CN104561007A - 舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用。所述dsRNA序列如SEQ ID NO.3所示，其可应用在抑制舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中。实验结果表明：当舞毒蛾幼虫注射CYP6B53基因dsRNA后，与对照（注射ddH₂O和GFP基因dsRNA）相比均有较强的沉默效果，致使舞毒蛾幼虫生长发育受到抑制，进而死亡。因此，发明提出可利用CYP6B53的沉默技术来防治林木重要害虫舞毒蛾及具有相似结构域的鳞翅目害虫，为绿色防治林业害虫提供了一个新的思路和技术。

Description

舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，涉及亚洲型舞毒蛾的细胞色素P450 CYP6B53基因dsRNA及其在防治亚洲型舞毒蛾中的应用。

背景技术

舞毒蛾（Lymantria dispar Linnaeus）是世界性的害虫，分布广，食性杂，据国外报道可危害300多种植物，国内报道可危害杨、柳、苹果、樟子松、落叶松等500余种植物。舞毒蛾传播快、繁殖量和取食量大，给林业生产造成重大经济损失，目前对亚洲型舞毒蛾的防治，仍然是以化学杀虫剂为主，但这些化合物容易引起害虫抗药性的形成和环境污染问题。尽管一些害虫天敌、致病微生物等生物防治在舞毒蛾防治上起到一定的作用，但这些防治技术存在天敌饲养难、受气候环境影响大、见效慢、效果不明显等弊病，严重制约了舞毒蛾防治的发展。然而，随着生物技术的迅猛发展，利用RNAi技术控制害虫的危害已成为植物保护工作者研究的重点和热点。Napoli（1990）首次发现RNAi现象，将外源基因引入矮牵牛内引起内源基因的沉默，当时把这种现象称为“共抑制”。1998年，华盛顿Carnegine研究所的Andrew Fire和马萨诸塞大学癌症研究中心的Craig C. Mello阐述了基因沉默现象的本质，并定义了RNAi。由于RNAi具有高特异性的沉默技术，因而展示出了很大的潜力，并且作为一种新的方法来防治农业害虫，已在农业害虫防治中得到应用。一方面通过基因工程手段将害虫靶标基因dsRNA转入植物体内，当有害生物取食转基因植物时，引发害虫体内发生基因沉默失去功能，降低害虫的取食能力，例如：Baum等（2007）通过转基因玉米防治玉米根部害虫玉米根叶甲Diabrotica virgifera饲喂表达ATP酶dsRNA的转基因植物，导致玉米根叶甲发育迟缓和死亡率升高；Mao等（2007）研究发现棉铃虫（Helicoverpa armigera）取食表达CYP6AE14的dsRNA转基因棉花后，棉铃虫的P450基因表达量明显降低，害虫的食欲降低，生长发育迟缓，最后死亡。另一方面，通过筛选具有致死效应的siRNA（一般来源于生物体内参与重要生物化学途径的候选基因），并用化学方法合成，可应用于新型的杀虫剂生物农药。基于RNAi技术具有特异性强、对人畜安全、对非靶标生物安全、无害虫抗药性等特点，解决了化学农药长期施用导致“3R”这一难题。因此，RNAi技术将为害虫防治开辟一条新途径。

昆虫在杀虫剂胁迫下，通过诱导高表达酯酶、谷胱甘肽S转移酶、细胞色素P450等方式来进行自身的保护。细胞色素P450酶系是广泛存在于生物体中的一类代谢酶系，是一种多功能氧化酶，具有底物广普性和功能多样性的特点，而细胞色素P450是多功能氧化酶的重要组成部分，起着与底物结合以末端氧化酶的作用，可以代谢多种内源性化合物（保幼激素及其类似物和脂肪酸等）和外源性化合物（药物、植物次生物质及其毒素等），对杀虫剂的代谢是昆虫产生抗药性的主要机制。

目前，有关通过抑制细胞色素CYPB53基因转录水平来防治林木重要害虫舞毒蛾及提高其对有机磷类杀虫剂的敏感性未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用，利用分子生物学手段干扰舞毒蛾细胞色素CYP6B53基因，降低了昆虫的生存能力，使其生长发育缓慢，提高了舞毒蛾对有机磷类杀虫剂的敏感性，在舞毒蛾无公害防治中的应用具有广阔的前景并为其他鳞翅目害虫防治提供了理论依据。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种亚洲型舞毒蛾细胞色素P450 CYP6B53基因，其核酸序列如SEQ ID No.1所示，编码氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，获得方法如下：

根据NCBI数据库中登陆号为KF853194.1的细胞色素P450序列，设计编码区设计上游引物LdCYP6B53F:5’ ATGTTGTCAATTTATTTACCTATATTTCTCATAGTAGC 3’； LdCYP6B53R: 5’ ATTTGAAGATTTCCTCGGAACAAGTCTTACGTG 3’，通过PCR法扩增获得如SEQ ID NO.1所示序列。

本发明以亚洲型舞毒蛾CYP6B53基因片段为模板，并设计特异的dsRNA引物对，通过MEGAscript RNAi试剂盒合成CYP6B53基因dsRNA，dsRNA序列如SEQ ID NO.3所示。

上述CYP6B53 dsRNA在无公害防治中的应用，主要表现在以下两方面：

一、在抑制舞毒蛾生长发育中的应用；

二、在提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂（氧化乐果）的敏感性中的应用。

微量注射dsRNA到昆虫体腔，结果表明：CYP6B53基因沉默舞毒蛾幼虫8 d内体重增加量大于对照ddH₂O和GFP，且从第5d起体重增加量显著大于dsRNAGFP和ddH₂O处理组，且有40%的致死效果，与对照组dsRNAGFP、ddH₂O相比致死效果明显；同时提高了舞毒蛾对有机磷类杀虫剂的敏感性；并且显著影响舞毒蛾营养利用指标，导致食物转化率、食物利用率显著低于对照（P < 0.05）。dsRNA可以在特定时间内高效特异的沉默昆虫体内CYP6B53基因的mRNA表达。

本发明中所述的舞毒蛾细胞色素CYP6B53基因的方法是本领域中所常采用的方法。本发明中所述的提取舞毒蛾幼虫总RNA、合成cDNA第一条链、合成dsRNA、实时荧光定量RT-PCR等方法都是本领域成熟的技术，试剂盒RNeasy Mini动物组织总RNA提取试剂盒（Qiagen），PrimeScript^TMRT reagent Kit（TaKaRa）、MEGAscript RNAi Kit（Ambion）、SYBR Green Real-time PCR Master Mix (Toyobo) 等都可以从生产商家购买。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明公开了亚洲型舞毒蛾细胞色素基因CYP6B53全长核苷酸序列，目前关于其抑制表达可显著影响舞毒蛾生长发育的功能、具有致死作用、提高其对有机磷类杀虫剂的敏感性未见相关报道。

2、本发明能使舞毒蛾细胞色素CYP6B53基因有效的沉默，显著影响舞毒蛾幼虫的生长发育和生理代谢，并且有40%的致死效应为无公害、可持续防治舞毒蛾提供了新思路和新材料。

3、实验结果表明：当舞毒蛾幼虫注射CYP6B53基因dsRNA后，与对照（注射ddH₂O和GFP基因dsRNA）相比均有较强的沉默效果，致使舞毒蛾幼虫生长发育受到抑制，进而死亡。因此，本发明提出可利用CYP6B53的沉默技术来防治林木重要害虫舞毒蛾及具有相似结构域的鳞翅目害虫，为绿色防治林业害虫提供了一个新的思路和技术。

附图说明

图1为注射dsRNA舞毒蛾3龄幼虫症状；

图2为注射dsRNA舞毒蛾3龄幼虫CYP6B53基因表达水平；

图3为舞毒蛾CYPB53基因电泳图；

图4为舞毒蛾dsRNACYPB53基因片段电泳图；

图5为舞毒蛾CYP6B53基因沉默对舞毒蛾幼虫鲜重的影响；

图6为舞毒蛾CYP6B53基因沉默的幼虫对氧化乐果的敏感性。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例 1 ：舞毒蛾细胞色素 CYP6B53 基因全长克隆

舞毒蛾细胞色素CYP6B53基因核酸序列1728 bp（SEQ ID No.1），开放阅读框1518 bp，编码506个氨基酸（序列如SEQ ID No.2所示），分子量大小为57.72kDa，理论等电点PI为8.76，为一碱性蛋白。

提取舞毒蛾总RNA，使用反转录试剂盒PrimeScript^TMRT reagent Kit（TaKaRa）合成cDNA第一条链，以cDNA第一链为模板，根据舞毒蛾幼虫转录组序列在基因编码区序列的两侧设计引物（正向引物：5’- ATGTTGTCAATTTATTTACCTATATTTCTCATAGTAGC -3’；反向引物：5’- ATTTGAAGATTTCCTCGGAACAAGTCTTACGTGAATCCC -3’）。反应体系:5×PrimeScript buffer 2 μL、PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5μL、Oligo d(T) primer (50μM) 0.5μL、Random 6 mers(100μM) 0.5 μL、 Total RNA 0.5 μg RNase Free ddH₂O 补足10 μL。PCR扩增程序如下：94℃3 min；94℃ 30 s，60℃ 30s，72℃ 1 min， 35个循环；72℃ 延伸10 min。将PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测，用胶回收试剂盒回收1518 bp的条带（图3）。将回收得到的条带与pMD18-T载体连接过夜，将连接产物转化DH5α感受态细胞。通过菌液PCR检测的阳性克隆菌液，送至北京华大生物技术有限公司测序以验证读码框。

实施例 2 ：舞毒蛾 CYP6B53 基因 dsRNA 的合成

根据实施例1中所克隆的舞毒蛾CYP6B53基因全长，设计合成CYP6B53基因dsRNA正向引物（5’- ATGTTGTCAATTTATTTACCTATATTTCTCATAGTAGC -3’）和反向引物（5’- ATTTGAAGATTTCCTCGGAACAAGTCTTACGTGAATCCC -3’），扩增得到片段长度为594 bp的序列，通过体外dsRNA合成试剂盒获得CYP6B53基因的dsRNA。

具体地合成过程是，在每条特异性引物的5′端加有一段20 bp左右的T7启动子序列，用GFP作为对照组。通过PCR法扩增目的条带，反应程序为: 94℃ 3 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 1 min，35 个循环；72℃ 7 min，扩增产物经电泳检测确认后作为模板合成dsRNA（参照MEGAscript RNAi Kit试剂盒说明书），于紫外分光光度计检测dsRNA浓度，并取0.5 µL dsRNA于1%琼脂糖凝胶电泳检测确认，-80℃保存备用，见图4。

实施例 3 ：舞毒蛾 CYP6B53 基因沉默效果的检测

将实施例2合成的CYP6B53基因和GFP 基因的dsRNA（1 μg），微注射入舞毒蛾3龄幼虫，分别于6、24、48、96、144 h选取活泼的3龄幼虫，采用RNeasy Mini动物组织总RNA提取试剂盒（Qiagen）提取总RNA，采用PrimeScript^TMRT 试剂盒（TaKaRa）合成cDNA第一条链，以此为模板，运用荧光定量RT-PCR检测注射后CYP6B53基因的表达量。注射dsRNA舞毒蛾3龄幼虫CYP6B53基因表达水平如图2所示，结果表明，外源对照基因GFP的dsRNA注入舞毒蛾幼虫体内会影响CYP6B53基因的表达。与对照GFP基因相比，CYP6B53基因沉默效果高于对照（除6 h外）。注射6 h时， dsRNA CYP6B53的沉默效果是dsRNAGFP沉默的0.98倍，随着时间的增加， dsRNACYP6B53的沉默效果有所升高，处理4 d时，沉默效果最佳，是对照的3.56倍，在处理第6 d时，没有沉默效应，CYP6B53基因表达量上调，此时dsRNAGFP处理组的表达量也上调（内参基因为Actin、EF1α、TUB，引物见表1）。

表 1 RNAi 干扰中的相关引物

实施例 4 ： CYP6B53 基因的 dsRNA 抑制舞毒蛾的生长发育、表型、死亡率、龄期的影响

将实施例2中体外合成的dsRNA微量注射入舞毒蛾3龄幼虫体内，同时记录其对舞毒蛾幼虫的营养利用影响。更具体的地说，是将舞毒蛾3龄幼虫经饥饿处理12 h后，将1μg的ddH₂O、dsRNA CYP6B53、dsRNAGFP分别注入到上述饥饿处理的舞毒蛾3龄幼虫体内，每组处理20头，正常饲喂8d，每天按时称量幼虫虫体的鲜重，记录其死亡情况。参照Waldbauer（2011）的方法计算其各营养指标：相对生长率（RGR）=（D-C）/[(C+D)/2]×100%;相对取食量（RCR）=（A-B）/[(C+D)/2];食物利用率（ECI）=（D-C）/(A-B-E) ×100%；近似消化率（AD）=（A-B-E）/（A-B）×100%。其中A为试验前饲料干重；B为试验后饲料干重；C为试验前幼虫干重；D为试验后幼虫干重；E为幼虫粪便干重；体重累计增长率（%）=（注射后的体重-注射前的体重）×100/注射前的体重。

由表2可知：经微量注射dsRNACYP6B53实验组与对照组dsRNAGFP和ddH₂O相比，经过8 d正常饲喂后，在取食、形态变化及食物利用率上两者差异显著（P<0.05），而外源基因dsRNAGFP与ddH₂O差异不显著（P > 0.05）。其中，微量注射 CYP6B53基因dsRNA处理组的相对生长率和相对取食量均显著高于dsRNAGFP照组，分别增长39.87%和6.72%；而食物利用率、食物转化率均显著低于对照组（dsRNAGFP和ddH₂O），表明舞毒蛾幼虫生长发育受到影响，干扰了正常的生理功能，表型见图1。

表 2 舞毒蛾 CYP6B53 基因沉默对舞毒蛾幼虫营养利用的影响

图5显示CYP6B53基因沉默导致舞毒蛾幼虫体重增长缓慢，4 d前各处理对幼虫鲜重影响较小，而在第5~8 d，幼虫体重显著高于GFP基因和对照ddH₂O（P<0.05）。

表 3 舞毒蛾 CYP6B53 基因沉默对舞毒蛾幼虫死亡率及龄期的影响

由表3可知，经微量注射dsRNACYP6B53的幼虫实验组8d后的累计死亡达40%，对照组仅为10%，注射外源基因dsRNAGFP组的4龄龄期小于注射dsRNACYP6B53的处理组和ddH₂O对照组，但差异不显著；而注射dsRNACYP6B53的处理组与ddH₂O对照组间无差异，说明CYP6B53基因沉默对龄期无影响。

实施例 5 ： CYP6B53 基因的 dsRNA 提高舞毒蛾的幼虫对有机磷类杀虫剂氧化乐果的敏感性

将实施例2中体外合成的dsRNA微量注射入舞毒蛾3龄幼虫体内，并将混有40 mg/L的氧化乐果饲料饲喂注射后的幼虫，24 h后统计其死亡率，每组处理15头。更具体的地说，是将舞毒蛾3龄幼虫经饥饿处理12 h后，将1μg的ddH₂O、dsRNACYP6B53、dsRNAGFP分别注入上述饥饿处理的舞毒蛾3龄幼虫体内，然后放入混有杀虫剂饲料中饲喂，24 h统计死亡率。

图6显示经微量注射dsRNACYP6B53处理组舞毒蛾幼虫24 h死亡率为40%，其死亡率比对照组ddH₂O和dsRNAGFP分别高出33.33%和40.00%，表现出高的敏感性，这表明CYP6B53基因沉默导致舞毒蛾幼虫解毒能力降低从而对氧化乐果敏感性增大。

序列表

<110> 东北林业大学

<120> 舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA及其在无公害防治中的应用

<160>3

<210> 1　

<211> 1728

<212> DNA

<213> CYP6B53基因核酸序列

<220>

<221> CDS

<222> (58)...(1575)

<400> 1

GGTATTATAA AATACATTCA ATATCAATCG CGCATGCGGT ATTAGTGTTT CTTCAAAATG 60

TTGTCAATTT ATTTACCTAT ATTTCTCATA GTAGCTTTTT ATAGTCTATA CTATTATTTC 120

TCAAGAAATT TCAATTATTG GAAGAAGAAA AATGTACCTG GACCGAAGCC TACTCCATTT 180

TATGGCAACT TGAAACAGAC GGCTCTCCGT AAAAAGAATA TAAGTGTTGC ATTTGAAGAA 240

TTTTACAACG CGTATCCCAA GGAAAAATAT GTTGGAGTTT ATAGAATGAC TACACCCTGC 300

CTGTTGATAC GAGACTTGGA TATAATCAAA CAAATTATGA TCAAAGATTT TGATTTATTC 360

CAAGATCGCG GACTTGAGTT CAGCAAATCT GGATTGGGGC AAAACTTATT TCATGCCGAT 420

GGTGATACAT GGAGCGCTTT AAGAACGCGA TTTACTCCTG TTTACACATC TGGGAATCTC 480

AAGAACATGT TTCCACTGAT AAGTAGCCGC GCTAATGTTT TCATAAATCA TCTTGTGAAT 540

AAATGTAAAG ACCCGACTGA ACTGGAAATG CATGGTTTAG TTCAAAAATA TACTGTGTCT 600

ACAATATTCG CATGTGCTTT TGGTGTTGAT ATAGATTATT TTCATAGTGA CTTGGATGAT 660

GGTTTGAAAG CAGTAGATAA AATGGTTTTA ACTCCTACTT ATGCAAATGA ATTTGACATG 720

ATGTACCCAG GTATTTTAAG AAAATTAAAT GTATCAATTT TTCCGGCTAA AGCTATAGAA 780

TTTTTTGAAA ATCTTGTGAG TAACATAATC ACACAAAGAA ACGGTAAGCC GTCTGGAAGA 840

GGTGATTTTA TGGACTTAGT TCTCCAATTA AGACAGAAAG GTGAAGTGCA AAGTACAAGG 900

GGCATCGAAG GAACAGAGCG AAAGATGCTT GAAATAACTG ACGATATAAT TGCAGGACAG 960

GCTTTTGTTT TCTACGTGGG CGGTTATGAG ACTAGTGCTA CTACTGTAGC TATTCTAATG 1020

TACTACCTGG CAACATATCC TGAAGTTCAA GAAAAAATAA TAGAAGAAGT CGATAGAGTC 1080

ACAGCTGAAC ACGGTGGCGA AATAACATAT GACTGCCTGC AAGATATGAA GTATTTGGAA 1140

AAAGCATTTA AAGAAACACT TCGAATTAAT CCTATTGTTG ATCCGTTACA AAGACAAGCA 1200

AAAGTTAATT ATAAAGTTCC CGGCACAGAT CTGGTAATTG AAAAGGGTCA GGTTATATTT 1260

GTATCAGCTA GAGGTATACA ACGCGATGAA AAATATTATC CCAAACCTGA AGTATTCGAT 1320

CCCAGTAGAT TTGATTCTGA AATAGAGGGC GCTAGACACT CTTGTGCATA CTTGCCTTTT 1380

GGAACTGGAC CAAGAAACTG TATTGGAATG CGATTTGGAA TAATTCAATC TCGAATGGGT 1440

GTGGCAAAAA TTTTGTCAAA ATTCCGCGTT GAAGCTTGTT CGAAGACAGA GTTAAAAATT 1500

GAACCGAATA GAGTTATTAG TGGCCCGGAA AATGGGATTC ACGTAAGACT TGTTCCGAGG 1560

AAATCTTCAA ATTGAGACAC TACTTAAATT TTATTTCATA TTTGCATGTT ACAATTTTTA 1620

AAATCCTATT TTATTTCCGT TAGTAATGTG TACATTTTCA TTAGTATTTT ATAAATGTGT 1680

ACCTAAAGAT ATCTTTAACT GTGTAAGCGA AAACAATTTT AATATATC 1728

<210> 2　

<211> 1518

<212> PRT

<213> CYP6B53基因编码氨基酸序列

<220>

<223>

<400> 2

METLEUSERI LETYRLEUPR OILEPHELEU ILEVALALAP HETYRSERLE UTYRTYRTYR 60

PHESERARGA SNPHEASNTY RTRPLYSLYS LYSASNVALP ROGLYPROLY SPROTHRPRO 120

PHETYRGLYA SNLEULYSGL NTHRALALEU ARGLYSLYSA SNILESERVA LALAPHEGLU 180

GLUPHETYRA SNALATYRPR OLYSGLULYS TYRVALGLYV ALTYRARGME TTHRTHRPRO 240

CYSLEULEUI LEARGASPLE UASPILEILE LYSGLNILEM ETILELYSAS PPHEASPLEU 300

PHEGLNASPA RGGLYLEUGL UPHESERLYS SERGLYLEUG LYGLNASNLE UPHEHISALA 360

ASPGLYASPT HRTRPSERAL ALEUARGTHR ARGPHETHRP ROVALTYRTH RSERGLYASN 420

LEULYSASNM ETPHEPROLE UILESERSER ARGALAASNV ALPHEILEAS NHISLEUVAL 480

ASNLYSCYSL YSASPPROTH RGLULEUGLU METHISGLYL EUVALGLNLY STYRTHRVAL 540

SERTHRILEP HEALACYSAL APHEGLYVAL ASPILEASPT YRPHEHISSE RASPLEUASP 600

ASPGLYLEUL YSALAVALAS PLYSMETVAL LEUTHRPROT HRTYRALAAS NGLUPHEASP 660

METMETTYRP ROGLYILELE UARGLYSLEU ASNVALSERI LEPHEPROAL ALYSALAILE 720

GLUPHEPHEG LUASNLEUVA LSERASNILE ILETHRGLNA RGASNGLYLY SPROSERGLY 780

ARGGLYASPP HEMETASPLE UVALLEUGLN LEUARGGLNL YSGLYGLUVA LGLNSERTHR 840

ARGGLYILEG LUGLYTHRGL UARGLYSMET LEUGLUILET HRASPASPIL EILEALAGLY 900

GLNALAPHEV ALPHETYRVA LGLYGLYTYR GLUTHRSERA LATHRTHRVA LALAILELEU 960

METTYRTYRL EUALATHRTY RPROGLUVAL GLNGLULYSI LEILEGLUGL UVALASPARG 1020

VALTHRALAG LUHISGLYGL YGLUILETHR TYRASPCYSL EUGLNASPME TLYSTYRLEU 1080

GLULYSALAP HELYSGLUTH RLEUARGILE ASNPROILEV ALASPPROLE UGLNARGGLN 1140

ALALYSVALA SNTYRLYSVA LPROGLYTHR ASPLEUVALI LEGLULYSGL YGLNVALILE 1200

PHEVALSERA LAARGGLYIL EGLNARGASP GLULYSTYRT YRPROLYSPR OGLUVALPHE 1260

ASPPROSERA RGPHEASPSE RGLUILEGLU GLYALAARGH ISSERCYSAL ATYRLEUPRO 1320

PHEGLYTHRG LYPROARGAS NCYSILEGLY METARGPHEG LYILEILEGL NSERARGMET 1380

GLYVALALAL YSILELEUSE RLYSPHEARG VALGLUALAC YSSERLYSTH RGLULEULYS 1440

ILEGLUPROA SNARGVALIL ESERGLYPRO GLUASNGLYI LEHISVALAR GLEUVALPRO 1500

ARGLYSSERS ERASN*** 1518

<210> 3　

<211> 594

<212> DNA

<213>合成dsRNA序列

<220>

<223> 合成dsRNA序列

<400> 3

CGTGTTCAGC TGTGACTCTA TCGACTTCTT CTATTATTTT TTCTTGAACT TCAGGATATG 60

TTGCCAGGTA GTACATTAGA ATAGCTACAG TAGTAGCACT AGTCTCATAA CCGCCCACGT 120

AGAAAACAAA AGCCTGTCCT GCAATTATAT CGTCAGTTAT TTCAAGCATC TTTCGCTCTG 180

TTCCTTCGAT GCCCCTTGTA CTTTGCACTT CACCTTTCTG TCTTAATTGG AGAACTAAGT 240

CCATAAAATC ACCTCTTCCA GACGGCTTAC CGTTTCTTTG TGTGATTATG TTACTCACAA 300

GATTTTCAAA AAATTCTATA GCTTTAGCCG GAAAAATTGA TACATTTAAT TTTCTTAAAA 360

TACCTGGGTA CATCATGTCA AATTCATTTG CATAAGTAGG AGTTAAAACC ATTTTATCTA 420

CTGCTTTCAA ACCATCATCC AAGTCACTAT GAAAATAATC TATATCAACA CCAAAAGCAC 480

ATGCGAATAT TGTAGACACA GTATATTTTT GAACTAAACC ATGCATTTCC AGTTCAGTCG 540

GGTCTTTACA TTTATTCACA AGATGATTTA TGAAAACATT AGCGCGGCTA CTTA 594

Claims (4)

1.一种舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA，其特征在于所述dsRNA序列如SEQ ID NO.3所示。

2.权利要求1所述舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA在抑制舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中的应用。

3.根据权利要求2所述的舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA在抑制舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中的应用，其特征在于所述舞毒蛾为亚洲型舞毒蛾。

4.根据权利要求2所述的舞毒蛾CYP6B53基因dsRNA在抑制舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中的应用，其特征在于所述CYP6B53基因dsRNA的注射剂量为1 μg。