CN114957426B - Sp6rars及其在防治蜚蠊目昆虫中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物技术领域，公开了SP6RARS及其在防治蜚蠊目昆虫中的应用。本发明首次公开了SP6RARS以及与SP6RARS相关的生物材料，SP6RARS以及与SP6RARS相关的生物材料与蜚蠊目昆虫表皮发育、存活率相关，通过降低蜚蠊目昆虫中SP6RARS的表达量和/或活性可以导致蜚蠊目昆虫表皮发育受阻，导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致蜚蠊目昆虫死亡，达到防治蜚蠊目昆虫的效果，并且在防治过程中，不会产生抗药性、对人畜没有危害，且对环境没有污染。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及SP6RARS及其在防治蜚蠊目昆虫中的应用。
背景技术
蜚蠊目昆虫通称为蜚蠊、地鳖等，俗称为蟑螂；包括黑胸大蠊、美洲大蠊、澳洲大蠊、德国小蠊、日本大蠊等。其中，美洲大蠊(Periplaneta americana，Americancockroach)食性广泛，喜食糖和淀粉、污染食物，传播病菌和寄生虫，是世界性卫生害虫，而且是我国华南地区常见室内优势种群。随着全球气候变暖，城市化进程的加快，交通和贸易的快速发展，美洲大蠊的分布更加广泛，危害程度日趋严重，已成为宾馆、饭店、家庭、医院、学校、食品加工制售、餐饮等单位重要的卫生害虫。美洲大蠊的生活史分为卵、若虫、成虫三个阶段，属于不完全变态昆虫中的渐变态昆虫。它们在生长发育中，幼虫期与成虫期形态和生活习性上变化不大，只是翅未长出，生殖器官发育不全(此时期的幼虫也称为若虫)，经过九次蜕皮，每经历一次脱皮后其生殖器官逐渐发育生长，渐渐成长为成虫，从九龄到成虫的蜕皮成为羽化。
目前，化学防治是治理美洲大蠊的主要手段，但大面积地使用化学杀虫剂导致抗药性的产生以及生态环境的破坏等，不利于美洲大蠊防治的可持续治理。因此，研发新型绿色分子靶标对于防治美洲大蠊是迫在眉睫的。
RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)分子引起的特异性转录后基因沉默的现象，是研究基因功能的有力工具，同时在害虫防治方面也具有极大潜力。基于RNAi技术的害虫防治手段具有专一性，且对非靶标生物安全。美洲大蠊属于蜚蠊目昆虫具有高效的RNAi机制，将dsRNA注射蜚蠊目昆虫(美洲大蠊)若虫或成虫均可以抑制目的基因的表达。因此，筛选出影响蜚蠊目昆虫(美洲大蠊)生长发育的关键靶标，对于加速RNAi技术在防治蜚蠊目昆虫(美洲大蠊)具有重要意义。
发明内容
本发明第一方面的目的，在于提供SP6RARS。
本发明第二方面的目的，在于提供与本发明第一方面的SP6RARS相关的生物材料。
本发明第三方面的目的，在于提供本发明第一方面的SP6RARS和/或本发明第二方面的生物材料的应用。
本发明第四方面的目的，在于提供一种dsRNA。
本发明第五方面的目的，在于提供与本发明第四方面的dsRNA相关的生物材料。
本发明第六方面的目的，在于提供一种试剂。
本发明第七方面的目的，在于提供一种方法。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供SP6RARS(serine/threonine-protein phosphatase6regulatory ankyrin repeat subunit，丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6调节性锚定蛋白重复亚基)，其氨基酸序列包含a1)～a3)中任一种：
a1)SEQ ID NO.4；
a2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个氨基酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列；
a3)与SEQ ID NO.4具有99％、98％、97％、96％、95％、94％或93％的同源性且与SEQ ID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列。
本发明的第二个方面，提供与本发明第一个方面的SP6RARS相关的生物材料，所述生物材料包含b1)～b8)中任一种：
b1)编码本发明第一方面的SP6RARS的核酸分子；
b2)包含b1)所述核酸分子的表达盒；
b3)包含b1)所述核酸分子的载体；
b4)包含b2)所述表达盒的载体；
b5)包含b1)所述核酸分子的转基因细胞系；
b6)包含b2)所述表达盒的转基因细胞系；
b7)包含b3)所述载体的转基因细胞系；
b8)包含b4)所述载体的转基因细胞系。
优选地，所述转基因细胞系不包含繁殖材料。
优选地，所述核酸分子的序列包含g1)～g3)中任一种：
g1)SEQ ID NO.3；
g2)将SEQ ID NO.3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.3所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列；
g3)与SEQ ID NO.3具有99％、98％、97％、96％、95％、94％或93％的同源性且与SEQ ID NO.3所示的核酸分子具有相同功能的核苷酸序列。
本发明的第三个方面，提供本发明第一方面的SP6RARS和/或本发明第二方面的生物材料在c1)～c8)中任一项中的应用：
c1)调控蜚蠊目昆虫表皮发育；
c2)制备调控蜚蠊目昆虫表皮发育的产品；
c3)抑制蜚蠊目昆虫表皮发育；
c4)制备抑制蜚蠊目昆虫表皮发育的产品；
c5)防治蜚蠊目昆虫；
c6)制备防治蜚蠊目昆虫的产品；
c7)降低蜚蠊目昆虫存活率；
c8)制备降低蜚蠊目昆虫存活率的产品。
优选地，所述蜚蠊目昆虫包含黑胸大蠊、美洲大蠊、澳洲大蠊、德国小蠊、日本大蠊中的至少一种；进一步优选地，所述蜚蠊目昆虫包含美洲大蠊。
优选地，SP6RARS抑制剂在上述c3)～c8)中任一项中的应用；所述SP6RARS的氨基酸序列包含a1)～a3)中任一种：
a1)SEQ ID NO.4；
a2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个氨基酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列；
a3)与SEQ ID NO.4具有99％、98％、97％、96％、95％、94％或93％的同源性且与SEQ ID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列。
优选地，所述SP6RARS抑制剂包含抑制SP6RARS活性的物质、降解SP6RARS的物质、降低SP6RARS表达水平的物质中的至少一种。
优选地，所述降低SP6RARS表达水平的物质包含靶向SP6RARS的siRNA、dsRNA、miRNA、核酶、shRNA中的至少一种。
优选地，所述SP6RARS抑制剂包含靶向SP6RARS的dsRNA。
优选地，所述靶向SP6RARS的dsRNA包含由SEQ ID.NO.7所示的核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸序列组成的双链RNA。
本发明的第四个方面，提供一种dsRNA，所述dsRNA包含由SEQ ID.NO.7所示的核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸序列组成的双链RNA。
本发明的第五个方面，提供与本发明第四方面的dsRNA相关的生物材料，所述生物材料包含d1)～d8)中任一种：
d1)编码本发明第四方面的dsRNA的核酸分子；
d2)包含d1)所述核酸分子的表达盒；
d3)包含d1)所述核酸分子的载体；
d4)包含d2)所述表达盒的载体；
d5)包含d1)所述核酸分子的转基因细胞系；
d6)包含d2)所述表达盒的转基因细胞系；
d7)包含d3)所述载体的转基因细胞系；
d8)包含d4)所述载体的转基因细胞系。
优选地，所述转基因细胞系不包含繁殖材料。
本发明的第六个方面，提供一种试剂，包含：SP6RARS抑制剂；所述SP6RARS的氨基酸序列为a1)～a3)中任一种：
a1)SEQ ID NO.4；
a2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个氨基酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列；
a3)与SEQ ID NO.4具有99％、98％、97％、96％、95％、94％或93％的同源性且与SEQ ID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列。
优选地，所述SP6RARS抑制剂包含抑制SP6RARS活性的物质、降解SP6RARS的物质、降低SP6RARS表达水平的物质中的至少一种。
优选地，所述降低SP6RARS表达水平的物质包含靶向SP6RARS的siRNA、dsRNA、miRNA、核酶、shRNA中的至少一种。
优选地，所述SP6RARS抑制剂包含靶向SP6RARS的dsRNA。
优选地，所述靶向SP6RARS的dsRNA包含由SEQ ID.NO.7所示的核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸序列组成的双链RNA。
优选地，所述试剂用于e1)～e6)中任一项：
e1)抑制蜚蠊目昆虫表皮发育；
e2)制备抑制蜚蠊目昆虫表皮发育的产品；
e3)防治蜚蠊目昆虫；
e4)制备防治蜚蠊目昆虫的产品；
e5)降低蜚蠊目昆虫存活率；
e6)制备降低蜚蠊目昆虫存活率的产品。
优选地，所述蜚蠊目昆虫包含黑胸大蠊、美洲大蠊、澳洲大蠊、德国小蠊、日本大蠊中的至少一种；进一步优选地，所述蜚蠊目昆虫为美洲大蠊。
本发明的第七个方面，提供一种方法，包含：降低蜚蠊目昆虫中SP6RARS的表达量和/或活性的步骤，所述SP6RARS的氨基酸序列包含a1)～a3)中任一种：
a1)SEQ ID NO.4；
a2)将SEQ ID NO.4经过一个或几个氨基酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列；
a3)与SEQ ID NO.4具有99％、98％、97％、96％、95％、94％或93％的同源性且与SEQ ID NO.4所示的蛋白具有相同功能的氨基酸序列；
所述方法为f1)～f3)中任一种：
f1)抑制蜚蠊目昆虫表皮发育的方法；
f2)防治蜚蠊目昆虫的方法；
f3)降低蜚蠊目昆虫存活率的方法。
优选地，所述降低蜚蠊目昆虫中SP6RARS的表达量和/或活性的步骤是将SP6RARS抑制剂导入蜚蠊目昆虫体内。
优选地，所述SP6RARS抑制剂包含抑制SP6RARS活性的物质、降解SP6RAR的物质、降低SP6RARS表达水平的物质中的至少一种。
优选地，所述降低SP6RARS表达水平的物质包含靶向SP6RARS的siRNA、dsRNA、miRNA、核酶、shRNA中的至少一种。
优选地，所述SP6RARS抑制剂包含靶向SP6RARS的dsRNA。
优选地，所述靶向SP6RARS的dsRNA包含由SEQ ID.NO.7所示的核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸序列组成的双链RNA。
优选地，所述导入的方式为注射。
优选地，所述蜚蠊目昆虫包含黑胸大蠊、美洲大蠊、澳洲大蠊、德国小蠊、日本大蠊中的至少一种；进一步优选地，所述蜚蠊目昆虫包含美洲大蠊。
本发明的有益效果是：
本发明首次公开了SP6RARS以及与SP6RARS相关的生物材料，SP6RARS以及与SP6RARS相关的生物材料与蜚蠊目昆虫表皮发育、存活率显著相关，通过降低蜚蠊目昆虫中SP6RARS的表达量和/或活性可以导致蜚蠊目昆虫表皮发育受阻，导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致蜚蠊目昆虫死亡，达到防治蜚蠊目昆虫的效果，并且在防治过程中，不会产生抗药性、对人畜没有危害，且对环境没有污染。
附图说明
图1是实施例1中PCR产物在pEASY-T3 Cloning vector中的克隆位点的示意图。
图2是实施例2中dsSP6RARS对美洲大蠊SP6RARS基因表达的影响图：其中，**表示P<0.01。
图3是实施例2中dsSP6RARS对美洲大蠊发育影响的统计图。
图4是实施例2中dsSP6RARS对美洲大蠊表型影响的直观图。
图5是实施例2中dsSP6RARS对美洲大蠊表皮结构影响的直观图。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。本实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，为从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1美洲大蠊SP6RARS序列及其dsRNA的获得
1、美洲大蠊SP6RARS基因序列获得
基于美洲大蠊基因组数据库，采用生物信息学方法对美洲大蠊SP6RARS基因的序列进行搜索，经过序列分析及比对后，共获得1条美洲大蠊SP6RARS基因的序列。根据获得的基因片段，并采用Primer premier 5.0软件设计上游引物和下游引物，由上海生工生物工程股份有限公司合成：其中，上游引物为：ATGTTGAACACGTATCCCCCAGAAG(SEQ ID NO.1)；下游引物为：TTACGTGCGCAGTTCCTTGTTTGTC(SEQ ID NO.2)。
提取美洲大蠊成虫(由华南师范大学昆虫科学研究所饲养)总RNA，采用M-MLV反转录酶(TaKaRa)将所提RNA反转录成第一链cDNA。以此作为模板，结合设计上下游引物，通过PCR扩增获得SP6RARS基因全长编码序列(SEQ ID NO.3)，通过Gel Extraction Kit(Omega)将PCR产物进行纯化(SEQ ID NO.3)，将纯化后的产物克隆到pEASY-T3 Cloning vector(北京全式金生物技术有限公司)的酶切位点：EcoRⅠ、SpeⅠ之间(具体如图1所示)，得到的重组质粒转入感受态细胞中，扩大菌液培养，采用Plasmid Mini Kit(Omega Biotek)提取质粒并送往上海生工生物工程股份有限公司进行测序，得到含SP6RARS的重组质粒。其中，SP6RARS基因序列为：ATGTTGAACACGTATCCCCCAGAAGCATTTGCTGCCTATCATGGACATGGTGACATTCTAAGACTGCTTTTACCTCTGTTTTCAAATGCAAATATCAAAGATGACACTGGAAAAACACCTCTTGATCATGCCTCTTTCAAAGGACACCGCCAATGTGTTCAGTTGCTACTGCGTTGTGGGGCATTAGTCAGTGTCCATGATGGAGTCACGCAGCGAACTCCAGTTCATGCAGCTGTAGCAAATGGCCATAAAGAATGTTTGCTACTGCTGCTAGAGAACACAGAAGAGAGCCAAGTTGTCAACAGCGTGGACTATAGGAAAAGAACTCCCCTGATGCTTGGAGTGGCAGCAGGACACAGTGACTGTGTAGTCATATTGCTCAAATATGGGGCAGATACGAATCTTGTGGATGAAGACCAGCATCCTGCTCTTTTCAGAGCTGTTGTGCATGGCCATCAGGAGAGTGTGGAGCTGTTGGTAAGCAGAGGTGCAAGCCCTACATTCCAGGACCAAAATGGGAAATCAGCCCTGCACCTAGCAGCTGCATGTGGACATCTGTCCTGTCTCGTGACACTTCTGGGAAACACAAGTGAAGATGTGAGCCAGCTACAGGACAGTCAGGGTTGCACAGTGCTGCACTGGGCATGTTACAATGGTAATGCTAACTGTGTGGAATTTTTGCTGGAACAGAAACATGTTAGGAGTATGGAGGGAAACCCTTTCTCGCCTGTTCACTGCTCTGTCTTCCAAGGTAGTGAGCAATGCTTGGAGTTGCTCATCACGCACTTTGGGTCATCAATTGTGAATTTGCGGGACCATCGTGGCCGTACACCACTGCATGTTGCTGCATTTCACAATAACCTGGACTGCATGCAGCTTCTTCTGAACCATGGGTCCAGTGTGGAGGCAAGAGACATCACTGGCAAGACTCCACTGCTATTGGCGGCCTACAGTGGACAGTGTAATGCTATTGAGTTGCTTTTGGACTGGAAGGCAAACATCAAGGCATGCGATCTCCAAAGCAACACAGCCCTTCATCATGCTTGCCAACGTAAGCACAATCGCTCTGCTCTCCTCCTCCTTGAGAGGACAGATGATGTGGAGGTTGTGAACATGACAAACAAGGAACTGCGCACGTAA(SEQ ID NO.3)；氨基酸序列为：MLNTYPPEAFAAYHGHGDILRLLLPLFSNANIKDDTGKTPLDHASFKGHRQCVQLLLRCGALVSVHDGVTQRTPVHAAVANGHKECLLLLLENTEESQVVNSVDYRKRTPLMLGVAAGHSDCVVILLKYGADTNLVDEDQHPALFRAVVHGHQESVELLVSRGASPTFQDQNGKSALHLAAACGHLSCLVTLLGNTSEDVSQLQDSQGCTVLHWACYNGNANCVEFLLEQKHVRSMEGNPFSPVHCSVFQGSEQCLELLITHFGSSIVNLRDHRGRTPLHVAAFHNNLDCMQLLLNHGSSVEARDITGKTPLLLAAYSGQCNAIELLLDWKANIKACDLQSNTALHHACQRKHNRSALLLLERTDDVEVVNMTNKELRT(SEQ ID NO.4)。
2、美洲大蠊SP6RARS的dsRNA合成
1)美洲大蠊SP6RARS的dsRNA引物设计
基于1中所得到美洲大蠊SP6RAR的基因序列(SEQ ID NO.3)，采用Primer premier5.0软件设计dsRNA引物，其序列分别为SEQ ID NO.5(taatacgactcactatagggGAGGTGCAAGCCCTAC)和SEQ ID NO.6(taatacgactcactatagggTTGATGTTTGCCTTCCAG)。然后送往上海生工生物工程股份有限公司合成。
2)美洲大蠊SP6RARS dsRNA的合成
以1中得到的含SP6RARS的重组质粒为模板，SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6为上下游引物，进行PCR扩增。将扩增的PCR产物进行纯化后按照T7 RiboMAXTMExpress RNAi System(Promega)试剂盒体外转录合成dsSP6RARS(合成dsSP6RARS的核酸分子的序列为GAGGTGCAAGCCCTACATTCCAGGACCAAAATGGGAAATCAGCCCTGCACCTAGCAGCTGCATGTGGACATCTGTCCTGTCTCGTGACACTTCTGGGAAACACAAGTGAAGATGTGAGCCAGCTACAGGACAGTCAGGGTTGCACAGTGCTGCACTGGGCATGTTACAATGGTAATGCTAACTGTGTGGAATTTTTGCTGGAACAGAAACATGTTAGGAGTATGGAGGGAAACCCTTTCTCGCCTGTTCACTGCTCTGTCTTCCAAGGTAGTGAGCAATGCTTGGAGTTGCTCATCACGCACTTTGGGTCATCAATTGTGAATTTGCGGGACCATCGTGGCCGTACACCACTGCATGTTGCTGCATTTCACAATAACCTGGACTGCATGCAGCTTCTTCTGAACCATGGGTCCAGTGTGGAGGCAAGAGACATCACTGGCAAGACTCCACTGCTATTGGCGGCCTACAGTGGACAGTGTAATGCTATTGAGTTGCTTTTGGACTGGAAGGCAAACATCAA，SEQ ID NO.7)。使用NanoDrop 2000(Thermo scientific)进行定量，使其终浓度达到2.0μg/μL。保存于-20℃低温冰箱备用。
实施例2美洲大蠊SP6RARS dsRNA的应用
1、美洲大蠊SP6RARS基因特异性dsRNA注射
将5μL(10μg)由SEQ ID NO.7所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的dsRNA(dsSP6RARS)用10μL规格微量注射器注射到美洲大蠊9龄第3天若虫体内，共注射48只(实验组)。注射相同体积和浓度的无法靶向美洲大蠊任何内源基因的dsCK(合成dsCK的核酸分子的序列为GAAAGCTCGGTACCACGCATGCTGCAGACGCGTTACGTATCGGATCCAGAATTCGTGATATCTGAATTCGTCGACAAGCTTCTCGAGCCTAGGCTAGCTCTAGA CCACACGTGTGGGGGCCCGAGCTCGCGGCCGCTGTATTC，SEQ ID NO.8)至对照组体内，共注射48只。将注射后美洲大蠊置于30℃恒温生化培养箱中饲养。
2、美洲大蠊SP6RARS基因沉默效率检测
注射dsRNA 24h后，取幼虫整虫进行RNA提取，并反转录成第一链cDNA，Real-timePCR检测目的基因(SP6RARS)和管家基因(Actin)的相对表达量，以计算目的基因的沉默效率：反应体系如下：SYBR Green mixture 10μL，上下游引物(10μM)各0.8μL，10倍稀释的上述第一链cDNA模板2μL，去离子水6.4μL。反应程序：95℃预变性1min，95℃变性15s；60℃退火及延伸31s，循环40次，60℃进行荧光检测，DNA熔解分析60～95℃，每步上升1℃；引物序列具体如下：SP6RARS-F：CCAAGTTGTCAACAGCGTGG(SEQ ID NO.9)；SP6RARS-R：GGAATGTAGGGCTTGCACCT(SEQ ID NO.10)；Actin-F:CATCCTGCGTTTGGATCTGG(SEQ IDNO.11)；Actin-R:TTTCTCGTTCGGCAGTGGTG(SEQ ID NO.12)。设置4个生物学重复，每个生物学重复取3头幼虫。结果如图2所示：与对照组(注射dsCK)比较，实验组(注射dsSP6RARS)后，SP6RAR基因的表达显著降低。
3、注射dsRNA后对美洲大蠊生长发育的影响
9龄第3天若虫注射dsRNA，14天后统计美洲大蠊表型率，如图3所示：对照组(注射dsCK)的若虫(30只)中90％(27只)可以正常发育到成虫(正常)，6.7％(2只)羽化时无法蜕皮致死(若虫死亡)，3.3％(1只)羽化后翅无法展开致死(成虫翅卷曲)；而实验组(注射dsSP6RARS)若虫(30只)的正常羽化率仅达到6.7％(2只)，其余90％(27只)羽化时无法蜕皮致死，3.3％(1只)羽化后翅无法展开致死。进一步观察表型如图4所示，对照组的美洲大蠊有27只可以正常发育到成虫，而实验组的美洲大蠊有27只则无法羽化为成虫并且死亡。
4、注射dsRNA后对美洲大蠊表皮结构的影响
在注射dsRNA 10天后，解剖对照组和实验组表皮(每个处理组6个生物学重复)，过夜固定后，制备石蜡切片并进行苏木精/伊红染色。观察结果，其中一个样本的结果如图5显示：与注射dsCK的对照组比较，注射dsSP6RARS的美洲大蠊表皮结构发生明显改变，即新表皮的产生受到阻碍，变薄导致若虫无法蜕皮羽化为成虫。
综上所述，通过RNA干扰技术靶向沉默SP6RARS基因能够有效抑制SP6RARS基因的表达，进而导致美洲大蠊表皮发育受阻，导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致美洲大蠊死亡；即抑制SP6RARS表达或其活性可以导致美洲大蠊表皮发育受阻，导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致美洲大蠊死亡，达到防治美洲大蠊的效果。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 华南师范大学
中国农业科学院深圳农业基因组研究
<120> SP6RARS及其在防治蜚蠊目昆虫中的应用
<130>
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atgttgaaca cgtatccccc agaag 25
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ttacgtgcgc agttccttgt ttgtc 25
<210> 3
<211> 1140
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atgttgaaca cgtatccccc agaagcattt gctgcctatc atggacatgg tgacattcta 60
agactgcttt tacctctgtt ttcaaatgca aatatcaaag atgacactgg aaaaacacct 120
cttgatcatg cctctttcaa aggacaccgc caatgtgttc agttgctact gcgttgtggg 180
gcattagtca gtgtccatga tggagtcacg cagcgaactc cagttcatgc agctgtagca 240
aatggccata aagaatgttt gctactgctg ctagagaaca cagaagagag ccaagttgtc 300
aacagcgtgg actataggaa aagaactccc ctgatgcttg gagtggcagc aggacacagt 360
gactgtgtag tcatattgct caaatatggg gcagatacga atcttgtgga tgaagaccag 420
catcctgctc ttttcagagc tgttgtgcat ggccatcagg agagtgtgga gctgttggta 480
agcagaggtg caagccctac attccaggac caaaatggga aatcagccct gcacctagca 540
gctgcatgtg gacatctgtc ctgtctcgtg acacttctgg gaaacacaag tgaagatgtg 600
agccagctac aggacagtca gggttgcaca gtgctgcact gggcatgtta caatggtaat 660
gctaactgtg tggaattttt gctggaacag aaacatgtta ggagtatgga gggaaaccct 720
ttctcgcctg ttcactgctc tgtcttccaa ggtagtgagc aatgcttgga gttgctcatc 780
acgcactttg ggtcatcaat tgtgaatttg cgggaccatc gtggccgtac accactgcat 840
gttgctgcat ttcacaataa cctggactgc atgcagcttc ttctgaacca tgggtccagt 900
gtggaggcaa gagacatcac tggcaagact ccactgctat tggcggccta cagtggacag 960
tgtaatgcta ttgagttgct tttggactgg aaggcaaaca tcaaggcatg cgatctccaa 1020
agcaacacag cccttcatca tgcttgccaa cgtaagcaca atcgctctgc tctcctcctc 1080
cttgagagga cagatgatgt ggaggttgtg aacatgacaa acaaggaact gcgcacgtaa 1140
<210> 4
<211> 379
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Met Leu Asn Thr Tyr Pro Pro Glu Ala Phe Ala Ala Tyr His Gly His
1 5 10 15
Gly Asp Ile Leu Arg Leu Leu Leu Pro Leu Phe Ser Asn Ala Asn Ile
20 25 30
Lys Asp Asp Thr Gly Lys Thr Pro Leu Asp His Ala Ser Phe Lys Gly
35 40 45
His Arg Gln Cys Val Gln Leu Leu Leu Arg Cys Gly Ala Leu Val Ser
50 55 60
Val His Asp Gly Val Thr Gln Arg Thr Pro Val His Ala Ala Val Ala
65 70 75 80
Asn Gly His Lys Glu Cys Leu Leu Leu Leu Leu Glu Asn Thr Glu Glu
85 90 95
Ser Gln Val Val Asn Ser Val Asp Tyr Arg Lys Arg Thr Pro Leu Met
100 105 110
Leu Gly Val Ala Ala Gly His Ser Asp Cys Val Val Ile Leu Leu Lys
115 120 125
Tyr Gly Ala Asp Thr Asn Leu Val Asp Glu Asp Gln His Pro Ala Leu
130 135 140
Phe Arg Ala Val Val His Gly His Gln Glu Ser Val Glu Leu Leu Val
145 150 155 160
Ser Arg Gly Ala Ser Pro Thr Phe Gln Asp Gln Asn Gly Lys Ser Ala
165 170 175
Leu His Leu Ala Ala Ala Cys Gly His Leu Ser Cys Leu Val Thr Leu
180 185 190
Leu Gly Asn Thr Ser Glu Asp Val Ser Gln Leu Gln Asp Ser Gln Gly
195 200 205
Cys Thr Val Leu His Trp Ala Cys Tyr Asn Gly Asn Ala Asn Cys Val
210 215 220
Glu Phe Leu Leu Glu Gln Lys His Val Arg Ser Met Glu Gly Asn Pro
225 230 235 240
Phe Ser Pro Val His Cys Ser Val Phe Gln Gly Ser Glu Gln Cys Leu
245 250 255
Glu Leu Leu Ile Thr His Phe Gly Ser Ser Ile Val Asn Leu Arg Asp
260 265 270
His Arg Gly Arg Thr Pro Leu His Val Ala Ala Phe His Asn Asn Leu
275 280 285
Asp Cys Met Gln Leu Leu Leu Asn His Gly Ser Ser Val Glu Ala Arg
290 295 300
Asp Ile Thr Gly Lys Thr Pro Leu Leu Leu Ala Ala Tyr Ser Gly Gln
305 310 315 320
Cys Asn Ala Ile Glu Leu Leu Leu Asp Trp Lys Ala Asn Ile Lys Ala
325 330 335
Cys Asp Leu Gln Ser Asn Thr Ala Leu His His Ala Cys Gln Arg Lys
340 345 350
His Asn Arg Ser Ala Leu Leu Leu Leu Glu Arg Thr Asp Asp Val Glu
355 360 365
Val Val Asn Met Thr Asn Lys Glu Leu Arg Thr
370 375
<210> 5
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
taatacgact cactataggg gaggtgcaag ccctac 36
<210> 6
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
taatacgact cactataggg ttgatgtttg ccttccag 38
<210> 7
<211> 520
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
gaggtgcaag ccctacattc caggaccaaa atgggaaatc agccctgcac ctagcagctg 60
catgtggaca tctgtcctgt ctcgtgacac ttctgggaaa cacaagtgaa gatgtgagcc 120
agctacagga cagtcagggt tgcacagtgc tgcactgggc atgttacaat ggtaatgcta 180
actgtgtgga atttttgctg gaacagaaac atgttaggag tatggaggga aaccctttct 240
cgcctgttca ctgctctgtc ttccaaggta gtgagcaatg cttggagttg ctcatcacgc 300
actttgggtc atcaattgtg aatttgcggg accatcgtgg ccgtacacca ctgcatgttg 360
ctgcatttca caataacctg gactgcatgc agcttcttct gaaccatggg tccagtgtgg 420
aggcaagaga catcactggc aagactccac tgctattggc ggcctacagt ggacagtgta 480
atgctattga gttgcttttg gactggaagg caaacatcaa 520
<210> 8
<211> 143
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
gaaagctcgg taccacgcat gctgcagacg cgttacgtat cggatccaga attcgtgata 60
tctgaattcg tcgacaagct tctcgagcct aggctagctc tagaccacac gtgtgggggc 120
ccgagctcgc ggccgctgta ttc 143
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ccaagttgtc aacagcgtgg 20
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
ggaatgtagg gcttgcacct 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
catcctgcgt ttggatctgg 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
tttctcgttc ggcagtggtg 20
Claims (9)
1.SP6RARS，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
2.与权利要求1所述的SP6RARS相关的生物材料，所述生物材料包含b1)～b8)中任一种：
b1)编码权利要求1所述的SP6RARS的核酸分子；
b2)包含b1)所述核酸分子的表达盒；
b3)包含b1)所述核酸分子的载体；
b4)包含b2)所述表达盒的载体；
b5)包含b1) 所述核酸分子的转基因细胞系；
b6) 包含b2)所述表达盒的转基因细胞系；
b7)包含b3)所述载体的转基因细胞系；
b8)包含b4）所述载体的转基因细胞系；
所述转基因细胞系不包含繁殖材料。
3.权利要求1所述的SP6RARS或权利要求2所述的生物材料在c1)～c6)中任一项中的应用：
c1)抑制蜚蠊目昆虫表皮发育；
c2)制备抑制蜚蠊目昆虫表皮发育的产品；
c3)防治蜚蠊目昆虫；
c4)制备防治蜚蠊目昆虫的产品；
c5)降低蜚蠊目昆虫存活率；
c6)制备降低蜚蠊目昆虫存活率的产品；
所述蜚蠊目昆虫为美洲大蠊。
4.一种dsRNA，所述dsRNA包含由SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸序列组成的双链RNA。
5.与权利要求4所述的dsRNA相关的生物材料，所述生物材料包含d1)～d8)中任一种：
d1)编码权利要求4所述的dsRNA的核酸分子；
d2)包含d1)所述核酸分子的表达盒；
d3)包含d1)所述核酸分子的载体；
d4)包含d2)所述表达盒的载体；
d5)包含d1) 所述核酸分子的转基因细胞系；
d6) 包含d2)所述表达盒的转基因细胞系；
d7)包含d3)所述载体的转基因细胞系；
d8)包含d4)所述载体的转基因细胞系；
所述转基因细胞系不包含繁殖材料。
6.一种试剂，包含：SP6RARS抑制剂；所述SP6RARS抑制剂包含靶向SP6RARS的dsRNA；
所述靶向SP6RARS的dsRNA包含由SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列和其反向互补序列所示的核苷酸序列组成的双链RNA。
7.根据权利要求6所述的试剂，其特征在于：
所述试剂用于e1)～e3)中任一项：
e1) 抑制蜚蠊目昆虫表皮发育；
e2) 防治蜚蠊目昆虫；
e3) 降低蜚蠊目昆虫存活率；
所述蜚蠊目昆虫为美洲大蠊。
8.一种方法，包含：降低蜚蠊目昆虫中权利要求1所述的SP6RARS的表达量和/或活性的步骤，
所述方法为f1)～f3)中任一种：
f1) 抑制蜚蠊目昆虫表皮发育的方法；
f2) 防治蜚蠊目昆虫的方法；
f3) 降低蜚蠊目昆虫存活率的方法；
所述蜚蠊目昆虫为美洲大蠊。
9.根据权利要求8所述的方法，所述降低蜚蠊目昆虫中SP6RARS的表达量和/或活性的步骤是将SP6RARS抑制剂导入蜚蠊目昆虫体内。
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