JP2005010177A - 循環ガン細胞の迅速かつ効率的な単離のための方法および試薬 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 試験対象における初期段階のガンを検査する方法であって、下記工程を含む方法:a)生物学的標本を試験対象から得て(標本はガン細胞を含有する可能性のある混合細胞集団を含む);b)生物学的標本から細胞フラクションを調製し(ガン細胞が生物学的標本中に存在する場合に、細胞フラクションをガン細胞について豊富化する);ついでc)豊富化されたフラクションをガン細胞の存在について分析する(標本中のガン細胞の存在が試験対象中の初期段階のガンの存在を示す)。
【選択図】なし
Description
大部分のガン患者はその初期の腫瘍によっては死亡しない。患者は、転移したガン、すなわち、元の細胞から分かれてしばしば離れた部位まで体内を移動する悪性細胞により確立された広い範囲にわたる複数の腫瘍コロニーに負けるのである。初期の腫瘍が十分に早期に検出されたならば、それらの多くは手術、放射線、または化学療法もしくはそれらの治療のいくつかの組み合わせにより除去されうる。不幸なことに、転移性コロニーは検出および除去がより困難であり、それらのすべてがうまく治療できるとは限らない。それゆえ、臨床的観点からすれば、転移は、ガンの自然な進行における決定的な出来事であると考えられる。そのうえ、転移能は悪性腫瘍をユニークに特徴づける特性である。
ガンの転移は一連の複雑な出来事を含む。これらは、1)最初の位置から周囲組織への拡張;2)体腔および血管中への浸透;3)循環系による輸送により腫瘍細胞が離れた部位に放出されること;4)滞留部位における組織への再侵入;および5)腫瘍細胞の生存、血管形成および腫瘍増殖を促進するための新たな環境への適応である。
ガンおよびガン転移の複雑さならびに長年にわたるガン患者の治療における欲求不満に基づいて、治療指針を立て、転移または再発に対するかかる治療の効果をモニターするための診断試験の開発のために多くの試みがなされてきた。おそらく、かかる試験は、ガンのスクリーニング、乳癌に関する乳房撮影または前立腺ガンに関する直腸触診のごとき比較的粗い試験の代替試験として用いることができた。その目的を達成するために、最近20年にわたり多くの試験が開発され、それらの利益が評価されてきた。最初の試みの1つは癌胎児性抗原(CEA)に関するイムノアッセイの定式化であった。この抗原は胎児細胞上に出現し、特定のガンにおける腫瘍細胞上に再出現する。CEAならびにPSA、CA15.3、CA125、PSMA、CA27.29のごとき他の多くの「腫瘍」抗原を試験することの有用性を評価するためにさらなる努力が行われてきた。通常にはかかる抗原の血中への出現は予想されず、検出された時には患者の生存の望みがほとんどないので、これらの努力はいくぶん実りのないものであることがわかった。しかしながら、最近2〜3年間において、1つの試験がガンの早期検出に有用であることがわかった。すなわち、前立腺ガンに関する前立腺特異的抗原(PSA)である。フォローアップ医学的試験および生検とともに用いた場合、PSA試験は、最も治療効果の高い早期において前立腺ガンの検出に顕著な役割を果たす。
PSA試験の成功にもかかわらず、その試験は多くの問題点を残している。例えば、高レベルのPSAは常にガンと相関があるとは限らず、さらに、常にガンの転移能を示すものでもない。この理由の一部は、PSAが正常前立腺組織ならびに他の未知因子の1成分であるという事実である。そのうえ、前立腺ガン患者の大部分は生命を脅かさない局所的な疾患を持ち続けるということが明らかになりつつある。転移するであろうガンを有する患者と転移しないであろうガンを有する患者との間のよりよい一致を図る必要があるので、前立腺細胞が循環するかどうかを調べるための試行がなされている。高いPSAレベルおよび生検データに付け加えた場合、循環腫瘍細胞の存在は、いかに活発に患者を治療すべきかを示すものとなりうる。
循環前立腺腫瘍の存在を調べるためのアプローチは、血中におけるPSAのメッセンジャーRNAの発現に関して試験することであった。これは、血液試料からすべてのmRNAを単離し、逆転写PCRを行うという手間のかかる手順により行われている。現在のところ、血中におけるかかる細胞の存在と、いずれの患者が活発な治療を要するのかを予想する能力との間には良好な相関関係はない(非特許文献1参照)。多くの状況下で行うことが不可能な場合、PCRを定量的に行うこと、すなわち、単位体積の生物学的試料あたりの腫瘍細胞数を決定することが困難であることは注目すべきことである。
さらに、この方法を用いると擬陽性がしばしば観察される。試験試料のサイズによる、この方法の感度に対する有限かつ現実的な限界があるという欠点もある。典型的には、試験を妨害する赤血球から精製された105ないし106個の細胞について試験が行われる。これは、血液0.1mlあたり腫瘍細胞1個という実施下限に対応する。それゆえ、シグナルが検出されるには、血液1mlあたり約10個の腫瘍細胞が必要である。さらに考えてみると、腫瘍細胞はしばしば遺伝的に不安定である。したがって、遺伝学的転移および配列変化を有するガン細胞は、PCRプライマーと標的配列との間の精妙な配列相補性が失われる可能性があるので、PCRアッセイにおいて見逃されやすい。
Gomella LG. J of Urology. 158: 326-337 (1997)
上記のことより、二次腫瘍の確立の前に転移能を有する循環中の細胞を同定するための方法、特にガンの初期において同定する方法が渇望される。かかる試験が慣用的なイムノアッセイに優るものであるという利点を理解するために、高感度イムノアッセイは10−17モルという低い機能的感度の限界を有すると考える。1個の腫瘍細胞が1mlの血液から捕捉され、分析されうる場合、表面受容体の分子数は、細胞1個あたり100000個と考えられ、それは10−19モルである。細胞上の約300個の分子が検出できるので、かかるアッセイは10−22モルのオーダーの機能的感度を有し、非常に注目すべきことである。かかる稀な細胞の単離における感度レベルを達成するために、そして、それらの細胞の特徴を変化または妨害しないやり方でそれらの細胞を単離するためには、膨大な仕事が必要である。
標的物質と別の物質(標的物質が特異的に結合する)との間の複合体形成に基づいて、上記標的物質を分析または分離するために種々の方法が利用できる。未結合物質からの複合体の分離を、重力を用いて、例えば、標的物質とカップリングした微粒子またはビーズを静置することにより、あるいは別法として遠心分離することにより行うことができる。所望ならば、かかる粒子またはビーズに磁性を帯びさせて結合/分離工程を容易にしてもよい。磁性粒子は当該分野においてよく知られており、免疫および他の生物学的な特異的アフィニティー反応において使用されている。例えば、米国特許第4554088号およびImmunoassays for Clinical Chemistry, pp. 147-162, Hunter et al. eds., Churchill Livingston, Edinburgh (1983)参照。一般的には、磁力または重力による分離を容易にする材料をこの目的に使用できる。しかしながら、磁力による分離手段が選択されるべき手段であることが明らかとなっている。
上記タイプの小型磁性粒子は、生物学的に特異的なアフィニティー反応を用いる分析において非常に有用である。なぜなら、それらは二官能基ポリマー(例えば、蛋白)でうまく被覆され、非常に大きな表面積を有し、合理的な反応キネティクスを有するからである。0.7〜1.5ミクロンの範囲の磁性粒子が、例えば、米国特許第3970518、4018886、4230685、4267234、4452773、4554088および4659678号を含む特許文献に記載されている。これらの粒子の特定のものは、免疫学的反応用の有用な固体支持体であると開示されている。
上記のような小型磁性粒子は、一般的には、2つの大きなカテゴリーに分類される。第1のカテゴリーは、永久に帯磁可能な粒子または強磁性体粒子を包含する。第2のカテゴリーは、磁場に置かれた場合にのみバルク(bulk)磁性挙動を示す粒子である。後者は磁気応答粒子と呼ばれる。磁気応答挙動を示す材料は超常磁性材料と呼ばれることがある。しかしながら、通常には強磁性体と考えられる材料、例えば、磁性を帯びた酸化鉄は、直径約30nmまたはそれ未満の結晶とした場合、超常磁性として特徴づけられる。対照的に、強磁性材料の比較的大きな結晶は、磁場に曝露した後、永久磁石の性質を保持し、強力な粒子間相互作用によりその後も凝集する傾向がある。
Owenらに付与された米国特許第4795698号は、ポリマー存在下におけるFe2+/Fe3+塩からのマグネタイトの形成により製造されるポリマーで被覆された、コロイド状超常磁性粒子に関するものである。Moldayに付与された米国特許第4452773号には、Owenらの特許に記載されたものと特性が類似した材料が記載されており、その材料は、非常に高濃度のデキストランの存在下において、塩基を添加することによりFe2+/Fe3+からマグネタイトおよび他の酸化鉄を生成させることにより製造される。両方の方法により得られた粒子は数カ月程度の長い期間観察しても、水性懸濁液から沈降する傾向を示さなかった。そのようにして製造された材料はコロイドの特性を有し、細胞分離において非常に有用であることが証明された。Moldayの方法はMiltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, GermanyおよびTerry Thomas, Vancouver, Canadaにより商業化されている。
流体媒体に磁場を適用して強磁性体を流体媒体から分離するという磁気による分離法は知られている。対照的に、比較的弱い磁気応答性に関連して、コロイド状の超常磁性粒子が懸濁状態を維持する傾向は、急勾配の磁気的分離(HGMS)法を用いてかかる粒子が懸濁されている流体媒体からそれらを分離することを必要とする。HGMS系において、磁場勾配、すなわち、空間的な導関数は、一定ポイントにおける磁場強度により及ぼされる影響よりも大きな影響を懸濁粒子の挙動に及ぼす。
HGMS系は2つの大きなカテゴリーに分類される。かかる1のカテゴリーは、分離チャンバーまたは容器にもっぱら外付けされる磁気回路を用いる磁気的分離系を含む。かかる外部分離器の例はLibertiらに付与された米国特許第5186827号に記載されている。この特許に記載されたいくつかの具体例において、磁石の同種の極が磁場に対向して配置されるように非磁性容器の周囲付近に永久磁石を置くことにより、精妙な磁場勾配が形成されている。かかる系において得ることのできる試験媒体中の磁場勾配の強さは、磁石の強さおよび磁石間の距離により制限される。それゆえ、外部勾配系を用いて得ることのできる勾配には一定の限界がある。
内部勾配系の欠点の1つは、スチールウール、ガーゼ材料、またはスチールマイクロビーズを使用すると、交差したワイヤー付近または交差したワイヤー間の格子中における毛細管現象により試験媒体の非磁性成分がトラップされうることである。かかる内部勾配カラムに対して種々の被覆法が適用されてきた(例えば、Miltenyiに付与された米国特許第5693539号およびKronickに付与された米国特許第4375407号)。しかしながら、かかる系の大きな表面積は吸着による回収率の問題をさらに生じさせる。それゆえ、特に、非常に低頻度で捕捉される物質の回収率が分離の目的である場合には、内部勾配系は望ましくない。さらにそのうえ、内部勾配系は自動化が困難であり、コストが高い。Owenら、およびMoldayにより記載された材料は両方ともかかる急勾配カラムの使用を必要とする。
磁気的分離を行うことができる効率、ならびに磁気標識された細胞の回収率および純度は多くの要因に依存するであろう。これらは、分離される細胞数、かかる細胞の受容体密度、細胞1個あたりの磁気負荷、磁性材料の非特異的結合(NSB)、使用する手法、容器の性質、容器表面の性質、媒体の粘度ならびに磁使用する気的分離デバイスのごとき事項を包含する。よくあることだが、系の非特異的結合のレベルが実質的に一定ならば、標的集団が減少するにつれて純度が低下する。例えば、NSBが0.8%である系が元の混合物中0.25%の集団を80%回収する場合、純度は25%であろう。しかしながら、最初の集団が0.01%(106個の共存細胞中、標的細胞1個)であり、NSBが0.001%である場合、純度は8%であろう。純度が高くなればなるほど、分析が容易かつ良好になる。それゆえ、意味のある稀な細胞の分析を行うためには極端に低い非特異的結合が必要となることは明らかである。
標的細胞の集団が小さくなればなるほど、磁気的に標識し、回収することが困難になるという事実はあまり明らかでない。さらにそのうえ、標識および回収は、使用する磁性粒子の性質に著しく依存する。例えば、Dynalビーズのごとき大型の磁性粒子とともに細胞をインキュベーションする場合、ビーズが大きすぎて効果的に拡散が起こらないので、系の混合により生じる衝突により細胞を標識する。よって、非常に初期のガンの腫瘍細胞の場合のように、細胞が、血液1mlあたり1個またはそれ未満の頻度で集団中に存在する場合、標的細胞を標識する確率は、系に添加された磁性粒子数および混合時間の長さに関係するであろう。かなりの時間、細胞をかかる粒子と混合することは有害なので、できるかぎり粒子濃度を増加させることが必要である。しかしながら、分離の際に大量の磁性粒子と混合された稀な細胞に代えて、他の血液細胞と混合された稀な細胞を用いることがあるので、添加できる磁性粒子の量には限界がある。後者の条件は、目的細胞を計数し、あるいはそれらを試験する能力を著しく改善することはない。
稀な出現頻度(血液1mlあたり1ないし50個)の細胞を単離するための大量の粒子の使用にはもう1つの欠点がある。大きな磁性粒子は非常に簡単な設計で、比較的低い磁場勾配の外部勾配の使用を可能にするという事実にもかかわらず、大きな粒子はカゴ様のクラスターを細胞周囲に形成する傾向があり、細胞を見たり分析したりすることを困難にする。それゆえ、分析前に磁性粒子を標的細胞から遊離させなくてはならず、粒子の遊離は他の問題を明らかに誘発する。
かかる分離を行って適当な磁気負荷を達成するためにコロイド状磁性材料を用いることについては他の理由がある。適当な負荷があると、十分な力が細胞に作用して、中程度に希釈された全血のごとき粘性媒体においてさえも、単離を行うことができる。説明したように、約200ナノメーター未満のコロイド状磁性材料はブラウン運動を示し、ブラウン運動は稀な細胞と衝突して磁気的に標識する能力を著しく高める。このことは、米国特許第5541072号に示されており、平均直径100nmのコロイド状磁性粒子またはフェロ流体を用いた、非常に効果的な腫瘍細胞追放実験の結果が記載されている。重要なことに、このサイズ範囲またはそれ未満のサイズ範囲のコロイド状材料は、一般的には、細胞の試験を妨害する。そのようにして回収された細胞を、フローサイトメトリー、レーザースキャンニング顕微鏡、または可視もしくは蛍光法を用いる顕微鏡により試験することができる。
本発明は、生物学的試料由来の腫瘍細胞のみならず、稀な細胞、あるいは他の生体物質を特徴づけるための迅速かつ効果的なスクリーニング法を提供する。本発明方法は、目的物質の効果的な豊富化を可能にする非常に高感度の分析法を提供する。標的の生体物質の豊富化を確実にし、その一方で分析前に残渣および他の妨害性物質の大部分を除去する、この二段階法は、実施されそうにない試料サイズの試験を可能にする。本明細書記載の方法は、ユニークなやり方で、多パラメーターフローサイトメトリー的、顕微鏡的および免疫細胞化学的分析を用いる免疫磁気的豊富化の要素を総合したものである。密度勾配遠心分離またはパンニングまたは適当な標識による標的細胞密度の変化のごとき他の豊富化手段を用いてもよい。好ましい具体例によれば、本発明方法は、ガンの進行段階識別、モニタリングおよびスクリーニングのための全血アッセイを可能にする。アッセイの高感度である性質は残存疾病の検出を可能にし、かくして、ガンの再発のモニタリングを可能にする。
ガンを根絶するための医学的、放射線的または外科的処置の後に、本発明方法を用いて循環系に滞留するガン細胞を評価してもよい。本発明方法を、数年にわたる期間中、定期的に行って、循環系における腫瘍細胞の存在および数を疾病の発症、再発および/または進行のインジケーターとして患者を評価してもよい。
好ましくは、本発明の被覆磁性粒子は70〜90%の磁石量を有する。好ましい具体例において、磁性粒子の主要部は90〜150nmの粒子サイズを有する。より単一分散(monodisperse)であるように、例えば、90〜120nmまたは120〜150nmの範囲であるように粒子を合成してもよい。典型的には、本発明の粒子は生物学的に適合しうる媒体中に懸濁される。
i.稀な細胞上の第1の特徴決定基に対してアフィニティーを有する生物学的に特異的なリガンドに直接的または間接的ににカップリングした被覆磁性ナノ粒子;
ii.稀な細胞上に存在する第2の特徴決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の生物学的に特異的な試薬;ならびに
iii.他の非標的物質または他の試料中の物質を分析から排除するための細胞特異的染料
を含む。
本発明のキットは、循環系中の転移性ガン細胞のタイプならびにかかる細胞の転移能および攻撃性を診断するための試薬を含んでいてもよい。この具体例において、キットは、上記試薬のほかに、ガンの診断を容易にするためのさらなる抗体マーカーを含んでいてもよい。乳ガンを例として用いた場合、かかる抗体は抗MUC−1、抗エストロゲン受容体、抗プロゲステロン受容体、抗CA27.29、抗CA15.5、抗カテプシンD、抗p53、抗ウロキナーゼ型プラスミノーゲンアクチベーター、抗上皮成長因子、抗上皮成長因子受容体、抗BRCA1、抗BRCA2、抗前立腺特異的抗原、抗プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤および/または抗Her2−neu抗体を包含しうる。攻撃性および侵襲性のさらなるマーカーはルイスa(Lea)、シアリルルイスa(sLea)、インテグリン類(CD49b、CD49c、CD29)、ゼラチナーゼAおよびB(MMP−2、MMP−9)、組織コラゲナーゼ(MMP−1)、線維芽細胞活性化蛋白(FAP)、グアニジノベンゾアターゼ、CEA、S100ファミリー(S100A4、mtsl、18A2/mtsl、pEL−98、p9Ka、メタスタシン)、サイクリンAおよびE、p27、p53、血管内皮成長因子(VGEF)ならびにE−カドヘリンである。
多くの医師は、ガンは初期段階においては器官に限定された疾病であると考えている。本明細書に示したデータに基づけば、この考えは正しくない。実際、本明細書のデータは、現在使用できる方法を用いて最初に検出されて時までにガンがしばしば全身性の疾病となっていることを明らかにする。それゆえ、循環系中の腫瘍細胞の存在を用いて、乳房撮影またはPSA測定のごとき他の試験の代わりに、あるいは他の試験と併用してガンのスクリーニングを行うことができる。細胞上または細胞中の特異的マーカーに試行された適当なモノクローナル抗体を用いることにより、あるいは細胞の蛋白発現の関する他のアッセイを用いることにより、あるいは細胞mRNAの分析により、かかる細胞の起源器官、例えば、乳房、前立腺、結腸、肺、卵巣または他の非造血系を容易に決定することができる。かくして、腫瘍の徴候が本質的に存在しないが、ガン細胞を検出することができる場合に、ガン細胞の存在ならびに起源器官を同定することが可能となるであろう。本発明の非常に高感度で機能する比較的簡単な血液試験を用いてスクリーニングできるので、試験は「全血生検」と考えられる。さらにそのうえ、本明細書に示すデータに基づけば、ガンは、潜在的に非常に有害な転移性細胞の存在により特徴づけられる血液由来の疾病と考えるべきであり、それゆえ、適宜治療されるものである。例えば、外科手術後に、循環性腫瘍細胞の検出可能な証拠が絶対的にない場合、放射線照射または化学療法のごときフォローアップ治療が必要かどうかを、さらに臨床的研究を行うことにより決定してもよい。治療の必要がないとの決定は、かかる治療のコストを考慮すれば、意義のある有益な臨床的情報である。
疾病の開始から末期段階に至るまで、循環系における腫瘍細胞数は疾病の進行段階と関連があることも、本発明のデータにより明らかである。
他の分析形式は、レーザースキャンニングサイトメトリー(コンピュサイト(compucyte))、明視野ベースイメージ分析(クロマビジョン(Chriomavision))、および毛細管体積測定(バイオメトリックイメージング(Biometric imaging))を包含する。
下記方法は本発明の実施を容易にするために提供される。
以下の実施例は本発明の実施を容易にするために提供される。これらの実施例は本発明の範囲を何ら限定するものではない。
稀な細胞(例えば、上皮由来の腫瘍の患者における腫瘍細胞、母親の血液中の胎児細胞等)は血液1mlあたり1個未満の頻度で存在しうる。かかる細胞の検出に必要な血液スメア数は極めて大きい。10mlの血液中に10個の稀な細胞があると仮定すると、5〜10x107個の白血球につき10個の腫瘍細胞があることになり、細胞遠心分離または沈降により細胞を顕微鏡スライドグラスに乗せ、目的とする稀な細胞に特異的な抗体で染色し、手動または自動で読み取ることができる。1枚のスライドグラスに乗せることのできる細胞の最大数は約500000個であり、そのことは、10mlの血液を処理するには100〜200枚のスライドグラスが必要であることを意味する。この方法による分析に必要な時間は、この方法を実用的でないものとし、経済的に実行不可能なものとする。結果的に、試料体積減少ならびに密度勾配分離または赤血球溶解による赤血球および血小板の除去のごとき豊富化法を稀な細胞の単離に使用して、分析すべきスライドグラスに乗せる細胞数を有意に減少させることとなる。
制限された量のビオチンをBSAに抱合させて、得られる生成物の30〜40%が結合ビオチンを持たないようにすることによりモノビオチン−BSAを調製してもよい。
図1は、本発明のアッセイ方法を用いて、全血中に添加された腫瘍細胞を単離する場合に結果を示す。パネルAは顕微鏡による分析を示し、パネルBはフローサイトメトリーを用いて得られた分析結果を示す。図2は、1人の転移性乳ガン患者から3つの時点において得た10mlの血液試料のフローサイトメトリー分析の3つの例を示し、フローサイトメトリーによる抗上皮細胞抗体に対する抗白血球抗体の相関を示す。図2中、パネルAは、上皮細胞に典型的な位置において検出され、存在する細胞を示す。パネルBには、108個の上皮細胞が検出されており、パネルCには、1036個の上皮細胞が検出されている。
10mlの血液試料の分析において核酸染料上の閾値セットを越える物質数は5000ないし50000個の間を変動した。これらの物質は、細胞残渣および白血球からなっている。32人の対照の血液の分析において、上皮細胞に典型的な領域に存在する物質は0〜4個/血液10mlの範囲であった(平均値=1.0、標準偏差=1.2)。
研究期間中8人の乳ガン患者は活性のある転移性疾病有していた。これらの患者において、10mlの血液中の上皮細胞数は0ないし1036の間を変動した。主観的判断基準、すなわち、骨の痛み、呼吸困難等ならびに客観的判断基準、X線、骨スキャン、CTスキャン、MRIおよびリンパ節サイズにより疾病の活性を評価した。表Iに示すように、患者をカテゴリー0から4までに分類した。
パネルGに示す場合において、乳ガンの手術から3年後である研究の最初の時点では上皮細胞は検出されなかった(T2N1M0)。4週間後、フローサイトメトリーにより10mlの血液中に50個の上皮細胞が検出された。この時点で患者は疾病再発の臨床的徴候は有していなかった。フローサイトメトリーにより検出される細胞が悪性細胞の特徴と矛盾しない特徴を有するという形態学的確認を得るために、さらに血液試料を分析した。
コロイド状磁性ナノ粒子を用いて上記実験を行った。上記のようにナノメーターサイズの磁性粒子がこの適用法に好ましいのであるが、この実験において、血中に低頻度で存在する腫瘍細胞の選択に関する大きなサイズの磁性ビーズの有効性も評価して、ミクロンサイズのビーズを用いて腫瘍細胞を選択できるかどうかも調べた。
すでに述べたように、大きなサイズのビーズの使用に伴う欠点がある。これらは:(i)ビーズが大きすぎて拡散できず、かくして、ビーズと低頻度で存在する標的細胞との衝突には混合が必要であること、(ii)ビーズが非常に速く沈降し、連続撹拌がさらに必要であること、ならびに(iii)大きなサイズのビーズが細胞周囲に凝集し、分析を妨害することである。したがって、大きなサイズのビーズは、可視化または分析の前に、細胞表面から除去する必要がある。本発明によれば、ビーズ濃度を増加させ、連続混合を行うインキュベーション時間を延長して稀な細胞への結合を容易化することにより、大きなビーズを用いる細胞選択の効率を改善できることがわかった。この実験において、2.8μmのDynal抗上皮細胞ビーズ(Dynal, NY)を用いて、大きなビーズに関する最適条件下でのモデル研究における血液からの腫瘍細胞の選択の効率を試験した。これらのビーズは上皮腫瘍細胞に特異的なモノクローナル抗体と抱合される。既知数の腫瘍細胞(ガン細胞系)を正常血液中に添加して、ビーズでの選択後の回収率を調べた。腫瘍細胞は蛍光色素にて予め標識され、検出中に血液細胞と分別するようにした。プロトコールは製造者の推奨するものに従った。
全血(5ml)を15mlのポリスチレン遠心管に入れ、ついで、20±3個の蛍光標識SKBR−3(乳ガン細胞系)細胞を添加した。SKBR−3細胞を予め核酸染色染料(Hoechst)にて染色して、ビーズによる選択後の検出を可能にした。5mM EDTA含む5mlのDulbeccoのPBSで血液を希釈し、希釈血液をロッカー(rocker)上4℃で15分混合した。50x106個のビーズを含む100μlのDynal抗上皮細胞ビーズを血液試料に添加し、ロッカー(rocker)上4℃で30分インキュベーションした。使用ビーズ数は全白血球数と同様、すなわち、白血球1個につきビーズ1個であったことに注意。磁力により標識した細胞を、試料チューブをDynal MPC磁力分離器中に6分間置くことにより分離した。上清を吸引後、集めた細胞を、0.1% BSAを含む3mlのDulbeccoのPBS中に再懸濁した。試料チューブをDynalのMPC中に戻して6分間置いて、持ち越し血液細胞を除去した。上清を吸引後、磁力により結合した細胞を、0.1% BSAを含む200μlのDulbeccoのPBS中に再懸濁した。
選択した腫瘍細胞、非特異的結合血液細胞および過剰の遊離磁性ビーズを含む最終試料を免疫蛍光スライドグラス上にスポットし、腫瘍細胞を検出した。200μlの試料を10個の異なるウェル中にスポットし、遊離磁性ビーズを分散させた。各ウェルに存在する蛍光染色された腫瘍細胞を、蛍光顕微鏡を用いてカウントした。結果を表IIに示す。
さらなる分析のための観察および染色を実行不能にする、細胞表面上のビーズが多数存在していた。この実施例において、腫瘍細胞を蛍光核酸染料にて前以て染色しておいたので、検出のためにさらに染色することは不要であった。しかしながら、磁性粒子に結合した細胞の起源組織を同定することが、しばしば好ましい。標識抗体を用いて臨床試料中に存在する腫瘍細胞を検出し特徴づけて、かかる同定を行う。したがって、標的細胞選択後、すなわち、分析前に、ビーズを細胞表面から除去し、試料から分離しなくてはならない。このことは、ナノサイズの磁性粒子にはあてはまらない。なぜなら、それらのサイズは細胞の分析を妨害しないからである。
ビーズを細胞表面から取るために用いる方法であって、単離細胞に有意なダメージを与えない方法がいくつかある。1の方法は、必要とされる抗原または抗体に対してより高いアフィニティーを有する過剰の特異的競合試薬を添加することにより細胞表面から抗体を駆逐することである。このタイプの機構を用い、ペプチド(Baxter Isolex 300)を用いて、臨床的適用例においてCD34により選択された細胞からビーズを取る。そのペプチドは、ビーズ上の抗体への結合に関してCD34抗原と競合し、細胞から抗体−ビーズ複合体を駆逐する。もう1つの方法はビーズと抗体との間の可逆的化学的リンカーを用いるものである。
磁性ビーズへの抗体の抱合を行っている間に化学リンカーを挿入することができる。化学的連結は適当な条件下で開裂されて抗体からビーズ遊離させるものであってもよい。現在使用される1の方法は、磁性ビーズに抗体を連結するための核酸リンカーを用いる。核酸リンカーはポリヌクレオチドであり、DNAase酵素を用いて特異的に加水分解されうる。核酸リンカー中に存在するヌクレオチド結合の加水分解後、ビーズは抗体から遊離され、抗体は細胞に結合したままである。遊離されたビーズを磁気的分離により細胞懸濁物から除去することができる。ビーズから遊離された細胞を、顕微鏡またはフローサイトメトリーによるさらなる分析に使用することができる。
この実施例は、大きなサイズの磁性ビーズを用いて血液から腫瘍細胞を単離することもできるが、細胞を標識するに十分な高濃度のビーズを使用し、ついで、分析前にビーズを細胞から遊離させることが条件である。
手術後1〜20年たった37人の患者の末梢血を、上皮細胞の存在に関して、フローサイトメトリーにより試験した。1年間に7個までの末梢血試料をこれらの患者から取った。表IIIにおいて、各患者をリストし、手術時ないし手術後年月がたってからのTNM(腫瘍、節、および転移)段階により分類してある。また表IIIは、研究期間中に患者が治療(化学療法またはホルモン療法のいずれか)を受けたかどうかを示す。過去において離れた部位への転移の証拠を有していたが研究の時点で完全に寛解している6人の患者のうち3人において、上皮細胞が血中において対照群よりも高い頻度で存在することがわかった。また、離れた部位への転移の証拠のない31人の患者のうち9人において循環上皮細胞が
見出された。
これら9人の患者におけるサイトフローメトリーによる上皮細胞についての典型的な領域に存在する物質数は少なく、これらの物質を腫瘍細胞であると同定することを保証するものではない。スライドグラス上に免疫磁気的に選択された細胞を乗せることにより得られた細胞学的知見は、図4に示すようなそれらの細胞のアイデンティティの評価において多いに役立つ。図4のパネルAは、サイトケラチン染色陽性で、採血時に転移性疾病の証拠が無かった患者から得た2個の細胞を示す。パネルBは、過去において転移性疾病を有していたが、完全に寛解している患者から得た細胞を示す。パネルCおよびDにおいて、時点6において患者25の血液から単離された2個の細胞を示す。パネルCに示す細胞は悪性と矛盾しない特徴を有するが、パネルDの細胞は正常偏平上皮細胞の外観を呈している。
表III
治療意志のある乳ガン患者であって術後疾病の証拠のない患者ならびに32人の対照の末梢血10ml中の、フローサイトメトリーによる上皮細胞数
患者
Ys = 最初の手術からの年数
Tx = 治療, CT = 化学療法, H = ホルモン療法, - = 治療せず
1,2,3,4,5,6,7 = 上皮細胞数を調べた時点の番号
表IVは、本発明のアッセイを用いて13人の対照および30人の乳ガン患者を評価する、同様の臨床試験を行って得られた結果をまとめたものである。対照個体において、20mlの血液中の上皮細胞数は0〜5個の範囲であった(平均値1.5±1.8)。対照的に、器官限定的乳ガンを有する14人の患者(TXNOMOに分類される患者)の20mlの血液試料中には平均15.9±17.4個の上皮細胞が存在し、リンパ節の障害を有する患者においては47.4±52.3個存在し、また、離れた部位への転移を有する患者においては122±140個存在していた。対照群と乳ガン患者(転移ありまたはなし)との間の相違は非常に有意であった[多パラメーター分析(Kruskal-Wallis)によればP,0.001]。器官限定群と離れた部位への転移を有する群との間の相違は0.009(t試験)であった。器官限定的乳ガンを有する患者における上皮細胞数は、14の症例のうち12の症例においてカットオフ点(対照群における平均値プラス3標準偏差=6.9)より大であった。そのうえ、上皮細胞として分類される5個より多い物質を有する個体は対照群には存在せず、器官限定的乳ガンを有する14人の患者のうちわずか2人が7個未満の物質を有していた。
表IV
臨床データのまとめ
フローサイトメトリーを用いて、対照個体および乳ガン女性からの20mlの血液から得た陽性物質を分析した。対照血液中の上皮細胞数は、t試験(P≦0.01)およびKruskall-Wallis非パラメーター分析(P<0.001)によれば、乳ガン患者の3つの群のそれぞれとは統計学的に異なっていた。この表中のデータを用いて陽性試料について予備的なカットオフ値を確立した。正常対照(n=13)中の循環上皮細胞数の平均値を求め、ついで、標準偏差の3倍の値を加算することによりこの値を決定した。平均値は1.5であり、標準偏差は1.8である。カットオフ:1.5+5.4=6.9。男女対照間の統計学的差異はない。
前立腺の転移性疾病を有する3人の患者を、化学療法を行った後の血中循環上皮細胞の存在に関して評価した。結果を図5に示す。データは、血中循環上皮細胞の増加が疾病の活性と相関関係があることを明らかにしている。また、ガンの拡張を検知できない3人の患者において、上皮細胞が20mlの末梢血中に見出された(16個±4個)。表Vに示すように、前立腺ガン患者の血中上皮細胞数は正常対照とは統計学的に異なっていた(Pは0.001未満)。
正常個体、良性腫瘍を有することが知られている個体ならびに炎症性疾病を有する患者から対照血液試料を得た。統計学的データに基づけば、結果は、20mlの血液中約6.8個のカットオフ点が前立腺ガンの診断マーカーとして有用であったことが明らかとなる。
本発明のアッセイ方法を用いて種々の異なるタイプのガンを有する患者の評価を有利に行うことができる。説明すると、当業者方法は、結腸ガンを有する患者における循環上皮細胞レベルを評価するためにも用いられる。転移の証拠のない結腸ガン患者を、術前、術後において、循環上皮細胞の存在に関して評価した。結果を図6に示し、表VIにまとめる。データは、結腸ガン患者中の循環上皮細胞数は手術前において多いことを明らかにする。
表VIIおよび図7は、転移の証拠を有する結腸ガン患者を循環上皮細胞の存在および数に関して評価して得たデータを示す。結果は、末梢血中の上皮細胞数は、手術後において、局所的な疾病と比較すると、転移性疾病の患者において多いことを明らかにする。結果はさらに、転移性疾病の程度が循環上皮細胞数と相関関係がある可能性を示す。
患者における上記のすべての研究は、良性腫瘍を包含するガン性疾病のない正常個体または患者と比較すると、ガンを有する患者において過剰な上皮細胞が存在することを明らかにする。しかしながら、これらの過剰な上皮細胞が実際にガン細胞であることを証明することが必須である。ガンを有するまたは有しない患者から免疫磁気的に精製された上皮細胞をスライドグラス上にサイトスパン(cytospun)し、抗ムチンで処理する実験を行うことによって、これを証明する。さらに、正常個体の包皮および血液から得た正常上皮細胞をいずれも対照として使用してサイトスパンした。スライドグラスにコード番号を付け、「盲検」を試験し、観察者が病気を熟知し、正常上皮細胞を試験に含めることが重要である。図4からわかるように、ガン細胞と正常上皮細胞との間に著しい相違がある。正常上皮細胞は、細胞質に対する核の割合が低く、すなわち、豊富な細胞質および比較的小さい核がある。核はクロマチンの平滑な分布を示す。細胞は抗ムチンでは染色されない。対照的に、乳ガンを有する2人の患者からの細胞は非常に大きな核およびその周囲の小さい細胞質を有する。さらに、核における暗色パッチにより示されるようにクロマチンは組織化されておらず、細胞は抗ムチンで強く染色される。前立腺ガンの2人の患者からの細胞においても、同じ結果が得られた。病気を熟知した医師は、ガンまたはガンでない患者からコード番号を付したスライドグラスを示された(合計21枚)。病気を熟知した医師は、すべての対照から血液を正しく同定してガン細胞を有しないものとし、スライドを2回示された場合、イントラ観察エラー(intraobserved error)を示さない。前立腺ガンを有する2人の患者の場合、研究において腫瘍細胞は見られなかった。1のスライドを再検査したところ、腫瘍細胞が観察された。この食い違いの原因は、細胞スネアのスキャンに要した時間であると思われる。要するに、細胞の形態および免疫表現型は、ガン患者の血中に存在する過剰の上皮細胞が実際にガン細胞であることを示す。
上記の実施例は、本明細書開示の方法が初期腫瘍を有する患者の血中ガン細胞の検出を可能にすることを示す。実際、器官に限定された疾病(初期段階のガン)を有すると臨床的に決定された27人の患者のうち25人において、我々は、血中におけるガン細胞の存在を検出した。このことは、当該アッセイが、通常には遅くに検出(腫瘍細胞109〜1010個)される固体腫瘍においてずっと早くガン細胞を検出するものであることを意味する。前立腺に関する血中腫瘍細胞の器官起源を、抗前立腺特異的膜抗原(PMSA)、抗PSA(前立腺特異的抗原)、または男性対照の前立腺に特異的な他の抗体での染色によって確認することができる。女性対照の乳ガンに関しては、抗マモグロビン、抗プロゲステロン受容体、抗エストロゲン受容体ならびに抗乳脂肪グロブリン抗原IおよびIIでの染色は、腫瘍が胸部由来であることを示すであろう。
我々の試験は、他の器官、例えば、膵臓、食道、結腸、胃、肺、卵巣、腎臓等に由来するガン細胞を検出するものである。下表は、乳ガンおよび前立腺ガン以外のガンを有する幾人かの患者において過剰の上皮細胞が観察された例を示す。
ずでにガン治療が成功し、現在長期のわたり完全に寛解している患者におけるガン細胞の検出に本発明の血液試験を用いることができる。実際に、5年またはそれ以前に治療され、臨床的に腫瘍を有していないと思われる患者において循環上皮細胞、すなわち、休眠腫瘍細胞が検出された。このことは、なぜ見かけ上治療が成功してから多くの年月がたってから、10年たってからでさえも患者における再発がおこりうるのかということの説明になる。実際に、蓄積されつつある証拠は、乳ガン患者の再発速度はゆっくりとして着実であり、乳房切除から10〜12年後に再発することを示唆する。
上記実施例により示されたように、本発明を用いて、現在無徴候の患者におけるガンの検査診断を有利に行うことができる。この点につき説明するために、2年間にわたり高PSAレベル(>12μg/ml)を有する患者に、下記の分析を行う2週間前に前立腺の穿刺生検を行った。生検によっては悪性の存在は明らかにならなかった。18カ月前に行った以前の生検も陰性であったことも重要である。
20mlの血液試料を得る前に、患者の直腸を触診し、血中に腫瘍細胞を存在させるために肥大した前立腺をおだやかにマッサージした。本発明方法を用いて血液試料を豊富化させた。Wrights-Giemsa染色を用いて顕微鏡により豊富化フラクションを調べた。単離細胞の形態学的試験により悪性の特徴が明らかとなった。明らかに、この患者はガンを有していた高いPSAレベルが観察された場合には、前立腺ガンと診断できる可能性がある。本明細書に記載したような適当な試薬を用いて細胞の起源を調べてもよい。この実施例で示された結果は、本発明方法を用いて、検出されなかったかもしれないガンを検出することができる。
血液試験の感度を上昇させる手段として局所的なマッサージを用いて血中に腫瘍細胞を流出させるという考えは、かなり長所のある考えである。このアプローチにより循環系に放出され、単離された細胞を、種々の異なる目的に使用することができる。フェロ流体を用いて単離された細胞の場合、単離細胞を容易に培養および/またはクローン化することができる。得られた細胞系を用いて、化学治療剤感受性および成長因子依存性のごとき種々の悪性細胞の特徴を評価することができる。
本発明のアッセイを行うために使用される試薬を含む試験キットも、本発明における使用が企図される。かかるキットは個々の用途のために設計される。循環している稀な細胞(腫瘍細胞を包含するが、これに限らない)に関して患者を容易にスクリーニングできるように試薬をアッセンブルすることができる。この具体例において、キットは、磁性コア材料を含むコロイド状磁性粒子、蛋白ベース被覆材料、ならびに単離すべきガン細胞上に存在する特徴敵な決定基に特異的に結合する生物学的に特異的なリガンドを含む。またキットは、単離すべきガン細胞上の第2の特徴決定基(該生物学に特異的なリガンドにより認識される決定基とは異なる)に対してアフィニティーを有する少なくとも1種の生物学的に特異的な試薬を含む。キットは、非有核細胞および他の非標的試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料も含む。
本発明による典型的なキットは、磁性ナノ粒子に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAM、ならびに一対のモノクローナル抗体(第1の抗体はガン特異的決定基を認識するものであり、第2の抗体は非腫瘍細胞決定基、例えば、汎白血球抗原に対してアフィニティーを有する)を含んでいてもよい。またキットは、非有核細胞を分析から排除するための核酸染料を含む。所望により、本発明のキットは生物学的バッファー、透過バッファー、プロトコール、分離容器、分析チャンバー、陽性細胞または適当なビーズおよび情報シートを含んでいてもよい。
循環系中において検出される特定のガン細胞の診断および特徴づけを容易ならしめるように上記キットを製造してもよい。この具体例において、キットは上記のすべての品目を含むが、好ましくは、一群のガン特異的モノクローナル抗体も含む。乳ガンを例として用いると、診断キットは、抗MUC−1、抗エストロゲン、抗プロゲステロン受容体抗体、抗CA27.29、抗CA15.3、抗カテプシンD、抗p53、抗ウロキナーゼタイププラスミノーゲンアクチベーター、抗上皮成長因子、抗上皮成長因子受容体、抗BRCA1、抗BRCA2、抗前立腺特異的抗原、抗プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤、抗Her2−neu抗体または上記のもののサブセットを含んでいてもよい。
ガン撲滅後の再発しつつある疾病および/または残存細胞に関して患者をモニターするためのキットも提供される。この具体例において、ガンのタイプはすでに診断されているものであろう。したがって、キットは、ガンについて生物学的試料をスクリーニングするために用いられるすべての試薬を含むほか、患者においてすでに診断されているガンのタイプに特異的なさらなる抗体も含むであろう。さらに乳癌を例に用いると、かかるキットは抗MUC−1を含む。あるいはまた、キットは抗Her2−neuを含む。
本発明のキットは種々の異なるガンのタイプをスクリーニング、診断またはモニターするためにカスタマイズしてもよい。例えば、キットを用いて前立腺ガンを検出する場合、キットに含まれる抗体は前立腺組織に特異的なものであろう。この目的に適した抗体またはマーカーは、抗前立腺特異的抗原、遊離PSA、前立腺酸性ホスファターゼ、クレアチンキナーゼ、チモシンb−15、p53、HPC1ベーシック前立腺遺伝子ならびに前立腺特異的膜抗体を包含する。結腸ガンの存在につき患者をスクリーニングする場合、ガン胎児性抗原(CEA)をキットに含ませてもよい。膀胱ガン患者のスクリーニングに用いるキットは、核マトリックス蛋白(NMP22)、Bard膀胱腫瘍抗原(BTA)またはフィブリン分解産物(FDP)に対する抗体を含んでいてもよい。多くの異なるガンタイプに関するマーカーが知られている。
本発明のキットを用いて単離された細胞を、形態、起源器官に関連したRNA、表面および細胞内蛋白、特に悪性に関連した蛋白に関してさらに研究してもよい。循環細胞の分析を行うことにより、かかる分子に関して存在する情報に基づいて、単離細胞上の分子の発現から腫瘍の転移能を決定することができるはずである。
特異的マーカーが知られているガンに関するキットを提供することが、本発明の目的である。現時点で知られているマーカーならびに有用性/徴候をまとめた表を以下に示す。
サイトケラチンマーカー
循環乳ガン細胞の検出に使用するキットを用いることにより、いかにして本発明方法の実施を容易にするかを以下に示す。
上記のように、キットは、全血から腫瘍細胞を豊富化するための試薬、デバイスおよび方法論から始まる。キットは血液試料中の乳ガン細胞を試験する試薬を含み、それらは6種の因子またはインジケーターを評価するものであろう。受容体分子DAPI、CY2、CY3、CY3.5、およびCY5.5が適当な励起およびエミッションフィルターにより識別されるように分析形式を設定する。この実施例における分析形式は、水銀アークランプを装備した蛍光顕微鏡、および使用検出標識の波長を調べるための適当なフィルターのセットを使用する。この方法ではすべてのマーカーは一度に導入される。UV光で励起され、核酸を染色するDAPIは細胞の核の形態を調べるために使用されるであろう。CY2で標識されたCAM5.2は対照細胞を染色するために使用されるであろう。CY3で標識されたC11はサイトケラチン7、8、18および19を標識するために使用されるであろう。CY3.5と抱合された抗体はHER−2/neuを標識するために使用されるであろう。CY5と抱合された抗体はMuc−1を標識するために使用されるであろう。CY5.5と抱合された抗体はエストロゲン受容体を標識するために使用されるであろう。適当な励起およびエミッションフィルターを用いることにより、ガン細胞が同定されるであろう。
雑誌、米国特許および米国特許出願に対するいくつかの引用が上記においてなされている。上記引用の各主題を、参照により、完全に本明細書に取り入れる。
上で、本発明の特定の好ましい具体例を記載し、詳細に例示説明したが、本発明をかかる具体例に限定するものではない。本発明の精神から逸脱せずに種々の修飾を本発明について行うことができ、本発明の全範囲は下記の特許請求の範囲に記載されている。
Claims (61)
- 試験対象における初期段階のガンを検査する方法であって、下記工程を含む方法:
a)生物学的標本を試験対象から得て(標本はガン細胞を含有する可能性のある混合細胞集団を含む);
b)生物学的標本から細胞フラクションを調製し(ガン細胞が生物学的標本中に存在する場合に、細胞フラクションをガン細胞について豊富化する);ついで
c)豊富化されたフラクションをガン細胞の存在について分析する(標本中のガン細胞の存在が試験対象中の初期段階のガンの存在を示す)。 - 免疫磁気的細胞フラクションの調製が、ガン細胞に特異的に結合する生物学的に特異的なリガンドにカップリングされた磁性粒子と生物学的標本とを混合して、生物学的標本中の他の成分を実質的に排除し、標本−磁性粒子混合物を磁場に供して、磁性粒子に結合したガン細胞が豊富化された細胞懸濁物を免疫磁気的試料として得ることを含むものである、請求項1記載の方法。
- 分析前に、免疫磁気的試料を、ガン細胞を標識する少なくとも1種の生物学的に特異的な試薬と接触させる請求項2記載の方法。
- 豊富化された磁性粒子結合ガン細胞を含む免疫学的試料の体積が減じられる請求項2記載の方法。
- 免疫磁気的試料を勾配のある磁場に置くことにより、免疫磁気的試料が、標識された磁性フラクションと未標識フラクションにさらに分離される請求項2記載の方法。
- 磁性粒子がコロイド状ナノ粒子である請求項2記載の方法。
- 磁性材料のナノ粒子コア、ならびに磁性コアへの生物学的高分子の非特異的結合を妨げるのに十分な量の、磁性粒子上のベース被覆材料を含む、被覆された磁性粒子。
- 磁性材料のナノ粒子コア、磁性コア上に不連続な被覆を形成するベース被覆材料(近接可能な場合には、ベース被覆粒子の生物学的高分子への特異的結合に貢献する少なくとも1つの不連続領域を提供する)、ならびに生物学的高分子による少なくとも1つの不連続領域への近接を妨害するさらなる被覆材料を含む、被覆された磁性粒子。
- 磁性コア材料が少なくとも1種の遷移金属酸化物を含むものであり、ベース被覆材料が蛋白を含むものである、請求項7記載の磁性粒子。
- さらなる被覆材料が、ベース被覆材料にカップリングされた特異的結合ペアーの1のメンバーである請求項9記載の磁性粒子。
- 特異的結合ペアーの1のメンバーが二官能基化合物を介してベース被覆材料にカップリングされている請求項10記載の磁性粒子。
- 特異的結合ペアーが、ビオチン−ストレプトアビジン、抗原−抗体、受容体−ホルモン、受容体−リガンド、アゴニスト−アンタゴニスト、レクチン−糖類、プロテインA−抗体Fc、およびアビジン−ビオチンからなる群より選択される請求項10記載の磁性粒子。
- 特異的結合ペアーがビオチン−ストレプトアビジンであり、ストレプトアビジンがベース被覆材料にカップリングされている請求項10記載の磁性粒子。
- ベース被覆材料にカップリングされたストレプトアビジンのフラクションがビオチン化抗体に結合され、ストレプトアビジンの残りが未結合である請求項13記載の磁性粒子。
- ベース被覆材料にカップリングされたストレプトアビジンのフラクションがビオチン化抗体に結合し、ストレプトアビジンの大部分が遊離のビオチンに結合している請求項13記載の磁性粒子。
- ベース被覆材料にカップリングされたストレプトアビジンのフラクションがビオチン化抗体に結合し、ストレプトアビジンの大部分がビオチン−蛋白抱合体に結合している請求項13記載の磁性粒子。
- ビオチン−蛋白抱合体の蛋白成分がウシ血清アルブミンを含む請求項13記載の磁性粒子。
- 70〜90%の磁石量を有する請求項8記載の被覆磁性粒子。
- 粒子の大部分が90〜120nmの範囲の粒子サイズを有する請求項8記載の被覆磁性粒子。
- 粒子の大部分が120〜150nmの範囲の粒子サイズを有する請求項8記載の被覆磁性粒子。
- 粒子の大部分が90〜150nmの範囲の粒子サイズを有する請求項8記載の被覆磁性粒子。
- 生物学的に適合する水性媒体に懸濁された、多数の請求項8記載の磁性粒子を含む組成物。
- 磁性遷移金属酸化物のナノ粒子コア材料、蛋白ベース被覆材料および二官能基連結化合物を介してベース被覆材料にカップリングされたさらなる被覆材料を含む被覆磁性粒子であって、さらなる被覆材料がビオチン−ストレプトアビジン、抗原−抗体、受容体−ホルモン、受容体−リガンド、アゴニスト−アンタゴニスト、レクチン−糖類、プロテインA−抗体Fc、およびアビジン−ビオチンからなる群より選択される特異的結合ペアーの1のメンバーである被覆磁性材料粒子。
- ベース被覆材料がウシ血清アルブミンであり、特異的結合ペアーがビオチン−ストレプトアビジンであり、ストレプトアビジンがベース被覆材料にカップリングされている請求項23記載の被覆磁性粒子。
- ベース被覆材料にカップリングされたストレプトアビジンのフラクションがビオチン化抗体に結合し、残りのストレプトアビジンがビオチン−ウシ血清アルブミン抱合体に結合している請求項24記載の被覆磁性粒子。
- 生物学的に適合する水性媒体に懸濁された、多数の請求項25記載の磁性粒子を含む組成物。
- 循環している稀な細胞の存在に関して患者の試料をスクリーニングするためのキットであって、下記a)〜c)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、および稀な細胞の第1の特徴決定基に特異的に結合する抗体(抗体はベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされている)を含む被覆磁性ナノ粒子;
b)稀な細胞の第2の特徴決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の抗体;ならびに
c)稀な細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - 非標的細胞に対して結合アフィニティーを有する抗体、生物学的バッファー、透過バッファー、プロトコール、および所望により情報シートをさらに含む請求項27記載のキット。
- 稀な細胞が、内皮細胞、母親の循環系中の胎児細胞、細菌細胞、心筋細胞、上皮細胞、およびウイルス感染細胞からなる群より選択されるものである請求項27記載のキット。
- 循環腫瘍細胞の存在に関して患者試料をスクリーニングするためのキットであって、下記a)〜c)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、およびベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAMを含む被覆磁性ナノ粒子;
b)ガン細胞決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の抗体;ならびに
c)ガン細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - 非ガン細胞に対して結合アフィニティーを有する抗体、生物学的バッファー、透過バッファー、プロトコール、および所望により情報シートをさらに含む請求項30記載のキット。
- 乳ガンに関して患者をスクリーニングするための請求項30記載のキットであって、ガン細胞決定基に対する結合特異性を有する少なくとも1種の抗体が乳ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基がMUC−1、エストロゲン、プロゲステロン受容体、カテプシンD、p53、ウロキナーゼタイプのプラスミノーゲンアクチベーター、上皮成長因子、上皮成長因子受容体、BRCA1、BRCA2、CA27.29、CA15.5、前立腺特異的抗原、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤およびHer2−neuからなる群より選択されるものであるキット。
- 前立腺ガンに関して患者をスクリーニングするための請求項30記載のキットであって、ガン細胞決定基に対する結合特異性を有する少なくとも1種の抗体が前立腺ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基が前立腺特異的抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、チモシンb−15、p53、HPC1ベーシック前立腺遺伝子、クレアチンキナーゼおよび前立腺特異的膜抗原からなる群より選択されるものであるキット。
- 結腸ガンに関して患者をスクリーニングするための請求項30記載のキットであって、ガン細胞決定基に対する結合特異性を有する少なくとも1種の抗体が結腸ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基が癌胎児性抗原、C蛋白、APC遺伝子、p53およびマトリックス金属プロテイナーゼ(MMP−9)からなる群より選択されるものであるキット。
- 膀胱ガンに関して患者をスクリーニングするための請求項30記載のキットであって、ガン細胞決定基に対する結合特異性を有する少なくとも1種の抗体が膀胱ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基が核マトリックス蛋白(NMP22)、Bard膀胱腫瘍抗原(BTA)およびフィブリン分解生成物(FDP)からなる群より選択されるものであるキット。
- 少なくとも1種の抗体が、異なるガン細胞の特徴決定基に対する結合特異性をそれぞれが有する一群の抗体を含むものである請求項30記載の試験キット。
- 循環乳ガン細胞の存在に関して患者試料をスクリーニングするためのキットであって、下記a)〜c)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、およびベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAMを含む被覆磁性ナノ粒子;
b)乳ガン細胞決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の抗体;ならびに
c)乳ガン細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - 循環前立腺ガン細胞の存在に関して患者試料をスクリーニングするためのキットであって、下記a)〜c)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、およびベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAMを含む被覆磁性ナノ粒子;
b)前立腺ガン細胞決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の抗体;ならびに
c)前立腺ガン細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - 循環結腸ガン細胞の存在に関して患者試料をスクリーニングするためのキットであって、下記a)〜c)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、およびベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAMを含む被覆磁性ナノ粒子;
b)結腸ガン細胞決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の抗体;ならびに
c)結腸ガン細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - 循環膀胱ガン細胞の存在に関して患者試料をスクリーニングするためのキットであって、下記a)〜c)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、およびベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAMを含む被覆磁性ナノ粒子;
b)膀胱ガン細胞決定基に対して結合特異性を有する少なくとも1種の抗体;ならびに
c)膀胱ガン細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - ガンの再発に関して患者をモニターするための試験キットであって、下記a)〜d)を含むキット:
a)磁性コア材料、蛋白ベース被覆材料、およびベース被覆材料に直接または間接的にカップリングされた抗EpCAMを含む被覆磁性ナノ粒子;
b)細胞内サイトケラチンマーカーに対して結合特異性を有する抗体;
c)細胞内サイトケラチンマーカーとは異なる、前以て決定されたガン特異的決定基に対して結合特異性を有する抗体;ならびに
d)ガン細胞以外の試料成分を分析から排除するための細胞特異的染料。 - 非腫瘍細胞に対する特異性を有する抗体、生物学的バッファー、透過バッファー、プロトコール、および所望により情報シートをさらに含む請求項41記載のキット。
- 乳ガン患者をモニターするための請求項41記載のキットであって、前以て決定されたガン特異的決定基に対して結合特異性を有する抗体が乳ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基がMUC−1、エストロゲン、プロゲステロン受容体、カテプシンD、p53、ウロキナーゼタイプのプラスミノーゲンアクチベーター、上皮成長因子、上皮成長因子受容体、BRCA1、BRCA2、CA27.29、CA15.5、前立腺特異的抗原、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤およびHer2−neuからなる群より選択されるものであるキット。
- 前立腺ガン患者をモニターするための請求項41記載のキットであって、前以て決定されたガン特異的決定基に対して結合特異性を有する抗体が前立腺ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基が前立腺特異的抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、チモシンb−15、p53、HPC1ベーシック前立腺遺伝子、クレアチンキナーゼおよび前立腺特異的膜抗原からなる群より選択されるものであるキット。
- 結腸ガン患者をモニターするための請求項41記載のキットであって、前以て決定されたガン特異的決定基に対して結合特異性を有する抗体が結腸ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基が癌胎児性抗原、C蛋白、APC遺伝子、p53およびマトリックス金属プロテイナーゼ(MMP−9)からなる群より選択されるものであるキット。
- 膀胱ガン患者をモニターするための請求項41記載のキットであって、前以て決定されたガン特異的決定基に対して結合特異性を有する抗体が膀胱ガン細胞決定基に特異的に結合するものであり、決定基が核マトリックス蛋白(NMP22)、Bard膀胱腫瘍抗原(BTA)およびフィブリン分解生成物(FDP)からなる群より選択されるものであるキット。
- すでにガンの治療を受けたヒト対象におけるガンの再発の可能性を調べるための方法であって、下記工程を含む方法:
a)対象から血液試料を得て;
b)試料中の上皮細胞数を決定し;
c)上皮細胞数を、腫瘍のない対照患者の群から統計学的に決定された上皮細胞数と比較し;ついで
d)上皮細胞数が、ガン患者からの循環上皮細胞の統計学的平均値と比較して健康対象からの循環上皮細胞の統計学的平均値に基づいて予め決定された値を超える場合にガンの再発の可能性を評価する。 - 上皮細胞の組織起源を同定することをさらに含む請求項47記載の方法。
- 上皮細胞の組織起源が、選択された腫瘍特異的抗体との細胞表面結合により同定される請求項48記載の方法。
- 血液20mlにつき血中上皮細胞数が約5ないし15個である場合に腫瘍の再発の可能性ありと決定される請求項47記載の方法。
- 器官限定的ガンと転移性を有するガンとを識別する方法であって、下記工程を含む方法:
a)試験対照から血液試料を得て;
b)試料中の循環上皮細胞数を決定し;
c)上皮細胞の組織起源を同定し;
d)試験対象に関して決定された組織特異的循環上皮細胞数を、健康対象の群、器官限定的ガン患者の群、および転移性ガン患者の群から統計学的に決定された組織特異的循環上皮細胞の平均数と比較し;ついで
e)細胞数が転移性ガン患者の群について統計学的に決定された平均値の範囲内にある場合、ヒト試験対象の細胞を転移性であると同定する。 - ガンが、前立腺ガン、乳ガン、結腸ガン、アプドーマ(apudoma)、分離腫、鰓腫、悪性カルシノイド症候群、カルシノイド心疾患、癌腫、例えば、ウォーカー、基底細胞、基底有きょく細胞、ブラウン−ピアース、腺管、エーリヒ腫瘍、インシトゥ、クレブス2、メルケル細胞、粘液性、非小細胞肺、えん麦細胞、乳頭、硬性、細気管支、気管支原性、偏平上皮細胞および移行性細胞のもの、細網組織症、黒色腫、軟骨芽細胞腫、軟骨腫、軟骨肉腫、線維腫、線維肉腫、巨細胞腫、組織球腫、脂肪腫、脂肪肉腫、中皮腫、粘液腫、粘液肉腫、骨腫、骨肉腫、エウィング肉腫、滑膜腫、腺線維腫、腺リンパ腫、癌肉腫、脊索腫、間葉腫、中腎腫、筋肉腫、エナメル上皮腫、セメント質腫、葉牙腫、奇形腫、トロホブラスト腫(throphoblastic tumor)、腺癌、腺腫、胆管腫、コレステリン腫、円柱腫、のう胞腺癌、のう胞腺腫、顆粒状細胞腫、男性胚細胞腫、肝癌、汗腺腫、膵島細胞腫、ライディヒ細胞腫、乳頭腫、セルトリ細胞腫、卵胞膜細胞腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、筋芽細胞腫、筋腫、筋肉腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、神経節細胞腫、グリオーム、髄芽細胞腫、髄膜腫、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経上皮腫、神経線維腫、神経腫、パラガングリオーマ、非クロム親和性パラガングリオーマ、角化血管腫、硬化性血管腫、血管腫症、グロムス血管腫、血管内皮腫、血管腫、血管外皮細胞腫、血管肉腫、リンパ管腫、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫、松果体腫、癌肉腫、軟骨肉腫、葉状のう肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、白血肉、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、筋肉腫、粘液肉腫、卵巣癌腫、横紋筋肉腫、肉腫(カポジ肉腫および肥満細胞肉腫)、新生物(例えば、骨、消化系、結腸直腸、肝臓、膵臓、脳下垂体、精巣、眼窩、頭部および頸部、中枢神経系、聴覚系、骨盤、呼吸管、ならびに尿性器のもの)、神経線維腫症、ならびに子宮頸部形成異常からなる群より選択されるガンである請求項51記載の方法。
- ガンが乳ガンである請求項51記載の方法。
- 器官限定的乳ガン患者の群における血中上皮細胞数よりも多いヒト試験対象の血中上皮細胞数が転移性乳ガンを示すものである請求項53記載の方法。
- 健康対象の群における平均上皮細胞数よりも多いが、転移性乳ガン患者の群における平均数よりも少ない、ヒト試験対象中の上皮細胞数が器官限定的乳ガンを示すものである請求項53記載の方法。
- ガン治療を受けたヒトガン患者における寛解の状況を追跡する方法であって、下記工程:
a)ヒトガン患者から血液試料を得て;
b)ガン治療前および治療後定期的に試料中の循環上皮細胞数を決定する
を含み、
治療直後の上皮細胞数と比較して治療後の上皮細胞数の経時的増加が再発を示すものであり、治療直後のレベルと比較した場合の上皮細胞数の維持が継続的な寛解を示すものである方法。 - ガンが、前立腺ガン、乳ガン、結腸ガン、アプドーマ(apudoma)、分離腫、鰓腫、悪性カルシノイド症候群、カルシノイド心疾患、癌腫、例えば、ウォーカー、基底細胞、基底有きょく細胞、ブラウン−ピアース、腺管、エーリヒ腫瘍、インシトゥ、クレブス2、メルケル細胞、粘液性、非小細胞肺、えん麦細胞、乳頭、硬性、細気管支、気管支原性、偏平上皮細胞および移行性細胞のもの、細網組織症、黒色腫、軟骨芽細胞腫、軟骨腫、軟骨肉腫、線維腫、線維肉腫、巨細胞腫、組織球腫、脂肪腫、脂肪肉腫、中皮腫、粘液腫、粘液肉腫、骨腫、骨肉腫、エウィング肉腫、滑膜腫、腺線維腫、腺リンパ腫、癌肉腫、脊索腫、間葉腫、中腎腫、筋肉腫、エナメル上皮腫、セメント質腫、葉牙腫、奇形腫、トロホブラスト腫(throphoblastic tumor)、腺癌、腺腫、胆管腫、コレステリン腫、円柱腫、のう胞腺癌、のう胞腺腫、顆粒状細胞腫、男性胚細胞腫、肝癌、汗腺腫、膵島細胞腫、ライディヒ細胞腫、乳頭腫、セルトリ細胞腫、卵胞膜細胞腫、平滑筋腫、平滑筋肉腫、筋芽細胞腫、筋腫、筋肉腫、横紋筋腫、横紋筋肉腫、上衣細胞腫、神経節細胞腫、グリオーム、髄芽細胞腫、髄膜腫、神経鞘腫、神経芽細胞腫、神経上皮腫、神経線維腫、神経腫、パラガングリオーマ、非クロム親和性パラガングリオーマ、角化血管腫、硬化性血管腫、血管腫症、グロムス血管腫、血管内皮腫、血管腫、血管外皮細胞腫、血管肉腫、リンパ管腫、リンパ管筋腫、リンパ管肉腫、松果体腫、癌肉腫、軟骨肉腫、葉状のう肉腫、線維肉腫、血管肉腫、平滑筋肉腫、白血肉、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、筋肉腫、粘液肉腫、卵巣癌腫、横紋筋肉腫、肉腫(カポジ肉腫および肥満細胞肉腫)、新生物(例えば、骨、消化系、結腸直腸、肝臓、膵臓、脳下垂体、精巣、眼窩、頭部および頸部、中枢神経系、聴覚系、骨盤、呼吸管、ならびに尿性器のもの)、神経線維腫症、ならびに子宮頸部形成異常からなる群より選択される請求項56記載の方法。
- 循環新生物細胞が豊富化された末梢血のフラクションであって、豊富化が、該フラクションを得た末梢血の試料に対して少なくとも2500倍であるフラクション。
- 循環新生物細胞が豊富化された末梢血のフラクションであって、豊富化が、該フラクションを得た末梢血の試料に対して少なくとも5000倍であるフラクション。
- 循環新生物細胞が豊富化された末梢血のフラクションであって、豊富化が、該フラクションを得た末梢血の試料に対して少なくとも10000倍であるフラクション。
- 血液試料中の循環上皮細胞数を増加させる方法であって、血液試料を得る前にガンの可能性のある組織をマッサージすることを含む方法。
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Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008533487A (ja) * | 2005-03-14 | 2008-08-21 | イムニベスト・コーポレイション | 循環腫瘍細胞を用いる転移性乳癌患者の療法中の各追跡期間ポイントでの無増悪および全生存を予測する方法 |
JP2008534914A (ja) * | 2005-01-17 | 2008-08-28 | ユィロス・パテント・アクチボラグ | 多目的流路 |
JP2008547027A (ja) * | 2005-06-23 | 2008-12-25 | バイエル ヘルスケア エルエルシー | 体液中のrasp21の定量的検定法 |
JP2009525468A (ja) * | 2006-01-30 | 2009-07-09 | ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 |
JP2010502986A (ja) * | 2006-09-05 | 2010-01-28 | ベリデックス・エルエルシー | 細胞の画像を格付けするための方法 |
JP4943504B2 (ja) * | 2006-06-02 | 2012-05-30 | ファイザー・プロダクツ・インク | 循環腫瘍細胞アッセイ |
JPWO2011108454A1 (ja) * | 2010-03-05 | 2013-06-27 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞の検出方法及び細胞検出システム |
US8592219B2 (en) | 2005-01-17 | 2013-11-26 | Gyros Patent Ab | Protecting agent |
WO2015012315A1 (ja) | 2013-07-24 | 2015-01-29 | 愛知県 | 末梢循環腫瘍細胞又は希少細胞分離用デバイス、及び末梢循環腫瘍細胞又は希少細胞分離方法 |
US9526823B2 (en) | 2009-03-27 | 2016-12-27 | Seiko Epson Corporation | Cell treatment device, cell treatment cartridge and body fluid treatment system |
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JP2020523612A (ja) * | 2017-06-08 | 2020-08-06 | カルシディア バイオテクノロジーズCarcidiag Biotechnologies | 癌幹細胞の単離および検出方法 |
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Families Citing this family (289)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9425138D0 (en) * | 1994-12-12 | 1995-02-08 | Dynal As | Isolation of nucleic acid |
WO1997020198A2 (en) * | 1995-11-30 | 1997-06-05 | Chromavision Medical Systems, Inc. | Method and apparatus for automated image analysis of biological specimens |
US6718053B1 (en) * | 1996-11-27 | 2004-04-06 | Chromavision Medical Systems, Inc. | Method and apparatus for automated image analysis of biological specimens |
US7282350B2 (en) | 1998-02-12 | 2007-10-16 | Immunivest Corporation | Labeled cell sets for use as functional controls in rare cell detection assays |
IL137802A0 (en) * | 1998-02-12 | 2001-10-31 | Immunivest Corp | A method and kit for detecting rare cells in a mixed cell population |
FR2782730B1 (fr) * | 1998-08-25 | 2002-05-17 | Biocom Sa | Procede de separation cellulaire pour l'isolation de cellules pathogeniques, notamment cancereuses rares, equipement et reactif pour la mise en oeuvre du procede et application du procede |
WO2000026666A2 (en) * | 1998-10-29 | 2000-05-11 | Cell Works Inc. | Multiple marker characterization of single cells |
US20040058401A1 (en) * | 1999-04-13 | 2004-03-25 | Blaise Bossy | Method for detecting rare event |
GB9910975D0 (en) * | 1999-05-13 | 1999-07-14 | Univ Strathclyde | Rapid dehydration of proteins |
WO2000071987A2 (en) * | 1999-05-25 | 2000-11-30 | John Philip | Isolation and culturing of fetal cells |
FR2804126B1 (fr) * | 2000-01-21 | 2005-09-30 | Patrick Rambaud | Procede et systeme de gestion de lots de cellules immuno-competentes prelevees sur des sujets humains ou animaux en vue d'utilisations differees |
US7537938B2 (en) * | 2000-04-28 | 2009-05-26 | Monogram Biosciences, Inc. | Biomarker detection in circulating cells |
US6953656B2 (en) * | 2000-07-14 | 2005-10-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Direct, externally imposed control of polypeptides |
US6379550B1 (en) * | 2000-07-24 | 2002-04-30 | Health Research, Inc. | Method for detecting PSA and its molecular forms using thiophilic gel |
WO2002048432A2 (en) | 2000-12-15 | 2002-06-20 | The Arizona Board Of Regents | Method for patterning metal using nanoparticle containing precursors |
JP2005516217A (ja) * | 2001-02-16 | 2005-06-02 | イムニベスト・コーポレイション | 循環している癌細胞の急速かつ効果的な単離のための方法および試薬 |
WO2002081656A2 (en) * | 2001-04-05 | 2002-10-17 | The Henry M. Jackson Foundation | Enhanced diagnostic potential of prostate-specific antigen expressing cells |
CA2445826C (en) | 2001-05-02 | 2014-03-25 | Purdue Research Foundation | Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease |
WO2002096460A1 (en) * | 2001-05-30 | 2002-12-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Endopeptidase/anti-psma antibody fusion proteins for treatment of cancer |
DE10127079A1 (de) * | 2001-06-02 | 2002-12-12 | Ulrich Pachmann | Verfahren zum quantitativen Nachweis vitaler epithelialer Tumorzellen in einer Körperflüssigkeit |
GB0116074D0 (en) * | 2001-06-29 | 2001-08-22 | Univ Strathclyde | Nanoparticle structures |
CA2457799C (en) | 2001-08-21 | 2014-05-27 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method and quantification assay for determining c-kit/scf/pakt status |
KR20040053115A (ko) * | 2001-08-23 | 2004-06-23 | 이뮤니베스트 코포레이션 | 분석용 세포 및 생물학적 시험편의 안정화 |
US7863012B2 (en) | 2004-02-17 | 2011-01-04 | Veridex, Llc | Analysis of circulating tumor cells, fragments, and debris |
EP1432811A4 (en) * | 2001-08-28 | 2005-02-16 | Wen-Tien Chen | CELL SEPARATION MATRIX |
WO2003025565A2 (en) * | 2001-09-21 | 2003-03-27 | Caprion Pharmaceuticals Inc. | Preparation of highly-purified plasma membranes |
CA2461877A1 (en) * | 2001-09-28 | 2003-04-10 | Purdue Research Foundation | Method of treatment using ligand-immunogen conjugates |
US8980568B2 (en) | 2001-10-11 | 2015-03-17 | Aviva Biosciences Corporation | Methods and compositions for detecting non-hematopoietic cells from a blood sample |
US8986944B2 (en) | 2001-10-11 | 2015-03-24 | Aviva Biosciences Corporation | Methods and compositions for separating rare cells from fluid samples |
AU2002360305A1 (en) * | 2001-10-26 | 2003-05-06 | Immunivest Corporation | Multiparameter analysis of comprehensive nucleic acids and morphological features on the same sample |
AU2003202026A1 (en) | 2002-01-16 | 2003-09-02 | Dynal Biotech Asa | Method for isolating nucleic acids and protein from a single sample |
US8043603B2 (en) * | 2002-02-07 | 2011-10-25 | Endocyte, Inc. | Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology |
US8043602B2 (en) | 2002-02-07 | 2011-10-25 | Endocyte, Inc. | Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology |
US7764821B2 (en) * | 2002-02-14 | 2010-07-27 | Veridex, Llc | Methods and algorithms for cell enumeration in a low-cost cytometer |
EP1474772A4 (en) * | 2002-02-14 | 2005-11-09 | Immunivest Corp | METHOD AND ALGORITHMS FOR CELL DETERMINATION IN A COST-EFFECTIVE CYTOMETER |
EP1506407B1 (fr) * | 2002-03-13 | 2006-06-28 | Biomerieux | Procede de detection et de quantification de cellules tumorales circulantes issues de cancers solides |
US20030175818A1 (en) * | 2002-03-15 | 2003-09-18 | Ross Amelia A. | Devices and methods for isolating and recovering target cells |
US7754155B2 (en) * | 2002-03-15 | 2010-07-13 | Ross Amelia A | Devices and methods for isolating target cells |
US20040241707A1 (en) * | 2002-04-01 | 2004-12-02 | Gao Chun L. | Enhanced diagnostic potential of prostate-specific antigen expressing cells |
US20040021073A1 (en) * | 2002-04-12 | 2004-02-05 | California Institute Of Technology | Apparatus and method for magnetic-based manipulation of microscopic particles |
WO2005027037A2 (en) * | 2002-05-01 | 2005-03-24 | Immunivest Corporation | Devices and methods to image objects by time delay integration |
AU2003299478A1 (en) * | 2002-05-07 | 2004-05-25 | Regents Of The University Of California | Bioactivation of particles |
US20040229293A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | Surface receptor complexes as biomarkers |
US7402397B2 (en) * | 2002-05-21 | 2008-07-22 | Monogram Biosciences, Inc. | Detecting and profiling molecular complexes |
US20040229299A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Badal M. Youssouf | Intracellular complexes as biomarkers |
US20040229380A1 (en) * | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | ErbB heterodimers as biomarkers |
US20040229294A1 (en) | 2002-05-21 | 2004-11-18 | Po-Ying Chan-Hui | ErbB surface receptor complexes as biomarkers |
WO2004008099A2 (en) * | 2002-07-15 | 2004-01-22 | Genentech, Inc. | METHODS FOR IDENTIFYING TUMORS THAT ARE RESPONSIVE TO TREATMENT WITH ANTI-ErbB2 ANTIBODIES |
US9435799B2 (en) * | 2002-07-31 | 2016-09-06 | Janssen Diagnostics, Inc. | Methods and reagents for improved selection of biological materials |
ATE531257T1 (de) | 2002-09-27 | 2011-11-15 | Gen Hospital Corp | Mikrofluidische vorrichtung zur zelltrennung und verwendungen davon |
DK1816461T3 (da) * | 2002-10-16 | 2020-04-14 | Streck Laboratories Inc | Fremgangsmåde og indretning til indsamling og sikring af celler til brug for analyse |
WO2004042401A1 (ja) * | 2002-11-08 | 2004-05-21 | Hiroshi Takahashi | 癌細胞の検査方法及びそのための試薬 |
US20040109824A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-06-10 | Hinds Kathleen Allison | Particles for imaging cells |
US20040110241A1 (en) * | 2002-12-06 | 2004-06-10 | Segal Mark S. | Materials and methods for monitoring vascular endothelial function |
GB0229287D0 (en) * | 2002-12-16 | 2003-01-22 | Dna Res Innovations Ltd | Polyfunctional reagents |
FR2848850B1 (fr) * | 2002-12-20 | 2005-06-24 | Guerbet Sa | Nouvelles compositions de particules magnetiques recouvertes de derives gem-bisphosphonates. |
ATE489452T1 (de) | 2003-02-27 | 2010-12-15 | Veridex Llc | Zirkulierende tumorzellen (ctc's): frühe beurteilung von time-to-progression, überleben und ansprechen auf therapie bei patienten mit metastasiertem krebs |
WO2004102196A1 (en) * | 2003-04-30 | 2004-11-25 | Chengdu Kuachang Medical Industrial Limited | Apparatus including nanostructures used for separation or analysis, and the preparation and application thereof |
US20050048463A1 (en) * | 2003-05-07 | 2005-03-03 | Deng David Xing-Fei | Systems and methods for determining cell type composition of mixed cell populations using gene expression signatures |
JP4680185B2 (ja) | 2003-05-30 | 2011-05-11 | パーデュー・リサーチ・ファウンデーション | アテローム性動脈硬化症の診断法 |
EP1649282A4 (en) * | 2003-07-07 | 2007-08-29 | Webb Waring Inst | PROCESS FOR PREDICTING THE DEVELOPMENT OF AUTOIMMUNE DISEASES AND TREATMENT THEREOF |
US7402398B2 (en) * | 2003-07-17 | 2008-07-22 | Monogram Biosciences, Inc. | Measuring receptor homodimerization |
BRPI0413471A (pt) * | 2003-08-11 | 2006-10-17 | Monogram Biosciences Inc | métodos para detectar um ou mais complexos de proteìnas e para detectar um complexo em uma amostra biológica |
US20050136509A1 (en) * | 2003-09-10 | 2005-06-23 | Bioimagene, Inc. | Method and system for quantitatively analyzing biological samples |
US8068988B2 (en) | 2003-09-08 | 2011-11-29 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method for automated processing of digital images of tissue micro-arrays (TMA) |
WO2005028663A2 (en) * | 2003-09-18 | 2005-03-31 | Immunivest Corporation | Operator independent programmable sample preparation and analysis system |
WO2005036180A1 (en) * | 2003-10-08 | 2005-04-21 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Department Of Health And Human Services | Analysis methods using biomarkers concentrated with biomarkers attractant molecules |
EP1680079A4 (en) | 2003-10-24 | 2008-01-02 | Adhesives Res Inc | QUICKLY FILING FILMS FOR THE DISTRIBUTION OF PHARMACEUTICAL OR COSMETIC AGENTS |
AU2003285133A1 (en) * | 2003-11-05 | 2005-06-24 | The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of Health And Human Services | Biofunctionalized quantum dots for biological imaging |
AU2004237844B2 (en) | 2003-12-23 | 2011-01-27 | Therakos, Inc. | Extracorporeal photopheresis in combination with anti-TNF treatment |
US20050181353A1 (en) * | 2004-02-17 | 2005-08-18 | Rao Galla C. | Stabilization of cells and biological specimens for analysis |
US20050266433A1 (en) * | 2004-03-03 | 2005-12-01 | Ravi Kapur | Magnetic device for isolation of cells and biomolecules in a microfluidic environment |
WO2005098046A2 (en) * | 2004-04-01 | 2005-10-20 | Immunivest Corporation | Methods for the determination of cell specific biomarkers |
WO2005116264A2 (en) * | 2004-05-24 | 2005-12-08 | Immunivest Corporation | A blood test to monitor the genetic changes of progressive cancer using immunomagnetic enrichment and fluorescence in situ hybridization (fish) |
US7943396B2 (en) * | 2004-06-22 | 2011-05-17 | The Regents Of The University Of California | Peptide-coated nanoparticles with graded shell compositions |
US9790539B2 (en) * | 2004-06-30 | 2017-10-17 | Russell Biotech, Inc. | Methods and reagents for improved selection of biological molecules |
US8189899B2 (en) * | 2004-07-30 | 2012-05-29 | Veridex, Llc | Methods and algorithms for cell enumeration in a low-cost cytometer |
ES2457755T3 (es) | 2004-08-17 | 2014-04-29 | Veridex, Llc | Un dispositivo de obtención de imágenes de diagnóstico para análisis de células raras circulantes |
US9494581B2 (en) * | 2004-08-24 | 2016-11-15 | University Of Wyoming | System and method for Raman spectroscopy assay using paramagnetic particles |
US7910315B2 (en) * | 2004-09-10 | 2011-03-22 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Early detection of hemangiosarcoma and angiosarcoma |
WO2006041453A1 (en) * | 2004-09-30 | 2006-04-20 | Immunivest Corporation | Circulating tumor cells (ctc’s): apoptotic assessment in prostate cancer patients |
WO2006041959A2 (en) * | 2004-10-06 | 2006-04-20 | Wellstat Biologics Corporation | Detection of elevated levels of her-2/neu protein on circulating cancer cells and treatment |
CN101068932B (zh) | 2004-10-27 | 2013-02-13 | 塞弗德公司 | 封闭系统多阶段核酸扩增反应 |
US7939267B2 (en) * | 2004-11-04 | 2011-05-10 | Laboratory Corporation Of America Holdings | Detection of activation of endothelial cells as surrogate marker for angiogenesis |
WO2006052842A2 (en) * | 2004-11-09 | 2006-05-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods for diagnosis of myelodysplastic syndromes (mds) |
WO2006054991A1 (en) * | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Immunivest Corporation | Magnetic enrichment of circulating cells, fragments and debris for enabling hts proteomics and genomics in disease detection |
EP1827239B1 (en) * | 2004-12-23 | 2019-04-17 | Purdue Research Foundation | Positron emission tomography imaging method |
US20080135490A1 (en) * | 2005-01-07 | 2008-06-12 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Quantum dot biolabeling and immunomagnetic separation for detection of contaminants |
US7699979B2 (en) * | 2005-01-07 | 2010-04-20 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Separation system and efficient capture of contaminants using magnetic nanoparticles |
US20060217893A1 (en) * | 2005-01-07 | 2006-09-28 | Yanbin Li | Method for detecting an unknown contaminant concentration in a substance |
US20060183223A1 (en) | 2005-01-21 | 2006-08-17 | King Michael R | Continuous flow chamber device for separation, concentration, and/or purification of cells |
US8399205B2 (en) | 2005-01-21 | 2013-03-19 | The University Of Rochester | Device and method for separation, concentration, and/or purification of cells |
US20070026414A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20070026417A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20070196820A1 (en) | 2005-04-05 | 2007-08-23 | Ravi Kapur | Devices and methods for enrichment and alteration of cells and other particles |
US20070026415A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20070026413A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Mehmet Toner | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US8263404B2 (en) * | 2005-04-08 | 2012-09-11 | Medical Discovery Partners Llc | Method for enriching rare cell subpopulations from blood |
WO2006130737A1 (en) * | 2005-06-02 | 2006-12-07 | Immunivest Corporation | A method for assessing metastatic carcinomas from circulating endothelial cells and disseminated tumor cells |
US20070037173A1 (en) * | 2005-08-12 | 2007-02-15 | Allard Jeffrey W | Circulating tumor cells (CTC's): early assessment of time to progression, survival and response to therapy in metastatic cancer patients |
US20060281104A1 (en) * | 2005-06-13 | 2006-12-14 | Macevicz Stephen C | Leuco dye particles and uses thereof |
ES2511218T5 (es) * | 2005-06-20 | 2017-12-07 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Kits y productos para detección de ácidos nucleicos en células individuales y para identificación de células raras en grandes poblaciones de células heterogéneas |
EP1738773A1 (de) * | 2005-06-29 | 2007-01-03 | Schering AG | Magnetische Eisenoxidpartikel enthaltende Zusammensetzung und deren Vervendung in bildgebenden Verfahren |
JP5175723B2 (ja) | 2005-07-05 | 2013-04-03 | パーデュー・リサーチ・ファウンデーション | 単球介在性疾患を治療するための組成物の調製 |
US8921102B2 (en) * | 2005-07-29 | 2014-12-30 | Gpb Scientific, Llc | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20070059680A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ravi Kapur | System for cell enrichment |
US20070026416A1 (en) * | 2005-07-29 | 2007-02-01 | Martin Fuchs | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US7901950B2 (en) * | 2005-08-12 | 2011-03-08 | Veridex, Llc | Method for assessing disease states by profile analysis of isolated circulating endothelial cells |
US7777885B2 (en) * | 2005-08-17 | 2010-08-17 | Veridex, Llc | Diagnostic imaging device for the analysis of circulating rare cells |
US20070059683A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Tom Barber | Veterinary diagnostic system |
US20070059781A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ravi Kapur | System for size based separation and analysis |
US20070059718A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Mehmet Toner | Systems and methods for enrichment of analytes |
US20070059719A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Michael Grisham | Business methods for prenatal Diagnosis |
US20070059716A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Ulysses Balis | Methods for detecting fetal abnormality |
US20070059774A1 (en) * | 2005-09-15 | 2007-03-15 | Michael Grisham | Kits for Prenatal Testing |
US9134237B2 (en) | 2005-09-20 | 2015-09-15 | Janssen Diagnotics, LLC | High sensitivity multiparameter method for rare event analysis in a biological sample |
EP1941050B1 (en) | 2005-09-20 | 2017-04-26 | Janssen Diagnostics, LLC | Methods and composition to generate unique sequence dna probes, iabeling of dna probes and the use of these probes |
EP1940473A2 (en) * | 2005-09-23 | 2008-07-09 | Purdue Research Foundation | Multiphoton in vivo flow cytometry method and device |
WO2007044642A2 (en) * | 2005-10-06 | 2007-04-19 | President And Fellows Of Harvard College And Children's Medical Center Corporation | Device and method for combined microfluidic-micromagnetic separation of material in continuous flow |
MX343814B (es) * | 2005-10-13 | 2016-11-24 | Anthrogenesis Corp | Inmunomodulación usando celulas madre de la placenta. |
EP1951036A4 (en) | 2005-11-02 | 2009-05-27 | Therakos Inc | USE OF APIVOTIC CELLS EX VIVO FOR GENERATING REGULATORY T CELLS |
WO2007053142A1 (en) * | 2005-11-03 | 2007-05-10 | Immunivest Corporation | Agr2 and tff3 regulation in the diagnosis and treatment of cancer |
US20070178084A1 (en) * | 2005-12-02 | 2007-08-02 | King Michael R | Continuous flow chamber device for separation, concentration, and/or purfication of cells |
WO2007067680A2 (en) * | 2005-12-05 | 2007-06-14 | Guava Technologies | Particle-based analyte characterization |
WO2007079250A2 (en) * | 2005-12-29 | 2007-07-12 | Cellpoint Diagnostics, Inc. | Devices and methods for enrichment and alteration of circulating tumor cells and other particles |
US20090022768A1 (en) * | 2006-01-20 | 2009-01-22 | King Michael R | Continuous flow chamber device for separation, concentration, and/or purification of cells |
CN1811427A (zh) * | 2006-01-25 | 2006-08-02 | 成都夸常医学工业有限公司 | 用于生物芯片的活性载体、其制备方法及其应用 |
WO2007085156A1 (fr) * | 2006-01-25 | 2007-08-02 | Chengdu Kuachang Medical Industrial Limited | Composant actif, composition nanostructurée comprenant des composants actifs et préparation de celle-ci |
US8337755B2 (en) | 2006-03-13 | 2012-12-25 | Veridex, Llc | Operator independent programmable sample preparation and analysis system |
US20070238137A1 (en) * | 2006-04-07 | 2007-10-11 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Constitutively resistant cancer stem cells in diagnosis |
US7615358B2 (en) | 2006-04-20 | 2009-11-10 | Ulrich Pachmann | Method for determining the concentration of vital epithelial tumor cells in a body fluid |
US8900828B2 (en) * | 2006-05-01 | 2014-12-02 | Cepheid | Methods and apparatus for sequential amplification reactions |
CA2652027C (en) * | 2006-05-12 | 2017-06-06 | Immunivest Corporation | A laser illumination system in fluorescent microscopy |
EP2029779A4 (en) | 2006-06-14 | 2010-01-20 | Living Microsystems Inc | HIGHLY PARALLEL SNP GENOTYPING UTILIZATION FOR FETAL DIAGNOSIS |
US20080090239A1 (en) * | 2006-06-14 | 2008-04-17 | Daniel Shoemaker | Rare cell analysis using sample splitting and dna tags |
US8137912B2 (en) | 2006-06-14 | 2012-03-20 | The General Hospital Corporation | Methods for the diagnosis of fetal abnormalities |
EP2589668A1 (en) | 2006-06-14 | 2013-05-08 | Verinata Health, Inc | Rare cell analysis using sample splitting and DNA tags |
US20080050739A1 (en) | 2006-06-14 | 2008-02-28 | Roland Stoughton | Diagnosis of fetal abnormalities using polymorphisms including short tandem repeats |
US8119352B2 (en) * | 2006-06-20 | 2012-02-21 | Cepheld | Multi-stage amplification reactions by control of sequence replication times |
CA2657621A1 (en) * | 2006-07-14 | 2008-01-17 | Aviva Biosciences Corporation | Methods and compositions for detecting rare cells from a biological sample |
US7993918B2 (en) * | 2006-08-04 | 2011-08-09 | Anthrogenesis Corporation | Tumor suppression using placental stem cells |
CN101636108B (zh) * | 2006-11-02 | 2014-02-12 | 维里德克斯有限责任公司 | 用免疫磁性mri造影剂对活化的血管内皮进行成像 |
CA2668197A1 (en) * | 2006-11-03 | 2008-05-15 | Philip S. Low | Ex vivo flow cytometry method and device |
WO2008089270A2 (en) * | 2007-01-16 | 2008-07-24 | University Of Rochester | Flow chamber device for neutralization of cancer cells |
CA2677792C (en) * | 2007-02-07 | 2015-04-14 | Purdue Research Foundation | Positron emission tomography imaging method |
SI2120977T1 (sl) | 2007-02-12 | 2014-01-31 | Anthrogenesis Coroporation | Zdravljenje vnetnih bolezni z uporabo placentarnih matičnih celic |
WO2008104380A2 (en) * | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Sentoclone Ab | Multiplex detection of tumour cells using a panel of agents binding to extracellular markers |
JP2010525326A (ja) * | 2007-04-19 | 2010-07-22 | ウェルスタット バイオロジックス コーポレイション | 分離されていない循環癌細胞由来のHer−2/neuタンパク質の上昇したレベルの検出および治療 |
US10118834B2 (en) * | 2007-04-27 | 2018-11-06 | The Regents Of The University Of California | Superparamagnetic colloidal photonic structures |
US8961926B2 (en) * | 2007-05-25 | 2015-02-24 | Purdue Research Foundation | Method of imaging localized infections |
US7828968B2 (en) * | 2007-08-30 | 2010-11-09 | Veridex, Llc | Method and apparatus for imaging target components in a biological sample using permanent magnets |
US8110101B2 (en) * | 2007-08-30 | 2012-02-07 | Veridex, Llc | Method and apparatus for imaging target components in a biological sample using permanent magnets |
US20090061456A1 (en) * | 2007-08-30 | 2009-03-05 | Allard William J | Method for predicting progression free and overall survival at each follow-up time point during therapy of metastatic breast cancer patients using circulating tumor cells |
US20090117532A1 (en) * | 2007-11-01 | 2009-05-07 | Doyle Gerald V | Pre-clinical method for monitoring serial changes in circulating breast cancer cells in mice |
US20090136946A1 (en) * | 2007-11-27 | 2009-05-28 | Mark Carle Connelly | Automated Enumeration and Characterization of Circulating Melanoma Cells in Blood |
EP2229441B1 (en) | 2007-12-12 | 2014-10-01 | The Board of Trustees of The Leland Stanford Junior University | Method and apparatus for magnetic separation of cells |
US20090191535A1 (en) * | 2007-12-22 | 2009-07-30 | Mark Carle Connelly | Method of assessing metastatic carcinomas from circulating endothelial cells and disseminated tumor cells |
KR101384142B1 (ko) * | 2007-12-28 | 2014-04-14 | 삼성디스플레이 주식회사 | 표시기판, 이의 제조방법 및 이를 갖는 표시장치 |
US8008032B2 (en) | 2008-02-25 | 2011-08-30 | Cellective Dx Corporation | Tagged ligands for enrichment of rare analytes from a mixed sample |
US20090233324A1 (en) * | 2008-03-11 | 2009-09-17 | Kopf-Sill Anne R | Methods for Diagnosing Cancer Using Samples Collected From A Central Vein Location or an Arterial Location |
US20090258365A1 (en) * | 2008-03-25 | 2009-10-15 | Terstappen Leon W M M | METHOD FOR DETECTING IGF1R/Chr 15 in CIRCULATING TUMOR CELLS USING FISH |
US8053250B2 (en) * | 2008-06-27 | 2011-11-08 | Rex Chin-Yih Hong | Method and system for suppressing bindings on magnetic particles |
AU2009283216B2 (en) | 2008-08-20 | 2015-04-02 | Celularity Inc. | Improved cell composition and methods of making the same |
PE20110399A1 (es) | 2008-08-20 | 2011-06-22 | Anthrogenesis Corp | Tratamiento de la apoplejia utilizando celulas placentarias aisladas |
RU2011110736A (ru) | 2008-08-22 | 2012-09-27 | Антродженезис Корпорейшн (Us) | Способы и композиции для лечения костных дефектов с помощью плацентарных клеточных популяций |
CA2736178A1 (en) * | 2008-09-05 | 2010-03-11 | Peter Kuhn | Methods for the detection of circulating tumor cells |
US8583380B2 (en) | 2008-09-05 | 2013-11-12 | Aueon, Inc. | Methods for stratifying and annotating cancer drug treatment options |
PT2562268T (pt) | 2008-09-20 | 2017-03-29 | Univ Leland Stanford Junior | Diagnóstico não invasivo de aneuploidia fetal por sequenciação |
US11298113B2 (en) | 2008-10-01 | 2022-04-12 | Covidien Lp | Device for needle biopsy with integrated needle protection |
US9782565B2 (en) | 2008-10-01 | 2017-10-10 | Covidien Lp | Endoscopic ultrasound-guided biliary access system |
US9332973B2 (en) | 2008-10-01 | 2016-05-10 | Covidien Lp | Needle biopsy device with exchangeable needle and integrated needle protection |
US8968210B2 (en) | 2008-10-01 | 2015-03-03 | Covidien LLP | Device for needle biopsy with integrated needle protection |
US9186128B2 (en) | 2008-10-01 | 2015-11-17 | Covidien Lp | Needle biopsy device |
SG195652A1 (en) | 2008-11-07 | 2013-12-30 | Sequenta Inc | Methods of monitoring conditions by sequence analysis |
US20100151573A1 (en) * | 2008-11-17 | 2010-06-17 | King Michael R | Compositions and methods for delivery of molecules to selectin-ligand-expressing and selectin-expressing cells |
WO2010068812A1 (en) | 2008-12-10 | 2010-06-17 | Abqmr, Inc. | Nuclear magnetic resonance apparatus, methods and associated technology |
WO2010071114A1 (ja) | 2008-12-18 | 2010-06-24 | シスメックス株式会社 | 血液試料中の癌細胞の検出方法 |
EP2199798A1 (en) * | 2008-12-18 | 2010-06-23 | Universite Libre De Bruxelles | Diagnostic method and kit of circulating tumor cells |
US20100167271A1 (en) * | 2008-12-30 | 2010-07-01 | Streck, Inc. | Method for screening blood using a preservative that may be in a substantially solid state form |
WO2010123594A2 (en) * | 2009-01-15 | 2010-10-28 | Children's Medical Center Corporation | Device for filtration of fluids there through and accompanying method |
US11634747B2 (en) | 2009-01-21 | 2023-04-25 | Streck Llc | Preservation of fetal nucleic acids in maternal plasma |
US20120055854A1 (en) * | 2009-02-05 | 2012-03-08 | Tibbe Arjan G J | Filter Method for Separating Unbound Ferrofluid from Target-bound Ferrofluid in a Biological Sample |
EP2398912B1 (en) | 2009-02-18 | 2017-09-13 | Streck Inc. | Preservation of cell-free nucleic acids |
US8167871B2 (en) | 2009-02-25 | 2012-05-01 | The Invention Science Fund I, Llc | Device for actively removing a target cell from blood or lymph of a vertebrate subject |
US8317737B2 (en) * | 2009-02-25 | 2012-11-27 | The Invention Science Fund I, Llc | Device for actively removing a target component from blood or lymph of a vertebrate subject |
EP2419726B1 (en) | 2009-04-13 | 2015-12-23 | University of Washington | Rare particle detection method and aparatus |
US8790916B2 (en) * | 2009-05-14 | 2014-07-29 | Genestream, Inc. | Microfluidic method and system for isolating particles from biological fluid |
JP5692738B2 (ja) * | 2009-07-28 | 2015-04-01 | 国立大学法人 鹿児島大学 | ウイルスの濃縮方法および磁性体組成物 |
WO2011038403A1 (en) | 2009-09-28 | 2011-03-31 | Yuling Luo | Methods of detecting nucleic acid sequences with high specificity |
EP3045918B1 (en) | 2009-10-21 | 2017-12-06 | The Scripps Research Institute | Method of using non-rare cells to detect rare cells |
EP3103883A1 (en) | 2009-11-09 | 2016-12-14 | Streck, Inc. | Stabilization of rna in and extracting from intact cells within a blood sample |
US20130171621A1 (en) | 2010-01-29 | 2013-07-04 | Advanced Cell Diagnostics Inc. | Methods of in situ detection of nucleic acids |
CA2791905A1 (en) | 2010-03-01 | 2011-09-09 | Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. | Biomarkers for theranostics |
KR101878749B1 (ko) * | 2010-03-05 | 2018-07-17 | 삼성전자주식회사 | 표적 세포의 분리 방법 및 키트 |
KR20130043104A (ko) | 2010-04-06 | 2013-04-29 | 카리스 라이프 사이언스 룩셈부르크 홀딩스 | 질병용 순환 생물학적 지표들 |
CN102933221A (zh) | 2010-04-08 | 2013-02-13 | 人类起源公司 | 使用胎盘干细胞治疗结节病 |
US9476812B2 (en) | 2010-04-21 | 2016-10-25 | Dna Electronics, Inc. | Methods for isolating a target analyte from a heterogeneous sample |
US9428547B2 (en) | 2010-04-21 | 2016-08-30 | Dna Electronics, Inc. | Compositions for isolating a target analyte from a heterogeneous sample |
US20110262989A1 (en) * | 2010-04-21 | 2011-10-27 | Nanomr, Inc. | Isolating a target analyte from a body fluid |
US8841104B2 (en) | 2010-04-21 | 2014-09-23 | Nanomr, Inc. | Methods for isolating a target analyte from a heterogeneous sample |
WO2011139372A1 (en) | 2010-05-06 | 2011-11-10 | Sequenta, Inc. | Sequence analysis of complex amplicons |
US9309556B2 (en) | 2010-09-24 | 2016-04-12 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Direct capture, amplification and sequencing of target DNA using immobilized primers |
MX347964B (es) * | 2010-10-14 | 2017-05-18 | Veridex Llc | Metodos y kits para la deteccion de células tumorales circulantes en pacientes pancreáticos por medio del uso de captura poliespecífica y reactivos de detección de cocteles. |
US9624474B2 (en) | 2010-12-01 | 2017-04-18 | Samsung Electronics Co, Ltd. | Method of separating target cell in biological sample |
US9645154B2 (en) | 2010-12-24 | 2017-05-09 | Arkray, Inc. | Method for detecting cancer cell |
EP2658557A1 (en) | 2010-12-31 | 2013-11-06 | Anthrogenesis Corporation | Enhancement of placental stem cell potency using modulatory rna molecules |
KR101374758B1 (ko) * | 2011-02-18 | 2014-03-17 | 한국생명공학연구원 | 항-사이토케라틴 8/18 복합체 자가면역항체를 포함하는 암 진단 마커 및 이의 항원을 포함하는 암 진단용 조성물 |
WO2012112013A2 (en) * | 2011-02-18 | 2012-08-23 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | A marker comprising anti-ck8/18 complex autoantibody and its use for diagnosing cancer |
CN110441343A (zh) | 2011-03-22 | 2019-11-12 | 通用医疗公司 | 利用磁共振检测目的物 |
US20120252038A1 (en) * | 2011-04-01 | 2012-10-04 | Chianese David A | Steroid receptor assays |
US20140134630A1 (en) * | 2011-04-05 | 2014-05-15 | Serrata, Llc | Risk analysis for disease development |
US9956281B2 (en) | 2011-05-04 | 2018-05-01 | Streck, Inc. | Inactivated virus compositions and methods of preparing such compositions |
CN104220081A (zh) | 2011-06-01 | 2014-12-17 | 人类起源公司 | 利用胎盘干细胞治疗疼痛 |
CN110763842A (zh) | 2011-06-29 | 2020-02-07 | 中央研究院 | 使用表面涂层对生物物质的捕获、纯化和释放 |
TW201311907A (zh) | 2011-07-07 | 2013-03-16 | Veridex Llc | 使用循環內皮細胞的基因診斷 |
BR112014001423B1 (pt) | 2011-07-21 | 2021-09-21 | Janssen Diagnostics, Llc | Métodos para capturar, isolar e analisar células circulantes de mieloma múltiplo em uma amostra e para determinar se um paciente é um candidato provável à intervenção terapêutica, bem como uso de partículas magnéticas coloidais e pelo menos dois ligantes |
EP2737317A2 (en) | 2011-07-28 | 2014-06-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods for diagnosing cancer by characterization of tumor cells associated with pleural or serous fluids |
CA2842359A1 (en) | 2011-08-01 | 2013-02-07 | Denovo Sciences | Cell capture system and method of use |
US10466160B2 (en) | 2011-08-01 | 2019-11-05 | Celsee Diagnostics, Inc. | System and method for retrieving and analyzing particles |
US9174216B2 (en) | 2013-03-13 | 2015-11-03 | DeNovo Science, Inc. | System for capturing and analyzing cells |
US9404864B2 (en) | 2013-03-13 | 2016-08-02 | Denovo Sciences, Inc. | System for imaging captured cells |
WO2013036620A1 (en) * | 2011-09-06 | 2013-03-14 | Becton, Dickinson And Company | Methods and compositions for cytometric detection of rare target cells in a sample |
JP2012022002A (ja) * | 2011-09-12 | 2012-02-02 | Veridex Llc | 循環腫瘍細胞を用いる転移性乳癌患者の療法中の各追跡期間ポイントでの無増悪および全生存を予測する方法 |
US9645149B2 (en) | 2011-09-30 | 2017-05-09 | The Regents Of The University Of Michigan | System for detecting rare cells |
US10130946B2 (en) | 2011-09-30 | 2018-11-20 | The Regents Of The University Of Michigan | System for detecting rare cells |
AU2012345926A1 (en) | 2011-11-29 | 2014-05-29 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for prostate cancer analysis |
AU2012358810B2 (en) | 2011-12-23 | 2018-03-15 | DePuy Synthes Products, Inc. | Detection of human umbilical cord tissue-derived cells |
US20130197296A1 (en) * | 2012-01-13 | 2013-08-01 | Karl-Heinz Ott | Removing Cells from an Organism |
WO2013149265A1 (en) * | 2012-03-31 | 2013-10-03 | Nvigen, Inc. | Magnetic nanocompositions for highly sensitive molecular and cellular enrichment, purification and detection |
CN103376228B (zh) * | 2012-04-27 | 2016-02-17 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种检测或辅助检测放射性肺纤维化的试剂盒 |
JP2015524054A (ja) * | 2012-05-24 | 2015-08-20 | ラールスル | 濾過を通して生物学的サンプルから抽出された又は単離された希少細胞の多重分析のための方法 |
JP6208473B2 (ja) | 2012-06-20 | 2017-10-04 | アークレイ株式会社 | 血液成分を含む試料の処理方法 |
US10032064B2 (en) * | 2012-08-21 | 2018-07-24 | Cambridge Research & Instrumentation, Inc. | Visualization and measurement of cell compartments |
ES2729182T3 (es) * | 2012-10-19 | 2019-10-30 | Univ Wayne State | Identificación y análisis de células de trofoblastos fetales en mucus cervical para diagnosis prenatal |
WO2014070776A1 (en) | 2012-10-29 | 2014-05-08 | The Regents Of The University Of Michigan | Microfluidic device and method for detecting rare cells |
ES2660438T3 (es) | 2012-11-09 | 2018-03-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Captura in vitro y análisis de células tumorales circulantes |
US10000557B2 (en) | 2012-12-19 | 2018-06-19 | Dnae Group Holdings Limited | Methods for raising antibodies |
US9551704B2 (en) | 2012-12-19 | 2017-01-24 | Dna Electronics, Inc. | Target detection |
US9804069B2 (en) | 2012-12-19 | 2017-10-31 | Dnae Group Holdings Limited | Methods for degrading nucleic acid |
US9995742B2 (en) | 2012-12-19 | 2018-06-12 | Dnae Group Holdings Limited | Sample entry |
US9599610B2 (en) | 2012-12-19 | 2017-03-21 | Dnae Group Holdings Limited | Target capture system |
US9434940B2 (en) | 2012-12-19 | 2016-09-06 | Dna Electronics, Inc. | Methods for universal target capture |
AU2014209218B2 (en) | 2013-01-25 | 2018-06-07 | Xcell Biosciences, Inc. | Methods, compositions, kits, and systems for selective enrichment of target cells |
US9606102B2 (en) | 2013-01-26 | 2017-03-28 | Denovo Sciences, Inc. | System and method for capturing and analyzing cells |
CN105102978B (zh) | 2013-02-02 | 2018-11-02 | 杜克大学 | 分离循环肿瘤细胞的方法 |
WO2014142559A1 (ko) * | 2013-03-13 | 2014-09-18 | 고려대학교 산학협력단 | 혈중 희소 세포의 검출 및 계수 장치와 방법 |
KR101568573B1 (ko) | 2013-03-13 | 2015-11-20 | 고려대학교 산학협력단 | 혈중 희소 세포의 검출 및 계수 장치와 방법 |
US9707562B2 (en) | 2013-03-13 | 2017-07-18 | Denovo Sciences, Inc. | System for capturing and analyzing cells |
PL2972359T3 (pl) | 2013-03-15 | 2021-03-08 | Menarini Silicon Biosystems S.P.A. | Wzbogacanie krążących komórek nowotworowych poprzez deplecję białych krwinek |
WO2014160796A1 (en) * | 2013-03-29 | 2014-10-02 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Rare cell concentration |
US9856535B2 (en) | 2013-05-31 | 2018-01-02 | Denovo Sciences, Inc. | System for isolating cells |
US10391490B2 (en) | 2013-05-31 | 2019-08-27 | Celsee Diagnostics, Inc. | System and method for isolating and analyzing cells |
CN105518464B (zh) | 2013-07-05 | 2019-12-03 | 华盛顿大学商业中心 | 微流体分析的方法、组合物和系统 |
WO2015013244A1 (en) | 2013-07-24 | 2015-01-29 | Streck, Inc. | Compositions and methods for stabilizing circulating tumor cells |
EP3100047B1 (en) | 2014-01-27 | 2021-08-11 | Epic Sciences, Inc. | Circulating tumor cell diagnostics for prostate cancer biomarkers |
EP3108246B1 (en) | 2014-02-21 | 2019-10-09 | Epic Sciences, Inc. | Methods for analyzing rare circulating cells |
US10495644B2 (en) | 2014-04-01 | 2019-12-03 | Academia Sinica | Methods and systems for cancer diagnosis and prognosis |
CN105381824B (zh) | 2014-08-26 | 2019-04-23 | 中央研究院 | 收集器架构布局设计 |
JP6673224B2 (ja) * | 2014-12-25 | 2020-03-25 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞画像解析方法及び細胞画像解析装置 |
US11168351B2 (en) | 2015-03-05 | 2021-11-09 | Streck, Inc. | Stabilization of nucleic acids in urine |
US10317406B2 (en) | 2015-04-06 | 2019-06-11 | The Regents Of The University Of Michigan | System for detecting rare cells |
EP3286565A1 (en) | 2015-04-21 | 2018-02-28 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for prostate cancer analysis |
WO2017040686A1 (en) * | 2015-09-01 | 2017-03-09 | University Of Miami | Identification of circulating cancer associated fibroblasts |
EP3913068B1 (en) | 2015-10-12 | 2023-08-02 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | In situ detection of nucleotide variants in high noise samples, and compositions and methods related thereto |
US20170145475A1 (en) | 2015-11-20 | 2017-05-25 | Streck, Inc. | Single spin process for blood plasma separation and plasma composition including preservative |
US10107726B2 (en) | 2016-03-16 | 2018-10-23 | Cellmax, Ltd. | Collection of suspended cells using a transferable membrane |
EP3440209A4 (en) | 2016-04-06 | 2019-11-27 | Wayne State University | ISOLATION AND ANALYSIS OF FETAL DNA FROM EXTRAVILLE THROPHOBLAST CELLS RECOVERED FROM THE ENDOZERVICAL CHANNEL |
KR101876724B1 (ko) * | 2016-05-09 | 2018-07-13 | 주식회사 싸이토젠 | 폐암 환자의 혈중 순환 종양세포를 활용한 egfr-tki 내성 환자의 맞춤형 항암제 선별시스템 및 방법 |
KR101876725B1 (ko) * | 2016-05-09 | 2018-07-13 | 주식회사 싸이토젠 | 전립선 암 환자의 혈중 순환 종양세포를 활용한 안드로겐 수용체 과발현 환자의 맞춤형 항암제 선별시스템 및 선별방법 |
KR20190037226A (ko) | 2016-06-14 | 2019-04-05 | 셀렉타 바이오사이언시스, 인코퍼레이티드 | 순환 종양 세포의 식별 및 단리를 위한 인지질 에테르 유사체 |
EP3491381A1 (en) | 2016-07-29 | 2019-06-05 | Streck, Inc. | Suspension composition for hematology analysis control |
SG10202100951SA (en) | 2016-11-21 | 2021-03-30 | Nanostring Technologies Inc | Chemical compositions and methods of using same |
BR112019018767A2 (pt) | 2017-04-03 | 2020-05-05 | Hoffmann La Roche | anticorpos, molécula de ligação ao antígeno biespecífica, um ou mais polinucleotídeos isolados, um ou mais vetores, célula hospedeira, método para produzir um anticorpo, composição farmacêutica, usos, método para tratar uma doença em um indivíduo e invenção |
EP4039367A1 (en) | 2017-08-29 | 2022-08-10 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System and method for isolating and analyzing cells |
WO2019103103A1 (ja) * | 2017-11-24 | 2019-05-31 | Jsr株式会社 | 細胞を分離する方法、細胞分離または濃縮用粒子およびキット |
CN111971560B (zh) * | 2017-12-01 | 2024-06-11 | 康奈尔大学 | 用于检测和治疗癌症的纳米颗粒和不同的外泌体子集 |
AU2019271028A1 (en) | 2018-05-14 | 2020-12-03 | Bruker Spatial Biology, Inc. | Chemical compositions and methods of using same |
CN108918398A (zh) * | 2018-05-18 | 2018-11-30 | 宁波永新光学股份有限公司 | 一种循环肿瘤细胞检测方法 |
US20200172768A1 (en) | 2018-12-04 | 2020-06-04 | Adhesives Research, Inc. | Disintegrable thin film adhesive barrier |
WO2020128908A2 (en) * | 2018-12-20 | 2020-06-25 | Medimmune, Llc | Methods for selection and expansion of t cells expressing pd-1 |
EP3908678A1 (en) | 2019-01-10 | 2021-11-17 | Iovance Biotherapeutics, Inc. | System and methods for monitoring adoptive cell therapy clonality and persistence |
US10633693B1 (en) | 2019-04-16 | 2020-04-28 | Celsee Diagnostics, Inc. | System and method for leakage control in a particle capture system |
KR20220016477A (ko) | 2019-05-07 | 2022-02-09 | 바이오 래드 래버러토리스 인코오포레이티드 | 자동화된 단일 세포 처리를 위한 시스템 및 방법 |
US11273439B2 (en) | 2019-05-07 | 2022-03-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System and method for target material retrieval from microwells |
CN110196327B (zh) * | 2019-05-18 | 2022-04-29 | 贵州医科大学附属医院 | 基于基因变异分析检测直肠癌细胞药物敏感性的试剂盒 |
US11724256B2 (en) | 2019-06-14 | 2023-08-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System and method for automated single cell processing and analyses |
US20220235420A1 (en) | 2019-07-15 | 2022-07-28 | Menarini Biomarkers Singapore Pte Ltd | Compositions and methods for isolating, detecting, and analyzing fetal cells |
US11504719B2 (en) | 2020-03-12 | 2022-11-22 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System and method for receiving and delivering a fluid for sample processing |
JPWO2023007793A1 (ja) * | 2021-07-28 | 2023-02-02 |
Family Cites Families (33)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4018886A (en) | 1975-07-01 | 1977-04-19 | General Electric Company | Diagnostic method and device employing protein-coated magnetic particles |
US3970518A (en) | 1975-07-01 | 1976-07-20 | General Electric Company | Magnetic separation of biological particles |
US4267234A (en) | 1978-03-17 | 1981-05-12 | California Institute Of Technology | Polyglutaraldehyde synthesis and protein bonding substrates |
US4230685A (en) * | 1979-02-28 | 1980-10-28 | Northwestern University | Method of magnetic separation of cells and the like, and microspheres for use therein |
US4375407A (en) | 1981-06-22 | 1983-03-01 | The Franklin Institute | High gradient magnetic separation device |
US4452773A (en) | 1982-04-05 | 1984-06-05 | Canadian Patents And Development Limited | Magnetic iron-dextran microspheres |
NO155316C (no) | 1982-04-23 | 1987-03-11 | Sintef | Fremgangsmaate for fremstilling av magnetiske polymerpartikler. |
US4659678A (en) | 1982-09-29 | 1987-04-21 | Serono Diagnostics Limited | Immunoassay of antigens |
US4554088A (en) | 1983-05-12 | 1985-11-19 | Advanced Magnetics Inc. | Magnetic particles for use in separations |
US4672040A (en) | 1983-05-12 | 1987-06-09 | Advanced Magnetics, Inc. | Magnetic particles for use in separations |
DE3588043T2 (de) * | 1984-01-06 | 1996-03-21 | Univ California | Cytokeratin-tumormarkierer und test zu deren nachweis. |
US5512332A (en) | 1985-10-04 | 1996-04-30 | Immunivest Corporation | Process of making resuspendable coated magnetic particles |
US5597531A (en) | 1985-10-04 | 1997-01-28 | Immunivest Corporation | Resuspendable coated magnetic particles and stable magnetic particle suspensions |
US4795698A (en) * | 1985-10-04 | 1989-01-03 | Immunicon Corporation | Magnetic-polymer particles |
NO162946C (no) | 1987-08-21 | 1990-03-14 | Otto Soerensen | Anordning for magnetisk separasjon av celler. |
US5238811A (en) * | 1988-04-26 | 1993-08-24 | Nippon Telegraph And Telephone Corporation | Laser magnetic immunoassay method and apparatus therefor and superparamagnetic material-labeled body and method for the manufacture of same |
US5512657A (en) * | 1988-12-12 | 1996-04-30 | Bainbridge Sciences, Inc. | Detection of complexes which include basement membrane components as diagnostic of cancer and other diseases |
US5385707A (en) | 1988-12-28 | 1995-01-31 | Stefan Miltenyi | Metal matrices for use in high gradient magnetic separation of biological materials and method for coating the same |
US5081030A (en) | 1989-04-25 | 1992-01-14 | The Johns Hopkins University | Release of cells from affinity matrices |
US5698271A (en) * | 1989-08-22 | 1997-12-16 | Immunivest Corporation | Methods for the manufacture of magnetically responsive particles |
US5541072A (en) * | 1994-04-18 | 1996-07-30 | Immunivest Corporation | Method for magnetic separation featuring magnetic particles in a multi-phase system |
US5200084A (en) | 1990-09-26 | 1993-04-06 | Immunicon Corporation | Apparatus and methods for magnetic separation |
US5186827A (en) | 1991-03-25 | 1993-02-16 | Immunicon Corporation | Apparatus for magnetic separation featuring external magnetic means |
US5466574A (en) | 1991-03-25 | 1995-11-14 | Immunivest Corporation | Apparatus and methods for magnetic separation featuring external magnetic means |
US5714325A (en) * | 1993-09-24 | 1998-02-03 | New England Medical Center Hospitals | Prenatal diagnosis by isolation of fetal granulocytes from maternal blood |
NO180658C (no) | 1994-03-10 | 1997-05-21 | Oeystein Fodstad | Fremgangsmåte og anordning for deteksjon av spesifikke målceller i spesialiserte eller blandede cellepopulasjoner og opplösninger som inneholder blandede cellepopulasjoner |
US5545527A (en) * | 1994-07-08 | 1996-08-13 | Visible Genetics Inc. | Method for testing for mutations in DNA from a patient sample |
US5660990A (en) * | 1995-08-18 | 1997-08-26 | Immunivest Corporation | Surface immobilization of magnetically collected materials |
US6190870B1 (en) | 1995-08-28 | 2001-02-20 | Amcell Corporation | Efficient enrichment and detection of disseminated tumor cells |
EP0857176A1 (en) * | 1995-10-25 | 1998-08-12 | Centocor B.V. | HUMAN EPITHELIAL ANTIGEN Ep-CAM DERIVED PEPTIDES AND THEIR USE |
EP0920627B1 (en) | 1996-06-07 | 2004-05-12 | Immunivest Corporation | Magnetic separation employing external and internal gradients |
IL137802A0 (en) * | 1998-02-12 | 2001-10-31 | Immunivest Corp | A method and kit for detecting rare cells in a mixed cell population |
US6960449B2 (en) | 1999-02-10 | 2005-11-01 | Cell Works Diagnostics, Inc. | Class characterization of circulating cancer cells isolated from body fluids and methods of use |
-
1999
- 1999-02-12 IL IL13780299A patent/IL137802A0/xx active IP Right Grant
- 1999-02-12 CA CA002320418A patent/CA2320418C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 US US09/248,388 patent/US6365362B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 DE DE69941689T patent/DE69941689D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-02-12 JP JP2000531745A patent/JP2002503814A/ja active Pending
- 1999-02-12 WO PCT/US1999/003073 patent/WO1999041613A1/en active IP Right Grant
- 1999-02-12 BR BR9907852-0A patent/BR9907852A/pt not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 AU AU27636/99A patent/AU760560B2/en not_active Ceased
- 1999-02-12 KR KR10-2000-7008880A patent/KR100399475B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1999-02-12 EP EP99908132A patent/EP1062515B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-08-10 IL IL137802A patent/IL137802A/en not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-07-13 US US09/904,472 patent/US6645731B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-10-11 US US10/269,579 patent/US7332288B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-09-13 JP JP2004265687A patent/JP3834326B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-04-14 JP JP2006112446A patent/JP5265855B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2012
- 2012-10-16 JP JP2012229134A patent/JP5766168B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008534914A (ja) * | 2005-01-17 | 2008-08-28 | ユィロス・パテント・アクチボラグ | 多目的流路 |
US8592219B2 (en) | 2005-01-17 | 2013-11-26 | Gyros Patent Ab | Protecting agent |
JP2008533487A (ja) * | 2005-03-14 | 2008-08-21 | イムニベスト・コーポレイション | 循環腫瘍細胞を用いる転移性乳癌患者の療法中の各追跡期間ポイントでの無増悪および全生存を予測する方法 |
JP2008547027A (ja) * | 2005-06-23 | 2008-12-25 | バイエル ヘルスケア エルエルシー | 体液中のrasp21の定量的検定法 |
JP4693902B2 (ja) * | 2005-06-23 | 2011-06-01 | バイエル ヘルスケア エルエルシー | 体液中のrasp21の定量的検定法 |
JP2017102121A (ja) * | 2006-01-30 | 2017-06-08 | ザ スクリプス リサーチ インスティテュート | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 |
JP2009525468A (ja) * | 2006-01-30 | 2009-07-09 | ザ・スクリプス・リサーチ・インステイチユート | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 |
JP2018185316A (ja) * | 2006-01-30 | 2018-11-22 | ザ スクリプス リサーチ インスティテュート | 循環腫瘍細胞の検出方法および哺乳類対象における癌の診断方法 |
JP4943504B2 (ja) * | 2006-06-02 | 2012-05-30 | ファイザー・プロダクツ・インク | 循環腫瘍細胞アッセイ |
JP2010502986A (ja) * | 2006-09-05 | 2010-01-28 | ベリデックス・エルエルシー | 細胞の画像を格付けするための方法 |
US9526823B2 (en) | 2009-03-27 | 2016-12-27 | Seiko Epson Corporation | Cell treatment device, cell treatment cartridge and body fluid treatment system |
JP5716738B2 (ja) * | 2010-03-05 | 2015-05-13 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞の検出方法及び細胞検出システム |
JPWO2011108454A1 (ja) * | 2010-03-05 | 2013-06-27 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞の検出方法及び細胞検出システム |
WO2015012315A1 (ja) | 2013-07-24 | 2015-01-29 | 愛知県 | 末梢循環腫瘍細胞又は希少細胞分離用デバイス、及び末梢循環腫瘍細胞又は希少細胞分離方法 |
US10022659B2 (en) | 2013-07-24 | 2018-07-17 | Aichi Prefecture | Device for isolating periphery circulating tumor cells or rare cells, and method of isolating periphery circulating tumor cells or rare cells |
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JP2021510759A (ja) * | 2018-01-18 | 2021-04-30 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | ジアミン架橋剤を用いての超架橋 |
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Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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