CN104561006A - 舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA及其在无公害防治中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA及其在无公害防治中的应用。所述dsRNA序列如SEQ ID NO.3所示，其可应用在调控舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中。实验结果表明：CYP6AN15v1基因沉默舞毒蛾幼虫8d内体重增加量小于对照ddH₂O，但高于GFP，且1~6d体重增加量小于GFPdsRNA和ddH₂O处理组，对舞毒蛾营养利用指标也有显著的影响，导致食物转化率和食物利用率显著小于对照（P < 0.05）；dsRNA可以在特定时间内高效特异的沉默舞毒蛾体内CYP6AN15v1基因的mRNA表达；而且舞毒蛾幼虫对有机磷类杀虫剂的敏感性显著提高。

Description

舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA及其在无公害防治中的应用

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，涉及一种亚洲型舞毒蛾的细胞色素P450基因 CYP6AN15v1dsRNA及其在防治亚洲型舞毒蛾中的应用。

背景技术

据国外报道舞毒蛾（Lymantria dispar Linnaeus）可危害300多种植物，国内报道可危害杨、柳、苹果、樟子松、落叶松等500余种植物。舞毒蛾传播快，繁殖量和取食量大，给林业生产造成重大经济损失。目前对亚洲型舞毒蛾的防治，仍然是以化学杀虫剂为主，虽然防效显著，但这些化合物容易引起“3R”问题不容忽视。尽管一些害虫天敌、致病微生物等生物防治手段在舞毒蛾防治上起到一定的作用，但这些防治技术存在受外界环境影响大、见效慢、效果不明显等弊病，严重制约了舞毒蛾防治的发展。随着生物技术的迅猛发展，利用RNAi技术控制害虫的危害已成为植物保护工作者研究的重点和热点。RNAi技术因具有高效、特异性等特点，在农业生物技术领域展示出了很大的潜力，并且作为一种新的方法来防治农林业害虫。迄今，RNAi技术已经在农业害虫防治中得到应用。一方面是通过导入功能基因dsRNA来实现RNAi，当有害生物取食转基因植物时，引发害虫体内发生基因沉默失去功能，降低害虫的取食能力；例如，张维等（2013）将棉蚜的V-ATPase-A基因转入到拟南芥中并饲喂烟草天蛾幼虫具有致死效应；李晓明等（2010）通过转基因烟草对棉蚜有一定的防控效果；Mao等（2007）研究发现棉铃虫取食含有表达CYP6AE14的dsRNA转基因棉花后，棉铃虫的P450基因表达量明显降低，害虫的食欲降低，生长发育迟缓，最后死亡。另一方面，通过筛选具有致死效应的siRNA（一般来源于生物体内参与重要生物化学途径的候选基因），通过化学方法合成，可应用于新型的杀虫剂生物农药。鉴于RNAi技术具有高效性和特异性，对人畜和非靶标生物安全、无害虫抗药性等特点，缓解了化学农药长期施用导致“3R”这一难题。因此，RNAi技术将为害虫防治开辟了新的途径。在昆虫中，细胞色素P450的功能主要与抗药性相关，主要参与代谢杀虫剂或来自植物的次生物质，其对杀虫剂的代谢是昆虫产生抗药性的重要机制之一。

目前，有关通过抑制细胞色素P450 CYP6AN15v1基因转录水平来防治林木重要害虫舞毒蛾及提高其对有机磷类农药氧化乐果的敏感性未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA及其在无公害防治中的应用，利用分子生物学手段干扰舞毒蛾重要的解毒酶基因CYP6AN15v1，降低了昆虫的生存能力，甚至死亡，同时还提高了对有机磷类杀虫剂的敏感性。舞毒蛾细胞色素P450 CYP6AN15v1基因沉默后，显著影响舞毒蛾幼虫的生长发育和生理代谢，同时有机磷类杀虫剂的敏感性提高，对防治无公害舞毒蛾提供了新思路和新材料。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术措施，如无特殊说明，本发明所采用的技术方法，均为本领域中常用的方法。

一种亚洲型舞毒蛾细胞色素P450 CYP6AN15v1基因，其核酸序列如SEQ ID No.1所示，编码氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，获得方法如下：

根据NCBI数据库中检索舞毒蛾CYP6AN15v1（登陆号为KF853201.1）的细胞色素P450序列，设计编码区设计上游引物Ld CYP6AN15v1F:5’ ATGTTCGCTCTATTACTACTGTTTCTACTACTATTAG 3’； Ld CYP6AN15v1R: 5’ TTTCCTCAGCTTCAGTCTAACAGGTAGACC3’，通过RT-PCR法扩增获得如SEQ ID NO.1所示序列。

本发明以亚洲型舞毒蛾CYP6AN15v1基因片段为模板，并设计特异的dsRNA引物对，通过MEGAscript RNAi试剂盒（Ambion）合成CYP6AN15v1基因dsRNA，dsRNA序列如SEQ ID NO.3所示。

上述CYP6AN15v1基因dsRNA在无公害防治中的应用，主要表现在以下两方面：

一、在调控舞毒蛾生长发育中的应用。微量注射dsRNA到昆虫幼虫体腔，观测其营养利用指标、幼虫鲜重。结果表明：CYP6AN15v1基因沉默舞毒蛾幼虫8 d内体重增加量小于对照ddH₂O，但高于GFP，且1~6 d体重增加量小于GFP dsRNA和ddH₂O处理组，对舞毒蛾营养利用指标也有显著的影响，导致食物转化率和食物利用率显著小于对照（P < 0.05）； dsRNA可以在特定时间内高效特异的沉默舞毒蛾体内CYP6AN15v1基因的mRNA表达。

二、在提高舞毒蛾幼虫对有机磷类杀虫剂氧化乐果的敏感性中的应用。结果表明：舞毒蛾幼虫对有机磷类杀虫剂的敏感性显著提高。

本发明具有如下有益效果：

1、本发明公开了亚洲型舞毒蛾细胞色素基因CYP6AN15v1全长核酸序列以及应用于合成dsRNA的序列；根据本发明提供的基因全长及用于合成dsRNA的序列可显著抑制其表达，影响舞毒蛾生长发育并提高其对有机磷类杀虫剂的敏感性，这方面的研究未见相关报道。

2、本发明提供可利用CYP6AN15v1的dsRNA干扰方法可提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂的敏感性，从而应用于对舞毒蛾的防治，同时解决“3R”问题及杀虫剂抗性等问题，为绿色环境友好型防治林业害虫提供了一个新的思路和实践技术。

3、将dsRNA注入舞毒蛾3龄幼虫体腔内，结果表明，与对照（注射ddH₂O和GFP dsRNA）相比，高效沉默了舞毒蛾的靶标基因CYP6AN15v1，致使舞毒蛾幼虫生长发育缓慢，显著影响其正常的生理代谢，累计死亡率达40%，同时显著提高了对有机磷类杀虫剂氧化乐果的敏感性。

附图说明

图1为注射dsRNA舞毒蛾3龄幼虫症状；

图2为注射dsRNA舞毒蛾3龄幼虫CYP6AN15v1基因表达水平；

图3为舞毒蛾CYP6AN15v1基因电泳图；

图4为舞毒蛾CYP6AN15v1dsRNA基因片段电泳图；

图5为舞毒蛾CYP6AN15v1基因沉默对幼虫鲜重的影响；

图6为舞毒蛾CYP6AN15v1基因沉默的舞毒蛾幼虫对氧化乐果的敏感性。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

实施例 1 ：舞毒蛾细胞色素 CYP6 AN15v1 基因全长克隆

舞毒蛾细胞色素CYP6 AN15v1基因核酸序列2224 bp（SEQ ID No.1），开放阅读框1536 bp，编码512个氨基酸（序列如SEQ ID No.2所示），分子量大小为59.02 kDa，理论等电点PI为9.03，为一碱性蛋白。

提取舞毒蛾总RNA，使用反转录试剂盒PrimeScript^TMRT reagent Kit（TaKaRa）合成cDNA第一条链，再以cDNA第一链为模板，根据舞毒蛾幼虫转录组序列在基因编码区序列的两侧设计引物（正向引物：5’- ATGTTCGCTCTATTACTACTGTTTCTACTACTATTAG -3’；反向引物：5’- TTTCCTCAGCTTCAGTCTAACAGGTAGACC -3’）。反应体系:5×PrimeScript buffer 2 μL、PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5 μL、Oligo d(T) primer (50 μM) 0.5 μL、Random 6 mers(100 μM) 0.5 μL、 Total RNA 0.5 μg RNase Free ddH₂O 补足10 μL。PCR扩增程序如下：94℃ 3 min；94℃ 30 s，60℃ 30s，72℃ 2 min， 35个循环；72℃ 延伸10 min。将PCR产物用1%的琼脂糖凝胶电泳检测，用胶回收试剂盒回收1536 bp的条带，见图3。将回收得到的条带与pMD18-T载体连接过夜，将连接产物转化DH5α感受态细胞。通过菌液PCR检测的阳性克隆菌液，送至北京华大生物技术有限公司测序以验证读码框。

实施例 2 ：舞毒蛾 CYP6 AN15v1 基因 dsRNA 的合成

根据实施例1中所克隆的舞毒蛾CYP6AN15v1基因全长，设计合成CYP6AN15v1基因dsRNA正向引物Ld CYP6AN15v1F:（5’- ATGTTCGCTCTATTACTACTGTTTCTACTACTATTAG -3’）和反向引物Ld CYP6AN15v1R:（5’- TTTCCTCAGCTTCAGTCTAACAGGTAGACC -3’），扩增得到片段长度为599 bp的序列，通过体外dsRNA合成试剂盒获得CYP6 AN15v1基因的dsRNA。

具体地合成过程是，在每条特异性引物的5′端加有一段20 bp左右的T7启动子序列，用GFP作为对照组。通过PCR法扩增目的条带，反应程序为: 94℃ 3 min；94℃ 30 s, 60℃ 30 s, 72℃ 1 min, 35 个循环；72℃ 7 min，扩增产物经电泳检测确认后作为模板合成dsRNA（参照MEGAscript RNAi Kit试剂盒说明书），于紫外分光光度计检测dsRNA浓度, 并取0.5µL dsRNA于1%琼脂糖凝胶电泳检测确认，- 80℃保存备用，见图4。

实施例 3 ：舞毒蛾 CYP6AN15v1 基因沉默效果的检测

将实施例2合成的CYP6AN15v1基因和GFP 基因的dsRNA（1 μg），微注射入舞毒蛾3龄幼虫，分别于6h、1d、4d和6d选取活泼的3龄幼虫，采用RNeasy Mini动物组织总RNA提取试剂盒（Qiagen）提取总RNA，采用PrimeScript^TMRT 试剂盒（TaKaRa）合成cDNA第一条链，以此为模板，运用荧光定量RT-PCR检测注射后CYP6AN15v1基因的表达量，以注射外源基因GFP dsRNA为对照。研究结果表明注射6 h时，CYP6AN15v1dsRNA处理组的CYP6AN15v1相对表达量明显应激诱导上调，为ddH₂O对照组的13.45倍，为GFP dsRNA对照组的4.16倍；随着作用时间的增加，处理1d时，CYP6AN15v1dsRNA处理组的CYP6AN15v1相对表达量被沉默下调，为ddH₂O对照组的0.86倍；持续沉默4d时，CYP6AN15v1 dsRNA处理组该基因的相对表达量为ddH₂O对照组的0.11倍，然而处理6d CYP6AN15v1表达量上调（内参基因为Actin、EF1α、TUB，引物见表1），可能沉默效果消失。

表 1 RNAi 干扰中的相关引物

实施例 4 ： CYP6 AN15v1 基因沉默对舞毒蛾的生长发育的影响

将实施例2中体外合成的dsRNA微量注射入舞毒蛾3龄幼虫体内，测定其对舞毒蛾幼虫的营养利用影响。更具体的地说，是将舞毒蛾3龄幼虫经饥饿处理12 h后，将1μg的ddH₂O、CYP6AN15v1dsRNA、GFPdsRNA分别注入到上述饥饿处理的舞毒蛾3龄幼虫体内，每组处理20头，正常饲喂8d，每天按时称量幼虫虫体的鲜重，记录其死亡情况。参照Waldbauer（2011）的方法计算其各营养指标：相对生长率（RGR）=（D-C）/[(C+D)/2]×100%；相对取食量（RCR）=（A-B）/[(C+D)/2];食物利用率（ECI）=（D-C）/(A-B-E)×100%；近似消化率（AD）=（A-B-E）/（A-B）×100%。其中A为试验前饲料干重；B为试验后饲料干重；C为试验前幼虫干重；D为试验后幼虫干重；E为幼虫粪便干重；体重累计增长率（%）=（注射后的体重-注射前的体重）×100/注射前的体重。

由表2可知：经微量注射CYP6AN15v1dsRNA实验组与对照组GFP dsRNA和ddH₂O相比，经过8 d正常饲喂后，舞毒蛾幼虫在相对生长率、相对取食量、食物利用率、食物转化率、近似消化率上两者差异显著（P < 0.05），而外源基因GFP dsRNA与ddH₂O差异不显著（除相对生长率外）。其中，微量注射 CYP6AB37基因dsRNA处理组的相对生长率、相对取食量和近似消化率均显著高于GFP dsRNA对照组，增长率分别为44.31%、11.54%和4.42%；而食物利用率和食物转化率均显著低于对照组（GFP dsRNA和ddH₂O），表明舞毒蛾幼虫生长发育出现障碍，干扰了正常的生理功能。表型见图1。

表 2 舞毒蛾 CYP6AN15v1 基因沉默对舞毒蛾幼虫营养利用的影响

图5显示CYP6AN15v1基因沉默导致舞毒蛾幼虫体重增长缓慢，6 d幼虫体重累计增长率均低于GFP dsRNA和ddH₂O对照组；而7d~8d，幼虫体重增长率低于对照ddH₂O，而高于 GFP dsRNA对照组。

表 3 舞毒蛾 CYP6AN15v1 基因沉默对舞毒蛾幼虫死亡率及龄期的影响

由表3可知，经微量注射CYP6 AN15v1 dsRNA的幼虫实验组8d后的累计死亡率达40%，说明该功能基因沉默对舞毒蛾幼虫有致死作用；实验组的幼虫4龄龄期小于对照组ddH₂O，与注射外源基因GFPdsRNA组的4龄周期相同。

实施例 5 ： CYP6AN15v1 基因沉默影响舞毒蛾的幼虫对有机磷类杀虫剂氧化乐果的敏感性性

将实施例2中体外合成的dsRNA微量注射入舞毒蛾3龄幼虫体内，并将注射后的幼虫置于混有40 mg/L的氧化乐果饲料中，48 h后分别记录对照组与处理组舞毒蛾的死亡率作为判断CYP6AN15v1dsRNA是否能够提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂氧化乐果的敏感性。更具体的地说，是将舞毒蛾3龄幼虫经饥饿处理12 h后，将1μg的ddH₂O、CYP6AN15v1dsRNA、GFPdsRNA分别注入到上述饥饿处理的舞毒蛾3龄幼虫体内，然后放入混有杀虫剂饲料中饲喂，48 h统计死亡率。

从图6可以看出，经微量注射CYP6AN15v1dsRNA实验组舞毒蛾幼虫48 h时死亡率为60.00%，其死亡率比对照组ddH₂O、GFPdsRNA分别高出26.67%和40.00%，表现出对氧化乐果高敏感性。

序列表

<110> 东北林业大学

<120> 舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA及其在无公害防治中的应用

<160>3

<210> 1　

<211> 2224

<212> DNA

<213> CYP6AN15v1基因核酸序列

<220>

<221> CDS

<222> (386)...(1924)

<400> 1

CGATTCCAAT TGTTAAATTT ATAACCTTAC GTAATGAAAG TCAAAACTTA ATTTTTATTA 60

CCTTTTATTT CGAAATAAAT TTCTAATTAG TACAAATAGA ATTCAGGGTT CAGTGATTGT 120

TTTTATGTTT TTTACAGATT CTTTTTACCT TTACACCTAA ATACACGGGC GTTCTTCAGA 180

TAAGCAAAGC GTATTACATC ACGGCCTAAC TGTTTGACAT AGAATTTTAT TTCTAGTTTT 240

CTTTTATACC AGTGATATTA CCTACTTACA TGGCTTCATA AATTTTTATG TTATCCACGC 300

AAAAGAAAGT GAAATCGGCA CATTGTATGA GAGTAACGAA CGGTAGGTTG TAACTTATTG 360

ATAGTCAACA ACAGTCAAGA GAAACATGTT CGCTCTATTA CTACTGTTTC TACTACTATT 420

AGTATACGTA TACTTCACTC GAAACCATAA TTATTGGAAG AAACGTAATG TGAAACATGA 480

GGAACCAATA CCATTATTCG GTAATATGTA TCGAAATGTA ATGGGCAAAC AAAGCATAAT 540

TCAAATAGCG ACGGAATTAT ATGAGAAATA TCCGGATGAA AAAGTTGTTG GTTTTTATCG 600

TGGAACCACT CCAGAGCTGA TAATTCGTGA CTTAGATCTC GTCAGAAAAA TTATCAGTGT 660

AGACTTTGCT TACTTTTATC CTCGGGGACT CGGTAGGAAC CCGAAAATAG AACCTTTATT 720

TATGAATCTA TTTCATGTCG ATGGTGATAT ATGGCGATTA TTGAGGCAAC GTTTAACACC 780

GGCGTTTACA ACAGCAAAAC TGAAAAGAAT GTTCCCTTTG GTGGTTGAAT GCGCAGAAAA 840

ATTACAACTT GTTGGAGAGA ATATTGTAAA TCAGGGTGGC GAATGTGACA TACGCGATCT 900

AATGGCACGT TTTACTACCG AATTCATTGG AGCCTGTGGT TTCGGTCTAC AATTTGACAG 960

TATCAATGAC CAAAATTCCC TGTTTAGAAA ATTTGGCAGA CTAATATTTG ATAGAAACAG 1020

ATCTTTAAAG AACATAGCAA TAGTAATTCT CTACGATTTG TTGCCACATT TTCGAACTAT 1080

TTTGCAAAAG ACTCTAGCAG AATCATACAT ATTAGATATG ACAGCAGCTA TAGTTCGCGG 1140

TGTTCGCACT GAAAGAAATA ATAAACCTTC TAATCGACAC GACTTTATAG ATCTTCTATT 1200

AGAATTAGAA GAGAAAGGTA TAATCAGAGG AGAATCAATT GAGAAGAGAA GTGATAACGG 1260

GAGTGCAATA CAAGTCGAAA TGGAAATGGA CTTTAATTGT ATGGTAGCAC AAGTAATTAT 1320

ATTTTTTGCG GCAGGTTTTG AAACATCCTC ATCTGCTACC AGTTATACAT TACATCAACT 1380

AGCTTTCCAT CAAGAAGAGC AGAAAAAAAT TCAAGATGAA ATCGATCAGG TGTTAGCTAA 1440

GTATCATAAT AAGATGAGCT ATGATTCGAT CAATGAAATG ACGCGGCTCA GGATGGCATT 1500

CAAGGAGGGT TTAAGAATGT TTCCATCCCT TGGCACACTG CATAGAGTAT GCGCTCAAAA 1560

ATATACGATA CCTGAACTCG GTATTACCAT AGATCCAGGT GTAAGAATTA TAATTCCTGT 1620

GCAAGCGATA CAGAACGATG AAAAATATTT CAAGAACCCG GCTGAGTTTA GACCGGAGAG 1680

ATTTGAAGAC AATTCTAACA CTCAAGATAA ATACTCTTAT TTGCCTTTCG GTGAAGGACC 1740

GAGAATGTGC ATCGGTGCCC GCCTGGGAGA GATGCAATCA TTAGCTGGTC TTGCTGCGCT 1800

ATTATCTAAA TTCACCGTAG AACCAGGTTC TTCTACAAAA CGAAAATTAG AAGTTAACCC 1860

TACTAGTAAT ATAGTTCAGT CTATTAAAGG AGGTCTACCT GTTAGACTGA AGCTGAGGAA 1920

ATAAAGATAT TAGTGACTCT ATATAGACAA TCATCGTCAT CCTTCCAGCC TGATATAAGA 1980

CCCGAGCGTA ACATTTGGTC TCTGGTCTCC TTGTTATAAT TTCAAGATCC CACGGAGAAT 2040

TGATACTATT ATGCGAGTCA TAGAATTTCA TTTCGTTTGA TGCTTTCCTG TATGACACCC 2100

ATGTGTTCCT AAAGTTGTAG TGACTTGTAA GATCTTACAC CGTCACTATA TAAGAATTTA 2160

TTCAGTGAAT GCGAGAGTGC CATTTTCAGA TGCTAAGATC TAAGAGTGGT AGGACCACAC 2220

TGTC 2224

<210> 2　

<211> 1536

<212> PRT

<213> CYP6AN15v1基因编码氨基酸序列

<220>

<223>

<400> 2

METPHEALAL EULEULEULE UPHELEULEU LEULEUVALT YRVALTYRPH ETHRARGASN 60

HISASNTYRT RPLYSLYSAR GASNVALLYS HISGLUGLUP ROILEPROLE UPHEGLYASN 120

METTYRARGA SNVALMETGL YLYSGLNSER ILEILEGLNI LEALATHRGL ULEUTYRGLU 180

LYSTYRPROA SPGLULYSVA LVALGLYPHE TYRARGGLYT HRTHRPROGL ULEUILEILE 240

ARGASPLEUA SPLEUVALAR GLYSILEILE SERVALASPP HEALATYRPH ETYRPROARG 300

GLYLEUGLYA RGASNPROLY SILEGLUPRO LEUPHEMETA SNLEUPHEHI SVALASPGLY 360

ASPILETRPA RGLEULEUAR GGLNARGLEU THRPROALAP HETHRTHRAL ALYSLEULYS 420

ARGMETPHEP ROLEUVALVA LGLUCYSALA GLULYSLEUG LNLEUVALGL YGLUASNILE 480

VALASNGLNG LYGLYGLUCY SASPILEARG ASPLEUMETA LAARGPHETH RTHRGLUPHE 540

ILEGLYALAC YSGLYPHEGL YLEUGLNPHE ASPSERILEA SNASPGLNAS NSERLEUPHE 600

ARGLYSPHEG LYARGLEUIL EPHEASPARG ASNARGSERL EULYSASNIL EALAILEVAL 660

ILELEUTYRA SPLEULEUPR OHISPHEARG THRILELEUG LNLYSTHRLE UALAGLUSER 720

TYRILELEUA SPMETTHRAL AALAILEVAL ARGGLYVALA RGTHRGLUAR GASNASNLYS 780

PROSERASNA RGHISASPPH EILEASPLEU LEULEUGLUL EUGLUGLULY SGLYILEILE 840

ARGGLYGLUS ERILEGLULY SARGSERASP ASNGLYSERA LAILEGLNVA LGLUMETGLU 900

METASPPHEA SNCYSMETVA LALAGLNVAL ILEILEPHEP HEALAALAGL YPHEGLUTHR 960

SERSERSERA LATHRSERTY RTHRLEUHIS GLNLEUALAP HEHISGLNGL UGLUGLNLYS 1020

LYSILEGLNA SPGLUILEAS PGLNVALLEU ALALYSTYRH ISASNLYSME TSERTYRASP 1080

SERILEASNG LUMETTHRAR GLEUARGMET ALAPHELYSG LUGLYLEUAR GMETPHEPRO 1140

SERLEUGLYT HRLEUHISAR GVALCYSALA GLNLYSTYRT HRILEPROGL ULEUGLYILE 1200

THRILEASPP ROGLYVALAR GILEILEILE PROVALGLNA LAILEGLNAS NASPGLULYS 1260

TYRPHELYSA SNPROALAGL UPHEARGPRO GLUARGPHEG LUASPASNSE RASNTHRGLN 1320

ASPLYSTYRS ERTYRLEUPR OPHEGLYGLU GLYPROARGM ETCYSILEGL YALAARGLEU 1380

GLYGLUMETG LNSERLEUAL AGLYLEUALA ALALEULEUS ERLYSPHETH RVALGLUPRO 1440

GLYSERSERT HRLYSARGLY SLEUGLUVAL ASNPROTHRS ERASNILEVA LGLNSERILE 1500

LYSGLYGLYL EUPROVALAR GLEULYSLEU ARGLYS 1536

<210> 3　

<211> 599

<212> DNA

<213>合成dsRNA序列

<220>

<223> 合成dsRNA序列

<400> 3

GGTGTTCGCA CTGAAAGAAA TAATAAACCT TCTAATCGAC ACGACTTTAT AGATCTTCTA 60

TTAGAATTAG AAGAGAAAGG TATAATCAGA GGAGAATCAA TTGAGAAGAG AAGTGATAAC 120

GGGAGTGCAA TACAAGTCGA AATGGAAATG GACTTTAATT GTATGGTAGC ACAAGTAATT 180

ATATTTTTTG CGGCAGGTTT TGAAACATCC TCATCTGCTA CCAGTTATAC ATTACATCAA 240

CTAGCTTTCC ATCAAGAAGA GCAGAAAAAA ATTCAAGATG AAATCGATCA GGTGTTAGCT 300

AAGTATCATA ATAAGATGAG CTATGATTCG ATCAATGAAA TGACGCGGCT CAGGATGGCA 360

TTCAAGGAGG GTTTAAGAAT GTTTCCATCC CTTGGCACAC TGCATAGAGT ATGCGCTCAA 420

AAATATACGA TACCTGAACT CGGTATTACC ATAGATCCAG GTGTAAGAAT TATAATTCCT 480

GTGCAAGCGA TACAGAACGA TGAAAAATAT TTCAAGAACC CGGCTGAGTT TAGACCGGAG 540

AGATTTGAAG ACAATTCTAA CACTCAAGAT AAATACTCTT ATTTGCCTTT CGGTGAAGG 599

Claims (4)

1.舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA，其特征在于所述dsRNA序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根据权利要求1所述舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA在调控舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中的应用。

3.根据权利要求2所述的舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA在抑制舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中的应用，其特征在于所述舞毒蛾为亚洲型舞毒蛾。

4.根据权利要求2所述的舞毒蛾CYP6AN15v1基因dsRNA在抑制舞毒蛾生长发育或提高舞毒蛾对有机磷类杀虫剂敏感性中的应用，其特征在于所述CYP6AN15v1基因dsRNA的注射剂量为1 μg。