CN109913480B

CN109913480B - 一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因及其应用

Info

Publication number: CN109913480B
Application number: CN201910218292.9A
Authority: CN
Inventors: 黄训兵; 王月月; 刘�文
Original assignee: Linyi University
Current assignee: Linyi University
Priority date: 2019-03-21
Filing date: 2019-03-21
Publication date: 2022-05-31
Anticipated expiration: 2039-03-21
Also published as: CN109913480A

Abstract

本发明公开了一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。根据该基因设计引物合成用于干扰尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因的dsRNA，将dsRNA导入蝗虫对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因进行RNA干扰，可显著降低蝗虫对食物的选择性和适合度，进而为害虫绿色、可持续防控提供新的方法，也为创制新型生物农药提供了技术支撑。

Description

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体的说是涉及一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因及其应用。

背景技术

农作物遭受虫害会降低生产力，危害粮食安全。传统的害虫防治方法多以化学防治为主，但过分依赖于化学农药的使用，容易引发害虫的抗性、再猖獗、残毒严重等问题，严重破坏生态环境和农产品质量安全。因此，开发并创制绿色、高效、可持续的害虫防控技术显得尤为重要。

亚洲小车蝗Oedaleus asiaticus Bey-Bienko是我国北方地区危害最为严重的优势种蝗虫之一，可取食禾本科牧草和粮食作物，喜食克氏针茅，严重破坏北方地区农牧业生产，是重要的生物灾害。目前，针对亚洲小车蝗的防控与治理多采用传统化学防控的方法，不利于农业环境的绿色、可持续发展。因此，如何利用新手段开发绿色、高效的防控技术和方法是本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)基因，利用该基因设计dsRNA对蝗虫进行RNA干扰可显著改变蝗虫的食物选择和食物适应性。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因编码的酶，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因在防控虫害中的应用。

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因在防控虫害中的应用，根据蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因设计引物合成dsRNA，对蝗虫进行RNA干扰，降低蝗虫对食物的选择性和适合度。

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因在防控虫害中的应用，以蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因为模板，以UGT-2F、UGT-2R为引物扩增得到dsRNA；UGT-2F序列如SEQ ID NO：3所示；UGT-2R序列如SEQ ID NO：4所示。

一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因在制备生物农药中的应用。

由上述技术方案可知，本发明提供了一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因，根据该基因设计引物合成用于干扰尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因的dsRNA，将dsRNA导入蝗虫对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因进行RNA干扰，可显著降低蝗虫对食物的选择性和适合度，进而为害虫绿色、可持续防控提供新的方法，也为创制新型生物农药提供了技术支撑。

附图说明

图1所示为UGT基因PCR扩增产物；

图2所示为亚洲小车蝗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT dsRNA干扰效果；

图3所示为尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT dsRNA干扰对亚洲小车蝗食物(克氏针茅)选择性的影响；

图4所示为尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT dsRNA干扰对亚洲小车蝗食物适合度的影响。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

供试虫源：野外采集4龄亚洲小车蝗蝗蝻，置于人工智能气候箱中饲养，条件如下：温度30℃，湿度80％，光照黑暗比为12h:12h，每天以采集的新鲜克氏针茅饲喂。

主要试剂及试剂盒：

分离试剂(invitrogen原装)，RNA spin column(全式金)，胶回收试剂盒(Axygen)，EX Taq DNA聚合酶(Takara)，T4DNA连接酶(Takara)，pGEM-T Easy Vector Systems(Promega)，无水乙醇、异丙醇、丙三醇等试剂均为国产分析醇。

主要仪器：超净工作台(上海博讯实业有限公司)、东胜龙ETC-811 PCR仪(北京东胜创新生物科技有限公司)、德国Sigma 3K15冷冻离心机(德国希格玛离心机有限公司)、NanoPhotometer微量分光光度计(德国IMPLEN公司)、HPX-9052 MBE数显电热培养箱(上海博讯实业有限公司)、THZ-D台式恒温振荡器(华美生化仪器厂)、漩涡振荡器QL-901(海门市其林贝尔仪器制造)、高压灭菌锅YXQ-LS-50SII(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。

实施例1亚洲小车蝗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶UGT编码基因的获得

1、亚洲小车蝗总RNA的提取

采用

分离试剂提取亚洲小车蝗样品的总RNA。具体步骤如下：

1)匀浆器置于冰上，加入1mL

分离试剂和100-200mg亚洲小车蝗组织，研磨。

2)将匀浆液转移至1.5mL离心管中，室温静置5min，4℃条件下13000r离心5min。

3)将上清转移至干净的1.5mL离心管中，加入200μL氯仿，漩涡震荡15s。室温放置5min，4℃条件下13000r离心10min。

4)吸取400μL上清转移至新的1.5mL离心管中，加入200μL氯仿，漩涡震荡30s，室温放置5min，4℃条件下13000r离心10min。

5)吸取300μL上清，加入300μL异丙醇，漩涡震荡30s，转移至RNA spin column中，冰上静置10min。

6)4℃，13000r离心2min，弃滤液。

7)加入600μL RNA washsolution，吸打使沉降物洗涤，4℃，13000r离心2min，弃滤液。再次加入600μL RNA washsolution，吸打使沉降物洗涤，4℃，13000r离心2min，弃滤液。4℃，13000r空离3min，除去多余乙醇，空气吹干3min。

8)更换一个新的收集管，向RNA spin column中加入50μL 65℃预热的RNase-free-water，余热下热置5min，4℃，13000r离心3min。

9)收集滤出液，用NanoPhotometer微量分光光度计检测RNA浓度和OD260/280值，确认RNA质量。同时，取2μL提取的RNA，琼脂糖凝胶电泳检测，剩余RNA储存于-20℃备用。

2、cDNA反转录

用PrimeScript^TM 1st strand cDNA Synthesis Kit反转录试剂盒反转录获得cDNA。具体步骤如下：

1)配置10μL体系：Oligo dT Primer(50μM)1μL、dNTP Mixture(10mM each)1μL、total RNA<5μL、RNase Free dH₂O补足体系至10μL。

2)65℃保温5min后，冰上迅速冷却。

3)配置20μL反应液：5×PrimeScript Buffer 4μL、RNase Inhibitor(400U/μL)0.5μL(20units)、PrimeScript RTase(200U/μL)1μL(200units)、RNase Free dH₂O补足体系至20μL。

4)缓慢混匀。

5)42℃保温30-60min。

6)95℃保温5min，使酶失活，冰上放置，-20℃保存cDNA。

3、亚洲小车蝗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶UGT编码基因的获得

1)引物设计

根据前期获得的亚洲小车蝗转录组得到UGT基因片段序列，其核苷酸序列如SEQID NO:1所示，其编码的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。设计引物如下：

UGT-F：TAAAATGCAGAATAGATGGTCAT(SEQ ID NO:5)；

UGT-R：ATGCCTGCAGGTCGACTGTTTGG(SEQ ID NO:6)。

2)PCR反应

以亚洲小车蝗cDNA为模板，以引物UGT-F/UGT-R进行PCR扩增，得到PCR产物。

PCR反应体系如下：cDNA模板1μL、dNTP 4μL、10×Buffer 5μL、UGT-F 1μL、UGT-R 1μL、Taq酶0.25μL、ddH₂O 38μL。

PCR反应条件如下：95℃3min；95℃30s，55℃30s，72℃1.5min，35个循环；72℃10min；4℃保存。

3)PCR产物回收、克隆、测序

3-1)将PCR产物在TAE配制的1％的琼脂糖凝胶上进行电泳(图1)，当目标带分离较好时，用刀片切下目标带所在的胶块放入无菌的离心管中。再用胶回收试剂盒(Axygen)回收纯化目标带，回收纯化过程参照试剂盒说明书进行。

3-2)PCR产物回收后连接pGEM-T Easy载体，得到重组载体。连接体系如下：T4 DNAligase 1μL、2×buffer 5μL、pGEM-T Easy 1μL、PCR回收产物3μL。连接条件：室温下连接6个小时。

3-3)感受态细胞的制备与转化

在1.5mL离心管中，加入33.3μL Trans1-t1感受态细胞，冰上放置15min，42℃水浴90s，冰上放置10min。在每个1.5mL离心管中加入500μL的液体LB培养液，37℃，200rpm摇菌2h。摇菌后，吸取100μL菌液至含1‰AMP的LB固体培养基中，37℃培养过夜。挑选单菌落于2mL的离心管中，管中添加1mL含1‰AMP的LB液体培养基，37℃，200rpm摇菌3-6h，观察生长情况。

3-4)菌液PCR

对3-3)中的菌液进行PCR验证，菌液PCR反应体系如下：菌液1μL、dNTP 4μL、10×Buffer 5μL、UGT-F 1μL、UGT-R 1μL、Taq酶0.25μL、ddH₂O 38μL。

反应条件如下：95℃3min；95℃30s，55℃30s，72℃1min30s，35个循环；72℃10min；4℃保存。

将阳性克隆菌株送到上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定并对测序结果进行分析。

测序结果表明：PCR扩增得到大小为1561bp的DNA片段。

实施例2 dsRNA的合成及其在防治害虫中的应用

1、dsRNA的合成

采用T7 RiboMAX^TM Express RNAi System试剂盒合成dsRNA。具体步骤如下：

1)dsRNA引物的合成

根据已克隆出的基因片段设计引物，在引物的5'端引入T7启动子。引物序列如下：

UGT-2F：5’-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGCTGTTCTTCGCTCTAAACC-3’(SEQ ID NO:3)；

UGT-2R：5’-GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGGCAAATGTATTCCACCAAC-3’(SEQ ID NO:4)。

2)DNA模板的制备

用试剂盒提取实施例1中的阳性克隆菌株菌液质粒，以该质粒为模板，采用UGT-2F和UGT-2R进行PCR扩增，得到含有T7启动子序列的目的片段，大小520bp。

PCR反应体系如下：质粒1μL、dNTP 4μL、10×Buffer 5μL、UGT-2F 1μL、UGT-2R 1μL、Taq酶0.25μL、ddH₂O 38μL。

PCR反应条件如下：95℃3min；95℃30s，55℃30s，72℃1min，35个循环；72℃10min；4℃保存。

回收PCR产物，并用NanoPhotometer微量分光光度计检测目标DNA浓度，回收浓度需大于150ng/μL。

3)dsRNA的合成

采用T7 RiboMAX ^TM Express RNAi System试剂盒将回收的DNA体外转录合成尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT的dsRNA，并用NanoPhotometer微量分光光度计检测dsRNA浓度，dsRNA浓度需要大于1000ng/μL。再将dsRNA浓度调整为3ng/μL，得到dsRNA溶液(溶剂为Nucleause free water)。

本发明获得的亚洲小车蝗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT的dsRNA为双链RNA，由正义链和反义链组成。上述亚洲小车蝗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT的dsRNA也可通过人工合成的方法获得。将亚洲小车蝗尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因UGT的dsRNA命名为dsUGT。

4)对照GFP的dsRNA

按照上述方法合成对照GFP的dsRNA，将对照GFP的dsRNA命名为dsGFP，得到浓度为1ng/μL的dsGFP溶液。对照GFP的dsRNA为双链RNA，由正义链和反义链组成。合成GFPdsRNA的引物如下：

GFP-1F：5’-TAATACGACTCACTATAGGTACGACTCACTATAGGAGTAAAGG-3’(SEQ ID NO:7)；

GFP-1R：5’-TAATACGACTCACTATAGGTAGGTTTGTATAGTTCATCCATACC-3’(SEQ ID NO:8)。

2、dsRNA在防治害虫中的应用

dsRNA注射导入亚洲小车蝗，具体步骤如下：采用10μL微量注射器吸取5μL浓度为3ng/μL的dsUGT溶液(实验组)和dsGFP溶液(对照组)，分别从亚洲小车蝗腹部第2腹节和第3腹节节间膜注射进入，注意注射器针头和腹部保持平行，避免损伤蝗虫内部器官组织；设置注射5μLNucleause free water的处理作为空白对照组(CK)。

1)实时荧光定量PCR

注射后36h提取实验组和对照组的亚洲小车蝗虫体的总RNA，Takara反转录试剂盒合成cDNA，以actin基因作为内参基因，检测UGT基因表达量。

UGT基因定量PCR引物序列如下：

F：CTCAGTGCAGTAGGACATGATG(SEQ ID NO:9)；

R：GCTACATATGCTGGACTATCAGG(SEQ ID NO:10)；

actin基因引物序列如下：

F’：GTTACAAACTGGGACGACAT(SEQ ID NO:11)；

R’：AGAAAGCACAGCCTGAATAG(SEQ ID NO:12)。

结果表明：与对照组(dsGFP对照组、空白对照组CK)相比，dsUGT实验组的亚洲小车蝗中的UGT基因的表达量显著降低，说明dsUGT成功干扰了亚洲小车蝗中UGT基因的表达。dsGFP对照组和空白CK对照组结果无显著性差异(图2)。

2)亚洲小车蝗对克氏针茅的食物选择性观察

将蝗虫饲养罩笼里放入克氏针茅、羊草、隐子草和冷蒿4种食物，每种食物各90g，dsUGT注射100头亚洲小车蝗蝗蝻，24h后放入罩笼，记录放入食物1小时内停留在每种植物上的亚洲小车蝗数量。亚洲小车蝗食物选择性指数为取食某一寄主植物的亚洲小车蝗数量/对不同寄主植物取食的亚洲小车蝗总数。

结果如图3所示，UGT基因RNAi后的亚洲小车蝗对克氏针茅的食物选择性与对照组(dsGFP对照组和空白对照组)有显著差异(P＜0.05)，UGT基因干扰后的亚洲小车蝗对克氏针茅的食物选择性显著降低。结果表明UGT基因RNAi显著降低了亚洲小车蝗对克氏针茅的食物选择。

3)亚洲小车蝗对克氏针茅的食物适合度观察

重复5次，每重复dsUGT注射处理16头4龄亚洲小车蝗蝗蝻。注射后放入智能人工气候箱中以90g克氏针茅进行饲养，饲养条件如下：温度30℃，湿度80％，光照黑暗比为12h：12h，观察并统计亚洲小车蝗存活率、体重、生长速率及对克氏针茅的食物适合度变化。初始蝗虫数量为S0＝16，各处理组存活数S，存活率＝S/S0；实验前各处理组平均体重为A1，进入成虫阶段后各处理组平均体重为A2，体重增加量＝A2-A1；生长速率＝(A2-A1)/D；食物适合度＝(S/S0)×[(A2-A1)/D]，式中D为天数。

结果如图4所示，UGT基因RNAi后的亚洲小车蝗对克氏针茅的食物适合度与对照组(dsGFP对照组和空白对照组)有显著差异(P＜0.05)，UGT基因干扰后的亚洲小车蝗食物适合度显著低于对照组，dsGFP对照组和空白对照组结果无显著性差异。结果表明UGT基因RNAi显著降低了亚洲小车蝗对克氏针茅的食物适合度。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

序列表

<110> 临沂大学

<120> 一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因及其应用

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1609

<212> DNA

<213> Oedaleus asiaticus

<400> 1

gtgattcgag ctcggtaccc ggggatcctc tagagattta aaatgcagaa tagatggtca 60

tctcaacttc ttctattgtt cttactggtg gtatggtcaa caaaagaagt aaaagctgga 120

agaatacttg ttttatggcc acacatcggg aaaagtcatt tcatggcatt tgaatcttac 180

ttccgttacc tcagtgcagt aggacatgat gttgttgtat acagccactt tccattaaaa 240

gacccacccc ctaattttac agatgtaagt ctgtttggct caagggatct tgatttttcc 300

acaaatgcta ttccagcata ttttgcactt ttgcctttca aggcaccttt tactgcattt 360

tccttagggt tggggggtgt tgtccagtgt gcagctgttc ttcgctctaa accaatgcaa 420

gaacttatta aatctgatga aaaatttgat cttgttatta cagagctttt caactcagac 480

tgtgtactgc cttttgtgca caaatttaga gctccccata tagcattaag ctcatgtgtc 540

cctcttccaa catcccttga ccgattcgga gatcctgata gtccagcata tgtagcaaat 600

atgtttctgc cactttcaag taaaatgaac ttctttgaga gagtttcaaa cactatcatg 660

tatttatggt gtagggcagt attttacatt gcatatgata taccttcaga attagtggct 720

tggtacaatt ttggtctatc cttcccaaga cttactacta tagcatacaa caccagtctg 780

ctgctgacca atacacatcc tgttataaat tctccaagac catatgtacc aaatataatt 840

gaagttggtg gaatacattt gcccaaagtc agaaaacttc cacaggacat agcaaagttt 900

atggacgaag cagaacatgg tgttgtgtat gttagctttg gttcactcct gaaaatagat 960

tcattgccag atgaaaaacg tgatgcaatg gtccatgcat ttgcacgtct taaacaacgt 1020

gtactttgga gatggtcatc tgaattgtat gaacgtccag caaatctcat gacaaaatct 1080

tggatacctc agtttgatgt tctcaatcat ccaaaagtaa aagcttttgt aactcacaat 1140

ggattattgg gcacaattga agccatacat aatgctgttc ctatggtgac tgttcctttt 1200

tttggtgatc aagatcacaa tgcaaagaat atagtacggc tagggatagg tattgatttg 1260

tcgtacaaca atttaacaat ggagaacctt ctgaacgctt tgaatcaagt catctacaat 1320

gtaagttata aggagaatgc aatccagaca tctaagatat ttcgtgatcg tccaaaatca 1380

ccgatggaaa ccgcagccta ctggacggaa tatattcttc gacatggggg tgcaccacat 1440

ttacaatcag cagctaaaga actcaatata ttccaatacc ttcttttgga tgtcattgct 1500

gtccttttgg tttttagtat aattgtttta gcaatccttg gttattgtgt taaaattatg 1560

ctttccttct tacggcccaa acagtcgacc tgcaggcatg caagctggc 1609

<210> 2

<211> 535

<212> PRT

<213> Oedaleus asiaticus

<400> 2

Val Ile Arg Ala Arg Tyr Pro Gly Ile Leu Arg Phe Lys Met Gln Asn

1 5 10 15

Arg Trp Ser Ser Gln Leu Leu Leu Leu Phe Leu Leu Val Val Trp Ser

20 25 30

Thr Lys Glu Val Lys Ala Gly Arg Ile Leu Val Leu Trp Pro His Ile

35 40 45

Gly Lys Ser His Phe Met Ala Phe Glu Ser Tyr Phe Arg Tyr Leu Ser

50 55 60

Ala Val Gly His Asp Val Val Val Tyr Ser His Phe Pro Leu Lys Asp

65 70 75 80

Pro Pro Pro Asn Phe Thr Asp Val Ser Leu Phe Gly Ser Arg Asp Leu

85 90 95

Asp Phe Ser Thr Asn Ala Ile Pro Ala Tyr Phe Ala Leu Leu Pro Phe

100 105 110

Lys Ala Pro Phe Thr Ala Phe Ser Leu Gly Leu Gly Gly Val Val Gln

115 120 125

Cys Ala Ala Val Leu Arg Ser Lys Pro Met Gln Glu Leu Ile Lys Ser

130 135 140

Asp Glu Lys Phe Asp Leu Val Ile Thr Glu Leu Phe Asn Ser Asp Cys

145 150 155 160

Val Leu Pro Phe Val His Lys Phe Arg Ala Pro His Ile Ala Leu Ser

165 170 175

Ser Cys Val Pro Leu Pro Thr Ser Leu Asp Arg Phe Gly Asp Pro Asp

180 185 190

Ser Pro Ala Tyr Val Ala Asn Met Phe Leu Pro Leu Ser Ser Lys Met

195 200 205

Asn Phe Phe Glu Arg Val Ser Asn Thr Ile Met Tyr Leu Trp Cys Arg

210 215 220

Ala Val Phe Tyr Ile Ala Tyr Asp Ile Pro Ser Glu Leu Val Ala Trp

225 230 235 240

Tyr Asn Phe Gly Leu Ser Phe Pro Arg Leu Thr Thr Ile Ala Tyr Asn

245 250 255

Thr Ser Leu Leu Leu Thr Asn Thr His Pro Val Ile Asn Ser Pro Arg

260 265 270

Pro Tyr Val Pro Asn Ile Ile Glu Val Gly Gly Ile His Leu Pro Lys

275 280 285

Val Arg Lys Leu Pro Gln Asp Ile Ala Lys Phe Met Asp Glu Ala Glu

290 295 300

His Gly Val Val Tyr Val Ser Phe Gly Ser Leu Leu Lys Ile Asp Ser

305 310 315 320

Leu Pro Asp Glu Lys Arg Asp Ala Met Val His Ala Phe Ala Arg Leu

325 330 335

Lys Gln Arg Val Leu Trp Arg Trp Ser Ser Glu Leu Tyr Glu Arg Pro

340 345 350

Ala Asn Leu Met Thr Lys Ser Trp Ile Pro Gln Phe Asp Val Leu Asn

355 360 365

His Pro Lys Val Lys Ala Phe Val Thr His Asn Gly Leu Leu Gly Thr

370 375 380

Ile Glu Ala Ile His Asn Ala Val Pro Met Val Thr Val Pro Phe Phe

385 390 395 400

Gly Asp Gln Asp His Asn Ala Lys Asn Ile Val Arg Leu Gly Ile Gly

405 410 415

Ile Asp Leu Ser Tyr Asn Asn Leu Thr Met Glu Asn Leu Leu Asn Ala

420 425 430

Leu Asn Gln Val Ile Tyr Asn Val Ser Tyr Lys Glu Asn Ala Ile Gln

435 440 445

Thr Ser Lys Ile Phe Arg Asp Arg Pro Lys Ser Pro Met Glu Thr Ala

450 455 460

Ala Tyr Trp Thr Glu Tyr Ile Leu Arg His Gly Gly Ala Pro His Leu

465 470 475 480

Gln Ser Ala Ala Lys Glu Leu Asn Ile Phe Gln Tyr Leu Leu Leu Asp

485 490 495

Val Ile Ala Val Leu Leu Val Phe Ser Ile Ile Val Leu Ala Ile Leu

500 505 510

Gly Tyr Cys Val Lys Ile Met Leu Ser Phe Leu Arg Pro Lys Gln Ser

515 520 525

Thr Cys Arg His Ala Ser Trp

530 535

<210> 3

<211> 45

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 3

ggatcctaat acgactcact atagggctgt tcttcgctct aaacc 45

<210> 4

<211> 45

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 4

ggatcctaat acgactcact ataggggcaa atgtattcca ccaac 45

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 5

taaaatgcag aatagatggt cat 23

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 6

atgcctgcag gtcgactgtt tgg 23

<210> 7

<211> 43

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 7

taatacgact cactataggt acgactcact ataggagtaa agg 43

<210> 8

<211> 44

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 8

taatacgact cactataggt aggtttgtat agttcatcca tacc 44

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 9

ctcagtgcag taggacatga tg 22

<210> 10

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 10

gctacatatg ctggactatc agg 23

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 11

gttacaaact gggacgacat 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial

<400> 12

agaaagcaca gcctgaatag 20

Claims

1.一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

2.根据权利要求1所述的一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因编码的酶，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求1所述的一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因合成的dsRNA在防控亚洲小车蝗虫害中的应用，其特征在于，所述dsRNA用于对蝗虫进行RNA干扰，降低蝗虫对克氏针茅的选择性和适合度。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，以所述蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因为模板，以UGT-2F、UGT-2R为引物扩增得到所述dsRNA；所述UGT-2F序列如SEQ ID NO：3所示；所述UGT-2R序列如SEQ ID NO：4所示。

5.根据权利要求1所述的一种蝗虫尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因合成的干扰所述基因的dsRNA在制备生物农药中的应用。