CN114854761B - AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用 - Google Patents

AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用；本发明以AtSpook基因为靶标，设计dsRNA并注射入蜂巢小甲虫体内，观察对蜂巢小甲虫生长发育的影响，结果发现，注射AtSpook dsRNA后，蜂巢小甲虫表皮结构发生明显改变，旧表皮由于无法降解而增厚，且新表皮的产生也受到阻碍；表皮发育受阻导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致蜂巢小甲虫死亡，死亡率可达到81％，这在影响昆虫防治方面有重要的作用。本发明也是首次提出可以将AtSpook基因作为防治蜂巢小甲虫的靶点，可以用于防治蜂巢小甲虫，例如防治蜂巢小甲虫的制剂，在蜂巢小甲虫防治过程中具有重要作用。

Description

AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用。
背景技术
蜂巢小甲虫(Aethina tumida，Small hive beetle，SHB)，又名蜂箱小甲虫或蜂房小甲虫，是一种完全变态(发育历程：卵期、幼虫期、蛹期和成虫期)的鞘翅目昆虫且寄生在蜂群内的重要害虫，原分布于非洲南部，随后扩散至澳洲、美洲、亚洲等各州多个国家，在世界各地均引起不同程度的蜂群危害和经济损失，被世界动物卫生组织(OIE)列为蜜蜂六大重要病原体之一。蜂巢小甲虫幼虫和成虫均会对蜜蜂造成严重的危害，它们取食花粉、蜂蜜和蜜蜂幼虫，因而会导致蜜蜂幼虫死亡、蜂蜜发酵和巢脾损毁，常造成整个蜂巢坍塌、蜂群弃巢飞逃。
目前，化学防治是蜂巢小甲虫治理的主要手段，但大面积地使用化学杀虫剂导致抗药性的产生、对蜜蜂的危害以及生态环境的破坏等，不利于蜂巢小甲虫防治的可持续治理。因此，研发新型绿色分子靶标对于防治蜂巢小甲虫是迫在眉睫的。
RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)分子引起的特异性转录后基因沉默的现象，是研究基因功能的有力工具，同时在害虫防治方面也具有极大潜力。基于RNAi技术的害虫防治手段具有专一性，且对非靶标生物安全。蜂巢小甲虫属于鞘翅目昆虫具有高效的RNAi机制，将dsRNA注射蜂巢小甲虫卵、幼虫、蛹或成虫均可以抑制目的基因的表达。因此，筛选出影响蜂巢小甲虫生长发育的关键靶标，对于加速RNAi技术在保护蜜蜂、防治蜂巢小甲虫具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。本发明人以AtSpook基因为靶标，设计dsRNA，将其注入蜂巢小甲虫体内，发现明显抑制蜂巢小甲虫的变态发育，死亡率显著增加，表皮发育受阻。表明AtSpook是影响蜂巢小甲虫的重要靶标基因。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一方面，提供AtSpook基因在(a1)～(a10)任一项中的应用，所述AtSpook基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
(a1)抑制昆虫变态发育；
(a2)制备抑制昆虫变态发育的产品；
(a3)抑制昆虫生长；
(a4)制备抑制昆虫生长的产品；
(a5)降低昆虫存活率；
(a6)制备降低昆虫成活率的产品；
(a7)抑制表皮发育；
(a8)制备抑制表皮发育的产品；
(a9)防治有害昆虫；
(a10)制备防治有害昆虫的产品。
在本发明的一些实施方式中，所述有害昆虫为鞘翅目昆虫。
在本发明的一些实施方式中，所述鞘翅目昆虫为蜂巢小甲虫。
本发明的第二方面，提供AtSpook基因作为制备特异性干扰有害昆虫基因表达或抑制有害昆虫生长的干扰分子的抑制靶标或沉默靶标的应用，所述AtSpook基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
在本发明的一些实施方式中，所述干扰分子是AtSpook基因或其转录本为抑制靶标或沉默靶标的dsRNA、反义核酸、小干扰RNA、微小RNA的构建物，或者能表达或形成所述dsRNA、反义核酸、小干扰RNA、微小RNA的构建物。
在本发明的一些实施方式中，所述有害昆虫为鞘翅目昆虫。
在本发明的一些实施方式中，所述鞘翅目昆虫为蜂巢小甲虫。
本发明的第三方面，提供一种防治有害昆虫的方法，所述方法包括：下调有害昆虫体内AtSpook基因的表达或活性；其中，所述AtSpook基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
在本发明的一些实施方式中，所述下调有害昆虫体内AtSpook基因的表达或活性的方法包括：在有害昆虫的基因组中敲除或沉默AtSpook基因；或将下调AtSpook基因转录、多肽表达或多肽活性的下调剂转入有害昆虫体内。
在本发明的一些实施方式中，所述有害昆虫为鞘翅目昆虫。
在本发明的一些实施方式中，所述鞘翅目昆虫为蜂巢小甲虫。
本发明的第四方面，提供一种dsRNA，所述dsRNA由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列转录而成。
在本发明的一些实施方式中，合成所述dsRNA的引物序列如SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4所示。
本发明的第五方面，提供本发明第四方面所述的dsRNA的相关生物材料，所述相关生物材料为下述(A1)～(A8)中的任一种：
(A1)编码所述dsRNA的核酸分子；
(A2)含有(A1)所述核酸分子的表达盒；
(A3)含有(A1)所述核酸分子的重组载体；
(A4)含有(A2)所述表达盒的重组载体；
(A5)含有(A1)所述核酸分子的重组微生物；
(A6)含有(A2)所述表达盒的重组微生物；
(A7)含有(A3)所述重组载体的重组微生物；
(A8)含有(A4)所述重组载体的重组微生物。
本发明的第六方面，提供本发明第四方面所述的dsRNA或第五方面所述的相关生物材料在(a1)～(a10)任一项中的应用，
(a1)抑制昆虫变态发育；
(a2)制备抑制昆虫变态发育的产品；
(a3)抑制昆虫生长；
(a4)制备抑制昆虫生长的产品；
(a5)降低昆虫存活率；
(a6)制备降低昆虫成活率的产品；
(a7)抑制表皮发育；
(a8)制备抑制表皮发育的产品；
(a9)防治有害昆虫；
(a10)制备防治有害昆虫的产品。
在本发明的一些实施方式中，所述有害昆虫为鞘翅目昆虫。
在本发明的一些实施方式中，所述鞘翅目昆虫为蜂巢小甲虫。
本发明的第七方面，提供一种产品，包括本发明第四方面所述的dsRNA或第五方面所述的相关生物材料。
在本发明的一些实施方式在，所述产品的功能为(a1)～(a10)任一项，
(a1)抑制昆虫变态发育；
(a2)制备抑制昆虫变态发育的产品；
(a3)抑制昆虫生长；
(a4)制备抑制昆虫生长的产品；
(a5)降低昆虫存活率；
(a6)制备降低昆虫成活率的产品；
(a7)抑制表皮发育；
(a8)制备抑制表皮发育的产品；
(a9)防治有害昆虫；
(a10)制备防治有害昆虫的产品。
在本发明的一些实施方式中，所述有害昆虫为鞘翅目昆虫。
在本发明的一些实施方式中，所述鞘翅目昆虫为蜂巢小甲虫。
在本发明的一些实施方式中，所述产品为喷洒式制剂或饵剂。
本发明的有益效果是：
本发明以AtSpook基因为靶标，设计dsRNA并注射入蜂巢小甲虫体内，观察对蜂巢小甲虫生长发育的影响，结果发现，注射AtSpook dsRNA后，蜂巢小甲虫表皮结构发生明显改变，旧表皮由于无法降解而增厚，且新表皮的产生也受到阻碍；表皮发育受阻导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致蜂巢小甲虫死亡，死亡率可达到81％，这在影响昆虫防治方面有重要的作用。本发明也是首次提出可以将AtSpook基因作为防治蜂巢小甲虫的靶点，可以用于防治蜂巢小甲虫，例如防治蜂巢小甲虫的制剂，在蜂巢小甲虫防治过程中具有重要作用。
附图说明
图1是dsAtSpook对蜂巢小甲虫AtSpook基因表达的影响图；其中，**表示P<0.01。
图2是dsAtSpook对蜂巢小甲虫化蛹率的影响图。
图3是dsAtSpook对蜂巢小甲虫表型的影响图。
图4是dsAtSpook对蜂巢小甲虫表皮结构的影响图。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例1蜂巢小甲虫AtSpook序列及其dsRNA的获得
1、蜂巢小甲虫AtSpook基因序列获得
基于蜂巢小甲虫转录组数据库，采用生物信息学方法对蜂巢小甲虫AtSpook基因的序列进行搜索，经过序列分析及比对后，共获得1条蜂巢小甲虫AtSpook基因的序列。根据上述基因片段，并采用Primer premier 5.0软件设计上游引物和下游引物，由上海生工生物工程股份有限公司合成。
提取蜂巢小甲虫幼虫(由广东省科学院动物研究所实验室饲养)总RNA，采用M-MLV反转录酶(TaKaRa)将所提RNA反转录成第一链cDNA。以此作为模板，结合设计上下游引物，通过PCR扩增获得AtSpook基因全长编码序列，通过Gel Extraction Kit(Omega)将PCR产物进行纯化，将纯化后的产物克隆到pEASY-T3 Cloning vector(全式金公司)中，转入感受态细胞，扩大菌液培养，采用Plasmid Mini Kit(Omega)提取质粒并送往上海生工生物工程股份有限公司进行测序。结果获得蜂巢小甲虫Spook基因的全长开放阅读框序列，其序列为：ATGCTTGCGCTAGTCGCGTTGTGTATAGTGCTCCTGGTTTGGTGGTTCAGCACCGCCAACCGCAACTCGAAATCAGCGTGCAGCACTGCACCGGGACCGAAACCTTGGCCCTTGATTGGATCACTGCATCTGCTCGGCGCGTACGAGACACCCTTCCAGGCGTTCACGGCCCTCAGCAAGATTTACGGTGACATCTTCAGCATCAATCTGGGCAACACTCCATGTGTGGTAGTCAACAATTTTAACCTTATCAAGGAAGTGCTCATTACGAAAGGCAGTGACTTCGGAGGCCGACCCGATTTTGTGCGATTTCATAAGCTCTTCGGTGGCGACAGGAATAACTCTCTCGCCCTGTGCGACTGGTCCTCATTGCAGAAGACAAGACGGAGCATCGCGAGAACGTACTGCTCGCCGCGGTTTACGTCACTGCAGTATGACACCGTTTCACGCGTTGGTCTCGACGAGATGAACGTTTTCATTCATGAACTGCAAAAATTGCCGATGGGACGGCCATGCGACCTGAAACCAGTCGTGATGGCCGCCTGCGCCAACATGTTCACGCAGTACATGTGCTCCACCAGTTTCTCCTACGACGACAAAGAATTCCAACAGACCGTGCGATATTTCGACGAGATTTTCTGGGAGATCAACCAGGGCTACGCGGTCGATTTCCTGCCCTGGCTCCTGCCCATCTACAACAAACACATGAACAAGCTGTCCAACTGGGCGATGGAGATCCGCCAGTTCATCCTGTCCCGCATCATCGACAAGCACCGCGCCACCCTCGACTACAACTCGCCGCCGCGCGACTTCACCGACGCCCTCCTCATGCACCTGGAGGAGGACCCCAACATGAACTGGCAGCACATCATCTTCGAGCTGGAGGACTTCATCGGCGGCCACTCGGCCATCGGCAACTTGGTCATGGTGACCCTGGCCTCCGTCGTCAAGTACCCCGAGGTGCAGAAGCGCATACAAACGGAAATCGACGCCGTGACGAACGGCACGCGCATGCCCACCCTGATGGACAAGACCTCCATGCCCTACACCGAGGCCACCCTGTGGGAGACGTTGCGCAAGGCCTCCTCGCCGATAGTACCGCACGTGGCCTCCACCGACTCGGAGATCGACGGCTTTAAAATACCCAAAGGGACGATGGTGTTCATCAACAATTACGAACTGAATTTGGGCGAGCAACACTGGGAGAAGCCGGAAGAGTTCAGACCGGAGAGGTTCCTGTCGCCGGCCGGTAACGTCGTCAAGCCCGCACACTTCATACCGTTCAGCACCGGCAAGAGGACGTGCATCGGGCAACGTCTGGTCCAATGTTTCAGTTTCGTTGTCCTGACCACCCTGCTACAACAATACGACATCAGCACGAACGAAGTACCTAAGACACAGCCCGGATGCGTTGCCGTGCCCCCCGATTGTTTCAAACTGATACTGACACCTAGATCTAATCAACAGTAG(SEQ ID NO:1)。
2、蜂巢小甲虫AtSpook的dsRNA合成
1)蜂巢小甲虫AtSpook的dsRNA引物设计
基于1中所得到蜂巢小甲虫AtSpook的序列SEQ ID NO:1，采用Primer premier5.0软件设计dsRNA引物，其序列分别为SEQ ID NO:3(taatacgactcactatagggTTCGAGCTGGAGGACTTCAT)和SEQ ID NO:4(taatacgactcactatagggTTGTTGTAGCAGGGTGGTCA)，其中小写字母代表T7启动子。然后送往上海生工生物工程股份有限公司合成。
2)蜂巢小甲虫AtSpook dsRNA的合成
以1中得到的AtSpook基因质粒为模板，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4为上下游引物，进行PCR扩增。将扩增的PCR产物进行纯化后按照T7 RiboMAXTMExpress RNAi System(Promega)试剂盒体外转录合成dsAtSpook，合成dsAtSpook的核酸分子的序列为：TTCGAGCTGGAGGACTTCATCGGCGGCCACTCGGCCATCGGCAACTTGGTCATGGTGACCCTGGCCTCCGTCGTCAAGTACCCCGAGGTGCAGAAGCGCATACAAACGGAAATCGACGCCGTGACGAACGGCACGCGCATGCCCACCCTGATGGACAAGACCTCCATGCCCTACACCGAGGCCACCCTGTGGGAGACGTTGCGCAAGGCCTCCTCGCCGATAGTACCGCACGTGGCCTCCACCGACTCGGAGATCGACGGCTTTAAAATACCCAAAGGGACGATGGTGTTCATCAACAATTACGAACTGAATTTGGGCGAGCAACACTGGGAGAAGCCGGAAGAGTTCAGACCGGAGAGGTTCCTGTCGCCGGCCGGTAACGTCGTCAAGCCCGCACACTTCATACCGTTCAGCACCGGCAAGAGGACGTGCATCGGGCAACGTCTGGTCCAATGTTTCAGTTTCGTTGTCCTGACCACCCTGCTACAACAA(SEQ ID NO:2)。
使用NanoDrop 2000(Thermo scientific)进行定量，使其终浓度达到1.0μg/μL。保存于-20℃低温冰箱备用。
实施例2蜂巢小甲虫AtSpook dsRNA的应用
1、蜂巢小甲虫AtSpook基因特异性dsRNA注射
将1μL(1μg)由SEQ ID NO:2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的dsR NA(dsAtSpook)用10μL规格微量注射器注射到蜂巢小甲虫第七日龄幼虫体内，共注射42只。注射相同体积浓度的dsGFP(合成dsGFP的核酸分子的序列为GTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTTTCTCTTATGGTGTTCAATGCTTTTCAAGATACCCAGATCATATGAAACAGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAAAGAACTATATTTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACACGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATAGAATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTTGGACACAAATTGGAATACAACTATAACTCACACAATGTATACATCATGGCAGACAAACAAAAGAATGGAATCAAAGTTAACTTCAAAATTAGACACAACATTGAAGATGGAAGCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCCACACAATCTGCCC(SEQ ID NO:5))至对照组体内，共注射60只。将注射后蜂巢小甲虫置于30℃恒温生化培养箱中饲养；其中dsGFP上游引物为taatacgactcactatagggGTGGAGAGGGTGAAGG(SEQ ID NO:10)；下游引物为taatacgactcactatagggGGGCAGATTGTGTGGAC(SEQ ID NO:11)。
2、蜂巢小甲虫AtSpook基因沉默效率检测
注射dsRNA 24h后，取幼虫整虫进行RNA提取，并反转录成第一链cDNA，Real-timePCR检测目的基因(AtSpook)和管家基因(GAPDH)的相对表达量，以计算目的基因的沉默效率：反应体系如下：SYBR Green mixture 10μL，上下游引物(10μM)各0.8μL，10倍稀释的上述第一链cDNA模板2μL，去离子水6.4μL。反应程序：95℃预变性1min，95℃变性15s；60℃退火及延伸31s，循环40次，60℃进行荧光检测，DNA熔解分析60～95℃，每步上升1℃；
引物序列具体如下：
AtSpook-F：CGACCTGAAACCAGTCGTGA(SEQ ID NO:6)；
AtSpook-R：ATCGCACGGTCTGTTGGAAT(SEQ ID NO:7)；
GAPDH-F：TTCGAGATCGTGGAAGGTTTG(SEQ ID NO:8)；
GAPDH-R：CAGAGGGACCGTCGACAGTT(SEQ ID NO:9)。
设置4个生物学重复，每个生物学重复取3头幼虫。结果如图1所示：与对照组(注射dsGFP)比较，实验组(注射dsSpook)后，AtSpook基因的表达显著降低。
3、注射dsRNA后对蜂巢小甲虫生长发育的影响
第七日龄幼虫注射dsRNA，在10天后开始统计化蛹率，如图2所示：对照组(注射dsGFP)的幼虫(42只)在14后100％发育到蛹期；而实验组(注射dsAtSpook)幼虫(42只)的化蛹率仅达到19％。进一步观察表型如图3所示，对照组的蜂巢小甲虫可以正常变态并发育到蛹期，而实验组的蜂巢小甲虫有34只幼虫则无法变态发育为蛹并且死亡，死亡率达到81％。
4、注射dsRNA后对蜂巢小甲虫表皮结构的影响
在注射dsRNA 12天后，解剖对照组和实验组表皮(每个处理组6个生物学重复)，过夜固定后，制备石蜡切片并进行苏木精/伊红染色。观察结果如图4显示：与注射dsGFP的对照组比较，注射dsAtSpook的蜂巢小甲虫表皮结构发生明显改变，即旧表皮由于无法降解而增厚，且新表皮的产生也受到阻碍。
综上所述，通过RNA干扰技术靶向沉默Spook基因能够有效抑制Spook基因的表达，进而导致蜂巢小甲虫表皮发育受阻，导致其蜕皮变态发育过程无法正常进行，从而导致蜂巢小甲虫死亡。
上述具体实施方式对本发明作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东省科学院动物研究所
<120> AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用
<130>
<160> 11
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1470
<212> DNA
<213> Aethina tumida
<400> 1
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<400> 2
ttcgagctgg aggacttcat cggcggccac tcggccatcg gcaacttggt catggtgacc 60
ctggcctccg tcgtcaagta ccccgaggtg cagaagcgca tacaaacgga aatcgacgcc 120
gtgacgaacg gcacgcgcat gcccaccctg atggacaaga cctccatgcc ctacaccgag 180
gccaccctgt gggagacgtt gcgcaaggcc tcctcgccga tagtaccgca cgtggcctcc 240
accgactcgg agatcgacgg ctttaaaata cccaaaggga cgatggtgtt catcaacaat 300
tacgaactga atttgggcga gcaacactgg gagaagccgg aagagttcag accggagagg 360
ttcctgtcgc cggccggtaa cgtcgtcaag cccgcacact tcataccgtt cagcaccggc 420
aagaggacgt gcatcgggca acgtctggtc caatgtttca gtttcgttgt cctgaccacc 480
ctgctacaac aa 492
<210> 3
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
taatacgact cactataggg ttcgagctgg aggacttcat 40
<210> 4
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
taatacgact cactataggg ttgttgtagc agggtggtca 40
<210> 5
<211> 531
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gtggagaggg tgaaggtgat gcaacatacg gaaaacttac ccttaaattt atttgcacta 60
ctggaaaact acctgttcca tggccaacac ttgtcactac tttctcttat ggtgttcaat 120
gcttttcaag atacccagat catatgaaac agcatgactt tttcaagagt gccatgcccg 180
aaggttatgt acaggaaaga actatatttt tcaaagatga cgggaactac aagacacgtg 240
ctgaagtcaa gtttgaaggt gatacccttg ttaatagaat cgagttaaaa ggtattgatt 300
ttaaagaaga tggaaacatt cttggacaca aattggaata caactataac tcacacaatg 360
tatacatcat ggcagacaaa caaaagaatg gaatcaaagt taacttcaaa attagacaca 420
acattgaaga tggaagcgtt caactagcag accattatca acaaaatact ccaattggcg 480
atggccctgt ccttttacca gacaaccatt acctgtccac acaatctgcc c 531
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cgacctgaaa ccagtcgtga 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
atcgcacggt ctgttggaat 20
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
ttcgagatcg tggaaggttt g 21
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cagagggacc gtcgacagtt 20
<210> 10
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
taatacgact cactataggg gtggagaggg tgaagg 36
<210> 11
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
taatacgact cactataggg gggcagattg tgtggac 37

Claims (2)

1.AtSpook基因抑制剂在（a1）～（a10）任一项中的应用，所述AtSpook基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
（a1）抑制昆虫变态发育；
（a2）制备抑制昆虫变态发育的产品；
（a3）抑制昆虫生长；
（a4）制备抑制昆虫生长的产品；
（a5）降低昆虫存活率；
（a6）制备降低昆虫成活率的产品；
（a7）抑制表皮发育；
（a8）制备抑制表皮发育的产品；
（a9）防治有害昆虫；
（a10）制备防治有害昆虫的产品；
所述AtSpook基因抑制剂为由SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列转录而成的dsRNA或dsRNA的相关生物材料；所述相关生物材料为下述（A1）～（A8）中的任一种：
（A1）编码所述dsRNA的核酸分子；
（A2）含有（A1）所述核酸分子的表达盒；
（A3）含有（A1）所述核酸分子的重组载体；
（A4）含有（A2）所述表达盒的重组载体；
（A5）含有（A1）所述核酸分子的重组微生物；
（A6）含有（A2）所述表达盒的重组微生物；
（A7）含有（A3）所述重组载体的重组微生物；
（A8）含有（A4）所述重组载体的重组微生物；
所述昆虫为蜂巢小甲虫。
2.一种防治有害昆虫的方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求1所述应用中的dsRNA或dsRNA的相关生物材料转入有害昆虫体内；
所述有害昆虫为蜂巢小甲虫。
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GenBank.PREDICTED: Aethina tumida cytochrome P450 307a1-like (LOC109600803), mRNA.《GenBank》.2017,第1-2页. *
Toshiki Namiki等.Cytochrome P450 CYP307A1/Spook: A regulator for ecdysone synthesis in insects.《Biochemical and Biophysical Research Communications》.2005,第337卷(第1期),第367-374页. *

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