KR20090127974A - 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 악성종양 치료에 적용되는 자기활성화 림프구 배양을 위한 배지 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 배지 내에 인터루킨2(IL-2) 외에 항CD3, 항CD16 및 항CD56 항체가 함께 첨가되어 NK 세포, T 세포 및 NKT 세포를 고르게 증폭 및 활성화시킴으로써, 다양한 종류의 악성종양 치료에 효능이 뛰어난 면역세포를 배양할 수 있는 배지 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물은, 세포 배양용 배지와, 상기 세포 배양용 배지에 첨가되는 첨가제로 구성되어 자기 활성화 림프구를 대량 배양하기 위한 배지 조성물에 있어서, 상기 첨가제는, 인터루킨-2(IL-2), 항CD3 항체, 항CD16 항체 및 항CD56 항체를 포함하여 구성되는 점을 특징으로 한다.
양자면역요법, 림프구, NK 세포, 배지, 악성종양, 인터루킨2(IL-2), 항CD3(anti-CD3), 항CD16(anti-CD16), 항CD56(anti-CD56)
Description
본 발명은 악성종양 치료에 적용되는 자기활성화 림프구 배양을 위한 배지 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 배지 내에 인터루킨2(IL-2) 외에 항CD3, 항CD16 및 항CD56 항체가 함께 첨가되어 NK 세포, T 세포 및 NKT 세포를 고르게 증폭 및 활성화시킴으로써, 다양한 종류의 악성종양 치료에 효능이 뛰어난 면역세포를 배양할 수 있는 배지 조성물에 관한 것이다.
최근 암 치료에 있어서 기존의 수술이나 방사선 요법, 화학요법을 대체할 수 있는 양자면역요법(adaptive immunotherapy)이라는 새로운 암 치료요법이 주목받고 있다.
양자면역요법은 자연살해세포(Natural Killer cell; NK 세포), 수지상세포(De), B 세포, T 세포 등 암 치료에 가장 중요한 면역세포를 환자의 혈액에서 추출한 후 여러 종류의 자극제를 이용하여 암에 강하게 작용하는 면역세포로 키운 뒤 다시 환자에게 주입하는 방법으로서, 환자 자신의 혈액을 사용하기 때문에 종래의 화학요법 등에 비해 부작용도 적고 투여법도 간편하여 최근 들어 활발하게 연구되 고 있다.
양자면역요법에서 활성화시키는 면역세포 중에서 특히 NK 세포는 림프구의 일종으로서, 감염된 바이러스, 종양세포를 죽이는 능력이 뛰어나고 대부분의 정상 세포는 죽이지 않는 특성을 가지고 있다. 이와 같은 NK 세포는 초기 생체방어 기구와 인체의 종양면역에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 즉, NK 세포는 MHC(Major Histocompatibility Complex)의 발현에 따른 면역 획득 과정없이도 특정자기세포, 동종세포, 심지어 이종 암세포도 살상할 수 있으며, 특히 Class1 MHC를 적게 발현하거나 발현하지 않는 표적 세포들을 더 잘 죽일 수 있다. 따라서, NK 세포는 MHC가 발현되지 않는 대부분의 암세포를 효과적으로 죽일 수 있으며, 그 외에도 몇몇 바이러스에 감염된 세포와 장티프스균(salmonella typhi)과 같은 세균들을 죽일 수 있다.
그러나, 이와 같이 암세포 살상에 탁월한 작용을 하는 NK 세포는 정상적인 사람인 경우에도 말초혈액 림프구의 5 ~ 15 % 만을 차지하고 있으며, 특히 암환자의 경우에는 그 비율이 1 % 미만으로 저하되기 때문에, 양자면역요법을 통한 별도의 증폭 과정 없이는 암세포를 효과적으로 공격하는 데에 한계가 있다.
따라서, 암치료를 위한 양자면역요법을 적용하기 위해서는 NK 세포를 비롯한 면역세포들을 환자의 암 진행 상태에 맞게 대량 배양하여 활성화시키기 위한 배지에 대한 연구가 필수적으로 요구되는데, 종래의 양자면역요법에 적용되는 면역세포 배양을 위한 배지들은 주로 면역세포 중 T 세포를 대량 증폭하는 데에 초점이 맞춰져 있다.
이러한 종래의 면역세포 배양용 배지가 한국등록특허 제0735081호(발명의 명칭:CD4 T 세포 활성화 방법)에 개시된 바 있다. 상기 CD4 T 세포 활성화 방법에서는, 혈액 등의 생물학적 시료로부터 CD4 T 세포를 분리하고, 분리된 CD4 T 세포를 GM-CSF, IFN-gamma, TNF-alpha, Lectin 및 IL-4을 포함하는 사이토카인을 첨가한 배지에서 배양하여 시험관내에서 CD4 T 세포를 활성화시킴으로써, 박테리아 감염 질환을 예방 또는 치료하는 조성물을 획득할 수 있다.
그러나, 상기 CD4 T 세포 활성화 방법에서 사용되는 배지 조성물은 면역세포 중 획득 면역에 관여하는 T 세포만을 선별적으로 활성화시키기 때문에, 이를 종양 치료에 적용하였을 경우 미리 기억된 암세포에 대해서는 대량으로 활성화된 T 세포를 통한 효과적인 공격 및 살상이 가능하나, 기억되지 않은 다양한 종류의 암세포를 공격하여 악성종양을 치료하는 데에는 한계를 가지고 있다는 문제점이 있다.
본 발명은 상기한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것이다. 즉, 본 발명의 목적은, 배지 내에 인터루킨2 외에 항CD3, 항CD16 및 항CD56 항체가 함께 첨가되어 NK 세포, T 세포 및 NKT(Natural Killer T) 세포를 고르게 증폭 및 활성화시킴으로써, 다양한 종류의 악성종양 치료에 효능이 뛰어난 면역세포를 배양할 수 있는 배지 조성물을 제공하는 데에 있다.
상기의 목적을 달성하기 위한 기술적 사상으로서의 본 발명은, 세포 배양용 배지와, 상기 세포 배양용 배지에 첨가되는 첨가제로 구성되어 자기 활성화 림프구를 대량 배양하기 위한 배지 조성물에 있어서, 상기 첨가제는, 인터루킨-2(IL-2), 항CD3 항체, 항CD16 항체 및 항CD56 항체를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물은, MHC가 발현되지 않는 대부분의 암세포에 대한 살상 기능이 뛰어난 NK 세포를 대량 활성화시킬 수 있어, 부작용이 적고 투여법이 적은 양자면역요법에 적용하여 다양한 종류의 악성종양으로 고통받는 암환자들의 예후 향상을 극대화할 수 있는 효과가 있다.
본 발명은 인간의 말초 혈액에서 유래된 림프구를 배양하여 악성종양 치료에 효과가 뛰어난 면역 세포 조성비를 가지는 자기활성화 림프구를 생성하기 위하여, 배지 내에 인터루킨2(IL-2)와, 항CD3(anti-CD3), 항CD16(anti-CD16) 및 항CD56(anti-CD56) 항체가 첨가된 배지 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 대한 구체적인 설명에 앞서, 먼저 각 면역세포의 특징과 함께, 면역세포 증폭 및 활성화에 이용되는 상기 각 첨가물들의 작용기전을 살펴보기로 한다.
NK 세포는 림프구의 일종으로 특징적인 형태인 거대과립형 림프구(LGL, Large granular lymphocytes)로서, 그 항종양 작용은 괴사(necrosis)나 세포예정사(apoptosis), 또는 이들 두 가지 작용기전이 동시에 발생하여 이루어진다. NK 세포는 IL-2, IL-12, 인터페론(Interferon) 등의 사이토카인(cytokine)에 반응하며 이에 의해 역가(cytolytic), 분비성(secretory), 증식성(proliferative) 기능이 상승한다. NK 세포의 표현형(phenotype)은 사람에 있어서 CD16(FcrRIII), CD56이고 세포표면에 TRC(T-cell receptor complex)가 없어 NK 세포에 대한 마커(marker)로 활용된다.
NK 세포의 암세포 작용기전은 일반적으로 항체의존성 세포매개형 세포독성 (Antibody-dependent cell mediated cytotoxicity; ADCC)이다. NK 세포는 면역글로불린G(IgG)의 Fc에 대한 수용체인 CD16을 발현하며, 이 수용체를 통하여 다른 형태의 MHC 비제한성 살해를 수행할 수가 있다. 즉, NK 세포의 ADCC는 표적 세포를 인식하는 항체의 존재에 의존하는데, 항체가 항원과 결합하면 항체의 Fc 부위가 노출되며, 노출된 Fc 부위가 NK 세포의 수용체와 결합하여 다리를 형성되면, 수용체 결합으로 인해 발생하는 신호전달에 의해 NK 세포로부터 세포상해물질이 방출되어 표 적 세포가 상해를 받는다.
항CD16 항체 또는 항원항체복합체의 존재하에 림프구를 배양하게 되면 NK 세포에 CD16 항원이 첨가되어 신호전달이 일어나는데, 이들의 자극에 의해서 NK 세포에 IL-2 수용체의 α 사슬 등 트랜스페린(transferrin) 수용체가 발현하거나, 또는 종양괴사인자(tumor necrosis factor; tnf)나 인터페론-γ(IFN-γ)가 생산될 수 있게 된다.
CD56 항원(Leu19/NKH1)은 분자량 180 ~ 200 kDa의 당단백질이며, NK 세포의 전부와 T 세포의 일부에 발현하고 있다. CD56 항원은 사람의 신경조직에 널리 분포하고 있는 NCAM-1(neural cell adhesion molecule-1)과 동일한 분자이다. NCAM-1은 신경이나 근조직에 있어서의 세포간 접착에 관여하는 분자로서 알려져 있다. 따라서, NK 세포에 발현되어 있는 CD56 역시 세포간접착으로서 기능을 하고 있다고 판단될 수 있다.
한편, T 세포는 세포 표면에 항원 수용체(T cell antigen receptor; TCR)를 가지는 세포를 말한다. TCR은 α사슬과 β사슬의 이합체 CD3 항원과 이형 이합체를 형성하고 있다. T세포의 일부(말초혈 T세포의 5% 전후)는 αβ가 아닌, γ사슬과 δ사슬의 이합체로 되어있다. TCR은 CD3 항원 (γ, δ, ε, ζ, ζ또는η)과 복합체를 형성하고 있는데, CD3항원은 TCR이 항원을 인식하면 그 신호를 세포 내에 전달하는 역할을 맡는다.
일반적으로 암세포에 대한 면역반응을 촉진하는 헬퍼T세포는 다양한 사이토카인을 방출해 킬러T세포, B세포 및 매크로파지 등을 활성화시키게되는데, 사이토 카인의 종류로는 세포와 세포 사이의 정보전달물질인 IL-1, IL-2, IL-3, TNF-α 및 interferon-γ 등 다양한 물질이 있다. 본 발명에서는 배양액에 IL-2를 첨가하여 킬러T세포, B세포, 매크로파지 등의 면역세포를 활성화시키게 된다.
IL-2는 T 세포가 항원을 인식하여 활성화 될 때 만들어지는 분자량 14 ~ 17 kDa의 당단백질(glycoprotein)로서, T 세포 밖으로 분비된 다음, IL-2를 생산한 T 세포 자신과 반응하여 해당 T 세포의 성장을 촉진하게 된다. IL-2는 또한 NK 세포에 작용하여 성장을 촉진하고 NK 세포의 살해능력을 강화하며, B 세포에 작용하여 그 성장을 촉진하기도 한다.
NKT 세포는 내재면역의 한 수행원으로서 비교적 근래에 그 기능들이 밝혀지고 있는 T 세포의 한 종류이다. 이름에서도 알 수 있듯이 T 세포의 수용체와 NK 세포 특이적인 세포표면마커(surface marker)를 발현하고 있다. NKT 세포의 한가지 놀라운 특징은 활성 후 IL-4, IL-10, IL-13, IFN-γ, TNF-α등과 같은 여러 사이토카인을 매우 빠른 시간 안에 분비한다는 점이다. 이러한 특징은 NKT 세포가 적응면역반응에 커다란 영향을 끼칠 수 있음을 암시한다.
따라서, 본 발명에서는 인간의 말초 혈액의 림프구로부터 NK 세포, T 세포 및 NKT 세포를 골고루 활성화시키기 위하여 IL-2와, 항CD3, 항CD16 및 항CD-56 단일항체를 배지 첨가물로 사용하였으며, 첨가물 중에서 IL-2는 T 세포와 NK 세포의 증식에, 각 단일항체는 면역세포에 CD3, CD16 및 CD56을 발현시키는 항원의 역할을 수행하게 된다.
이하, 본 발명에 따른 자기활성화 림프구 배양을 위한 배지 조성물에 대하여 상세하게 설명하기로 한다.
본 발명을 실시함에 있어서, 먼저 배양 대상이 되는 림프구를 치료 대상 환자의 말초 혈액으로부터 수확하는데, 이를 위해서는 인간의 림프구 또는 단핵구 등의 단핵세포가 1.077보다 낮은 비중을 가지는 성질을 이용하여 환자의 혈액을 1.077 비중의 Ficoll-Paque Plus용액에 중첩시켜 일정한 원심력으로 원심 침전시킴으로써, 비중의 차이에 의해 림프구가 포함된 단핵세포층을 얻고, 단핵세포층으로부터 림프구만을 수확하는 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 자기활성화 림프구 배양을 위한 배지 조성물(이하, 제1 배지 조성물이라 함)은 세포 배양용 배지와, 세포 배양용 배지에 첨가되는 각종 첨가제로 구성되는데, 39 ㎖의 세포 배양용 배지를 기준으로 하였을때, 면역세포 배양을 위한 영양분으로 작용하는 190~210mM의 L-글루타민(L-glutamine) 20~500 ㎕ 및 2~5 ㎖의 자가 유래 혈장(plasma)과 함께, 면역세포의 활성화를 위한 17×106~19×106 IU/㎖의 IL-2 20 ~ 300㎕와, 최종 배양된 면역세포(NK 세포, NKT 세포, T 세포)의 상대적인 조성비를 조절하기 위한 0.9~1.1㎎/㎖의 항CD3 항체, 항CD16 항체 및 항CD56 항체를 각각 2 ~ 30㎕씩 첨가하여 이루어진다.
이와 같은 배지 조성물을 이용하여 림프구를 배양하는 과정에서, 배양 효율을 높이기 위해 계대배양 방식을 적용하는 것이 바람직한데, 먼저 위와 같은 조성의 배지 조성물을 이용하여 3~4일간 배양한 후, 3~4일간 림프구가 배양된 배지 조 성물을 다음과 같은 조성의 배지 조성물에 혼입하여 2~3일 추가적으로 배양하는 것이 좋다.
계대배양을 위한 또다른 배지 조성물(이하, 제2 배지 조성물이라 함)은, 세포 배양용 배지에, 67 ㎖의 세포 배양용 배지를 기준으로 하였을때, 면역세포 배양을 위한 영양분으로 작용하는 190~210mM의 L-글루타민(L-glutamine) 20~500 ㎕ 및 2~5 ㎖의 자가 유래 혈장(plasma)과 함께, 면역세포의 활성화를 위한 17×106~19×106 IU/㎖의 IL-2 20 ~ 300㎕와, 최종 배양된 면역세포(NK 세포, NKT 세포, T 세포)의 상대적인 조성비를 조절하기 위한 0.9~1.1㎎/㎖의 항CD3 항체, 항CD16 항체 및 항CD56 항체를 각각 2 ~ 30㎕씩 첨가하여 이루어진다.
상기 제1 및 제2 배지 조성물에 사용된 세포 배양용 배지는 아미노산, 비타민, 유·무기 화합물, 단백질 등 세포의 성장과 생존에 필수적인 영양소를 함유한 통상적인 배지에 800 내지 1200 IU(International Unit)/㎖의 IL-2가 함유되어 있는 배지로서, 그 예로 NKB6040(NKBIO, KOREA)를 들 수 있다.
이하, 구체적인 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예1 : 림프구 세포의 세포증식배양
도 1은 본 발명에 따른 배지 조성물에 의한 배양 결과 면역 세포수 변화를 나타내는 그래프이다.
정상인과, 고형종향(solid tumor) 환자 및 백혈병(leukemia) 환자의 말초 혈액 60cc에서 수득된 각 림프구를 실험대상군으로 선정하고, 각 림프구를 39㎖의 제1 배지 조성물에서 4일간 배양하고, 배양된 세포를 포함한 제1 배지 조성물을 67㎖의 제2 배지 조성물에 혼입하여 2일간 추가 배양하였다. 또한, 세포의 대량 증식을 유도하기 위하여 추가 배양된 세포 및 제2 배지 조성물에 자가유래혈장 7㎖을 첨가하고, 10~20 IU(International Unit)/㎖의 IL-2가 함유된 세포 배양용 배지 1ℓ가 들어있는 가스투과성 배양백에 혼입시켜 8일간 배양하였다. 여기서, 각 배양 과정은 37℃의 온도 조건 하에서 CO2 배양기를 이용하여 수행되었다.
이와 같은 배양 과정을 거치면서 NK 세포, T 세포 및 NKT 세포를 포함한 전체 림프구 세포수는, 도 1에 나타난 바와 같이, 세 가지 대상 림프구 모두 배양전 2.0x106~ 4.0x107 개에서 2.0x109 개 이상으로 증식되었음을 확인하였다.
실시예2 : 배양 전후 표현형 관찰
도 2는 본 발명에 따른 배지 조성물에 의해 배양된 활성화 림프구의 표현형 변화를 나타내는 그래프로서, H1 영역은 NK 세포, H4 영역은 T 세포, H2 영역은 NKT 세포, H3 영역은 기타 면역 세포의 분포를 나타내고 있다.
정상인의 말초 혈액 60cc에서 림프구를 수득하여, 실시예1의 배양 과정을 거친 후, 배양된 활성화 림프구를 유세포 분석기(floweytometry)를 이용하여 표면 항 원을 분석한 결과를 도 2를 통해 살펴보면, 배양전에는 그래프 (a)에서와 같이 표면 항원 분포가 H4 영역에 가장 많이 분포되어 있는 반면, 배양후에는 그래프 (b)에서와 같이 H1 영역에 가장 많이 분포되어 있음을 알 수 있었으며, 실제 CD3 positive T 세포와 CD16+CD56 positive NK 세포의 비율을 계산한 결과 배양전 53.60%:12.74%에서 배양후 39.74%:69.03%로 변화된 것으로 나타났다.
상기 결과로부터 본 발명에 따른 배지 조성물을 이용하여 배양된 림프구 세포 내에서 NK 세포의 비율이 대폭 상승됨을 확인하였으며, 이와 같은 최종 배양물의 조성 변화가 각종 암세포에 대한 살해능력 향상에 미치는 영향을 평가하기 위하여 아래의 역가 분석을 수행하였다.
실시예3 : 각종 암세포에 대한 역가(cytotoxicity) 분석
림프육종(lymphosarcoma) 환자의 말초 혈액 60cc에서 림프구를 수득하여 전술한 실시예1의 배양 과정을 거쳐 활성화 림프구를 배양하였고, 표적세포(target cell)인 암세포와 효과기세포(effector cell)인 활성화 림프구의 비율을 다양하게 함께 섞어준후 6시간 후에 유산탈수효소(Lactate DeHydronase; LDH)로 반응시켜 효소면역측정법(Elisa)을 통해 역가 분석한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 특히 백혈병 세포주(leukemia cell line; K562), 림프종 세포주(human lymphoma cell line; U937), 자궁 표피양암종 세포주(human cervical epidermoid cell line; ME180)에서 활성화된 자기 활성화 림프구 세포의 암세포 살상능력이 말초혈액 단핵세포(PBMC)에 비하여 비약적으로 향상되었음을 알 수 있었다.
비교예1 : T 세포 배양용 배지 조성물과의 암세포 살상 능력 비교
림프종(lymphoma) 환자의 말초 혈액 60cc에서 림프구를 수득하여 실시예1의 배양 과정을 거쳐 NK/NKT 세포 대 T 세포 비율을 6:4로 배양시킨 활성화 림프구(NKM)와, 기존의 T 세포 배양용 배지 조성물을 이용하여 T 세포의 비율이 90 % 이상이 되도록 배양시킨 활성화 림프구(CAT)에 대하여, calcein-Am dying 방법에 의해 다양한 표적 세포들에 대한 각각의 역가를 비교 분석하였다. 여기서, T 세포 배양용 배지 조성물은 일본에서 널리 이용되는 기존의 CAT(anti CD3 Antibody-activity T cells) 요법에 따라 제조된 것으로서, 항 CD3항체와 IL-2 등이 첨가된 배양액이 사용되었으며, 표적 세포로는 위암 세포주(AGS, NCI-N87), 유방암 세포주(MCF-7, MDA-MB-231), 간암 세포주(SK-HEP-1, HepG2), 백혈병 세포주(K562)가 사용되었다.
도 4에 나타난 바와 같이, AGS를 제외한 대부분의 암세포주에 대해 본 발명에 따른 배지 조성물에 의해 배양된 활성화 림프구의 역가가 T 세포 배양용 배지 조성물에 의해 배양된 활성화 림프구의 경우에 비하여 6~34 % 증가하였음을 확인할 수 있었다.
이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능하다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식 을 가진 자에게 있어 명백하다 할 것이다.
도 1은 본 발명에 따른 배지 조성물에 의한 배양 결과 면역 세포수 변화를 나타내는 그래프.
도 2는 본 발명에 따른 배지 조성물에 의해 배양된 활성화 림프구의 표현형 변화를 나타내는 그래프.
도 3은 본 발명에 따른 배지 조성물에 의해 배양된 활성화 림프구에 대한 역가 분석 결과를 나타내는 그래프.
도 4는 본 발명에 따른 배지 조성물과 기존의 T 세포 배양용 배지 조성물에 의해 각각 배양된 활성화 림프구의 암세포 살상능력을 비교하기 위한 그래프.
Claims (6)
- 세포 배양용 배지와, 상기 세포 배양용 배지에 첨가되는 첨가제로 구성되어 자기 활성화 림프구를 대량 배양하기 위한 배지 조성물에 있어서,상기 첨가제는,인터루킨-2(IL-2), 항CD3 항체, 항CD16 항체 및 항CD56 항체를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물.
- 제 1항에 있어서,상기 세포 배양용 배지에는,800 내지 1200 IU(International Unit)/㎖의 IL-2가 함유된 것을 특징으로 하는 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물.
- 제 1항에 있어서,상기 세포 배양용 배지에 첨가되는 첨가제는,상기 세포 배양용 배지 39 ㎖를 기준으로 하였을때,17×106 내지 19×106 IU/㎖의 IL-2 20 ~ 300㎕와, 0.9 내지 1.1 ㎎/㎖의 항CD3 항체 2 ~ 30㎕와, 0.9 내지 1.1 ㎎/㎖의 항CD16 항체 2 ~ 30㎕ 및 0.9 내지 1.1 ㎎/㎖의 항CD56 항체 2 ~ 30㎕로 구성되는 것을 특징으로 하는 자기활성화 림 프구 배양용 배지 조성물.
- 제 3항에 있어서,상기 첨가제에는,상기 세포 배양용 배지 39 ㎖를 기준으로 하였을때,190 내지 210mM의 L-글루타민(L-glutamine) 20~500 ㎕ 및 2 내지 5 ㎖의 자가 유래 혈장(plasma)이 더 포함되는 것을 특징으로 하는 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물.
- 제 1항에 있어서,상기 세포 배양용 배지에 첨가되는 첨가제는,상기 세포 배양용 배지 67 ㎖를 기준으로 하였을때,17×106 내지 19×106 IU/㎖의 IL-2 20 ~ 300㎕와, 0.9 내지 1.1 ㎎/㎖의 항CD3 항체 2 ~ 30㎕와, 0.9 내지 1.1 ㎎/㎖의 항CD16 항체 2 ~ 30㎕ 및 0.9 내지 1.1 ㎎/㎖의 항CD56 항체 2 ~ 30㎕로 구성되는 것을 특징으로 하는 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물.
- 제 5항에 있어서,상기 첨가제에는,상기 세포 배양용 배지 67 ㎖를 기준으로 하였을때,190 내지 210mM의 L-글루타민(L-glutamine) 20~500 ㎕ 및 2 내지 5 ㎖의 자가 유래 혈장(plasma)이 더 포함되는 것을 특징으로 하는 자기활성화 림프구 배양용 배지 조성물.
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