JP2011528102A - 初期段階および後期段階のhpv感染の検出 - Google Patents
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Abstract
Description
HPV組み換え型タンパク質は、限定することはないが、E2,E6、E7,L1,L2等の初期遺伝子および/または後期遺伝子のHPVタンパク質である、いずれかの種類のHPVタンパク質であり、様々なHPV型からでよい。全長E6,E7および/またはL1ポリペプチド配列は、タンパク質精製間の望ましくない凝集化、タンパク質の不安定性、低度の発現、精製タンパク質の低い免疫原反応のために獲得および精製が非常に難しいと考えられている。例えば、多くの初期E6発癌タンパク質が、多くのシステインアミノ酸を有し、これによってE6発癌タンパク質の正しいトポグラフィー(地図)は、多くのジスルフィド結合特性の形成を必要とする。加えて、初期E6およびE7タンパク質の小ペプチドを用いた特定の免疫学的分析の結果、非常に低い分析特異性および感度となり、臨床的in vitro診断のツールとして望ましくない。したがって、本発明は、部分配列または全長配列のHPV発癌タンパク質を有する組み換え型ハイブリッドタンパク質等の組み換え型タンパク質を提供する。
例示的なHPV型であるHPV−16からの例示的な発癌性E6初期遺伝子はクローンであった。本願明細書でクローン化したHPV16 E6遺伝子は、全HPV−16 E6遺伝子の157アミノ酸コーディング領域を有し、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅によって得られた474塩基対(b.p.)DNAフラグメントである。独立したDNAフラグメントのDNA配列は、遺伝子バンクのデータベースからの配列と比較することによって確認した。組み換え型HPV−18 E6タンパク質も得た。すべてのクローン化手順は、"Molecular Cloning", A Laboratory Manual, eds. Sambrook, Fritsch and Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989において開示されたプロトコールに従って行う。加えて、HPV18 E6遺伝子もクローン化し、DNA配列を確認した。
例示的なHPV型であるHPV−16からの例示的な発癌性E7初期遺伝子はクローンであった。本願明細書でクローン化したHPV16 E7遺伝子は、全HPV−16 E7遺伝子の99アミノ酸コーディング領域を有し、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅によって得られた294塩基対(b.p.)DNAフラグメントである。独立したDNAフラグメントのDNA配列は、遺伝子バンクのデータベースからの配列と比較することによって確認した。組み換え型HPV−18 E7タンパク質も得た。加えて、異なるHPV型からのE7 DNAフラグメントも異なる臨床サンプルまたはソースからクローン化した。
例示的なHPV型であるHPV−16からの例示的な発癌性E7後期遺伝子はクローンであった。本願明細書でクローン化したHPV16 E7遺伝子は、全HPV−16 L1遺伝子の531アミノ酸コーディング領域を有し、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅によって得られた1596塩基対(b.p.)DNAフラグメントである。独立したDNAフラグメントのDNA配列は、遺伝子バンクのデータベースからの配列と比較することによって確認した。組み換え型HPV−18 E7タンパク質も得た。加えて、異なるHPV型からのL1 DNAフラグメントも異なる臨床サンプルまたはソースからクローン化した。
大腸菌において発現した組み換え型HPV E6,E7またはL1を精製、濃縮およびPBSで透析し、免疫原として用いた。免疫付与を標準的なプロトコールにしたがって行った。得られた各血清をELISA分析によって試験し、その後定期的なブースティングおよび出血させた。適切な滴定量からの生成出血を収集した;処理した血清をタンパク質Aカラムまたは親和カラムを介して免疫グロブリン(lg)精製を行うのに用いた。精製lgGをHPV免疫分析に対する抗HPV抗体として用いた。
大腸菌において発現した組み換え型HPV E6,E7またはL1を精製、濃縮およびPBSで透析し、免疫原として用いた。マウスの免疫付与を標準的なプロトコールにしたがって行った。得られた各血清の滴定をELISA分析によって試験し、その後定期的なブースティングおよび出血させた。マウスの血清の滴定は最適となり、腫瘍細胞を有するマウスの脾臓細胞の融合を標準的なプロトコールにしたがって行った。融合細胞、例えばハイブリドーマ細胞のクローン化をさらに培養した。
本発明において説明する、panを有するハイブリドーマ細胞を生成し、様々なHPVタンパク質に特異的に結合する抗HPV抗体生成ハイブリドーマ細胞を得るため、ハイブリドーマクローンを、元の免疫原だけでなく陽性スクリーニングのさらなるHPVタンパク質および陰性スクリーニングの無関係のタンパク質等の様々なタンパク質でスクリーニングした。例えば2個以上の精製HPV組み換え型タンパク質を、各ハイブリドーマクローンに対してスクリーニングして、抗体生成ハイブリドーマ細胞をスクリーニングおよび獲得し、こうして得られた各抗体生成ハイブリドーマ細胞株の特異性を試験および理解するために用いた。
一つの実施形態において、HPV IHC分析を行うキットを提供する。このキットは、抗原回復剤、前−抗体ブロッキング溶液、後−抗体ブロッキング溶液、一次抗体としての抗HPV抗体、二次抗体としてのHRPもしくはビオチンまたは他の物質と結合した抗マウスまたは抗ラビット免疫グロブリン、二次抗体を検出する基質として用いる適切な化学物質を含む溶液を含む。
これらの結果は、CIN2子宮頸部組織からのHPV E6タンパク質のin situの存在は、本願明細書で記載するIHC分析において用いたマウスモノクローナル抗HPV E7抗体によって検出できることを示す。
5.HPV ICC分析
CIN3サンプルを、抗p16マウスモノクローナル抗体を用いたICC染色に用いた。図7Gは、図7B〜7Fにおいて示したのと同じCIN3サンプルから抗p16マウスモノクローナル抗体を用いてICC染色した結果を示す。図において示すように、高いN/C(核/細胞質)比を有する互いに結合した形のCIN3、HSIL異常細胞(黒色矢印で示した)は核および細胞質に対して陽性に染色した。これらの結果は、in situで存在するp16タンパク質が、中間期から後期の腫瘍からの異常細胞において検出できることを示す。これらの結果は、in situで存在するHPV E6,E7およびp16タンパク質が、ICC分析において本願明細書で記載するマウスモノクローナル抗体を用いて液体溶液のCIN3からの異常細胞において検出できることを示す。
HPVタンパク質を検出する免疫分析の他の実施例として、HPVフローサイトメトリ分析を行った。製造ガイドラインに従った液体溶液において収集した子宮頸部かき取りからの細胞を遠心分離、洗浄、同様のICC染色手順に従って免疫染色した。細胞をスライドガラス上に塗布する代わりに、細胞をフローサイトメトリによる分析の染色から溶液において保存する。HPVフローサイトメトリを行うため、溶液における子宮頸部細胞を固定し、ブロックし、抗HPV抗体と培養し、その後適切な二次抗体およびフローサイトメトリによって検出する基質化学物質と培養した。このHPVフローサイトメトリ分析の利点は、高い訓練をした細胞学者がスライドガラスを観察する必要性がないことである。
1)直接EIA:1個以上のHPVタンパク質をマイクロタイタープレート上にコートして1個以上の抗HPV抗体によって検出する。子宮頸部かき取りからの臨床サンプルを直接EIA上でHPV E6,E7またはL1の検出のために得た。様々なサンプルソースからの子宮頸部細胞には、液体細胞溶解溶液における子宮頸部かき取り細胞、輸送媒体における子宮頸部かき取り細胞(HPV DNAテストサンプルに対して用いる)、または溶菌緩衝液における子宮頸部かき取り細胞がある。本願明細書で記載する直接EIAを行うため、生検を処理、遠心分離、洗浄、および検体としての細胞溶解物を生成するように溶解した。細胞溶解物におけるタンパク質を定量化し、各ウェルにおける各サンプルをコーティングするための同量のタンパク質を用いてマイクロタイタープレートにコーティングした。プレートを遮断し、示したように各HPVモノクローナル抗体およびその後HRP結合した二次抗体(例えば抗マウスIgGまたは抗ラビットIgG)によって検出した。TMB基質を加え、その後、標準的な反応停止溶液を加えた。OD450をELISAプレートリーダーによって行った。
読み取りに装置を必要としない結果を示す迅速試験を開発するため、ドットプロット分析は、色基質による視覚的結果を得る膜上の細胞溶解物からのHPVタンパク質を検出する実現可能性を示す。実施例として、液体溶液において収集した様々な段階の子宮頸部腫瘍からの子宮頸部細胞を処理して、膜上にスポットする細胞溶解物を得た。膜は、ブロッキング溶液でブロットをブロッキングする前に空気乾燥した。抗HPV抗体を加えて、抗HPV抗体に結合できる二次抗体によってブロットと反応させた。ブロットは各工程間で洗浄して、抗体の膜上への非特異的な結合を防いだ。最終工程において、TMB基質をブロットに加えて、青色スポットがこのドットプロット分析において用いた抗HPV抗体と結合する細胞溶解物の陽性反応を示す。組み換え型HPVタンパク質も膜上にスポットして、陽性または陰性対照として用いた。
3)抗体マイクロアレイ:生物学的サンプルからの標識化した細胞におけるHPVタンパク質および細胞内因性タンパク質上の抗体のスポッティング
8.二次抗HPV抗体によって検出する表面上に補足した一次抗HPV抗体を用いた生物学的サンプルからのHPVタンパク質の検出
マイクロタイタープレート上のサンドイッチELISAを行うため、SCCまたはHPV PCR陽性またはHPV PCR陰性と診断された血清を希釈して、血清サンプルに存在するHPV E6,E7またはL1タンパク質を検出する分析物として用いた。ELISAサンドイッチ分析において行う分析フォーマットは、一次抗体としてのE6,E7またはL1に対するラビットポリクロ―ナル抗体、その後、分析物(血清)およびHRPを結合した他の抗体によって検出するそれに関連する二次抗HPV抗体をコーティングした。基質および停止剤と培養後、OD450をマイクロタイタープレートによって取った。図8において示した実施例として、結果は、ラビットポリクロ―ナル抗HPV抗体をコーティングおよび検出に用いたHPV陰性血清(PCRによる)と比較したSCC(扁平上皮細胞癌)またはHPV陽性(PCRによる)と診断されたヒト血清サンプルにおけるHPV E6,E7およびL1タンパク質を検出するELISAを示す。
実施例として、ビーズ表面にコートした一次抗体は、生物学的サンプルの細胞溶解物におけるHPVタンパク質と反応し、二次抗HPV抗体を捕捉するビーズの表面上に複合体を形成する。複合体は、二次抗HPV抗体を予め標識化したとき直接検出できる、または、二次抗HPV抗体に結合できる予め標識化した抗体を加えることによって検出できる。予め標識化した抗体は、限定することはないが西洋ワサビペルオキシダーゼ、ビオチン、蛍光およびそれらの組み合わせ等の検出剤で標識化する。実施例として、ビーズの固体表面上に存在する複合体は、抗マウスまたは抗ラビットPEを二次抗体として用いてFACS(蛍光活性細胞分類)によって検出できる。多くのHPVタンパク質がビーズ上に補足されたら、異なる蛍光染色によって標識化された多くの二次抗HPV抗体がFACSによって同時に検出できる。したがって、FACSによるビーズ分析は、生物学的サンプルからの1個以上のHPVタンパク質を検出する強力な分析を提供する。
3)HPV感染を検出する迅速流動分析:迅速免疫学分析は、ストリップにおいて膜上に垂直にまたは横方向に行う。側方流動または拡散ワンステップ迅速免疫学的分析も、結果を得るのに5〜15分間かかり用いるのが簡単であり、限定的な訓練を必要とするが装置を必要としない免疫クロマトグラフストリップ試験と呼ぶ。分析の基本的な主旨は、パップスメアからの綿棒サンプルと反応する捕捉剤を含む固相ニトロセルロース膜またはストリップを含む。患者サンプルが標的因子を含めば、 ニトロセルロースにおける捕捉剤は標的因子と反応し、複合体が拡散または毛細管現象を通してニトロセルロース膜において形成および移動する。
A)ワンステップHPV側方流動分析:膜上に一次抗HPV抗体をストリップして、側副金粒子と結合した二次抗HPV抗体によってHPVタンパク質を検出する
Claims (37)
- ヒト対象におけるパピローマウイルス感染の検出方法であって、
ヒト対象の臨床サンプルに免疫学的分析を行う工程と、1個以上のモノクローナル抗体を用いて臨床サンプルからのヒト細胞の核部分を染色する工程とを含む方法。 - 前記核部分の陽性染色は、初期形成不全段階、軽度扁平上皮内病変(LSIL)、重度扁平上皮内病変(HSIL)、子宮頸部上皮内癌形成段階1(CIN1)、子宮頸部上皮内癌形成段階2(CIN2)、子宮頸部上皮内癌形成段階3(CIN3)およびそれらの組み合わせからなる群から選択される疾患段階への進行に関連する請求項1に記載の方法。
- ヒト細胞の細胞質部分の陽性染色は、後期形成不全段階、重度扁平上皮内病変(HSIL)、子宮頸部上皮内癌形成(CIN2/3)、浸潤性子宮頸癌、扁平上皮細胞癌(SCC)、腺癌、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される疾患段階へ進行するパピローマウイルス感染を示す請求項1に記載の方法。
- 1個以上のモノクローナル抗体を、1個以上の精製組み換え型パピローマウイルスタンパク質に対して生成する請求項1に記載の方法。
- 1個以上のモノクローナル抗体は、少なくとも1個のHPV初期ウイルス性タンパク質に結合できる請求項1に記載の方法。
- 1個以上のモノクローナル抗体は、少なくとも1個のHPV後期ウイルス性タンパク質に結合できる請求項1に記載の方法。
- 1個以上のモノクローナル抗体は、少なくとも1個のHPV初期ウイルス性タンパク質、および少なくとも1個のHPV後期ウイルス性タンパク質に結合できる請求項1に記載の方法。
- 1個以上のモノクローナル抗体は、HPV初期ウイルス性タンパク質に結合できる抗体、およびHPV後期ウイルス性タンパク質に結合できる抗体を有する請求項1に記載の方法。
- 1個以上のモノクローナル抗体は、抗HPV E6モノクローナル抗体、抗HPV E7モノクローナル抗体、抗HPV L1モノクローナル抗体、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項1に記載の方法。
- 1個以上の精製組み換え型パピローマウイルス性タンパク質に対して生成した1個以上の抗体を用いて、ヒト対象の臨床サンプルからヒト細胞に免疫化学分析を行う工程と;
臨床サンプルからのヒト細胞の細胞質部分の染色と核部分の染色を比較する工程をさらに含む請求項1に記載の方法。 - 臨床サンプルからのヒト細胞の細胞質部分より核部分で観察される陽性染色は、初期形成不全段階、軽度扁平上皮内病変(LSIL)、重度扁平上皮内病変(HSIL)、子宮頸部上皮内癌形成1、子宮頸部上皮内癌形成2、子宮頸部上皮内癌形成3、(それぞれCIN1,CIN2,CIN3)、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される初期疾患段階でヒト対象におけるパピローマウイルス感染を示す請求項10に記載の方法。
- 臨床サンプルのヒト細胞の核部分より細胞質部分で観察される陽性染色は、後期形成不全段階、子宮頸部上皮内癌形成(CIN3)、浸潤性子宮頸癌およびそれらの組み合わせからなる群から選択される後期疾患段階でヒト対象におけるパピローマウイルス感染を示す請求項10に記載の方法。
- E6,E7,L1タンパク質およびそれらの組み合わせからなる群から選択されるHPVウイルス性タンパク質に結合できる2個以上の抗体を用いて、ヒト対象の臨床サンプルに免疫化学分析を行う工程と;
2個以上の抗体によってヒト対象の染色を比較する工程であって、2個以上の抗体のうち少なくとも1個によるヒト細胞の陽性染色はヒト対象におけるパピローマウイルス感染を示す工程をさらに含む請求項1に記載の方法。 - 免疫化学分析を用いて様々な疾患段階でHPV感染を検出し、疾患段階は、初期HPV感染、後期HPV感染、初期段階子宮頸部細胞病変、後期段階子宮頸部細胞病変、軽度扁平上皮内病変(LSIL)、重度扁平上皮内病変(HSIL)、異型扁平上皮細胞(ASCUS)、子宮頸部上皮内癌形成ステージ1(CIN1)、子宮頸部上皮内癌形成ステージ2(CIN2)、子宮頸部上皮内癌形成ステージ3(CIN3)、進行した子宮頸癌、腺癌(ADC),扁平上皮細胞癌(SCC)およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項1に記載の方法。
- ヒト対象から臨床サンプルを提供して、臨床サンプルは形態学的に異常および正常なヒト細胞の混合物を含む臨床サンプルを処理して、スライドガラス上の細胞の薄層内に塗布する工程と;
1個以上の精製組み換え型パピローマウイルス性タンパク質に対して生成した1個以上の抗体を用いて免疫化学分析を行う工程であって、少なくとも1個の抗体はパピローマウイルス初期ウイルス性タンパク質と結合できる工程と;
形態学的に異常および正常なヒト細胞の混合物を含むスライドガラス上で臨床サンプルに存在する1個以上のパピローマウイルス型から1個以上のパピローマウイルス性タンパク質をそのままで染色する工程をさらに含む請求項1に記載の方法。 - 形態学的に異常または正常なヒト細胞の混合物から各細胞を分離することによって、それぞれの個々の細胞を検出する1個以上のフローサイトメトリ分析を行う工程と;
臨床サンプルからの液体溶液内に含まれる形態学的に異常および正常なヒト細胞の混合物における1個以上のパピローマウイルス型から、1個以上のヒトパピローマウイルス性タンパク質の存在を検出する工程をさらに含む請求項1に記載の方法。 - ヒト対象における1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を検出する方法であって、
1個以上のパピローマウイルス型からの1個以上のパピローマウイルス性タンパク質に結合でき、ヒト対象から臨床サンプルに存在する1個の抗HPV抗体を提供する工程と;
1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を含有する様々なタンパク質を含む細胞溶解液内に臨床サンプルを処理する工程と;
細胞溶解物溶液内に存在する抗HPV抗体および様々なタンパク質からなる群から選択される少なくとも1個のタンパク質で固体表面をその上にコートして提供する工程と;
細胞溶解物溶液で抗HPV抗体を反応する工程と;
固体表面に抗HPV抗体で1個以上のパピローマウイルス性タンパク質の複合体を形成する工程と;
臨床サンプルに存在する1個以上のパピローマウイルス性タンパク質の存在を確認するために固体表面上の複合体を検出する工程とを含む方法。 - 1個以上のパピローマウイルス性タンパク質は、パピローマウイルス性E6タンパク質、パピローマウイルス性E7タンパク質、パピローマウイルス性L1タンパク質およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項17に記載の方法。
- 固体表面は、ビーズ表面、ストリップ表面、迅速試験ストリップ表面、膜表面、装置による鉛直流動の膜表面、マイクロ流体装置の表面、ブロット膜の表面、タンパク質チップの表面、ガラス表面、マイクロタイタープレートの底面、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項17に記載の方法。
- 複合体を、1個以上のビーズの固体表面で検出し、複合体をFACS(蛍光活性化細胞分類)によって検出する請求項19に記載の方法。
- 複合体を、ストリップの一端に固定化した一次抗HPV抗体を有する迅速試験装置のストリップの固体表面で検出し、二次抗HPV抗体および細胞溶解液を、一次抗HPV抗体を有する複合体内に形成する迅速試験装置のストリップの固体表面上で横方向に流れる前に、ストリップのもう一端に加える請求項19に記載の方法。
- 複合体を、それに固定化した一次抗HPV抗体を有する鉛直流動迅速試験装置の膜の固体表面で検出し、細胞溶解液および二次抗HPV抗体を、一次抗HPV抗体を有する複合体内に形成する鉛直流動迅速試験装置の膜の固体表面にその後加える請求項19に記載の方法。
- 複合体をマイクロ流体装置の固体表面で検出し、マイクロ流体装置によって流れる請求項19に記載の方法。
- 細胞溶解物溶液内に存在する1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を、抗HPV抗体と反応する前に、固体表面にコートする請求項17に記載の方法。
- 細胞溶解物溶液に存在する1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を、ブロット膜の固体表面にコートする請求項24に記載の方法。
- 細胞溶解物溶液に存在する1個以上のパピローマウイルス性タンパク質をマイクロタイタープレートの固体表面上にコートし、抗HPV抗体は、複合酵素、ビオチン、金粒子、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される検出剤で予め標識化して、検出剤の存在が、1個以上のパピローマウイルス性タンパク質および抗HPV抗体の複合体を固体表面上での形成、およびヒト対象に存在する1個以上のパピローマウイルス性タンパク質の存在を示すようにする請求項24に記載の方法。
- 抗HPV抗体を、1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を有する細胞溶解物溶液と反応させてヒト対象のパピローマウイルス感染を検出する前に、固体表面にコートする請求項17に記載の方法。
- 抗HPV抗体を、細胞溶解物溶液と反応する前に、タンパク質チップ装置の固体表面にコートする請求項27に記載の方法。
- 抗HPV抗体を、細胞溶解物溶液と反応する前にマイクロ流体装置の固体表面にコートする請求項27に記載の方法。
- 固体表面上の複合体の複合体検出は、抗HPV抗体、細胞溶解物溶液に存在する様々なタンパク質、抗HPV抗体に結合する二次抗体、抗HPV抗体と異なる第2の抗HPV抗体およびそれらの組み合わせからなる群から選択される1個以上のタンパク質に予め標識化した検出剤の存在を検出する工程をさらに有し、第2の抗HPV抗体はまた、1個以上のパピローマウイルス型から1個以上のパピローマウイルス性タンパク質に結合でき臨床サンプルに存在する請求項17に記載の方法。
- 検出剤の存在を、薬剤の色変化の直接定量的可視化、ELISAリーダーによる読み取り、マイクロアレイスキャナによる読み取り、FACS(蛍光活性化細胞分類)装置による読み取り、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される分析によって検出する請求項30に記載の方法。
- 固体表面上の細胞内タンパク質に対して抗体をコートする工程と、ヒト対象の臨床サンプルにおける1個以上のパピローマウイルス性タンパク質の存在と細胞内タンパク質の存在を比較する工程をさらに有し、細胞内タンパク質は、p16INK4a,E2F,Ki−67(MlB−1),MYCタンパク質、CDK4、サイクリン−A,サイクリン−B,サイクリン−E、テロメラーゼ−TERC、MCM2タンパク質、TOP2Aタンパク質、熱ショックタンパク質40(HSP40),熱ショックタンパク質60(HSP60),熱ショックタンパク質70(HSP70),CA9/MNタンパク質,ラミニン5、ラミニンタンパク質、brn−3a、CDK N2タンパク質、トポイソメラーゼ2A,ミクロソーム維持タンパク質−2、ミクロソーム維持タンパク質−4、ミクロソーム維持タンパク質−5、スルビビンタンパク質、VEGFタンパク質、p53、RB,p27(kip1)およびp21(waf)ならびにそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項1または31に記載の方法。
- 細胞溶解物溶液内で処理される臨床サンプルに存在する1個以上のパピローマウイルス型からの1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を検出する横方向流動装置において、
第1の抗HPV抗体を有するストリップの一端の第1固体表面であって、第1の抗HPV抗体は、1個以上のパピローマウイルス型から1個以上のパピローマウイルス性タンパク質に結合でき、第1の抗HPV抗体は、固体表面上で細胞溶解物溶液に存在する1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を捕捉できるようにする第1固体表面と;
固定した第2の抗HPV抗体を有するストリップのもう一端の第2固体表面であって、ストリップの第1固体表面から横方向に流れる細胞溶解物溶液と反応して、ストリップの第2固体表面上で第2抗HPV抗体を有する複合体内に形成し、第2抗HPV抗体は1個以上のパピローマウイルス性タンパク質と結合でき、第2抗HPV抗体が臨床サンプルにおける1個以上のパピローマウイルス性タンパク質を結合および検出できるようにする第2固体表面とを有する横方向流動装置。 - ヒト対象におけるパピローマウイルス感染を検出するキットであって、ヒト対象の臨床サンプルに免疫化学分析を行う抗HPVモノクローナル抗体は、臨床サンプルから1個以上のヒト細胞の核部分を染色して、ヒト細胞の細胞質部分の染色と核部分の染色を比較することができるキット。
- ヒト対象におけるパピローマウイルス感染を検出するキットであって、
抗HPVモノクローナル抗体を有し、前記抗HPVモノクローナル抗体は、形態学的に異常および正常なヒト細胞の混合物を含む溶液内で処理して、形態学的に異常および正常なヒト細胞の混合物を含むスライドガラス上で臨床サンプルに存在する1個以上のパピローマウイルス型から1個以上のパピローマウイルス性タンパク質をそのままで染色するためのスライドガラス上の細胞の薄層内に塗布したヒト対象から、臨床サンプルに免疫化学的分析を行うパピローマウイルス性初期タンパク質に結合することができるキット。 - 抗HPV抗体は、抗HPV E7モノクローナル抗体、抗HPV E6モノクローナル抗体、抗HPV L1抗体および抗HPV E7モノクローナル抗体の組み合わせ、抗HPV L1抗体および抗HPV E6モノクローナル抗体の組み合わせ、抗HPV E6抗体および抗HPV E7モノクローナル抗体の組み合わせ、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項34または35に記載のキット。
- 抗HPVモノクローナル抗体を使用して様々な疾患段階でHPV感染を検出し、前記疾患段階は、初期HPV感染、後期HPV感染、初期段階子宮頸部細胞病変、後期段階子宮頸部細胞病変、軽度扁平上皮内病変(LSIL)、重度扁平上皮内病変(HSIL)、異型扁平上皮細胞(ASCUS)、子宮頸部上皮内癌形成ステージ1(CIN1)、子宮頸部上皮内癌形成ステージ2(CIN2)、子宮頸部上皮内癌形成ステージ3(CIN3)、進行した子宮頸癌、腺癌(ADC),扁平上皮細胞癌(SCC)およびそれらの組み合わせからなる群から選択される請求項34または35に記載のキット。
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