JP2006197941A - 界面活性剤およびプロテアーゼを使用して核酸を単離するための組成物、方法およびキット - Google Patents
界面活性剤およびプロテアーゼを使用して核酸を単離するための組成物、方法およびキット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006197941A JP2006197941A JP2006074844A JP2006074844A JP2006197941A JP 2006197941 A JP2006197941 A JP 2006197941A JP 2006074844 A JP2006074844 A JP 2006074844A JP 2006074844 A JP2006074844 A JP 2006074844A JP 2006197941 A JP2006197941 A JP 2006197941A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- certain embodiments
- surfactant
- proteinase
- tween
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【解決手段】生物学的サンプルから核酸を得て、そして該核酸を固相に結合させるための方法であって、以下:該生物学的サンプルに破壊緩衝液を接触させる工程であって、該破壊緩衝液は、プロテアーゼおよびカチオン性界面活性剤を含む、工程;該カチオン性界面活性剤を実質的に中和する工程;ならびに該核酸を固相に結合させる工程、を包含する方法を提供することによって、上記課題が解決された。
【選択図】なし
Description
特定の実施形態において、生物学的サンプルからの核酸の遊離のための組成物が、提供される。特定の実施形態において、この組成物は、少なくとも1つのカチオン性界面活性剤、少なくとも1つのプロテアーゼ、および緩衝液を含む。
本発明においては、以下が提供される。
(項目1) 生物学的サンプルから核酸を得て、そして該核酸を固相に結合させるための方法であって、以下:
該生物学的サンプルに破壊緩衝液を接触させる工程であって、該破壊緩衝液は、以下:
プロテアーゼ;および
カチオン性界面活性剤、
を含む、工程;
該カチオン性界面活性剤を実質的に中和する工程;ならびに
該核酸を固相に結合させる工程、
を包含する、方法。
(項目2) 項目1に記載の方法であって、前記緩衝剤のpHがpH8よりも上昇される場合に、前記カチオン性界面活性剤が沈殿しない、方法。
(項目3) 項目1に記載の方法であって、前記カチオン性界面活性剤を実質的に中和する工程が、該カチオン性界面活性剤を除去することを包含する、方法。
(項目4) 項目1に記載の方法であって、前記カチオン性界面活性剤を実質的に中和する工程が、該カチオン性界面活性剤を実質的に中和する第2の界面活性剤を添加することを包含する、方法。
(項目5) 項目4に記載の方法であって、前記界面活性剤が、セチルトリメチルアンモニウムブロミド(CTAB)、セチルトリメチルアンモニウムクロリド(CTACl)、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド(TTAB)、テトラデシルトリメチルアンモニウムクロリド(TTACl)、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド(DTAB)、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド(DTACl)、ドデシルエチルジメチルアンモニウムブロミド(DEDTAB)、デシルトリメチルアンモニウムブロミド(D10TAB)、およびドデシルトリフェニルホスホニウムブロミド(DTPB)からなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目6) 塩を添加する工程をさらに包含する、項目4に記載の方法。
(項目7) 項目6に記載の方法であって、前記塩が、NaBr、NaI、NaSCN、LiCl、LiBr、LiI、GuHClおよびGuSCNからなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目8) 項目6に記載の方法であって、前記塩が、CaCl2であり、そして少なくとも20mMの濃度で存在する、方法。
(項目9) 前記第2の界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、項目4に記載の方法。
(項目10) 項目9に記載の方法であって、前記非イオン性界面活性剤が、t−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール(Triton X−100)、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween 21)、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート(Tween 40)、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート(Tween 60)、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(Tween 80)、ポリオキシエチレンソルビタンモノトリオレエート(Tween 85)、(オクチルフェノキシ)ポリエトキシエタノール(IGEPAL CA−630)、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル(Brij 30)、およびソルビタンモノラウレート(Span 20)からなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目11) 前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween 20)である、項目9に記載の方法。
(項目12) 前記Tween 20が、少なくとも4% w/wの濃度で存在する、項目11に記載の方法。
(項目13) 前記Tween 20が、20% w/wの濃度で存在する、項目12に記載の方法。
(項目14) 前記プロテアーゼが、サブチリシン、サブチラーゼ、およびアルカリセリンプロテアーゼからなる群の少なくとも1つから選択される、項目1に記載の方法。
(項目15) 項目14に記載の方法であって、前記プロテアーゼが、プロテイナーゼK、プロテイナーゼR、プロテイナーゼT、サブチリシンDY、Streptomyces griseus由来のアルカリセリンプロテアーゼ、Bacillus lichenformis由来のアルカリセリンプロテアーゼ、ディスパーゼ、サブチリシンCalsberg、サブチロペプチダーゼA、およびサーモリシンからなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目16) 前記プロテアーゼが、熱安定性プロテアーゼである、項目1に記載の方法。
(項目17) 項目16に記載の方法であって、前記熱安定性プロテアーゼが、Thermus Rt41AおよびBacillus thermoproteolyticus rokkoからなる群の少なくとも1つから選択される生物から単離される、方法。
(項目18) 前記破壊緩衝液が、リボヌクレアーゼインヒビターをさらに含む、項目4に記載の方法。
(項目19) 項目18に記載の方法であって、前記リボヌクレアーゼインヒビターが、バナジレートリボヌクレオシド複合体、フェニルグリオキサール、p−ヒドロキシフェニルグリオキサール、ポリアミン、スペルミジン、9−アミノアクリジン、ヨードアセテート、ベントナイト、ポリ[2’−O−(2,4−ジニトロフェニル)]ポリ(アデニル酸)、硫酸亜鉛、ブロモピルベート、ホルムアミド、銅、および亜鉛からなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目20) 前記リボヌクレアーゼインヒビターが、アウリントリカルボン酸である、項目18に記載の方法。
(項目21) 前記アウリントリカルボン酸が、10μMの濃度で存在する、項目20に記載の方法。
(項目22) デオキシリボヌクレアーゼインヒビターを添加する工程をさらに包含する、項目4に記載の方法。
(項目23) 前記デオキシリボヌクレアーゼインヒビターが、二価カチオンキレート剤を含む、項目22に記載の方法。
(項目24) 前記二価カチオンキレート剤が、EDTA、EGTAおよびDPTAからなる群の少なくとも1つから選択される、項目23に記載の方法。
(項目25) 生物学的サンプルから核酸を得て、そして該核酸を固相に結合させるための方法であって、以下:
該生物学的サンプルに破壊緩衝液を接触させる工程であって、該破壊緩衝液は、以下:
プロテアーゼ;および
カチオン性界面活性剤、
を含む、工程;ならびに
該核酸を固相に結合させる工程、
を包含する、方法。
(項目26) 項目25に記載の方法であって、前記カチオン性界面活性剤が、セチルトリメチルアンモニウムブロミド(CTAB)、セチルトリメチルアンモニウムクロリド(CTACl)、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド(TTAB)、テトラデシルトリメチルアンモニウムクロリド(TTACl)、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド(DTAB)、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド(DTACl)、ドデシルエチルジメチルアンモニウムブロミド(DEDTAB)、デシルトリメチルアンモニウムブロミド(D10TAB)、およびドデシルトリフェニルホスホニウムブロミド(DTPB)からなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目27) 塩を添加する工程をさらに包含する、項目25に記載の方法。
(項目28) 項目27に記載の方法であって、前記塩が、NaBr、NaI、NaSCN、LiCl、LiBr、LiI、GuHClおよびGuSCNからなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目29) 項目27に記載の方法であって、前記塩が、CaCl2であり、そして少なくとも20mMの濃度で存在する、方法。
(項目30) 前記プロテアーゼが、サブチリシン、サブチラーゼ、およびアルカリセリンプロテアーゼからなる群の少なくとも1つから選択される、項目25に記載の方法。
(項目31) 項目30に記載の方法であって、前記プロテアーゼが、プロテイナーゼK、プロテイナーゼR、プロテイナーゼT、サブチリシンDY、Streptomyces griseus由来のアルカリセリンプロテアーゼ、Bacillus lichenformis由来のアルカリセリンプロテアーゼ、ディスパーゼ、サブチリシンCalsberg、サブチロペプチダーゼA、およびサーモリシンからなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目32) 前記プロテアーゼが、熱安定性プロテアーゼである、項目25に記載の方法。
(項目33) 項目32に記載の方法であって、前記熱安定性プロテアーゼが、Thermus Rt41AおよびBacillus thermoproteolyticus rokkoからなる群の少なくとも1つから選択される生物から単離される、方法。
(項目34) 前記破壊緩衝液が、リボヌクレアーゼインヒビターをさらに含む、項目25に記載の方法。
(項目35) 項目34に記載の方法であって、前記リボヌクレアーゼインヒビターが、バナジレートリボヌクレオシド複合体、フェニルグリオキサール、p−ヒドロキシフェニルグリオキサール、ポリアミン、スペルミジン、9−アミノアクリジン、ヨードアセテート、ベントナイト、ポリ[2’−O−(2,4−ジニトロフェニル)]ポリ(アデニル酸)、硫酸亜鉛、ブロモピルベート、ホルムアミド、銅、および亜鉛からなる群の少なくとも1つから選択される、方法。
(項目36) 前記リボヌクレアーゼインヒビターが、アウリントリカルボン酸である、項目34に記載の方法。
(項目37) 前記アウリントリカルボン酸が、10μMの濃度で存在する、項目36に記載の方法。
(項目38) デオキシリボヌクレアーゼインヒビターを添加する工程をさらに包含する、項目25に記載の方法。
(項目39) 前記デオキシリボヌクレアーゼインヒビターが、二価カチオンキレート剤を含む、項目38に記載の方法。
(項目40) 前記二価カチオンキレート剤が、EDTA、EGTAおよびDPTAからなる群の少なくとも1つから選択される、項目39に記載の方法。
(項目41) キットであって、以下:
プロテアーゼ;
カチオン性界面活性剤;および
第2の界面活性剤
を備え、該第2の界面活性剤が、該カチオン性界面活性剤を実質的に中和する、キット。
(項目42) 項目41に記載のキットであって、前記緩衝剤のpHがpH8よりも上昇される場合に、前記カチオン性界面活性剤が沈殿しない、キット。
(項目43) 項目41に記載のキットであって、前記カチオン性界面活性剤が、セチルトリメチルアンモニウムブロミド(CTAB)、セチルトリメチルアンモニウムクロリド(CTACl)、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロミド(TTAB)、テトラデシルトリメチルアンモニウムクロリド(TTACl)、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド(DTAB)、ドデシルトリメチルアンモニウムクロリド(DTACl)、ドデシルエチルジメチルアンモニウムブロミド(DEDTAB)、デシルトリメチルアンモニウムブロミド(D10TAB)、およびドデシルトリフェニルホスホニウムブロミド(DTPB)からなる群の少なくとも1つから選択される、キット。
(項目44) 前記プロテアーゼが、サブチリシン、サブチラーゼ、およびアルカリセリンプロテアーゼからなる群の少なくとも1つから選択される、項目41に記載のキット。
(項目45) 項目44に記載のキットであって、前記プロテアーゼが、プロテイナーゼK、プロテイナーゼR、プロテイナーゼT、サブチリシンDY、Streptomyces griseus由来のアルカリセリンプロテアーゼ、Bacillus lichenformis由来のアルカリセリンプロテアーゼ、ディスパーゼ、サブチリシンCalsberg、サブチロペプチダーゼA、およびサーモリシンからなる群の少なくとも1つから選択される、キット。
(項目46) 前記プロテアーゼが、熱安定性プロテアーゼである、項目41に記載のキット。
(項目47) 項目46に記載のキットであって、前記熱安定性プロテアーゼが、Thermus Rt41AおよびBacillus thermoproteolyticus rokkoからなる群の少なくとも1つから選択される生物から単離される、キット。
(項目48) リボヌクレアーゼインヒビターをさらに備える、項目41に記載のキット。
(項目49) 項目48に記載のキットであって、前記リボヌクレアーゼインヒビターが、バナジレートリボヌクレオシド複合体、フェニルグリオキサール、p−ヒドロキシフェニルグリオキサール、ポリアミン、スペルミジン、9−アミノアクリジン、ヨードアセテート、ベントナイト、ポリ[2’−O−(2,4−ジニトロフェニル)]ポリ(アデニル酸)、硫酸亜鉛、ブロモピルベート、ホルムアミド、銅、および亜鉛からなる群の少なくとも1つから選択される、キット。
(項目50) 前記リボヌクレアーゼインヒビターが、アウリントリカルボン酸である、項目48に記載のキット。
(項目51) 前記アウリントリカルボン酸が、10μMの濃度で存在する、項目50に記載のキット。
(項目52) デオキシリボヌクレアーゼインヒビターをさらに備える、項目41に記載のキット。
(項目53) 前記デオキシリボヌクレアーゼインヒビターが、二価カチオンキレート剤を備える、項目52に記載のキット。
(項目54) 前記二価カチオンキレート剤が、EDTA、EGTAおよびDPTAからなる群の少なくとも1つから選択される、項目53に記載のキット。
(項目55) 塩をさらに備える、項目41に記載のキット。
(項目56) 項目55に記載のキットであって、前記塩が、NaBr、NaI、NaSCN、LiCl、LiBr、LiI、GuHClおよびGuSCNからなる群から選択される、キット。
(項目57) 前記塩が、CaCl2である、項目55に記載のキット。
(項目58) 前記CaCl2が、少なくとも20mMの濃度で存在する、項目57に記載のキット。
(項目59) 前記第2の界面活性剤が、非イオン性界面活性剤である、項目41に記載のキット。
(項目60) 項目59に記載のキットであって、前記非イオン性界面活性剤が、t−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール(Triton X−100)、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween 21)、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート(Tween 40)、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート(Tween 60)、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(Tween 80)、ポリオキシエチレンソルビタンモノトリオレエート(Tween 85)、(オクチルフェノキシ)ポリエトキシエタノール(IGEPAL CA−630)、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル(Brij 30)、およびソルビタンモノラウレート(Span 20)からなる群から選択される、キット。
(項目61) 前記非イオン性界面活性剤が、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween 20)である、項目59に記載のキット。
(項目62) 前記Tween 20が、少なくとも4% w/wの濃度で存在する、項目61に記載のキット。
(項目63) 前記Tween 20が、20% w/wの濃度で存在する、項目61に記載のキット。
(項目64) 生物学的サンプルから核酸を得るためのキットであって、以下:
プロテアーゼ;
カチオン性界面活性剤;
非イオン性界面活性剤であって、該非イオン性界面活性剤は、該プロテアーゼおよびカチオン性界面活性剤の存在下で、固相への核酸の結合を可能にする、非イオン性界面活性剤;および
高塩濃度を有する緩衝液
を備える、キット。
用語「アルキル基」は、直鎖アルカン、分枝アルカン、または環状アルカンに基づく炭化水素部分をいう。直鎖アルカンは、一般化学式CnH2n+2(ここでCは、炭素原子を表し、Hは水素原子を表し、そしてnは自然数を表す)を有する有機化合物である。例示的な直鎖アルカンとしては、メタン(CH4)、エタン(C2H6)、プロパン(C3H8)、ブタン(C4H10)、オクタンなどが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な分枝アルカンとしては、イソブタン(C4H10)、イソペンタン(C5H12)などが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な環状アルカンとしては、シクロブタン(C4H8)、シクロヘキサン(C6H12)などが挙げられるが、これらに限定されない。例示的なアルキル基としては、メチル(−CH3)、プロピル(−C3H7)、オクチル(−C8H17)などが挙げられるが、これらに限定されない。アルカンは、代表的に不活性であるが、アルキル基はほかの分子と組み合わされて化合物を形成し得る。例えば、イソプロピルアルコール(C3H7OH)は、プロピル基を含むアルコールである。アルキル基およびアルカンの一般的な考察は、とりわけ、MorrisonおよびBoyd,Organic Chemistry,第3版、Allyn and Bacon,Boston,MA,1973;ならびにVollhardt,Organic Chemistry,W.H.Freeman,New York,NY,1987に見出され得る。
by Chaotropic Agents」、Proc.Natl.Acad.Sci.62:1129−1136);The Effect Of Electrolytes On The Stability Of The Deoxyribonucleate Helix,J.Amer.Chem.Soc.84:1329−1338);ならびに米国特許第5,234,809号に見出され得る。
Group,Ltd.)およびコムギ脂質エポキシド(Mackernium
WLE;McIntyre Group,Ltd.)が挙げられるが、これらに限定されない。例示的三級アミン界面活性剤としては、オクチルジメチルアミン、デシルジメチルアミン、ドデシルジメチルアミン、テトラデシルジメチルアミン、ヘキサデシルジメチルアミン、オクチルデシルジメチルアミン、オクチルデシルメチルアミン、ジデシルメチルアミン、ドデシルメチルアミン、塩化トリアセチルアンモニウム、塩化セトリモニウム、および塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウムが挙げられるが、これらに限定されない。カチオン性界面活性剤のさらなる種類としては、ホスホニウム、イミダゾリン、およびエチル化アミン基が挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態において、本発明は、核酸を生物学的なサンプル(好ましくは、全組織)から単離するための、組成物、方法、およびキットに関する。特定の実施形態において、本発明の組成物、方法、およびキットは、サンプル調製に必要な時間を減少させ、繰り返されるサンプル操作を必要とする多段階手順によって課される潜在的な安全性の危険度を減少させ、そして/または高い完全性(すなわち、最小の分解性)の高分子量の核酸を提供する。特定の実施形態において、本発明の組成物、方法、およびキットは、組織を物理学的または機械学的に破壊するために、さらなる装置の必要性を除去する。
Cells In Culture Using Catrimox−14TM Cationic Surfactant」,BioTecniques 第15巻、第6号:1102〜1105(1993);Macfarlane,D.E.およびDahle,C.E.,「Isolation RNA From Whole Blood−The Dawn Of RNA−Based Diagnosis?」,Nature,第362号:186−188(1993);Macfarlane,D.E.およびDahle,C.E.,「Isolating RNA From Clinical Samples With Catrimox−14 and Lithium Chloride」,Journal of Clinical Laboratory Analysis」,11:132−139(1997)を参照のこと。
Detergent From Protein Fractions,Methods Mol.Biol.59:305−312(1996)を参照のこと。特定の実施形態において、アニオン性界面活性剤は、不溶性の錯体を形成するカチオン(例えば、カリウムおよびグアニジニウム)との沈澱によって、除去され得る。例えば、Shively,J.E.Methods of Protein Microcharacterization,41−87頁(1986)を参照のこと。界面活性剤除去のための、市販の透析製品としては、Harverd/Amika Dialysis製品、Biodialyser(Western Analytical Products,Inc.)、ならびにAmicon(登録商標)、Microcon(登録商標)、およびCentricon(登録商標)遠心分離デバイス(Millipore Corporation)が挙げられるが、これらに限定されない。界面活性剤の除去のためのクロマトグラフィーアプローチとしては、ゲル濾過;疎水性クロマトグラフィー;逆相HPLC;およびイオン交換クロマトグラフィーが挙げられるが、これらに限定されない。このような技術および原理の例示的な要約に関しては、例えば、Bhairi,S.M.,Detergents:A Guide To The Properties And Uses Of Detergents
In Biological Systems,(1997)を参照のこと。界面活性剤の除去のための、市販の樹脂および他の製品の例としては、CALBIOSORBTM Absorbent(Calbiochem−Novabiochem Corporation);Detergent−OUTTM SDS−300(Genotech);Detergent−OUTTM DTG−100;OrgoSol−Detergent−OUTTM(Genotech);Bio−Beads SM2TM(BioRad);Vivapure Ion Exchange(Vivascience);およびZip TimHPL(Millipore Coiporation)が挙げられるが、これらに限定されない。
プロテイナーゼKの活性を測定するために、BoDipyで標識化されたカゼイン結合体(Enz Check Protease Assay Kit,製品番号E6638;Molecular Probes,Eugene,OR)を用いるアッセイを開発した。この誘導体化された結合体中の、蛍光BoDipy部分の濃度は、このタンパク質がインタクトである場合に、個々の部分の蛍光が消失するほど十分に高い。しかし、この誘導体化されたカゼインの、プロテアーゼによる消化において、より少数のBoDipy色素分子を含むペプチドが放出され、蛍光の増大を生じる。アッセイのための初期ダイナミックレンジを決定するために、以下のように、プロテイナーゼKの濃度を減少させながら、BoDipyで標識化されたカゼインを1時間消化した。
Reaction Plate,Applied Biosystems,Foster City,CA)に移動し、そしてABI Prism 7700分光光度計(Applied Biosystems)において蛍光を測定した。バックグラウンドの蛍光を、プロテイナーゼKを有さない緩衝液中で基質をインキュベートすることによって決定した。
最初に、一連の反応組成物を、生体サンプル(例えば、肝臓の切片)を脱凝集させる能力について分析した。これらの反応組成物は、100mMのTris(pH8.0)、20mMのジチオスレイトール(DTT)、ならびに必要に応じて、1mg/mlのプロテイナーゼK、界面活性剤(例えば、カチオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤およびアニオン性界面活性剤)、カオトロープ(chaotropes)、または添加物1−メチル−2−ピロリジノン(Sigma)を含んだ。各々の反応組成物を、肝臓の切片とともにチューブに配置し、次いで、65℃でインキュベートした。このチューブを定期的に観察して、どの反応組成物がサンプルを効率的に軟化し得るかを決定した。
プロテイナーゼKの活性に対するカチオン性界面活性剤の効果を試験するために、以下のように一連の反応組成物を調製した。反応混合物は、以下を含んだ:カゼインBoDipy結合体(1μg、10ng/μL)、10mMのTris(pH8.0)、20mMのCaCl2、1%の界面活性剤(以下の表2に示す)、ならびに、20μg/ml、5μg/ml、1.25μg/ml、0.31μg/ml、0.078μg/ml、0.02μg/mlおよび0.005μg/mlの濃度の、一連のプロテイナーゼK希釈物。アニオン性界面活性剤ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)(試験された条件下でプロテイナーゼKの活性を活性化することが公知である)を、ポジティブコントロールとして含めた。反応チューブを、96−ウェルの光学プレート(MicroAmp(登録商標) Optical 96−Well Reaction Plate,Applied
Biosystems)において60℃でインキュベートし、そして、放出された蛍光の量を、ABI Prism 7700を用いて、示した時点で測定した。
組織全体から核酸を抽出することは、代表的には困難であるので、本発明の組成物および方法の効力を例示することは、有効に用いられ得る。従って、実施例の残りを、例示的な組織全体として肝臓組織を用いて行った。しかし、当業者は、開示された組成物および方法がまた、広範囲の生体サンプルを用いて有効に使用され得ること、ならびに、本発明がいかなる型のサンプルを用いる使用にも限定されないことを、理解する。
種々のカチオン性界面活性剤がプロテイナーゼKによる組織の消化を増大する能力を評価するために、16の界面活性剤のうち1つを含む反応組成物を使用し、プロテイナーゼKの有りまたは無しの両方で、肝臓切片を消化した(表4に示される)。還元剤ジチオトレイトール(DTT)を、組織消化に対する還元条件の効果を評価するために含ませた。肝臓組織(80mg〜120mg)を、1000μLの10mM Tris、pH8、20mM CaCl2、および20mMジチオトレイトールを含む34本のエッペンドルフチューブ(17対のチューブ)の各々の中に置いた。16の界面活性剤のうち1つを、最終濃度1%の界面活性剤を生じるように一対のチューブに加えた。第17対目のチューブは、非界面活性剤コントロールとして働く。1ミリグラム(mg)のプロテイナーゼKを、17対の各々の一方のチューブに加えた。次いで、34本のチューブを60℃で攪拌しながらインキュベーションした(Eppendorf Thermomixer、モデル5436)。
カチオン性界面活性剤およびプロテイナーゼKが生物学的サンプルから高度に完全な核酸を放出する能力を検査するために、放出された核酸を単離した。肝臓組織の切片(一片あたり90mg〜200mg)を、22本のエッペンドルフマイクロフューズチューブ各々の中に置いた。400μLの50mM Tris、pH8、20mM CaCl2、1%界面活性剤、および1mgプロテイナーゼKを各々のチューブに加えた。チューブを60℃で22分間、攪拌しながらインキュベーションした(Eppendorf Thermomixer、モデル5436)。
実施例6から得た結果は、サンプル中に有意なヌクレアーゼ活性があったことを示す。内因性RNAsesの核酸分解活性を減少させるために、反応組成物のpHを約6.0へ低下させ、そしてインキュベーション温度を45℃へ低下させた。フェニルグリオキサ−ル(Aldrich#14243−3)、1−メチル−2−ピロリジノン、RNA Later(Ambion,#7020)、およびStreck Tissue Fixitive(Streck Laboratories,#265138)を含むいくつかの添加物をまた、試験して、反応組成物中での内因性RNAse活性に対する効果を評価した。フェニルグリオキサ−ルは、リボヌクレアーゼ活性を減少することが知られている(Takahashi,The Structure And Function Of Ribonuclease T1.XI.Modification Of The Single Arginine Residue In Ribonuclease T1 By Phenylglyoxal And Glyoxal,J.Biochem(Japan)68:659−664,1970を参照のこと)。RNA Laterについての製品の印刷物は、この試薬が組織中でRNAを安定化し、そして、Streck Tissue Fixativeは、組織の完全性を保存すると考えれていると主張している。
CTAClとCTABとを比較するために、これら2つの界面活性剤を、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド(HDTAB)、ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロリド(HDTACl)、およびSarkosylと並行して評価した。3種の添加剤、フェニルグリオキサール、アクリジンオレンジ(例えば、Sigma #A6014)、および1−メチル−2−ピロリジノンもまた評価した。フェニルグリオキサールを試験して、これがRNAase活性を減少させるか否かを決定した。核酸分子と相互作用することが知られている色素化合物であるアクリジンオレンジを試験して、これがヌクレアーゼ活性を減少させるか否かを決定した。1−メチル−2−ピロリジノンを試験して、これが種々の反応組成物によるサンプルの溶解性を増大させるか否かを観察した。
実施例7は、組織サンプル中のRNAを安定化するために使用される特定の試薬(すなわち、Streck Tissue FixativeおよびRNA Later)の存在が、プロテイナーゼKの活性を阻害することを証明した。この阻害の減少を試みるために、組織を、いくつかの試薬中でプレインキュベートして、この組織をサンプル中に拡散させた。残った試薬を、反応組成物中でのサンプルのインキュベーションの前に除去した。
アウリントリカルボン酸がCTAB、CTAClまたはSDSを含む反応組成物を使用して遊離される核酸の完全性を維持する能力を評価した。アウリントリカルボン酸は、核酸へのタンパク質(例えば、ヌクレアーゼ)の結合を阻害すると考えられ、そしてリボヌクレアーゼを阻害することが証明されている。肝臓組織のスライス(77〜186mg/サンプル)を、21本のエッペンドルフチューブに入れた。各チューブに、50mM MES(pH6.0)、20mM CaCl2、および表10に示されるような追加成分を含む反応組成物(400μL)を添加した。
他のカチオン性試薬が高完全性の核酸を遊離する能力を試験するために、さらなる化合物を、以下のようにして試験した。肝臓組織のスライス(80〜140mg/サンプル)を、14本のEppendorfチューブに入れた。100mM MES(pH 6)、20mM CaCl2、0.5mM アウリントリカルボン酸(例えば、Sigma #A1895)、および1mg プロテイナーゼKを含む反応組成物(500μl)を、各チューブに添加した。表11に示すカチオン性試薬の1つを、最終濃度が1%になるまでこのチューブに添加した。コントロールとして、1つのチューブは、追加の試薬を含まなかった。これらのチューブを、混合しながら(Eppendorf Thermomixer,Model 5436)、60℃で30分間インキュベートした。このインキュベーションの後、1.75M NaCl、29% Tween 20、585μg/ml グリコーゲンを含む溶液(200μL)(447mM NaCl、7.5% Tween 20、および149μg/ml グリコーゲンの最終濃度を生じる)を、各チューブに添加して、界面活性剤:核酸複合体を溶解した。残った組織フラグメントを、実施例7に記載の方法と同じかまたは類似の方法を使用して、遠心分離によって除去した。実施例6に記載の方法と同じかまたは類似の方法を使用して、上清を、フェノールで抽出し、イソプロパノールで沈殿させ、そしてエタノールで洗浄した。この洗浄した核酸ペレットを、100μLの、10mM Tris(pH8.0)、0.1mM EDTAおよび1単位/μL Rnasinに再懸濁した。遊離された核酸の量およびその完全性を、実施例6に記載の方法と同じかまたは類似の方法を使用して、評価した。
以下の実施例において、これらの以下のカチオン性界面活性剤を使用した:臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB、Aldrich #85582−0)、塩化セチルトリメチルアンモニウム(CTACl、Aldrich #29273−7)、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム(DTAB、Sigma
#D−8638)、塩化ドデシルトリメチルアンモニウム(DTACl、Fluka 製品番号44242)、臭化オクチルトリメチルアンモニウム、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム(TTAB、Sigma 製品番号T4762)、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム(TTACl、Fluka 製品番号87212)、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウム(DEDTAB、Fluka 製品番号44165)、臭化デシルトリメチルアンモニウム(D10TAB Fluka 製品番号30725)、臭化ドデシルトリフェニルホスホニウム(DTPB、Research Chemicals 製品番号14295)、クオーターニウム84(MNLEまたはMackernium NLE;Mclntyre Group,Ltd.)、オレアルコニウムクロリド(Mackernium KPまたはMKP;Mclntyre Group,Ltd.)、およびコムギ(wheat)リピドエポキシド(MWLまたはMackernium WLE;Mclntyre Group,Ltd.)。
製品番号P9416)、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(Tween 21、Sigma 製品番号P2565)、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミテート(Tween 40、Sigma 製品番号P1504)、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート(Tween 60、Sigma 製品番号P1629)、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート(Tween 80、Sigma 製品番号P8074)、ポリオキシエチレンソルビタンモノトリオレエート(Tween 85、Sigma 製品番号P4634)、(オクチルフェノキシ)ポリエトキシエタノール(IGEPAL CA−630/NP−40、Sigma 製品番号I3021)、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル(Brij 30、Aldrich 製品番号23598−9)、およびソルビタンモノラウレート(Span 20、Sigma
製品番号S6635)。
製品番号P2963)、ヨウ化ルビジウム(Sigma 製品番号R2252)、ヨウ化セシウム(Sigma 製品番号C8643)、臭化リチウム(Aldrich 21,322−5)、塩化リチウム(Sigma 製品番号L9650)、チオシアン酸ナトリウム(Sigma 製品番号S7757)、尿素(Sigma 製品番号U5378)、EDTA(Ambion カタログ番号9261)、および水酸化ナトリウム(Sigma、製品番号S−8045、ロット番号127H0531および69H1264)。
特定の例において、高塩中での洗浄剤の可溶性は、塩および洗浄剤それ自体の組成に関連し得る。混合実験を、異なる塩組成における種々のアニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、および非イオン性界面活性剤の溶解性を試験するために実施した。0.5%(Sarkosyl、LDS、SDS、およびCTAB)または5.0%(Triton X−100、Tween 20、Tween 21、Tween 40、Tween 60、Tween 80、Tween 85、NP−40、Brij 30、およびSpan 20)の最終濃度で、界面活性剤を、塩溶液に対して加えた。この塩溶液は、pH6.0またはpH10.0で、LiI、NaI、KI、RbI、CsI、GuSCN、GuHCl、またはNaClO4を含有した。表12に示すように、濃度は、加えた塩について2M、4Mまたは6Mであった。いくつかの塩溶液は、8Mの尿素を含み、そして他の塩溶液は、8Mの尿素を含まなかった。界面活性剤の可溶性を、可溶性または不溶性のいずれかとして記録した。塩溶液中の界面活性剤の可溶性を、最初に、曇りまたは沈殿の形成に対する目視観測によって決定した。得られた溶液をまた、沈殿ペレットが存在しないことによって、沈殿物が存在しないことを確認するために遠心分離した。溶液中に曇りを生じたかまたは沈殿物および沈殿ペレットを形成した界面活性剤を、不溶性(X)と記録し、そして遠心分離後に明らかなペレットを形成しない透明な溶液を生じた界面活性剤を、可溶性(S)として記録した。「S(V)」の記録を有するいくつかの洗浄剤は、塩溶液中に溶解したが、著しく粘稠な溶液を生じた。これらの結果を、表12に示す。観測された不溶性は、pHに独立であるように考えられ、そして変性試薬の尿素の添加によって変化しなかった。
いくつかのカチオン性界面活性剤の可溶性を、異なるカオトロピズムの塩溶液中で試験した。試験したカチオン性界面活性剤は、臭化セチルトリメチルアンモニウム(CTAB)、塩化セチルトリメチルアンモニウム(CTACl)、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム(TTAB)、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム(TTACl)、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム(DTAB)、ドデシルトリメチルアンモニウム(DTACl)、臭化ドデシルエチルジメチルアンモニウム(DEDTAB)、臭化デシルトリメチルアンモニウム(D10TAB)、および臭化ドデシルトリフェニルホスホニウム(DTPB)であった。試験したカチオン性界面活性剤のそれぞれは、1%濃度で存在した。カチオン性界面活性剤のそれぞれは、2% Tween 20を含有するカオトロピズムの塩の1つの5M溶液中で試験した。それぞれのカチオン性界面活性剤および塩の組み合わせを、pH6(50mM MES)、pH8(50mM Tris−HCl)、およびpH10(50mM AMP)で試験した。各界面活性剤の可溶性を、視覚的に評価し、そして実施例12において使用した同一の基準を用いて記録した。これらの結果を表13に示す。
DTABおよびDTAClの存在下で、界面活性剤−核酸沈殿物の形成が可逆的であることを確認するために、以下の実験を実施した。仔ウシ胸腺のゲノムDNA(Sigma)を、18ゲージの皮下注射針中を3回通すことによって部分的に切断した。8μgの切断されたDNAを含有する90μLの溶液を、16の微量遠心管(microfuge tube)のそれぞれの中へ入れた。DTABを、8つのチューブに最終1.6%濃度まで加え、そしてDTAClを残りの8つに加えた。このチューブを、手短にボルテックスし、そして沈殿物を、全てのチューブにおいて注目した。次いで、8つのカオトロープ(chaotrope)溶液を、pH6.0で50mM MESおよび5Mの以下:NaBr、NaI、NaSCN、LiCl、LiBr、LiI、GuHClまたはGuSCNの1つとともに調製した。600μlのそれぞれのカオトロープ溶液を、別々に、DTABおよび沈殿物とともに6つの異なるチューブに加えた。600μlのそれぞれのカオトロープ溶液を、別々に、DTAClおよび沈殿物とともに6つの異なるチューブに加えた。結果を、表13に示す。溶液を、DNAが溶解した(「R」)かまたは溶解しない(「IR」)かどうかについて評価した。
ラットの尾由来のゲノムDNAを入手しようと試みるために、50mgのラットの尾の小片を、微量遠心管中の、5mg/ml プロテイナーゼK、100mM Tris−HCl(pH8.0)、20μM ATA、20mM CaCl2、および1%の以下のカチオン性界面活性剤:CTACl、CTAB、TTAB、DTAB、MNLE(クオーターニウム84、Mackernium NLE;Mclntyre Group,Ltd.)、MKP(オレアルコニウムクロリド、Mackernium KP;Mclntyre Grp,Ltd)、およびMWL(コムギ(wheat)リピドエポキシド、Mackernium
WLE;Mclntyre Group,Ltd.)を含有する、200μlの緩衝液中に浸軟した。このチューブを、65℃で1000rpm(Eppendorf Thermomixer、Model5436)で混合しながら60分間インキュベートした。各チューブから、100μlアリコートおよび50μlアリコートを、新たなチューブに移した。5M GuSCN、50mM Tris−HCl、pH8.0、20mM EDTA、および2% Tween 20を含有する、600μlのカオトロープ溶液を、各チューブに加え、そして溶液をSchlerinパターンが消失するまで混合した。消化されない組織微粒子物(例えば、毛および骨)を除去するために、このチューブを、4℃で5分間14,000rpmで遠心分離した。上清溶液中に放出されたゲノムDNAを、ABI PRISM 6100 Nucleic Acid PrepStation(Applied Biosystems 製品番号6100−01)を使用する、ガラスフィルター−吸着および真空濾過法によって単離した。サンプル溶液を、ガラス繊維GF/Bフィルター(96−ウェル形式における)に移し、そして2.4psi真空で排出した。フィルターを、90%エチルアルコールで3回洗浄した。DNAを、最初に、200μlのTE溶液(10mM Tris、pH8.0、1mM EDTA)の使用によって、ガラス繊維から回収した。室温での3分間のインキュベーションに続いて、DNA含有溶出液を、96−ウェルサンプル保管トレー中に排出および回収した(ABI PRISM 4306737、Applied Biosystems)。第2の分離溶出液を、100μlの0.1N NaOHで実施した。
GF/Bガラス繊維フィルターに可逆的に結合される精製DNAの能力を、評価した。ゲノムDNAの結合および放出を、2% Tween 20の存在下で、3つの異なるpHレベル(pH6、8および10)にて、3つの異なる塩(チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸グアニジニウム、および臭化ナトリウム)のうちの1つの存在下、および2つの異なるカチオン性界面活性剤(DTABおよびDTACl)のうちのいずれか1つの存在下またはいずれのカチオン性界面活性剤の非存在下で、試験した。8マイクログラムの部分剪断仔ウシ胸腺ゲノムDNA(実施例15にて調製されるような)を、600μlのDNA結合溶液に添加した。このDNA結合溶液は、5Mの1つの塩(NaSCN、NaBrまたはGuSCN)、20mMのEDTA、2%のTween 20、50mMの緩衝液(MES、pH6.0;Tris−HCl、pH8.0;またはAMP、pH10のうちの1つ)および1%のカチオン性界面活性剤(DTAB、DTACl、または界面活性剤を含まない水(コントロール「No Deterg(界面活性剤なし)」として))を含む。従って、27個の異なる組み合わせを試験した。ゲノムDNAを、ABI PRISM 6100 Nucleic Acid PrepStation(Applied Biosystems Product Number 6100−01)を使用する真空濾過によって、ガラスフィルター上に吸着させた。サンプル溶液を、ガラス繊維GF/Bフィルター(96ウェル形式)に移し、そして2.4psiの減圧下で脱気した。フィルターを、90% EtOHで3回洗浄した。最初に、DNAを、200μlのTE溶液を使用することによってガラス繊維から回収した。室温で3分のインキュベーション後、このDNA含有溶出物を、脱気し、そして96ウェルサンプルアーカイブトレイ(ABI Prism 4306737、Applied Biosystems)に収集した。2回目の別の溶出を、100μlの0.1N NaOHを用いて行った。
DNA回収に対するTween−20の効果を、非イオン性界面活性剤(Tween 20)の非存在下で、実施例15に示される実験を繰り返して試験した。8マイクログラムの部分剪断仔ウシ胸腺ゲノムDNA(実施例15にて調製されるような)を、600μlのDNA結合溶液に添加した。このDNA結合溶液は、5Mの1つの塩(NaSCN、NaBrまたはGuSCN)、20mMのEDTA、50mMの緩衝液(MES、pH6.0;Tris−HCl、pH8.0;またはAMP、pH10のうちの1つ)および1%のカチオン性界面活性剤(DTAB、DTACl、または界面活性剤を含まない水(コントロール「No
Deterg(界面活性剤なし)」として))を含む。従って、27個の異なる組み合わせを試験した。ゲノムDNAを、ABI PRISM 6100 Nucleic Acid PrepStation(Applied Biosystems Product No.6100−01)を使用する真空濾過によって、ガラスフィルター上に吸着させた。サンプル溶液を、ガラス繊維GF/Bフィルター(96ウェル形式)に移し、そして2.4psiの減圧下で脱気した。フィルターを、90% EtOHで3回洗浄した。最初に、DNAを、200μlのTE溶液を使用することによってガラス繊維から回収した。室温で3分のインキュベーション後、このDNA含有溶出物を、脱気し、そして96ウェルサンプルアーカイブトレイ(ABI Prism 4306737、Applied Biosystems)に収集した。2回目の別の溶出を、100μlの0.1N NaOHを用いて行った。
カチオン性界面活性剤DTABの阻害効果をさらに試験した。DTABを、DNA結合が固相上で生じる前、DNA結合が固相上で生じる間、またはDNA結合が固相上で生じた後の、精製反応の種々の時点で導入した。DNA結合および精製手順を、ABI PRISM 6100上のGF/Bガラス繊維フィルター(96ウェル形式)を使用して行った。種々の精製条件を、図16において示されるように、A〜Dで示す。
ガラス繊維GF/B膜へのDNA結合を干渉したプロテアーゼ消化反応の成分を同定することを試みるために、CaCl2、アウリントリカルボン酸およびTween 20の各々を、DNA結合反応において別々に評価した。DNAの結合および回収は、サンプル中のタンパク質の存在によって影響され得るので、結合を、13% ウシ胎仔血清(FBS)の存在下または非存在下で行った。
DNA回収を阻害する主要成分としてカチオン性界面活性剤を同定したので、阻害性効果を打ち消す非イオン性界面活性剤の能力を試験した。仔ウシ胸腺ゲノムDNA(8μg)を、漸増濃度のTween 20と共に0%、1%および4%のドデシルトリメチルアンモニウムブロミド(DTAB)の存在下で、ガラス繊維GF/B膜に結合させた。
組織解離方法の特定の成分の存在下でのガラス繊維GF/B膜へのゲノムDNAの結合を生じる条件が同定されたので、ラット尾組織由来のDNAを単離する能力を試験した。この実施例において、2つのガラス繊維膜GF/BおよびGF/Dを試験した。
実施例21からのプロセスを使用して、いくつかのラット組織およびマウス尾からゲノムDNAを単離した。ラット筋肉、肝臓、肺、膵臓、腎臓、脳、小腸および尾の50mgの切片、ならびにマウス尾の50mg切片を、200μlの消化溶液を含む微量遠心チューブに置いた。この消化溶液は、1mgのプロテイナーゼK、1%のDTAB、100mMのTris−HCl(pH8.0)、20μMのATAおよび20mMのCaCl2を含んだ。
Thermomixer Model 5436)。各組織の消化時間を記録し、そして60分の終了時に、未消化組織の量を決定した。50mgの種々のげっ歯類組織を分解するのに要した時間量を、表14に示す。
表14
Claims (1)
- 生物学的サンプルから核酸を得て、そして該核酸を固相に結合させるための方法。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/724,613 US7001724B1 (en) | 2000-11-28 | 2000-11-28 | Compositions, methods, and kits for isolating nucleic acids using surfactants and proteases |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002587600A Division JP2005501523A (ja) | 2000-11-28 | 2001-11-28 | 界面活性剤およびプロテアーゼを使用して核酸を単離するための組成物、方法およびキット |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006197941A true JP2006197941A (ja) | 2006-08-03 |
Family
ID=24911121
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002587600A Pending JP2005501523A (ja) | 2000-11-28 | 2001-11-28 | 界面活性剤およびプロテアーゼを使用して核酸を単離するための組成物、方法およびキット |
JP2006074844A Pending JP2006197941A (ja) | 2000-11-28 | 2006-03-17 | 界面活性剤およびプロテアーゼを使用して核酸を単離するための組成物、方法およびキット |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002587600A Pending JP2005501523A (ja) | 2000-11-28 | 2001-11-28 | 界面活性剤およびプロテアーゼを使用して核酸を単離するための組成物、方法およびキット |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US7001724B1 (ja) |
EP (1) | EP1354036B1 (ja) |
JP (2) | JP2005501523A (ja) |
AT (1) | ATE469219T1 (ja) |
AU (1) | AU2001297835B2 (ja) |
CA (1) | CA2429941A1 (ja) |
DE (1) | DE60142254D1 (ja) |
WO (1) | WO2002090539A2 (ja) |
Families Citing this family (145)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7001724B1 (en) * | 2000-11-28 | 2006-02-21 | Applera Corporation | Compositions, methods, and kits for isolating nucleic acids using surfactants and proteases |
DE10105912A1 (de) * | 2001-02-09 | 2002-08-14 | Roche Diagnostics Gmbh | Rekombinante Proteinase K |
JP4236934B2 (ja) * | 2001-04-17 | 2009-03-11 | 中外製薬株式会社 | 界面活性剤の定量方法 |
AU2008201675B2 (en) * | 2001-05-14 | 2012-06-07 | Zygem Corporation Limited | Thermostable Proteinases From Thermophilic Bacteria |
NZ511680A (en) * | 2001-05-14 | 2004-07-30 | Univ Waikato | Method for preparing nucleic acid or DNA samples and a DNA extraction process using thermophilic proteases |
EP3112025B1 (en) * | 2001-10-12 | 2019-11-27 | Becton, Dickinson and Company | Apparatus for transporting biological samples |
DE60234464D1 (de) | 2001-11-28 | 2009-12-31 | Applied Biosystems Llc | Zusammensetzungen und Verfahren zur selektiven Nukleinsäureisolierung |
EP1476573B1 (en) | 2002-01-28 | 2010-01-06 | Ambion, Inc. | Crude biological derivatives competent for nucleic acid detection |
GB0212825D0 (en) * | 2002-05-31 | 2002-07-10 | Dna Res Innovations Ltd | Methods compositions and kits for cell separation |
US7482116B2 (en) | 2002-06-07 | 2009-01-27 | Dna Genotek Inc. | Compositions and methods for obtaining nucleic acids from sputum |
US7998699B2 (en) | 2002-08-15 | 2011-08-16 | University Of South Florida | Early detection of pathogens in blood |
CN1332972C (zh) * | 2002-11-28 | 2007-08-22 | 爱科来株式会社 | 浓缩和纯化核酸的方法和装置 |
WO2004048398A1 (ja) * | 2002-11-28 | 2004-06-10 | Arkray Inc. | 核酸の濃縮精製方法および装置 |
US7601491B2 (en) * | 2003-02-06 | 2009-10-13 | Becton, Dickinson And Company | Pretreatment method for extraction of nucleic acid from biological samples and kits therefor |
US20040157219A1 (en) * | 2003-02-06 | 2004-08-12 | Jianrong Lou | Chemical treatment of biological samples for nucleic acid extraction and kits therefor |
ES2428941T3 (es) * | 2003-03-10 | 2013-11-12 | Expression Pathology, Inc. | Preparación líquida de tejidos a partir de muestras biológicas, tejidos y células procesadas histopatológicamente |
US20060210988A1 (en) * | 2003-04-22 | 2006-09-21 | Ken Inose | Method for isolating nucleic acid and, for nucleic acid isolation, kit and apparatus |
US20050009036A1 (en) * | 2003-07-11 | 2005-01-13 | Applera Corporation | Methods and kits for obtaining nucleic acid from biological samples |
DE602004020999D1 (de) * | 2003-08-15 | 2009-06-18 | Univ South Florida | Materialien und verfahren zum einfangen von krankheitserregern und zur abtrennung von aurintricarbonsäure aus einer probe |
EP1529840A1 (en) * | 2003-11-04 | 2005-05-11 | Qiagen GmbH | A rapid and low cost method for isolating nucleic acid |
AU2005200670B2 (en) | 2004-02-20 | 2007-05-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Adsorption of nucleic acids to a solid phase |
US20050239091A1 (en) * | 2004-04-23 | 2005-10-27 | Collis Matthew P | Extraction of nucleic acids using small diameter magnetically-responsive particles |
US7593483B2 (en) * | 2004-05-07 | 2009-09-22 | Broadcom Corporation | Nonlinear mapping in digital-to-analog and analog-to-digital converters |
EP2471924A1 (en) | 2004-05-28 | 2012-07-04 | Asuragen, INC. | Methods and compositions involving microRNA |
WO2005122709A2 (en) * | 2004-06-17 | 2005-12-29 | Zygem Corporation Limited | Purification methods and uses thereof |
DE102004034433A1 (de) * | 2004-07-15 | 2006-02-02 | Qiagen Gmbh | Verfahren zur Reinigung und Isolierung von Nukleinsäuren unter Verwendung kationischer Detergentien |
CA2575446C (en) * | 2004-08-03 | 2014-03-25 | Becton, Dickinson And Company | Use of magnetic material to direct isolation of compounds and fractionation of multipart samples |
WO2006017427A1 (en) * | 2004-08-03 | 2006-02-16 | Becton, Dickinson And Company | Use of magnetic material to fractionate samples |
JP2006087394A (ja) * | 2004-09-27 | 2006-04-06 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 核酸抽出方法および核酸抽出キット |
TWI294460B (en) * | 2004-12-23 | 2008-03-11 | Ind Tech Res Inst | Method for stabilizing nucleic acids |
GB2419594C (en) * | 2004-11-02 | 2011-03-02 | Ind Tecnology Res Inst | Method for stabilizing or isolating nucleic acids. |
WO2008073922A2 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Functions and targets of let-7 micro rnas |
EP2302055B1 (en) * | 2004-11-12 | 2014-08-27 | Asuragen, Inc. | Methods and compositions involving miRNA and miRNA inhibitor molecules |
US7226875B2 (en) * | 2004-11-30 | 2007-06-05 | Taiwan Semiconductor Manufacturing Co., Ltd. | Method for enhancing FSG film stability |
CN1796398B (zh) * | 2004-12-29 | 2012-09-26 | 财团法人工业技术研究院 | 以胺类界面活性剂萃取核酸的方法 |
US20060188892A1 (en) * | 2005-02-18 | 2006-08-24 | Ambion, Inc. | Enzymatic digestion of tissue |
JP2008541761A (ja) * | 2005-05-31 | 2008-11-27 | インヴィトロジェン コーポレーション | パラフィン含有試料からの核酸の分離及び精製 |
US20070154903A1 (en) * | 2005-06-23 | 2007-07-05 | Nanosphere, Inc. | Selective isolation and concentration of nucleic acids from complex samples |
US20070015165A1 (en) * | 2005-07-13 | 2007-01-18 | Sigma-Aldrich Co. | Method for the isolation of RNA from biological sources |
JP5627162B2 (ja) * | 2005-10-05 | 2014-11-19 | 倉敷紡績株式会社 | 核酸の分離精製方法および当該方法を利用した核酸分離キット |
US20100216657A1 (en) * | 2006-05-16 | 2010-08-26 | Arcxis Biotechnologies, Inc. | Pcr-free sample preparation and detection systems for high speed biologic analysis and identification |
US8679741B2 (en) * | 2006-05-31 | 2014-03-25 | Sequenom, Inc. | Methods and compositions for the extraction and amplification of nucleic acid from a sample |
EP2484781B1 (en) * | 2006-08-01 | 2017-08-23 | Applied Biosystems, LLC | Detection of analytes and nucleic acids |
US20120107799A1 (en) * | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Longhorn Vaccines & Diagnostics LLC. | Disposable, rapid extraction apparatus and methods |
AU2007299748A1 (en) * | 2006-09-19 | 2008-03-27 | Asuragen, Inc. | miR-15, miR-26, miR -31,miR -145, miR-147, miR-188, miR-215, miR-216 miR-331, mmu-miR-292-3p regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
AU2007304776A1 (en) | 2006-10-06 | 2008-04-10 | Dna Genotek Inc. | Stabilizing compositions and methods for extraction of ribonucleic acid |
US20080131878A1 (en) * | 2006-12-05 | 2008-06-05 | Asuragen, Inc. | Compositions and Methods for the Detection of Small RNA |
AU2007333106A1 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | miR-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
EP2104735A2 (en) * | 2006-12-08 | 2009-09-30 | Asuragen, INC. | Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
WO2008073915A2 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-19 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in leukemia and uses thereof |
CA2671270A1 (en) * | 2006-12-29 | 2008-07-17 | Asuragen, Inc. | Mir-16 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
US8686129B2 (en) * | 2007-03-20 | 2014-04-01 | Agilent Technologies, Inc. | Methods for the separation of biological molecules using sulfolane |
US7964350B1 (en) | 2007-05-18 | 2011-06-21 | Applied Biosystems, Llc | Sample preparation for in situ nucleic acid analysis |
US20090232893A1 (en) * | 2007-05-22 | 2009-09-17 | Bader Andreas G | miR-143 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION |
WO2008154333A2 (en) * | 2007-06-08 | 2008-12-18 | Asuragen, Inc. | Mir-34 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
WO2009006417A2 (en) * | 2007-06-29 | 2009-01-08 | Becton, Dickinson And Company | Methods for extraction and purification of components of biological samples |
DK2181191T3 (da) * | 2007-08-20 | 2011-05-23 | Novozymes As | Nukleasereduktion |
EP2198050A1 (en) * | 2007-09-14 | 2010-06-23 | Asuragen, INC. | Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof |
JP5277497B2 (ja) * | 2007-09-28 | 2013-08-28 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 土壌から抽出したrnaの精製法 |
WO2009052386A1 (en) * | 2007-10-18 | 2009-04-23 | Asuragen, Inc. | Micrornas differentially expressed in lung diseases and uses thereof |
JP5726529B2 (ja) * | 2007-11-30 | 2015-06-03 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・コーポレイション | 単一試料からのゲノムdna、rnaおよびタンパク質の単離方法 |
WO2009070805A2 (en) * | 2007-12-01 | 2009-06-04 | Asuragen, Inc. | Mir-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention |
US20090192114A1 (en) * | 2007-12-21 | 2009-07-30 | Dmitriy Ovcharenko | miR-10 Regulated Genes and Pathways as Targets for Therapeutic Intervention |
EP2260110B1 (en) * | 2008-02-08 | 2014-11-12 | Asuragen, INC. | miRNAs DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN LYMPH NODES FROM CANCER PATIENTS |
WO2009154835A2 (en) * | 2008-03-26 | 2009-12-23 | Asuragen, Inc. | Compositions and methods related to mir-16 and therapy of prostate cancer |
WO2009126726A1 (en) * | 2008-04-08 | 2009-10-15 | Asuragen, Inc | Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv) |
US8258111B2 (en) * | 2008-05-08 | 2012-09-04 | The Johns Hopkins University | Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis |
DE102008032501A1 (de) * | 2008-07-10 | 2010-01-14 | Qiagen Gmbh | Schnelles Analyseverfahren biologischer Mischproben |
WO2010019898A1 (en) * | 2008-08-14 | 2010-02-18 | Zygem Corporation Limited | Temperature controlled nucleic-acid detection method suitable for practice in a closed-system |
US20110172405A1 (en) * | 2008-09-17 | 2011-07-14 | Ge Healthcare Bio-Sciences Corp. | Method for small rna isolation |
US20100179213A1 (en) * | 2008-11-11 | 2010-07-15 | Mirna Therapeutics, Inc. | Methods and Compositions Involving miRNAs In Cancer Stem Cells |
WO2010067612A1 (ja) * | 2008-12-11 | 2010-06-17 | 積水メディカル株式会社 | 糖化ヘモグロビン含有試料の前処理法 |
WO2010071833A1 (en) | 2008-12-19 | 2010-06-24 | Life Technologies Corporation | Proteinase k inhibitors, methods and compositions therefor |
EP2411539B1 (en) | 2009-03-25 | 2018-10-03 | Life Technologies Corporation | Discriminatory positive/extraction control dna |
EP2264168B1 (de) * | 2009-06-18 | 2014-12-17 | Qiagen GmbH | Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren |
PL2443455T3 (pl) | 2009-06-19 | 2014-02-28 | Philipp Bauer | Nowy sposób izolowania Trichinella lub innych pasożytów z tkanki organicznej |
DE102009025542A1 (de) * | 2009-06-19 | 2011-01-05 | Philipp Bauer | Neue Methode zur Isolation von Trichinella oder anderen Parasiten aus organischem Gewebe |
US10174368B2 (en) | 2009-09-10 | 2019-01-08 | Centrillion Technology Holdings Corporation | Methods and systems for sequencing long nucleic acids |
WO2011032040A1 (en) | 2009-09-10 | 2011-03-17 | Centrillion Technology Holding Corporation | Methods of targeted sequencing |
JP2013523144A (ja) * | 2010-04-08 | 2013-06-17 | キアゲン ゲーエムベーハー | 核酸の存在下で陰イオン界面活性剤イオンを沈殿させるための方法 |
JPWO2011162326A1 (ja) * | 2010-06-25 | 2013-08-22 | 株式会社日本遺伝子研究所 | Rna鎖の保存溶液 |
EP2426201A1 (en) * | 2010-09-06 | 2012-03-07 | Qiagen GmbH | Method of isolating purified RNA with reduced DNA contaminations |
CA2810252C (en) | 2010-09-10 | 2019-03-12 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Detection of rna-interacting regions in dna |
WO2012054613A2 (en) * | 2010-10-20 | 2012-04-26 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Stabilized protease-containing solutions |
WO2012075471A1 (en) * | 2010-12-04 | 2012-06-07 | Hui-Yu Liu | Rna stability enhancer |
WO2012106586A1 (en) | 2011-02-03 | 2012-08-09 | Mirna Therapeutics, Inc. | Synthetic mimics of mir-124 |
EP2675913B1 (en) | 2011-02-15 | 2016-12-14 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Detecting methylation in a subpopulation of genomic dna |
US20120252682A1 (en) | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Maples Corporate Services Limited | Methods and systems for sequencing nucleic acids |
EP2721140B1 (en) | 2011-06-19 | 2016-11-23 | Abogen, Inc. | Devices, solutions and methods for sample collection |
EP2739752B1 (en) | 2011-08-03 | 2017-07-19 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Filtering small nucleic acids using permeabilized cells |
WO2013040251A2 (en) | 2011-09-13 | 2013-03-21 | Asurgen, Inc. | Methods and compositions involving mir-135b for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease |
US9206418B2 (en) | 2011-10-19 | 2015-12-08 | Nugen Technologies, Inc. | Compositions and methods for directional nucleic acid amplification and sequencing |
CN104093890B (zh) | 2012-01-26 | 2016-04-20 | 纽亘技术公司 | 用于靶向核酸序列富集和高效文库产生的组合物和方法 |
US9480966B2 (en) | 2012-04-30 | 2016-11-01 | General Electric Company | Substrates and methods for collection, stabilization and elution of biomolecules |
JP6181751B2 (ja) | 2012-06-18 | 2017-08-16 | ニューゲン テクノロジーズ, インコーポレイテッド | 望まれない核酸配列のネガティブ選択のための組成物および方法 |
US20150011396A1 (en) | 2012-07-09 | 2015-01-08 | Benjamin G. Schroeder | Methods for creating directional bisulfite-converted nucleic acid libraries for next generation sequencing |
US9092401B2 (en) | 2012-10-31 | 2015-07-28 | Counsyl, Inc. | System and methods for detecting genetic variation |
CN104812947B (zh) | 2012-07-17 | 2018-04-27 | 考希尔股份有限公司 | 检测遗传变异的系统和方法 |
US9422602B2 (en) | 2012-08-15 | 2016-08-23 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Methods and compositions for determining nucleic acid degradation |
WO2014121091A1 (en) | 2013-02-01 | 2014-08-07 | The Regents Of The University Of California | Methods for genome assembly and haplotype phasing |
US9411930B2 (en) | 2013-02-01 | 2016-08-09 | The Regents Of The University Of California | Methods for genome assembly and haplotype phasing |
US9822408B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-11-21 | Nugen Technologies, Inc. | Sequential sequencing |
CN110592244A (zh) | 2013-07-25 | 2019-12-20 | 德诚分子诊断 | 用于检测细菌污染的方法和组合物 |
US9534214B2 (en) | 2013-10-31 | 2017-01-03 | General Electric Company | Substrates and associated methods for elution of nucleic acids |
EP3068883B1 (en) | 2013-11-13 | 2020-04-29 | Nugen Technologies, Inc. | Compositions and methods for identification of a duplicate sequencing read |
CA2933387C (en) | 2013-12-11 | 2023-05-02 | The Regents Of The University Of California | Methods for labeling dna fragments to reconstruct physical linkage and phase |
US11286519B2 (en) | 2013-12-11 | 2022-03-29 | Accuragen Holdings Limited | Methods and compositions for enrichment of amplification products |
ES2707744T3 (es) | 2013-12-11 | 2019-04-04 | Accuragen Holdings Ltd | Métodos para detectar variantes de secuencia raras |
US11859246B2 (en) | 2013-12-11 | 2024-01-02 | Accuragen Holdings Limited | Methods and compositions for enrichment of amplification products |
US20150225713A1 (en) * | 2014-02-10 | 2015-08-13 | Zymo Research Corporation | Methods for nucleic acid capture |
US9745614B2 (en) | 2014-02-28 | 2017-08-29 | Nugen Technologies, Inc. | Reduced representation bisulfite sequencing with diversity adaptors |
AU2015277059B2 (en) | 2014-06-18 | 2021-06-17 | Clear Gene, Inc. | Methods, compositions, and devices for rapid analysis of biological markers |
US20160017316A1 (en) * | 2014-07-18 | 2016-01-21 | Bionano Genomics, Inc. | Isolation of megabase-sized dna from plant and animal tissues |
EP3174980A4 (en) | 2014-08-01 | 2018-01-17 | Dovetail Genomics, LLC | Tagging nucleic acids for sequence assembly |
CN107109474B (zh) | 2014-08-19 | 2021-03-19 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于核酸检测的方法和组合物 |
EP3259696A1 (en) | 2015-02-17 | 2017-12-27 | Dovetail Genomics LLC | Nucleic acid sequence assembly |
US11807896B2 (en) | 2015-03-26 | 2023-11-07 | Dovetail Genomics, Llc | Physical linkage preservation in DNA storage |
WO2017017457A1 (en) | 2015-07-30 | 2017-02-02 | Arcis Biotechnology Holdings Limited | Method and composition using a quaternary ammonium compound |
ES2818569T3 (es) | 2015-09-09 | 2021-04-13 | Drawbridge Health Inc | Métodos para la recopilación, estabilización y conservación de muestras |
KR20180055905A (ko) | 2015-10-09 | 2018-05-25 | 아큐라젠 홀딩스 리미티드 | 증폭 산물의 농축을 위한 방법 및 조성물 |
CN108368542B (zh) | 2015-10-19 | 2022-04-08 | 多弗泰尔基因组学有限责任公司 | 用于基因组组装、单元型定相以及独立于靶标的核酸检测的方法 |
US11401558B2 (en) | 2015-12-18 | 2022-08-02 | Clear Gene, Inc. | Methods, compositions, kits and devices for rapid analysis of biological markers |
AU2017223600B2 (en) | 2016-02-23 | 2023-08-03 | Dovetail Genomics Llc | Generation of phased read-sets for genome assembly and haplotype phasing |
WO2017197300A1 (en) | 2016-05-13 | 2017-11-16 | Dovetail Genomics Llc | Recovering long-range linkage information from preserved samples |
CN109511265B (zh) | 2016-05-16 | 2023-07-14 | 安可济控股有限公司 | 通过链鉴定改进测序的方法 |
WO2017218777A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | California Institute Of Technology | Nucleic acid reactions and related methods and compositions |
EP3478856B1 (en) | 2016-06-30 | 2021-01-27 | Grail, Inc. | Differential tagging of rna for preparation of a cell-free dna/rna sequencing library |
SG10202111825YA (en) | 2016-08-15 | 2021-12-30 | Accuragen Holdings Ltd | Compositions and methods for detecting rare sequence variants |
JP7274748B2 (ja) | 2016-11-08 | 2023-05-17 | クヴェッラ コーポレーション | 核酸の安定化及び分離を行う方法 |
CA3055981A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Ancestry.Com Dna, Llc | Sample collection device and method |
EP3612646A1 (en) | 2017-04-18 | 2020-02-26 | Dovetail Genomics, LLC | Nucleic acid characteristics as guides for sequence assembly |
WO2018213803A1 (en) | 2017-05-19 | 2018-11-22 | Neon Therapeutics, Inc. | Immunogenic neoantigen identification |
WO2018232126A1 (en) * | 2017-06-14 | 2018-12-20 | Fabrico Technology Inc. | Decellularized and demineralized bone matrices and methods for making same |
US10973775B2 (en) * | 2017-09-22 | 2021-04-13 | University Of Manitoba | Antibacterial nanofiber |
AU2018345714A1 (en) | 2017-10-06 | 2020-05-21 | Ancestry.Com Dna, Llc | Systems, devices, and methods for sample collection |
US11099202B2 (en) | 2017-10-20 | 2021-08-24 | Tecan Genomics, Inc. | Reagent delivery system |
BR112020010274A2 (pt) | 2017-11-22 | 2020-11-17 | Ancestry. Com Dna, Llc | kit de coleta de amostra incluindo tampa tendo luva seletivamente móvel |
US11426734B2 (en) | 2017-11-22 | 2022-08-30 | Ancestry.Com Dna, Llc | Sample collection kit including cap having selectively movable sleeve |
CN111542605A (zh) * | 2017-12-27 | 2020-08-14 | 东丽株式会社 | 核酸的回收方法 |
EP3746566A1 (en) | 2018-01-31 | 2020-12-09 | Dovetail Genomics, LLC | Sample prep for dna linkage recovery |
US11203782B2 (en) | 2018-03-29 | 2021-12-21 | Accuragen Holdings Limited | Compositions and methods comprising asymmetric barcoding |
WO2020174442A1 (en) | 2019-02-27 | 2020-09-03 | Ancestry.Com Dna, Llc | Graphical user interface displaying relatedness based on shared dna |
DE102019108087A1 (de) * | 2019-03-28 | 2020-10-01 | Axagarius Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur Isolierung von Nukleinsäuren aus Probematerialien |
CN112176029B (zh) | 2020-06-12 | 2021-05-14 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 一种拭子核酸样本释放剂及其应用 |
WO2022197637A1 (en) * | 2021-03-15 | 2022-09-22 | Gen-Probe Incorporated | Compositions and methods for biological sample processing |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0078556B1 (en) | 1981-11-03 | 1986-03-12 | Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. | Process for cell disruption |
US4900677A (en) * | 1986-09-26 | 1990-02-13 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for rapid isolation of high molecular weight DNA |
DE3704465C2 (de) * | 1987-02-13 | 1995-11-02 | Roehm Gmbh | Flüssig-Formulierungen von Enzymen |
US5010183A (en) | 1989-07-07 | 1991-04-23 | Macfarlane Donald E | Process for purifying DNA and RNA using cationic detergents |
IT1240870B (it) | 1990-02-14 | 1993-12-17 | Talent | Procedimento per l'estrazione e la purificazione di dna genomico umano |
US5130423A (en) * | 1990-07-13 | 1992-07-14 | Microprobe Corporation | Non-corrosive compositions and methods useful for the extraction of nucleic acids |
JP3018802B2 (ja) | 1992-12-04 | 2000-03-13 | 和光純薬工業株式会社 | 全血液検体からのdna抽出方法及び抽出キット |
US5300635A (en) | 1993-02-01 | 1994-04-05 | University Of Iowa Research Foundation | Quaternary amine surfactants and methods of using same in isolation of nucleic acids |
WO1994018156A1 (en) | 1993-02-01 | 1994-08-18 | University Of Iowa Research Foundation | Quartenary amine surfactants and methods of using same in isolation of rna |
JPH07143879A (ja) | 1993-11-24 | 1995-06-06 | Toagosei Co Ltd | Dnaの分離精製方法 |
US5610287A (en) | 1993-12-06 | 1997-03-11 | Molecular Tool, Inc. | Method for immobilizing nucleic acid molecules |
US5981235A (en) | 1996-07-29 | 1999-11-09 | Promega Corporation | Methods for isolating nucleic acids using alkaline protease |
AU5168798A (en) | 1996-11-04 | 1998-05-29 | Cornell Research Foundation Inc. | Matrix mill for dna extraction |
JP4304348B2 (ja) | 1997-09-22 | 2009-07-29 | 独立行政法人理化学研究所 | Dnaの単離方法 |
JPH11332562A (ja) | 1998-04-28 | 1999-12-07 | Ortho Clinical Diagnostics Inc | 組織試料およびパラフィン包埋組織から核酸を抽出するための改良方法 |
DE19916534A1 (de) | 1999-04-13 | 2000-10-19 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | RNA-Isolierungs-Kit |
US6242188B1 (en) * | 1999-07-30 | 2001-06-05 | Applied Gene Technologies, Inc. | Sample processing to release nucleic acids for direct detection |
EP1203240A2 (de) * | 1999-08-09 | 2002-05-08 | Bilatec Gesellschaft Zur Entwicklung Biotechnologischer Systeme MBH | Labor-roboter und verfahren und reagenzienkit zur isolierung von nukleinsäuren |
DE19937607A1 (de) | 1999-08-09 | 2001-02-15 | Bilatec Ges Zur Entwicklung Bi | Reagenzienkit zur Isolierung von Nukleinsäuren |
US6548256B2 (en) | 2000-07-14 | 2003-04-15 | Eppendorf 5 Prime, Inc. | DNA isolation method and kit |
US7001724B1 (en) | 2000-11-28 | 2006-02-21 | Applera Corporation | Compositions, methods, and kits for isolating nucleic acids using surfactants and proteases |
-
2000
- 2000-11-28 US US09/724,613 patent/US7001724B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-11-28 DE DE60142254T patent/DE60142254D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-28 JP JP2002587600A patent/JP2005501523A/ja active Pending
- 2001-11-28 US US09/997,169 patent/US6762027B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-28 CA CA002429941A patent/CA2429941A1/en not_active Abandoned
- 2001-11-28 EP EP01274041A patent/EP1354036B1/en not_active Revoked
- 2001-11-28 AT AT01274041T patent/ATE469219T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-11-28 WO PCT/US2001/045071 patent/WO2002090539A2/en active IP Right Grant
- 2001-11-28 AU AU2001297835A patent/AU2001297835B2/en not_active Ceased
-
2004
- 2004-03-11 US US10/800,137 patent/US7303876B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-03-17 JP JP2006074844A patent/JP2006197941A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2002090539A3 (en) | 2003-08-07 |
US6762027B2 (en) | 2004-07-13 |
US7303876B2 (en) | 2007-12-04 |
US7001724B1 (en) | 2006-02-21 |
WO2002090539A2 (en) | 2002-11-14 |
CA2429941A1 (en) | 2002-11-14 |
US20050009045A1 (en) | 2005-01-13 |
DE60142254D1 (de) | 2010-07-08 |
ATE469219T1 (de) | 2010-06-15 |
US20020177139A1 (en) | 2002-11-28 |
EP1354036A2 (en) | 2003-10-22 |
JP2005501523A (ja) | 2005-01-20 |
AU2001297835B2 (en) | 2005-11-10 |
EP1354036B1 (en) | 2010-05-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7303876B2 (en) | Compositions, methods, and kits for isolating nucleic acids using surfactants and proteases | |
AU2001297835A1 (en) | Compositions, methods, and kits for isolating nucleic acids using surfactants and proteases | |
EP2539449B1 (en) | Process for parallel isolation and/or purification of rna and dna | |
JP2008531028A (ja) | カオトロピック剤および/または界面活性剤の存在下で核酸を分解するためのヌクレアーゼの使用 | |
JP2013523143A (ja) | 核酸を単離および精製するための方法 | |
JP2014502495A (ja) | 乾燥試料から遺伝材料を電気溶出する方法 | |
AU2016266805A1 (en) | Composition and method for disrupting tissue material | |
JP2005052142A (ja) | Rna単離用の装置及び方法 | |
JP5924888B2 (ja) | 核酸抽出方法、核酸抽出試薬キットおよび核酸抽出用試薬 | |
JP3887014B2 (ja) | 核酸増幅用に全細胞含有サンプルを調製する方法、対象の核酸分子を増幅する方法、核酸増幅用に核酸含有細胞から核酸を回収するためのキット | |
JP5426668B2 (ja) | Rna単離のための細胞溶解試薬 | |
WO2005093065A1 (en) | Improved method of isolating nucleic acids | |
US20090088560A1 (en) | Process for Nucleic Acid Purification | |
JP2023521579A (ja) | 固定された生体試料からの核酸精製 | |
JP2013523142A (ja) | 核酸の選択的単離および精製のための方法 | |
US20230130159A1 (en) | Rapid purification of high quality nucleic acids from biological samples | |
US20190233810A1 (en) | Method for Isolating Nucleic Acids with Bivalent Cations and Elution with a Cation Chelating Agent |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060824 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20061106 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20061110 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070223 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20080116 |