JP2008541752A - 昆虫及びクモの防除のためのRNAi - Google Patents
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Abstract
【選択図】 なし
Description
本発明は、昆虫種における二本鎖RNA(dsRNA)介在性遺伝子サイレンシングの分野に関する。さらに詳しくは、本発明は、本明細書において初めて同定された新規な標的に対応するdsRNAの発現のために設計された遺伝子構築物に関する。これらの構築物は、詳しくはdsRNA介在性昆虫害虫防除に、特に屋内昆虫又は屋内クモ、例えばゴキブリの防除に有用である。
害虫防除、詳しくは昆虫及び/又はクモの防除、特に屋内昆虫、外部寄生虫、並びにゴキブリ、ノミ、アリ、シロアリ、ハサミムシ、カ、ハエ、及びイエコオロギなどの公衆の保健衛生(例えば都市の保護)に関連する昆虫の防除は重要な分野である。ゴキブリやハエなどの昆虫は、不潔で、管理の行き届いていない場所に生息するという公衆の共通の認識があることから、家庭、職場、飲食店、病院、又は倉庫などの場所における昆虫の存在は疑いようもない悩みの種である。
(1)dsRNAは有害生物により取り込まれなければならない、
(2)dsRNAは有害生物中で良好な安定性を有さなければならない、
(3)dsRNAは有害生物に有効で、その生存率、成長、及び/若しくは発育を制御しなければならない、及び/又は
(4)dsRNAは最大の安全性及び最小の環境影響を保証しなければならない。
本発明は、昆虫及び/又はクモの防除のための、化合物に基づかない新規な取り組みを記載する。活性成分はヌクレオチドである二本鎖RNA(dsRNA)であり、それを(例えばベイト剤又はゲル塗布剤の形の)殺虫又は殺クモ製剤として使用することができる。dsRNAの配列は不可欠な昆虫遺伝子の部分と一致し、RNA干渉(RNAi)により昆虫標的のダウンレギュレーションを引き起こす。mRNAのダウンレギュレーションの結果として、dsRNAは対応する昆虫タンパク質の発現を阻害することによって、その昆虫及び/又はクモの死滅、成長停止、又は生殖不能を引き起こす。
本発明者らは、昆虫又はクモ害虫の個体数を効果的に制御することができるRNAiのための新規な標的を初めて同定した。
A)構造タンパク質、例えばトロポミオシン1(GenBank AF260897)(配列番号41及び42)、アクチン5C(GenBank AY004248)(配列番号57及び58)、並びに同一又は他の昆虫及び/又はクモ種において同一の生物学的機能を有する相同又は非相同タンパク質、
B)代謝酵素、例えばHMGコエンザイムAシンターゼ(GenBank X73679)(配列番号49及び50)、並びに同一又は他の昆虫及び/又はクモ種において同一の生物学的機能を有する相同又は非相同タンパク質、
C)V−ATPアーゼなどのイオン/pHのホメオスタシスに関与する酵素、並びに同一又は他の昆虫及び/又はクモ種において同一の生物学的機能を有する相同又は非相同タンパク質、
D)例えば
リボソームタンパク質S4ホモログ(配列番号1及び2)
リボソームタンパク質S9ホモログ(配列番号11及び12)
リボソームタンパク質L9ホモログ(配列番号21及び22)
リボソームタンパク質L19ホモログ(配列番号31及び32)
などの転写/翻訳機構に関与する酵素。
本発明に使用する「標的種」は、害虫となる任意の昆虫又はクモであってもよい。この用語は、任意の発育期にある昆虫又はクモにもまた関する。昆虫は、生きていない外骨格を有することから、昆虫は一定速度で成長することはできず、それどころか定期的に自分の外骨格を脱ぎ捨てることにより段階的に成長する。この過程は脱皮(moulting又はecdysis)と呼ばれる。脱皮と脱皮の間の段階は「齢」と呼ばれ、この段階は本発明により標的とすることができる。また、昆虫の卵や生きた子もまた本発明により標的とすることができる。有翅昆虫亜綱における変態を含む、発育周期の全ての段階は、本発明によるRNAiによって標的とすることができる。したがって、幼虫、蛹、若虫などの発育段階などの個別の段階を全て標的とすることができる。
(1) ダニ目:マダニ亜目(Ixodida)(マダニ)を含むダニ
(2) クモ綱:クモ目(Araneae)(クモ)及びメクラグモ目(Opiliones)(メクラグモ)、例には、Latrodectus mactans(クロゴケグモ)及びLoxosceles recluse(ドクイトグモ)がある。
(3) シラミ目:Pediculus humanus(ヒトジラミ)などのシラミ
(4) ゴキブリ目:チャバネゴキブリ(Blatella germanica)、ワモンゴキブリ(Periplaneta americana)及びコワモンゴキブリ(Periplaneta australiasiae)を含むワモンゴキブリ属、トウヨウゴキブリ(Blatta orientalis)を含むトウヨウゴキブリ属、及びチャオビゴキブリ(Supella longipalpa)を含むスペラ属のものを含むゴキブリ。最も好ましい標的はチャバネゴキブリ(Blatella germanica)である。
(5) コウチュウ目:コウチュウ、例には、ヒラタキクイムシの科(ナガシンクイムシ上科(Bostrichoidea));デンドロクトヌス種(Dendroctonus spp.)(ブラックツルペンチンビートル(Black Turpentine Beetle)、サザンパインビートル(Southern Pine Beetle)、IPSエングレーバービートル(IPS Engraver Beetle));マルカツオブシムシ(アントレヌス種(Anthrenus spp)、アタゲヌス種(Attagenus spp);オールドハウスボーラー(Old House Borer)(カミキリムシ科:ヒロトルペス−バジュルス(Hylotrupes bajulus));シバンムシ(Anobium punctatum);トリボリウム種(Tribolium spp)(コクヌストモドキ);Trogoderma granarium(ヒメアカカツオブシムシ);Oryzaephilus sarinamensis(ノコギリヒラタムシ)など(シミ)がある。
(6) ハサミムシ目:ハサミムシ科
(7) ハエ目:カ(カ科(Culicidae))及びハエ(ハエ亜目(Brachycera))、例は、ハマダラカ種(Anopheles spp.)などのハマダラカ亜科(Anophelinae)及びアエデス−フルブス(Aedes fulvus)などのカ亜科(Culicinae);タバヌス−プンクティファ(Tabanus punctifer)(ホースフライ(Horse Fly))、Glossina morsitans morsitans(ツェツェバエ)などのアブ科(Tabanidae)、ドレインフライ(drain flies)(チョウバエ科(Psychodidae))、及びMusca domestica(イエバエ)などの弁翅亜節(Calyptratae)、ニクバエ(ニクバエ科(Sarcophagidae))など。
(8) カメムシ亜目:Cimex lectularius(トコジラミ)などのカメムシ
(9) ハチ目:アリ(アリ科(Formicoidea))、ミツバチ(ミツバチ上科(Apoidea))を含むハチ(ハチ亜目(Apocrita):Solenopsis invicta(ヒアリ)、Monomorium pharaonis(イエヒメアリ)、オオアリ種(Camponotus spp)(オオアリ)、(lasius niger(トビイロケアリ)、(tetramorium caespitum)(トビイロシワアリ)、Myrmica rubra(キイロクシケアリ)、ヤマアリ種(ウッドアント)、クレマトガスタ−リネオラタ(アクロバットアント)、Iridomyrmex humilis(アルゼンチンアリ))、オオズアリ種(オオズアリ)、及びDasymutilla occidentalis)(アリガタバチ)など
(10) シロアリ目:シロアリ、例には:アミテルメス−フロリデンシス(フロリダダークウィングドサブテラネアンテルマイト))、イースタンサブテラネアンテルマイト(レティキュリテルメス−フラビペス)、R.ヘスペルス(ウエスタンサブテラネアンテルマイト))、Coptotermes formosanus(イエシロアリ))、Incisitermes minor(アメリカカンザイシロアリ))、ネオテルメス−コネキサス(フォレストツリーテルマイト))、及びシロアリ科(Termitidae)がある。
(11) チョウ目:ガ、例には:Tineola bisselliella(コイガ)などのヒロズコガ科(Tineidae)及びマルハキバガ科(Oecophoridae)、並びにPyralis farinalis(カシノシマメイガ)などのメイガ科(Pyralidae)がある。
(12) チャタテムシ目:ブックライス(チャタテムシ)
(13) ノミ目:ヒトノミ(Pulex irritans)などのノミ
(14) 腹吻亜目:アブラムシ(アブラムシ科(Aphididae))
(15) シミ亜目:シミ、例は:マダラシミ(Thermobia domestica)及びセイヨウシミ(Lepisma saccharina)である。
「相補的」とは、RNA鎖が、特定の配列がDNA配列である場合はその配列のRNA同等物、又はそのDNA配列の相補体のRNA同等物に相当することを意味する。
(i)配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180及び181;のいずれか1つに定義する標的核酸分子、或いは
(ii)配列番号41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫及び/若しくはクモ種由来のそのオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子のいずれか1つのヌクレオチド配列の部分に相補的なヌクレオチド配列を含む。上記のように、オーソログは、配列番号1、4、6、7、11、16、17、21、26、27、31、36、37、41、43、44、49、51、52及び57のいずれか1つに示すヌクレオチド配列と少なくとも約50%のヌクレオチド配列同一性を有することがある。好ましくは、オーソログは、配列番号1、4、6、7、11、16、17、21、26、27、31、36、37、41、43、44、49、51、52及び57のいずれか1つに示すヌクレオチド配列と少なくとも約70%、75%、80%、85%、90%、さらに好ましくは少なくとも約95%、なおさらに好ましくは少なくとも約96%、97%、98%、又は99%の配列同一性を有するものである。
a)単一の法的遺伝子を標的とする複数のdsRNA領域を組み合わせる場合、それらの領域はRNA構築物中に本来の順序(すなわち標的遺伝子に断片が出現する順序)で組み合わせることができる、
b)或いは、断片の本来の順序を無視することにより、断片を混ぜ合わせて、ランダム又は故意に任意の順序に組み合わせてRNA構築物にすることができる。
c)或いは、1つの単一断片をRNA構築物中に数回、例えば1から10回、例えば1、2、3、4、5、6、7、8、9、又は10回繰り返すことができ、また
d)(単一又は異なる標的遺伝子を標的とする)dsRNA領域をセンス又はアンチセンス方向に組み合わせることができる。
e)「必須」遺伝子又は「病原性遺伝子」は、1つ又は複数の標的昆虫及び/又はクモに重要で、サイレンシングした場合に致死的又は重大な(例えば、運動、摂食、麻痺、飲水、生殖能力、生殖、成長の)表現型を招く遺伝子を包含する。強い致死的標的遺伝子の選択は強力なRNAi効果を招く。本発明のRNA構築物において、同一又は異なる(非常に効果的な)致死的遺伝子を標的とする複数のdsRNA領域を組み合わせて、昆虫及び/又はクモの防除に果たすRNAiの効果の効力、有効性、又は速度をさらに増大させることができる。
f)「弱小遺伝子」は、本明細書に記載した細胞経路の1つに特に興味深い機能を有するが、独立してサイレンシングすると表現型に弱小作用を招く標的遺伝子を包含する。本発明のRNA構築物では、単一又は異なる弱小遺伝子を標的とする複数のdsRNA領域を組み合わせて、より強いRNAi効果を得ることができる。
g)「昆虫及び/又はクモ特異的」遺伝子は、生物情報学の相同性検索、例えばBLAST検索により決定することのできる非有害生物における実質的な相同的対応物を有さない遺伝子及び遺伝子の部分を包含する。昆虫及び/若しくはクモ特異的標的遺伝子又はその部分の選択は、種特異的RNAi効果を招き、非標的生物に効果を有さないか、又は実質的な(有害)効果を有さない。
h)「保存された遺伝子」は、標的生物及び非標的生物の間で(アミノ酸レベルで)保存されている遺伝子を包含する。非標的種に及ぼす可能性のある効果を減らすために、そのような効果的であるが保存された遺伝子を分析し、これらの保存された遺伝子の可変領域由来の標的配列を選択して、RNA構築物中のdsRNA領域による標的とする。ここで、保存性はヌクレオチド配列のレベルで評価される。このように、当該可変領域は、保存された標的遺伝子のうち、ヌクレオチド配列レベルで最小に保存された部分を包含する。
i)「保存された経路の」遺伝子は、同一の生物学的経路若しくは細胞過程に関与する遺伝子を包含するか、又は異なる昆虫及び/若しくはクモ種において同一の機能を有して、特異的及び強力なRNAi効果と効率的な害虫防除とを招く遺伝子を包含する。
j)或いは、本発明によるRNA構築物は、異なる生物学的経路由来の複数の遺伝子を標的とし、広範囲の細胞性RNAi効果とより効率的な昆虫及び/又はクモの防除とを招く。
さらなる態様では、本発明は、配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180、181、41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200に表す、本発明の新規な標的のヌクレオチド配列を含むDNA構築物もまた提供する。
a.前記DNA構築物若しくは本発明の発現構築物を無細胞成分と接触させるステップ、又は
b.前記DNA構築物若しくは本発明の発現構築物を細胞に適用するステップを含む。
なおさらなる態様では、本発明は、本発明のRNA構築物、及び/又は本発明のDNA構築物、及び/又は本発明の発現構築物、及び/又は本発明の宿主細胞を、適切な担体、賦形剤、又は希釈剤と共に含む害虫防除剤組成物に関する。
なおさらなる態様では、本発明は、RNA干渉により昆虫及び/又はクモを防除するための本発明のRNA構築物、及び/又は本発明のDNA構築物、及び/又は本発明の発現構築物、及び/又は本発明の組成物、及び/又は本発明のハウジング若しくはトラップの使用に関する。その使用は、本明細書に同定された新規な標的とオーソロガスな標的遺伝子を有する全ての発育段階のいくつかの昆虫及び/又はクモに適用することができ、それらには、屋内昆虫及び/又はクモ、外部寄生虫、並びに非限定的な例としてハエ、ハダニ、アザミウマ、ダニ、赤色ニワトリダニ、アリ、ゴキブリ、シロアリ、イエコオロギを含むコオロギ、シミ、チャタテムシ、コウチュウ、ハサミムシ、カ、及びノミなどの公衆の保健衛生に関連する昆虫及び/又はクモが含まれる。最も好ましい標的種はゴキブリ、例えばチャバネゴキブリ(Blatella germanica)を含むチャバネゴキブリ属、ワモンゴキブリ(Periplaneta americana)及びコワモンゴキブリ(Periplaneta australiasiae)を含むワモンゴキブリ属、トウヨウゴキブリ(Blatta orientalis)を含むトウヨウゴキブリ属、並びにチャオビゴキブリ(Supella longipalpa)を含むスペラ属のゴキブリである。最も好ましい標的はチャバネゴキブリ(Blatella germanica)である。
本発明は、本発明の方法に使用するためのキットもまた提供する。これらのキットは、本発明のRNA構築物、及び/又はDNA構築物、及び/又は発現構築物、及び/又は宿主細胞、及び/又は組成物、及び/又はハウジング若しくはトラップを組み入れていてもよく、その全てはdsRNA領域を送達して特異的標的遺伝子に対するRNAiをもたらす。
従来の化学殺虫剤の使用に比べて、本発明に関連する多数の大きな長所がある。
(1)dsRNAを仲介しているRNAiは、効果的に発現をダウンレギュレーションすることにより害虫を防除するために、高度のヌクレオチド配列同一性で標的と一致しなければならない。したがって、特異性は、1方の鎖が標的配列と高い相同性を有するが、その鎖がヒトなどの哺乳動物種でのオーソロガスな配列と低い相同性だけを有する二本鎖RNA分子を設計することにより実現することができる。この特異性は、従来の化学殺虫剤で実現できるものよりも大きい。
(2)害虫の防除に使用することができる新しいセットの標的が同定された。これらの標的は以前に同定されていないため、害虫種に獲得された抵抗性はないはずである。
(3)新規な標的に対するRNAiに使用する二本鎖RNAは、DMSOなどの公知の化学合成害虫防除剤に比べて生分解性の産物である。この構築物が生分解性であることから、この構築物は環境面でさらに健全になる。
(4)RNAiは、害虫を死滅させる点で必ずしも即時効果を与えるわけではなく、それどころかその効果は効果的に仲介されるが、二本鎖RNAがその標的と会合するには時間が必要である。RNAiの効果は、(Dow AgroSciencesからのキチン合成阻害剤である)ノビフルムロンのようにその後にそして接触直後でなしに害虫の死滅を招くことができる。したがって、害虫が殺虫剤及び/又は殺クモ剤の近くで大量の死んだ害虫に出くわして害虫の間にショック効果が広がるという機会が少ないことから、RNAiを使用すると、昆虫及び/又はクモなどの害虫の大規模な侵襲を比較的容易に防除することができる。
(5)同時に複数の標的を使用することは、害虫の個体数のさらに有効な防除をもたらし、抵抗性を獲得する確率を減らすことができる。標的はいくつかの害虫種に共通で、広範囲の処置を与えることがある。
(6)従来の害虫防除剤とは対照的に、本発明のDNA及びRNA構築物、組成物、並びに宿主細胞の性質が比較的安全であることから、関連する場所を処理するために職業的な援助は必要ないであろう。
(7)二本鎖RNA領域含有構築物が、標的害虫集団以外の遺伝子発現に有害作用もごく小さな作用も有さないように設計されていることから、ヒトの活動性の混乱は最小限しか必要ないであろう。
[表の説明]
表1:新規に同定した昆虫標的遺伝子の例。割り当てられた遺伝子機能はFlyBaseオーソログに基づく。
表2:チャバネゴキブリ標的配列に相補的なdsRNA断片。
表3:うまく脱皮して成虫期になったゴキブリの数に及ぼすdsRNA処置の効果を生きた昆虫の率で表したもの(平均±標準誤差、n=4)。
表4:選択された標的遺伝子配列*。配列*の少なくとも17bpの断片は、昆虫種での特異的にオーソロガスな配列に存在する(GI番号で表す)。
表5:選択された標的遺伝子配列*。配列*の少なくとも17bpの断片は、クモ種での特異的にオーソロガスな配列に存在する(GI番号で表す)。
TRIzol Reagent(カタログ番号15596−026/15596−018、Invitrogen、ロックヴィル、メリーランド州、米国)を製造業者の説明書通りに使用して、高品質の無傷のRNAをチャバネゴキブリ(入手源:Central Science Laboratory、ヨーク)から単離した。このRNA調製物に存在するゲノムDNAは、製造業者が指示したDnアーゼ処理により除去した。市販のキット(SuperScript(商標)III Reverse Transcriptase、カタログ番号18080044、Invitrogen、ロックヴィル、メリーランド州、米国)を製造業者の説明書通りに使用して、cDNAを作製した。
TRIzol Reagent(カタログ番号15596−026/15596−018、Invitrogen、ロックヴィル、メリーランド州、米国)を製造業者の説明書通りに使用して、高品質の無傷のRNAをチャバネゴキブリ(入手源:Central Science Laboratory、ヨーク)から単離した。このRNA調製物に存在するゲノムDNAは、製造業者が指示したようにDNアーゼ処理により除去した。市販のキット(SuperScript(商標)III Reverse Transcriptase、カタログ番号18080044、Invitrogen、ロックヴィル、メリーランド州、米国)を製造業者の説明書通りに使用して、cDNAを作製した。
市販のキットT7 RiboMAX(商標)Express RNAi System(カタログ番号P1700、Promega)を使用して、ミリグラム量のdsRNAを合成した。最初に2つの異なる一本鎖5’T7 RNAポリメラーゼプロモーターテンプレートを2つの異なるPCR反応で作製した。各反応物はT7プロモーターに対して異なる方向で標的配列を含む。
蒸留水に溶かした1〜10μg/μl dsRNA原液を調製した。各dsRNA溶液を適切な濃度に希釈し、それを細かく磨り潰した実験室動物用餌(ラット及びマウス標準食、B&K Universal Ltd、ハル、英国)(全ての酵素を不活性化するために予め熱処理したもの)と混合した。この混合物又は製剤を等重量(0.3g)の小さなペレットに成形し、終濃度0.1%から2%w/w dsRNAにして、室温で一晩乾燥させた。
ヒトと実質的な相同性を有さないチャバネゴキブリBg001、Bg003、Bg004、Bg005、Bg031、Bg032、及びBg033遺伝子の断片の同定〕
本明細書においてそれぞれ配列番号1、配列番号11、配列番号21、配列番号31、配列番号41、配列番号49、及び配列番号57に表すBg001、Bg003、Bg004、Bg005、Bg031、Bg032、及びBg033遺伝子の部分配列を分析し、非標的生物と実質的な相同性を有さない断片を見出した。特に、dsRNAは生物中でsiRNA分子に細切されるものであることから、非標的種と相同性を有するであろうsiRNA配列を求めて配列をスキャンした。当該siRNAは非標的生物に有害作用を起こすおそれがあるため、最終産物に組み入れるdsRNA断片に入れるのは避けることが好ましい。選択された断片は、例えばベイト剤に存在してゴキブリの摂食によりベイト剤から取り込まれる場合、RNA干渉によるゴキブリ防除に適する。この分析について、非標的生物はヒト(Homo sapiens)であった。非標的生物に存在しない21個の隣接するヌクレオチド(best1_human_21_0)、又は3つのミスマッチを許した24個の隣接するヌクレオチド(best1/2/3_human_24_3)の断片を同定した。これを本明細書において「フリーフラッグ(freefrag)」と名付ける。第1の選択基準で非標的生物の配列を有さないBg001、Bg003、Bg004、Bg005、Bg031、Bg032及びBg033の最長配列を配列番号で示し、本明細書において「フリーフラッグ」と名付ける。これらのBg001、Bg003、Bg004、Bg005、Bg031、Bg032、及びBg033のフリーフラッグは、本明細書においてそれぞれ配列番号10、配列番号20、配列番号30、配列番号40、配列番号48、配列番号56、及び配列番号64で表す。本発明での使用に適した他のフリーフラッグ配列の数例の長さ及び配列を表2に示す。正確な配列は、この表から容易に推定することができる。表に記載した全てのフリーフラッグ配列は、本発明の配列群に属する。
各標的遺伝子についてコンカテマーを設計した。コンカテマーは50から100bpのds断片の合成タンデム反復である。本実施例では、タンパク質ファミリー中で相同性を有する領域から、そしてヌクレオチドレベルで最良の予測されるsiRNAを含む領域及び40から60%のGC含量、可能であれば好ましくは約50%のGC含量を有する領域から最良の可能性のある断片を選択することによってコンカテマーを設計した。
RNA干渉(RNAi)は、多数の異なる種において配列特異的に標的遺伝子の発現を阻害する、潜在的に非常に強力な手段である。しかし、RNAiが貴重で効果的であるためには、所与の任意の標的遺伝子を、非特異的ノックダウン及び有毒な副作用なしに特異的にサイレンシングすることが不可欠である。dsRNAの適用は、細胞内でのこれらの化合物の作用部位にこれらの化合物を効果的に送達できないことによって妨害されてきた。特異性を失わずに相互作用の強度及び安定性を高めるためのdsRNAの化学修飾の進歩が継続中である。この実験では、チャバネゴキブリの標的遺伝子にdsRNAを送達するためのいくつかの概念について評価する。
遺伝子サイレンシングのためのdsRNA適用は、分子の生物学的安定性、特異性、及び送達の改善に依存するものである。
蒸留水に溶かした10μg/μl dsRNA原液を調製し、それを細かく磨り潰した実験室動物用餌(ラット及びマウス標準食、B&K Universal Ltd、ハル、英国)(全ての酵素を不活性化するために予め熱処理したもの)と混合した。この混合物又は製剤を等重量(0.3g)の小さなペレットに成形し、終濃度1%w/w dsRNAにして、室温で一晩乾燥させた。
Claims (76)
- 配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180及び181のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫若しくはクモ種由来のオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記オーソロガスなヌクレオチド配列が、配列番号1、11、21、及び31のいずれか1つのヌクレオチド配列と少なくとも70%の配列同一性を有する核酸分子。
- 少なくとも1つの二本鎖RNA領域を含むRNA構築物であって、前記二本鎖RNA領域の少なくとも1方の鎖が、(i)請求項1に記載の核酸分子、或いは(ii)配列番号41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫及び/若しくはクモ種由来のそのオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子のいずれか1つのヌクレオチド配列の部分に相補的なヌクレオチド配列を含むRNA構築物。
- 前記少なくとも1つの二本鎖RNA領域が少なくとも17bpの長さを有する、請求項2に記載のRNA構築物。
- 前記ヌクレオチド配列の相補性が、(i)請求項1又は請求項2に記載の核酸分子のヌクレオチド配列の部分と、或いは(ii)配列番号41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫若しくはクモ種由来のそのオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも70%のヌクレオチド配列同一性を有し、前記配列同一性の率が同一の長さにわたり計算される、請求項2又は3に記載のRNA構築物。
- (i)請求項1又は請求項2に記載の核酸分子のヌクレオチド配列の部分と、或いは(ii)配列番号41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫若しくはクモ種由来のそのオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子と相補的なヌクレオチド配列を含む前記少なくとも1方の鎖が、24個の隣接するヌクレオチドにわたり哺乳動物種由来の対応するヌクレオチド配列と12.5%未満の配列同一性を有する、請求項2〜4のいずれかに記載のRNA構築物。
- 配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180、181、41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか、例えば配列番号65から70のいずれかから独立して選択される少なくとも2つのヌクレオチド配列を含む、請求項2〜5のいずれかに記載のRNA構築物。
- (i)請求項1に記載のヌクレオチド配列を含むか、又は(ii)請求項2〜6のいずれか一項に記載のRNA構築物をコードしている領域を含むDNA構築物。
- 請求項7に記載のDNA構築物を含む発現構築物。
- 請求項7に記載のヌクレオチドの発現を駆動することができる1つ又は複数の制御配列と、場合によっては転写終結配列とをさらに含む、請求項8に記載の発現構築物。
- 請求項2〜6のいずれかに記載のRNA構築物、請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物を含む宿主細胞。
- 請求項2〜6のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞を適切な担体と一緒に含む害虫防除組成物。
- 前記担体が、静電荷電した粉末若しくは粒子及び/又は磁気粒子、好ましくは最初帯磁していないが、前記昆虫又はクモの体が与える電界にさらされると磁気的に分極することができる金属粒子を含み、前記粉末又は粒子が、前記昆虫又はクモのクチクラに接着し、昆虫又はクモにより摂食されることができる、請求項10に記載の組成物。
- 請求項11又は12に記載の組成物を含む、昆虫及び/又はクモのためのハウジング又はトラップ。
- RNA干渉により昆虫及び/又はクモを防除するための、請求項2〜6のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップの使用。
- 昆虫及び/又はクモを防除する方法であって、昆虫及び/又はクモに、請求項2〜6のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップを適用するステップを含み、前記二本鎖RNAが、RNA干渉によって少なくとも1つの昆虫及び/又はクモ遺伝子の発現をダウンレギュレーションすることができる方法。
- 請求項2〜6のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップが前記昆虫及び/又はクモに適用される、請求項15に記載の方法。
- 前記昆虫及び/又はクモが抵抗性を獲得する確率を減らすために、請求項2〜6のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップが連続的に適用される、請求項16に記載の方法。
- 前記昆虫及び/又はクモが、屋内昆虫、外部寄生虫、並びに公衆の保健衛生に関連する昆虫及び/又はクモ、好ましくはハエ、ハダニ、アザミウマ、ダニ、赤色ニワトリダニ(trd poultry mite)、アリ、ゴキブリ、シロアリ、イエコオロギを含むコオロギ、シミ、チャタテムシ、コウチュウ、ハサミムシ、カ、及びノミを含む、請求項14に記載の使用又は請求項15〜17のいずれかに記載の方法。
- 前記昆虫及び/又はクモが、非限定的にチャバネゴキブリ種(Blatella spp.)(例えばBlatella germanica(チャバネゴキブリ))、ワモンゴキブリ種(Periplaneta spp.)(例えばPeriplaneta americana(ワモンゴキブリ)及びPeriplaneta australiasiae(コワモンゴキブリ))、トウヨウゴキブリ種(Blatta spp.)(例えばBlatta orientalis(トウヨウゴキブリ))、及びスペラ種(Supella spp.)(例えばSupella longipalpa(チャオビゴキブリ)などのゴキブリ(ゴキブリ亜目)(Blattodea);非限定的にトフシアリ種(Solenopsis spp.)(例えばSolenopsis invicta(ヒアリ))、ヒメアリ種(Monomorium spp.)(例えばMonomorium pharaonis(イエヒメアリ))、オオアリ種(Camponotus spp)(例えばオオアリ種(カーペンターアント(Carpenter Ant)))、ケアリ種(lasius spp.)(例えばlasius niger(トビイロケアリ))、シワアリ種(Tetramorium spp.)(例えばTetramorium caespitum(トビイロシワアリ))、クシケアリ種(Myrmica spp.)(例えばMyrmica rubra(キイロクシケアリ))、ヤマアリ種(Formica spp)(ウッドアント(wood ant))、シリアゲアリ種(Crematogaster spp.)(例えばクレマトガスタ−リネオラタ(Crematogaster lineolata)(アクロバットアント(Acrobat Ant)))、イリドミルメクス種(Iridomyrmex spp.)(例えばIridomyrmex humilis(アルゼンチンアリ))、オオズアリ種(Pheidole spp.)(オオズアリ)、及びダシムチラ種(Dasymutilla spp.)(例えばDasymutilla occidentalis)(アリガタバチ))などのアリ(アリ上科)(Formicoidea);非限定的にアミテルメス種(Amitermes spp.)(例えばアミテルメス−フロリデンシス(Amitermes floridensis)(フロリダダークウィングドサブテラネアンテルマイト(Florida dark−winged subterranean termite)))、レティキュリテルメス種(Reticulitermes spp.)(例えばレティキュリテルメス−フラビペス(Reticulitermes flavipes)(イースタンサブテラネアンテルマイト(eastern subterranean termite))、レティキュリテルメス−ヘスペルス(Reticulitermes hesperus)(ウエスタンサブテラネアンテルマイト(Western Subterranean Termite)))、イエシロアリ種(Coptotermes spp.)(例えばCoptotermes formosanus(イエシロアリ))、インシシテルメス種(Incisitermes spp.)(例えばIncisitermes minor(アメリカカンザイシロアリ))、ネオテルメス種(Neotermes spp.)(例えばネオテルメス−コネキサス(Neotermes connexus)(フォレストツリーテルマイト(Forest Tree Termite)))などのシロアリ(シロアリ目(Isoptera)及び/又はシロアリ科(Termitidae))を含み、最も好ましくはチャバネゴキブリ(Blatella germanica)を含む、請求項18に記載の使用又は方法。
- 請求項15〜19のいずれか一項に記載の方法に使用するためのキットであって、請求項2〜6のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップを使用説明書と一緒に備え、前記二本鎖RNAが、RNA干渉により少なくとも1つの害虫遺伝子の発現をダウンレギュレーションすることができるキット。
- 請求項2〜6のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10若しくは11のいずれかに記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップを備え、各二本鎖RNAが、RNA干渉により少なくとも1つの害虫遺伝子の発現をダウンレギュレーションすることができる、請求項20に記載のキット。
- 前記害虫が抵抗性を獲得する確率を減らすために、請求項2〜6のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項7又は8に記載のDNA構築物、及び/又は請求項9に記載の発現構築物、及び/又は請求項10に記載の宿主細胞、及び/又は請求項11又は12に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップが連続的に使用される、請求項20に記載のキット。
- ゴキブリ害虫を防除する方法であって、少なくとも1つの二本鎖RNA領域を含むRNA構築物をゴキブリに与えるステップを含み、前記二本鎖RNA領域の少なくとも1方の鎖が、ゴキブリリボソームタンパク質をコードしているヌクレオチド配列の部分に相補的なヌクレオチド配列を含む方法。
- 前記少なくとも1つの二本鎖RNA領域の少なくとも1方の鎖が、配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180、181、41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれかに示すヌクレオチド配列又はその相補体を含む任意の核酸分子の少なくとも17、18、19、20、21個、又はそれを超えるヌクレオチドを含む、請求項23に記載の方法。
- 少なくとも1つの追加のdsRNA領域を含み、前記dsRNA領域の少なくとも1方の鎖が、昆虫及び/又はクモ種由来のさらなる遺伝子のヌクレオチド配列の部分に相補的なヌクレオチド配列を含む、請求項2〜6のいずれか一項に記載のRNA構築物。
- 少なくとも1つの追加の機能的配列と、場合によってはリンカーとをさらに含む、請求項2〜6又は25のいずれか一項に記載のRNA構築物。
- 前記追加の機能的配列が、(i)前記RNA構築物の大規模産生を容易にする配列と、(ii)dsRNAの安定性を増加又は減少させる配列と、(iii)タンパク質又は他の分子を結合させて、昆虫及び/若しくはクモによる前記RNA構築物の取り込みを容易にする配列と、(iv)昆虫の腸内で受容体又は分子に結合し、前記昆虫及び/又はクモによる取り込み、エンドサイトーシス、及び/又はトランスサイトーシスを容易にするアプタマーである配列とを含む群から選択される、請求項26に記載のRNA構築物。
- 前記リンカーが、条件的に自己開裂するRNA配列であり、好ましくはpH感受性リンカー又は疎水性感受性リンカーである、請求項26又は27に記載のRNA構築物。
- 前記リンカーがイントロンである、請求項26又は27に記載のRNA構築物。
- 前記ヌクレオチド配列の相補性が、(i)請求項1又は請求項2に記載の核酸分子のヌクレオチド配列の部分と、或いは(ii)配列番号41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫及び/若しくはクモ種由来のそのオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子と少なくとも70%のヌクレオチド配列同一性を有し、前記配列同一性の率が同一の長さにわたり計算される、請求項23〜27のいずれか一項に記載のRNA構築物。
- (i)請求項1又は請求項2に記載の核酸分子のヌクレオチド配列の部分と、或いは(ii)配列番号41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれか1つに示すヌクレオチド配列又は昆虫種由来のそのオーソロガスなヌクレオチド配列を含む核酸分子及び/又はクモと相補的なヌクレオチド配列を含む少なくとも1方の鎖が、哺乳動物種由来の対応するヌクレオチド配列と24個の隣接するヌクレオチドにわたり12.5%未満の配列同一性を有する、請求項25〜30のいずれか一項に記載のRNA構築物。
- 少なくとも1方の鎖が、配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180、181、41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれかに示すヌクレオチド配列又はその相補体を含む任意の核酸分子の少なくとも17、18、19、20、21個、又はそれを超えるヌクレオチドを含む、請求項3〜6又は25〜28のいずれかに記載のRNA構築物。
- 前記哺乳動物種がヒトである、請求項31又は32に記載のRNA構築物。
- 少なくとも1つの二本鎖RNA領域を含むRNA構築物であって、前記二本鎖RNA領域の少なくとも1方の鎖が、配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180、181、41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれかに示すヌクレオチド配列又はその相補体を含む任意の核酸分子の少なくとも17、18、19、20、21個、又はそれを超えるヌクレオチドを含むRNA構築物。
- 請求項25〜34のいずれか一項に記載のRNA構築物をコードしている領域を含むDNA構築物。
- 請求項35に記載のDNA構築物を含む発現構築物。
- 請求項25〜34のいずれかに記載のRNA構築物、請求項35に記載のDNA構築物、又は請求項36に記載の発現構築物を含む宿主細胞。
- 細菌細胞である、請求項10又は37に記載の宿主細胞。
- 不活性化細菌細胞である、請求項38に記載の宿主細胞。
- 請求項2〜6又は25〜34のいずれかに記載のRNA構築物を作製する方法であって、
請求項7又は35に記載のDNA構築物を転写させて前記RNA構築物を産生させる条件下で、
a.前記DNA構築物又は請求項8、9、若しくは36のいずれかに記載の発現構築物を無細胞成分と接触させるステップ、又は
b.前記DNA構築物又は請求項8、9、若しくは36のいずれかに記載の発現構築物を細胞に適用するステップを含む方法。 - 前記細胞が細菌細胞である、請求項40に記載の方法。
- 請求項25〜34のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞を適切な担体と一緒に含む害虫防除組成物。
- 昆虫及び/又はクモよる摂食に適した形態である、請求項10、11、又は43のいずれかに記載の組成物。
- ペレット若しくは粉末などの固体形態、液体形態、又はゲル形態である、請求項42又は43に記載の組成物。
- ベイト剤の形態である、請求項42〜44のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ベイト剤が、タンパク質性食物などの少なくとも1つの食品、又はホウ酸及び/若しくは誘引剤、例えばフェロモンをさらに含む、請求項45に記載の組成物。
- 昆虫及び/又はクモが前記組成物を摂食するために進入することができるハウジング又はトラップに用意されている、請求項42〜46のいずれか一項に記載の組成物。
- スプレー、好ましくは加圧/エーロゾル化スプレー又はポンプスプレーの形態である、請求項42〜46のいずれか一項に記載の組成物。
- 昆虫及び/又はクモが接触すると、前記昆虫及び/又はクモに接着する、適切な表面上のコーティングの形態である、請求項42〜46のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記担体が、静電荷電した粉末若しくは粒子及び/又は磁気粒子、好ましくは最初帯磁していないが、前記昆虫及び/又はクモの体がもたらす電界にさらされると磁気的に分極することができ、前記昆虫及び/又はクモのクチクラに接着する金属粒子を含む、請求項42〜46のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記担体が、前記害虫への前記二本鎖RNAの取り込みを増大させる、請求項42〜50のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記担体が、好ましくは水中油型エマルジョン、コレステロール、ミセル、リポポリアミン、及びリポソームのうち1つ又は複数を含む脂質系担体である、請求項51に記載の組成物。
- 前記担体が、ヌクレオチド凝縮剤、好ましくはスペルミジン又は硫酸プロタミンを含む、請求項51に記載の組成物。
- さらなる害虫防除剤と組み合わせた、請求項11、12、又は42〜53のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項42〜46又は54のいずれか一項に記載の組成物を含む、昆虫及び/又はクモ用のハウジング又はトラップ。
- RNA干渉により昆虫及び/又はクモを防除するための、請求項25〜34のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項55に記載のハウジング若しくはトラップの使用。
- 前記昆虫及び/又はクモが、屋内昆虫、外部寄生虫、並びに公衆の保健衛生に関連する昆虫及び/又はクモ、好ましくはハエ、ハダニ、アザミウマ、ダニ、赤色ニワトリダニ、アリ、ゴキブリ、シロアリ、イエコオロギを含むコオロギ、シミ、チャタテムシ、コウチュウ、ハサミムシ、カ、及びノミを含む、請求項56に記載の使用。
- 前記昆虫及び/又はクモが、非限定的にチャバネゴキブリ種(例えばBlatella germanica(チャバネゴキブリ))、ワモンゴキブリ種(例えばPeriplaneta americana(ワモンゴキブリ)及びPeriplaneta australiasiae(コワモンゴキブリ))、トウヨウゴキブリ種(例えばBlatta orientalis(トウヨウゴキブリ))、及びスペラ種(例えばSupella longipalpa(チャオビゴキブリ)などのゴキブリ(ゴキブリ亜目);非限定的にトフシアリ種(例えばSolenopsis invicta(ヒアリ))、ヒメアリ種(例えばMonomorium pharaonis(イエヒメアリ))、オオアリ種(例えばオオアリ種(カーペンターアント))、ケアリ種(例えばIasius niger(トビイロケアリ))、シワアリ種(例えばTetramorium caespitum(トビイロシワアリ))、クシケアリ種(例えばMyrmica rubra(キイロクシケアリ))、ヤマアリ種(ウッドアント)、シリアゲアリ種(例えばクレマトガスタ−リネオラタ(アクロバットアント))、イリドミルメクス種(例えばIridomyrmex humilis(アルゼンチンアリ))、オオズアリ種(オオズアリ)、及びダシムチラ種(例えばDasymutilla occidentalis(アリガタバチ))などのアリ(アリ上科);非限定的にアミテルメス種(例えばアミテルメス−フロリデンシス(フロリダダークウィングドサブテラネアンテルマイト))、レティキュリテルメス種(例えばレティキュリテルメス−フラビペス(イースタンサブテラネアンテルマイト)、レティキュリテルメス−ヘスペルス(ウエスタンサブテラネアンテルマイト))、イエシロアリ種(例えばCoptotermes formosanus(イエシロアリ))、インシシテルメス種(例えばIncisitermes minor(アメリカカンザイシロアリ))、及びネオテルメス種(例えばネオテルメス−コネキサス(フォレストツリーテルマイト))などのシロアリ(シロアリ目及び/又はシロアリ科)を含み、最も好ましくはチャバネゴキブリ(Blatella germanica)を含む、請求項57に記載の使用。
- 前記昆虫及び/又はクモが、成長が遅延するか、麻痺するか、生殖不能になるか、又は死滅する、請求項14、18、又は56〜58のいずれか一項に記載の使用。
- 昆虫及び/又はクモを防除する方法であって、昆虫及び/又はクモに、請求項25〜34のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップを適用することを含み、前記二本鎖RNAがRNA干渉により少なくとも1つの昆虫及び/又はクモ遺伝子の発現をダウンレギュレーションすることができる方法。
- 請求項25〜34のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップが適用される、請求項60に記載の使用。
- 前記害虫が抵抗性を獲得する確率を減らすために、請求項25〜34のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップが連続的に適用される、請求項61に記載の方法。
- 前記昆虫及び/又はクモが、屋内昆虫、外部寄生虫、並びに公衆の保健衛生に関連する昆虫及び/又はクモ、好ましくはハエ、ハダニ、アザミウマ、ダニ、赤色ニワトリダニ、アリ、ゴキブリ、シロアリ、イエコオロギを含むコオロギ、シミ、チャタテムシ、コウチュウ、ハサミムシ、カ、及びノミを含む、請求項60〜62のいずれか一項に記載の方法。
- 前記昆虫及び/又はクモが、非限定的にチャバネゴキブリ種(例えばBlatella germanica(チャバネゴキブリ))、ワモンゴキブリ種(例えばPeriplaneta americana(ワモンゴキブリ)及びPeriplaneta australiasiae(コワモンゴキブリ))、トウヨウゴキブリ種(例えばBlatta orientalis(トウヨウゴキブリ))、及びスペラ種(例えばSupella longipalpa(チャオビゴキブリ)などのゴキブリ(ゴキブリ亜目);非限定的にトフシアリ種(例えばSolenopsis invicta(ヒアリ))、ヒメアリ種(例えばMonomorium pharaonis(イエヒメアリ))、オオアリ種(例えばオオアリ種(カーペンターアント))、ケアリ種(例えばlasius niger(トビイロケアリ))、シワアリ種(例えばTetramorium caespitum(トビイロシワアリ))、クシケアリ種(例えばMyrmica rubra(キイロクシケアリ))、ヤマアリ種(ウッドアント)、シリアゲアリ種(例えばクレマトガスタ−リネオラタ(アクロバットアント))、イリドミルメクス種(例えばIridomyrmex humilis(アルゼンチンアリ))、オオズアリ種(オオズアリ)、及びダシムチラ種(例えばDasymutilla occidentalis(アリガタバチ))などのアリ(アリ上科);非限定的にアミテルメス種(例えばアミテルメス−フロリデンシス(フロリダダークウィングドサブテラネアンテルマイト))、レティキュリテルメス種(例えばレティキュリテルメス−フラビペス(イースタンサブテラネアンテルマイト)、レティキュリテルメス−ヘスペルス(ウエスタンサブテラネアンテルマイト))、イエシロアリ種(例えばCoptotermes formosanus(イエシロアリ))、インシシテルメス種(例えばIncisitermes minor(アメリカカンザイシロアリ))、及びネオテルメス種(例えばネオテルメス−コネキサス(フォレストツリーテルマイト))などのシロアリ(シロアリ目及び/又はシロアリ科)を含む、請求項60〜63のいずれか一項に記載の方法。
- 前記昆虫及び/又はクモが、成長が遅延するか、麻痺するか、生殖不能になるか、又は死滅する、請求項15〜16又は6〜62のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項60〜65のいずれか一項に記載の方法に使用するためのキットであって、請求項25〜34のいずれか一項に記載のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物、及び/又は請求項13に記載のハウジング若しくはトラップを使用説明書と一緒に備え、前記二本鎖RNAが、RNA干渉により少なくとも1つの害虫遺伝子の発現をダウンレギュレーションすることができるキット。
- 請求項53〜34のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物を備え、各二本鎖RNAがRNA干渉により少なくとも1つの害虫遺伝子の発現をダウンレギュレーションすることができる、請求項64に記載のキット。
- 前記害虫が抵抗性を獲得する確率を減らすために、請求項25〜34のいずれか一項に記載の複数のRNA構築物、及び/又は請求項35に記載のDNA構築物、及び/又は請求項36に記載の発現構築物、及び/又は請求項37〜39のいずれか一項に記載の宿主細胞、及び/又は請求項42〜54のいずれか一項に記載の組成物が連続的に使用される、請求項67に記載のキット。
- ゴキブリ害虫を防除する方法であって、ゴキブリに少なくとも1つの二本鎖RNA領域を含むRNA構築物を適用するステップを含み、前記二本鎖RNA領域の少なくとも1方の鎖が、トロポミオシン、HMGコエンザイムAシンターゼ遺伝子、又はアクチン5C遺伝子をコードしているヌクレオチド配列の部分に相補的なヌクレオチド配列を含む方法。
- 前記少なくとも1つの二本鎖領域の少なくとも1方の鎖が、配列番号1、4、6、7、9、10、65から70、71から79、11、16、17、19、20、80から87、21、26、27、29、30、88から93、31、36、37、39、40、94から108、180、181、41、43、44、47、48、109から147、182から187、49、51、52、55、56、148から150、57、63、64、151から179、及び188から200のいずれかに示すヌクレオチド配列又はその相補体を含む任意の核酸分子の少なくとも17、18、19、20、21個、又はそれを超えるヌクレオチドを含む、請求項69に記載の方法。
- 前記ゴキブリ害虫が、チャバネゴキブリ属、ワモンゴキブリ属、トウヨウゴキブリ属、及びスペラ属を含む属の群に属する種から選択される、請求項23、24、69、又は70のいずれかに記載の方法。
- 前記ゴキブリ害虫が、チャバネゴキブリ(Blatella germanica)、ワモンゴキブリ(Periplaneta americana)、及びコワモンゴキブリ(Periplaneta australiasiae)、トウヨウゴキブリ(Blatta orientalis)、及びチャオビゴキブリ(Supella longipalpa)を含む群から選択される、請求項23、24、又は69〜71のいずれかに記載の方法。
- 配列番号2、12、22、又は32のいずれか1つに示すアミノ酸配列を含むタンパク質、又はさらなる昆虫及び/若しくはクモ種由来の保存されたアミノ酸配列を有するオーソロガスなタンパク質。
- オーソログが、配列番号2、12、22、又は32のいずれか1つに示すアミノ酸配列と少なくとも70%のアミノ酸配列同一性を有する、請求項73に記載のタンパク質。
- 請求項2〜6又は25〜34のいずれかのRNA構築物を作製する方法であって、前記RNA構築物の発現を可能にする条件下で、請求項10又は37〜39のいずれかに記載の宿主細胞を培養するステップを含む方法。
- 前記RNA構築物の精製をさらに含む、請求項75に記載の方法。
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