JP2003528157A - 結合体ワクチンにおいてキャリアとして使用するためのタンパク質 - Google Patents

結合体ワクチンにおいてキャリアとして使用するためのタンパク質

Info

Publication number
JP2003528157A
JP2003528157A JP2001570298A JP2001570298A JP2003528157A JP 2003528157 A JP2003528157 A JP 2003528157A JP 2001570298 A JP2001570298 A JP 2001570298A JP 2001570298 A JP2001570298 A JP 2001570298A JP 2003528157 A JP2003528157 A JP 2003528157A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
carrier
antigen
conjugate
protein
proteins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2001570298A
Other languages
English (en)
Inventor
リチャード ゴリンジ，アンドリュー
ロビンソン，アンドリュー
ジョン ハドソン，マイケル
マーガレット レディン，カレン
Original Assignee
マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ filed Critical マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ
Publication of JP2003528157A publication Critical patent/JP2003528157A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/644—Transferrin, e.g. a lactoferrin or ovotransferrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

(57)【要約】 キャリア分子に結合された莢膜多糖抗原を含むワクチン結合体が記載されている。キャリア分子は、病原性微生物の鉄取り込みに関連するタンパク質である。ワクチン結合体は、キャリアに結合された第２のまたは追加の抗原も含み得る。好ましい実施態様においては、キャリアは、トランスフェリン結合タンパク質、特にＴｂｐＡまたはＴｂｐＢである。キャリア分子に抗原を結合する方法、およびワクチン接種のためのキャリア−抗原結合体の製造におけるトランスフェリン結合タンパク質の使用も記載される。鉄取り込みタンパク質に対する固定化リガンドを含むアフィニティーマトリクス、および本発明のワクチン結合体を精製するためのアフィニティーマトリクスの使用も記載される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、結合体ワクチンにおいてキャリアとして使用するためのタンパク質
に関し、ならびに、このような結合体の調製および精製に関する。
【０００２】 重篤な侵襲性疾患を引き起こす多くの病原性細菌は、必須の毒性成分である糖
質莢膜を有する。通常、糖質莢膜に対する抗体が、その補体介在性殺菌活性に基
づいて防御的に作用するため、糖質莢膜は、潜在的なワクチン成分である。糖質
に対して惹起した抗体は、その糖質が得られた特定の血清群に対して特異的であ
る；インフルエンザ菌に対して１種類の主要病原性血清型、髄膜炎菌に対して３
種類の主要血清群、および肺炎連鎖球菌に対して８０以上の血清型がある。
【０００３】 莢膜ワクチンの主な不利点は、糖質がＴ細胞非依存性抗原であり、そのため、
それらが誘起する免疫応答は低く（特に幼児で）、短命であり、ブースト可能で
はなく、そして成熟しない親和性を有することである。その抗原は、記憶応答を
提供することを含む免疫応答を増強するタンパク質への結合によって、Ｔ細胞依
存性に変換され得る。
【０００４】 インフルエンザ菌ｂ型（Ｈｉｂ）莢膜多糖タンパク質結合体ワクチンを用いる
免疫は、幼児においてＨｉｂ疾患に対する防御を与えることが証明されており、
そして、髄膜炎菌Ｃ結合体ワクチンは、最近、英国（ＵＫ）の免疫スケジュール
に導入されている。これは、例えば、髄膜炎菌および肺炎連鎖球菌の幼児期感染
の制御についての同様の小児科ワクチン方策を導入するための説得力のある論拠
である。しかし、これらの新しいワクチンは、抗原の複合混合物である。Ｈｉｂ
ワクチン接種の導入中に、処方技術において不利な抗原性相互作用および制限を
見出した。確立された小児科免疫プログラムに新たなワクチンを含める場合、こ
れらの問題は、単に悪化するだけのようである。
【０００５】 この問題は、多糖に対する幼児の免疫がＴ細胞依存性機能によって作用するの
みであるという事実に由来し、したがって、このタイプのワクチンは、キャリア
タンパク質への結合を必要とする。現在、ヒトへの使用に利用可能な主なキャリ
アタンパク質は、破傷風菌トキソイド（ＴＴ）、あるいは遺伝的または化学的に
トキソイド化されたジフテリア菌毒素（ＤＴ）である。これらのキャリアの使用
を増加することは、考えにくい。なぜなら、それらに対して予め存在する免疫、
すなわち早い時期に受動的に移行された母性抗体によって、または既存のワクチ
ンの免疫学的記憶のいずれかで生じ得る免疫が、逆に、糖質部分に対する免疫応
答をもたらし得るという証拠があるからである。明らかにこのような相互作用は
、一次免疫および追加免疫適用に対する現在の多糖結合体ワクチンの有効性をそ
れぞれ減少させ得る。
【０００６】 したがって、既存のトキソイドキャリアの長期の使用は、ジフテリア菌／破傷
風菌トキソイドの過負荷を生じ、そしてトキソイドに結合した糖質に対する免疫
応答を低下させるという問題がある。さらに、トキソイドは、解毒を必要とする
が、それによってトキソイドの免疫学的特性が変化し得る。キャリアとして提案
されている外膜タンパク質は、上記の問題がないが、特徴付けしそしてその組成
を１つの混合物から次の混合物まで変化させることが困難である複合混合物であ
る。
【０００７】 別の困難性は、小児科免疫のためのワクチンの数および複雑性を増加させるこ
との実用性に関する。ワクチン製造業者は、１本のシリンジから同時に送達され
得る小児科ワクチンの組み合わせを生産することに成功しており、そのため、免
疫プログラムを簡単にしている。現在、最新の処方およびアジュバント技術を用
いて、結合ワクチン中の成分の範囲を広げることは、技術的にますます困難であ
る。適切な代替送達システム（例えば、粘膜表面への）が導入されなければ、お
そらく、多数回の注射を、ますます複雑なワクチン接種プログラムの対応する問
題の全てとともに、再導入する見込みが生じる。
【０００８】 したがって、一般的に、代替キャリアタンパク質および代替送達ルートが、新
規または第２世代の結合体ワクチンの導入に必要であると認識されている。百日
咳菌の線毛を用いる、多糖を含む抗原送達のための新しいキャリアが、WO 98/58
668に記載されている。それにもかかわらず、ワクチン送達のためのさらなるお
よび代替キャリアタンパク質の必要性がある。
【０００９】 Chhibber, S. (1995) Vaccine, 第13巻, 第2号, 179-184頁には、多糖に結合
した鉄調節された細胞表面タンパク質を含むワクチンが記載され、結合体の成分
は両方とも、肺炎莢膜杆菌に由来している。多糖成分は、リポ多糖表面露出抗原
の温和な酸加水分解によって得られ、そして鉄調節された細胞表面タンパク質は
、鉄枯渇条件下で培養された肺炎莢膜杆菌細胞で行われる標準的な抽出手順によ
って得られた。別々の成分は、次いで、臭化シアンの使用によって、化学的に結
合された。
【００１０】 WO87/02678には、ナイセリア属の病原性種の主な鉄調節されたタンパク質が記
載されている。このタンパク質は、淋菌ワクチンとして単独で使用され得る。あ
るいは、鉄調節されたタンパク質は、免疫原性の低いペプチドに結合され、さら
なる淋菌ワクチンを形成し得る。
【００１１】 WO00/25811には、１以上のトランスフェリン結合タンパク質を含む多成分の髄
膜炎菌ワクチンが記載され、トランスフェリン結合タンパク質は、２以上の一緒
に結合されたトランスフェリン結合タンパク質を含む。WO00/25811の公開日は、
２０００年５月１１日である。
【００１２】 EP-A-733708には、ブタ胸膜肺炎に対するワクチンが記載されている。より詳
細には、Actinobacillus pleuropneumoniae由来のトランスフェリン結合タンパ
ク質は、このワクチンおよび診断試薬として使用されている。
【００１３】 本発明の目的は、これまでに直面した問題および潜在的な問題が改善または低
減された既存のトキソイドベースのワクチンと同時またはその後に使用され得る
結合体において、どちらかといえば免疫原性の低い糖質を提示するための結合体
ワクチンを提供することである。さらなる目的は、結合体ワクチンの製造のため
に、既存のトキソイドキャリアの代替であるキャリアタンパク質を提供すること
である。なおさらなる目的は、単一のワクチン処方物中で１より多くの病原体に
対するワクチン接種のために使用され得るワクチンを提供することである。
【００１４】 本発明は、第１の局面において、キャリアとしての鉄取り込みタンパク質の使
用に基づくワクチン接種のための新規な結合体を提供する。したがって、本発明
は、以下を含む結合体を提供する： （a）キャリアに結合される莢膜多糖抗原、 （b）病原性微生物による鉄取り込みに関連するタンパク質である、キャリア。
【００１５】 莢膜多糖は、Singleton P.およびSainsbury D. (1996)「Dictionary of Micro
biology and Molecular Biology」第２版, John Wiley & Sons, Chichesterによ
って明示される技術用語である。より詳細には、莢膜多糖とは、微生物の細胞壁
の外側であるが、それに隣接する多糖の層をいう。莢膜は、一般的に、以下の３
つのカテゴリーの１つに含まれる： （i）光学顕微鏡によって（ネガティブ染色法を用いて）、十分に厚く容易に
見える巨大莢膜または「真の」莢膜； （ii）光学顕微鏡によっては観察され得ないが、それらの存在が電子顕微鏡ま
たは血清学的手法によって明らかにされ得る、微小莢膜；および （iii）拡散分泌物であり、そして微生物の細胞表面に緩く付着し得る粘液層
。粘液層は、通常、微生物が液体培地で増殖する際、培養培地中に拡散する。こ
のような層は、染色法を利用するにはしばしばあまりにも透過性が高く、その結
果、しばしば、顕微鏡では見ることができない。
【００１６】 莢膜多糖は、リポ多糖およびリポ多糖に由来する多糖とは異なる。より詳細に
は、用語リポ多糖は、通常、グラム陰性細菌の外膜の内毒素の成分を特にいうた
めに使用される。外膜リポ多糖は、３つの共有結合した領域、すなわち、リピド
Ａ−コアオリゴ糖−Ｏ特異的鎖からなる複合分子である。このように、用語リポ
多糖は、グラム陰性細菌の外膜に必須の複合分子をいう。それに対して、莢膜多
糖は、微生物の細胞膜の外側である。
【００１７】 例えば、以下の微生物は、莢膜または莢膜様多糖を生産することができる：髄
膜炎菌（Neisseria meningitidis）；肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumoniae
）；化膿連鎖球菌（Streptococcus pyogenes）；「Streptococcus milleri」群
；黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）；表皮ブドウ球菌（Staphylococcu
s epidermidis）；インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）；大腸菌（Esc
herichia coli）；肺炎莢膜杆菌（Klebsiella pneumoniae）；Actinobacillus p
leuropneumoniae；Pasteurella multocida；緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）
；Moraxella catarrhalis；結核菌（Myconobacterium tuberculosis）；鵞口瘡
カンジダ（Candida albicans）；Cryptococcus neoformans；およびHistoplasma
capsulatum。
【００１８】 細菌の鉄取り込みタンパク質は、特に適切であり、そしてこのようなタンパク
質の例は、Griffiths EおよびWilliams P (1999), The iron uptake systems of
pathogenic bacteria, fungi and protozoa,「Iron and Infection: Molecular
, physiological and clinical aspects, 第２版」JJ BullenおよびE Griffiths
編, John Wiley & Sons, Chichester, UKに記載されている。本明細書中で鉄取
り込みタンパク質という場合には、シデロフォア取り込みに関連するタンパク質
を包含することが意図される。
【００１９】 本発明のキャリアタンパク質は、結合体ワクチンへの組み込みのための、新し
くかつ有用なキャリアを提供し、この目的に利用可能な既存のタンパク質に認め
られる問題および不利点の回避または少なくとも改善の利益がある。鉄取り込み
タンパク質はまた、細菌による感染中に毒性に重要な機能を有するため、本明細
書に記載されるようなキャリアとしての使用に利点がある。したがって、これら
のタンパク質に対する抗体応答がある場合、おそらく防御的である。
【００２０】 本発明のキャリアタンパク質は、好ましくは、髄膜炎菌トランスフェリン結合
タンパク質Ａと少なくとも１０％、好ましくは少なくとも２０％の配列の相同性
を有する；または髄膜炎菌トランスフェリン結合タンパク質Ｂと少なくとも１０
％、好ましくは少なくとも２０％の配列相同性を有する、いずれかのＴｏｎＢ依
存性外膜タンパク質である。
【００２１】 例えば、表１は、多数の適切なＴｏｎＢ依存性外膜タンパク質と髄膜炎菌トラ
ンスフェリン結合タンパク質Ａ（ＴｂｐＡ）との相同性を示す。
【００２２】
【表１】
【００２３】 結合体ワクチンにおけるキャリアタンパク質として有用であり得る細菌由来の
適切な鉄取り込みタンパク質およびシデロフォア取り込みタンパク質のさらなる
例を表２に示す。
【００２４】
【表２】
【００２５】 好ましい鉄取り込みタンパク質は、その発現が感染中に増加またはアップレギ
ュレートされる。代表的には、これらのタンパク質の発現は、鉄を含む培地での
インビトロ培養中には、最小限かまたはないが、細菌による感染中にインビボに
おいては明らかに増加する。このように、本発明のキャリアタンパク質は、感染
中に抗体に対するターゲットである抗原を表す。本明細書において、鉄取り込み
タンパク質という場合には、無処理のタンパク質の機能の少なくとも一部を保持
するそのフラグメント、誘導体、および改変体をいうことも意図する。より好ま
しくは、フラグメント、改変体、または誘導体に対して惹起された抗体はまた、
無処理のタンパク質に結合する。本発明のさらに好ましい鉄取り込みタンパク質
は、（i）鉄に結合するか、または（ii）鉄に結合するヒトタンパク質に結合す
るか、もしくは（iii）シデロフォアに結合するかのいずれかである。
【００２６】 ワクチン結合体においてキャリアとして使用される鉄取り込みタンパク質の適
切な例は、GriffithsおよびWilliams (1999)による総説に記載され、そして、ト
ランスフェリン結合タンパク質ＡおよびＢ（TbpAおよびTbpB; Boultonら, 1998
）、ラクトフェリン結合タンパク質ＡおよびＢ（LbpAおよびLbpB; Schryversら,
1998）、主要鉄調節タンパク質FrpB（Petterssonら, 1995）、鉄結合タンパク
質Ａ（FbpA; Berishら, 1992）、およびヘモグロビンレセプター（HpuA、HpuB、
およびHmbR; Lewisら, 1999）が挙げられる。トランスフェリン結合タンパク質
は、Neisseria属、Haemophilus属、Pasteurella属の生物群内のほとんどの細菌
から単離され得る。腸内細菌（大腸菌など）は、シデロフォアレセプターFepA（
Wachiら, 1999）、FhuE（Wachiら, 1999）、FhuA（Boulangerら, 1996）、IutA
（Bouchetら, 1994）を含む広い範囲の適切なタンパク質を生産する。
【００２７】 トランスフェリン結合タンパク質は、感染中に髄膜炎菌によって発現されるタ
ンパク質の一例であり、そして、特定の実施態様において、以下を含む本発明の
結合体が提供される： （a）キャリアに結合される莢膜多糖抗原、 （b）（i）ＴｂｐＡ、 （ii）ＴｂｐＢ、 （iii）（i）または（ii）のフラグメント、 （iv）（i）または（ii）の誘導体、および （v）（i）から（iv）のいずれかの混合物 から選択されるキャリア。
【００２８】 抗原は、適切には病原性細菌またはウイルスの抗原性成分である。この文脈に
おいて「抗原」とは、抗原を用いる免疫により病原性生物に対して防御免疫を生
じるような病原性細菌またはウイルスの抗原性成分の改変体、誘導体、およびフ
ラグメントを含むことが理解されるべきである。
【００２９】 キャリアへの抗原の結合は、従来の手段によって達成される。本発明の１つの
実施態様では、キャリアは、まず誘導体化され、次いで、抗原の溶液に添加され
る。最初に抗原を誘導体化し、次いで、Ｔｂｐキャリアに添加するという選択肢
もあり、これは、抗原が代表的にはｐＨの変化を含む誘導体化条件によって損傷
を受け易い場合に、有利であり得る。代表的には、Ｔｂｐに対する抗原の結合の
ために二官能基が導入され、２つが一緒に連結される。
【００３０】 本発明の使用において、動物は、免疫原性結合体を含むワクチンで免疫され、
そして、結合体の抗原性成分が由来する病原性生物によるチャレンジに対して防
御される。この意味では、防御は、病原性生物の致死量でのチャレンジに対する
生存によってまたはこのような致死量でのチャレンジに応答した平均寿命の延長
によって、認められる。防御はまた、ある量の病原性生物によるチャレンジ後、
患者にほとんど影響がなく、病気でないことによっても認められる。
【００３１】 本発明は、Ｔ細胞エピトープと抗原とを組み合わせて提示するための免疫原性
結合体の調製のための代替のキャリア分子を提供する点で有利である。本発明の
免疫原性結合体に対する免疫応答は、単離された抗原に対する免疫応答と比較し
て増強され、したがって、抗原単独によるワクチン接種と比較して効率が改善さ
れる。本発明はまた、既存のトキソイドキャリアの代替を提供し、したがって、
これらのトキソイドを含むワクチンの長期間および繰り返しの使用により生じ得
るトキソイドの過負荷の問題を克服する。
【００３２】 結合体の成分として鉄取り込みタンパク質を使用することのさらなる利点は、
毒素による夾雑がなく容易に得られ得、そしてワクチンへの組み込み前に解毒を
必要としないことである。当該技術分野で用いられるジフテリア菌および破傷風
菌毒素に必要とされる解毒は、タンパク質の免疫学的特性を変更し得る。Ｔｂｐ
のようなナイセリア菌由来のタンパク質のさらなる利点は、それらがまた髄膜炎
菌性および／または淋菌性疾患に対して防御免疫を与えるまたは増強することで
あり、前者は小児関連病原体であり、したがって、Ｔｂｐを含む結合体は、二重
の免疫応答を誘導する。
【００３３】 本発明はまた、本発明の免疫原性結合体の使用に関する。したがって、本発明
はまた、抗原が由来するまたは得られる病原性生物に対するヒトまたは動物のワ
クチン接種のための医薬品の製造における本発明の結合体の使用を提供する。本
発明はまた、有効な免疫量の本発明の結合体をヒトまたは動物へ投与する工程を
含む、ヒトまたは動物のワクチン接種方法を提供する。
【００３４】 本発明の免疫原性結合体を組み込むワクチンは、当該技術分野で標準的な手法
に従って処方され得る。そしてワクチンは、従来の薬学的に受容可能なキャリア
および当業者によく知られた賦形剤を含み得る。
【００３５】 本発明の結合体は、上述のように、莢膜多糖である主要な（第１の）抗原を含
む。結合体は、必要に応じて第２の抗原を含み、そして第２の抗原という場合は
、２以上の抗原を含む。
【００３６】 主要なまたは第２の抗原のソースまたは性質は、特定サブグループの抗原のい
ずれにも制限されない。そして、実際は、主要なまたは第２の抗原は、単離の際
には免疫原性ではないが、本発明の結合体に組み込まれた場合のみ免疫原性にな
ることが可能である。
【００３７】 適切な第２の抗原としては、糖質、多糖、単糖、オリゴ糖、タンパク質、ペプ
チド、グリコペプチド、リポ多糖、ならびに類似および関連分子が挙げられる。
【００３８】 代表的には、主要なまたは第２の抗原は、細菌の細胞壁の成分、または線毛も
しくは鞭毛の成分、またはウイルスの外膜エンベロープの成分のような、細菌ま
たはウイルス、あるいは細菌またはウイルスの外表面に現れる真核生物の成分で
あるか、またはその成分由来であり、その特定の例はＢ型肝炎ウイルスの表面抗
原である。例として、抗原は、気管支敗血症菌；破傷風菌；サイトメガロウイル
ス；デングウイルス；エプスタイン・バーウイルス；フラビウイルス；Ａ型肝炎
、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、Ｄ型肝炎、またはＥ型肝炎ウイルス；単純疱疹ウイルス
；インフルエンザウイルス；日本脳炎ウイルス；麻疹ウイルス；ムンプスウイル
ス；結核菌；ロタウイルス；風疹ウイルス；ＴＢＥ；コレラ菌；インフルエンザ
菌；髄膜炎菌；肺炎連鎖球菌；黄色ブドウ球菌；パラ百日咳菌；ＨＩＶ；ＨＰＶ
；ポリオウイルス；ブルセラ属；ペスト菌；ヘリコバクターピロリ；B. burgdor
ferii；マラリア；鵞口瘡カンジダ；およびＲＳＶの成分であるかまたはそれら
に由来し得る。しかし、本発明は、このサブグループの抗原のみに制限されるこ
とを意図しない。
【００３９】 本発明の実施態様においては、抗原性結合体は、ＴｂｐＢのような２つの異な
る抗原に結合された本発明のキャリアを含む。したがって、結合体は、髄膜炎菌
性疾患に対して、およびおそらくキャリアに結合された異なる抗原が得られるま
たは由来する２つの異なる病原性生物に対しても、防御免疫を与えるまたは増強
するために使用される。したがって、本発明の免疫原性結合体は、必要に応じて
、例えば、肺炎球菌Ｃの多糖およびＨｉｂ莢膜糖質が両方とも結合されているＴ
ｂｐＢを含む。したがって、本発明の実施態様は、３つの病原性生物に対する防
御免疫を与えるために使用され得る。本発明の実施態様の利点は、多数の免疫が
単一のワクチン成分によって与えられ得ることであり、個々のワクチンの混合物
を調製する必要性を回避し、そして単一の生物のみに対する免疫を与えるワクチ
ンを用いる繰り返しおよび複雑なワクチン接種スケジュールの必要性を減少させ
る。
【００４０】 本発明の結合体は、経口送達を含む多様な経路を介する送達用のマイクロパー
ティクルへの組み込みに適切である。このようなマイクロパーティクルの調製は
、EP-A-0266119、EP-A-0333523、およびEP-A-0706792に記載され、その内容は、
参考として本明細書に援用される。
【００４１】 特定の結合体は、以下を含む： （a-1）第１の莢膜多糖抗原；および （a-2）第１の抗原とは異なる第２の抗原；両者に結合する （b）キャリア。
【００４２】 本発明の特定の実施態様では、キャリアはＴｂｐＡまたはＴｂｐＢ、あるいは
それらのフラグメントまたは誘導体であり、そして第１の抗原はHib PRP多糖で
ある。
【００４３】 本発明によれば、上記の結合体を含むワクチン、および、さらに以下の工程を
含む、キャリアに抗原を結合させる方法も提供される： （a）キャリアを誘導体化する工程であって、該キャリアが病原性微生物によ
る鉄取り込みに関連するタンパク質である、工程、および （b）（a）からの誘導体化したキャリアと莢膜多糖抗原とを組み合わせ、抗原
を該キャリアに結合させる工程。
【００４４】 好ましくは、この方法は、（a）の工程において、誘導体化したキャリアを透
析する工程、および該透析した誘導体化キャリアを濃縮する工程を含み、そして
、（b）の工程において、結合していない抗原から結合体を分離する工程を含む
。
【００４５】 本発明の他の局面は、病原性微生物による鉄取り込みに関連するタンパク質の
使用を提供し、そして、その発現はワクチン接種のためのキャリア−抗原結合体
の製造において感染中に調節されない。本発明はまた、本発明の結合体の有効量
を投与する工程を含む、ワクチン接種方法を提供する。
【００４６】 さらなる局面において、本発明は、以下の工程を含む組換えヒトトランスフェ
リンの生産方法を提供する： Ａ．ヒトトランスフェリンのクローンあるいはそのフラグメントまたは誘導体
を得る工程； Ｂ．適切な発現ベクターに該クローンあるいはそのフラグメントまたは誘導体
を挿入する工程； Ｃ．適切な宿主生物でＢのベクターを発現させる工程；および Ｄ．該宿主生物から発現した遺伝子産物を単離する工程。
【００４７】 クローンは、ＰＣＲに基づく方法によって単離され得、そして、発現ベクター
は、pMTLおよびpETからなる群より選択され得る。宿主生物は、細菌、適切には
大腸菌であり、そして本発明の特定の実施態様は、Novablue DE3；HMS 174 DE3
；BL21 DE3；JM 109；RV 308；およびXL1 Blueからなる群より選択される宿主を
使用する。
【００４８】 変性条件（２Ｍ塩酸グアニジン、0.5％ザルコシル）を用いる組換えＴｂｐＢ
の産生についての代替方法が、Lissolo, L. G.ら(1995)「Evaluation of transf
errin-binding protein 2 within the transferrin-binding protein complex a
s a potential antigen for future meningococcal vaccines」Infection and I
mmunity. 63: 884-90に記載されている。
【００４９】 一旦、結合体が得られると、その粗生成物を１以上の精製プロセスに付すこと
が好ましい。アフィニティークロマトグラフィーによって、および好ましくは、
鉄取り込みタンパク質のリガンドが結合されているアフィニティーマトリクスを
使用して、結合体を精製することが特に便利であることが見出されている。
【００５０】 したがって、本発明のアフィニティーマトリクスは、適切には、鉄取り込みタ
ンパク質に対する固定化リガンドを含み、粗結合体は、マトリクスを通して溶出
され得、そしてリガンドは、結合体をマトリクス上に保持し、そして、この結合
体は、その後、ｐＨの変更またはイオン濃度の変更のような従来の手法によって
放出され得る。リガンドの選択は、鉄取り込みタンパク質に応じ、そしてリガン
ドの例としては、トランスフェリン、ラクトフェリン、鉄、ヘモグロビン、およ
び細菌シデロフォアが挙げられる。
【００５１】 以下に詳述する本発明のさらなる局面は、組換えトランスフェリン（そのフラ
グメントおよび誘導体を含む）に関し、そしてアフィニティーマトリクスは、好
ましくは、組換えトランスフェリン（例えば、組換えヒトトランスフェリン）を
含む。
【００５２】 本発明のさらなる局面は、上記の結合体の精製方法を提供し、この方法は、鉄
取り込みタンパク質に対する固定化リガンドを含むアフィニティーマトリクスを
通過させ、該結合体を溶出する工程を含む。この方法の利点は、機能的タンパク
質のみが固定化リガンドに結合するため、アフィニティーマトリクスは、機能的
タンパク質のみを結合することである。このように、溶出物は、非結合体型物質
について精製され、また、機能障害であるか、変異したか、そうでなければ、リ
ガンドに結合しない鉄取り込みタンパク質がマトリクスを通過することにより精
製される。したがって、多糖抗原に基づくワクチンの問題は、ワクチンの性能に
悪影響を与え得る非結合抗原による夾雑であるため、結合体の調製における重要
な改善が可能になる。この問題は、上記のアフィニティーマトリクスを使用する
ことによって、克服される。Ｔｂｐ含有結合体の精製のためには、ヒトトランス
フェリンが固定化されることが好ましく、組換えヒトトランスフェリンがより好
ましい。
【００５３】 本発明は、本明細書において特定の実施態様で記載され、添付の図面によって
説明される。
【００５４】 実施例１ ｒＴｂｐＢ−多糖結合体の調製 試薬 50mM Hepes緩衝液、pH8.5 ５ml Hepes緩衝液で作成されるリジン（2mg/ml） 使用直前に２ml Hepes緩衝液で作成されるジメチルスベリミデート（25mg/ml）
ＰＢＳ 透析チューブ（12400分子量カットオフ） ポリエチレングリコール（分子量8000） 100mM 炭酸水素ナトリウム pH9.0、これは透析に必要な場合に作成されるべきで
ある。 １mM 過ヨウ素酸ナトリウム、４℃に冷却されたHPLC品質の水で使用直前に調製
する。 エチレングリコール 使用直前に作成される水素化ホウ素ナトリウム（50mg/ml） すべての溶液はHPLC品質の水で調製した。
【００５５】 方法 １日目−ｒＴｂｐＢの誘導体化 ｒＴｂｐＢを、20mM 重炭酸アンモニウム緩衝液、pH7.0に対して、緩衝液を３
回交換して透析し、そして凍結乾燥して濃縮した。
【００５６】 10mgのｒＴｂｐＢを18mlの50mM Hepes緩衝液 pH8.5に溶解した。
【００５７】 ガラス瓶中のｒＴｂｐＢ溶液に225μlのリジン溶液を加えた。
【００５８】 ２mlの25mg/mlＤＭＳ溶液を調製し、そして直ちに１mlをタンパク質／リジン
混合物に加えた。ＤＭＳが金属およびプラスチックと反応するため、これは、ガ
ラス瓶中で行った。次いで、この溶液を室温で１時間混合した。
【００５９】 さらに２mlのリジン溶液を加えて、反応を終了させた。
【００６０】 この溶液をＰＢＳに対して一晩透析した（３回交換）。
【００６１】 トリニトロベンゼンスルホン酸（TNBS）アッセイおよびSDS-PAGEのために100
μlを取り出した。
【００６２】 ２日目−透析した誘導体化ｒＴｂｐＢを、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）
で１〜２mlに濃縮する 濃縮するために、透析した誘導体を透析チューブに入れたまま、容器に入れ、
そしてＰＥＧで満たした。これを室温で放置し、そしてその容量が１〜２mlに減
少するまで、定期的にチェックした。この溶液は、pH8.0以下、４℃で安定であ
った。
【００６３】 濃縮したｒＴｂｐＢ誘導体を、100mM 重炭酸ナトリウム pH9.0に対して４℃に
て一晩透析した（３回交換）。
【００６４】 TNBSアッセイおよびSDS-PAGEのために100μlを取り出した。
【００６５】 ３日目−髄膜炎菌Ｃ多糖の過ヨウ素酸酸化 １mM 過ヨウ素酸ナトリウム溶液をHPLC品質の水（４℃に冷却）で調製した。
【００６６】 多糖を、１mlのこの過ヨウ素酸塩溶液に溶解し、そして暗所で４℃にて30分間
混合した。使用する多糖の量は、モル比に基づき、そして18ml Hepes緩衝液中の
タンパク質のモル数に依存する。
【００６７】 エチレングリコールを１滴加えた。
【００６８】 直ちに、この溶液を誘導体化したｒＴｂｐＢ溶液に加え、そして４℃にて２時
間インキュベートした。
【００６９】 重炭酸ナトリウムの50mg/ml溶液をHPLC品質の水で新しく調製し、そしてこの
溶液の200μlを直ちに反応混合物に加え、４℃にて一晩インキュベートした。
【００７０】 ４日目 ｒＴｂｐＢ−ｍｅｎＣ結合体を、ＰＢＳ（HPLC品質の水で調製した）に対して
３回交換して透析し、非結合かつ加水分解された多糖を除去した。
【００７１】 次いで、結合体をSuperdex 200カラム（Amersham-Pharmacia）のサイズ排除ク
ロマトグラフィーによる精製の必要があるまで、４℃で保存した。
【００７２】 図１は、ｒＴｂｐＢおよびｍｅｎＣ多糖の非結合混合物のサイズ排除クロマト
グラフィーを示す。屈折率プロファイルは、サイズ排除カラムからの多糖の溶出
を示し、そしてＵＶプロファイルは、タンパク質の溶出プロファイルを示す。多
糖およびｒＴｂｐＢは、非結合混合物において、別々のピークとして溶出する。
【００７３】 図２は、上記の還元アミノ化プロトコルを用いる、結合したｒＴｂｐＢおよび
ｍｅｎＣ多糖のサイズ排除クロマトグラフィーを示す。屈折率およびＵＶプロフ
ァイルは、タンパク質および多糖の共溶出、ならびにサイズ排除カラムの空隙容
量の方へのｒＴｂｐＢタンパク質ピークのシフトを示し、これは、分子量の増加
を示し、そしてタンパク質および多糖の結合を確認する。
【００７４】 実施例２ 大腸菌における組換えヒトトランスフェリンの発現 ｒＴｂｐの精製のためのヒト血液由来トランスフェリンを用いる代わりに、大
腸菌においてヒトトランスフェリンの組換え形態を発現させた。全長タンパク質
と共に、トランスフェリンタンパク質の個々のローブを発現させた。
【００７５】 ヒトトランスフェリンを、既存の遺伝子クローンのＰＣＲ増幅によってクロー
ニングした（cDNA配列、Funmei Yangら, (1984) PNAS 81: 2752-2756）。使用前
に、hTf遺伝子に存在する内部NdeI部位を、以下のように、変異誘発ＰＣＲによ
って除去した。
【００７６】 １．以下のオリゴマーを用いるトランスフェリンのＰＣＲ増幅により、アミノ
酸配列を変化させることなく、アミノ酸２５〜２６位の第１のNdeI部位を除去し
た。NruI部位は、5'プライマーに含まれ、これによって、NdeI部位のすぐ上流に
NruI部位を含むhTfの既に遺伝子操作したバージョン（これもアミノ酸配列を変
化させることなく遺伝子操作されている）に生成物がクローニングされることを
可能にする。
【００７７】 5'（上流）NdeI部位を除去するためのプライマー 5' TTT CGC GAC CAC ATG AAA AGC GTC ATT CCA TCC 3' (5'プライマー) 5' GTT CTA GAG TGG CAG CCC TAC CTC TGA G 3' (3'プライマー)。
【００７８】 ２．第２のNdeI部位の除去は、２工程のプロセスであった：まず、適切に配置
されたPvuI部位を含むhTfのバージョンを生成させた（アミノ酸６４２〜６４５
位）。以下のオリゴマーを用いて、上流にNdeI部位を有しないhTf（上で詳述し
たように生成した）のＰＣＲ増幅によって、PvuI部位を導入した。
【００７９】 hTfにPvuI部位を導入するためのプライマー 5' CAT ATG GTC CCT GAT AAA ACT GTG AG 3' (5'プライマー) 5' CGA TCG TGA AGT TTG GCC AAA CAT ACT G 3' (3'プライマー)。
【００８０】 次いで、hTfの3'末端を、以下のオリゴマーを用いて増幅した。
【００８１】 3'（下流）NdeI部位を除去するためのプライマー 5' CGA TCG AAA CAC GTA TGA AAA ATA CTT AG 3' (5'プライマー) 5' GTT CTA GAG TGG CAG CCC TAC CTC TGA G 3' (3'プライマー)。
【００８２】 ３．PvuI部位を、２つの生成物を一緒に結合させるために用い、開始ATGコドン
のレベルで１つのNdeI部位を有する全長の組換えhTf遺伝子を形成した。
【００８３】 Ｎ末端クローンを、以下のオリゴマーを用いるＰＣＲによって調製し、天然の
リーダー配列を含まないＮ末端クローンを生じさせ、これは、成熟トランスフェ
リン配列のアミノ酸１〜３３７位を含んでいた。
【００８４】 Ｎ末端クローンプライマー 5' CAT ATG GTC CCT GAT AAA ACT GTG AG 3' (5'プライマー) 5' TCT AGA TTA ATC TGT TGG GGC TTC TGG GCA TG 3' (3'プライマー)。
【００８５】 Ｃ末端ローブを、以下のオリゴマーを用いて増幅し、これはまた、pETおよびp
MTLベクターのNdeI部位へのクローニングを可能にし、そして成熟トランスフェ
リン配列のアミノ酸３３８〜６７９位を含んでいた。
【００８６】 Ｃ末端クローンプライマー 5' CAT ATG GAA TGC AAG CCT GTG AAG TGG 3' (5'プライマー) 5' GTT CTA GAG TGG CAG CCC TAC CTC TGA G 3' (3'プライマー)。
【００８７】 全長およびhTfローブを、最初に、NdeI-XbaIフラグメントで、pET22bおよびpE
T26bにクローニングした。
【００８８】 発現研究 発現研究を、hTf pET22bおよびpET26クローンを有する大腸菌BL21 DE3をＯＤ650 が0.7〜1.0になるまで増殖させることによって行った。１mM IPTGで発現を誘導
し、そしてhTF生成を、ヤギ抗ヒトトランスフェリンポリクローナル抗体（Sigma
）を用いて、ドットブロットおよびウエスタンブロッティングによって２時間に
わたりモニターした。全長およびＣ末端組換え体のサイズは、非グリコシル化ヒ
トトランスフェリンおよびその個々のローブについて予測されたサイズに匹敵し
た。顕微鏡検査では、hTfの発現により、封入体が生産されることを明らかにし
た。この沈殿した物質は、機能的物質を生成させるために可溶化およびリフォー
ルディングを必要とする。
【００８９】 組換えトランスフェリンのリフォールディングおよびアフィニティーカラムで
の生成のためのプロトコル 可溶化およびリフォールディングのプロトコルは、他に記載されている（Hoef
kins P.ら (1996) Int. J. Biochem. Cell. Biol. 28, 975-982）。簡単にいえ
ば次のとおりである： １．標準的な細胞溶解および遠心分離によって封入体物質を単離する。 ２．８M尿素、１mM DTT、40mM Tris／塩酸、10%グリセロール(v/v) pH7.6にペレ
ット化したタンパク質を溶解する。 ３．再生緩衝液（0.1mM Na-EDTA、0.1mM Tris／塩酸、1.0mM 還元型グルタチオ
ン(GSH)、pH8.2）で、溶解したタンパク質を20μg/mlの濃度まで希釈する。 ４．６℃にて15分間インキュベートする。 ５．0.5mMの最終濃度になるまで酸化型グルタチオン(GSSG)を加える。 ６．６℃にてさらに22時間インキュベートする。 ７．濃縮し、そして10mM NaHCO3に対して透析する。 ８．鉄で飽和し、そして純度を評価する（必要であれば、サイズ排除クロマトグ
ラフィーまたは他のクロマトグラフィー技法を用いてクリーンアップする）。 ９．Sepharose 4B（Amersham Pharmacia）と結合して、アフィニティーマトリク
スを生成する。
【００９０】 本発明は、このように、ワクチン適用のためのキャリアタンパク質として使用
するための鉄取り込みタンパク質を提供する。
【００９１】 実施例３−ＴｂｐＢ−ｍｅｎＣ結合体の評価方法 3.1 免疫 結合体の免疫応答を測定するために、５匹のBalb/cマウス（雌、６〜９週齢）
の群に、10μgの多糖を含む結合体ワクチンまたは非結合体コントロールを２回
の投与で免疫した；防御効率を、マウスの群に上記調製物を３回投与した後に測
定した。すべてのワクチンを、リン酸アルミニウム（Adjuphos, Superfos-Biose
ctor, Frederikssund, Denmark）でアジュバントにし、リン酸アルミニウムを最
終濃度４mgml-1にした。皮下注射を、免疫応答については１日目および２８日目
に行い、防御効率の評価については１、２１、および２８日目に行った。血清を
０、１４、２１、および３５日目に収集し、そしてIgG全体に対するＥＬＩＳＡ
によって、ｍｅｎＣＰおよびＴｂｐＢに対する抗体をアッセイした。
【００９２】 3.2 髄膜炎菌イムノアッセイのためのマウス腹腔内感染態様 ＴｂｐＢ−ｍｅｎＣＰ結合体の防御効率を測定するために、Balb/cマウス（雌
、６〜８週齢、Harlan）に、結合体あるいは10μgml-1多糖またはdFimを含む多
糖とタンパク質との非結合の混合物を１、２１、および２８日目に免疫した。マ
ウスは、腹腔内（i.p.）注射によって、３５日目に感染させた。細菌を、Muelle
r Hintonブロス中で４時間増殖し、同じ培地で必要な密度に調節し、そしてＰＢ
Ｓ中の滅菌したヒトトランスフェリン（40mgml-1, Sigma）の等容量と混合した
。マウスに、0.5ml懸濁液中で適切なチャレンジ量を腹腔内投与し、そして、２
４時間後、ヒトトランスフェリン（50mgml-1）を含む0.2ml生理食塩水を第２の
腹腔内注射により投与した。感染に対する罹病性を感染後４日間モニターし、そ
してマウスが、閉眼、毛の乱れ、および不動状態の徴候を示した時を終点とし、
その時点でマウスを安楽死させた。
【００９３】 図３および４に注目すると、ＴｂｐＢ−ｍｅｎＣ結合体は、ＴｂｐＢ単独より
も髄膜炎菌チャレンジに対して良好な防御を提供する。
【００９４】 3.3 ＥＬＩＳＡ ９６ウェルマイクロタイタープレート（Immulon）を、PBS中の１μgml-1 Ｔｂ
ｐＢまたはデ-Ｏ-アセチル化ｍｅｎＣＰ-メチル化ヒト血清アルブミン（menCP-m
HSA）で４℃にて一晩コートし、そして血清希釈物とインキュベートした。特異
的抗体を、ヤギ抗マウスIgG-HRP、および抗マウスIgMおよびIgGイソタイプ-HRP
結合体（Jackson）、ならびにTMBlue（Universal Biologicals）を用いて検出し
た。抗体力価を、用量応答曲線の中点に対応する血清の希釈物の逆数として定義
した。これを、各血清の８つの希釈物から生じた用量応答曲線について内挿ソフ
トウエア（Genesis; Labsystems）を用いて算出した。内挿の変動を、１４日目
の血清のプールを用いることによって補正し、そして、検出限界未満の力価を示
す血清を、幾何平均の計算について５０の任意の力価とした。抗-menCP抗体のカ
オトロピック剤としてチオシアネートを用いるアビディティーＥＬＩＳＡを３５
日目の血清について行った。
【００９５】 図５および６に示す免疫原性のデータは、ｍｅｎＣ莢膜多糖およびＴｂｐＢ抗
原を別々に認識する抗体（血清IgG）が惹起したことを示す。図５では、マウス
が産生した血清IgGを、ｍｅｎＣ莢膜多糖抗原でチャレンジするが、図６では、
トランスフェリン結合タンパク質Ｂ抗原は、IgGチャレンジのために使用する。
抗ｍｅｎＣ抗体は、本発明の結合体で２１日目において最大である（図５を参照
のこと）。
【００９６】 参考文献 Berish, S.A., Chen, C. Y., Mietzner, T.A.,およびMorse, S. A.、(1992):
Expression of a functional neisserial fbp gene in Escherichia coli. Mol.
Microbiol., 6: 2607-2615。 Bouchet A, Valvano MA, Dho-Moulin Mら、Immunological variants of the a
erobactin-cloacin DF13 outer membrane protein receptor IutA among enteri
c bacteria. (1994) Infect Immun 62: 3017-21。 Boulanger P, le Maire M, Bonhivers Mら、Purification and structural an
d functional characterization of FhuA, a transporter of the Escherichia
coli outer membrane. (1996) Biochemistry, 35: 14216-24。 Boulton, I. C., Gorringe, A. R., Allison, N., Robinson, A., Gorinsky,
B., Joannou, C. L.,およびEvans, R. W.、(1998): Transferrin-binding prote
in B isolated from Neisseria meningitidis discriminates between apo and
diferric human transferrin. Biochem. J., 334: 269-273。 Griffiths E.およびWilliams P.、(1999). The iron uptake systems of path
ogenic bacteria, fungi and protozoa. Iron and Infection，第２版，JJ Bull
enおよびE.Griffiths編. 87-212頁. John Wiley & Sons, Chichester, UK。 Lewis LA, Gipson M, Hartman Kら、Phase variation of HpuAB and HmbR, tw
o distinct haemoglobin receptors of Neisseria meningitidis DNM2. (1999).
Mol Microbiol 32: 977-89。 Pettersson A, Maas A, van Wassenaar Dら、Molecular characterization of
FrpB, the 70-kilodalton iron-regulated outer membrane protein of Neisse
ria meningitidis. (1995). Infect Immun 63: 4181-4。 Schryvers, A.B., Bonnah, R., Yu, R.H., Wong, H.およびRetzer, M.、(1998
): Bacterial lactoferrin receptors. Adv. Exp. Med. Biol., 443:123-133。 Wachi M, Takada A, Nagai K、Overproduction of the outer-membrane prote
ins FepA and FhuE responsible for iron transport in Escherichia coli hfq
::cat mutant. (1999). Biochem Biophys Res Commun, 264: 525-9。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ｒＴｂｐＢおよびｍｅｎＣ多糖の非結合混合物のサイズ排除クロマトグラフィ
ーを示す。
【図２】 結合したｒＴｂｐＢおよびｍｅｎＣ多糖のサイズ排除クロマトグラフィーを示
す。
【図３】 本発明の結合体の投与後、およびその後の３×１０６用量の血清群Ｃ−髄膜炎
菌株でのチャレンジのマウス防御データを示す。
【図４】 本発明の結合体の投与後、およびその後の２×１０８用量の血清群Ｃ−髄膜炎
菌株でのチャレンジのマウス防御データを示す。
【図５】 本発明のトランスフェリン結合タンパクＢ−髄膜炎菌莢膜多糖抗原結合体での
ワクチン接種後のマウスにおける髄膜炎菌莢膜多糖認識抗体の生成を示す。
【図６】 トランスフェリン結合タンパクＢ−髄膜炎菌莢膜多糖抗原結合体でのワクチン
接種後のマウスにおけるトランスフェリン結合タンパクＢ認識抗体の生成を示す
。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ゴリンジ，アンドリュー リチャード イギリス国 エスピー４ ０ジェイジー ウィルトシャー，ソールズベリー，ポート ン ダウン（番地なし），シーエイエムア ール，マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ (72)発明者 ロビンソン，アンドリュー イギリス国 エスピー４ ０ジェイジー ウィルトシャー，ソールズベリー，ポート ン ダウン（番地なし），シーエイエムア ール，マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ (72)発明者 ハドソン，マイケル ジョン イギリス国 エスピー４ ０ジェイジー ウィルトシャー，ソールズベリー，ポート ン ダウン（番地なし），シーエイエムア ール，マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ (72)発明者 レディン，カレン マーガレット イギリス国 エスピー４ ０ジェイジー ウィルトシャー，ソールズベリー，ポート ン ダウン（番地なし），シーエイエムア ール，マイクロバイオロジカル リサーチ オーソリティ Ｆターム(参考） 4C076 AA95 BB11 CC31 EE59 4C085 AA03 BA14 BA16 BA33 CC07 DD33 EE01 EE05 GG01

Claims (13)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 （a）キャリアに結合される莢膜多糖抗原と（b）キャリアと
    を含む結合体であって、該キャリアが病原性微生物による鉄取り込みに関連する
    タンパク質である、結合体。
  2. 【請求項２】 前記キャリアが、細菌の鉄取り込みタンパク質である、請求
    項１に記載の結合体。
  3. 【請求項３】 前記キャリアの発現が、感染中に増加されるまたはアップレ
    ギュレートされる、請求項２に記載の結合体。
  4. 【請求項４】 （a）キャリアに結合される莢膜多糖抗原と（b）キャリアと
    を含む、請求項１から３のいずれかに記載の結合体であって、該キャリアが： （i）ＴｂｐＡ、 （ii）ＴｂｐＢ、 （iii）（i）または（ii）のフラグメント、 （iv）（i）または（ii）の誘導体、および （v）（i）から（iv）のいずれかの混合物 より選択される、結合体。
  5. 【請求項５】 前記キャリアが、ＴｂｐＢ、あるいはそのフラグメントまた
    は誘導体である、請求項４に記載の結合体。
  6. 【請求項６】 前記抗原が、細菌の莢膜多糖である、請求項５に記載の結合
    体。
  7. 【請求項７】 肺炎球菌多糖および／または髄膜炎菌多糖を含む、請求項６
    に記載の結合体。
  8. 【請求項８】 請求項１から７のいずれかに記載の結合体であって、 （a-1）第１の莢膜多糖抗原；および （a-2）該第１の抗原とは異なる第２の抗原と、両者に結合する （b）キャリア とを含む、結合体。
  9. 【請求項９】 請求項１から８のいずれかに記載の結合体を含む、ワクチン
    。
  10. 【請求項１０】 抗原をキャリアに結合する方法であって、 （a）鉄取り込みタンパク質を誘導体化する工程；および （b）（a）からの該誘導体化した鉄取り込みタンパク質を莢膜多糖抗原と組み合
    わせ、該抗原を該鉄取り込みタンパク質に結合させる工程 を含む、方法。
  11. 【請求項１１】 ワクチン接種のためのキャリア−抗原結合体の製造におけ
    る、トランスフェリン結合タンパク質の使用。
  12. 【請求項１２】 鉄取り込みタンパク質に対する固定化リガンドを含む、請
    求項１から８のいずれかに記載の結合体の精製のためのアフィニティーマトリク
    ス。
  13. 【請求項１３】 請求項１から８のいずれかに記載の結合体を精製する方法
    であって、該方法は、鉄取り込みタンパク質に対する固定化リガンドを含むアフ
    ィニティーマトリクスを通過させ、該結合体を溶出させる工程を含む、方法。
JP2001570298A 2000-03-27 2001-03-27 結合体ワクチンにおいてキャリアとして使用するためのタンパク質 Pending JP2003528157A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0007432.8 2000-03-27
GBGB0007432.8A GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-03-27 Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
PCT/GB2001/001361 WO2001072337A1 (en) 2000-03-27 2001-03-27 Proteins for use as carriers in conjugate vaccines

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2003528157A true JP2003528157A (ja) 2003-09-24

Family

ID=9888523

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001570298A Pending JP2003528157A (ja) 2000-03-27 2001-03-27 結合体ワクチンにおいてキャリアとして使用するためのタンパク質

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20030082211A1 (ja)
EP (1) EP1267938A1 (ja)
JP (1) JP2003528157A (ja)
AU (1) AU2001242602A1 (ja)
CA (1) CA2403993A1 (ja)
GB (1) GB0007432D0 (ja)
WO (1) WO2001072337A1 (ja)

Families Citing this family (158)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7082569B2 (en) 2001-01-17 2006-07-25 Outlooksoft Corporation Systems and methods providing dynamic spreadsheet functionality
GB0220197D0 (en) * 2002-08-30 2002-10-09 Univ Utrecht Refolding method
US20060240045A1 (en) * 2002-08-02 2006-10-26 Francois-Xavier Berthet Neisserial vaccine compositions comprising a combination of antigens
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
DK1549338T3 (da) 2002-10-11 2011-03-28 Novartis Vaccines & Diagnostic Polypeptidvacciner til bred beskyttelse mod hypervirulente meningokok-afstamningslinier
AU2003288660A1 (en) 2002-11-15 2004-06-15 Chiron Srl Unexpected surface proteins in neisseria meningitidis
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
EP2289546A3 (en) 2003-01-30 2011-03-30 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups
US9296795B2 (en) 2003-03-07 2016-03-29 Wyeth Holdings, Llc. Polysaccharide-staphylococcal surface adhesin carrier protein conjugates for immunization against nosocomial infections
EP1622933A2 (en) * 2003-04-22 2006-02-08 Intercell AG H. pylori antigens
EP1961426B1 (en) 2003-10-02 2011-04-27 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Combined meningitis vaccines
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
GB0406013D0 (en) 2004-03-17 2004-04-21 Chiron Srl Analysis of saccharide vaccines without interference
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0410866D0 (en) 2004-05-14 2004-06-16 Chiron Srl Haemophilius influenzae
GB0411387D0 (en) 2004-05-21 2004-06-23 Chiron Srl Analysis of saccharide length
GB0413868D0 (en) 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
EP1784211A4 (en) 2004-07-29 2010-06-30 Novartis Vaccines & Diagnostic IMMUNOGENIC COMPOSITIONS FOR GRAMPOSITIVE BACTERIA SUCH AS STREPTOCOCCUS AGALACTIAE
GB0424092D0 (en) 2004-10-29 2004-12-01 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
GB0502096D0 (en) 2005-02-01 2005-03-09 Chiron Srl Purification of streptococcal capsular polysaccharide
NZ597685A (en) 2005-02-18 2013-12-20 Novartis Vaccines & Diagnostic Proteins and nucleic acids from meningitis/sepsis-associated escherichia coli
NZ560929A (en) 2005-02-18 2009-12-24 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunogens from uropathogenic escherichia coli
EP2329843A3 (en) 2005-04-18 2011-09-14 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Expressing Hepatitis B Virus surface antigen for vaccine preparation
SI2283857T1 (sl) 2005-06-27 2019-11-29 Glaxosmithkline Biologicals Sa Sestava cepiva, ki obsega konjugirane nativne kapsularne polisaharide n. meningitidis
EP2308505A3 (en) 2005-09-01 2011-11-30 Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH Multiple vaccines including serogroup C meningococcus
GB0522765D0 (en) 2005-11-08 2005-12-14 Chiron Srl Combination vaccine manufacture
JP5215865B2 (ja) 2005-11-22 2013-06-19 ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス インコーポレイテッド ノロウイルス抗原およびサポウイルス抗原
GB0524066D0 (en) 2005-11-25 2006-01-04 Chiron Srl 741 ii
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
DK1973564T3 (da) 2005-12-22 2017-01-16 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine omfattende streptococcus pneumoniae-kapselpolysaccharidkonjugat
GB0605757D0 (en) 2006-03-22 2006-05-03 Chiron Srl Separation of conjugated and unconjugated components
PT2004225E (pt) 2006-03-22 2012-05-30 Novartis Ag Regimes para imunização com conjugados meningocócicos
ATE522541T1 (de) 2006-06-09 2011-09-15 Novartis Ag Bakterielle adhäsine konformere
GB0612854D0 (en) 2006-06-28 2006-08-09 Novartis Ag Saccharide analysis
AU2007285484B2 (en) 2006-08-16 2013-05-02 Novartis Ag Immunogens from uropathogenic Escherichia coli
AU2007293672B2 (en) 2006-09-07 2013-06-27 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
GB0700136D0 (en) 2007-01-04 2007-02-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Process for manufacturing vaccines
GB0700562D0 (en) 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
CN101687028A (zh) 2007-05-02 2010-03-31 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 疫苗
EA201391788A1 (ru) 2007-06-26 2014-08-29 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцина, содержащая конъюгаты капсульных полисахаридов streptococcus pneumoniae
GB0713880D0 (en) 2007-07-17 2007-08-29 Novartis Ag Conjugate purification
GB0714963D0 (en) 2007-08-01 2007-09-12 Novartis Ag Compositions comprising antigens
AU2008299376B2 (en) 2007-09-12 2013-02-28 Glaxosmithkline Biologicals S.A. GAS57 mutant antigens and GAS57 antibodies
SI2200642T1 (sl) 2007-10-19 2012-06-29 Novartis Ag Formulacije meningokoknega cepiva
GB0818453D0 (en) 2008-10-08 2008-11-12 Novartis Ag Fermentation processes for cultivating streptococci and purification processes for obtaining cps therefrom
RU2498994C2 (ru) 2007-12-21 2013-11-20 Новартис Аг Мутантные формы стрептолизина о
CN102356089B (zh) 2008-02-21 2014-02-19 诺华股份有限公司 脑膜炎球菌fHBP多肽
DK2349520T3 (en) 2008-10-27 2016-08-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Purification Procedure for Group A Streptococcus Carbohydrate
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
GB0822634D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Meningitis vaccines
EP2367568A2 (en) 2008-12-17 2011-09-28 Novartis AG Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor
CN102481349B (zh) 2009-01-12 2014-10-15 诺华股份有限公司 抗革兰氏阳性细菌疫苗中的Cna_B结构域
JP5668049B2 (ja) 2009-03-24 2015-02-12 ノバルティス アーゲー 髄膜炎菌ｈ因子結合タンパク質および肺炎球菌糖結合体の組み合わせ
SI2411048T1 (sl) 2009-03-24 2020-08-31 Glaxosmithkline Biologicals Sa Meningokokni faktor H vezavni protein uporabljen kot adjuvans
NZ612315A (en) 2009-04-14 2014-10-31 Novartis Ag Compositions for immunising against staphylococcus aureus
MX340830B (es) 2009-04-30 2016-07-26 Coley Pharm Group Inc Vacuna neumococica y usos de la misma.
WO2010132833A1 (en) 2009-05-14 2010-11-18 The Regents Of The University Of Michigan Streptococcus vaccine compositions and methods of using the same
PE20142188A1 (es) 2009-06-22 2014-12-29 Wyeth Llc Composiciones inmunogenicas de antigenos de staphylococcus aureus
JP2012530785A (ja) 2009-06-22 2012-12-06 ワイス・エルエルシー 組成物および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）血清型５および８莢膜多糖コンジュゲート免疫原性組成物を調製するための方法
US8647621B2 (en) * 2009-07-27 2014-02-11 Fina Biosolutions, Llc Method of producing protein-carbohydrate vaccines reduced in free carbohydrate
EP2470204B1 (en) 2009-08-27 2015-12-16 GlaxoSmithKline Biologicals SA Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences
MY163512A (en) 2009-09-03 2017-09-15 Pfizer Vaccines Llc Pcsk9 vaccine
WO2011030218A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Novartis Ag Combination vaccines against respiratory tract diseases
EP2483390A2 (en) 2009-09-30 2012-08-08 Novartis AG Expression of meningococcal fhbp polypeptides
CN102596254B (zh) 2009-09-30 2016-10-19 诺华股份有限公司 金黄色葡萄球菌5型和8型荚膜多糖的偶联
AU2010310985B2 (en) 2009-10-27 2014-11-06 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Modified meningococcal fHBP polypeptides
SG10201407096RA (en) 2009-10-30 2014-12-30 Novartis Ag Purification of staphylococcus aureus type 5 and type 8 capsular saccharides
GB0919690D0 (en) 2009-11-10 2009-12-23 Guy S And St Thomas S Nhs Foun compositions for immunising against staphylococcus aureus
GB201003333D0 (en) 2010-02-26 2010-04-14 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
GB201005625D0 (en) 2010-04-01 2010-05-19 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
EP2585106A1 (en) 2010-06-25 2013-05-01 Novartis AG Combinations of meningococcal factor h binding proteins
GB201101665D0 (en) 2011-01-31 2011-03-16 Novartis Ag Immunogenic compositions
WO2012072769A1 (en) 2010-12-01 2012-06-07 Novartis Ag Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations
WO2012085668A2 (en) 2010-12-24 2012-06-28 Novartis Ag Compounds
US10286056B2 (en) 2011-01-27 2019-05-14 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvant nanoemulsions with crystallisation inhibitors
WO2012131504A1 (en) 2011-03-02 2012-10-04 Pfizer Inc. Pcsk9 vaccine
US20140112950A1 (en) 2011-03-02 2014-04-24 Manmohan Singh Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
GB201103836D0 (en) 2011-03-07 2011-04-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
US10357568B2 (en) 2011-03-24 2019-07-23 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Adjuvant nanoemulsions with phospholipids
CN103764171B (zh) 2011-07-08 2016-08-17 诺华股份有限公司 酪氨酸连接方法
GB201114923D0 (en) 2011-08-30 2011-10-12 Novartis Ag Immunogenic proteins and compositions
ES2732708T3 (es) 2011-09-14 2019-11-25 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de fabricación de glucoconjugados de sacárido-proteína
MX354924B (es) 2011-11-07 2018-03-22 Novartis Ag Molecula portadora que comprende un antigeno spr0096 y un spr2021.
EP2592137A1 (en) 2011-11-11 2013-05-15 Novartis AG Fermentation media free of animal-derived components for production of diphtheria toxoids suitable for human vaccine use
DE102011118371B4 (de) 2011-11-11 2014-02-13 Novartis Ag Zur Impfung von Menschen geeignete Zusammensetzung, die ein Diphtherie-Toxoid umfasst, sowie Verfahren zu deren Herstellung
GB2495341B (en) 2011-11-11 2013-09-18 Novartis Ag Fermentation methods and their products
DE102011122891B4 (de) 2011-11-11 2014-12-24 Novartis Ag Fermentationsmedium, das frei von tierischen Bestandteilen ist, zur Herstellung von Diphtherie-Toxoiden zur Verwendung bei der Impfung von Menschen
EP2788022B1 (en) 2011-12-08 2018-10-31 GlaxoSmithKline Biologicals SA Clostridium difficile toxin-based vaccine
GB201121301D0 (en) 2011-12-12 2012-01-25 Novartis Ag Method
WO2013098589A1 (en) 2011-12-29 2013-07-04 Novartis Ag Adjuvanted combinations of meningococcal factor h binding proteins
AU2013224026A1 (en) 2012-02-24 2014-08-21 Novartis Ag Pilus proteins and compositions
US20150132339A1 (en) 2012-03-07 2015-05-14 Novartis Ag Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens
WO2013132043A1 (en) 2012-03-08 2013-09-12 Novartis Ag Combination vaccines with tlr4 agonists
SA115360586B1 (ar) 2012-03-09 2017-04-12 فايزر انك تركيبات لعلاج الالتهاب السحائي البكتيري وطرق لتحضيرها
EP2841096B1 (en) 2012-04-26 2020-09-30 GlaxoSmithKline Biologicals SA Antigens and antigen combinations
US10279026B2 (en) 2012-04-26 2019-05-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antigens and antigen combinations
US10124051B2 (en) 2012-05-22 2018-11-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Meningococcus serogroup X conjugate
EP2892553A1 (en) 2012-09-06 2015-07-15 Novartis AG Combination vaccines with serogroup b meningococcus and d/t/p
JP6266000B2 (ja) 2012-10-03 2018-01-24 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 免疫原性組成物
EP2906239A1 (en) 2012-10-12 2015-08-19 GlaxoSmithKline Biologicals SA Non-cross-linked acellular pertussis antigens for use in combination vaccines
CN111249455A (zh) 2012-11-30 2020-06-09 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 假单胞菌抗原和抗原组合
WO2014118305A1 (en) 2013-02-01 2014-08-07 Novartis Ag Intradermal delivery of immunological compositions comprising toll-like receptor agonists
WO2015095868A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Wake Forest University Health Sciences Methods and compositions for increasing protective antibody levels induced by pneumococcal polysaccharide vaccines
KR102099741B1 (ko) 2014-01-21 2020-04-10 화이자 인코포레이티드 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 피막 폴리사카라이드 및 그의 접합체
US11160855B2 (en) 2014-01-21 2021-11-02 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
NZ759686A (en) 2014-01-21 2023-07-28 Pfizer Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
RU2688831C2 (ru) 2014-01-21 2019-05-22 Пфайзер Инк. Капсульные полисахариды Streptococcus pneumoniae и их конъюгаты
CA2939416A1 (en) 2014-02-14 2015-08-20 Pfizer Inc. Immunogenic glycoprotein conjugates
BR112016019735A2 (pt) 2014-02-28 2017-10-17 Glaxosmithkline Biologicals Sa fhbp, polipeptídeo, plasmídeo ou outro ácido nucleico, célula hospedeira, vesículas de membrana, e, composição imunogênica
US9815886B2 (en) 2014-10-28 2017-11-14 Adma Biologics, Inc. Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency
EP3034516A1 (en) 2014-12-19 2016-06-22 Novartis AG Purification of streptococcal capsular polysaccharide
ES2945312T3 (es) 2015-01-15 2023-06-30 Pfizer Composiciones inmunogénicas para su uso en vacunas antineumocócicas
SG10202005253TA (en) 2015-07-21 2020-07-29 Pfizer Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
GB201518684D0 (en) 2015-10-21 2015-12-02 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EP3377098A1 (en) 2015-11-20 2018-09-26 Pfizer Inc Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
KR20180088458A (ko) 2015-12-04 2018-08-03 다나-파버 캔서 인스티튜트 인크. 암의 치료를 위한 mica/b 알파 3 도메인의 백신접종
BE1024634B1 (fr) 2016-04-05 2018-05-14 Gsk Vaccines S.R.L. Compositions immunogenes
WO2018042017A2 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccines for neisseria gonorrhoeae
EP3551668A1 (en) 2016-12-06 2019-10-16 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Purification process for capsular polysaccharide
WO2018134693A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Pfizer Inc. Immunogenic compositions for use in pneumococcal vaccines
EP3576759A4 (en) 2017-01-31 2020-11-11 Merck Sharp & Dohme Corp. PROCESS FOR THE PREPARATION OF CAPSULE POLYSACCHARIDE PROTEIN CONJUGATES FROM STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE SEROTYPE 19F
IL303108B1 (en) 2017-01-31 2024-03-01 Pfizer NEISSERIA MENINGITIDIS preparations and methods therefor
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
MX2020002555A (es) 2017-09-07 2020-09-25 Merck Sharp & Dohme Polisacaridos neumococicos y su uso en conjugados de polisacarido inmunogenico con proteina transportadora.
US20210177957A1 (en) 2017-12-06 2021-06-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Compositions comprising streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
WO2019217665A1 (en) * 2018-05-09 2019-11-14 West Virginia University Iron-acquisition receptor peptide administration for vaccination against pseudomonas aeruginosa
JP7446279B2 (ja) 2018-07-19 2024-03-08 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 乾燥多糖を調製するための方法
EP3607967A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Modified meningococcal fhbp polypeptides
US11260119B2 (en) 2018-08-24 2022-03-01 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
JP2022512345A (ja) 2018-12-12 2022-02-03 ファイザー・インク 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用
AU2019401535B2 (en) 2018-12-19 2023-12-14 Merck Sharp & Dohme Llc Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
CA3129425A1 (en) 2019-02-11 2020-08-20 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
JP7239509B6 (ja) 2019-02-22 2023-03-28 ファイザー・インク 細菌多糖類を精製するための方法
EP3952906A1 (en) 2019-04-10 2022-02-16 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
CA3139257A1 (en) 2019-05-10 2020-11-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Conjugate production
EP4003410A1 (en) 2019-07-31 2022-06-01 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate compositions and methods of using the same
MX2022003682A (es) 2019-09-27 2022-04-25 Pfizer Composiciones de neisseria meningitidis y metodos de las mismas.
CA3159573A1 (en) 2019-11-01 2021-05-06 Pfizer Inc. Escherichia coli compositions and methods thereof
US20220387614A1 (en) 2019-11-22 2022-12-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Dosage and administration of a bacterial saccharide glycoconjugate vaccine
AU2021224078B2 (en) 2020-02-21 2024-01-18 Pfizer Inc. Purification of saccharides
BR112022014555A2 (pt) 2020-02-23 2022-09-20 Pfizer Composições de escherichia coli e métodos das mesmas.
GB202013262D0 (en) 2020-08-25 2020-10-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine Composition
JP2023546446A (ja) 2020-10-22 2023-11-02 ファイザー・インク 細菌多糖を精製する方法
JP2023546615A (ja) 2020-10-27 2023-11-06 ファイザー・インク 大腸菌組成物およびその方法
CN116744965A (zh) 2020-11-04 2023-09-12 辉瑞大药厂 用于肺炎球菌疫苗的免疫原性组合物
US20220202923A1 (en) 2020-12-23 2022-06-30 Pfizer Inc. E. coli fimh mutants and uses thereof
TW202245835A (zh) 2021-02-04 2022-12-01 美商默沙東有限責任公司 用於肺炎球菌結合物疫苗之奈米乳化液佐劑組合物
JP2024517780A (ja) 2021-05-03 2024-04-23 ファイザー・インク 細菌およびベータコロナウイルス感染症に対するワクチン接種
WO2022234416A1 (en) 2021-05-03 2022-11-10 Pfizer Inc. Vaccination against pneumoccocal and covid-19 infections
TW202306969A (zh) 2021-05-28 2023-02-16 美商輝瑞大藥廠 包含結合之莢膜醣抗原的免疫原組合物及其用途
TW202304503A (zh) 2021-05-28 2023-02-01 美商輝瑞大藥廠 包含結合之莢膜醣抗原的免疫原組合物及其用途
WO2023135515A1 (en) 2022-01-13 2023-07-20 Pfizer Inc. Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof
WO2023161817A1 (en) 2022-02-25 2023-08-31 Pfizer Inc. Methods for incorporating azido groups in bacterial capsular polysaccharides
WO2023218322A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Pfizer Inc. Process for producing of vaccine formulations with preservatives
GB202208093D0 (en) 2022-06-01 2022-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
GB202208089D0 (en) 2022-06-01 2022-07-13 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic composition
WO2024084397A1 (en) 2022-10-19 2024-04-25 Pfizer Inc. Vaccination against pneumoccocal and covid-19 infections

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4681761A (en) * 1985-10-24 1987-07-21 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Major iron-regulated protein of Neisseria gonorrhoeae and its use as vaccine

Also Published As

Publication number Publication date
GB0007432D0 (en) 2000-05-17
AU2001242602A1 (en) 2001-10-08
WO2001072337A1 (en) 2001-10-04
US20030082211A1 (en) 2003-05-01
CA2403993A1 (en) 2001-10-04
EP1267938A1 (en) 2003-01-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2003528157A (ja) 結合体ワクチンにおいてキャリアとして使用するためのタンパク質
JP2022105155A (ja) 多糖類－タンパク質コンジュゲートを含む多価肺炎球菌ワクチン組成物
JP4091026B2 (ja) 複数種オリゴ糖の糖接合体型の細菌性髄膜炎ワクチン
EP0549617B1 (en) Improved vaccine compositions
TWI281403B (en) Vaccine
JP4097691B2 (ja) Ｃ群髄膜炎菌に対するワクチン
JP2019104940A (ja) Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ５型および８型の莢膜糖の精製
CA2530363C (en) Carrier proteins for vaccines
TW201531299A (zh) 包含結合之莢膜醣抗原的免疫原組合物及其用途
RO122761B1 (ro) Vaccin multivalent antimeningococic conţinând polizaharid-proteină
CN110845587B (zh) 一种定点突变的载体蛋白及其在制备疫苗中的用途
JP2002541808A (ja) ポリサッカリド結合体ワクチンのための組換えトキシンａタンパク質キャリア
JP2001510169A (ja) Ｂ型髄膜炎菌性ポーリンおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ多糖体を含む免疫原性結合体
JP5744842B2 (ja) 髄膜炎菌と肺炎球菌との結合型ワクチン及びそれを使用する方法
JP2022513562A (ja) 肺炎連鎖球菌の精製された莢膜多糖
US6780420B1 (en) Carrier protein having an adjuvant effect, immunogenic complex containing it, process for their preparation, nucleotide sequence and vaccine
CN111801343A (zh) 免疫原性组合物
US20220211859A1 (en) Conjugate production
WO2017054635A1 (zh) 一种流感嗜血杆菌融合蛋白及其构建方法与应用
TWI749085B (zh) 使用低分子化ＰＲＰ之Ｈｉｂ接合型疫苗之製造方法
AU761394B2 (en) Superoxide dismutase as a vaccine antigen
WO1999036088A1 (en) RECOMBINANT CtB-BASED VACCINES
JP2016029103A (ja) 免疫原性組成物
CN110652585A (zh) 多糖-蛋白缀合物免疫制剂及其制备与应用
CN116898960A (zh) 细菌多糖蛋白缀合物及其应用