JP2009529879A5

JP2009529879A5 -

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Publication number: JP2009529879A5
Application number: JP2009500456A
Authority: JP
Filing date: 2007-03-13
Publication date: 2010-03-04
Anticipated expiration: 2027-03-13

Description

本発明に従う細胞は、発酵条件下で培養した場合、非常に低レベルのグリセロールを産生することが分かった。グリセロール産生は、発酵条件の範囲内で、０．２g/L以下であることが分かった。驚いたことに、本発明の細胞は、グリセロール産生を欠くにも拘わらず、またいくつかの態様では、グリセロール−３−リン酸産生を欠くにも拘わらず、発酵条件下で良く生育する。いくつかの例において、本発明の細胞の酸寛容性が改善されたことが分かった。従って、本発明はまた、本発明の上記の態様の何れかの細胞を、発酵産物を産生する発酵条件下で培養することから成る発酵方法であって、炭素源に対するグリセロールの収量が２重量％より少ない発酵方法である。

本発明の細胞は、多くの発酵条件下で、グリセロール産生能をはっきり減少させた。細胞のグリセロール産生能の減少は低グリセロール収量により表される。本発明の細胞は、一般的に、消費した炭素源の２重量％より少なくグリセロールに代謝する。大部分の場合、グリセロール収量は、培養で消費される炭素源の重量に基づき、１％以下又は０．１％以下でさえある。好ましくは、細胞は、所望の発酵産物に消費する炭素源の、例えば少なくとも５０，６０，７０、８０又は８５％の様に、少なくとも４０％を代謝する。
本発明の細胞が発酵条件下で高い増殖能を示すことを見出した。細胞は、様々な用途にグリセロールを使うのでこれは驚くべきことであり、また野生型の酵母細胞において、グリセロールの役割は、NADH/NAD⁺をバランスさせる働きがあると信じられてきた。細胞自体のためのグリセロール産生量の低下を補うために、グリセロールを発酵培地中に加える事は、本発明の範囲内である。しかしながら、申請者等は、少なくともいくつかの発酵過程において、このようなことをしても少しも利益がなかったことを見出した。

Claims

遺伝的に改変して、ジヒドロキシアセトンリン酸からグリセロールへのネイティブな代謝経路が欠失した又は破壊され、代謝可能な炭素源の存在下で細胞を培養する時、この炭素源の２重量％より少ない部分がこの細胞により消費されてグリセロールへ代謝される、全ゲノム重複以前の半子嚢菌綱の酵母細胞。
Saccharomyces コンプレックス(Kurtzman 2003)のZygosaccharomyces、Zygotorulaspora、Torulaspora、Lachancea、Kluyveromyces、Eremothecium又はHanseniasporaクレードに属する請求項１に記載の細胞。
Kluyveromyces、Candida又はIssatchenkia属の請求項１に記載の細胞。
I. orientalis/P. fermentansクレード(Kurtzman及びRobnett 1998)又はSaccharomycesコンプレックスの Kluyveromycesクレード(Kurtzman 2003)に属する請求項１に記載の細胞。
機能性LDH遺伝子カセットを持ち、ラクタートを産生する請求項１〜４のいずれか一項に記載の細胞。
ネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子が欠失した又は破壊された請求項５に記載の細胞。
ネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−ホスファターゼ遺伝子が欠失した又は破壊された請求項５に記載の細胞。
ネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子及び少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−ホスファターゼ遺伝子が欠失した又は破壊された請求項５に記載の細胞。
ネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなジヒドロキシアセトンホスファターゼ遺伝子が欠失した又は破壊された、ネイティブなグリセロールデヒドロゲナーゼ遺伝子が欠失した又は破壊された、又はネイティブなジヒドロトキシアセトンホスファターゼ遺伝子及びネイティブなグリセロールデヒドロゲナーゼ遺伝子の両者が欠失した又は破壊された請求項５に記載の細胞。
ピルビン酸からエタノールへのネイティブな代謝経路が欠失した又は破壊された請求項５〜９のいずれか一項に記載の細胞。
ラクタートを産生するように遺伝的に改変された酵母細胞であって、更にジヒドロキシアセトンリン酸からグリセロールへのネイティブな代謝経路が欠失し又は破壊され、かつピルビン酸塩からエタノールへのネイティブな代謝経路が欠失した又は破壊された酵母細胞。
ジヒドロキシアセトンリン酸からグリセロールへのネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子が欠失した又は破壊された請求項１１に記載の酵母細胞。
ジヒドロキシアセトンリン酸からグリセロールへのネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のグリセロール−３−ホスファターゼ遺伝子が欠失した又は破壊された請求項１１に記載の酵母細胞。
ジヒドロキシアセトンリン酸からグリセロールへのネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ遺伝子、及び少なくとも１個のネイティブなグリセロール−３−ホスファターゼ遺伝子が欠失した又は破壊された請求項１３に記載の酵母細胞。
ジヒドロキシアセトンリン酸からグリセロールへのネイティブな代謝経路の欠失又は破壊として、少なくとも１個のネイティブなジヒドロキシアセトンホスファターゼ遺伝子が欠失した又は破壊された、ネイティブなグリセロールデヒドロゲナーゼ遺伝子が欠失した又は破壊された、又はネイティブなジヒドロトキシアセトンホスファターゼ遺伝子及びネイティブなグリセロールデヒドロゲナーゼ遺伝子の両者が欠失した又は破壊された請求項１３に記載の細胞。
請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞を、発酵条件下かつ所望の発酵産物を産生するための炭素源の存在下で、培養することから成る発酵方法であって、グリセロール収量が、この細胞により消費される炭素源に対して２重量％より少ない発酵方法。
請求項５〜１０のいずれか１項に記載の細胞を、発酵条件下かつラクタートを産生するための炭素源の存在下で、培養することから成る発酵方法であって、グリセロール収量が、この細胞により消費される炭素源に対して２重量％より少ない発酵方法。