JP2010535758A - ジオスゲニンを含む皮膚美白用組成物 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
本発明の他の目的は、前記組成物を含む皮膚美白用化粧料組成物を提供することである。
本発明のさらに他の目的は、前記組成物を含む皮膚美白用薬剤学的組成物を提供することである。
本発明のジオスゲニン((3β、25R)−spirost−5−en−3−ol)は下記化学式1の構造を持っている植物来由のサポゲニン(sapogenin)の一種である。
前記化粧料組成物は、有効成分としてのジオスゲニンの外に化粧料組成物に通常利用される成分を含み、例えば抗酸化剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料及び香料のような通常の補助剤及び/または担体を含む。また、前記化粧料組成物は、皮膚美白効果を増進させるために、皮膚吸収促進物質をさらに含むことができる。
さらに他の様態によれば、本発明は前記組成物を含む皮膚美白用薬剤学的組成物に関する。
本発明の薬剤学的組成物は、薬剤学的組成物の製造に通常使われる適切な担体、腑形剤及び希釈剤をさらに含むことができる。
ラットの色素細胞(B16 melanoma cells)を利用してジオスゲニン(Sigma)によるメラニン生成抑制効果を測定し、これをメラニン生成を抑制すると知られたビタミンCによるメラニン生成抑制効果と比較した。
本実験は、murine melanoma(B−16 F10)細胞を10%のFBS(fetal bovine serum)が含有されたDMEM培地を含む6−well plateにwell当たり1×105個で接種した後、5% CO2及び37℃で細胞がwellの底に約80%以上付着するまで培養した。培養の後、培地を除去し、試料を適当濃度に希釈された培地に入れ替え、5% CO2、37℃で3日間培養した。ジオスゲニンの濃度範囲は細胞毒性がない1μM、10μM、50μMの範囲で決めた。培地を除去した細胞をPBS(phosphated buffer saline)で洗浄し、これをトリプシンで処理して細胞を回収した。回収された細胞は血球計(hemocytometer)を利用して細胞数を測定した後、5,000〜10,000rpmで10分間遠心分離した後、浮遊物を除去してペレット(pellet)を得た。この細胞ペレットを60℃で乾燥した後、10%DMSOが含有された1M水酸化ナトリウム液100μを入れ、60℃の恒温槽で細胞内メラニンを得た。この液から、マイクロプレートリーダー(microplate reader)によって490nmで吸光度を測定して細胞一定数当たりメラニン量を求めた。その結果を下記表1に示した。
ラットの色素細胞(B16 melanoma cells)を利用してジオスゲニンによるメラニン生成抑制効果を測定し、これをメラニン生成を抑制すると知られたビタミンCによる細胞内チロシナーゼ活性抑制効果と比較した。
本実験はmurine melanoma(B−16F1)細胞を10%のFBS(fetal bovine serum)が含有されたDMEM培地を含む6−well plateにwell当たり1×105個で接種した後、5%CO2、37℃で細胞がwellの底に約80%以上付着するまで培養した。培養の後、培地を除去し、試料を適当濃度に希釈された培地に入れ替えた後、5%CO2、37℃で3日間培養した。ジオスゲニンの濃度範囲は細胞毒性がない1μM、10μM、50μMの範囲で決めた。培地を除去した細胞をPBS(phosphated buffer saline)で洗浄し、これをトリプシンで処理して細胞を回収した。回収された細胞は血球計を利用して細胞数を測定した後、5,000〜10,000rpmで10分間遠心分離した後、浮遊物を除去してペレットを得た。この細胞ペレットを溶解バッファ(lysis buffer)を利用して粉碎した後、12,000rpmで10分間遠心分離して浮遊物を収集した。この液をから、microplate readerによって492nmで吸光度を測定し、細胞一定数当たりチロシナーゼ活性を求めた。その結果を下記表2に示した。
人と類似して紫外線によって色素沈着が生ずると知られた茶色モルモット(Tortoiseshell guinea pigs;Brown guinea pigs)を使ってジオスゲニンによる美白効果を測定した。
[実験式1]
△L*=塗布00日後のL*値−塗布開始日のL*値
△L*値を試料塗布部位と対照群部位に対して求めてから比較すれば、美白物質の効果が分かる。
4−1.ジオスゲニンを含む皮膚外用剤の製造
前記のように美白効果に優れると判明されたジオスゲニンが人体皮膚にも安全であるかを確認するために、ジオスゲニン及びビタミンCを含む皮膚外用剤を製造し、これに対する皮膚安全性検証実験を遂行した。
ジオスゲニンとビタミンCを含む皮膚外用剤は下記の表4の成分含量で製造した。下記の表4において、対照群はチロシナーゼ阻害剤を含まない皮膚外用剤であり、試験群1と試験群2はジオスゲニンとビタミンCを含む皮膚外用剤である。
前記実施例4−1で製造した各皮膚外用剤を使って元気な30人の大人を対象として上腕部位に隔日で総9回の24時間累積して当て布を当てることによってジオスゲニンが皮膚に刺激を与えるかどうかを測定した。
当て布方法はフィンチャンバ(Finn chamber、Epitest Ltd、フィンランド)を利用した。チャンバに前記各皮膚外用剤を15μずつ滴加した後、当て布を当てた。毎回皮膚に現れた反応の程度を下記の公式を利用して点数化し、その結果を下記の表5に示した。
[実験式2]
平均反応度=[[反応指数×反応度/総被検者数×最高点数(4点)]×100]÷検査回数(9回)
この際、反応度において、±は1点、+は2点、++は4点の点数を付与し、平均反応度が3未満の場合、安全な組成物と判定した。
Claims (5)
- ジオスゲニンを有効成分として含む皮膚美白用組成物。
- 請求項1の組成物を含む皮膚美白用化粧料組成物。
- 前記組成物は、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、ローション、パウダー、せっけん、オイル、粉末ファウンデーション、乳濁液ファウンデーション、ワックスファウンデーション及びスプレーよりなる群から選ばれる剤型を持つことを特徴とする、請求項2に記載の化粧料組成物。
- 請求項1の組成物を含むしみまたはそばかす予防及び治療用薬剤学的組成物。
- 前記ジオスゲニンが組成物の総重量に対して0.0001〜15重量%含まれることを特徴とする、請求項1に記載の皮膚美白用組成物。
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