JP2003238438A - 外因子から生体を防御する組成物 - Google Patents
外因子から生体を防御する組成物Info
- Publication number
- JP2003238438A JP2003238438A JP2002033256A JP2002033256A JP2003238438A JP 2003238438 A JP2003238438 A JP 2003238438A JP 2002033256 A JP2002033256 A JP 2002033256A JP 2002033256 A JP2002033256 A JP 2002033256A JP 2003238438 A JP2003238438 A JP 2003238438A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- composition
- abm
- extract
- composition according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L31/00—Edible extracts or preparations of fungi; Preparation or treatment thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 外因子から生体を防御する組成物または食品
素材を提供すること。 【解決手段】 外因子から生体を防御する組成物であっ
て、カワリハラタケの熱水抽出物を含む組成物。この組
成物は、免疫担当細胞を媒介して生体を防御する。上記
免疫担当細胞は、マクロファージ、あるいはマクロファ
ージまたはＴ細胞であり得る。上記免疫担当細胞は、抗
体産生細胞であり得る。上記組成物は、体液性免疫の増
強によって生体を防御し得る。体液性免疫の増強は、活
性化Ｔ細胞およびマクロファージからなる群から選択さ
れるリンパ球の活性化によって、インターロイキン−１
βおよびインターロイキン６からなる群から選択される
インターロイキンの発現の増強によって起こり得る。上
記外因子は、喫煙によって摂取されるかまたは抗原物質
であり得る。
素材を提供すること。 【解決手段】 外因子から生体を防御する組成物であっ
て、カワリハラタケの熱水抽出物を含む組成物。この組
成物は、免疫担当細胞を媒介して生体を防御する。上記
免疫担当細胞は、マクロファージ、あるいはマクロファ
ージまたはＴ細胞であり得る。上記免疫担当細胞は、抗
体産生細胞であり得る。上記組成物は、体液性免疫の増
強によって生体を防御し得る。体液性免疫の増強は、活
性化Ｔ細胞およびマクロファージからなる群から選択さ
れるリンパ球の活性化によって、インターロイキン−１
βおよびインターロイキン６からなる群から選択される
インターロイキンの発現の増強によって起こり得る。上
記外因子は、喫煙によって摂取されるかまたは抗原物質
であり得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、カワリハラタケの
熱水抽出処理物を含有する、外因子によって引き起こさ
れる生体の損傷を防ぐ組成物に関する。
熱水抽出処理物を含有する、外因子によって引き起こさ
れる生体の損傷を防ぐ組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒトは、外因子として、おびただしい種
類のウイルス、細菌、カビ、寄生虫などの生物の感染、
ならびに、これら以外の膨大な数の抗原物質およびタバ
コ煙に含まれる発癌物質、発癌促進物質を包含する環境
汚染物質に常にさらされている。健康を維持するために
は、これらの外因子の悪影響を排除する必要がある。
類のウイルス、細菌、カビ、寄生虫などの生物の感染、
ならびに、これら以外の膨大な数の抗原物質およびタバ
コ煙に含まれる発癌物質、発癌促進物質を包含する環境
汚染物質に常にさらされている。健康を維持するために
は、これらの外因子の悪影響を排除する必要がある。
【０００３】健康を維持する願望がより増加するにつ
れ、多くの人々は、一般に、健康食品および健康補助剤
を食している。副作用がほとんどなく、そして活性成分
（特に抗腫瘍効果）を有する天然素材が注目されてい
る。なぜなら、化学的治療薬物または合成化合物は、抗
腫瘍活性とともに多くの副作用を示すからである。活性
成分を有する天然素材の例としてマッシュルーム、アガ
リクス茸などが挙げられる。
れ、多くの人々は、一般に、健康食品および健康補助剤
を食している。副作用がほとんどなく、そして活性成分
（特に抗腫瘍効果）を有する天然素材が注目されてい
る。なぜなら、化学的治療薬物または合成化合物は、抗
腫瘍活性とともに多くの副作用を示すからである。活性
成分を有する天然素材の例としてマッシュルーム、アガ
リクス茸などが挙げられる。
【０００４】マッシュルームから、抗腫瘍活性をもつ多
くの多糖類が単離されている（Ｈａｍｕｒｏ Ｊら（１
９７８）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３８：３０８０−３
０８５；Ｍｉｚｕｎｏ Ｔら（１９９２）、Ｂｉｏｓｃ
ｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：３
４７−３４８）。
くの多糖類が単離されている（Ｈａｍｕｒｏ Ｊら（１
９７８）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．３８：３０８０−３
０８５；Ｍｉｚｕｎｏ Ｔら（１９９２）、Ｂｉｏｓｃ
ｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：３
４７−３４８）。
【０００５】一般にアガリクス茸と呼ばれるものは、学
名を「アガリクス・ブラゼイ・ムリル Ａｇａｒｉｃｕ
ｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｌｌ」和名を「カワリハラタ
ケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこである。
アガリクス茸（以後、本明細書では、一般に、カワリハ
ラタケまたはＡＢＭと称する）は、ブラジルのサンパウ
ロ州に位置するＰｉｅｄａｄｅ地方で伝統的に医薬とし
て用いられている。カワリハラタケは、種々の免疫賦活
活性、発癌予防効果、腫瘍増殖抑制効果をもつといわ
れ、現在、健康食品として幅広く内服されている。
名を「アガリクス・ブラゼイ・ムリル Ａｇａｒｉｃｕ
ｓ ｂｌａｚｅｉ Ｍｕｒｌｌ」和名を「カワリハラタ
ケ」という担子菌類ハラタケ科に属するきのこである。
アガリクス茸（以後、本明細書では、一般に、カワリハ
ラタケまたはＡＢＭと称する）は、ブラジルのサンパウ
ロ州に位置するＰｉｅｄａｄｅ地方で伝統的に医薬とし
て用いられている。カワリハラタケは、種々の免疫賦活
活性、発癌予防効果、腫瘍増殖抑制効果をもつといわ
れ、現在、健康食品として幅広く内服されている。
【０００６】カワリハラタケに含まれる多糖類は、ザル
コーマ１８０に対して抗腫瘍活性を有し、そしてβ−
１，６−グルコピラノシル残基を含む（Ｅｂｉｎａ Ｔ
ら（１９８６）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
７７：１０３４−１０４２）。カワリハラタケ抽出物
は、（１→６）−β分岐をもつ（１→４）−α−Ｄ−グ
ルカンを含み、ナチュラルキラー細胞活性化およびアポ
トーシスを経由して媒介される選択的抗腫瘍活性を有し
ている（Ｆｕｊｉｍｉｙａ Ｙら（１９９８）、Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ４
６：１４７−１５９）。二重移植腫瘍系において、カワ
リハラタケに含まれるペプチドグリカンは、Ｍｅｔｈ
Ａ腫瘍細胞に対して直接的な細胞傷害性作用を有し、そ
して腫瘍をもつマウスに対して間接的な免疫増強作用を
有していた（Ｅｂｉｎａ Ｔら（１９９８）、Ｂｉｏｔ
ｈｅｒａｐｙ １１：２５９−２６５）。カワリハラタ
ケに含まれる多糖類は、マウスにおけるＴ細胞サブセッ
トにおける脾臓Ｔｈｙ１，２−、Ｌ３Ｔ４陽性細胞の割
合を変えた（Ｍｉｚｕｎｏ Ｍら（１９９８）、Ｂｉｏ
ｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６
２：４３４−４３７）。これらの報告は、カワリハラタ
ケに含まれる多糖類が、免疫調節活性を通じて腫瘍細胞
に対する細胞傷害性作用を有することを示唆している。
コーマ１８０に対して抗腫瘍活性を有し、そしてβ−
１，６−グルコピラノシル残基を含む（Ｅｂｉｎａ Ｔ
ら（１９８６）、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
７７：１０３４−１０４２）。カワリハラタケ抽出物
は、（１→６）−β分岐をもつ（１→４）−α−Ｄ−グ
ルカンを含み、ナチュラルキラー細胞活性化およびアポ
トーシスを経由して媒介される選択的抗腫瘍活性を有し
ている（Ｆｕｊｉｍｉｙａ Ｙら（１９９８）、Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ４
６：１４７−１５９）。二重移植腫瘍系において、カワ
リハラタケに含まれるペプチドグリカンは、Ｍｅｔｈ
Ａ腫瘍細胞に対して直接的な細胞傷害性作用を有し、そ
して腫瘍をもつマウスに対して間接的な免疫増強作用を
有していた（Ｅｂｉｎａ Ｔら（１９９８）、Ｂｉｏｔ
ｈｅｒａｐｙ １１：２５９−２６５）。カワリハラタ
ケに含まれる多糖類は、マウスにおけるＴ細胞サブセッ
トにおける脾臓Ｔｈｙ１，２−、Ｌ３Ｔ４陽性細胞の割
合を変えた（Ｍｉｚｕｎｏ Ｍら（１９９８）、Ｂｉｏ
ｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６
２：４３４−４３７）。これらの報告は、カワリハラタ
ケに含まれる多糖類が、免疫調節活性を通じて腫瘍細胞
に対する細胞傷害性作用を有することを示唆している。
【０００７】種々の天然素材、特に、カワリハラタケ抽
出物が免疫増強活性および抗腫瘍活性を有するという多
くの報告がなされているが、遅延型過敏症または抗体産
生について免疫増強活性を報告した例はほとんどない。
カワリハラタケ抽出物が免疫系をどのように活性化する
のかは明らかにされていない。また、免疫賦活活性、発
癌予防効果、および腫瘍増殖抑制効果の他にカワリハラ
タケ抽出物の生理活性を具体的に確認した報告はほとん
どない。
出物が免疫増強活性および抗腫瘍活性を有するという多
くの報告がなされているが、遅延型過敏症または抗体産
生について免疫増強活性を報告した例はほとんどない。
カワリハラタケ抽出物が免疫系をどのように活性化する
のかは明らかにされていない。また、免疫賦活活性、発
癌予防効果、および腫瘍増殖抑制効果の他にカワリハラ
タケ抽出物の生理活性を具体的に確認した報告はほとん
どない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】生体は、外因子とし
て、おびただしい種類のウイルス、細菌、カビ、寄生虫
などの生物の感染、ならびに、これら以外の膨大な数の
抗原物質およびタバコ煙に含まれる発癌物質、発癌促進
物質などを包含する環境汚染物質に常にさらされてい
る。生体に対するこのような外因子および生体に生じる
異常変異細胞（例えば癌細胞）は、主に、生体のもって
いる免疫系の感染防御機能あるいは免疫学的監視機構に
より除去されていると考えられている。従って、生体の
もつ免疫系を増強することは、個体の健康の維持・増強
に重要である。そして、天然素材であるカワリハラタケ
のもつ、種々の免疫賦活活性、発癌予防効果、腫瘍増殖
効果免疫賦活効果およびその他の生理活性効果を実際に
検証していくことは、個体の健康の維持・増強に必要な
重要な課題である。
て、おびただしい種類のウイルス、細菌、カビ、寄生虫
などの生物の感染、ならびに、これら以外の膨大な数の
抗原物質およびタバコ煙に含まれる発癌物質、発癌促進
物質などを包含する環境汚染物質に常にさらされてい
る。生体に対するこのような外因子および生体に生じる
異常変異細胞（例えば癌細胞）は、主に、生体のもって
いる免疫系の感染防御機能あるいは免疫学的監視機構に
より除去されていると考えられている。従って、生体の
もつ免疫系を増強することは、個体の健康の維持・増強
に重要である。そして、天然素材であるカワリハラタケ
のもつ、種々の免疫賦活活性、発癌予防効果、腫瘍増殖
効果免疫賦活効果およびその他の生理活性効果を実際に
検証していくことは、個体の健康の維持・増強に必要な
重要な課題である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、カワリハ
ラタケ抽出物が、抗体産生を誘導するか否か、およびそ
の機構を調査することにより本発明を完成するに至っ
た。また、本発明者らは、マウスにタバコの主流煙を喫
煙させ、タバコ喫煙による、肺、肺胞マクロファージ、
および心臓におけるＤＮＡ損傷と、これらの損傷を防ぐ
カワリハタラケ抽出液の効果を確認し、本発明を完成す
るに至った。
ラタケ抽出物が、抗体産生を誘導するか否か、およびそ
の機構を調査することにより本発明を完成するに至っ
た。また、本発明者らは、マウスにタバコの主流煙を喫
煙させ、タバコ喫煙による、肺、肺胞マクロファージ、
および心臓におけるＤＮＡ損傷と、これらの損傷を防ぐ
カワリハタラケ抽出液の効果を確認し、本発明を完成す
るに至った。
【００１０】本発明は、外因子から生体を防御する組成
物に関し、この組成物は、カワリハラタケの熱水抽出物
を含む。
物に関し、この組成物は、カワリハラタケの熱水抽出物
を含む。
【００１１】この組成物は、免疫担当細胞を媒介して生
体を防御し得る。
体を防御し得る。
【００１２】上記免疫担当細胞は、マクロファージであ
り得る。
り得る。
【００１３】上記免疫担当細胞は、マクロファージまた
はＴ細胞であり得る。
はＴ細胞であり得る。
【００１４】上記免疫担当細胞は、抗体産生細胞であり
得る。
得る。
【００１５】上記組成物は、体液性免疫の増強によって
生体を防御し得る。
生体を防御し得る。
【００１６】上記外因子は、喫煙によって摂取され得
る。
る。
【００１７】上記組成物は、遺伝子損傷を低減すること
によって生体を防御し得る。
によって生体を防御し得る。
【００１８】上記遺伝子損傷は、肺組織の酸化的ＤＮＡ
損傷であり得る。
損傷であり得る。
【００１９】上記外因子は抗原物質であり得る。
【００２０】上記体液性免疫の増強は、活性化Ｔ細胞お
よびマクロファージからなる群から選択されるリンパ球
の活性化によって起こり得る。
よびマクロファージからなる群から選択されるリンパ球
の活性化によって起こり得る。
【００２１】上記体液性免疫の増強は、インターロイキ
ン−１βおよびインターロイキン６からなる群から選択
されるインターロイキンの発現の増強によって起こり得
る。
ン−１βおよびインターロイキン６からなる群から選択
されるインターロイキンの発現の増強によって起こり得
る。
【００２２】上記組成物は、薬学的に受容可能なキャリ
アをさらに包含し得る。
アをさらに包含し得る。
【００２３】上記組成物は、粉末、液体、錠剤、カプセ
ル、ペレットからなる群から選択される形態であり得
る。
ル、ペレットからなる群から選択される形態であり得
る。
【００２４】本明細書で用いる用語、生体に対する「外
因子」は、ウイルス、細菌、カビ、寄生虫などの生物、
これら以外の抗原物質、タバコ煙に含まれる発癌物質、
発癌促進物質などを包含する環境汚染物質、さらには、
生体に生じる異常変異細胞（例えば癌細胞）をも包含す
る。本明細書で用いる用語、「外因子から生体を防御す
る」は、上記の「外因子」に起因して生じる、ウイルス
性疾患、アレルギー、生体組織の酸化的損傷、腫瘍、癌
などの症状の発生を予防するかまたは遅延すること、あ
るいはこれらの症状を低減するかなくすることを意味す
る。本明細書で用いる用語、「免疫担当細胞」は、当業
者に公知の免疫応答に関与する細胞を意味し、これに
は、体液性免疫を媒介するＢ細胞および細胞性免疫を媒
介するＴ細胞に大別されるリンパ球；マクロファージ、
ランゲルハンス細胞、樹枝状細胞などのアクセサリー細
胞；ＮＫ細胞（ナチュラルキラー細胞）；ＬＡＫ細胞
（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌ
ｌｅｒ ｃｅｌｌ）；および抗体依存性細胞傷害を誘導
する細胞などが含まれる。Ｔ細胞には、免疫応答の制御
に関与するヘルパーＴ細胞やサプレッサーＴ細胞、標的
細胞を破壊するキラーＴ細胞や遅延型過敏症などに関与
するＴ細胞が含まれる。Ｂ細胞には、抗原やＴ細胞など
により活性化されてＢ細胞から分化した抗体分泌細胞が
含まれる。
因子」は、ウイルス、細菌、カビ、寄生虫などの生物、
これら以外の抗原物質、タバコ煙に含まれる発癌物質、
発癌促進物質などを包含する環境汚染物質、さらには、
生体に生じる異常変異細胞（例えば癌細胞）をも包含す
る。本明細書で用いる用語、「外因子から生体を防御す
る」は、上記の「外因子」に起因して生じる、ウイルス
性疾患、アレルギー、生体組織の酸化的損傷、腫瘍、癌
などの症状の発生を予防するかまたは遅延すること、あ
るいはこれらの症状を低減するかなくすることを意味す
る。本明細書で用いる用語、「免疫担当細胞」は、当業
者に公知の免疫応答に関与する細胞を意味し、これに
は、体液性免疫を媒介するＢ細胞および細胞性免疫を媒
介するＴ細胞に大別されるリンパ球；マクロファージ、
ランゲルハンス細胞、樹枝状細胞などのアクセサリー細
胞；ＮＫ細胞（ナチュラルキラー細胞）；ＬＡＫ細胞
（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌ
ｌｅｒ ｃｅｌｌ）；および抗体依存性細胞傷害を誘導
する細胞などが含まれる。Ｔ細胞には、免疫応答の制御
に関与するヘルパーＴ細胞やサプレッサーＴ細胞、標的
細胞を破壊するキラーＴ細胞や遅延型過敏症などに関与
するＴ細胞が含まれる。Ｂ細胞には、抗原やＴ細胞など
により活性化されてＢ細胞から分化した抗体分泌細胞が
含まれる。
【００２５】上記カワリハラタケの熱水抽出物は、カワ
リハラタケの子実体を熱水抽出する工程、抽出物を透析
処理する工程および透析外液をクロマトグラフィー処理
する工程によって得られる分子量１００〜２０００のク
ロマトグラフィー主溶出画分を有効成分として含み得
る。
リハラタケの子実体を熱水抽出する工程、抽出物を透析
処理する工程および透析外液をクロマトグラフィー処理
する工程によって得られる分子量１００〜２０００のク
ロマトグラフィー主溶出画分を有効成分として含み得
る。
【００２６】あるいは、上記カワリハラタケの熱水抽出
物は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、抽
出物にエタノールを加えて混合し、混合物を遠心分離し
て沈殿と上澄液に分ける工程、上澄液にエタノールを加
えて混合し、混合物を遠心分離して沈殿と上澄液に分け
る工程および沈殿物を蒸留水に溶解して透析処理する工
程によって得られる透析外液を有効成分として含み得
る。
物は、カワリハラタケの子実体を熱水抽出する工程、抽
出物にエタノールを加えて混合し、混合物を遠心分離し
て沈殿と上澄液に分ける工程、上澄液にエタノールを加
えて混合し、混合物を遠心分離して沈殿と上澄液に分け
る工程および沈殿物を蒸留水に溶解して透析処理する工
程によって得られる透析外液を有効成分として含み得
る。
【００２７】上記カワリハラタケの熱水抽出物は、必要
に応じて、薬学的に受容可能なキャリアと配合された形
態であり得る。このような薬学的に受容可能なキャリア
は当業者に公知であり、制限されないで、例えば、以下
を包含する：リンゲル溶液、ハンクス溶液、または緩衝
化生理食塩水などの緩衝液；ゴマ油などの脂肪酸、オレ
イン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エ
ステル；ラクトース、スクロース、マンニトール、ソル
ビトールなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジ
ャガイモなどの植物由来デンプン；メチルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアゴ
ム、トラガカントゴムなどのゴム；ゼラチン、コラーゲ
ンなどのタンパク質；架橋ポリビニルピロリドン、寒
天、アルギン酸またはその塩など。
に応じて、薬学的に受容可能なキャリアと配合された形
態であり得る。このような薬学的に受容可能なキャリア
は当業者に公知であり、制限されないで、例えば、以下
を包含する：リンゲル溶液、ハンクス溶液、または緩衝
化生理食塩水などの緩衝液；ゴマ油などの脂肪酸、オレ
イン酸エチルまたはトリグリセリドなどの合成脂肪酸エ
ステル；ラクトース、スクロース、マンニトール、ソル
ビトールなどの糖類；トウモロコシ、コムギ、イネ、ジ
ャガイモなどの植物由来デンプン；メチルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースナトリウムなどのセルロース；アラビアゴ
ム、トラガカントゴムなどのゴム；ゼラチン、コラーゲ
ンなどのタンパク質；架橋ポリビニルピロリドン、寒
天、アルギン酸またはその塩など。
【００２８】
【発明の実施の形態】以下に本発明の外因子によって引
き起こされる生体の損傷を防ぐ組成物の製法について説
明する。
き起こされる生体の損傷を防ぐ組成物の製法について説
明する。
【００２９】本発明で用いられるカワリハラタケの子実
体は、天然物であっても人工培養物であってもよい。市
販されている乾燥物もまた便利に利用できる。
体は、天然物であっても人工培養物であってもよい。市
販されている乾燥物もまた便利に利用できる。
【００３０】カワリハラタケの熱水抽出は、乾燥子実体
に５から１０倍の水を加えて１〜３時間加熱抽出または
加熱還流することによって行われる。必要に応じて、カ
ワリハラタケの熱水抽出は、熱水抽出残渣についてもさ
らに加熱抽出または加熱還流を繰り返して行われる。こ
のようにして得られる熱水抽出液は、凍結乾燥、スプレ
ードライなど、当業者に公知の方法によって乾燥物（以
下乾燥物Ａという）とする。この乾燥物に、５〜２０倍
の水を加え、透析チューブに入れ数倍の蒸留水で１０〜
１５時間透析し、透析外液を凍結乾燥することによって
も、カワリハラタケの熱水抽出物の乾燥物（以下乾燥物
Ｃという）を得ることができる。
に５から１０倍の水を加えて１〜３時間加熱抽出または
加熱還流することによって行われる。必要に応じて、カ
ワリハラタケの熱水抽出は、熱水抽出残渣についてもさ
らに加熱抽出または加熱還流を繰り返して行われる。こ
のようにして得られる熱水抽出液は、凍結乾燥、スプレ
ードライなど、当業者に公知の方法によって乾燥物（以
下乾燥物Ａという）とする。この乾燥物に、５〜２０倍
の水を加え、透析チューブに入れ数倍の蒸留水で１０〜
１５時間透析し、透析外液を凍結乾燥することによって
も、カワリハラタケの熱水抽出物の乾燥物（以下乾燥物
Ｃという）を得ることができる。
【００３１】次に、透析内液についても、さらに流水中
で２０〜４０時間透析し、そして蒸留水で２回各数時間
透析した後に得られる透析内液を上記と同様に乾燥物と
することによっても、外因子によって引き起こされる生
体の損傷を防ぐ、カワリハラタケの熱水抽出物の乾燥物
（以下乾燥物Ｂという）を得ることができる。
で２０〜４０時間透析し、そして蒸留水で２回各数時間
透析した後に得られる透析内液を上記と同様に乾燥物と
することによっても、外因子によって引き起こされる生
体の損傷を防ぐ、カワリハラタケの熱水抽出物の乾燥物
（以下乾燥物Ｂという）を得ることができる。
【００３２】次に、得られた上記乾燥物Ｃを、約１０倍
の蒸留水に溶解し、蒸留水を流出溶媒としてクロマトグ
ラフィーを行い、２０ｍＬずつ分取し、多くの画分を得
る。得られた画分の中程の主溶出画分で、ゲル濾過法に
よって分子量１００〜２０００の画分もまた、外因子に
よって引き起こされる生体の損傷を防ぐ、カワリハラタ
ケの熱水抽出物を含む画分である。
の蒸留水に溶解し、蒸留水を流出溶媒としてクロマトグ
ラフィーを行い、２０ｍＬずつ分取し、多くの画分を得
る。得られた画分の中程の主溶出画分で、ゲル濾過法に
よって分子量１００〜２０００の画分もまた、外因子に
よって引き起こされる生体の損傷を防ぐ、カワリハラタ
ケの熱水抽出物を含む画分である。
【００３３】これらの画分は、さらにＯＤＳ（オクタデ
シルシラン化シリカゲル）を用いる逆相クロマトグラフ
ィー、ＤＥＡＥ−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ６５０を用いるイ
オン交換クロマトグラフィーなどを用いて分析すると、
アルギニン、リジン、マンニトールの他、数種の成分を
含んでいることが確認されている。
シルシラン化シリカゲル）を用いる逆相クロマトグラフ
ィー、ＤＥＡＥ−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ６５０を用いるイ
オン交換クロマトグラフィーなどを用いて分析すると、
アルギニン、リジン、マンニトールの他、数種の成分を
含んでいることが確認されている。
【００３４】また、上記の方法で得られる熱水抽出液に
等量のエタノールを加えて混合し、遠心分離処理して沈
殿と上澄液に分ける。得られる上澄液にさらにその１か
ら３倍量のエタノールを加えて混合し、遠心分離処理し
て得られる沈殿を蒸留水に溶解し、この溶液を透析処理
して得られる透析外液もまた低分子画分であって、本発
明の、外因子によって引き起こされる生体の損傷を防
ぐ、カワリハラタケの熱水抽出物を含む画分である。
等量のエタノールを加えて混合し、遠心分離処理して沈
殿と上澄液に分ける。得られる上澄液にさらにその１か
ら３倍量のエタノールを加えて混合し、遠心分離処理し
て得られる沈殿を蒸留水に溶解し、この溶液を透析処理
して得られる透析外液もまた低分子画分であって、本発
明の、外因子によって引き起こされる生体の損傷を防
ぐ、カワリハラタケの熱水抽出物を含む画分である。
【００３５】このようにして得られたカワリハラタケの
熱水抽出物を含む画分は、そのまま、あるいは種々のキ
ャリアとともに医薬製剤の製造に用いることができる。
また、このカワリハラタケの熱水抽出物を含む画分は、
そのまま、または他の食品素材と共に健康飲食品として
利用することができる。
熱水抽出物を含む画分は、そのまま、あるいは種々のキ
ャリアとともに医薬製剤の製造に用いることができる。
また、このカワリハラタケの熱水抽出物を含む画分は、
そのまま、または他の食品素材と共に健康飲食品として
利用することができる。
【００３６】本発明の組成物は、代表的には、生体適合
性の薬学的キャリア（例えば、生理食塩水、緩衝化生理
食塩水、デキストロース、および水など）とともに経口
的に摂取され得る。本発明の組成物は、単独または他の
薬剤もしくは食品素材と組み合わせて摂取され得る。
性の薬学的キャリア（例えば、生理食塩水、緩衝化生理
食塩水、デキストロース、および水など）とともに経口
的に摂取され得る。本発明の組成物は、単独または他の
薬剤もしくは食品素材と組み合わせて摂取され得る。
【００３７】本発明の組成物は経口的または非経口的に
投与され得る。非経口送達は、静脈内、筋肉内、腹腔
内、または鼻孔内への投与により達成され得る。本発明
の薬学的組成物の処方および投与の詳細は、例えば、当
該分野における教科書「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨ
ＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ」（Ｍａ
ａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏ
ｎ、ＰＡ）に記載に従って行なわれ得る。
投与され得る。非経口送達は、静脈内、筋肉内、腹腔
内、または鼻孔内への投与により達成され得る。本発明
の薬学的組成物の処方および投与の詳細は、例えば、当
該分野における教科書「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨ
ＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ」（Ｍａ
ａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏ
ｎ、ＰＡ）に記載に従って行なわれ得る。
【００３８】経口投与のための組成物は、投与に適した
投与形態で当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリ
アを用いて処方され得る。このようなキャリアは、得ら
れる組成物が、患者による摂取に適した、錠剤、丸剤、
糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、
懸濁物などに処方されることを可能とする。
投与形態で当該分野で周知の薬学的に受容可能なキャリ
アを用いて処方され得る。このようなキャリアは、得ら
れる組成物が、患者による摂取に適した、錠剤、丸剤、
糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、
懸濁物などに処方されることを可能とする。
【００３９】本発明の組成物は、カワリハラタケ熱水抽
出物を、外因子によって引き起こされる生体の損傷を防
ぐに有効な量で含む。「薬理学的に有効な量」は、当業
者に十分に認識される用語であり、生体内で意図される
外因子によって引き起こされる生体の損傷を防ぐために
有効なカワリハラタケ熱水抽出物の量をいう。従って、
薬学的に有効な量は、処置されるべき、外因子によって
引き起こされる生体の損傷の徴候を軽減するのに十分な
量である。
出物を、外因子によって引き起こされる生体の損傷を防
ぐに有効な量で含む。「薬理学的に有効な量」は、当業
者に十分に認識される用語であり、生体内で意図される
外因子によって引き起こされる生体の損傷を防ぐために
有効なカワリハラタケ熱水抽出物の量をいう。従って、
薬学的に有効な量は、処置されるべき、外因子によって
引き起こされる生体の損傷の徴候を軽減するのに十分な
量である。
【００４０】「薬理学的に有効な量」を確認する有用な
アッセイの例は、被験体における外因子によって引き起
こされる生体の損傷、例えば、酸化的ＤＮＡ損傷の程度
を測定することである。実際に投与されるカワリハラタ
ケ熱水抽出物の量は、処置が適用される個体の健康状態
などに依存し、所望の効果が達成されるように最適化さ
れた量である。薬学的に有効な量を決定することは、当
業者にとって慣用的な手順である。
アッセイの例は、被験体における外因子によって引き起
こされる生体の損傷、例えば、酸化的ＤＮＡ損傷の程度
を測定することである。実際に投与されるカワリハラタ
ケ熱水抽出物の量は、処置が適用される個体の健康状態
などに依存し、所望の効果が達成されるように最適化さ
れた量である。薬学的に有効な量を決定することは、当
業者にとって慣用的な手順である。
【００４１】薬学的に有効な量は、まず、細胞培養によ
るインビトロアッセイまたは適切な動物モデルによって
評価され得る。次に、このような情報を用いて、ヒトに
おける投与に有用な量を決定し得る。
るインビトロアッセイまたは適切な動物モデルによって
評価され得る。次に、このような情報を用いて、ヒトに
おける投与に有用な量を決定し得る。
【００４２】また、上記の外因子によって引き起こされ
る生体の損傷を防ぐ活性を有する画分は、その機能を発
揮するに十分な量で、選択された１種またはそれ以上の
食品素材と混合される。選択された１種またはそれ以上
の食品素材は、当業者に公知の形態、通常粉末形態で、
この免疫賦活活性を有する画分と混合される。そしてこ
れらは、用途または好みに応じて、液状の食品として供
することができる。あるいはハードカプセル、ソフトカ
プセルなどのカプセル剤、錠剤もしくは丸剤としてか、
または粉末状、顆粒状、茶状、ティーバック状もしく
は、飴状などの形状に成形され得る。
る生体の損傷を防ぐ活性を有する画分は、その機能を発
揮するに十分な量で、選択された１種またはそれ以上の
食品素材と混合される。選択された１種またはそれ以上
の食品素材は、当業者に公知の形態、通常粉末形態で、
この免疫賦活活性を有する画分と混合される。そしてこ
れらは、用途または好みに応じて、液状の食品として供
することができる。あるいはハードカプセル、ソフトカ
プセルなどのカプセル剤、錠剤もしくは丸剤としてか、
または粉末状、顆粒状、茶状、ティーバック状もしく
は、飴状などの形状に成形され得る。
【００４３】以下、実施例により本発明をより詳細に説
明するが、以下の実施例は本発明の例示であり、本発明
を制限するものではない。
明するが、以下の実施例は本発明の例示であり、本発明
を制限するものではない。
【００４４】
【実施例】（実施例１）喫煙のＤＮＡ損傷に及ぼすカワ
リハラタケ熱水抽出物の効果 Ｉ．材料および方法 実施例１で用いた材料および方法は以下の通りである。
リハラタケ熱水抽出物の効果 Ｉ．材料および方法 実施例１で用いた材料および方法は以下の通りである。
【００４５】１．喫煙
マウス（８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウス）に、フィルタ
ー付きタバコ（ＣＯＲＥＳＴＡ：１本あたりタール１５
ｍｇ、ニコチン１．５ｍｇを含む）を、２０本／日、１
０日間、図８に示すＨａｍｂｕｒｇＩＩ自動喫煙装置
（ｂｏｒｇｗａｌｄｔ社製）を用いて喫煙させた。
ー付きタバコ（ＣＯＲＥＳＴＡ：１本あたりタール１５
ｍｇ、ニコチン１．５ｍｇを含む）を、２０本／日、１
０日間、図８に示すＨａｍｂｕｒｇＩＩ自動喫煙装置
（ｂｏｒｇｗａｌｄｔ社製）を用いて喫煙させた。
【００４６】２．カワリハラタケ抽出物
カワリハラタケ（ＡＢＭ）の熱水抽出物（上記の乾燥物
Ａ）は、協和エンジニアリング株式会社（東京、日本）
から供与された。これは、ＡＢＭを、Ｍｉｚｕｎｏら
（上述）に記載の方法を改変して抽出したものである。
すなわち、ＡＢＭの乾燥子実体を沸騰水で抽出し、１８
００×ｇで１０分間遠心分離し、そして凍結乾燥し、カ
ワリハラタケ熱水抽出物を得た。次いで、これを、Ｃａ
++、Ｍｇ++フリーのＤｕｌｂｅｃｃｏ緩衝化生理食塩水
（ＰＢＳ）（日水製薬株式会社、東京、日本）中に１０
ｍｇ／ｍＬの濃度で再溶解し、そして０．４５μｍメン
ブレンフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏ．Ｌｔ
ｄ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）で濾過した。得られた濾液
は使用するまで４℃で貯蔵した。これを、２５ｍｇ／ｋ
ｇ体重投与となるように、喫煙前に静脈注射（ｉ．
ｐ．）した。コントロール群には、カワリハラタケ熱水
抽出液を含まない上記ＰＢＳのみを投与した。
Ａ）は、協和エンジニアリング株式会社（東京、日本）
から供与された。これは、ＡＢＭを、Ｍｉｚｕｎｏら
（上述）に記載の方法を改変して抽出したものである。
すなわち、ＡＢＭの乾燥子実体を沸騰水で抽出し、１８
００×ｇで１０分間遠心分離し、そして凍結乾燥し、カ
ワリハラタケ熱水抽出物を得た。次いで、これを、Ｃａ
++、Ｍｇ++フリーのＤｕｌｂｅｃｃｏ緩衝化生理食塩水
（ＰＢＳ）（日水製薬株式会社、東京、日本）中に１０
ｍｇ／ｍＬの濃度で再溶解し、そして０．４５μｍメン
ブレンフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏ．Ｌｔ
ｄ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）で濾過した。得られた濾液
は使用するまで４℃で貯蔵した。これを、２５ｍｇ／ｋ
ｇ体重投与となるように、喫煙前に静脈注射（ｉ．
ｐ．）した。コントロール群には、カワリハラタケ熱水
抽出液を含まない上記ＰＢＳのみを投与した。
【００４７】３．肺胞マクロファージ（Ｍφ）
喫煙終了後１日目に、エーテルで麻酔死させたマウスの
主気管支に注射器で１ｍｌのＰＢＳを注入し吸引回収す
る操作を１０回行うＢＡＬ（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏ
ｌａｒ ｌａｖａｇｅ）法によってＢＡＬ液を回収し
た。次いで得られたＢＡＬ液を、１０００ｒｐｍ、１０
分間遠心分離し、得られた沈渣をＭφとして回収した。
主気管支に注射器で１ｍｌのＰＢＳを注入し吸引回収す
る操作を１０回行うＢＡＬ（Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏ
ｌａｒ ｌａｖａｇｅ）法によってＢＡＬ液を回収し
た。次いで得られたＢＡＬ液を、１０００ｒｐｍ、１０
分間遠心分離し、得られた沈渣をＭφとして回収した。
【００４８】４．肺組織における８−ＯＨｄＧ（８−Ｈ
ｙｄｒｏｘｙ ｄｅｏｘｙ ｇｕａｎｏｓｉｎｅ）の測
定 喫煙終了後１日目に、肺組織を摘出した後、定法に従っ
てパラフィン切片を作製し、ＯＡＢ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅ）色素で免疫染色を行
った。顕微鏡下で染色の強度を観察することによって８
−ＯＨｄＧ（８−Ｈｙｄｒｏｘｙ ｄｅｏｘｙ ｇｕａ
ｎｏｓｉｎｅ）の測定を行った。
ｙｄｒｏｘｙ ｄｅｏｘｙ ｇｕａｎｏｓｉｎｅ）の測
定 喫煙終了後１日目に、肺組織を摘出した後、定法に従っ
てパラフィン切片を作製し、ＯＡＢ（ｄｉｍｅｔｈｙｌ
ａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅ）色素で免疫染色を行
った。顕微鏡下で染色の強度を観察することによって８
−ＯＨｄＧ（８−Ｈｙｄｒｏｘｙ ｄｅｏｘｙ ｇｕａ
ｎｏｓｉｎｅ）の測定を行った。
【００４９】５．肺、肺胞Ｍφおよび心臓のＤＮＡ中の
８−ＯＨｄＧ タバコ煙には、ベンツピレンなどの多くの発癌物質およ
び発癌促進物質が含まれている。喫煙がヒトの肺癌の発
生と関係し、発癌に８−ＯＨｄＧが関与することが報告
されている（Ｆｌｏｙｄ、Ｒ．Ａ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅ
ｎｅｓｉｓ、１１：１４４７−１４５０、１９９０）。
８−ＯＨｄＧ タバコ煙には、ベンツピレンなどの多くの発癌物質およ
び発癌促進物質が含まれている。喫煙がヒトの肺癌の発
生と関係し、発癌に８−ＯＨｄＧが関与することが報告
されている（Ｆｌｏｙｄ、Ｒ．Ａ．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅ
ｎｅｓｉｓ、１１：１４４７−１４５０、１９９０）。
【００５０】喫煙後１日目に各組織を摘出した後、定法
に従い（Ｌｕ Ｗａｎｇらの方法）ＤＮＡ抽出し、一次
抗体として抗８−ＯＨｄＧ抗体を、そして二次抗体とし
て抗ＩｇＧ酵素標識抗体を用いるＥＬＩＳＡ法により測
定した。なお、肺胞Ｍφは、摘出した肺を気管支肺胞洗
浄することによって回収した。また、喫煙後１日目に尿
を採取し、尿についてもＥＬＩＳＡ法により８−ＯＨｄ
Ｇを測定した。
に従い（Ｌｕ Ｗａｎｇらの方法）ＤＮＡ抽出し、一次
抗体として抗８−ＯＨｄＧ抗体を、そして二次抗体とし
て抗ＩｇＧ酵素標識抗体を用いるＥＬＩＳＡ法により測
定した。なお、肺胞Ｍφは、摘出した肺を気管支肺胞洗
浄することによって回収した。また、喫煙後１日目に尿
を採取し、尿についてもＥＬＩＳＡ法により８−ＯＨｄ
Ｇを測定した。
【００５１】６．肺、肺胞Ｍφおよび心臓におけるＯ2 -
およびＨ2Ｏ2の産生 喫煙後１日目に上記３に記載したように肺胞Ｍφを回収
し、Ｈｙｄｒｏｅｔｈｉｄｉｎｅ ２．５μｇ／ｍｌお
よびＤＣＦＨ−ＤＡ（ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ）２０μｇ／ｍｌを添加し
た後、３７℃で３０分間振盪して反応させた。反応液中
のＭφを遠心分離操作により洗浄し、ＦＡＣＳｏｒｔ
（Ｂａｓｓ、Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１３９：１９１０−１９１７、１９８３）を用いて
測定した。
およびＨ2Ｏ2の産生 喫煙後１日目に上記３に記載したように肺胞Ｍφを回収
し、Ｈｙｄｒｏｅｔｈｉｄｉｎｅ ２．５μｇ／ｍｌお
よびＤＣＦＨ−ＤＡ（ｄｉｃｈｌｏｒｏｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ）２０μｇ／ｍｌを添加し
た後、３７℃で３０分間振盪して反応させた。反応液中
のＭφを遠心分離操作により洗浄し、ＦＡＣＳｏｒｔ
（Ｂａｓｓ、Ｄ．Ａ．ｅｔ ａｌ、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１３９：１９１０−１９１７、１９８３）を用いて
測定した。
【００５２】ＩＩ．結果
図１に、肺組織における免疫染色の結果を示す。図１の
上は非喫煙マウスの肺組織の免疫組織染色の結果を示す
顕微鏡写真であり、図１の下は喫煙マウスの肺組織の免
疫組織染色の結果を示す顕微鏡写真である。図１に示さ
れるように、非喫煙マウスに比較して喫煙マウスでは強
い染色が認められた。
上は非喫煙マウスの肺組織の免疫組織染色の結果を示す
顕微鏡写真であり、図１の下は喫煙マウスの肺組織の免
疫組織染色の結果を示す顕微鏡写真である。図１に示さ
れるように、非喫煙マウスに比較して喫煙マウスでは強
い染色が認められた。
【００５３】次に、各々のマウスの肺の気管支上皮を無
作為に６ヶ所（図１中四角で囲まれる部分）選び、免疫
染色の平均光学輝度をＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ
（Ｐｌａｎｅｔｒｏｎ、Ｉｎｃ．）を用いて解析した。
図２に結果を示す。図２に示されるように、非喫煙群の
平均輝度は喫煙群の平均輝度に比べて有意に高かった。
作為に６ヶ所（図１中四角で囲まれる部分）選び、免疫
染色の平均光学輝度をＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ
（Ｐｌａｎｅｔｒｏｎ、Ｉｎｃ．）を用いて解析した。
図２に結果を示す。図２に示されるように、非喫煙群の
平均輝度は喫煙群の平均輝度に比べて有意に高かった。
【００５４】図３に、肺組織ＤＮＡ中の８−ＯＨｄＧの
測定結果を示す。図３に示されるように、肺組織ＤＮＡ
中の８−ＯＨｄＧ値は、非喫煙群に比べて喫煙群で有意
な増加が認められたが、カワリハラタケ抽出物（図３中
および以下でＡｇと記載する）の投与により有意に低下
していた。
測定結果を示す。図３に示されるように、肺組織ＤＮＡ
中の８−ＯＨｄＧ値は、非喫煙群に比べて喫煙群で有意
な増加が認められたが、カワリハラタケ抽出物（図３中
および以下でＡｇと記載する）の投与により有意に低下
していた。
【００５５】図４に、肺胞ＭφにおけるＯ2 -およびＨ2
Ｏ2の測定結果を示した。図示されるように、肺胞Ｍφ
中のＯ2産生陽性細胞の比率は、非喫煙群に比べて喫煙
群で有意に高く、Ｈ2Ｏ2産生細胞は、非喫煙群に比べて
喫煙群で高い傾向が認められた。
Ｏ2の測定結果を示した。図示されるように、肺胞Ｍφ
中のＯ2産生陽性細胞の比率は、非喫煙群に比べて喫煙
群で有意に高く、Ｈ2Ｏ2産生細胞は、非喫煙群に比べて
喫煙群で高い傾向が認められた。
【００５６】図５、図６および図７に、肺胞ＭφＤＮＡ
中、心臓組織ＤＮＡ中、および尿中の８−ＯＨｄＧの測
定結果をそれぞれ示す。これらの図に示されるように、
肺胞ＭφＤＮＡ中、心臓ＤＮＡ中および尿中の８−ＯＨ
ｄＧ値は、喫煙群と非喫煙群とでは有意な差は認められ
なかったが、肺胞ＭφＤＮＡ中および尿中の８−ＯＨｄ
Ｇ値は、カワリハラタケ熱水抽出物（図５および図７中
Ａｇで示される）を投与することにより低下する傾向が
認められた。
中、心臓組織ＤＮＡ中、および尿中の８−ＯＨｄＧの測
定結果をそれぞれ示す。これらの図に示されるように、
肺胞ＭφＤＮＡ中、心臓ＤＮＡ中および尿中の８−ＯＨ
ｄＧ値は、喫煙群と非喫煙群とでは有意な差は認められ
なかったが、肺胞ＭφＤＮＡ中および尿中の８−ＯＨｄ
Ｇ値は、カワリハラタケ熱水抽出物（図５および図７中
Ａｇで示される）を投与することにより低下する傾向が
認められた。
【００５７】以上の結果から、喫煙により肺胞ＭφのＯ
2 -の産生が増加した結果、肺組織に酸化的ＤＮＡ損傷が
生じること、またカワリハラタケ抽出液の投与が喫煙に
生じる酸化的損傷を予防する効果があることが示され
た。
2 -の産生が増加した結果、肺組織に酸化的ＤＮＡ損傷が
生じること、またカワリハラタケ抽出液の投与が喫煙に
生じる酸化的損傷を予防する効果があることが示され
た。
【００５８】（実施例２）抗体産生に対するカワリハラ
タケ熱水抽出物の影響 Ｉ．材料および方法 実施例２で用いた材料および方法は以下の通りである。
タケ熱水抽出物の影響 Ｉ．材料および方法 実施例２で用いた材料および方法は以下の通りである。
【００５９】１．マウス
８−１０週齢の雌のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｊａｐａｎ
ＳＬＣ Ｉｎｃ．浜松、日本）を用いた。１２匹のマ
ウスをカワリハラタケ（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅ
ｉ Ｍｕｒｉｌｌ、以下、ＡＢＭと略して記載する）群
とコントロール群に分け、そして標準的な非精製食餌
（８．７ｇ水分、２５．２ｇ粗タンパク質、４．６ｇ粗
脂質、４．４ｇ粗繊維、６．５ｇ粗灰分、５０．７ｇＮ
ＦＥ／１００ｇ食餌：３４４．４ｋｃａｌ；Ｃｌｅａ
Ｊａｐａｎ、大阪、日本）と水とを自由摂取させ、約２
５℃に維持した部屋で飼育した。マウスは、京都産業大
学動物委員会の倫理ガイドラインに従って取り扱った。
ＳＬＣ Ｉｎｃ．浜松、日本）を用いた。１２匹のマ
ウスをカワリハラタケ（Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｌａｚｅ
ｉ Ｍｕｒｉｌｌ、以下、ＡＢＭと略して記載する）群
とコントロール群に分け、そして標準的な非精製食餌
（８．７ｇ水分、２５．２ｇ粗タンパク質、４．６ｇ粗
脂質、４．４ｇ粗繊維、６．５ｇ粗灰分、５０．７ｇＮ
ＦＥ／１００ｇ食餌：３４４．４ｋｃａｌ；Ｃｌｅａ
Ｊａｐａｎ、大阪、日本）と水とを自由摂取させ、約２
５℃に維持した部屋で飼育した。マウスは、京都産業大
学動物委員会の倫理ガイドラインに従って取り扱った。
【００６０】２．カワリハラタケ抽出物の調製
カワリハラタケ（ＡＢＭ）の熱水抽出物は、協和エンジ
ニアリング株式会社（東京、日本）から供与された。こ
れは、ＡＢＭを、Ｍｉｚｕｎｏら（上述）に記載の方法
を改変して抽出したものである。すなわち、ＡＢＭの乾
燥子実体を沸騰水で抽出し、１８００×ｇで１０分間遠
心分離し、そして凍結乾燥し、カワリハラタケ熱水抽出
物を得た。次いで、これを、Ｃａ++、Ｍｇ++フリーのＤ
ｕｌｂｅｃｃｏ緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（日水製薬
株式会社、東京、日本）中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で再
溶解し、そして０．４５μｍメンブレンフィルター（Ｍ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏ．Ｌｔｄ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍ
Ａ）で濾過した。得られた濾液は使用するまで４℃で貯
蔵した。
ニアリング株式会社（東京、日本）から供与された。こ
れは、ＡＢＭを、Ｍｉｚｕｎｏら（上述）に記載の方法
を改変して抽出したものである。すなわち、ＡＢＭの乾
燥子実体を沸騰水で抽出し、１８００×ｇで１０分間遠
心分離し、そして凍結乾燥し、カワリハラタケ熱水抽出
物を得た。次いで、これを、Ｃａ++、Ｍｇ++フリーのＤ
ｕｌｂｅｃｃｏ緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（日水製薬
株式会社、東京、日本）中に１０ｍｇ／ｍＬの濃度で再
溶解し、そして０．４５μｍメンブレンフィルター（Ｍ
ｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏ．Ｌｔｄ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、Ｍ
Ａ）で濾過した。得られた濾液は使用するまで４℃で貯
蔵した。
【００６１】３．溶血斑形成細胞（ＰＦＣ）のアッセイ
ヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）を抗原として用い、Ｎｉ
ｋｋｅｎ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｉｎｃ．（京都、日本）から得た。ＳＲＢＣは生
理食塩水で３回洗浄した。マウスには、１×１０8のＳ
ＲＢＣとＡＢＭ抽出物（２５ｍｇ／ｋｇ）とを同時に、
またはコントロールとしてＰＢＳを腹腔内注射した。４
日後マウスを屠殺し、Ｃｕｎｎｉｇｈａｍ、Ａ．Ｊ．ｅ
ｔ ａｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４：５９９−６０
０、１９６８に記載の方法に従い、脾臓を摘出し、スチ
ールメッシュ上で切り刻み、そしてガーゼの層を通過さ
せて脾臓細胞の懸濁液を得た。次いで、得られた懸濁液
について、４９０×ｇで５分間の遠心分離を２回行い、
得られたペレットを、１０ｍＬのＥａｇｌｅのＭＥＭ培
地（Ｎｉｋｋｅｎ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ．（京都、日本））に再懸濁し
た。生存細胞の計数は、トリパンブルー排除試験により
実施した。ＳＲＢＣ抗原に対するＰＦＣの数は、Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＳｚｅｎｂｅｒｇ（Ｃｕｎｎｉｎ
ｇｈａｍ ＡＪら（１９６８）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ．１４（４）：５９９−６００）の方法によって決定
した。すなわち、脾臓細胞懸濁液の１００μＬアリコー
トを、５０μＬの５０％ＳＲＢＣと２４％補体とを最終
容量５００μＬとなるように混合した。これらサンプル
の１００μＬをＣｕｎｎｉｇｈａｍ’ｓ ｃｈａｍｂｅ
ｒ（登録商標）（７６×２６ｍｍ）中３７℃で１時間イ
ンキュベートした。ＳＲＢＣの溶血斑は、コロニーカウ
ンター（積水化学株式会社、大阪、日本）により計数し
た。
ｋｋｅｎ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｉｎｃ．（京都、日本）から得た。ＳＲＢＣは生
理食塩水で３回洗浄した。マウスには、１×１０8のＳ
ＲＢＣとＡＢＭ抽出物（２５ｍｇ／ｋｇ）とを同時に、
またはコントロールとしてＰＢＳを腹腔内注射した。４
日後マウスを屠殺し、Ｃｕｎｎｉｇｈａｍ、Ａ．Ｊ．ｅ
ｔ ａｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４：５９９−６０
０、１９６８に記載の方法に従い、脾臓を摘出し、スチ
ールメッシュ上で切り刻み、そしてガーゼの層を通過さ
せて脾臓細胞の懸濁液を得た。次いで、得られた懸濁液
について、４９０×ｇで５分間の遠心分離を２回行い、
得られたペレットを、１０ｍＬのＥａｇｌｅのＭＥＭ培
地（Ｎｉｋｋｅｎ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ．（京都、日本））に再懸濁し
た。生存細胞の計数は、トリパンブルー排除試験により
実施した。ＳＲＢＣ抗原に対するＰＦＣの数は、Ｃｕｎ
ｎｉｎｇｈａｍおよびＳｚｅｎｂｅｒｇ（Ｃｕｎｎｉｎ
ｇｈａｍ ＡＪら（１９６８）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ．１４（４）：５９９−６００）の方法によって決定
した。すなわち、脾臓細胞懸濁液の１００μＬアリコー
トを、５０μＬの５０％ＳＲＢＣと２４％補体とを最終
容量５００μＬとなるように混合した。これらサンプル
の１００μＬをＣｕｎｎｉｇｈａｍ’ｓ ｃｈａｍｂｅ
ｒ（登録商標）（７６×２６ｍｍ）中３７℃で１時間イ
ンキュベートした。ＳＲＢＣの溶血斑は、コロニーカウ
ンター（積水化学株式会社、大阪、日本）により計数し
た。
【００６２】４．ＩＬ−１βおよびＩＬ−６ｍＲＮＡの
発現 ４．１．ＲＮＡの抽出 ａ）脾臓細胞 上記のＰＦＣの方法と同様に、マウスにＡＢＭ抽出物
（２５ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳを腹腔内投与した。４
日後、脾臓を摘出し、スチールメッシュ上で切り刻み、
そしてガーゼの層を通過させて脾臓細胞の懸濁液を得
た。脾臓細胞懸濁液から総細胞ＲＮＡを、酸性グアニジ
ウムチオシアネート−フェノール−クロロホルム（ＡＧ
ＰＣ）法により抽出した。 ｂ）腹膜細胞 マクロファージ培養を、１０ｍＬの冷ＰＢＳを用いた洗
浄により回収した浸出液から確立した。浸出液をプラス
チックチューブ中にプールし、そして２５０×ｇで１０
分間遠心分離した。ペレット化した浸出液中の細胞を、
ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ Ｉｎｃ．、Ｌｅｎｅｘａ、ＫＳ）を補填したＲＰ
ＭＩ（Ｎｉｋｋｅｎ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ．、京都、日本）中に再懸濁し
た。腹腔細胞のアリコート（５×１０5細胞／０．１ｍ
Ｌ／ウェル）を、９６ウェルの平底培養プレート（Ｂｅ
ｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃｏ．Ｌｔｄ、ＭＡ、
ＵＳ）中、０．１または１ｍｇ／ｍＬ ＡＢＭ抽出物と
ともにまたはなしで、５％ＣＯ2を含む湿潤化大気中３
７℃培養した。２４または４８時間後、総ＲＮＡをＡＧ
ＰＣ法を用いることにより単離した。
発現 ４．１．ＲＮＡの抽出 ａ）脾臓細胞 上記のＰＦＣの方法と同様に、マウスにＡＢＭ抽出物
（２５ｍｇ／ｋｇ）またはＰＢＳを腹腔内投与した。４
日後、脾臓を摘出し、スチールメッシュ上で切り刻み、
そしてガーゼの層を通過させて脾臓細胞の懸濁液を得
た。脾臓細胞懸濁液から総細胞ＲＮＡを、酸性グアニジ
ウムチオシアネート−フェノール−クロロホルム（ＡＧ
ＰＣ）法により抽出した。 ｂ）腹膜細胞 マクロファージ培養を、１０ｍＬの冷ＰＢＳを用いた洗
浄により回収した浸出液から確立した。浸出液をプラス
チックチューブ中にプールし、そして２５０×ｇで１０
分間遠心分離した。ペレット化した浸出液中の細胞を、
ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃ
ｅｓ Ｉｎｃ．、Ｌｅｎｅｘａ、ＫＳ）を補填したＲＰ
ＭＩ（Ｎｉｋｋｅｎ Ｂｉｏ−ｍｅｄｉｃａｌ ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｃ．、京都、日本）中に再懸濁し
た。腹腔細胞のアリコート（５×１０5細胞／０．１ｍ
Ｌ／ウェル）を、９６ウェルの平底培養プレート（Ｂｅ
ｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｃｏ．Ｌｔｄ、ＭＡ、
ＵＳ）中、０．１または１ｍｇ／ｍＬ ＡＢＭ抽出物と
ともにまたはなしで、５％ＣＯ2を含む湿潤化大気中３
７℃培養した。２４または４８時間後、総ＲＮＡをＡＧ
ＰＣ法を用いることにより単離した。
【００６３】４．２．ＲＴ−ＰＣＲ
総ＲＮＡを、ＭＬＶ逆転写酵素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎ
ｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ、ＭＤ、ＵＳ）でｃＤＮＡに転
写した。オリゴヌクレオチドプライマーは、公開され
た、ＩＬ−１β（２５０ｂｐ）、ＩＬ−６（２９０ｂ
ｐ）およびβ−アクチン（２６８ｂｐ）のｃＤＮＡ配列
から、ハウスキーピング遺伝子として構築した。次い
で、ＰＣＲを、以下のプライマー対を用い、ＩＬ−１β
に対して３０サイクル、ＩＬ−６に対して３２サイクル
実施した：β−アクチンセンス（５’−ＧＣＡＴＴＧＴ
ＴＡＣＣＡＡＣＴＧＧＧＡＣ−３’）およびβ−アクチ
ンアンチセンス（５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＴＣＣＡＴ
ＣＡＣＡＡＴ−３’）；ＩＬ−１βセンス（５’−ＡＧ
ＣＴＡＣＣＴＧＴＧＴＣＴＴＴＣＣＣＧ−３’）および
ＩＬ−１βアンチセンス（５’−ＧＴＣＧＴＴＧＣＴＴ
ＧＧＴＴＣＴＣＣＴＴ−３’）；ＩＬ−６センス（５’
−ＧＡＴＧＣＴＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＴＡＡＴＣ
−３’）およびＩＬ−６アンチセンス（５’−ＧＧＴＣ
ＣＴＴＡＧＣＣＡＣＴＧＣＴＴＣＴＧＴＧ−３’）。増
幅プロフィールは、９４℃で１分間の変性、５６℃で１
分間のプライマーアニーリング、および７２℃で１分間
の伸長から構成した。最終サイクルの後、さらに７２℃
で１０分間伸長を実施し、そして反応を４℃に冷却して
終了した。ＲＣＲ産物は、３０％ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動の後、臭化エチジウムを用いて可視化した。
ｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ、ＭＤ、ＵＳ）でｃＤＮＡに転
写した。オリゴヌクレオチドプライマーは、公開され
た、ＩＬ−１β（２５０ｂｐ）、ＩＬ−６（２９０ｂ
ｐ）およびβ−アクチン（２６８ｂｐ）のｃＤＮＡ配列
から、ハウスキーピング遺伝子として構築した。次い
で、ＰＣＲを、以下のプライマー対を用い、ＩＬ−１β
に対して３０サイクル、ＩＬ−６に対して３２サイクル
実施した：β−アクチンセンス（５’−ＧＣＡＴＴＧＴ
ＴＡＣＣＡＡＣＴＧＧＧＡＣ−３’）およびβ−アクチ
ンアンチセンス（５’−ＴＣＴＣＣＧＧＡＧＴＣＣＡＴ
ＣＡＣＡＡＴ−３’）；ＩＬ−１βセンス（５’−ＡＧ
ＣＴＡＣＣＴＧＴＧＴＣＴＴＴＣＣＣＧ−３’）および
ＩＬ−１βアンチセンス（５’−ＧＴＣＧＴＴＧＣＴＴ
ＧＧＴＴＣＴＣＣＴＴ−３’）；ＩＬ−６センス（５’
−ＧＡＴＧＣＴＡＣＣＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＴＡＡＴＣ
−３’）およびＩＬ−６アンチセンス（５’−ＧＧＴＣ
ＣＴＴＡＧＣＣＡＣＴＧＣＴＴＣＴＧＴＧ−３’）。増
幅プロフィールは、９４℃で１分間の変性、５６℃で１
分間のプライマーアニーリング、および７２℃で１分間
の伸長から構成した。最終サイクルの後、さらに７２℃
で１０分間伸長を実施し、そして反応を４℃に冷却して
終了した。ＲＣＲ産物は、３０％ポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動の後、臭化エチジウムを用いて可視化した。
【００６４】５．表面抗原の分析
脾臓細胞上の表面抗原の発現は、直接免疫蛍光法により
測定した。ＡＢＭ抽出物ありまたはなしで得た脾臓細胞
（５×１０5細胞／１００μＬ）を、最終０．５μｇの
フルオレセイン−イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−結
合またはフィコエリスリン（ＰＥ）結合ｍＡｂで、４
℃、４５分間染色した。ＦＩＴＣ−結合抗−ＣＤ３、抗
−ＣＤ４、抗−ＣＤ８、抗−ＣＤ２５、抗−ＣＤ１１ｂ
（Ｍａｃ−１）ｍＡｂ、およびＰＥ−結合抗−ＣＤ１９
ｍＡｂは、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎＩｎｃ．（Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ、ＣＡ）から得、ＦＩＴＣ−結合抗−クラスＩ
Ｉおよび抗Ｂ７−１ｍＡｂは、Ｃａｌｔａｇ Ｉｎｃ．
（Ｓａｎ ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）から得た。イン
キュベーションの後、これらの細胞を、１ｍＬのＰＢＳ
を用いて、２回、４９０×ｇで５分間遠心分離し、そし
て、１００μｇ／ｍＬのＣａＣｌ2／ＭｇＣｌ2、０．０
１％のアジ化ナトリウムおよび１％のＦＣＳを含む０．
５ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、次いでＦＡＣＳｃａｎフ
ローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏ
ｎ Ｃｏ．、ＭＡ、ＵＳ）を用いて分析した。
測定した。ＡＢＭ抽出物ありまたはなしで得た脾臓細胞
（５×１０5細胞／１００μＬ）を、最終０．５μｇの
フルオレセイン−イソチオシアネート（ＦＩＴＣ）−結
合またはフィコエリスリン（ＰＥ）結合ｍＡｂで、４
℃、４５分間染色した。ＦＩＴＣ−結合抗−ＣＤ３、抗
−ＣＤ４、抗−ＣＤ８、抗−ＣＤ２５、抗−ＣＤ１１ｂ
（Ｍａｃ−１）ｍＡｂ、およびＰＥ−結合抗−ＣＤ１９
ｍＡｂは、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎＩｎｃ．（Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ、ＣＡ）から得、ＦＩＴＣ−結合抗−クラスＩ
Ｉおよび抗Ｂ７−１ｍＡｂは、Ｃａｌｔａｇ Ｉｎｃ．
（Ｓａｎ ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）から得た。イン
キュベーションの後、これらの細胞を、１ｍＬのＰＢＳ
を用いて、２回、４９０×ｇで５分間遠心分離し、そし
て、１００μｇ／ｍＬのＣａＣｌ2／ＭｇＣｌ2、０．０
１％のアジ化ナトリウムおよび１％のＦＣＳを含む０．
５ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、次いでＦＡＣＳｃａｎフ
ローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏ
ｎ Ｃｏ．、ＭＡ、ＵＳ）を用いて分析した。
【００６５】６．統計学的分析
すべての値は平均±Ｓ．Ｄ．で表した。ＡＢＭ処理群と
コントロール群との間の比較は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−
検定で行った。０．０５より少ないｐ値を有意であると
した。
コントロール群との間の比較は、Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−
検定で行った。０．０５より少ないｐ値を有意であると
した。
【００６６】ＩＩ．結果
１．抗体産生に対するＡＢＭの影響
１０6の脾臓細胞および脾臓あたりのＰＦＣの数に対す
るＡＢＭの影響を調査した。表１に示すように、ＡＢＭ
−処置群のマウス（１．１１±０．２９×１０ 8細胞／
脾臓）とコントロール（０．９８±０．２０×１０8細
胞／脾臓）との間で脾臓細胞の数に有意な差はなかっ
た。１０6の脾臓細胞あたりのＰＦＣの数は、コントロ
ールで４２５±２８３細胞であったが、ＡＢＭ処置群の
マウスでは８９７±４４０細胞であった（図９のａ、表
１）。脾臓あたりのＰＦＣの数は、ＡＢＭ処置群のマウ
スで３．８±２．２０×１０4細胞、コントロール群で
１０．５±５．６３×１０4細胞であった（図９のｂ、
表１）。このように、ＡＢＭ抽出物は、１０6脾臓細胞
および脾臓あたりのＰＦＣの数に有意な増加をもたらし
た（ｐ＜０．０１）。
るＡＢＭの影響を調査した。表１に示すように、ＡＢＭ
−処置群のマウス（１．１１±０．２９×１０ 8細胞／
脾臓）とコントロール（０．９８±０．２０×１０8細
胞／脾臓）との間で脾臓細胞の数に有意な差はなかっ
た。１０6の脾臓細胞あたりのＰＦＣの数は、コントロ
ールで４２５±２８３細胞であったが、ＡＢＭ処置群の
マウスでは８９７±４４０細胞であった（図９のａ、表
１）。脾臓あたりのＰＦＣの数は、ＡＢＭ処置群のマウ
スで３．８±２．２０×１０4細胞、コントロール群で
１０．５±５．６３×１０4細胞であった（図９のｂ、
表１）。このように、ＡＢＭ抽出物は、１０6脾臓細胞
および脾臓あたりのＰＦＣの数に有意な増加をもたらし
た（ｐ＜０．０１）。
【００６７】
【表１】
２．脾臓細胞または腹腔マクロファージ中のＩＬ−１β
およびＩＬ−６ｍＲＮＡの発現に対するＡＢＭ抽出物の
影響 ＡＢＭ抽出物でどのようにＰＦＣが増加したのかを調査
するために、Ｂ細胞を抗体産生細胞に分化させるサイト
カインとして知られるＩＬ−１βおよびＩＬ−６のｍＲ
ＮＡ発現を調べた。脾臓中のＩＬ−１βおよびＩＬ−６
ｍＲＮＡの発現は、ＡＢＭ抽出物処置群で３および４日
目に増強された（図１０）。特に、ＩＬ−１β ｍＲＮ
Ａの発現は、４日目にＡＢＭ処置群のマウスで最も増強
された。
およびＩＬ−６ｍＲＮＡの発現に対するＡＢＭ抽出物の
影響 ＡＢＭ抽出物でどのようにＰＦＣが増加したのかを調査
するために、Ｂ細胞を抗体産生細胞に分化させるサイト
カインとして知られるＩＬ−１βおよびＩＬ−６のｍＲ
ＮＡ発現を調べた。脾臓中のＩＬ−１βおよびＩＬ−６
ｍＲＮＡの発現は、ＡＢＭ抽出物処置群で３および４日
目に増強された（図１０）。特に、ＩＬ−１β ｍＲＮ
Ａの発現は、４日目にＡＢＭ処置群のマウスで最も増強
された。
【００６８】ＡＢＭ抽出物がマクロファージを活性化し
たかどうかを調査するために、ＩＬ−１βおよびＩＬ−
６ｍＲＮＡ発現の誘導を調べた。その結果、ＡＢＭ抽出
物は、２４時間後の培養で、用量依存的にＩＬ−１βお
よびＩＬ−６ｍＲＮＡ発現の発現を強く増強したことが
わかった（図１１）。
たかどうかを調査するために、ＩＬ−１βおよびＩＬ−
６ｍＲＮＡ発現の誘導を調べた。その結果、ＡＢＭ抽出
物は、２４時間後の培養で、用量依存的にＩＬ−１βお
よびＩＬ−６ｍＲＮＡ発現の発現を強く増強したことが
わかった（図１１）。
【００６９】３．脾臓細胞中の表面抗原に対するＡＢＭ
抽出物の影響 Ｍａｃ−１、Ｂ７−１またはＣＤ２５抗原陽性細胞の割
合は、それぞれ、ＡＢＭ処置群のマウスで２５．４±
１．４、４２．０±２．０または２６．９±２．５であ
り、コントロール群のマウスで１７．０±３．６、４
２．０±２．９または１３．１±２．２であり、ＡＢＭ
処置群のマウスでコントロール群のマウスに比べ有意な
増加（それぞれ、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０１、ｐ＜
０．００１）があった。しかし、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ
８、ＣＤ１９またはクラスＩＩ抗原陽性細胞の割合は、
両群で有意な差は認められなかった（表２）。
抽出物の影響 Ｍａｃ−１、Ｂ７−１またはＣＤ２５抗原陽性細胞の割
合は、それぞれ、ＡＢＭ処置群のマウスで２５．４±
１．４、４２．０±２．０または２６．９±２．５であ
り、コントロール群のマウスで１７．０±３．６、４
２．０±２．９または１３．１±２．２であり、ＡＢＭ
処置群のマウスでコントロール群のマウスに比べ有意な
増加（それぞれ、ｐ＜０．０１、ｐ＜０．０１、ｐ＜
０．００１）があった。しかし、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ
８、ＣＤ１９またはクラスＩＩ抗原陽性細胞の割合は、
両群で有意な差は認められなかった（表２）。
【００７０】
【表２】
４．考察
ＡＢＭが抗腫瘍活性をもつことは一般に認められている
が（ＦｕｊｉｍｉｙａＹら、前述；Ｅｂｉｎａ Ｔら、
前述、Ｍｉｚｕｎｏ Ｍら、前述）、抗体産生に対する
その影響について報告した例はない。本願は、ＡＢＭ抽
出物が、免疫系に対する応答性を増強し得ることを示し
た。ＰＦＣアッセイを用い、ＡＢＭ抽出物の抗体産生に
対する影響を確認した。ＰＦＣアッセイは、体液性免疫
応答を調査する代表的な方法である（Ｃｕｎｎｉｎｇｈ
ａｍ ＡＪら、前述）。
が（ＦｕｊｉｍｉｙａＹら、前述；Ｅｂｉｎａ Ｔら、
前述、Ｍｉｚｕｎｏ Ｍら、前述）、抗体産生に対する
その影響について報告した例はない。本願は、ＡＢＭ抽
出物が、免疫系に対する応答性を増強し得ることを示し
た。ＰＦＣアッセイを用い、ＡＢＭ抽出物の抗体産生に
対する影響を確認した。ＰＦＣアッセイは、体液性免疫
応答を調査する代表的な方法である（Ｃｕｎｎｉｎｇｈ
ａｍ ＡＪら、前述）。
【００７１】ＳＲＢＣ抗原に対する脾臓中のＰＦＣの数
は、ＡＢＭ処置群のマウスでコントロール群のマウスに
比べて約３倍まで増加したが、Ｂ細胞の集団および脾臓
細胞の数に差はなかった。免疫化の後４日目のマウスの
脾臓では、Ｍａｃ−１またはＣＤ２５抗原陽性細胞の割
合は、コントロール群のマウスに比べＡＢＭ処置群のマ
ウスで有意に増加した。しかし、ＣＤ１９抗原陽性細胞
の集団は、両群のマウスで有意な差はなかった。Ｍａｃ
−１抗原は、分化した単球／マクロファージ、顆粒球お
よび活性化Ｔリンパ球上に存在し、ＣＤ２５抗原は、活
性化または分化Ｔ／Ｂリンパ球および分化単球／マクロ
ファージの細胞表面膜上にある。ＣＤ１９抗原は非活性
化Ｂリンパ球の細胞表面膜上に存在する。従って、これ
らの結果は、ＡＢＭ抽出物が主にマクロファージとＴ細
胞を刺激し、Ｂ細胞の数は増加せずにＢ細胞分化を生じ
たことを示唆した。Ｍｉｚｕｎｏら、前述、は、Ｔｈｙ
−１，２、ＣＤ４およびＣＤ８陽性細胞集団の割合が、
コントロールと比較して、ＡＢＭからの熱水可溶性画分
を経口投与したマウスで有意に増加したことを示した。
しかし、本発明者らは、ＣＤ４およびＣＤ８陽性細胞の
割合に有意な差異は見出せなかった。これらの不一致
は、ＡＢＭ抽出物の抽出方法、投与経路および濃度の違
いに起因し得る。
は、ＡＢＭ処置群のマウスでコントロール群のマウスに
比べて約３倍まで増加したが、Ｂ細胞の集団および脾臓
細胞の数に差はなかった。免疫化の後４日目のマウスの
脾臓では、Ｍａｃ−１またはＣＤ２５抗原陽性細胞の割
合は、コントロール群のマウスに比べＡＢＭ処置群のマ
ウスで有意に増加した。しかし、ＣＤ１９抗原陽性細胞
の集団は、両群のマウスで有意な差はなかった。Ｍａｃ
−１抗原は、分化した単球／マクロファージ、顆粒球お
よび活性化Ｔリンパ球上に存在し、ＣＤ２５抗原は、活
性化または分化Ｔ／Ｂリンパ球および分化単球／マクロ
ファージの細胞表面膜上にある。ＣＤ１９抗原は非活性
化Ｂリンパ球の細胞表面膜上に存在する。従って、これ
らの結果は、ＡＢＭ抽出物が主にマクロファージとＴ細
胞を刺激し、Ｂ細胞の数は増加せずにＢ細胞分化を生じ
たことを示唆した。Ｍｉｚｕｎｏら、前述、は、Ｔｈｙ
−１，２、ＣＤ４およびＣＤ８陽性細胞集団の割合が、
コントロールと比較して、ＡＢＭからの熱水可溶性画分
を経口投与したマウスで有意に増加したことを示した。
しかし、本発明者らは、ＣＤ４およびＣＤ８陽性細胞の
割合に有意な差異は見出せなかった。これらの不一致
は、ＡＢＭ抽出物の抽出方法、投与経路および濃度の違
いに起因し得る。
【００７２】Ｂ細胞の分化には、マクロファージまたは
Ｔ細胞から分泌される種々のサイトカインの相互作用が
必要である（Ｍｉｔｓｕｚｕｍｉ Ｈら、Ｊｐｎ．Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７８（２）：１６９−７９）。Ｓ
ＲＢＣ抗原に対する抗体産生は、ＩＬ−１が抗体産生の
ためのＴ細胞プライミングを活性化したため、ＩＬ−１
-/-マウスでは減少したことが報告された（Ｎａｋａｅ
Ｓら（２００１）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７
（１）、９０−７）。ＧＭ−ＣＳＦは、成熟した機能的
ＡＰＣに対して影響をもち、しかも、それは、ＩＬ−１
の分泌およびＩａ抗原の発現を増大することによりイン
ビトロで免疫系の増大した応答を生じることとが示され
た（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ＰＪら（１９８７）、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１５；１３９（４）：１１１３−１１１
９）。ＩＬ−６は、Ｂ細胞の抗体分泌細胞への末端分化
を促進し、そしてその主要な生産者は単球およびＴ細胞
であることが示された（Ｍｏｒｇａｎ ＥＬら（１９９
０）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１；１４４（７）：２４９
９−５０５）。本願は、ＡＢＭ抽出物が、腹腔マクロフ
ァージからのＩＬ−６およびＩＬ−１β ｍＲＮＡの発
現を増強したことを示した。さらに、同じ結果が、ＡＢ
Ｍ処置群のマウスからの脾臓細胞のＩＬ−１βおよびＩ
Ｌ−６ｍＲＮＡの発現においても示された。これらの結
果は、ＡＢＭ抽出物による抗体産生の増強が活性化Ｔ細
胞およびマクロファージからのＩＬ−１βおよびＩＬ−
６の産生により誘導され、Ｂ細胞分化を生じることを示
した。このように、ＡＢＭからの熱水抽出物は、免疫系
の増強および種々の疾患の予防に重要な物質であること
が示された。
Ｔ細胞から分泌される種々のサイトカインの相互作用が
必要である（Ｍｉｔｓｕｚｕｍｉ Ｈら、Ｊｐｎ．Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７８（２）：１６９−７９）。Ｓ
ＲＢＣ抗原に対する抗体産生は、ＩＬ−１が抗体産生の
ためのＴ細胞プライミングを活性化したため、ＩＬ−１
-/-マウスでは減少したことが報告された（Ｎａｋａｅ
Ｓら（２００１）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７
（１）、９０−７）。ＧＭ−ＣＳＦは、成熟した機能的
ＡＰＣに対して影響をもち、しかも、それは、ＩＬ−１
の分泌およびＩａ抗原の発現を増大することによりイン
ビトロで免疫系の増大した応答を生じることとが示され
た（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ ＰＪら（１９８７）、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１５；１３９（４）：１１１３−１１１
９）。ＩＬ−６は、Ｂ細胞の抗体分泌細胞への末端分化
を促進し、そしてその主要な生産者は単球およびＴ細胞
であることが示された（Ｍｏｒｇａｎ ＥＬら（１９９
０）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１；１４４（７）：２４９
９−５０５）。本願は、ＡＢＭ抽出物が、腹腔マクロフ
ァージからのＩＬ−６およびＩＬ−１β ｍＲＮＡの発
現を増強したことを示した。さらに、同じ結果が、ＡＢ
Ｍ処置群のマウスからの脾臓細胞のＩＬ−１βおよびＩ
Ｌ−６ｍＲＮＡの発現においても示された。これらの結
果は、ＡＢＭ抽出物による抗体産生の増強が活性化Ｔ細
胞およびマクロファージからのＩＬ−１βおよびＩＬ−
６の産生により誘導され、Ｂ細胞分化を生じることを示
した。このように、ＡＢＭからの熱水抽出物は、免疫系
の増強および種々の疾患の予防に重要な物質であること
が示された。
【００７３】５．まとめ
本発明者らは、乾燥したカワリハラタケ（ＡＢＭ）から
の熱水抽出物の免疫強化活性を調査した。抗体産生に及
ぼすＡＢＭの影響は、ヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）抗
原に対する溶血斑形成細胞（ＰＦＣ）方法により調査し
た。ＡＢＭ抽出物は、コントロールと比較して、２５ｍ
ｇ／ｋｇの腹腔内投与量で脾臓中のＰＦＣの数を顕著に
増大した。これら脾臓細胞上の表面抗原を、フローサイ
トメトリーを用いることにより分析した。コントロール
マウスと比較して、Ｍａｃ−１またはＣＤ２５が陽性の
細胞集団は顕著に増大したが、ＣＤ１９陽性細胞に差は
なかった。ＩＬ−６およびＩＬ−１βｍＲＮＡの発現
を、ＲＴ−ＰＣＲにより分析し、これらの発現は、ＡＢ
Ｍ抽出物により、腹膜マクロファージおよび脾臓細胞の
両者において増強された。これらの結果は、ＡＢＭ抽出
物が、Ｔ細胞およびマクロファージがＩＬ−１βおよび
ＩＬ−６を放出するための有効な刺激因子であって、Ｓ
ＲＢＣ抗原に対する抗体産生の増強を生じたことを示唆
する。
の熱水抽出物の免疫強化活性を調査した。抗体産生に及
ぼすＡＢＭの影響は、ヒツジ赤血球細胞（ＳＲＢＣ）抗
原に対する溶血斑形成細胞（ＰＦＣ）方法により調査し
た。ＡＢＭ抽出物は、コントロールと比較して、２５ｍ
ｇ／ｋｇの腹腔内投与量で脾臓中のＰＦＣの数を顕著に
増大した。これら脾臓細胞上の表面抗原を、フローサイ
トメトリーを用いることにより分析した。コントロール
マウスと比較して、Ｍａｃ−１またはＣＤ２５が陽性の
細胞集団は顕著に増大したが、ＣＤ１９陽性細胞に差は
なかった。ＩＬ−６およびＩＬ−１βｍＲＮＡの発現
を、ＲＴ−ＰＣＲにより分析し、これらの発現は、ＡＢ
Ｍ抽出物により、腹膜マクロファージおよび脾臓細胞の
両者において増強された。これらの結果は、ＡＢＭ抽出
物が、Ｔ細胞およびマクロファージがＩＬ−１βおよび
ＩＬ−６を放出するための有効な刺激因子であって、Ｓ
ＲＢＣ抗原に対する抗体産生の増強を生じたことを示唆
する。
【００７４】
【発明の効果】本発明によりカワリハラタケを熱水抽出
することによって、外因子によって引き起こされる生体
の損傷を防ぐ組成物およびそれを含む健康食品が提供さ
れる。
することによって、外因子によって引き起こされる生体
の損傷を防ぐ組成物およびそれを含む健康食品が提供さ
れる。
【図１】マウスの肺組織の免疫染色の結果を示す写真で
ある。
ある。
【図２】喫煙による肺組織の８−ＯＨｄＧ発現に及ぼす
影響を示す図である。
影響を示す図である。
【図３】喫煙による肺組織ＤＮＡの８−ＯＨｄＧ濃度に
及ぼす影響、および本発明の組成物の投与による効果を
示す図である。
及ぼす影響、および本発明の組成物の投与による効果を
示す図である。
【図４】喫煙による肺胞Ｍφ細胞内活性酸素産生に及ぼ
す影響を示す図である。
す影響を示す図である。
【図５】喫煙による肺胞ＭφＤＮＡの８−ＯＨｄＧ濃度
に及ぼす影響、および本発明の組成物の投与による効果
を示す図である。
に及ぼす影響、および本発明の組成物の投与による効果
を示す図である。
【図６】喫煙による心臓組織ＤＮＡの８−ＯＨｄＧ濃度
に及ぼす影響を示す図である。
に及ぼす影響を示す図である。
【図７】喫煙による尿中の８−ＯＨｄＧ濃度に及ぼす影
響、および本発明の組成物の投与による効果を示す図で
ある。
響、および本発明の組成物の投与による効果を示す図で
ある。
【図８】ＨａｍｂｕｒｇＩＩ自動喫煙装置の写真であ
る。
る。
【図９】ＰＦＣの数に対するＡＢＭ抽出物の影響を示す
図である。マウスに、１×１０ 8ＳＲＢＣおよびＡＢＭ
抽出物（２５ｍｇ／ｋｇ）、またはコントロールとして
ＰＢＳを０日目に腹腔内注射した。４日目に脾臓を回収
し、そしてＳＲＢＣ抗原に対するＰＦＣをＰＦＣアッセ
イを用いることにより計数した。ａ）は、１０6脾臓細
胞あたりＰＦＣの数を示し、ｂ）は、脾臓あたりのＰＦ
Ｃの数を示す。結果は、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝１２）で
示してある。＊＊は、コントロールと比較して統計学的
に有意であることを示す（ｐ＜０．０１）。
図である。マウスに、１×１０ 8ＳＲＢＣおよびＡＢＭ
抽出物（２５ｍｇ／ｋｇ）、またはコントロールとして
ＰＢＳを０日目に腹腔内注射した。４日目に脾臓を回収
し、そしてＳＲＢＣ抗原に対するＰＦＣをＰＦＣアッセ
イを用いることにより計数した。ａ）は、１０6脾臓細
胞あたりＰＦＣの数を示し、ｂ）は、脾臓あたりのＰＦ
Ｃの数を示す。結果は、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝１２）で
示してある。＊＊は、コントロールと比較して統計学的
に有意であることを示す（ｐ＜０．０１）。
【図１０】脾臓細胞中のＩＬ−１βおよびＩＬ−６ｍＲ
ＮＡの発現に対するＡＢＭ抽出物の影響を示す電気泳動
ゲルの写真である。マウスに、ＡＢＭ抽出物（２５ｍｇ
／ｋｇ）（＋）またはなし（−）で腹腔内注射した。３
または４日後、脾臓を回収し、そしてＡＧＰＣ法を用い
ることにより総ＲＮＡを単離した。次いで、ＲＴ−ＰＣ
Ｒを、β−アクチンに対して２６サイクル、ＩＬ−１β
に対して２９サイクル、そしてＩＬ−６に対して３２サ
イクル実施した。ＰＣＲ産物は、３０％ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動後、臭化エチジウムを用いて可視化し
た。
ＮＡの発現に対するＡＢＭ抽出物の影響を示す電気泳動
ゲルの写真である。マウスに、ＡＢＭ抽出物（２５ｍｇ
／ｋｇ）（＋）またはなし（−）で腹腔内注射した。３
または４日後、脾臓を回収し、そしてＡＧＰＣ法を用い
ることにより総ＲＮＡを単離した。次いで、ＲＴ−ＰＣ
Ｒを、β−アクチンに対して２６サイクル、ＩＬ−１β
に対して２９サイクル、そしてＩＬ−６に対して３２サ
イクル実施した。ＰＣＲ産物は、３０％ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動後、臭化エチジウムを用いて可視化し
た。
【図１１】腹膜マクロファージ中のＩＬ−１βおよびＩ
Ｌ−６ｍＲＮＡの発現に対するＡＢＭ抽出物の影響を示
す電気泳動ゲルの写真である。腹膜細胞を、０．１また
は１ｍｇ／ｍＬのＡＢＭ抽出物ありまたはなしの９６ウ
ェル平底培養プレート中に分配した（５×１０4／０．
１ｍＬ／ウェル）。細胞を、５％ＣＯ2中、３７℃で２
４または４８時間インキュベートし、そしてＡＧＰＣ法
を用いることにより総ＲＮＡを単離した。次いで、ＲＴ
−ＰＣＲを図２で上記したように実施した。ＰＣＲ産物
は、３０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、臭化エ
チジウムを用いて可視化した。
Ｌ−６ｍＲＮＡの発現に対するＡＢＭ抽出物の影響を示
す電気泳動ゲルの写真である。腹膜細胞を、０．１また
は１ｍｇ／ｍＬのＡＢＭ抽出物ありまたはなしの９６ウ
ェル平底培養プレート中に分配した（５×１０4／０．
１ｍＬ／ウェル）。細胞を、５％ＣＯ2中、３７℃で２
４または４８時間インキュベートし、そしてＡＧＰＣ法
を用いることにより総ＲＮＡを単離した。次いで、ＲＴ
−ＰＣＲを図２で上記したように実施した。ＰＣＲ産物
は、３０％ポリアクリルアミドゲル電気泳動後、臭化エ
チジウムを用いて可視化した。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
Ｆターム(参考） 4B018 MD82 ME08 MF01
4B024 AA11 CA04 HA14
4C088 AA07 BA09 MA16 MA35 MA36
MA37 MA43 MA52 NA14 ZC80
Claims (14)
- 【請求項１】 外因子から生体を防御する組成物であっ
て、カワリハラタケの熱水抽出物を含む、組成物。 - 【請求項２】 免疫担当細胞を媒介して生体を防御す
る、請求項１に記載の組成物。 - 【請求項３】 前記免疫担当細胞が、マクロファージで
ある、請求項２に記載の組成物。 - 【請求項４】 前記免疫担当細胞が、マクロファージま
たはＴ細胞である、請求項２に記載の組成物。 - 【請求項５】 前記免疫担当細胞が、抗体産生細胞であ
る、請求項２に記載の組成物。 - 【請求項６】 体液性免疫の増強によって生体を防御す
る、請求項２に記載の組成物。 - 【請求項７】 前記外因子が、喫煙によって摂取され
る、請求項１に記載の組成物。 - 【請求項８】 遺伝子損傷を低減することによって生体
を防御する、請求項７に記載の組成物。 - 【請求項９】 前記遺伝子損傷が、肺組織の酸化的ＤＮ
Ａ損傷である、請求項８に記載の組成物。 - 【請求項１０】 前記外因子が抗原物質である、請求項
１に記載の組成物。 - 【請求項１１】 前記体液性免疫の増強が、活性化Ｔ細
胞およびマクロファージからなる群から選択されるリン
パ球の活性化によって起こる、請求項６に記載の組成
物。 - 【請求項１２】 前記体液性免疫の増強が、インターロ
イキン−１βおよびインターロイキン６からなる群から
選択されるインターロイキンの発現の増強によって起こ
る、請求項１１に記載の組成物。 - 【請求項１３】 薬学的に受容可能なキャリアをさらに
包含する、請求項１に記載の組成物。 - 【請求項１４】 粉末、液体、錠剤、カプセル、ペレッ
トからなる群から選択される形態である、請求項１に記
載の組成物。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002033256A JP2003238438A (ja) | 2002-02-08 | 2002-02-08 | 外因子から生体を防御する組成物 |
| EP02790788A EP1473038A4 (en) | 2002-02-08 | 2002-12-16 | METHOD FOR PROTECTING A LIVING BODY OF EXTERNAL FACTORS, AND COMPOSITION THEREOF |
| KR10-2004-7012014A KR20040075976A (ko) | 2002-02-08 | 2002-12-16 | 외인자로부터 생체를 방어하는 방법 및 그를 위한 조성물 |
| CNA028286448A CN1633303A (zh) | 2002-02-08 | 2002-12-16 | 保护活体免受外部因子损害的方法及组合物 |
| US10/503,773 US20060182760A1 (en) | 2002-02-08 | 2002-12-16 | Method for protecting living body from external factor and composition therefor |
| PCT/JP2002/013145 WO2003066076A1 (fr) | 2002-02-08 | 2002-12-16 | Procede de protection d'un corps vivant de facteurs exterieurs, et composition associee |
| AU2002367612A AU2002367612A1 (en) | 2002-02-08 | 2002-12-16 | Method of protecting living body from foreign factor and composition therefor |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002033256A JP2003238438A (ja) | 2002-02-08 | 2002-02-08 | 外因子から生体を防御する組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003238438A true JP2003238438A (ja) | 2003-08-27 |
Family
ID=27677995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002033256A Pending JP2003238438A (ja) | 2002-02-08 | 2002-02-08 | 外因子から生体を防御する組成物 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20060182760A1 (ja) |
| EP (1) | EP1473038A4 (ja) |
| JP (1) | JP2003238438A (ja) |
| KR (1) | KR20040075976A (ja) |
| CN (1) | CN1633303A (ja) |
| AU (1) | AU2002367612A1 (ja) |
| WO (1) | WO2003066076A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005075740A (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-24 | Hajime Otani | 免疫賦活化組成物、並びにそれが含まれた医薬品、動物薬、食品、飼料及び化粧品 |
| WO2005092320A1 (ja) * | 2004-03-29 | 2005-10-06 | Ssi Co., Ltd. | 細胞を保護するための組成物 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005027952A1 (ja) * | 2003-09-17 | 2005-03-31 | Ssi Co., Ltd | 生体の免疫機構を通じて生理活性を発現する組成物 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2597953B2 (ja) * | 1991-12-10 | 1997-04-09 | 大塚製薬株式会社 | 制癌剤 |
| JP3524145B2 (ja) * | 1994-03-17 | 2004-05-10 | 均 伊藤 | エイズ症状改善用経口投与剤 |
| JPH11187844A (ja) * | 1997-12-26 | 1999-07-13 | Shingo Kikuchi | 笹類とアガリクスブラゼイの粉末又はエキス抽出物を混合した食品 |
| JP2000143530A (ja) * | 1998-09-08 | 2000-05-23 | Gogaku Reishi Honpo:Kk | 抗ガン剤、マクロフゼジ活性付与剤及び機能性食品 |
| JP2001161341A (ja) * | 1999-12-03 | 2001-06-19 | Kashio Maehara | キノコ酢（酒）並びにキノコ酢（酒）の製造方法 |
| JP2001048795A (ja) * | 2000-01-01 | 2001-02-20 | Kyokuho Yagita | 微粉末状のサメ軟骨からなる抗腫瘍効果が期待しうる経口摂取用製剤 |
| JP2001233782A (ja) * | 2000-02-25 | 2001-08-28 | Kanebo Ltd | アガリクス・ブラゼイ由来の生理活性物質の新規な用途 |
| JP2002272418A (ja) * | 2001-03-19 | 2002-09-24 | Vivo Corporation Co Ltd | 健康食品とその製法 |
-
2002
- 2002-02-08 JP JP2002033256A patent/JP2003238438A/ja active Pending
- 2002-12-16 AU AU2002367612A patent/AU2002367612A1/en not_active Abandoned
- 2002-12-16 WO PCT/JP2002/013145 patent/WO2003066076A1/ja not_active Application Discontinuation
- 2002-12-16 KR KR10-2004-7012014A patent/KR20040075976A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-12-16 CN CNA028286448A patent/CN1633303A/zh active Pending
- 2002-12-16 US US10/503,773 patent/US20060182760A1/en not_active Abandoned
- 2002-12-16 EP EP02790788A patent/EP1473038A4/en not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005075740A (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-24 | Hajime Otani | 免疫賦活化組成物、並びにそれが含まれた医薬品、動物薬、食品、飼料及び化粧品 |
| WO2005092320A1 (ja) * | 2004-03-29 | 2005-10-06 | Ssi Co., Ltd. | 細胞を保護するための組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1473038A1 (en) | 2004-11-03 |
| EP1473038A4 (en) | 2006-10-11 |
| WO2003066076A1 (fr) | 2003-08-14 |
| KR20040075976A (ko) | 2004-08-30 |
| AU2002367612A1 (en) | 2003-09-02 |
| CN1633303A (zh) | 2005-06-29 |
| US20060182760A1 (en) | 2006-08-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230203444A1 (en) | Method of culturing nk cells and kits containing medium additions | |
| US20190276803A1 (en) | Method of culturing immune cells, kit for thereof, immune cell cultured medium obtained by same method, cosmetic composition and pharmaceutical composition comprising thereof | |
| KR100842053B1 (ko) | 계피 추출물을 유효성분으로 함유하는 장내 균총 개선 및면역기능 증진용 조성물 | |
| KR20160142831A (ko) | 면역 밸런스 조정제 | |
| KR20090127974A (ko) | 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물 | |
| KR102254955B1 (ko) | 바이러스 면역치료 약물 복합체 및 이의 용도 | |
| JP2003238438A (ja) | 外因子から生体を防御する組成物 | |
| Choi et al. | Immunomodulatory effects of ethanol extract of germinated ice plant (Mesembryanthemum crystallinum) | |
| KR101257494B1 (ko) | 전복 소화 가수분해물을 함유하는 면역계 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물 | |
| Ghareeb et al. | Investigation of the Immunomodulatory effect of Berberis vulgaris on core-pulsed dendritic cell vaccine | |
| KR101331148B1 (ko) | 유동 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항바이러스용 조성물 | |
| JPH02134325A (ja) | エイズ治療剤およびその製造方法 | |
| JP2000159686A (ja) | シイタケ菌糸体抽出物由来のｌａｋ活性増強用製剤 | |
| KR100797050B1 (ko) | 아토피성 피부염에 치료효과를 갖는 ｃｄ8 ｔ 세포 | |
| JP4308350B2 (ja) | シイタケ菌糸体抽出物を含有するｌａｋ活性スクリーニング物質およびそれを用いたｌａｋ活性スクリーニング法 | |
| JP5550734B2 (ja) | シナアブラギリまたはコショウノキの抽出物、またはその分画物を有効成分として含む抗ウイルス用組成物 | |
| KR102176839B1 (ko) | 녹용 및 가시오갈피의 추출물을 포함하는 면역 증강용 조성물 및 그 제조방법 | |
| EP0600915B1 (fr) | Composition a base de buis pour le traitement de l'infection par le vih (virus de l'immunodeficience humaine) | |
| Ranaweera et al. | Increased expression of co-stimulatory molecules and enhancement of the IgG response in rats orally administered with a polyherbal formulation | |
| WO2000032212A1 (fr) | Potentialisateur de l'activite lak obtenu a partir d'un extrait d'hypes du champignon shiitake, et preparations de potentialisation de l'activite lak contenant ledit potentialisateur | |
| EP1871872B1 (en) | Method for activating cd8 t cells | |
| JP4649617B2 (ja) | 医薬およびこれに使用する抽出物 | |
| JP2004107316A (ja) | リン酸化デキストラン | |
| JPH02174718A (ja) | 免疫賦活剤 | |
| TW202409268A (zh) | 新穎乳酸菌以及含有乳酸菌之組成物、飲食品及醫藥品 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050128 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20051118 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20051118 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060127 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060127 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20070810 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20081017 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20081126 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20090317 |