JP4693902B2 - 体液中のrasp21の定量的検定法 - Google Patents
体液中のrasp21の定量的検定法 Download PDFInfo
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Description
ras p21のヒト組織における定量的検定法が利用可能であるが、より以前に記載されたras p21のヒト体液における検定法はせいぜい半定量的である。rasは正常に発現されているため、活性化(アップレギュレートされたおよび/または変異性に刺激された)ras腫瘍性タンパク質経路の指標、例えば、ras p21レベルにおける上昇レベルまたは変化が、rasに導かれる発癌、またはrasに導かれる腫瘍の状態変化を検出するために使用できる、循環ras p21レベルにおける上昇または連続変化の定量的検定法があれば有用である。
発明者らは、体液中の総ras p21レベルにおける連続変化を測定するために使用できる定量的イムノアッセイを発見しており、その変化は活性化(アップレギュレートおよび/または変異性に刺激された)ras経路の指標として有用である。その新規のイムノアッセイは、汎反応性モノクローナル抗体(Mabs)Ras17およびRas10またはRas10.2の使用を含み、そのそれぞれが総ras p21タンパク質(正常および変異活性化ras p21の両方)と結合する。Mabs Ras17およびRas10は以前に記載されている[Carney,W.P.,特許文献2,特許文献1,特許文献3 および 特許文献4];しかし、イムノアッセイにおけるMabs Ras17およびRas10の組み合わせの使用は以前に記載されていない。
本発明まで、癌患者がras p21に導かれる腫瘍を有するか否かを決定する高感度な、定量的および定型的な血清検査は存在しなかった。本発明の検定法は、定型的に、血清だけでなく血漿および他の体液にも使用されうる、そうした高感度なおよび定量的な検定法を提供する。
(a)対照集団の個体から採取された体液の試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを免疫学的に検出および定量する;
(b)経時的に対象から採取された対応する体液試料中の総ras p21タンパク質レベルの連続変化を免疫学的に検出および定量する;および
(c)対象の試料中の総ras p21タンパク質のレベルを、対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルと比較する;
ここで対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを上回る、対象の試料中の総ras p21タンパク質のレベルは、対象における活性化ras経路および前腫瘍/腫瘍疾患の存在を示唆する。工程(a)の対照集団の個体は、性別はどちらでもよく、または対象と同じ性別でよい。
前記方法は、疾患が活性化ras経路と関連する、癌疾患または前癌疾患を診断および/または予後診断(予測)できる。そのような癌疾患または前癌疾患のうち典型的なのは、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、急性骨髄性白血病、甲状腺癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、メラノーマ、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸部癌、頭頚部癌、肝細胞癌および血液系腫瘍、およびそのような癌に繋がる前癌より成る群から選択されるものである。結腸、結腸直腸、肺癌および乳癌、およびそれに繋がる前癌は、ヒト体液中の総ras p21の連続変化を検出する診断/予後診断(予測)検定方法の特に標的と考えられる。
(a)対照集団の個体から採取された体液の試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを免疫学的に検出および定量する;
(b)経時的に患者から採取された対応する体液試料中の総ras p21タンパク質レベルの連続変化を免疫学的に検出および定量する;
(c)患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルを、対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルと比較する;および
(d)患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルと対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルとの差に基づき、および患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルの連続変化を考慮して、患者を治療するために従来の癌治療および/またはrasを標的とする癌治療を用いるか否かを決定する。例えば、患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルが対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを上回るとわかった場合、および患者の試料中の総ras p21タンパク質レベルの連続変化が対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを上回る傾向にあるレベルを示す場合、その患者はras発癌遺伝子に導かれる前腫瘍/腫瘍疾患を有するという結論付けがなされ、および、単独でまたは一つ以上の他の抗癌治療と併せて、ras指向治療を用いて患者を治療することが決定される。
・ Adjei,A.A.,Journal of National Cancer Institute,93(14): 1062−1074 (July 18,2001)
・ Agarwal et al.,Oncogene,20(20): 2527−2536 (May 3,2001)
・ Anderson et al.,Mutat Res..445(2): 167−173 (Sep.30,1999)
・ Anderson et al.,Mutat.Res.,349 (1): 121−126 (Jan.17,1996)
・ Anderson et al.,Mutat.Res.,403(1−2): 229−235 (July 17,1998)
・Anderson,P.,Int.J.Hvα.Environ.Health,204(1 V 55−60 (Oct.2001)
・ Bos,J.L,Cancer Research,49: 4682−4689 (1989)
・ Bos,J.L.,Mutation Research,195: 255−271 (1988)
・ Brandt−Rauf,P.W.,J.Occup.Med.,33(9): 951−955 (Sep.1991)
・ Brtva et al.,J Biol Chem.,270(17V.9809−9812 (April 28,1995)
・ Brunner et al.,Cancer Research,63: 5656−5668 (Sep.15,2003)
・ Carney et al.,"Monoclonal Antibodies for Detection of Normal and Oncogenic Ras p21 ," in Human Tumor Antigens and Specific Tumor Therapy,Alan R.Liss,Pub.,pp.53−62 (1989)
・ Carney,W.P.,The Cancer Journal,4: 156−161 (1991)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.4,898,932 (Feb.6,1990)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.5,028,527 (July 2,1991)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.5,081 ,230 (Jan.14,1992)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.5,084,380 (Jan.28,1992)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.5,112,737 (May 12,1992)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.5,262,523 (Nov.16,1993)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.5,443,956 (August 22,1995)
・ Carney,W.P.,U.S.Patent No.6,200,764 B1 (March 13,2001)
・ Carney et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),83: 7485−7489 (1986)
・ Cebulska−Wasilewska A,et al.,Mutat Res..431(1): 123−131 (Dec.16,1999)
・ Chang et al.,Leukemia,17(7): 1263−1293 (July 2003)
・ Chie et al.,Cancer Chemother Pharmocol.45: 441−449 (2000)
・ Choi et al.,Oncogene.23(1): 9−20 (2004)
・ Collisson et al.,Cancer Research,63: 5669−5673 (Sep.15,2003)
・ Cox and Der,Cancer Biol Ther..1(6): 599:606 (Nov−Dec 2002) Dancev J.E.,Curr Pharm Pes.,8(25): 2259−2267 (2002)
・ Dent et al.,Oncogene,22: 5885−5896 (2003)
・ Eckert et al.,Cancer Research,64: 4585 − 4892 (July 1 ,2004)
・ Epelbaum et al.,J Clin Lab Anal.,3(4): 209−214 (1989)
・ Fischbach and Settleman,Cancer Research,63: 4089−4094 (July 15,2003)
・ Fridman et al.,J Biol Chem.,269(48): 30105−30108 (Dec.2,1994)
・ Ghosh and Bell,J Bio Chem.,269(49): 30785−30788 (Dec.9,1994)
・ Gibbs et al..Breast Cancer Res Treat.,38(1): 75−83 (1996)
・ Hamer et al..Oncogene,6(9): 1609−1615 (Sep.1991)
・ Holten−Andersen et al.,lnt J Cancer,113(2): 198−206 (Jan 10,2005)
・ Jin et al.,British Journal of Cancer.89.185−191 (2003)
・ Jones et al.,Semin Radiat Oncol..11(4): 328−337 (Oct.2001)
・ Karelia et al.,Int.J.Biol.Markers,16(2): 97−104 (April − June 2001)
・ Kohl et al.,J Cell Biochem (Suppl.),22: 145−150 (1995)
・ Lee C.S.,Eur J Surg Oncol.,23(3): 233:237 (June 1997)
・ Leevers et al.,Nature,369(6479): 411−414 (June 2,1994)
・ Lerner et al.,J Biol Chem.,270(45): 26802−26806 (Nov.10,1995)
・ Li et al.,Development.125(24): 4999−5008 (Dec.1998)
・ Liang et al.,MoI Cancer Then.2(4): 353−360 (April 2003)
・ Luo et al.,J Occup Environ Med.,40(12):1053−1058 (Dec.1998)
・ Mallon et al.,Anal Biochem,294(1): 48−54 (July 1 ,2001)
・ Manzur et al.,Cell MoI Neurobiol,21(1): 39−52 (Feb.2001)
・ Marais et al.,EMBO J.,14(1): 3136−3145 (July 3,1995)
・ Marshall,M.,MoI Reprod Dev..42(4): 493−499 (Dec.1995)
・ Meadows et al.,Oncogene,23(1): 192−200 (2004) Needleman et al.,Pathology,22(2): 77−81 (April 1990)
・ Perera et al.,Arch.Toxicol.,64(5): 401−406 (1990) Perera et al.,Nature,35: 256−258 (1992)
・ Pitarque et al.,Mutat Res.,440(2): 195−204 (April 6,1999)
・ Prior and Hancock.Journal of Cell Science,114: 1603−1608 (2001)
・ Pruitt and Der,Cancer Letters,171 : 1−10 (2002)
・ Rundle et al..Cancer Lett,185(1): 71−78 (Nov.8,2002)
・ Schneider et al.,Clin.Chem.Lab.Med.,38(4): 301−305 (April 2000)
・ Singh et al.,Cancer Res.,57(2): 253−258 (Jan.15,1997)
・ Solanas and Escrich,Rev Esp Fisiol.,52(3):173−192 (Sep.1996)
・ Sommer et al.,Oncogene,22,4266−4280 (2003)
・ Sreelekha et al.,J Esp Clin Cancer Res.,18 (3): 337−341 (Sep.1999)
・ Sun et al.,Eur.J.Cancer,27(12): 1646−1649 (1991)
・ Takahashi et al.,Clin Cancer Res.,1 (10): 1071−1077 (Oct.1995)
・ Ulku et al.,MoI Cancer Res.: 1(14): 1077−1088 (2003) Wang et al.,J Cell Bio.,129(4): 1103−1114 (May 1995)
・ Watson,D.M.,Breast Cancer Res.Treat.17(3): 161 −169 (Jan−Feb 1991)
・ Weissfeld et al.,Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.,3(1): 57−62 (Jan−Feb 1994)
・ Wilhelm et al.,Cancer Research,64: 7099−7109 (Oct.1 ,2004)
・ Wittinghofer et al.,FEBS Letters,410: 63−67 (1997)
・ Yan et al.,Jour.Biol Chem.,273(37): 24052−24056 (Sep.11 ,1998)
略語
下記の略語がここで用いられる:
ATCC:American Type Culture Collection
BSA:ウシ血清アルブミン
℃:摂氏
CEA:癌胎児性抗原
CV:変動係数
EDTA:エチレンジアミンテトラ酢酸
EGFR:上皮増殖因子受容体
ELISA:酵素結合免疫吸着検定法
FTI:ファルネシルトランスフェラーゼ阻害因子
GDP:グアノシン二リン酸
GEFS:グアニン−ヌクレオチド交換因子
GTP:グアノシン三リン酸
Gタンパク質:グアニルヌクレオチド依存性タンパク質
HRP:ホースラディッシュペルオキシダーゼ
kD:キロダルトン
M:モル濃度
Mab:モノクローナル抗体
MAP:分裂促進因子活性化タンパク質
ml:ミリリットル
mM:ミリモル濃度
N:正常または数(文脈に応じて)
ND:検出されず
NED:疾患徴候無し
Ng:ナノグラム
nm:ナノメートル
OD:光学密度
pg:プロテオグリカン
PDGFR:血小板由来増殖因子 受容体
P.Resp:患者の反応
Prog:増悪
Recur:再発
SD:標準偏差
Stab:安定
Stg:ステージ
TIMP−1:メタロプロテイナーゼ−1組織阻害因子
TMB:テトラメチルベンジジン
μg:マイクログラム
μl:マイクロリットル
Unk:不明
uPA:ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子
VEGF:血管内皮増殖因子
VEGFR:血管内皮増殖因子受容体
本発明の好ましい一実施形態では、総ras p21タンパク質は、連続して経時的に採取されたヒト体液試料で定量される。そのような体液試料は、体液試料の中でも特に、血液、血清、血漿、尿、唾液、精液、乳房滲出液、脳脊髄液、涙液、痰、粘液、リンパ液、細胞質ゾル、腹水、胸水、羊水、膀胱洗液および気管支肺胞洗浄液でありうる。好ましい体液は、体液試料の中でも特に、例えば、血清またはヘパリン、クエン酸またはEDTAで処理された血漿試料を含み、および新鮮または冷凍でありうる。そのような体液標本は、治療前、治療中、または治療後に採取でき、または治療に反応しない患者から採取されうる。ここでは、「経時的連続変化」または「連続試料」は、背景および状況に応じて、対象にとって適切と考えられる期間にわたって採取された試料の連続検査を意味する。例えば、癌患者スクリーニングのためには、連続試料は患者の初診、診断後、手術前および/または手術後に採取されうる;一方、前腫瘍疾患のための集団スクリーニングのためには、連続試料は年一回ベースで採取されうる。
本発明の方法に記載の典型的なおよび好ましいイムノアッセイは、材料および方法の項で後述されおよび実施例1から8のデータを得るために用いられたサンドイッチELISAである。ここに開示される方法に加えて、代替の方法がヒト体液中の総ras p21タンパク質を定量するために使用されうることが理解できる。他の好ましいサンドイッチアッセイが、例えば発光標識といった他の視覚化方法と共に使用されうる。他の標識は、下記の標識化標識の項で詳述される。
典型的なおよび好ましいELISAサンドイッチイムノアッセイが、材料および方法の項に、および実施例1〜8に記載される。その典型的なELISAは、MabRas17を捕捉抗体として、およびビオチン化Mab10.2(ハイブリドーマRas10のサブクローンによって産生される)を検出抗体として使用する。捕捉MabRas17はマイクロタイタープレートウェル上に固定化され;希釈ヒト血清/血漿試料またはras p21標準(組み換え野生型H−rasタンパク質)が3時間37℃にてウェル中でインキュベートされ、総ras p21抗原をMab17によって結合させる。ウェルの洗浄後、固定化されたras p21抗原はビオチン化検出抗体MabRas10.2に30分間室温にて(20〜27℃)曝露され、その後ウェルは再び洗浄される。ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ複合体が次いで添加される(30分間室温にて)。最後の洗浄後、結合ペルオキシダーゼ活性を検出するためにTMBブルー基質がウェルに添加される(および30分間室温にてインキュベートされる)。反応は2.5N硫酸の添加によって停止され、および吸収が450nmにて測定される。試料の吸収値のras標準との相関が、総ras p21の定量値をpg/ml血清または血漿として決定可能にする。
対象前腫瘍/腫瘍疾患に応じて、例えば阻害因子、腫瘍性タンパク質、増殖因子受容体、血管新生因子、転移タンパク質、腫瘍マーカー、および腫瘍抑制因子、特にras経路に随伴するものといった他のタンパク質が、ras p21と同時の検出および定量に適しうることが理解できる。ras p21との同時検査に適する典型的なおよび好ましい他のタンパク質は、メタロプロテイナーゼ−1組織阻害因子(TIMP−1)、HER−2/neu、上皮増殖因子受容体(EGFR)、血小板由来増殖因子受容体(PDGFR)、血管内皮増殖因子(VEGF)、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子(uPA)、癌胎児性抗原(CEA)、およびp53を含む。本発明の方法に適した好ましい他のタンパク質を検出するための検定法は当業者に公知である。例えば、ヒト体液中のHER−2/neuおよびTIMP−1の定量のためのイムノアッセイは、ヒト血清または血漿中のTIMP−1のng/ml値を測定できるOncogene Science TIMP−1 ELISA [Oncogene Science,Cambridge,MA (USA),www.oncogene.com]のように市販されている。実施例8に記載される通り、連続結腸直腸癌血清試料および正常血清試料が、総ras p21およびTIMP−1レベルの療法について検定された。
ras p21および/または他のタンパク質のレベルの監視は、前腫瘍/腫瘍疾患の臨床的結果を示しうる。臨床的結果を評価する好ましい方法は、奏功率(RR)、臨床効果[完全奏功(CR)、部分奏功(PR)、および病勢安定(SD)を含む]、無進行期間(TTP)、および生存期間(TTD)に基づく方法である。予後を評価する他の方法が本分野で公知でありおよび使用されうる。
「抗体」の語はここでは、もっとも広義で用いられおよび具体的にはモノクローナル抗体(完全長モノクローナル抗体を含む)、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体(例えば、二重特異性抗体)、および目的の生物活性を示す限り抗体断片を包含する。本発明の方法に記載の有用な抗体は、従来の方法論によっておよび/または遺伝子工学によって調製されうる。本発明に記載の好ましい抗体は、「汎反応性」であるもの、すなわち総ras p21(野生型および変異活性化ras p21の両方)、およびHarvey、KirstenおよびN−ras p21の三つのファミリーと結合する抗体である。非常に好ましいのは、本発明の典型的なイムノアッセイに使用される抗体であるRas17およびRas10抗体、または目的の生物活性を示す限りRas17およびRas10ハイブリドーマのサブクローンによって産生される抗体である(例えば親Ras10ハイブリドーマのサブクローン由来のRas10.2Mab)。
総ras p21タンパク質を特定するための本発明に記載の有用な抗体は、任意の従来の方法によって標識化されうる。本発明に記載の好ましい標識はホースラディッシュペルオキシダーゼであり、および抗体を標識化する好ましい方法は、ビオチン−ストレプトアビジン複合体を用いることによる。
標識の性質に応じて、標識を検出および定量するためにはさまざまな方法が使用されうる。蛍光物質については、多数の蛍光光度計が利用可能である。化学発光物質については、ルミノメーターまたはフィルムが利用可能である。酵素については、蛍光、化学発光、または着色産物が、蛍光光度計、ルミノメーター、分光光度計、または目視によって判定または測定されうる。
Ras指向治療
ここでは、「ras指向治療」は、ras経路を標的とする任意の治療を含み、rasタンパク質発現の阻害(例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド)、ras活性化に必須の膜局在化の妨害(rasファルネシル化阻害因子)、またはrasの下流エフェクターの阻害(例えば、Rafセリン/スレオニンキナーゼ)を含む。好ましいras指向治療は、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害因子(FTI)、チロシンキナーゼ阻害因子、またはビスアリール尿素を含む。典型的なFTIは、BMS−214662[イミダゾール含有非ペプチドミメティックFTI; Cortes et al.,J.Clin.Oncol,23 (12): 2805−2812 (April 20,2005); Bristol−Myers Squibb,Princeton,NJ (USA)]、FTI−2153およびFTI−277[EMD Biosciences,www.emdbiosciences.com (Cat.No.3444555); Lerner et al.(1995); Sun et al.,Cancer Res..59: 4919−4926 (1999)]、R115777[メチルキノロン; Janssen Research Foundation,Titusville,NJ (USA)]、および Sch66336 [Sarasar(登録商標) または Lonafamib(登録商標);ベンゾシクロヘプタピリジルFTI; Taveras et al.,Curr.Topics Med.Chem.,3(10): 1103− 1114 (June 2003); Schering Plough,Kenilworth,NJ (USA)]である。
本発明に記載の好ましいras指向治療は、酵素Rafキナーゼを阻害する低分子であるビスアリール尿素ソラフェニブ(BAY43−9006)である[Onyx Pharmaceuticals,Richmond,CA (USA),および Bayer Corporation,West Haven,CT (USA); Lyons et al.,Endocrine−Related Cancer,8:219−225 (2001) および Wilhelm et al.(2004)]。ソラフェニブは、細胞増殖を阻害するRAF/MEK/ERK[MEK:MAP/ERKキナーゼ;ERK:細胞外シグナル関連キナーゼ]シグナル伝達経路、および腫瘍血管新生を阻害するVEGFR−2/PDGFR−βシグナル伝達経路の両方を標的とする。ソラフェニブはそのため、活性化ras経路および活性化VEGFR−2/PDGFR−βシグナル伝達経路を有することがわかった患者のための、特に好ましい抗癌治療となる。
ヒト血清および血漿のための固相サンドイッチマイクロタイターELISA
試料調製ras p21ELISAによる分析に適した試料は、ヘパリン、クエン酸、またはEDTAで処理されたヒト血漿、およびヒト血清を含む。可能な干渉因子のため、ヒト血清および血漿の調製および検定には特別の注意を払わなければならない。希釈前に微量遠心分離によって、いかなる凝集物質も試料から除去されるべきである。試験すべき血清または血漿標本の初濃度は濃度50%(標本の試料希釈剤での1:2希釈)を超えない。例えば、試料0.150mlは試料希釈剤0.150mlで希釈でき、および100μlをマイクロプレートウェルへ加える。
精製Ras17Mabs[ATCCへHB10054として寄託されたRas17ハイブリドーマから分泌された]は1μg/mlへコーティング緩衝液(0.03M無水炭酸ナトリウムおよび0.07M炭酸水素ナトリウム、pH9.6)で希釈され、および96ウェルマイクロプレート[Nunc MaxiSorp(商標) F8 lmmuno Module,Part #1001; Nalge Nunc International Corp.,Naperville,IL (USA)]のウェルへ吸着される(ウェル当たり100μlにて)。吸着は一夜(少なくとも12時間)室温にて(20℃〜27℃)実施される。インキュベート期間の終了時に、ブロッキング溶液をウェルに加え(0.002Mリン酸二水素ナトリウム、0.008Mリン酸水素二ナトリウム七水和物、0.15M塩化ナトリウム、0.29MベータD−ラクトースおよび2%BSA試薬グレード;pH7.45)およびOyster Bayマイクロプレートコーター(Model MPCS− 3) [Oyster Bay Pump Works,Hicksville,N.Y.(USA)]を用いて吸引した。コーティングされたマイクロプレートはLyoStar(登録商標) Freeze−Dryer [FTS Systems,Stone Ridge,N.Y.(USA)]を用いて22℃にて乾燥しおよび2〜8℃にて保存した。
Ras標準曲線
定量的分析は、Ha ras p21[組み換え野生型ras p21、Invitrogen Corporation,Catalog # P2138]を用いて標準曲線を作成することによって行った。図1は、さまざまな濃度 のHa−ras p21タンパク質を固定化抗p21汎反応性モノクローナル抗体Ras17と反応させることによって、および捕捉されたras p21タンパク質をビオチン化抗総p21モノクローナル抗体Ras10.2を用いて検出することによって作成された標準曲線を示す。イムノアッセイ手順は材料および方法で上述した通りであった。
正常ヒト血清
マイクロプレートウェルを、上記の通り、抗総ras p21捕捉抗体(MabRas17)でコーティングした。計82検体の正常ヒト血清(女性42名、男性40名;Bioclinical Partners,Inc.から入手)を個別に、コーティングされたマイクロプレートでELISAによって検査し、および血清中に存在するras p21をビオチン化Ras10.2モノクローナル抗体を用いて検出した。450nmでの吸収度を用いて、血清試料中の総ras p21のレベルを測定した。結果は、一般的に、正常男性よりも正常女性でより高いレベルの総ras p21タンパク質がみられたことを示した(平均は女性で122.4pg/mlに対して男性で33.1pg/ml)。
血漿対血清
16検体の対応する正常ヒト血清および血漿試料について、材料および方法は上述の通りで、総ras p21タンパク質レベルをELISAによって測定した。血漿レベルは、下記の表2で示す通り、血清レベルより平均して約24%高かった。
検定法の特徴
ヒト血清または血漿中の総ras p21についてのELISAアッセイ法の感度、特異性、精度および並列性が特徴づけられた(全ての場合で、MabRas17を捕捉抗体として、およびMabRas10.2を検出抗体として使用)。
分析物の最小検出可能濃度を、ゼロ用量試料(標準レベル1)の反復測定および平均+2標準偏差の計算によって決定した。rasELISAアッセイ法は総ras p21タンパク質4.6ピコグラム/mlを検出する。
交差反応性:Rab3A、Rac−1、およびRanは、Gタンパク質ファミリーの他のメンバーである。Oncogene Science RAS p21 ELISAを、高レベルの各分析物で検証した。Rab−3Aだけが最小限の1.22%にていくらかの交差反応性を示した。
分析間精度:ヒト試料中の総ras p21タンパク質を測定するための本ELISA検査の再現性を、別の時での同一血清の反復検査によって確認した(表3)。正常ヒト血清および血漿に組み換え野生型ras p21[Invitrogen]を三つの異なる濃度で添加し、および8回の分析で、各回当たり8連で試験した。分析間変動は10.0%以下であった。
添加血清および血漿試料を最初に1:2希釈し、続いて2倍希釈を作製し、および全ての希釈をras p21ELISAで試験した。各希釈についての回収率(pg/ml)は適当な希釈係数で補正して計算した。結果は、試料希釈剤で希釈した添加血漿および血清試料はras p21タンパク質の正確な回収を結果として生じることを示す(表5)。
正常血清由来連続試料中のrasレベル
正常者15名(男性13名、女性2名)由来の連続血清試料について、材料および方法は上述の通りで、ELISAによって総ras p21レベルを測定した。一般的に、試料は少なくとも3週間間隔で採取された。
結腸癌患者における一点および連続Rasレベル
Rasは全ての癌の約20%、特に結腸および膵臓癌で変異している。変異または過剰発現によって活性化されたras経路は総ras p21タンパク質のレベル上昇を結果として生じうるという本発明の仮説に基づき、結腸癌患者由来の血清48検体について、総ras p21レベルを測定した(表7)。結腸癌患者由来の少なくとも4検体の血清(試料#2004、#2065、#2784および#2785)が極めて高い総ras p21レベルを示した。
ステージI/ステージII乳癌におけるRas p21血清レベル
Ras p21は乳癌の50〜60%で過剰発現されている。転移性乳癌(MBC)患者における循環ras腫瘍性タンパク質の治療前の上昇したレベルは、従来の治療または標的化抗ras治療に適した患者を示しうる。
ヒト血清におけるRasおよびTIMP−1の同時発現
ras p21レベルを他の腫瘍関連タンパク質と組み合わせて測定することは、特定の癌についての治療の選択を支援しうる。例えば、rasおよびrasの上流のタンパク質の両方のレベルを測定することによって、活性化ras経路に関連する腫瘍疾患に最も適した治療を決定しうる。
正常者対照15名(男性13名、女性2名)由来の連続正常試料について、材料および方法で上述の通り、ELISAによって総ras p21およびTIMP−1レベルを測定した(表10に示す)。一般的に、試料は少なくとも3週間間隔で採取された。正常血清では、総ras p21レベルは50.6pg/mlないし560pg/mlで変動した;TIMP−1の正常レベルは167.8ng/mlないし614.4ng/mlの範囲であった。
表11に示す通り、結腸癌患者7名から連続的に採取された血清について、材料および方法で上述の通り、ELISAによって総ras p21およびTIMP−1レベルを測定した。それらの患者のうち6名に由来する血清をまた、CEAについても検定した。
ATCC寄託。下記の材料は現在10801 University Boulevard,Manassas,Va.,20110−2209 (USA)のAmerican Type Culture Collection (ATCC)に寄託された。寄託はBudapest Treaty on the International Recognition of Deposited Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure and Regulations thereunder(ブダペスト条約)の規定に基づいて実施した。生存可能な培養の維持は寄託日から30年間保証されている。該ハイブリドーマおよびプラスミドは、ATCCによってブダペスト条約の条項に基づいて利用可能にされ、および、関連する米国特許の発行に際して一般に対し、寄託されたハイブリドーマおよびその子孫の無制限の利用可能性を保証する、出願者およびATCCの間の合意に支配される。
i. ハイブリドーマ 寄託日 ATCC#
ii. Ras10 1987年5月12日 HB9426
iii. Ras17 1989年5月29日 HB10054
本発明の前記の実施形態の記載は、説明および記載の目的で提示されている。それらは網羅的であることまたは本発明を開示された正確な形に限定することを意図せず、および上記の教示に照らして明らかに多数の改変および変形が可能である。実施形態は本発明の原理およびその実際的応用を説明し、それによって当業者が本発明をさまざまな実施形態でおよび考えられる特定の使用に適するさまざまな改変と共に利用することが可能になるように選択および記載された。
Claims (23)
- 活性化ras経路に関連する前腫瘍/腫瘍疾患を検出する方法であって:
(a)対照集団の個体から採取された体液試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを免疫学的に検出および定量する;
(b)対象から経時的に採取された対応する体液試料中の総ras p21タンパク質レベルの連続変化を免疫学的に検出および定量する;および
(c)前記対象の試料中の総ras p21タンパク質のレベルを、前記対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルと比較する;工程を含み、
前記対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルより高い前記対象の試料中の総ras p21タンパク質のレベルが、対象における活性化ras経路および前腫瘍/腫瘍疾患の存在の指標となり、
前記工程(a)および(b)における免疫学的検出および定量が、American Type Culture Collection(ATCC)に寄託されたハイブリドーマHB10054から分泌されるモノクローナル抗体Ras17と、ATCCに寄託されたハイブリドーマHB9426から分泌されるモノクローナル抗体Ras10との組合せを使用するサンドイッチイムノアッセイの形式のイムノアッセイによってなされることを特徴とする方法。 - 前記対照試料中の総ras p21の平均レベルに対する前記対象の試料中の総ras p21タンパク質のレベルが、前記対象に関するより良好なまたはより悪い予後の指標となることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 前記対象が前腫瘍/腫瘍疾患を有するヒト患者であり、該患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルと前記対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルとの差、および該患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルの連続的変化が、該患者を治療するために従来の癌治療および/またはras指向癌治療を用いるか否かの指標となることを特徴とする請求項1または2記載の方法。
- 前記患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルが前記対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを上回る場合、および患者の試料中の総ras p21タンパク質レベルの連続変化が対照試料中の総ras p21タンパク質の平均レベルを上回る傾向にあるレベルを示す場合、ras発癌遺伝子により生じた前腫瘍/腫瘍疾患が存在すること、およびras指向治療を用いて治療すべきことが示唆されることを特徴とする請求項3記載の方法。
- ras指向治療が、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害因子(FTI)、チロシンキナーゼ阻害因子、ビスアリール尿素、およびrasのアンチセンス阻害因子より成る群から選択されることを特徴とする請求項3または4記載の方法。
- ras指向治療がビスアリール尿素ソラフェニブ(BAY43−9006)であることを特徴とする請求項5記載の方法。
- 前記工程(a)の対照集団の個体が、対象と同一の性別の個体であることを特徴とする、請求項1から6いずれか1項記載の方法。
- 前記サンドイッチイムノアッセイが、サンドイッチELISAであることを特徴とする請求項1から7いずれか1項記載の方法。
- モノクローナル抗体Ras10がビオチン化されており、検出抗体として使用されることを特徴とする請求項1から8いずれか1項記載の方法。
- 前記患者の体液試料が、治療に反応していない癌患者に由来するものであることを特徴とする請求項3記載の方法。
- 活性化ras経路に関連する前腫瘍/腫瘍疾患の状態を特定する方法であって:
前腫瘍/腫瘍疾患を有する患者から経時的に採取された体液試料中の総ras p21タンパク質レベルの連続変化を免疫学的に検出および定量することを含み;
前記患者が治療を受けている患者であり、経時的な総ras p21タンパク質のレベル上昇が、疾患の進行または治療に対するネガティブな反応を示唆し、および総ras p21タンパク質のレベル低下が、疾患の寛解または治療に対するポジティブな反応を示唆し、
前記免疫学的検出および定量が、American Type Culture Collection(ATCC)に寄託されたハイブリドーマHB10054から分泌されるモノクローナル抗体Ras17と、ATCCに寄託されたハイブリドーマHB9426から分泌されるモノクローナル抗体Ras10との組合せを使用するサンドイッチイムノアッセイの形式のイムノアッセイによってなされることを特徴とする方法。 - 前記治療がras指向治療であることを特徴とする請求項11記載の方法。
- 前記患者の試料中の総ras p21タンパク質のレベルが、前記患者に関するより良好なまたはより悪い予後の指標となることを特徴とする請求項11または12記載の方法。
- 前記予後が、奏功率(RR)、完全奏功臨床効果(CR)、部分奏功臨床効果(PR)、病勢安定臨床効果(SD)、無進行期間(TTP)、および生存期間(TTD)より成る群から選択される臨床的結果であることを特徴とする請求項2または13記載の方法。
- 前記患者の試料が、治療前の試料であることを特徴とする請求項2または3記載の方法。
- 前記患者の試料中の一または複数の他のタンパク質のレベルを検出または検出および定量するためのイムノアッセイの使用をさらに含むことを特徴とする請求項1から15いずれか1項記載の方法。
- 前記一または複数の他のタンパク質が、阻害因子、腫瘍性タンパク質、増殖因子受容体、血管新生因子、転移タンパク質、腫瘍マーカーおよび腫瘍抑制因子より成る群から選択されることを特徴とする請求項16記載の方法。
- 阻害因子がメタロプロテイナーゼ−1組織阻害因子(TIMP−1)であり、腫瘍性タンパク質がHER−2/neuであり、増殖因子受容体が上皮増殖因子受容体(EGFR)および血小板由来増殖因子受容体(PDGFR)より成る群から選択され、血管新生因子が血管内皮増殖因子(VEGF)であり、転移タンパク質がウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子(uPA)であり、腫瘍マーカーが癌胎児性抗原(CEA)であり、および腫瘍抑制因子がp53であることを特徴とする請求項17記載の方法。
- 前記患者の体液試料が、治療に反応していない癌患者に由来するものであることを特徴とする請求項11記載の方法。
- 総ras p21および/またはHER−2/neuのレベルの上昇が、早期再発または転移の高い可能性の指標となることを特徴とする請求項18記載の方法。
- 前記体液が、血液、血清、血漿、尿、唾液、精液、乳房滲出液、脳脊髄液、涙液、痰、粘液、リンパ液、細胞質ゾル、腹水、胸水、羊水、膀胱洗液および気管支肺胞洗浄液より成る群から選択されることを特徴とする請求項1から20いずれか1項記載の方法。
- 前記体液が血清または血漿であることを特徴とする請求項21記載の方法。
- 活性化ras経路と関連する前腫瘍/腫瘍疾患が、結腸直腸癌、結腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、急性骨髄性白血病、甲状腺癌、膵臓癌、膀胱癌、腎臓癌、メラノーマ、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸部癌、頭頚部癌、肝細胞癌および血液系腫瘍より成る群から選択されることを特徴とする請求項1から22いずれか1項記載の方法。
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Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03505250A (ja) * | 1988-04-22 | 1991-11-14 | オンコジーン・サイエンス・インコーポレーテッド | 体液および組織におけるrasタンパクの検出、定量および分類 |
JP2002530676A (ja) * | 1998-11-20 | 2002-09-17 | アプライド スペクトラル イメイジング リミテッド | 細胞のインサイチュ分析方法 |
JP2003515535A (ja) * | 1999-11-16 | 2003-05-07 | ザ ゼネラル ホスピタル コーポレーション | 腫瘍関連抗原発現を調節するための組成物および方法 |
JP2003520964A (ja) * | 2000-01-24 | 2003-07-08 | ロード アイランド ホスピタル, ア ライフスパン パートナー | 中枢神経系の癌を検出する方法 |
JP2005010177A (ja) * | 1998-02-12 | 2005-01-13 | Immunivest Corp | 循環ガン細胞の迅速かつ効率的な単離のための方法および試薬 |
JP2005505303A (ja) * | 2001-10-16 | 2005-02-24 | マウント・サイナイ・ホスピタル | 卵巣癌の検出方法 |
WO2005037273A1 (en) * | 2003-10-16 | 2005-04-28 | Chiron Corporation | Substituted benzazoles and use thereof as inhibitors of raf kinase |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5443956A (en) * | 1985-01-29 | 1995-08-22 | Oncogene Science, Inc. | Detection, quantitation and classification of RAS proteins in body fluids and tissues |
US5081230A (en) * | 1987-07-08 | 1992-01-14 | E. I. Dupont Denemours And Company | Monoclonal antibodies reactive with normal and oncogenic forms of the ras p21 protein |
US6200764B1 (en) * | 1985-01-29 | 2001-03-13 | Bayer Corporation | Detection, quantitation and classification of ras proteins in body fluids and tissues |
EP0206065A3 (en) * | 1985-06-27 | 1989-04-19 | James R. Feramisco | Method of detecting oncogene and proto-oncogene related proteins in extracellular biological fluids |
IL79755A0 (en) * | 1985-08-21 | 1986-11-30 | Oncogene Science Inc | Immunoassay for detection of ras encoded protein |
US5262523A (en) * | 1987-07-08 | 1993-11-16 | Oncogene Science, Inc. | Antibodies reactive with normal and oncogenic forms of the ras p21 protein |
DE60329020D1 (de) * | 2002-03-01 | 2009-10-08 | Siemens Healthcare Diagnostics | Assays zur überwachung von krebspatienten auf grundlage der spiegel des analyten für die extrazelluläre domäne (ecd) des epidermalen wachstumsfaktor-rezeptors (egfr), allein oder in kombination mit anderen analyten, in proben von körperflüssigkeiten |
EP1651095A4 (en) * | 2003-08-05 | 2008-10-08 | Euro Celtique Sa | ErbB RECEPTOR PROCESS AND SETS FOR MONITORING CHEMOTHERAPY RESISTANCE |
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Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH03505250A (ja) * | 1988-04-22 | 1991-11-14 | オンコジーン・サイエンス・インコーポレーテッド | 体液および組織におけるrasタンパクの検出、定量および分類 |
JP2005010177A (ja) * | 1998-02-12 | 2005-01-13 | Immunivest Corp | 循環ガン細胞の迅速かつ効率的な単離のための方法および試薬 |
JP2002530676A (ja) * | 1998-11-20 | 2002-09-17 | アプライド スペクトラル イメイジング リミテッド | 細胞のインサイチュ分析方法 |
JP2003515535A (ja) * | 1999-11-16 | 2003-05-07 | ザ ゼネラル ホスピタル コーポレーション | 腫瘍関連抗原発現を調節するための組成物および方法 |
JP2003520964A (ja) * | 2000-01-24 | 2003-07-08 | ロード アイランド ホスピタル, ア ライフスパン パートナー | 中枢神経系の癌を検出する方法 |
JP2005505303A (ja) * | 2001-10-16 | 2005-02-24 | マウント・サイナイ・ホスピタル | 卵巣癌の検出方法 |
WO2005037273A1 (en) * | 2003-10-16 | 2005-04-28 | Chiron Corporation | Substituted benzazoles and use thereof as inhibitors of raf kinase |
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