JP2008545420A5

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Publication number: JP2008545420A5
Application number: JP2008513987A
Authority: JP
Filing date: 2006-05-26
Publication date: 2010-08-12
Anticipated expiration: 2026-05-26

Claims

下記式で示されるホスファチジルセリンを調製する方法であって：

（式中、Ｒ¹およびＲ²は独立して飽和、単不飽和または多不飽和アシルＣ₁₀〜Ｃ₃₀を表し、ＸはＯＨまたはＯＭ（ここで、Ｍはアルカリもしくはアルカリ土類金属、アンモニウム、またはアルキルアンモニウム（内塩を含む））を表す。）
下記一般的で示される化合物：

（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＸは先に特定した意味を有し、Ｒ³＝ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＮＨ₂またはＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｎ⁺（ＣＨ₃）₃である。）
と、Ｄ、Ｌまたはラセミ型のセリンとの間の、ホスホリパーゼＤ酵素（ＰＬＤ）により触媒されたホスファチジル交換反応を含み、該反応が、脂肪族アルコールを含む含水アルコール媒体中で二価金属酸化物の存在下に行われることを特徴とする方法。
下記式で示されるホスファチジルセリンを調製する方法であって：

（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＸは請求項１で定義した意味と同じ意味を有する。）
下記一般的で示される化合物：

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＸは請求項１で定義した意味と同じ意味を有する。）
と、Ｄ、Ｌまたはラセミ型のセリンとの間の、ホスホリパーゼＤ酵素（ＰＬＤ）により触媒されたホスファチジル交換反応を含み、
前記反応が、非プロトン性極性溶媒を含む媒体中で二価金属酸化物の存在下に生じることを特徴とする方法。
下記式で示されるホスファチジルセリンを調製する方法であって：

（式中、Ｒ¹、Ｒ²およびＸは請求項１で定義した意味と同じ意味を有する。）
下記一般的で示される化合物：

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＸは請求項１で定義した意味と同じ意味を有する。）
と、Ｄ、Ｌまたはラセミ型のセリンとの間の、ホスホリパーゼＤ酵素（ＰＬＤ）により触媒されたホスファチジル交換反応を含み、
前記反応が、水／有機溶媒により形成される２相系からなる媒体中で二価金属酸化物の存在下に行われることを特徴とする方法。
脂肪族アルコールが、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールおよびイソプロパノールから選択される、請求項１に記載の方法。
脂肪族アルコールが、開始緩衝剤の体積を基準にした体積％で表して０．１〜５０％の間の濃度のイソプロパノールである、請求項４に記載の方法。
イソプロパノール濃度が１０％である、請求項５に記載の方法。
非プロトン性極性溶媒が、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、ジメチルホルムアミドおよびＮ−メチル−ピロリドンから選択される、請求項２に記載の方法。
非プロトン性極性溶媒が、開始緩衝剤の体積を基準にした体積％で表して０．１〜５０％の間の濃度のジメチルスルホキシドである、請求項７に記載の方法。
ジメチルスルホキシド濃度が１．２５％である、請求項８に記載の方法。
有機溶媒が、ｎ−ヘキサン、トルエン、ベンゼンおよびｎ−ブタノールから選択される、請求項３に記載の方法。
有機溶媒が、開始緩衝剤の体積を基準にした体積％で表して０．１〜４０％の間の濃度のｎ−ヘキサンである、請求項１０に記載の方法。
ｎ−ヘキサン濃度が１．２５％または２．５％である、請求項１１に記載の方法。
二価金属酸化物が、０．１〜１Ｍの間の濃度のカルシム、マグネシウムまたは亜鉛の酸化物である、先の請求項に記載の方法。
選択された酸化物の濃度が０．３３または０．５４Ｍである、請求項１３に記載の方法。
前記一般的で示される化合物がホスファチジルコリンであり、セリンの濃度が、１〜５ｇｇ／ｇｇホスファチジルコリンの範囲である、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
セリンの濃度が、２〜３ｇｇ／ｇｇホスファチジルコリンの範囲である、請求項１５に記載の方法。
前記一般的で示される化合物がホスファチジルコリンであり、ホスファチジルコリンが、開始濃度が１０〜５００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは２００〜３００ｍｇ／ｍｌであり精製状態でまたは原料として存在する、動物および／または植物起源の天然または合成のものである、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
ホスファチジル交換反応が、２０℃〜６０℃の温度、好ましくは４５℃で起こる、先の全ての請求項のいずれかに記載の方法。
ホスファチジル交換反応が、２０℃〜６０℃の温度、好ましくは５５℃で起こる、先の全ての請求項のいずれかに記載の方法。
酵素ＰＬＤが、精製、半精製または非精製状態で用いられる、微生物ストレプトバーチシリウム・ハチジョウエンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍｈａｃｈｉｊｏｅｎｓｅ）から誘導された発酵起源のものである、先の全ての請求項のいずれかに記載の方法。
前記一般的で示される化合物がホスファチジルコリンであり、使用されるＰＬＤの濃度が１〜１００単位／ｇホスファチジルコリンの間で変化する、請求項２０に記載の方法。
使用されるＰＬＤの濃度が１〜１０単位／ｇホスファチジルコリンの間で変化する、請求項２１に記載の方法。
微生物ストレプトバーチシリウム・ハチジョウエンスから誘導された酵素ＰＬＤを精製し、以下の工程を含んでなる、請求項２０に記載の方法：
Ｉ）孔寸法が０．２μｍの精密濾過により、生成した物質を除去する工程、
ＩＩ）１００００Ｄの分子分画のフィルターを通して限外濾過する工程、
ＩＩＩ）３０００００Ｄの分子分画の膜を有するフィルターを通して限外濾過する工程、および
ＩＶ）１００００Ｄの分子分画の膜を通して限外濾過して、酵素を再濃縮すると共に、それをＴＲＩＳ−ＨＣＬ緩衝剤に対して透析する工程。
請求項1〜２２のいずれかにより生成されたホスファチジルセリン（ＰＳ）を精製するための、以下の工程を含んでなる方法：
Ｉ）生成されたＰＳを含む反応媒体に、塩化ナトリウムの生理食塩水溶液を添加し、続いて混合し、そしてＰＳを分離する工程、
ＩＩ）沈降体を集め除去する工程、
ＩＩＩ）塩化ナトリウム溶液の開始濃度を変化させて工程ＩおよびＩＩを繰り返し、上澄みを除去する工程、
ＩＶ）ＥＤＴＡの溶液を添加して、溶液中に存在するイオンをキレート化させ、続いて混合する工程、
Ｖ）エタノールを５０〜１００％含むエタノール溶液、またはアセトンを５０〜９５％含むアセトン／水の混合物を添加し、続いて混合し、そしてＰＳを沈降させる工程、
ＶＩ）エタノールの割合を変化させて工程Ｖを繰り返す工程、
ＶＩＩ）エタノールを９０〜１００％含むエタノール溶液を添加する工程、
ＶＩＩＩ）上澄みを集め除去する工程、および
ＩＸ）得られた最終生成物を乾燥する工程。
請求項１〜２２のいずれかにより生成されたホスファチジルセリン（ＰＳ）を精製するための、以下の工程を含んでなる方法：
Ｉ）先に濾過されたＰＳに、塩化ナトリウムの生理食塩水溶液を添加し、続いて混合し、そしてＰＳを分離する工程、
ＩＩ）上澄みを集め除去する工程、
ＩＩＩ）塩化ナトリウム溶液の開始濃度を変化させて工程ＩおよびＩＩを繰り返し、上澄みを除去する工程、
ＩＶ）ＥＤＴＡの溶液を添加して、溶液中に存在するイオンをキレート化させ、続いて混合する工程、
Ｖ）エタノールを５０〜１００％含むエタノール溶液、またはアセトンを５０〜９５％含むアセトン／水の混合物を添加し、続いて混合し、そしてＰＳを沈降させる工程、
ＶＩ）エタノールの割合を変化させて工程Ｖを繰り返す工程、
ＶＩＩ）エタノールを９０〜１００％含むエタノール溶液を添加する工程、
ＶＩＩＩ）上澄みを集め除去する工程、および
ＩＸ）得られた最終生成物を乾燥する工程。
請求項１〜２２のいずれかにより生成されたホスファチジルセリン（ＰＳ）を精製するための、以下の工程を含んでなる方法：
Ｉ）生成されたＰＳを含む反応媒体に、塩化ナトリウムの生理食塩水溶液を添加し、続いて混合し、そしてＰＳを分離する工程、
ＩＩ）沈降体を集め除去する工程、
ＩＩＩ）塩化ナトリウムの生理食塩水溶液を添加し、多孔質膜を通して限外濾過を行う工程、および
ＩＶ）最終生成物を乾燥する工程。
先の全ての請求項のいずれかに記載のように生成され精製されたホスファチジルセリンを含む医薬組成物。
大脳老化に関連する病理を予防および治療するための薬剤を調製するための、先の全ての請求項のいずれかに記載のように生成され精製されたホスファチジルセリンの使用。
食品サプリメントの調製のための、先の全ての請求項のいずれかに記載のように生成され精製されたホスファチジルセリンの使用。
化粧分野で用いるためおよび薬剤の制御放出用の系としてのリポソームを調製するための、先の全ての請求項のいずれかに記載のように生成され精製されたホスファチジルセリンの使用。