CN113519547A - AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用 - Google Patents

AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113519547A
CN113519547A CN202110758162.1A CN202110758162A CN113519547A CN 113519547 A CN113519547 A CN 113519547A CN 202110758162 A CN202110758162 A CN 202110758162A CN 113519547 A CN113519547 A CN 113519547A
Authority
CN
China
Prior art keywords
atcyp303a1
bee
parasites
dsrna
inhibitor
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110758162.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113519547B (zh
Inventor
赵红霞
武丽仙
刘芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Original Assignee
Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences filed Critical Institute of Zoology of Guangdong Academy of Sciences
Priority to CN202110758162.1A priority Critical patent/CN113519547B/zh
Publication of CN113519547A publication Critical patent/CN113519547A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113519547B publication Critical patent/CN113519547B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N57/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds
    • A01N57/10—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds
    • A01N57/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic phosphorus compounds having phosphorus-to-oxygen bonds or phosphorus-to-sulfur bonds containing heterocyclic radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用。本发明首次公开了AtCYP303A1抑制剂在如下a1)～a4)中任一种中的应用；a1)防治蜜蜂寄生虫；a2)防治蜜蜂寄生虫的产品；a3)促进蜜蜂寄生虫死亡；a4)促进蜜蜂寄生虫死亡的产品。通过将AtCYP303A1抑制剂导入蜜蜂寄生虫体内，促进蜜蜂寄生虫的死亡，并且该AtCYP303A1抑制剂对寄主蜜蜂的细胞色素P450基因AmCYP303A1无干扰，即对寄主蜜蜂无影响，从而达到防治蜜蜂寄生虫的效果。

Description

AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用。
背景技术
蜂巢小甲虫是一种寄生在蜂群内的害虫，原分布于非洲南部，随后扩散至澳洲、美洲、亚洲等各州多个国家，在世界各地均引起不同程度的蜂群危害和经济损失。蜂巢小甲虫在幼虫期和成虫期对蜜蜂造成严重的危害，它们取食花粉、蜂蜜和蜜蜂幼虫，因而会导致蜜蜂幼虫死亡、蜂蜜发酵和巢脾损毁，常造成整个蜂巢坍塌、蜂群弃巢飞逃。目前对其防治主要依靠化学防治，然而长期施用化学杀虫剂导致一系列问题，如环境污染，抗药性产生和对非靶标生物的危害等。因此，开发新型、可替代化学防治的方法变得极其紧迫。
RNA干扰(RNAi)是一种由双链RNA分子引起的特异性转录后基因沉默的现象，自2006年获得诺贝尔奖以来，RNAi技术一直跻身于科技前沿。RNAi不仅是研究基因功能的有力工具，同时在害虫防治方面也具有极大潜力。通过RNA干扰进行害虫防治具有如下特点：1)杀虫具有专一性，对非靶标生物无杀伤作用；2)RNA在自然界极易降解，无残留；3)对环境无毒无害，相对安全。因此，国内外学者将其称为第四代杀虫剂。
发明内容
本发明第一方面的目的，在于提供AtCYP303A1抑制剂的应用。
本发明第二方面的目的，在于提供一种dsRNA。
本发明第三方面的目的，在于提供编码本发明第二方面的dsRNA的核酸分子。
本发明第四方面的目的，在于提供包含本发明第三方面的核酸分子的重组载体、转基因细胞或重组菌。
本发明第五方面的目的，在于提供本发明第三方面的核酸分子或第四方面的重组载体、转基因细胞或重组菌的应用。
本发明第六方面的目的，在于提供一种产品。
本发明第七方面的目的，在于提供一种防治蜜蜂寄生虫和/或促进蜜蜂寄生虫死亡的方法。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供AtCYP303A1抑制剂在如下a1)～a4)中任一种中的应用；
a1)防治蜜蜂寄生虫；
a2)制备防治蜜蜂寄生虫的产品；
a3)促进蜜蜂寄生虫死亡；
a4)制备促进蜜蜂寄生虫死亡的产品。
优选地，所述AtCYP303A1的序列如SEQ ID NO：1所示。
优选地，所述蜜蜂寄生虫为蜂巢小甲虫。
优选地，所述AtCYP303A1抑制剂为抑制AtCYP303A1表达的试剂。
优选地，所述AtCYP303A1抑制剂为靶向AtCYP303A1的dsRNA或靶向AtCYP303A1的shRNA。
优选地，所述靶向AtCYP303A1的dsRNA为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
本发明的第二个方面，提供一种dsRNA，为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
本发明的第三个方面，提供编码本发明第二方面的dsRNA的核酸分子。
优选地，所述核酸分子的序列如SEQ ID NO：5所示。
本发明的第四个方面，提供包含本发明第三方面的核酸分子的重组载体、转基因细胞或重组菌。
优选地，所述转基因细胞非植物或动物品种。
本发明的第五个方面，提供本发明第三方面的核酸分子或第四方面的重组载体、转基因细胞或重组菌在如下a1)～a4)中任一种中的应用；
a1)防治蜜蜂寄生虫；
a2)制备防治蜜蜂寄生虫的产品；
a3)促进蜜蜂寄生虫死亡；
a4)制备促进蜜蜂寄生虫死亡的产品。
优选地，所述蜜蜂寄生虫为蜂巢小甲虫。
本发明的第六个方面，提供一种产品，其活性成分为b1)～b3)中的至少一种：
b1)本发明第二方面的dsRNA；
b2)本发明第三方面的核酸分子；
b3)本发明第四方面的重组载体、转基因细胞或重组菌。
本发明的第七个方面，提供一种防治蜜蜂寄生虫和/或促进蜜蜂寄生虫死亡的方法，将AtCYP303A1抑制剂导入蜜蜂寄生虫体内。
优选地，所述AtCYP303A1的序列如SEQ ID NO：1所示。
优选地，所述蜜蜂寄生虫为蜂巢小甲虫。
优选地，所述AtCYP303A1抑制剂为抑制AtCYP303A1表达的试剂。
优选地，所述AtCYP303A1抑制剂为靶向AtCYP303A1的dsRNA或靶向AtCYP303A1的shRNA。
优选地，所述靶向AtCYP303A1的dsRNA为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
优选地，所述导入的方式为注射。
本发明的有益效果是：
本发明首次公开了AtCYP303A1抑制剂在如下a1)～a4)中任一种中的应用；a1)防治蜜蜂寄生虫；a2)防治蜜蜂寄生虫的产品；a3)促进蜜蜂寄生虫死亡；a4)促进蜜蜂寄生虫死亡的产品。通过将AtCYP303A1抑制剂导入蜜蜂寄生虫体内，促进蜜蜂寄生虫的死亡，并且该AtCY P303A1抑制剂对寄主蜜蜂的细胞色素P450基因AmCYP303A1无干扰，即对寄主蜜蜂无影响，从而达到防治蜜蜂寄生虫的效果。
本发明提供一种dsRNA，为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA，该dsRNA可以抑制蜜蜂寄生虫细胞色素P450基因AtCYP303A1的表达，并导致蜜蜂寄生虫的死亡，而对寄主蜜蜂的细胞色素P450基因AmCYP303A1无干扰，即对寄主蜜蜂无影响，可用于防治蜜蜂寄生虫。
附图说明
图1是dsCYP303A1对蜂巢小甲虫AtCYP303A1基因表达的影响图：其中，**表示P<0.01。
图2是dsCYP303A1对蜂巢小甲虫表型的影响图。
图3是dsCYP303A1对意大利蜜蜂AmCYP303A1基因表达的影响图。
图4是dsCYP303A1对意大利蜜蜂表型的影响图。
具体实施方式
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。
应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。本实施例中所使用的材料、试剂等，如无特别说明，为从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1的序列及其dsRNA的获得
1.蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1的序列获得
基于蜂巢小甲虫转录组数据库，采用生物信息学方法对蜂巢小甲虫AtCYP303A1基因的序列进行搜索，经过序列分析及比对后，共获得1条蜂巢小甲虫AtCYP303A1基因的序列。根据上述基因片段，并采用Primer premier 5.0软件设计上游引物和下游引物，由上海生工生物工程股份有限公司合成。
提取蜂巢小甲虫幼虫(由广东省科学院动物研究所实验室饲养)总RNA，采用M-MLV反转录酶(TaKaRa)将所提RNA反转录成第一链cDNA。以此作为模板，结合设计上下游引物，通过PCR扩增获得AtCYP303A1基因全长编码序列，通过Gel Extraction Kit(Omega)将PCR产物进行纯化，将纯化后的产物克隆到pEASY-T3 Cloning vector(全式金公司)中，转入感受态细胞，扩大菌液培养，采用Plasmid Mini Kit(Omega)提取质粒并送往上海生工生物工程股份有限公司进行测序。结果获得蜂巢小甲虫细胞色素P450 303A1基因的全长开放阅读框序列，其序列为SEQ ID NO：1。
2、蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1的dsRNA合成
1)蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1的dsRNA引物设计
基于1中所得到蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1的序列SEQ ID NO：1，采用Primer premier 5.0软件设计dsRNA引物，其序列分别为SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4。然后送往上海生工生物工程股份有限公司合成。
2)蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1 dsRNA的合成
以1中得到的AtCYP303A1基因质粒为模板，SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4为上下游引物，进行PCR扩增。将扩增的PCR产物进行纯化后按照T7 RiboMAXTM Express RNAi System(Promega)试剂盒体外转录合成dsRNA(由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的)。使用NanoDrop 2000(Thermo scientific)进行定量，使其终浓度达到1.0μg/μL。保存于-20℃低温冰箱备用。
实施例2蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1 dsRNA致死小甲虫实验
1、蜂巢小甲虫AtCYP303A1基因特异性dsRNA注射
将1μL(1μg)由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的dsRNA(dsCYP303A1)用10μL规格微量注射器注射到蜂巢小甲虫第七日龄幼虫体内，共注射42只。注射相同体积浓度的dsGFP(合成dsGFP的核酸分子的序列为GTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTTTCTCTTATGGTGTTCAATGCTTTTCAAGATACCCAGATCATATGAAACAGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAAAGAACTATATTTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACACGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATAGAATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTTGGACACAAATTGGAATACAACTATAACTCACACAATGTATACATCATGGCAGACAAACAAAAGAATGGAATCAAAGTTAACTTCAAAATTAGACACAACATTGAAGATGGAAGCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCCACACAATCTGCCC，SEQ ID NO：6)至对照组体内，共注射42只。将注射后蜂巢小甲虫置于30℃恒温生化培养箱中饲养。
2、蜂巢小甲虫AtCYP303A1基因沉默效率检测
注射dsRNA 24h后，取幼虫整虫进行RNA提取，并反转录成第一链cDNA，Real-timePCR检测目的基因(AtCYP303A1)和管家基因(GAPDH)的相对表达量，以计算目的基因的沉默效率：反应体系如下：SYBR Green mixture 10μL，上下游引物(10μM)各0.8μL，10倍稀释的上述第一链cDNA 模板2μL，去离子水6.4μL。反应程序：95℃预变性1min，95℃变性15s；60℃退火及延伸31s，循环40次，60℃进行荧光检测，DNA熔解分析60～95℃，每步上升1℃；引物序列具体如下：AtCYP303A1-F：GGCAGGTTCTGAGACAACCA(SEQ ID NO：7)；AtCYP303A1-R：AGTTCGGCCTATCGTCAAGC(SEQ ID NO：8)；GAPDH-F:TTCGAGATCGTGGAAGGTTTG(SEQ ID NO：9)；GAPDH-R:CAGAGGGACCGTCGACAGTT(SEQ ID NO：10)。设置4个生物学重复，每个生物学重复取3头幼虫。结果如图1所示：与对照组(注射dsGFP)比较，实验组(注射dsCYP303A1)后，AtCYP303A1基因的表达显著降低。
3、注入dsRNA后蜂巢小甲虫表型的观察
第七日龄幼虫注射dsRNA后，对照组(注射dsGFP)的虫体(30只)3周后正常羽化出沙，且羽化后虫体状态良好；与对照组相比，实验组(注射dsCYP303A1)的虫体(30只)未出现羽化延迟的现象，但其中有26头幼虫在羽化后死亡，死亡率达到87％：26头死亡小甲虫出现两种不同的表型，具体如图2所示：一种为羽化后翅无法展开、死亡，死亡率为37％；另一种为羽化后翅发育正常，但12h内陆续死亡，死亡率为50％。
实施例3蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1 dsRNA对意大利蜜蜂幼虫发育的影响
1、蜂巢小甲虫细胞色素P450基因AtCYP303A1 dsRNA饲喂意大利蜜蜂
将2μg由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的dsRNA(dsCYP303A1)稀释到糖水中饲喂意大利蜜蜂幼虫(实验组)，共饲喂33只。相同质量的dsGFP饲喂至对照组体内，共饲喂29只。将饲喂后的意大利蜜蜂幼虫(饲养于广东省广州市海珠区新港西路105号广东省科学院动物研究所广州综合试验站实验蜂场)置于28℃恒温生化培养箱中饲养。
2、意大利蜜蜂细胞色素P450 303A1基因沉默检测
注射dsRNA 24h后，取幼虫整虫进行RNA提取，并反转录成第一链cDNA，Real-timePCR检测目的基因(AmCYP303A1)和管家基因(β-actin)的相对表达量，反应体系如下：反应体系：SYBR Green mixture 10μL，上下游引物(10μM)各0.8μL，10倍稀释的上述第一链cDNA模板2μL，去离子水6.4μL。反应程序：95℃预变性1min，95℃变性15s；60℃退火及延伸31s，循环40次，60℃进行荧光检测，DNA熔解分析60～95℃，每步上升1℃；引物序列具体如下AmCYP303A1-F：GACAAAAGAACAGGCGGCAT(SEQ ID NO：11)；AmCYP303A1-R：CGACCAAAGCCGAAATCACG(SEQ ID NO：12)；β-actin-F：TGCCAACACTGTCCTTTCTG(SEQ ID NO：13)；β-actin-R：AGAATTGACCCACCAATCCA(SEQ ID NO：14)。每组设置3个生物学重复，每个生物学重复取3头幼虫。结果如图3所示：与对照组(饲喂dsGFP)比较，实验组(饲喂dsCYP303A1)后，对AmCYP303A1基因的表达无显著影响。
3、饲喂dsRNA后意大利蜜蜂幼虫的观察
意大利蜜蜂幼虫饲喂dsRNA(dsGFP、dsCYP303A1)后，第15天观察意大利蜜蜂，结果如图4所示：饲喂不同dsRNA后，意大利蜜蜂幼虫在体长、重量及活跃度都无明显差异，也均可顺利化蛹和羽化为成虫，没有出现羽化后死亡的现象。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东省科学院动物研究所
<120> AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用
<130>
<160> 14
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1485
<212> DNA
<213> Aethina tumida
<400> 1
atgtacttgg tagtagcatt gatagcaata atcctcggac tcttggcata tttggatacg 60
cgaaaaccaa agaactttcc acccggacca aaatggttac ctctaattgg atccggattg 120
gagataatga aagagagaaa acgcgccgga catttattca aggccaccgc tgaaatggct 180
gagaaatacg gtccagtttt gggattaaag tttggcaagg ataaattggt cgttgtttat 240
ggcactgagg ccgttaagga gtttctctca tcggaggatc ttgcaggaag accgtacgat 300
gagttttaca gaatgaggac cttcaataaa aggagaggca tccttctggt ggaccaaaac 360
ttttggcaag agcaacgaag atttatgcta cgtcaattga aagaatttgg ttttggaagg 420
aagagcatgt cttctttaat agaagaagag gcggctcaca tggtggaata tttaagggaa 480
acaatccgta acaacgactc aaacattttc aatatggaaa tgattttcaa cgttccaatc 540
ctcaataccc tgtggaaaat gattgcagga acacgttacc accccgatga caaagaactt 600
ggtaaaatta tgaatattat ggcccaatta ttcgctgctg tcgatatgag tggtggattg 660
ttcagtcact tcccaatttt aaaatatatc gcaccagata tgtccggata taatttgatg 720
gtgcaattac ataaggaagt ttacgctgta attaggagag tgctggaaga acacaaagcg 780
actcacaatc cggacgaccc gagggattta atggatgttt atctgactgt tttgaatgag 840
aaagataagg gcaaaagttt ttcagaagaa cagttgatgg cagtatgttt agatatgttt 900
atggcaggtt ctgagacaac cagtaattct tgtacctttg gtattcagta tttaatattg 960
tatccggaag tccaggaaaa agcaagagaa gagatcgata gggttgttgg taagagtaga 1020
tgtgtgacgc ttgacgatag gccgaactta ccatatttag aatgtgttgt tctggaaaca 1080
ctgagaatgt tttcaggaag agtttttacc gttccacaca gagcattgag agacacgtat 1140
ttacatggat attttattcc aaaggatgtt caggtaattg caaacctcca cggatgtatg 1200
atgaagcctg aaaacgggtt caaggatccg gaagttttca tacctgaaag atacatgaag 1260
gatggaaaga tcaccatgcc tgaaacatac ttaccattcg ggatgggcaa acatagatgt 1320
atgggagaga ctttggcgag ggcgaatgtg tttttgtttt tgggaacgat gttgcagaat 1380
tttgtgttta gtacggtgcc tggaagtcct cccgacatga aaatgacaga cggtgtgacg 1440
ccggccgtaa gacactataa ggcgaagatt attcctagag tttga 1485
<210> 2
<211> 493
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 2
uuggauccgg auuggagaua augaaagaga gaaaacgcgc cggacauuua uucaaggcca 60
ccgcugaaau ggcugagaaa uacgguccag uuuuaggauu aaaguuuggc aaggauaaac 120
uagucguugu uuauggcacu gaggccguua aggaguuucu cucaucggag gaucuugcag 180
gaagaccgua cgaugaguuu uacagaauga ggaccuucaa uaaaaggaga ggcauccuuc 240
ugguggacca aaacuuuugg caagagcaac gaagauuuau gcuacgucaa uugaaagaau 300
uugguuuugg aaggaagagc augucuucuu uaauagaaga agaggcggcu cacauggugg 360
aauauuuaag ggaaacaauc cguaacaacg acucgaacau uuucaauaug gaaaugauuu 420
ucaacguucc aauccucaau acccugugga aaaugauugc aggaacacgu uaccaccccg 480
augacaaaga acu 493
<210> 3
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
taatacgact cactataggg ttggatccgg attggagata 40
<210> 4
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
taatacgact cactataggg agttctttgt catcggggtg 40
<210> 5
<211> 493
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ttggatccgg attggagata atgaaagaga gaaaacgcgc cggacattta ttcaaggcca 60
ccgctgaaat ggctgagaaa tacggtccag ttttaggatt aaagtttggc aaggataaac 120
tagtcgttgt ttatggcact gaggccgtta aggagtttct ctcatcggag gatcttgcag 180
gaagaccgta cgatgagttt tacagaatga ggaccttcaa taaaaggaga ggcatccttc 240
tggtggacca aaacttttgg caagagcaac gaagatttat gctacgtcaa ttgaaagaat 300
ttggttttgg aaggaagagc atgtcttctt taatagaaga agaggcggct cacatggtgg 360
aatatttaag ggaaacaatc cgtaacaacg actcgaacat tttcaatatg gaaatgattt 420
tcaacgttcc aatcctcaat accctgtgga aaatgattgc aggaacacgt taccaccccg 480
atgacaaaga act 493
<210> 6
<211> 531
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gtggagaggg tgaaggtgat gcaacatacg gaaaacttac ccttaaattt atttgcacta 60
ctggaaaact acctgttcca tggccaacac ttgtcactac tttctcttat ggtgttcaat 120
gcttttcaag atacccagat catatgaaac agcatgactt tttcaagagt gccatgcccg 180
aaggttatgt acaggaaaga actatatttt tcaaagatga cgggaactac aagacacgtg 240
ctgaagtcaa gtttgaaggt gatacccttg ttaatagaat cgagttaaaa ggtattgatt 300
ttaaagaaga tggaaacatt cttggacaca aattggaata caactataac tcacacaatg 360
tatacatcat ggcagacaaa caaaagaatg gaatcaaagt taacttcaaa attagacaca 420
acattgaaga tggaagcgtt caactagcag accattatca acaaaatact ccaattggcg 480
atggccctgt ccttttacca gacaaccatt acctgtccac acaatctgcc c 531
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
ggcaggttct gagacaacca 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
agttcggcct atcgtcaagc 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ttcgagatcg tggaaggttt g 21
<210> 10
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
cagagggacc gtcgacagtt 20
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gacaaaagaa caggcggcat 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
cgaccaaagc cgaaatcacg 20
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
tgccaacact gtcctttctg 20
<210> 14
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
agaattgacc caccaatcca 20

Claims (10)

1.AtCYP303A1抑制剂在如下a1)～a4)中任一种中的应用；
a1)防治蜜蜂寄生虫；
a2)制备防治蜜蜂寄生虫的产品；
a3)促进蜜蜂寄生虫死亡；
a4)制备促进蜜蜂寄生虫死亡的产品；
所述AtCYP303A1的序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：
所述蜜蜂寄生虫为蜂巢小甲虫；
优选地，所述AtCYP303A1抑制剂为抑制AtCYP303A1表达的试剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：
所述AtCYP303A1抑制剂为靶向AtCYP303A1的dsRNA或靶向AtCYP303A1的shRNA；优选地，所述靶向AtCYP303A1的dsRNA为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
4.一种dsRNA，为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
5.编码权利要求4所述的dsRNA的核酸分子。
6.包含权利要求5所述的核酸分子的重组载体、转基因细胞或重组菌。
7.b1)或b2)在如下a1)～a4)中任一种中的应用；
b1)权利要求5所述的核酸分子；
b2)权利要求6所述的重组载体、转基因细胞或重组菌；
a1)防治蜜蜂寄生虫；
a2)制备防治蜜蜂寄生虫的产品；
a3)促进蜜蜂寄生虫死亡；
a4)制备促进蜜蜂寄生虫死亡的产品。
8.一种产品，其活性成分为c1)～c3)中的至少一种：
c1)权利要求4所述的dsRNA；
c2)权利要求5所述的核酸分子；
c3)权利要求6所述的重组载体、转基因细胞或重组菌。
9.一种防治蜜蜂寄生虫和/或促进蜜蜂寄生虫死亡的方法，将AtCYP303A1抑制剂导入蜜蜂寄生虫体内；
所述AtCYP303A1的序列如SEQ ID NO：1所示。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：
所述AtCYP303A1抑制剂为抑制AtCYP303A1表达的试剂；
优选地，所述AtCYP303A1抑制剂为靶向AtCYP303A1的dsRNA或靶向AtCYP303A1的shRNA；
优选地，所述靶向AtCYP303A1的dsRNA为由SEQ ID NO：2所示核苷酸和其反向互补序列所示的核苷酸组成的双链RNA。
CN202110758162.1A 2021-07-05 2021-07-05 AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用 Active CN113519547B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110758162.1A CN113519547B (zh) 2021-07-05 2021-07-05 AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110758162.1A CN113519547B (zh) 2021-07-05 2021-07-05 AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113519547A true CN113519547A (zh) 2021-10-22
CN113519547B CN113519547B (zh) 2022-04-15

Family

ID=78126778

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110758162.1A Active CN113519547B (zh) 2021-07-05 2021-07-05 AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113519547B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854761A (zh) * 2022-05-13 2022-08-05 广东省科学院动物研究所 AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103589729A (zh) * 2013-11-11 2014-02-19 中国农业科学院作物科学研究所 一种抑制麦蚜唾液腺体分泌多肽基因表达的dsRNA及其应用
CN103596575A (zh) * 2011-03-30 2014-02-19 富优基尼以色列股份有限公司 瘿蜂防治剂
CN103602681A (zh) * 2013-11-11 2014-02-26 中国农业科学院作物科学研究所 一种抑制麦蚜腺体蛋白MYS2基因表达的dsRNA及其应用
CN104046641A (zh) * 2014-06-25 2014-09-17 山西大学 昆虫Ⅱ型几丁质酶基因特异性dsRNA的应用
CN104561007A (zh) * 2015-02-03 2015-04-29 东北林业大学 舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用
CN104673812A (zh) * 2015-03-18 2015-06-03 山西大学 一种昆虫细胞色素p450基因及其应用
CN108588077A (zh) * 2018-05-03 2018-09-28 中国农业科学院深圳农业基因组研究所 CYP6AB9基因和干扰棉铃虫棉酚代谢的dsRNA及二者在防治棉铃虫中的应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103596575A (zh) * 2011-03-30 2014-02-19 富优基尼以色列股份有限公司 瘿蜂防治剂
CN103589729A (zh) * 2013-11-11 2014-02-19 中国农业科学院作物科学研究所 一种抑制麦蚜唾液腺体分泌多肽基因表达的dsRNA及其应用
CN103602681A (zh) * 2013-11-11 2014-02-26 中国农业科学院作物科学研究所 一种抑制麦蚜腺体蛋白MYS2基因表达的dsRNA及其应用
CN104046641A (zh) * 2014-06-25 2014-09-17 山西大学 昆虫Ⅱ型几丁质酶基因特异性dsRNA的应用
CN104561007A (zh) * 2015-02-03 2015-04-29 东北林业大学 舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用
CN104673812A (zh) * 2015-03-18 2015-06-03 山西大学 一种昆虫细胞色素p450基因及其应用
CN108588077A (zh) * 2018-05-03 2018-09-28 中国农业科学院深圳农业基因组研究所 CYP6AB9基因和干扰棉铃虫棉酚代谢的dsRNA及二者在防治棉铃虫中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KYUNGMUN KIM等: "Characterization of the small hive beetle transcriptiome focused on the insecticide target site and RNA interference genes", 《JOURNAL OF ASIA-PACIFIC ENTOMOLOGY》 *
MICHELLE E POWELL等: "Systemic RNAi in the small hive beetle Aethina tumida Murray (Coleoptera: Nitidulidae), a serious pest of the European honey bee Apis mellifera.", 《PEST MANAGEMENT SCIENCE》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854761A (zh) * 2022-05-13 2022-08-05 广东省科学院动物研究所 AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用
CN114854761B (zh) * 2022-05-13 2023-12-26 广东省科学院动物研究所 AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113519547B (zh) 2022-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Luo et al. Towards an understanding of the molecular basis of effective RNAi against a global insect pest, the whitefly Bemisia tabaci
CN114957426B (zh) Sp6rars及其在防治蜚蠊目昆虫中的应用
CN104561018B (zh) 舞毒蛾热激蛋白Hsp23基因及其dsRNA在无公害防治中的应用
CN106661590A (zh) 赋予鞘翅目害虫抗性的dre4核酸分子
CN110468137B (zh) 一种茄二十八星瓢虫高致死基因及其在防治瓢虫的应用
CN113519547B (zh) AtCYP303A1抑制剂在防治蜜蜂寄生虫中的应用
CN107916264B (zh) 翅发育相关基因vestigial的dsRNA及其在防治橘小实蝇中的应用
CN110592117A (zh) 高致死基因vATPase B及其防瓢虫应用
US20190059364A1 (en) RNAi FOR CONTROL OF PHLOEM SAP-FEEDING INSECTS IN CROP PLANTS
CN114921467A (zh) 基于桃蚜效应因子MpC002基因的dsRNA及其在防治桃蚜中的应用
CN114478735B (zh) 蚜虫的高致死dsRNA及其在蚜虫防治中的应用
CN113430200B (zh) 美国白蛾vATPase A基因dsRNA及其细菌表达液及应用
AU2016291813A1 (en) Transgenic microalgae and use thereof as a feed for delivery of interfering RNA molecules
CN114854761B (zh) AtSpook基因在防治蜂巢小甲虫中的应用
CN110106179B (zh) 一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS3的dsRNA及其制备方法和应用
CN114591964A (zh) 茄二十八星瓢虫致死基因HvSrp54k及其应用
CN110564702B (zh) 二化螟生长发育相关蛋白ND及其编码基因、dsRNA干扰序列和应用
CN114015688B (zh) 一种用于干扰三疣梭子蟹性别决定基因表达的RNAi试剂及其RNAi方法和应用
CN113755530B (zh) 敲除或沉默蜂巢小甲虫气味结合蛋白基因1在防治蜂巢小甲虫中的应用
CN113481202B (zh) 美国白蛾Rop基因dsRNA及其细菌表达液和应用
CN108841827B (zh) 翅发育相关基因wingless的dsRNA及其在防治橘小实蝇中的应用
CN116814676A (zh) 基于rna干扰技术提高植物抗虫性的方法及其应用
CN111394354B (zh) 一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS的dsRNA及制备方法和应用
CN117660464A (zh) 柑橘木虱唾液腺基因DcS21、其编码蛋白及其应用
CN112029772B (zh) Gustavus基因及其应用、由其合成的dsRNA及dsRNA的制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant