또는 인버타아제 유전자를 인위적으로 결손시킨 주(공지의 방법에 따라서 제작 가능)를 이용할 수 있다. 효모의 형질 전환은 공지의 방법, 예컨대 아세트산 리튬법으로 실시한다. 형질 전환체를 선택 배지에서 생육한 후, 라피노오스를 탄소원으로 하는 배지로 옮겨 생육 가능한 콜로니를 선택하고 플라스미드를 회수한다. 라피노오스를 탄소원으로 하여 효모가 생육되었다는 것은 라이브러리 중에 어떠한 분비 단백질의 시그널 펩티드가 들어 있다는 것을 시사하는 것이다.

다음에, 단리된 양성 클론에 대해서 염기 서열을 결정하고, 미지의 단백질을 암호하는 것이 분명해진 cDNA에 대해서는, 이를 프로브로 하여 전체 길이 클론을 단리하여, 전체 길이의 염기 서열을 결정할 수 있다. 이들 조작은 당업자에 있어서 전부 공지의 방법으로 행해진다.

서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열이 일부, 바람직하게는 전부가 확정되면 포유류에 존재하는 본 발명의 폴리펩티드를 암호하는 DNA 혹은 본 발명의 폴리펩티드의 동족체 및 아군을 암호하는 DNA를 얻을 수 있다. 적당한 염기 서열을 갖는 올리고뉴클레오티드를 합성하고, 그것을 이용하여 포유류 유래의 cDNA 라이브러리 혹은 mRNA로부터 PCR법에 의해, 혹은 적당한 염기 서열의 단편을 프로브로 하여 하이브리드시킴으로써, 다른 포유류 cDNA 라이브러리 혹은 그 게놈 라이브러리로부터, 다른 포유류형의 해당 폴리펩티드를 암호하는 DNA를 얻을 수 있다.

이와 같이 하여 얻어진 cDNA가, SST에서 얻어진 cDNA 단편의 염기 서열(또는 그 상동 서열)을 포함하고 있으면 시그널 서열을 암호하고 있는 것이기 때문에, 그 cDNA가 전체 길이, 또는 거의 전체 길이라는 것은 분명하다(시그널 서열은 예외없이 단백질의 N 말단에 존재하므로, cDNA의 오픈 리딩 프레임의 5' 말단에 암호되어 있음).

또한, 공지의 방법에 따라서 상기 cDNA를 프로브로 하여 노던(Northern) 분석으로 전체 길이를 확인할 수 있다. 하이브리드한 밴드로부터 얻어지는 mRNA의 크기와 그 cDNA의 크기를 비교하여, 거의 같으면 그 cDNA는 거의 전체 길이라고 생각할 수 있다.

서열 번호 2, 3, 6 또는 7에 기재된 염기 서열이 일단 확정되면, 그 후에는 화학 합성에 의해서, 혹은 그 염기 서열의 단편을 화학 합성하고, 이것을 프로브로서 하이브리드함으로써, 본 발명의 DNA를 얻을 수 있다. 또한, 본 DNA를 함유하는 벡터 DNA를 적당한 숙주에 도입하여, 이것을 증식시킴으로써 목적으로 하는 DNA를 필요량 얻을 수 있다.

본 발명의 폴리펩티드를 얻는 방법으로서는,

(1) 생체 또는 배양 세포로부터 정제 단리하는 방법,

(2) 펩티드 합성하는 방법, 또는

(3) 유전자 조환 기술을 이용하여 생산하는 방법

등을 들 수 있지만, 공업적으로는 (3)에 기재한 방법이 바람직하다.

유전자 조환 기술을 이용하여 폴리펩티드를 생산하기 위한 발현계(숙주-벡터계)로는, 예컨대 세균, 효모, 곤충 세포 및 포유 동물 세포의 발현계를 들 수 있다.

예컨대, 대장균에서 발현시키는 경우에는 성숙 단백 부분을 암호하는 DNA의 5' 말단에 개시 코돈(ATG)을 부가하고, 생성된 DNA를 적당한 프로모터(예컨대, trp 프로모터, lac 프로모터, λPL 프로모터, T7 프로모터 등)의 하류에 접속한 후, 대장균내에서 기능하는 벡터(예컨대, pBR322, pUC18, pUC19 등)에 삽입하여 발현 벡터를 제작한다.

다음에, 이 발현 벡터에 의해 형질 전환된 대장균(예컨대, E. Coli DH1, E. Coli JM109, E. Coli HB101주 등)을 적당한 배지에서 배양하여, 그 균체로부터 목적으로 하는 폴리펩티드를 얻을 수 있다. 또한, 박테리아의 시그널 펩티드(예컨대, pelB의 시그널 펩티드)를 이용하면, 세포질 중으로 목적으로 하는 폴리펩티드를 분비할 수도 있다. 더욱이, 다른 폴리펩티드와의 융합 단백질을 생산할 수도 있다.

또한, 포유 동물 세포에서 발현시키는 경우에는, 예컨대 서열 번호 3 또는 7에 기재된 염기 서열을 암호하는 DNA를 적당한 벡터(예컨대, 레트로바이러스 벡터, 파피로마 바이러스 벡터, 종두 바이러스 벡터, SV40계 벡터 등) 중의 적당한 프로모터(예컨대, SV40 프로모터, LTR 프로모터, 메탈로티오네인 프로모터 등)의 하류에 삽입하여 발현 벡터를 제작한다. 다음에, 얻어진 발현 벡터로 적당한 포유 동물 세포(예컨대, 원숭이 COS-7 세포, 차이니스 햄스터 CHO 세포, 마우스 L 세포 등)를 형질 전환하여, 형질 전환체를 적당한 배지에서 배양함으로써, 그 세포막 상에 목적으로 하는 폴리펩티드가 발현된다. 또한, 서열 번호 3 또는 7에 기재된 염기 서열을 암호하는 DNA의 경막 영역을 결손시킨 결실체를 상기 벡터에 삽입하고, 이것을 이용하여 적당한 포유류 동물 세포를 형질 전환함으로써, 그 배양액 중에 목적으로 하는 가용성 폴리펩티드가 분비된다. 이상과 같은 식으로 얻어진 폴리펩티드는 일반적인 생화학적 방법에 의해서 단리 정제할 수 있다.

산업상 이용성

본 발명의 폴리펩티드 OAF065는 TNF 수용체 패밀리에 속하는 1군의 단백질과 유의의 상동성을 보였다. TNF 수용체 패밀리에 속하는 단백질은 세포외 도메인에 6개의 Cys 잔기를 포함하는 반복 구조를 3∼6개 갖는 I형 막 단백질로, 그 리간드와의 상호 작용에 의해, 여러가지 세포의 증식, 분화, 세포사와 같은 현상에 관련되어 있는 것이 분명해져 있다(Craig A. Smith et. al., Cell, 76, 959- 962, 1994).

예컨대, 신경 성장 인자(NGF) 수용체/NGF는 각종 신경계 세포의 생존 유지, 신경 돌기의 신장, 신경 전달 물질의 합성 촉진에 필수적이다(Chao M. V., J. Neurobiol., 25, 1373-1385, 1994). Fas/FasL은 그 세포소멸 유도 활성을 통해 암 세포의 파괴나 자기 반응성 임파구의 제거와 같은 생체의 항상성 유지에 필수인 동시에, AIDS에 있어서의 CD4 양성 T 세포의 감소, 극증 간염, 이식후의 이식편대 숙주(GVHD), 각종 자기 면역 질환의 발증에 관여하고 있다(Nagata S. et. al. Science, 267, 1449-1456, 1995). CD40/CD40L은 T/B 세포간 상호 작용을 통해 B세포의 활성화(증식 및 항체 생성 촉진)에 필수적이다(Banchereau J. et. al. Annu. Rev. Immunol., 12, 881-922, 1994). TNF 수용체/TNF 및 림포톡신(LT) 수용체/LT는 각종 면역·조혈 세포의 증식, 활성화, 분화 유도, 종양 세포의 세포 장해, 증식 억제, 각종 결합 조직(혈관 내피 세포, 섬유아 세포, 골아 세포 등)의 증식, 활성화, 바이러스 증식 억제 등의 작용을 갖는 동시에, 림프 조직의 형태 혹은 기관 형성에도 필수적이다(Ware C. F. et al. Curr. Topics Microbiol. Immunol., 198, 175-218, 1995) .

본 발명의 폴리펩티드도 세포외 도메인에 Cys의 반복 구조가 3군데 존재하므로, 신규의 TNF 수용체 패밀리에 속하는 단백질이며, 기지 또는 미지의 TNF 패밀리에 속하는 리간드를 통해 작용하는 것은 명백하다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드 및 그것을 암호하는 cDNA는 조혈·면역·신경계 세포의 분화, 증식, 성장, 생존 유지 또는 세포사, 면역계의 기능, 종양의 증식, 성장 혹은 염증, 골대사 등에 관련된 하나 또는 그 이상의 효과 혹은 생물 활성(이하에 열거하는 분석법에 관련된 것을 포함함)을 나타내는 것으로 생각된다. 본 발명의 폴리펩티드에 관해서 기술되는 효과 혹은 생물 활성은 그 폴리펩티드의 투여 혹은 사용에 의해, 혹은 그 폴리펩티드를 암호하는 cDNA의 투여 혹은 사용(예컨대, 유전자 치료나 cDNA 도입에 알맞은 벡터)에 의해 제공된다.

(1) 시토킨 활성 및 세포 증식/분화 활성

본 발명의 폴리펩티드는 시토킨 활성 및 세포 증식(유도 혹은 저해)/분화 활성(유도 혹은 저해)을 나타낼 가능성, 혹은 어떤 세포 집단에 다른 시토킨의 생산을 유도 혹은 억제한다고 생각된다. 모든 이미 알려진 시토킨을 포함한, 현재 발견되어 있는 대부분의 단백성 인자는 인자에 의존적인 하나 혹은 그 이상의 세포 증식 분석법에서 활성을 보이기 때문에, 그 분석법은 시토킨 활성의 편리한 확인법으로서 기능한다. 본 발명의 폴리펩티드의 활성은 많은 종래의 인자 의존성 세포주의 세포 증식 분석법 중 어느 하나에 의해서 증명될 수 있다.

(2) 면역 자극/억제 활성

본 발명의 폴리펩티드는 면역 자극 활성 및 면역 억제 활성을 나타낸다고 생각된다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드는 예컨대 T 임파구 및 B 임파구 혹은 어느 한쪽의 성장 및 증식을 제어(자극 혹은 억제)하는 것이나, 같은 식으로 NK 세포나 다른 집단의 세포 상해성 활성에 영향을 주는 것에 의해, 여러가지 면역 부전 및 질환[합병형 면역부전중증(SCID)를 포함함]의 치료에 효과를 나타낸다고 생각된다. 이들 면역 부전은 유전성인 경우도 있고, 바이러스(예컨대 HIV)나, 마찬가지로 세균이나 곰팡이의 감염이 원인으로 발생하는 경우도 있다. 또는 자기 면역 질환으로부터 유래될 가능성도 있다. 보다 특수한 경우에, HIV, 간염 바이러스(hepatitis viruses), 헤르페스 바이러스(herpes viruses), 마이코박테리아(mycobacteria), 레이시마니아(leishmania), 말라리아(malaria) 및 칸디다(candida)와 같은 여러가지 곰팡이 감염을 포함하는 바이러스, 세균, 곰팡이 혹은 다른 감염에 의한 감염증의 원인을, 본 발명의 폴리펩티드를 이용함으로써 치료할 수 있다고 생각된다. 물론, 이와 관련하여, 본 발명의 폴리펩티드는 면역 시스템이 증대되고 있는 것이 일반적으로 시사되는 장소, 즉 암 치료 부분에 있어서 효과를 나타낸다고 생각된다.

본 발명의 폴리펩티드는 알레르기 반응 및 천식이나 다른 호흡기계 질환과 같은 상황의 치료에도 효과를 나타낸다고 생각된다. 면역 억제가 요망되는 다른 상태(예컨대, 천식이나 관련 호흡기 질환을 포함함)에도, 본 발명의 폴리펩티드를 이용하여 치료할 수 있다고 생각된다.

본 발명의 폴리펩티드는, 예컨대 감염[예, 패혈병성 쇼크 혹은 전신성 염증 반응 증후군(SIRS)], 염증성 대장염, 클론병, 혹은(IL-11에 의해 증명된 효과와 같은) TNF나 IL-1과 같은 시토킨의 과잉 생산으로부터 유래되는 식의 감염에 관련된 만성 혹은 급성의 염증을 억제할 가능성도 있다.

(3) 조혈 세포 제어 활성

본 발명의 폴리펩티드는 조혈 세포의 제어에, 또 그에 따라 골수구양 세포 혹은 림프구양 세포의 결핍에 대한 치료에도 효과를 나타낸다고 생각된다. 콜로니 형성 세포 혹은 인자 의존성 세포주의 원조하에 극히 약한 생물 활성으로조차도, 조혈 세포의 제어에 관계되는 것을 시사한다. 그 생물 활성이란, 다음에 드는 예의 전부 혹은 그 어느 하나에서 예로 든 것에 관계되는 것이다. 적혈구 전구 세포만의 (성장 및) 증식을 지지, 혹은 다른 시토킨과의 조합, 또 그것이 시사하는 유효성, 예컨대 여러가지 빈혈의 치료, 혹은 적혈구 전구 세포 및 적혈구 혹은 그 중 어느 하나의 생산을 자극하는 방사선 요법/화학 요법과의 조합 사용; 과립구 및 단구/마크로 파지와 같은 골수구의 (성장 및) 증식을 지지(즉, 고전적인 CSF 활성), 화학 요법에 따른 골수 억제를 막기 위한 화학 요법과의 병용; 거핵구의 (성장 및) 증식 및 후속되는 혈소판의 (성장 및) 증식의 지지, 그에 의해 혈소판 감소증과 같은 여러가지 혈소판 장해를 방어 및 치료할 수 있게 하는 혈소판 수혈시 혹은 상보적인 일반적 사용; 상기 조혈 세포의 몇가지 혹은 모든 세포로 성숙할 수 있는 조혈간세포의 (성장 및) 증식의 지지, 이에 따라, 여러가지 간세포 장해(재생 불량성 빈혈 및 발작성 야간 혈색소뇨증을 포함한, 이식으로 일반적으로 치료되는 것, 이에 국한되는 것은 아님)에 치료적 효과를 발견할 수 있고, 또 정상 세포 혹은 유전자 요법을 위해 유전적으로 조작된 세포를 시험관내 혹은 생체외(즉, 골수 이식에 동반됨) 중 어느 방법으로든지, 방사선 요법/화학 요법후의 간세포 분획의 재구축을 행하는 것 역시 마찬가지이다.

본 발명의 폴리펩티드는 다른 방법 중, 이하의 방법에 의해 측정하는 것이 가능하다.

(4) 조직 생성/수복 활성

본 발명의 폴리펩티드는 손상 치유 및 조직 수복, 또한 화상, 절개 및 궤양의 치료와 같이, 뼈, 연골, 힘줄, 인대 및 신경 조직 성장 혹은 재생 중 어느 하나에 사용된다고 생각된다.

뼈를 정상적으로 형성하지 않는 환경에서 연골 및 뼈 혹은 어느 하나의 성장을 유도하는 식으로 본 발명의 폴리펩티드는 사람 및 다른 동물의 골절 및 연골 손상 혹은 결손의 치유에 적용된다. 또한, 본 발명의 폴리펩티드를 사용하는 제제는 개방 골절과 같이 폐쇄 골절의 정복, 또 인공 관절의 고정 개량이나, 예방적 사용에도 유효하다고 생각된다. 뼈 형성제에 의해 유도된 신생뼈 형성은 선천성, 외상성, 암 절제술에 의해 유발된 두개안면(頭蓋顔面)의 결손의 수복에 공헌한다. 또, 미용 성형 외과 분야에도 유효하다.

본 발명의 폴리펩티드는 치근막증의 치료 및 다른 치아 수복에도 사용된다고 생각된다. 그와 같은 약품은 뼈 형성 세포를 유인하여, 그 세포의 증식을 자극하고, 그 전구 세포의 분화를 유도하는 환경을 제공한다고 생각된다. 본 발명의 폴리펩티드는 뼈 및 연골 혹은 어느 하나의 수복을 자극하는 것을 통해서, 혹은 염증이나 염증 과정에서 개재되는 조직 파괴(콜로게나아제 활성이나 파골 세포의 활성)의 과정을 저지함으로써, 골다공증 및 골관절염의 치료에 유효하다고 생각된다.

본 발명의 폴리펩티드에 기인한다고 생각되는 조직 재생 활성의 다른 카테고리는 힘줄/인대 형성이다. 본 발명의 폴리펩티드는 힘줄/인대 모양 조직 혹은 다른 조직이 정상적으로 형성되지 않는 환경에서 그와 같은 조직 형성을 유도하는 것이지만, 사람 및 다른 동물에게 있어서의 힘줄/인대의 열상(裂傷), 기형, 및 다른 힘줄/인대의 장해 치유에 적용할 수 있다. 힘줄/인대 모양 조직을 유도하는 폴리펩티드를 사용하는 제제는 뼈 혹은 다른 조직에의 힘줄/인대의 고정의 개량, 및 힘줄/인대 조직의 결손의 수복에서의 사용은 물론 힘줄 또는 인대의 손상의 방어에 대한 예방적 사용도 생각할 수 있다. 본 발명의 구성물에 의해 유도된 신생 힘줄/인대 모양 조직 형성은 선천성, 외상, 혹은 다른 기원의 힘줄 혹은 인대 결손의 수복에 공헌한다. 또한, 힘줄 혹은 인대의 첨부 혹은 수복이라는 미용 성형 외과에도 유효하다. 본 발명의 구성물은 힘줄/인대 형성 세포를 유인하여, 그 세포의 증식을 자극하고, 그 전구 세포의 분화를 유도하는 환경을 제공한다고 생각된다. 혹은 조직 수복을 다하기 위해서 생체내로의 반환에 대비하여 생체외에서 힘줄/인대 세포 혹은 그 전구 세포를 유도한다. 본 발명의 구성물은 건염, 수근 터널 증후군(Carpal tunnel syndrome), 및 다른 힘줄 혹은 인대 결손의 치료에도 유효하다. 본 발명의 구성물에는 적당한 매트릭스 및 캐리어와 마찬가지로 당업자에게 잘 알려져 있는 착화(Sequestering)제도 포함된다.

본 발명의 폴리펩티드는 신경 세포의 증식, 및 신경과 뇌조직의 재생, 즉 신경 세포 혹은 신경 조직에 대한 변성, 죽음, 혹은 외상을 포함하는 기계적 및 외상적 장해와 같이 중추 및 말초 신경계 질환 및 신경병의 치료에 대하여도 효과를 나타낸다고 생각된다. 보다 특이적으로는 본 발명의 폴리펩티드는 말초 신경 장해, 말초 신경증 및 국소적 신경증과 같은 말초 신경계의 질환 및 알츠하이머병, 파킨슨병, 헌팅톤병, 근 위축성 측책증(amyotrophic lateral), 및 샤이-드레거(Shy-Drager) 증후군과 같은 중추 신경계의 질환 치료에 유효하다고 생각된다. 또한, 본 발명에 따라서 치료될 수 있는 조건에는 척수 장해, 머리 부분 외상, 및 뇌졸중 등의 뇌혈관 질환과 같은 기계적 및 외상적 장해를 포함한다. 화학 요법 혹은 다른 치료로부터 기인하는 말초 신경증도 본 발명의 폴리펩티드를 이용하여 치료 가능하다.

본 발명의 폴리펩티드는 장기(예컨데 췌장, 간장, 장, 신장, 피부, 내피 포함), 근육(평활, 골격 혹은 심장), 및 혈관 조직(혈관 내피를 포함함)과 같은 다른 조직을 생성하는 활성, 혹은 그와 같은 조직을 구성하는 세포의 증식을 촉진하는 활성을 보일 가능성도 기대된다. 요구되는 효과의 일부는 정상 조직을 재생시키는 섬유성 반흔(scarring)의 저해에 의해서도 나타날 수 있다고 생각된다.

본 발명의 폴리펩티드는 분해관 보호 혹은 재생, 및 폐 혹은 간장의 섬유화, 여러가지 조직의 재환류 손상, 및 전신성 시토킨 장해에 기인하는 상태에 대한 치료에도 유효하다고 생각된다.

(5) 악티빈/인히빈 활성

본 발명의 폴리펩티드는 악티빈/인히빈에 관련된 활성을 나타낸다고 생각된다. 악티빈은 여포 자극 호르몬(FSH)의 방출을 자극하는 활성에 의해서 특징지워지지만, 인히빈은 여포 자극 호르몬(FSH)의 방출을 저해하는 활성에 의해서 특징지워진다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 단독 혹은 인히빈 a 패밀리의 멤버와의 헤테로다이머로, 포유류 동물의 암컷 수정율을 감소시키고, 수컷의 정자 형성을 감소시키는 인히빈의 활성에 기초하여 피임 조절제로서 유효하다고 생각된다. 충분한 양의 다른 인히빈의 투여에 의해서, 포유 동물의 불임을 유도할 수 있다. 한편, 본 발명의 폴리펩티드는 인히빈 b 그룹의 다른 단백질 서브유닛과의 호모다이머 혹은 헤테로다이머로, 전뇌하수체의 세포로부터 FSH의 방출을 자극하는 악티빈 분자의 활성에 기초한 치료적인 불임 유도로서 유효하다고 생각된다(미국 특허 제4,798,885호를 참조). 본 발명의 폴리펩티드는 소, 양, 및 돼지와 같은 가축의 생애 출산 능력 가능한 기간을 연장시키기 위해서, 성적으로 미숙한 포유류 동물에 있어서의 임신 개시를 조기화시키는 데에 유효하다고 생각된다.

(6) 주화성/화학 운동성 활성

본 발명의 폴리펩티드는, 예컨대 단구, 호중구, T 세포, 비만 세포, 호산구, 및 내피 세포, 혹은 그 어느 하나를 포함한, 포유 동물의 세포에 대하여(예컨대, 케모킨으로서 기능한다) 주화성/화학 운동성 단백질을 갖는다고 생각된다. 주화성/화학 운동성 단백질은 반응이 요망되는 부위에, 요망되는 세포 집단을 고정화 혹은 유인하기 위해서 사용될 수 있다. 주화성/화학 연동성 단백질은 국소적인 감염과 같이, 창상 및 다른 외상의 치료에 특별한 우위성을 제공한다. 예컨대, 림프구, 단구, 또는 호중구를 종양 혹은 감염 부위로 유인하는 것은 종양 혹은 감염 부위에 대한 면역 응답을 개선하는 결과를 초래한다고 생각된다.

단백질이나 펩티드는 만일 그것이 직접 혹은 간접적으로 특수한 세포 집단에 대하여 지시된 방향 또는 운동을 자극할 수 있으면, 그와 같은 세포 집단에 대한 주화성 활성를 유지하고 있다. 바람직하게는 그 단백질이나 펩티드는 세포의 지시된 운동을 직접적으로 자극하는 활성을 유지한다. 특별한 단백질이 있는 집단의 세포에 대하여 주화성 활성을 유지하는지의 여부는 이미 알려진 어떤 세포 주화성의 분석법에 그와 같은 단백질 혹은 펩티드를 사용하더라도 용이하게 결정할 수 있다.

(7) 응혈 및 혈전 활성

본 발명의 폴리펩티드는 응혈 혹은 혈전 활성도 나타낸다고 생각된다. 결과적으로, 그와 같은 단백질은 여러가지 응고 장해(혈우병과 같은 유전성 장해를 포함함)의 치료에 유효하다고 기대된다. 또는, 외상, 수술 또는 다른 원인에 의해 생겨난 창상의 치료에 있어서의 응고 및 다른 응혈 사상을 촉진시킬 것으로 기대된다. 본 발명의 폴리펩티드는 혈전 형성의 용해 혹은 저해(혈전 혹은 졸중 등), 및 그로부터 생기는 상태의 치료 및 예방에도 효과가 있다고 생각된다.

(8) 수용체/리간드 활성

본 발명의 폴리펩티드는 수용체, 수용체/리간드 혹은 수용체/리간드의 억제제 혹은 작동제로서의 활성을 나타낼 가능성도 있다. 그와 같은 수용체 및 리간드의 예로서, 시토킨 수용체 및 그 리간드, 수용체 키나아제 및 그 리간드, 수용체 포스파타아제 및 그 리간드, 세포간 상호 작용에 관련된 수용체(Selectin, Integurin, 및 그 리간드, 수용체 키나아제 등의 세포 접착 분자를 포함함) 및 그 리간드, 및 항원 제시, 항원 인식, 세포성 및 액성 면역 반응의 발달에 관계되는 수용체/리간드의 조합을 들 수 있지만, 이들에 제한되는 것은 아니다. 수용체 및 리간드는 그 상호 작용에 대한 가능한 펩티드 혹은 소분자의 억제제의 스크리닝에도 유효하다. 본 발명의 폴리펩티드(수용체 및 리간드의 단편을 포함하지만, 제한되는 것은 아님)는 그 자체 수용체/리간드의 상호 작용의 억제제로서 유효하다고 생각된다.

(9) 그 밖의 활성

본 발명의 폴리펩티드는 이하에 나타내는 부가적인 활성 혹은 효과의 하나 혹은 그 이상을 나타낸다고 생각된다. 즉 세균, 바이러스, 곰팡이, 및 다른 기생충을 포함하는 감염성 물질의 살상; 신장, 체중, 머리칼의 색, 눈의 색, 피부 혹은 다른 조직의 색소 침착, 혹은 기관의 크기(예컨대, 흉부 증량 혹은 감량) 등, 신체적 특징에 미치는 효과(억제 혹은 촉진); 식이 지방, 단백질, 혹은 탄수화물의 분해에 미치는 효과; 식욕, 성욕, 스트레스, 인식(인식 장해), 우울증, 폭력 행동을 포함하는 행동 특징에 미치는 효과; 진통 효과 혹은 다른 통증을 감소시키는 효과; 배성간세포의 조혈계 이외의 다른 계통으로의 분화 및 증식 촉진; 및 효소의 경우, 그 효소의 결함 보충 및 관련 질환의 치료.

상기 활성을 갖는 본 발명의 폴리펩티드는 예컨대 B 세포, T 세포, 비만 세포의 증식 또는 세포사, 면역 글로불린의 클래스 변환 촉진에 의한 클래스 특이적 유도, B 세포의 항체 생산 세포로의 분화, 과립구 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, 단구·마크로 파지 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, 호중구, 단구·마크로 파지, 호산구, 호염기구의 증식 또는 기능 항진, 세포사, 거핵구 전구 세포의 증식 또는 세포사, 호중구 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, B 또는 T 전구 세포의 증식 또는 분화, 세포사, 적혈구의 생산 촉진, 적혈구, 호중구, 호산구, 호염기구, 단구·마크로 파지, 비만 세포, 거핵구 전구 세포의 증식 지지, 호중구, 단구·마크로 파지, B 세포 또는 T 세포의 유주(遊走) 촉진, 흉선 세포의 증식 또는 세포사, 지방 세포의 분화 억제, 천연 킬러 세포의 증식 또는 세포사, 조혈 간세포의 증식 또는 세포사, 간세포 및 각종 조혈 전구 세포의 증식 억제, 간엽계 간세포 유래의 골아 세포, 연골 세포로의 분화 촉진 또는 증식, 세포사, 혹은 파골 세포의 활성화나 단구에서 파골 세포로의 분화 촉진에 의한 뼈 흡수 촉진의 작용을 본 발명의 폴리펩티드만으로, 또 리간드 리셉터간의 결합을 통해, 혹은 다른 분자와 상승적으로 작동함으로써 얻을 가능성이 있다.

또한, 본 발명의 폴리펩티드는 신경계에도 작용하는 것이 예측되기 때문에, 각종 신경 전달 물질 작동성 신경 세포로의 분화 및 이들의 생존 유지 또는 세포사, 신경교 세포의 증식 촉진 또는 세포사, 신경 돌기의 신장, 신경절 세포의 생존 유지 또는 세포사, 성상세포의 증식 또는 분화 촉진 또는 세포사, 말초 신경의 증식 또는 생존 유지, 세포사, 쉬반 세포의 증식 또는 세포사, 운동 신경의 증식 또는 생존 유지, 세포사의 작용도 있을 가능성이 있다.

또한, 본 발명의 폴리펩티드는 초기 배의 발생 과정에서, 외배엽 유도 작용에 의한 표피, 뇌, 등뼈, 신경의 기관 형성, 중배엽 유도 작용에 의한 배색(背索) 결합 조직(뼈, 근육, 힘줄), 혈구 세포, 심장, 신장, 생식소의 기관 형성, 혹은 내배엽 유도 작용에 의한 분해기계 장기(위, 장, 간장, 췌장), 호흡기계(폐, 기관)의 형성에 촉진적 또는 억제적으로 작용할 가능성이 있는 동시에, 생체에 있어서도 상기 기관의 증식 혹은 증식 억제 작용을 지닐 가능성이 있다.

따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 그 자체로, 면역계 또는 신경계 혹은 뼈 대사 기능의 저하 또는 항진에 관한 질환, 또는 조혈계 세포의 발육 부전 또는 이상증식, 예컨대 염증성 질환(류마티즘, 궤양성 대장염 등), 골수 이식후의 조혈간세포의 감소증, 암, 백혈병에 대한 방사선 조사 또는 화학 요법제 투여후의 백혈구, 혈소판, B 세포 또는 T 세포의 감소증, 빈혈, 감염증, 암, 백혈병, AIDS, 골대사 이상(골다공증 등), 각종 변성 질환(알츠하이머병, 다발성 경화증 등), 혹은 신경 손상의 예방 또는 치료약으로서 이용될 것으로 기대된다.

또한, 본 발명의 폴리펩티드는 외배엽, 중배엽 또는 내배엽 유래 기관의 분화 또는 증식 작용을 지닐 가능성이 있기 때문에, 각 기관(표피, 뼈, 근육, 힘줄, 심장, 신장, 위, 장, 간장, 췌장, 폐, 기관 등)의 조직 수복제로서 이용하는 것도 기대된다.

또, 본 발명의 폴리펩티드의 폴리클로널 항체 또는 모노클로널 항체를 이용하여, 생체에 있어서의 그 폴리펩티드의 정량을 행할 수 있고, 이에 의해 본 발명의 폴리펩티드와 질환과의 관계의 연구 혹은 질환의 진단 등에 이용할 수 있다. 폴리클로널 항체 및 모노클로널 항체는 상기 폴리펩티드 혹은 그 단편을 항원으로서 이용하여 통상의 방법에 의해 제작할 수 있다.

또, 본 발명의 폴리펩티드(바람직하게는 세포외 도메인의 폴리펩티드)를 이용함으로써, 예컨대 친화성 컬럼을 제작하면, 본 폴리펩티드와 결합하는 기지 또는 미지의 단백질(리간드)의 동정, 정제 혹은 그 유전자 클로닝을 행할 수 있다.

또한, 본 발명의 폴리펩티드(바람직하게는 그 경막 영역 또는 세포내 도메인의 폴리펩티드)를 이용하여, 예컨대 웨스트-웨스턴법에 의해, 또는 그 cDNA(바람직하게는 그 폴리펩티드의 경막 영역 또는 세포내 도메인을 암호하는 cDNA)를 이용하여, 예컨대 효모2-하이브리드법에 의해 상기 폴리펩티드와 세포질내에서 상호 작용하는 하류의 시그널 전달 분자의 동정, 유전자 클로닝을 행할 수도 있다.

더욱이 본 발명의 폴리펩티드를 이용함으로써, 본 폴리펩티드 리셉터 작동제, 길항제 및 수용체-시그널 전달 분자간의 저해제 등의 스크리닝을 행할 수도 있다.

본 발명의 cDNA는 많은 유용성이 기대되는 본 발명의 폴리펩티드를 생산할 때 중요하고 또 필수적인 주형이 될 뿐만 아니라, 유전병의 진단이나 치료(유전자 결손증의 치료 또는 안티센스 DNA(RNA)에 의해서, 폴리펩티드의 발현을 정지시킴에 의한 치료 등)에 이용할 수 있다. 또한, 본 발명의 cDNA를 프로브로 하여 게놈 DNA를 분리할 수도 있다. 같은 식으로, 본 발명의 cDNA와 상동성이 높은 사람의 관련 폴리펩티드의 유전자, 또한 마우스 이외의 생물에 있어서의 본 발명의 폴리펩티드와 상동성이 높은 폴리펩티드의 유전자를 분리하는 것도 가능하다.

의약품에 대한 적용

조혈계 세포의 발육 부전이나 이상 증식, 신경계 기능의 항진이나 저하, 면역계 기능의 항진이나 저하에 관한 질환, 예컨대 염증성 질환(류마티즘, 궤양성 대장염 등), 골수 이식후의 조혈간세포의 감소증, 방사선 치료후 또는 화학 요법제 투여후의 백혈구, 혈소판, B 세포 또는 T 세포의 감소증, 빈혈, 감염증, 암, 백혈병, AIDS, 각종 변성 질환(알츠하이머병, 다발성 경화증 등), 또는 신경 손상의 예방 또는 치료, 골대사 이상(골다공증 등)의 예방 또는 치료약, 혹은 조직 수복 등을 위해, 본 발명의 폴리펩티드 혹은 본 발명의 폴리펩티드에 대한 항체는 통상 전신적 또는 국소적으로, 일반적으로는 경구 또는 비경구의 형태로 투여한다. 바람직하게는 경구 투여, 정맥내 투여 및 뇌실내 투여가 좋다.

투여량은 연령, 체중, 증상, 치료 효과, 투여 방법, 처리 시간 등에 따라 다르지만, 통상 성인 1인당, 일회에 100㎍에서 100㎎ 범위에서, 하루 1회에서 수회 경구 투여되거나 또는 성인 1인당, 일회에 10㎍에서 100㎎ 범위로, 하루 1회 내지 수회 비경구 투여된다.

물론 상기한 것과 같이, 투여량은 여러가지 조건에 따라 변동하기 때문에, 상기 투여량보다 적은 양으로 충분한 경우도 있고, 또한 범위 이상으로 필요한 경우도 있다.

본 발명의 화합물을 투여할 때는 경구 투여를 위한 고체 조성물, 액체 조성물 및 그 밖의 조성물, 비경구 투여를 위한 주사제, 외용제, 좌제 등으로서 이용된다.

경구 투여를 위한 고체 조성물에는 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 과립제 등이 포함된다. 캡슐에는 소프트 캡슐 및 하드 캡슐이 포함된다.

이러한 고체 조성물에 있어서는 하나 또는 그 이상의 활성 물질이, 적어도 하나의 불활성 희석제(예컨대, 락토스, 만니톨, 글루코스, 히드록시프로필셀룰로오스, 미결정 셀룰로오스, 전분, 폴리비닐피롤리돈, 메타규산알루미늄산마그네슘 등)과 혼합된다. 조성물은 통상의 방법에 따라서 불활성 희석제 이외의 첨가물, 예컨대 윤활제(스테아린산마그네슘 등), 붕괴제(섬유소글리콜산칼슘 등), 안정화제(사람 혈청 알부민, 락토스 등), 용해 보조제(아르기닌, 아스파라긴산 등)을 함유하고 있더라도 좋다.

정제 또는 환제는 필요에 따라 백당, 젤라틴, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메틸셀룰로스프탈레이트 등의 위용성 혹은 장용성 필름으로 피막해도 좋고, 또한 2 이상의 층으로 피막해도 좋다. 또한 젤라틴과 같은 흡수될 수 있는 물질의 캡슐도 포함된다.

경구 투여를 위한 액체 조성물은 약학적으로 허용되는 유탁제, 용액제, 현탁제, 시럽제, 엘릭시르제 등을 포함하는데, 일반적으로 이용되는 불활성 희석제(예컨대, 정제수, 에탄올 등)를 포함하고 있어도 좋다. 이와 같은 조성물은 불활성 희석제 이외에 습윤제, 현탁제와 같은 보조제, 감미제, 풍미제, 방향제, 방부제를 함유하고 있어도 좋다.

경구 투여를 위한 그 밖의 조성물은 1종 또는 그 이상의 활성 물질을 포함하며, 그 자체가 공지된 방법에 의해 처방되는 스프레이제가 포함된다. 이 조성물은 불활성 희석제 이외에 아황산수소나트륨과 같은 안정제와 등장성을 부여하는 식의 안정화제, 염화나트륨, 구연산나트륨 혹은 구연산과 같은 등장제를 함유하고 있어도 좋다. 스프레이제의 제조 방법은, 예컨대 미국 특허 제2,868,691호 및 미국 특허 제3,095,355호 명세서에 자세히 기재되어 있다.

본 발명에 의한 비경구 투여를 위한 주사제는 무균의 수성 또는 비수성의 용액제, 현탁제, 유탁제를 포함한다. 수성 또는 비수성의 용액제, 현탁제는 1종 또는 그 이상의 활성 물질이 적어도 1종의 불활성 희석제와 혼합된다. 수성의 희석제로는 예컨대 주사용 증류수 및 생리 식염수를 들 수 있다. 비수성의 희석제로는 예컨대 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브유와 같은 식물유, 에탄올과 같은 알콜류, 폴리솔베이트80(등록 상표) 등을 들 수 있다.

이러한 조성물은 또한 방부제, 습윤제, 유화제, 분산제, 안정화제(예컨대, 사람 혈청 알부민, 락토스 등), 용해 보조제(예컨대, 아르기닌, 아스파라긴산 등)와 같은 보조제를 포함하고 있어도 좋다.

발명의 개시

본 발명자들은 지금까지 조혈계나 면역계에서 기능하는 증식 분화 인자의 유전자 클로닝을 연구해 왔다. 그리고, 증식 분화 인자(예컨대, 각종 시토킨 등)와 같은 분비 단백질이나 그 수용체와 같은 막 단백질(이하, 이들을 합하여 분비 단백질 등이라 함)의 대부분이 그 N 말단에 시그널 펩티드라 불리는 서열을 갖고 있는 데에 착안하여, 시그널 펩티드를 암호하는 유전자를 효율적이고 또 선택적으로 클로닝하는 방법을 예의 검토하였다. 그 결과, 동물 세포를 이용하여 시그널 펩티드의 유무를 간단하게 검색할 수 있는 방법[시그널 서열 트랩(SST)법]을 발견하였다(일본국 특허 출원 평6-13951호 참조). 또한, 동일한 개념하에 효모를 이용하여 더욱 대량으로 또한 간편하게 시그널 펩티드를 암호하는 유전자를 단리하는 방법(효모 SST법)도 개발되었다(미국 특허 제5,536,637호 참조).

본 발명자들은 SST법을 이용하여, 골수 간질 세포가 생산하고 있는 신규의 막 단백질 및 그것을 암호하는 DNA를 발견하는 데에 성공하여, 본 발명을 완성하였다.

아미노산 서열 데이터 베이스의 스위스 프롯(Swiss Prot Release 33)에 등록되어 있는 이미 알려진 폴리펩티드의 아미노산 서열을 조사한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OAF065는 아직 알려지지 않았지만, I형의 막 단백질로 세포외 영역에 존재하는 종양 괴사 인자(Tumor necrosis factor: TNF) 수용체 패밀리에 공통되는 Cys 리치 영역을 갖는 것으로 판명되었다(도 1). 이로부터, 본 발명의 폴리펩티드는 TNF 수용체 패밀리에 속하는 신규의 막 단백질로 볼 수 있었다.

이하에 실시예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 이들이 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.

실시예

사람 골수 간질 세포주 HAS303(도쿄의과대학 제1내과 外山圭 조교수, 相澤信 조수로부터 공여. J. Cell. Physio1., 148 : 245-251(1991) 및 Experimental Hematol., 22. 482-487(1994)에 기재되어 있음)으로부터 TRIzo1 시약[TRIzol reagent(등록 상표, GIBCOBRL사에서 판매)]을 이용하여 모든 RNA를 추출하고, mRNA 정제 키트[mRNA Purification Kit(상품명, Pharmacia사에서 판매)]를 이용하여 poly(A)RNA를 정제하였다. XhoI 부위를 연결시킨 랜덤 9mer(서열 번호 9: 5' -CGATTGAATTCTAGACCTGCCTCGAGNNNNNNNNN-3')를 프라이머로 하여, 수퍼스크립트 플라스미드 시스템[SuperScript Plasmid System for cDNA Synthesis and Plasmid C1oning(상품명, GIBC0BRL사에서 판매)]을 이용하여 2본쇄 cDNA 합성을 행하였다.

EcoRI 어댑터(GIBC0BRL사에서 판매)를 DNA 라이게이션 키트 ver.2[DNA ligation kit ver.2(상품명, 다까라주조(주)에서 판매) 이후 DNA의 연결은 전부 본 키트를 사용함]를 이용하여 연결한 후, XhoI로 분해하여, 아가로스 전기 영동으로 300∼800 bp의 cDNA를 잘라내어 분획하고, pSUC2(미국 특허 5536637호 참조)의 EcoRI/NotI 부위에 연결하여, 일렉트로포레이션법으로 대장균 DH10B주를 형질 전환하여 효모 SST용의 cDNA 라이브러리를 얻었다.

이 cDNA 라이브러리의 플라스미드를 조제하고, 아세트산 리튬법(Current Protocols In Molecular Biology 13.7.1을 참조)에 의해 효모 YTK12주를 형질 전환하여, 트립토판(Trp)을 포함하지 않는 효모 형질 전환체의 선택 배지(CMD-Trp 배지)의 플레이트상에 접종하고, 30℃에서 48시간 항온배양한 후, 액큐트런 레플리카플레이터[Accutran Replica Plater(상품명, Schleicher ＆ Schuell사에서 판매)]를 이용하여 얻어진 콜로니(형질 전환체)의 레플리카를 라피노오스를 탄소원으로 하는 YPR 플레이트에 취하여, 30℃에서 14일간 항온배양하였다. 3일째 이후, 출현하는 각각의 콜로니를 하나씩 재차 YPR 플레이트에 스트리킹하여 30℃에서 48시간 배양한 후, 단일 콜로니를 YPD 배지에 옮겨, 30℃에서 48시간 배양한 후, 플라스미드를 조제하였다.

계속해서 pSUC2의 클로닝 부위의 양단 서열에 2종류의 프라이머(센스쇄(鎖)는 비오틴화 프라이머)를 이용하여 공지의 방법에 따라서 PCR를 행하고, 삽입된 cDNA를 증폭한 후, 다이나비드(Dynabeads, 상품명, DYNAL사에서 판매)를 이용하여 비오틴화 1본쇄 DNA를 정제하고, 염기 서열의 결정을 행하였다. 염기 서열의 결정은 DNA 시퀀싱 키트[DNA Sequencing kit(Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction)(상품명, Applied Biosystems Inc.에서 판매)]를 이용한 형광 염료 터미네이터 사이클 서열법으로 반응을 행하고, 자동 DNA 시퀀서 373(Applied Biosystems Inc.)으로 판독하였다(이하, 염기 서열 결정은 전부 본 방법으로 행함).

그 중의 1클론 OAF065에 관해서 얻어진 염기 서열 및 추정되는 아미노산 서열에 대해서 데이터 베이스와의 상동성 검색을 행한 결과, 데이터 베이스에 등록되어 있지 않은 신규의 DNA인 것이 분명하였다. 또한 추정되는 아미노산 서열을 기지의 시그널 서열와 비교함으로써 본 발명의 DNA가 기능적, 구조적으로도 시그널 서열을 갖는 것이 확인되었다.

다음에 3' RACE(Rapid Amplification of cDNA End)법에 의해 OAF065의 전체 길이 cDNA를 단리하였다. 3' RACE법은 마라톤 cDNA 증폭 키트[Marathon cDNA Amplification Kit(상품명, Clontech사에서 판매)]를 이용하였다. 이 키트의 방법에 따라서 HAS303의 poly(A)RNA로부터 어댑터를 연결한 2본쇄 cDNA를 조제하였다. SST에서 얻어진 염기 서열의 정보에 기초하여 추정 번역 개시점 ATG 영역을 포함하는 28mer의 OAF065 특이적 프라이머 F3(서열 번호 10: 5'-AGAAAGATGGCTTTAAAAGTGCTACTAG-3')을 제작하여, 그 키트에 첨부된 어댑터 프라이머로 PCR를 행하였다. 그 결과, 4.0 kb와 1.5 kb의 2종류의 DNA가 증폭되었기 때문에, 4.0 kb의 cDNA를 OAF065α, 1.5 kb의 cDNA를 OAF065β라 명명하였다.

이 2종류의 DNA를 아가로스 전기 영동으로 분획한 후, pT7 블루2·T 벡터[pT7 Blue-2 T-Vector(상품명, Novagen사에서 판매)]에 연결하여, 대장균 DH5α를 형질 전환시켜 플라스미드를 조제하였다. 처음에 5'측의 염기 서열을 결정하여, 모두 OAF065 특이적 프라이머 F3의 염기 서열이 존재하는 것을 확인한 후, OAF065α에 관해서는 5'측의 약 1.7 kb를, OAF065β에 관해서는 모든 염기 서열을 결정하여, 각각 서열 번호 3 및 7에 나타내는 서열을 얻었다. 또한 오픈 리딩 프레임을 검색하고, 아미노산으로 해독하여 서열 번호 1 및 5에 나타내는 서열을 얻었다.

OAF065α 및 OAF065β의 염기 서열을 비교해 보면, 5'측의 1∼1290b까지의 염기 서열은 전부 일치했지만, 1291b 이후의 염기 서열은 전혀 상동성이 인정되지 않았다. 또한, OAF065α 및 OAF065β의 아미노산 서열을 비교한 결과 N 말단측의 1∼415 아미노산은 전부 일치하고 있고, OAF065α의 C 말단측 2개 아미노산(GluAla)만이 OAF065β에서는 8개 아미노산(ValArgGlnArgLeuGIySerLeu)으로 치환되어 있었다. 또 소수성 프롯에 의한 해석에서 OAF065α 및 OAF065β은 I형 막 단백질이며, 세포외 영역과 경막 영역은 전부 공통인 것이 판명되었다.

또한, 스위스 프롯(Swiss Prot Release 33)에 등록되어 있는 기지의 폴리펩티드의 아미노산 서열과 비교한 결과, 본 발명의 폴리펩티드 OAF065α와 OAF065β는 아직 알려지지 않았지만, 세포외 영역에 TNF 수용체 패밀리에 공통되는 Cys 리치 영역을 갖는 것이 판명되었다. 즉, 도 1에서 다른 TNF 수용체 패밀리인 사람 종양 괴사 인자 수용체 1(hTNFR1), 사람 종양 괴사 인자 수용체 2(hTNFR2), 사람 신경 성장 인자 수용체(hNGFR) 및 사람 Fas(hFas)와의 아미노산 서열의 비교 결과를 나타낸 바와 같이(아미노산을 1 문자 기호로 나타냄.), 본 발명의 폴리펩티드(OAF065)는 I형 막 단백질로 세포외 영역에 종양 괴사 인자(Tumor necrosis factor: TNF) 수용체 패밀리에 공통되는 Cys 리치 영역을 갖는 것이 판명되었다. 이로부터, 본 발명의 폴리펩티드 OAF065α 및 OAF065β는 TNF 수용체 패밀리에 속하는 신규의 막 단백질인 것이 확인되었다.

서열 목록

서열 번호 : 1

서열의 길이 : 417

서열의 형태 : 아미노산

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : 단백질

서열

Met Ala Leu Lys Val Leu Leu Glu Gln Glu Lys Thr Phe Phe Thr Leu

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Gly Tyr Leu Ser Cys Lys Val Thr Cys Glu Thr Gly

20 25 30

Asp Cys Arg Gln Gln Glu Phe Arg Asp Arg Ser Gly Asn Cys Val Pro

35 40 45

Cys Asn Gln Cys Gly Pro Gly Met Glu Leu Ser Lys Glu Cys Gly Phe

50 55 60

Gly Tyr Gly Glu Asp Ala Gln Cys Val Thr Cys Arg Leu His Arg Phe

65 70 75 80

Lys Glu Asp Trp Gly Phe Gln Lys Cys Lys Pro Cys Leu Asp Cys Ala

85 90 95

Val Val Asn Arg Phe Gln Lys Ala Asn Cys Ser Ala Thr Ser Asp Ala

100 105 110

Ile Cys Gly Asp Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Lys Thr Lys Leu Val

115 120 125

Gly Phe Gln Asp Met Glu Cys Val Pro Cys Gly Asp Pro Pro Pro Pro

130 135 140

Tyr Glu Pro His Cys Ala Ser Lys Val Asn Leu Val Lys Ile Ala Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ser Ser Pro Arg Asp Thr Ala Leu Ala Ala Val Ile Cys Ser

165 170 175

Ala Leu Ala Thr Val Leu Leu Ala Leu Leu Ile Leu Cys Val Ile Tyr

180 185 190

Cys Lys Arg Gln Phe Met Glu Lys Lys Pro Ser Trp Ser Leu Arg Ser

195 200 205

Gln Asp Ile Gln Tyr Asn Gly Ser Glu Leu Ser Cys Leu Asp Pro Arg

210 215 220

Gln Leu His Glu Tyr Ala His Arg Ala Cys Cys Gln Cys Arg Arg Asp

225 230 235 240

Ser Val Gln Thr Cys Gly Pro Val Arg Leu Leu Pro Ser Met Cys Cys

245 250 255

Glu Glu Ala Cys Ser Pro Asn Pro Ala Thr Leu Gly Cys Gly Val His

260 265 270

Ser Ala Ala Ser Leu Gln Ala Arg Asn Ala Gly Pro Ala Gly Glu Met

275 280 285

Val Pro Thr Phe Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ser Ile Cys Gly Glu Phe

290 295 300

Ser Asp Ala Trp Pro Leu Met Gln Asn Pro Met Gly Gly Asp Asn Ile

305 310 315 320

Ser Phe Cys Asp Ser Tyr Pro Glu Leu Thr Gly Glu Asp Ile His Ser

325 330 335

Leu Asn Pro Glu Leu Glu Ser Ser Thr Ser Leu Asp Ser Asn Ser Ser

340 345 350

Gln Asp Leu Val Gly Gly Ala Val Pro Val Gln Ser His Ser Glu Asn

355 360 365

Phe Thr Ala Ala Thr Asp Leu Ser Arg Tyr Asn Asn Thr Leu Val Glu

370 375 380

Ser Ala Ser Thr Gln Asp Ala Leu Thr Met Arg Ser Gln Leu Asp Gln

385 390 395 400

Glu Ser Gly Ala Ile Ile His Pro Ala Thr Gln Thr Ser Leu Gln Glu

405 410 415

Ala

서열 번호 : 2

서열의 길이 : 1269

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : cDNA 내지 mRNA

서열

ATGGCTTTAA AAGTGCTACT AGAACAAGAG AAAACGTTTT TCACTCTTTT AGTATTACTA 60

GGCTATTTGT CATGTAAAGT GACTTGTGAA ACAGGAGACT GTAGACAGCA AGAATTCAGG 120

GATCGGTCTG GAAACTGTGT TCCCTGCAAC CAGTGTGGGC CAGGCATGGA GTTGTCTAAG 180

GAATGTGGCT TCGGCTATGG GGAGGATGCA CAGTGTGTGA CGTGCCGGCT GCACAGGTTC 240

AAGGAGGACT GGGGCTTCCA GAAATGCAAG CCCTGTCTGG ACTGCGCAGT GGTGAACCGC 300

TTTCAGAAGG CAAATTGTTC AGCCACCAGT GATGCCATCT GCGGGGACTG CTTGCCAGGA 360

TTTTATAGGA AGACGAAACT TGTCGGCTTT CAAGACATGG AGTGTGTGCC TTGTGGAGAC 420

CCTCCTCCTC CTTACGAACC GCACTGTGCC AGCAAGGTCA ACCTCGTGAA GATCGCGTCC 480

ACGGCCTCCA GCCCACGGGA CACGGCGCTG GCTGCCGTTA TCTGCAGCGC TCTGGCCACC 540

GTCCTGCTGG CCCTGCTCAT CCTCTGTGTC ATCTATTGTA AGAGACAGTT TATGGAGAAG 600

AAACCCAGCT GGTCTCTGCG GTCACAGGAC ATTCAGTACA ACGGCTCTGA GCTGTCGTGT 660

CTTGACAGAC CTCAGCTCCA CGAATATGCC CACAGAGCCT GCTGCCAGTG CCGCCGTGAC 720

TCAGTGCAGA CCTGCGGGCC GGTGCGCTTG CTCCCATCCA TGTGCTGTGA GGAGGCCTGC 780

AGCCCCAACC CGGCGACTCT TGGTTGTGGG GTGCATTCTG CAGCCAGTCT TCAGGCAAGA 840

AACGCAGGCC CAGCCGGGGA GATGGTGCCG ACTTTCTTCG GATCCCTCAC GCAGTCCATC 900

TGTGGCGAGT TTTCAGATGC CTGGCCTCTG ATGCAGAATC CCATGGGTGG TGACAACATC 960

TCTTTTTGTG ACTCTTATCC TGAACTCACT GGAGAAGACA TTCATTCTCT CAATCCAGAA 1020

CTTGAAAGCT CAACGTCTTT GGATTCAAAT AGCAGTCAAG ATTTGGTTGG TGGGGCTGTT 1080

CCAGTCCAGT CTCATTCTGA AAACTTTACA GCAGCTACTG ATTTATCTAG ATATAACAAC 1140

ACACTGGTAG AATCAGCATC AACTCAGGAT GCACTAACTA TGAGAAGCCA GCTAGATCAG 1200

GAGAGTGGCG CTATCATCCA CCCAGCCACT CAGACGTCCC TCCAGGTAAG GCAGCGACTG 1260

GGTTCCCTG 1269

서열 번호 : 3

서열의 길이 : 1704

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : cDNA 내지 mRNA

서열

GGGAACGTAG AACTCTCCAA CAATAAATAC ATTTGATAAG AAAGATGGCT TTAAAAGTGC 60

TACTAGAACA AGAGAAAACG TTTTTCACTC TTTTAGTATT ACTAGGCTAT TTGTCATGTA 120

AAGTGACTTG TGAAACAGGA GACTGTAGAC AGCAAGAATT CAGGGATCGG TCTGGAAACT 180

GTGTTCCCTG CAACCAGTGT GGGCCAGGCA TGGAGTTGTC TAAGGAATGT GGCTTCGGCT 240

ATGGGGAGGA TGCACAGTGT GTGACGTGCC GGCTGCACAG GTTCAAGGAG GACTGGGGCT 300

TCCAGAAATG CAAGCCCTGT CTGGACTGCG CAGTGGTGAA CCGCTTTCAG AAGGCAAATT 360

GTTCAGCCAC CAGTGATGCC ATCTGCGGGG ACTGCTTGCC AGGATTTTAT AGGAAGACGA 420

AACTTGTCGG CTTTCAAGAC ATGGAGTGTG TGCCTTGTGG AGACCCTCCT CCTCCTTACG 480

AACCGCACTG TGCCAGCAAG GTCAACCTCG TGAAGATCGC GTCCACGGCC TCCAGCCCAC 540

GGGACACGGC GCTGGCTGCC GTTATCTGCA GCGCTCTGGC CACCGTCCTG CTGGCCCTGC 600

TCATCCTCTG TGTCATCTAT TGTAAGAGAC AGTTTATGGA GAAGAAACCC AGCTGGTCTC 660

TGCGGTCACA GGACATTCAG TACAACGGCT CTGAGCTGTC GTGTCTTGAC AGACCTCAGC 720

TCCACGAATA TGCCCACAGA GCCTGCTGCC AGTGCCGCCG TGACTCAGTG CAGACCTGCG 780

GGCCGGTGCG CTTGCTCCCA TCCATGTGCT GTGAGGAGGC CTGCAGCCCC AACCCGGCGA 840

CTCTTGGTTG TGGGGTGCAT TCTGCAGCCA GTCTTCAGGC AAGAAACGCA GGCCCAGCCG 900

GGGAGATGGT GCCGACTTTC TTCGGATCCC TCACGCAGTC CATCTGTGGC GAGTTTTCAG 960

ATGCCTGGCC TCTGATGCAG AATCCCATGG GTGGTGACAA CATCTCTTTT TGTGACTCTT 1020

ATCCTGAACT CACTGGAGAA GACATTCATT CTCTCAATCC AGAACTTGAA AGCTCAACGT 1080

CTTTGGATTC AAATAGCAGT CAAGATTTGG TTGGTGGGGC TGTTCCAGTC CAGTCTCATT 1140

CTGAAAACTT TACAGCAGCT ACTGATTTAT CTAGATATAA CAACACACTG GTAGAATCAG 1200

CATCAACTCA GGATGCACTA ACTATGAGAA GCCAGCTAGA TCAGGAGAGT GGCGCTATCA 1260

TCCACCCAGC CACTCAGACG TCCCTCCAGG AAGCTTAAAG AACCTGCTTC TTTCTGCAGT 1320

AGAAGCGTGT GCTGGAACCC AAAGAGTACT CCTTTGTTAG GCTTATGGAC TGAGCAGTCT 1380

GGACCTTGCA TGGCTTCTGG GGCAAAAATA AATCTGAACC AAACTGACGG CATTTGAAGC 1440

CTTTCAGCCA GTTGCTTCTG AGCCAGACCA GCTGTAAGCT GAAACCTCAA TGAATAACAA 1500

GAAAAGACTC CAGGCCGACT CATGATACTC TGCATCTTTC CTACATGAGA AGCTTCTCTG 1560

CCACAAAAGT GACTTCAAAG ACGGATGGGT TGAGCTGGCA GCCTATGAGA TTGTGGACAT 1620

ATAACAAGAA ACAGAAATGC CCTCATGCTT ATTTTCATGG TGATTGTGGT TTTACAAGAC 1680

TGAAGACCCA GAGTATACTT TTTC 1704

서열 번호 : 4

서열의 길이 : 1704

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : cDNA 내지 mRNA

기원

생물명 : 호모 사피엔스

세포주 : HAS303

서열의 특징

특징을 나타내는 기호 : CDS

존재 위치 : 45..1295

특징을 결정한 방법 : P

특징을 나타내는 기호 : sig 펩티드

존재 위치 : 45..119

특징을 결정한 방법 : S

특징을 나타내는 기호 : mat 펩티드

존재 위치 : 120..1295

특징을 결정한 방법 : S

서열

GGGAACGTAG AACTCTCCAA CAATAAATAC ATTTGATAAG AAAG ATG GCT TTA AAA 56

Met Ala Leu Lys

-25

GTG CTA CTA GAA CAA GAG AAA ACG TTT TTC ACT CTT TTA GTA TTA CTA 104

Val Leu Leu Glu Gln Glu Lys Thr Phe Phe Thr Leu Leu Val Leu Leu

-20 -15 -10

GGC TAT TTG TCA TGT AAA GTG ACT TGT GAA ACA GGA GAC TGT AGA CAG 152

Gly Tyr Leu Ser Cys Lys Val Thr Cys Glu Thr Gly Asp Cyc Arg Gln

-5 1 5 10

CAA GAA TTC AGG GAT CGG TCT GGA AAC TGT GTT CCC TGC AAC CAG TGT 200

Gln Glu Phe Arg Asp Arg Ser Gly Asn Cys Val Pro Cys Asn Gln Cys

15 20 25

GGG CCA GGC ATG GAG TTG TCT AAG GAA TGT GGC TTC GGC TAT GGG GAG 248

Gly Pro Gly Met Glu Leu Ser Lys Glu Cys Gly Phe Gly Tyr Gly Glu

30 35 40

GAT GCA CAG TGT GTG ACG TGC CGG CTG CAC AGG TTC AAG GAG GAC TGG 296

Asp Ala Gln Cys Val Thr Cys Arg Leu His Arg Phe Lys Glu Asp Trp

45 50 55

GGC TTC CAG AAA TGC AAG CCC TGT CTG GAC TGC GCA GTG GTG AAC CGC 344

Gly Phe Gln Lys Cys Lys Pro Cys Leu Asp Cys Ala Val Val Asn Arg

60 65 70 75

TTT CAG AAG GCA AAT TGT TCA GCC ACC AGT GAT GCC ATC TGC GGG GAC 392

Phe Gln Lys Ala Asn Cys Ser Ala Thr Ser Asp Ala Ile Cys Gly Asp

80 85 90

TGC TTG CCA GGA TTT TAT AGG AAG ACG AAA CTT GTC GGC TTT CAA GAC 440

Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Lys Thr Lys Leu Val Gly Phe Gln Asp

95 100 105

ATG GAG TGT GTG CCT TGT GGA GAC CCT CCT CCT CCT TAC GAA CCG CAC 488

Met Glu Cys Val Pro Cys Gly Asp Pro Pro Pro Pro Tyr Glu Pro His

110 115 120

TGT GCC AGC AAG GTC AAC CTC GTG AAG ATC GCG TCC ACG GCC TCC AGC 536

Cys Ala Ser Lys Val Asn Leu Val Lys Ile Ala Ser Thr Ala Ser Ser

125 130 135

CCA CGG GAC ACG GCG CTG GCT GCC GTT ATC TGC AGC GCT CTG GCC ACC 584

Pro Arg Asp Thr Ala Leu Ala Ala Val Ile Cys Ser Ala Leu Ala Thr

140 145 150 155

GTC CTG CTG GCC CTG CTC ATC CTC TGT GTC ATC TAT TGT AAG AGA CAG 632

Val Leu Leu Ala Leu Leu Ile Leu Cys Val Ile Tyr Cys Lys Arg Gln

160 165 170

TTT ATG GAG AAG AAA CCC AGC TGG TCT CTG CGG TCA CAG GAC ATT CAG 680

Phe Met Glu Lys Lys Pro Ser Trp Ser Leu Arg Ser Gln Asp Ile Gln

175 180 185

TAC AAC GGC TCT GAG CTG TCG TGT CTT GAC AGA CCT CAG CTC CAC GAA 728

Tyr Asn Gly Ser Glu Leu Ser Cys Leu Asp Rro Arg Gln Leu His Glu

190 195 200

TAT GCC CAC AGA GCC TGC TGC CAG TGC CGC CGT GAC TCA GTG CAG ACC 776

Tyr Ala His Arg Ala Cys Cys Gln Cys Arg Arg Asp Ser Val Gln Thr

205 210 215

TGC GGG CCG GTG CGC TTG CTC CCA TCC ATG TGC TGT GAG GAG GCC TGC 824

Cys Gly Pro Val Arg Leu Leu Pro Ser Met Cys Cys Glu Glu Ala Cys

220 225 230 235

AGC CCC AAC CCG GCG ACT CTT GGT TGT GGG GTG CAT TCT GCA GCC AGT 872

Ser Pro Asn Pro Ala Thr Leu Gly Cys Gly Val His Ser Ala Ala Ser

240 245 250

CTT CAG GCA AGA AAC GCA GGC CCA GCC GGG GAG ATG GTG CCG ACT TTC 920

Leu Gln Ala Arg Asn Ala Gly Pro Ala Gly Glu Met Val Pro Thr Phe

255 260 265

TTC GGA TCC CTC ACG CAG TCC ATC TGT GGC GAG TTT TCA GAT GCC TGG 968

Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ser Ile Cys Gly Glu Phe Ser Asp Ala Trp

270 275 280

CCT CTG ATG CAG AAT CCC ATG GGT GGT GAC AAC ATC TCT TTT TGT GAC 1016

Pro Leu Met Gln Asn Pro Met Gly Gly Asp Asn Ile Ser Phe Cys Asp

285 290 295

TCT TAT CCT GAA CTC ACT GGA GAA GAC ATT CAT TCT CTC AAT CCA GAA 1064

Ser Tyr Pro Glu Leu Thr Gly Glu Asp Ile His Ser Leu Asn Pro Glu

300 305 310 315

CTT GAA AGC TCA ACG TCT TTG GAT TCA AAT AGC AGT CAA GAT TTG GTT 1112

Leu Glu Ser Ser Thr Ser Leu Asp Ser Asn Ser Ser Gln Asp Leu Val

320 325 330

GGT GGG GCT GTT CCA GTC CAG TCT CAT TCT GAA AAC TTT ACA GCA GCT 1160

Gly Gly Ala Val Pro Val Gln Ser His Ser Glu Asn Phe Thr Ala Ala

335 340 345

ACT GAT TTA TCT AGA TAT AAC AAC ACA CTG GTA GAA TCA GCA TCA ACT 1208

Thr Asp Leu Ser Arg Tyr Asn Asn Thr Leu Val Glu Ser Ala Ser Thr

350 355 360

CAG GAT GCA CTA ACT ATG AGA AGC CAG CTA GAT CAG GAG AGT GGC GCT 1256

Gln Asp Ala Leu Thr Met Arg Ser Gln Leu Asp Gln Glu Ser Gly Ala

365 370 375

ATC ATC CAC CCA GCC ACT CAG ACG TCC CTC CAG GAA GCT TAAAGAACCT 1305

Ile Ile His Pro Ala Thr Gln Thr Ser Leu Gln Glu Ala

380 385 390

GCTTCTTTCT GCAGTAGAAG CGTGTGCTGG AACCCAAAGA GTACTCCTTT GTTAGGCTTA 1365

TGGACTGAGC AGTCTGGACC TTGCATGGCT TCTGGGGCAA AAATAAATCT GAACCAAACT 1425

GACGGCATTT GAAGCCTTTC AGCCAGTTGC TTCTGAGCCA GACCAGCTGT AAGCTGAAAC 1485

CTCAATGAAT AACAAGAAAA GACTCCAGGC CGACTCATGA TACTCTGCAT CTTTCCTACA 1545

TGAGAAGCTT CTCTGCCACA AAAGTGACTT CAAAGACGGA TGGGTTGAGC TGGCAGCCTA 1605

TGAGATTGTG GACATATAAC AAGAAACAGA AATGCCCTCA TGCTTATTTT CATGGTGATT 1665

GTGGTTTTAC AAGACTGAAG ACCCAGAGTA TACTTTTTC 1704

서열 번호 : 5

서열의 길이 : 423

서열의 형태 : 아미노산

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : 단백질

서열

Met Ala Leu Lys Val Leu Leu Glu Gln Glu Lys Thr Phe Phe Thr Leu

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Gly Tyr Leu Ser Cys Lys Val Thr Cys Glu Thr Gly

20 25 30

Asp Cys Arg Gln Gln Glu Phe Arg Asp Arg Ser Gly Asn Cys Val Pro

35 40 45

Cys Asn Gln Cys Gly Pro Gly Met Glu Leu Ser Lys Glu Cys Gly Phe

50 55 60

Gly Tyr Gly Glu Asp Ala Gln Cys Val Thr Cys Arg Leu His Arg Phe

65 70 75 80

Lys Glu Asp Trp Gly Phe Gln Lys Cys Lys Pro Cys Leu Asp Cys Ala

85 90 95

Val Val Asn Arg Phe Gln Lys Ala Asn Cys Ser Ala Thr Ser Asp Ala

100 105 110

Ile Cys Gly Asp Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Lys Thr Lys Leu Val

115 120 125

Gly Phe Gln Asp Met Glu Cys Val Pro Cys Gly Asp Pro Pro Pro Pro

130 135 140

Tyr Glu Pro His Cys Ala Ser Lys Val Asn Leu Val Lys Ile Ala Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ser Ser Pro Arg Asp Thr Ala Leu Ala Ala Val Ile Cys Ser

165 170 175

Ala Leu Ala Thr Val Leu Leu Ala Leu Leu Ile Leu Cys Val Ile Tyr

180 185 190

Cys Lys Arg Gln Phe Met Glu Lys Lys Pro Ser Trp Ser Leu Arg Ser

195 200 205

Gln Asp Ile Gln Tyr Asn Gly Ser Glu Leu Ser Cys Leu Asp Pro Arg

210 215 220

Gln Leu His Glu Tyr Ala His Arg Ala Cys Cys Gln Cys Arg Arg Asp

225 230 235 240

Ser Val Gln Thr Cys Gly Pro Val Arg Leu Leu Pro Ser Met Cys Cys

245 250 255

Glu Glu Ala Cys Ser Pro Asn Pro Ala Thr Leu Gly Cys Gly Val His

260 265 270

Ser Ala Ala Ser Leu Gln Ala Arg Asn Ala Gly Pro Ala Gly Glu Met

275 280 285

Val Pro Thr Phe Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ser Ile Cys Gly Glu Phe

290 295 300

Ser Asp Ala Trp Pro Leu Met Gln Asn Pro Met Gly Gly Asp Asn Ile

305 310 315 320

Ser Phe Cys Asp Ser Tyr Pro Glu Leu Thr Gly Glu Asp Ile His Ser

325 330 335

Leu Asn Pro Glu Leu Glu Ser Ser Thr Ser Leu Asp Ser Asn Ser Ser

340 345 350

Gln Asp Leu Val Gly Gly Ala Val Pro Val Gln Ser His Ser Glu Asn

355 360 365

Phe Thr Ala Ala Thr Asp Leu Ser Arg Tyr Asn Asn Thr Leu Val Glu

370 375 380

Ser Ala Ser Thr Gln Asp Ala Leu Thr Met Arg Ser Gln Leu Asp Gln

385 390 395 400

Glu Ser Gly Ala Ile Ile His Pro Ala Thr Gln Thr Ser Leu Gln Val

405 410 415

Arg Gln Arg Leu Gly Ser Leu

420

서열 번호 : 6

서열의 길이 : 1269

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : cDNA 내지 mRNA

서열

ATGGCTTTAA AAGTGCTACT AGAACAAGAG AAAACGTTTT TCACTCTTTT AGTATTACTA 60

GGCTATTTGT CATGTAAAGT GACTTGTGAA ACAGGAGACT GTAGACAGCA AGAATTCAGG 120

GATCGGTCTG GAAACTGTGT TCCCTGCAAC CAGTGTGGGC CAGGCATGGA GTTGTCTAAG 180

GAATGTGGCT TCGGCTATGG GGAGGATGCA CAGTGTGTGA CGTGCCGGCT GCACAGGTTC 240

AAGGAGGACT GGGGCTTCCA GAAATGCAAG CCCTGTCTGG ACTGCGCAGT GGTGAACCGC 300

TTTCAGAAGG CAAATTGTTC AGCCACCAGT GATGCCATCT GCGGGGACTG CTTGCCAGGA 360

TTTTATAGGA AGACGAAACT TGTCGGCTTT CAAGACATGG AGTGTGTGCC TTGTGGAGAC 420

CCTCCTCCTC CTTACGAACC GCACTGTGCC AGCAAGGTCA ACCTCGTGAA GATCGCGTCC 480

ACGGCCTCCA GCCCACGGGA CACGGCGCTG GCTGCCGTTA TCTGCAGCGC TCTGGCCACC 540

GTCCTGCTGG CCCTGCTCAT CCTCTGTGTC ATCTATTGTA AGAGACAGTT TATGGAGAAG 600

AAACCCAGCT GGTCTCTGCG GTCACAGGAC ATTCAGTACA ACGGCTCTGA GCTGTCGTGT 660

CTTGACAGAC CTCAGCTCCA CGAATATGCC CACAGAGCCT GCTGCCAGTG CCGCCGTGAC 720

TCAGTGCAGA CCTGCGGGCC GGTGCGCTTG CTCCCATCCA TGTGCTGTGA GGAGGCCTGC 780

AGCCCCAACC CGGCGACTCT TGGTTGTGGG GTGCATTCTG CAGCCAGTCT TCAGGCAAGA 840

AACGCAGGCC CAGCCGGGGA GATGGTGCCG ACTTTCTTCG GATCCCTCAC GCAGTCCATC 900

TGTGGCGAGT TTTCAGATGC CTGGCCTCTG ATGCAGAATC CCATGGGTGG TGACAACATC 960

TCTTTTTGTG ACTCTTATCC TGAACTCACT GGAGAAGACA TTCATTCTCT CAATCCAGAA 1020

CTTGAAAGCT CAACGTCTTT GGATTCAAAT AGCAGTCAAG ATTTGGTTGG TGGGGCTGTT 1080

CCAGTCCAGT CTCATTCTGA AAACTTTACA GCAGCTACTG ATTTATCTAG ATATAACAAC 1140

ACACTGGTAG AATCAGCATC AACTCAGGAT GCACTAACTA TGAGAAGCCA GCTAGATCAG 1200

GAGAGTGGCG CTATCATCCA CCCAGCCACT CAGACGTCCC TCCAGGTAAG GCAGCGACTG 1260

GGTTCCCTG 1269

서열 번호 : 7

서열의 길이 : 1496

서열의 형태 : 핵산

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : cDNA 내지 mRNA

서열

GGGAACGTAG AACTCTCCAA CAATAAATAC ATTTGATAAG AAAGATGGCT TTAAAAGTGC 60

TACTAGAACA AGAGAAAACG TTTTTCACTC TTTTAGTATT ACTAGGCTAT TTGTCATGTA 120

AAGTGACTTG TGAAACAGGA GACTGTAGAC AGCAAGAATT CAGGGATCGG TCTGGAAACT 180

GTGTTCCCTG CAACCAGTGT GGGCCAGGCA TGGAGTTGTC TAAGGAATGT GGCTTCGGCT 240

ATGGGGAGGA TGCACAGTGT GTGACGTGCC GGCTGCACAG GTTCAAGGAG GACTGGGGCT 300

TCCAGAAATG CAAGCCCTGT CTGGACTGCG CAGTGGTGAA CCGCTTTCAG AAGGCAAATT 360

GTTCAGCCAC CAGTGATGCC ATCTGCGGGG ACTGCTTGCC AGGATTTTAT AGGAAGACGA 420

AACTTGTCGG CTTTCAAGAC ATGGAGTGTG TGCCTTGTGG AGACCCTCCT CCTCCTTACG 480

AACCGCACTG TGCCAGCAAG GTCAACCTCG TGAAGATCGC GTCCACGGCC TCCAGCCCAC 540

GGGACACGGC GCTGGCTGCC GTTATCTGCA GCGCTCTGGC CACCGTCCTG CTGGCCCTGC 600

TCATCCTCTG TGTCATCTAT TGTAAGAGAC AGTTTATGGA GAAGAAACCC AGCTGGTCTC 660

TGCGGTCACA GGACATTCAG TACAACGGCT CTGAGCTGTC GTGTCTTGAC AGACCTCAGC 720

TCCACGAATA TGCCCACAGA GCCTGCTGCC AGTGCCGCCG TGACTCAGTG CAGACCTGCG 780

GGCCGGTGCG CTTGCTCCCA TCCATGTGCT GTGAGGAGGC CTGCAGCCCC AACCCGGCGA 840

CTCTTGGTTG TGGGGTGCAT TCTGCAGCCA GTCTTCAGGC AAGAAACGCA GGCCCAGCCG 900

GGGAGATGGT GCCGACTTTC TTCGGATCCC TCACGCAGTC CATCTGTGGC GAGTTTTCAG 960

ATGCCTGGCC TCTGATGCAG AATCCCATGG GTGGTGACAA CATCTCTTTT TGTGACTCTT 1020

ATCCTGAACT CACTGGAGAA GACATTCATT CTCTCAATCC AGAACTTGAA AGCTCAACGT 1080

CTTTGGATTC AAATAGCAGT CAAGATTTGG TTGGTGGGGC TGTTCCAGTC CAGTCTCATT 1140

CTGAAAACTT TACAGCAGCT ACTGATTTAT CTAGATATAA CAACACACTG GTAGAATCAG 1200

CATCAACTCA GGATGCACTA ACTATGAGAA GCCAGCTAGA TCAGGAGAGT GGCGCTATCA 1260

TCCACCCAGC CACTCAGACG TCCCTCCAGG TAAGGCAGCG ACTGGGTTCC CTGTGAACAC 1320

AGCACTGACT TACAGTAGAT CAGAACTCTG TTCCCAGCAT AAGATTTGGG GGAACCTGAT 1380

GAGTTTTTTT TTTGCATCTT TAATAATTTC TTGTATGTTG TAGAGTATGT TTTAAAATAA 1440

ATTTCAAGTA TTTTTTTTAA AAACTAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAA 1496

서열 번호 : 8

서열의 길이 : 1496

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열의 종류 : cDNA 내지 mRNA

기원

생물명 : 호모 사피엔스

세포주 : HAS303

서열의 특징

특징을 나타내는 기호 : CDS

존재 위치 : 45..1313

특징을 결정한 방법 : P

특징을 나타내는 기호 : sig 펩티드

존재 위치 : 45..119

특징을 결정한 방법 : S

특징을 나타내는 기호 : mat 펩티드

존재 위치 : 120..1313

특징을 결정한 방법 : S

서열

GGGAACGTAG AACTCTCCAA CAATAAATAC ATTTGATAAG AAAG ATG GCT TTA AAA 56

Met Ala Leu Lys

-25

GTG CTA CTA GAA CAA GAG AAA ACG TTT TTC ACT CTT TTA GTA TTA CTA 104

Val Leu Leu Glu Gln Glu Lys Thr Phe Phe Thr Leu Leu Val Leu Leu

-20 -15 -10

GGC TAT TTG TCA TGT AAA GTG ACT TGT GAA ACA GGA GAC TGT AGA CAG 152

Gly Tyr Leu Ser Cys Lys Val Thr Cys Glu Thr Gly Asp Cyc Arg Gln

-5 1 5 10

CAA GAA TTC AGG GAT CGG TCT GGA AAC TGT GTT CCC TGC AAC CAG TGT 200

Gln Glu Phe Arg Asp Arg Ser Gly Asn Cys Val Pro Cys Asn Gln Cys

15 20 25

GGG CCA GGC ATG GAG TTG TCT AAG GAA TGT GGC TTC GGC TAT GGG GAG 248

Gly Pro Gly Met Glu Leu Ser Lys Glu Cys Gly Phe Gly Tyr Gly Glu

30 35 40

GAT GCA CAG TGT GTG ACG TGC CGG CTG CAC AGG TTC AAG GAG GAC TGG 296

Asp Ala Gln Cys Val Thr Cys Arg Leu His Arg Phe Lys Glu Asp Trp

45 50 55

GGC TTC CAG AAA TGC AAG CCC TGT CTG GAC TGC GCA GTG GTG AAC CGC 344

Gly Phe Gln Lys Cys Lys Pro Cys Leu Asp Cys Ala Val Val Asn Arg

60 65 70 75

TTT CAG AAG GCA AAT TGT TCA GCC ACC AGT GAT GCC ATC TGC GGG GAC 392

Phe Gln Lys Ala Asn Cys Ser Ala Thr Ser Asp Ala Ile Cys Gly Asp

80 85 90

TGC TTG CCA GGA TTT TAT AGG AAG ACG AAA CTT GTC GGC TTT CAA GAC 440

Cys Leu Pro Gly Phe Tyr Arg Lys Thr Lys Leu Val Gly Phe Gln Asp

95 100 105

ATG GAG TGT GTG CCT TGT GGA GAC CCT CCT CCT CCT TAC GAA CCG CAC 488

Met Glu Cys Val Pro Cys Gly Asp Pro Pro Pro Pro Tyr Glu Pro His

110 115 120

TGT GCC AGC AAG GTC AAC CTC GTG AAG ATC GCG TCC ACG GCC TCC AGC 536

Cys Ala Ser Lys Val Asn Leu Val Lys Ile Ala Ser Thr Ala Ser Ser

125 130 135

CCA CGG GAC ACG GCG CTG GCT GCC GTT ATC TGC AGC GCT CTG GCC ACC 584

Pro Arg Asp Thr Ala Leu Ala Ala Val Ile Cys Ser Ala Leu Ala Thr

140 145 150 155

GTC CTG CTG GCC CTG CTC ATC CTC TGT GTC ATC TAT TGT AAG AGA CAG 632

Val Leu Leu Ala Leu Leu Ile Leu Cys Val Ile Tyr Cys Lys Arg Gln

160 165 170

TTT ATG GAG AAG AAA CCC AGC TGG TCT CTG CGG TCA CAG GAC ATT CAG 680

Phe Met Glu Lys Lys Pro Ser Trp Ser Leu Arg Ser Gln Asp Ile Gln

175 180 185

TAC AAC GGC TCT GAG CTG TCG TGT CTT GAC AGA CCT CAG CTC CAC GAA 728

Tyr Asn Gly Ser Glu Leu Ser Cys Leu Asp Rro Arg Gln Leu His Glu

190 195 200

TAT GCC CAC AGA GCC TGC TGC CAG TGC CGC CGT GAC TCA GTG CAG ACC 776

Tyr Ala His Arg Ala Cys Cys Gln Cys Arg Arg Asp Ser Val Gln Thr

205 210 215

TGC GGG CCG GTG CGC TTG CTC CCA TCC ATG TGC TGT GAG GAG GCC TGC 824

Cys Gly Pro Val Arg Leu Leu Pro Ser Met Cys Cys Glu Glu Ala Cys

220 225 230 235

AGC CCC AAC CCG GCG ACT CTT GGT TGT GGG GTG CAT TCT GCA GCC AGT 872

Ser Pro Asn Pro Ala Thr Leu Gly Cys Gly Val His Ser Ala Ala Ser

240 245 250

CTT CAG GCA AGA AAC GCA GGC CCA GCC GGG GAG ATG GTG CCG ACT TTC 920

Leu Gln Ala Arg Asn Ala Gly Pro Ala Gly Glu Met Val Pro Thr Phe

255 260 265

TTC GGA TCC CTC ACG CAG TCC ATC TGT GGC GAG TTT TCA GAT GCC TGG 968

Phe Gly Ser Leu Thr Gln Ser Ile Cys Gly Glu Phe Ser Asp Ala Trp

270 275 280

CCT CTG ATG CAG AAT CCC ATG GGT GGT GAC AAC ATC TCT TTT TGT GAC 1016

Pro Leu Met Gln Asn Pro Met Gly Gly Asp Asn Ile Ser Phe Cys Asp

285 290 295

TCT TAT CCT GAA CTC ACT GGA GAA GAC ATT CAT TCT CTC AAT CCA GAA 1064

Ser Tyr Pro Glu Leu Thr Gly Glu Asp Ile His Ser Leu Asn Pro Glu

300 305 310 315

CTT GAA AGC TCA ACG TCT TTG GAT TCA AAT AGC AGT CAA GAT TTG GTT 1112

Leu Glu Ser Ser Thr Ser Leu Asp Ser Asn Ser Ser Gln Asp Leu Val

320 325 330

GGT GGG GCT GTT CCA GTC CAG TCT CAT TCT GAA AAC TTT ACA GCA GCT 1160

Gly Gly Ala Val Pro Val Gln Ser His Ser Glu Asn Phe Thr Ala Ala

335 340 345

ACT GAT TTA TCT AGA TAT AAC AAC ACA CTG GTA GAA TCA GCA TCA ACT 1208

Thr Asp Leu Ser Arg Tyr Asn Asn Thr Leu Val Glu Ser Ala Ser Thr

350 355 360

CAG GAT GCA CTA ACT ATG AGA AGC CAG CTA GAT CAG GAG AGT GGC GCT 1256

Gln Asp Ala Leu Thr Met Arg Ser Gln Leu Asp Gln Glu Ser Gly Ala

365 370 375

ATC ATC CAC CCA GCC ACT CAG ACG TCC CTC CAG GTA AGG CAG CGA CTG 1304

Ile Ile His Pro Ala Thr Gln Thr Ser Leu Gln Val Arg Gln Arg Leu

380 385 390 395

GGT TCC CTG TGAACACAG CACTGACTTA CAGTAGATCA GAACTCTGTT CCCAGCATAA 1362

Gly Ser Leu

GATTTGGGGG AACCTGATGA GTTTTTTTTT TGCATCTTTA ATAATTTCTT GTATGTTGTA 1422

GAGTATGTTT TAAAATAAAT TTCAAGTATT TTTTTTAAAA ACTAAAAAAA AAAAAAAAAA 1482

AAAAAAAAAA AAAA 1496

서열 번호 : 9

서열의 길이 : 35

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열

CGATTGAATT CTAGACCTGC CTCGAGNNNN NNNNN

서열 번호 : 10

서열의 길이 : 28

서열의 형태 : 핵산

쇄의 수 : 1본쇄

토폴로지 : 직쇄상

서열

AGAAAGATGG CTTTAAAAGT GCTACTAG

Claims (10)

1. 실질적으로 순수한 형태인 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드, 그 동족체, 그 단편 또는 그 단편의 동족체로 이루어지는 폴리펩티드.
2. 제1항에 있어서, 서열 번호 1 또는 5에 기재된 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드.
3. 제1항에 기재된 폴리펩티드를 암호하는 DNA.
4. 제3항에 있어서, 서열 번호 2 또는 6에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA, 또는 그 서열에 선택적으로 하이브리드하는 단편으로 이루어진 DNA.
5. 제3항에 있어서, 서열 번호 3 또는 7에 기재된 염기 서열을 갖는 DNA, 또는 그 서열에 선택적으로 하이브리드하는 단편으로 이루어진 DNA.
6. 제3항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 기재된 DNA로 이루어지는 복제 또는 발현 벡터.
7. 제6항에 기재된 복제 또는 발현 벡터로 형질 전환된 숙주 세포.
8. 제1항 또는 제2항에 기재된 폴리펩티드를 발현시키기 위한 조건하에서 제7항에 기재된 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함하는 상기 폴리펩티드의 제조 방법.
9. 제1항 또는 제2항에 기재된 폴리펩티드의 모노클로널 또는 폴리클로널 항체.
10. 제1항 또는 제2항에 기재된 폴리펩티드 또는 제9항에 기재된 항체 및 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 함유하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.