JP2000316567A - ラクトバチルス属の増殖用培地 - Google Patents
ラクトバチルス属の増殖用培地Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明の課題は、種々の異なるラクトバチル
ス属の、好ましくはジョンソングループＡおよびＢの増
殖に適応し、かつ異臭の発生等の技術的な問題のない、
新規の培地を供することである。 【課題を解決する手段】 少なくとも４つのアミノ酸、
リボヌクレオシドおよび鉄の、ラクトバチルス属の増殖
を促進するのに充分な量を補足した、乳由来の基体を含
む培地を供する。
ス属の、好ましくはジョンソングループＡおよびＢの増
殖に適応し、かつ異臭の発生等の技術的な問題のない、
新規の培地を供することである。 【課題を解決する手段】 少なくとも４つのアミノ酸、
リボヌクレオシドおよび鉄の、ラクトバチルス属の増殖
を促進するのに充分な量を補足した、乳由来の基体を含
む培地を供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は少なくとも４つのア
ミノ酸、リボヌクレオシドおよび鉄を補足した乳由来の
基体を含む、ラクトバチルス属の増殖に適応した新規培
地に関する。特に本発明は、乳製品の製造用の種々の異
なるラクトバチルス属菌株、例えば、 L.ジョンソニ
ィ、 L. アシドフィラス、 L. ガリナラムを培養するた
めの新規培地の使用に関する。
ミノ酸、リボヌクレオシドおよび鉄を補足した乳由来の
基体を含む、ラクトバチルス属の増殖に適応した新規培
地に関する。特に本発明は、乳製品の製造用の種々の異
なるラクトバチルス属菌株、例えば、 L.ジョンソニ
ィ、 L. アシドフィラス、 L. ガリナラムを培養するた
めの新規培地の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】乳酸菌は、以前からヨーグルト、チー
ズ、カード等の種々の食品材料の製造に使用されてき
た。食品工業における発酵目的のための一般的使用以外
に、つい最近ラクトバチルス属又はビフィドバクテリア
属に属するある種の菌株は、それらに起因するプロバイ
オティック特性により、多くの注目を引いている。従っ
て、微生物量の生産を最大にすることができるように、
培養条件を改善する要求があった。
ズ、カード等の種々の食品材料の製造に使用されてき
た。食品工業における発酵目的のための一般的使用以外
に、つい最近ラクトバチルス属又はビフィドバクテリア
属に属するある種の菌株は、それらに起因するプロバイ
オティック特性により、多くの注目を引いている。従っ
て、微生物量の生産を最大にすることができるように、
培養条件を改善する要求があった。
【０００３】それらの大規模な生産およびそれらの適用
性に関する乳酸菌の一つの欠陥は、それらの栄養要求が
異なることである。この関係で、ある特定の属又は種に
属する異なる菌株は、最適の増殖のために異なる培地を
必要とし、そのことは微生物量の標準的な生産を複雑化
し、かつ厄介なものにしている。そのように、ラクトバ
チルス属の異なる菌株の微生物量を生産する際に、種々
の異なる培地を利用せねばならず、その各々は特定の菌
株の栄養要求を満たすものであるが、その中の他のラク
トバチルス菌株の充分な増殖を供するものではない。
性に関する乳酸菌の一つの欠陥は、それらの栄養要求が
異なることである。この関係で、ある特定の属又は種に
属する異なる菌株は、最適の増殖のために異なる培地を
必要とし、そのことは微生物量の標準的な生産を複雑化
し、かつ厄介なものにしている。そのように、ラクトバ
チルス属の異なる菌株の微生物量を生産する際に、種々
の異なる培地を利用せねばならず、その各々は特定の菌
株の栄養要求を満たすものであるが、その中の他のラク
トバチルス菌株の充分な増殖を供するものではない。
【０００４】乳酸菌株を培養するのにしばしば利用され
る培地は牛乳である。一方、この培地は複雑な自然の環
境を供し、かつその発酵生成物、例えばヨーグルトは直
接食品材料として使用することができる。しかし、この
培地は限定された数の菌株の乳酸菌の増殖を支持するだ
けであることが証明された。例えば、ジョンソングルー
プＡおよびＢのラクトバチルス属は本質的に乳の中で増
殖し、かつ培養することができず、乳は前記の菌株の培
地として役に立たないことを示した。
る培地は牛乳である。一方、この培地は複雑な自然の環
境を供し、かつその発酵生成物、例えばヨーグルトは直
接食品材料として使用することができる。しかし、この
培地は限定された数の菌株の乳酸菌の増殖を支持するだ
けであることが証明された。例えば、ジョンソングルー
プＡおよびＢのラクトバチルス属は本質的に乳の中で増
殖し、かつ培養することができず、乳は前記の菌株の培
地として役に立たないことを示した。
【０００５】ある場合には、酵母抽出物又は種々の起源
のペプトンのような不確定で非常に複雑な組成の物質を
乳に加えた時に細菌の増殖は改善できた。しかし、これ
らの付加的成分はしばしば異臭を生じ、その結果、その
ような方法で補足した培地中で増殖する培養物は乳製品
の工業的製造に使用できない。さらに、そのような方法
は費用がかかり、かつ繰り返した場合に達成される細菌
の計測数の結果が変化することが、微生物の菌株の商業
的製造を不適切にする。
のペプトンのような不確定で非常に複雑な組成の物質を
乳に加えた時に細菌の増殖は改善できた。しかし、これ
らの付加的成分はしばしば異臭を生じ、その結果、その
ような方法で補足した培地中で増殖する培養物は乳製品
の工業的製造に使用できない。さらに、そのような方法
は費用がかかり、かつ繰り返した場合に達成される細菌
の計測数の結果が変化することが、微生物の菌株の商業
的製造を不適切にする。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】この点を考慮して、本
発明の問題点は、ラクトバチルス菌株の増殖を支持する
と共に、従来技術の欠陥のない、培地を供することであ
る。
発明の問題点は、ラクトバチルス菌株の増殖を支持する
と共に、従来技術の欠陥のない、培地を供することであ
る。
【０００７】
【課題を解決する手段】この問題は、少なくとも４つの
アミノ酸、リボヌクレオシドおよび鉄を補足した乳由来
の基体を含む、ラクトバチルス属菌株の増殖用の培地を
供することにより解決された。
アミノ酸、リボヌクレオシドおよび鉄を補足した乳由来
の基体を含む、ラクトバチルス属菌株の増殖用の培地を
供することにより解決された。
【０００８】好ましい実施態様によれば、培地に加える
べきリボヌクレオチド前駆物質（即ち遊離塩基、リボヌ
クレオシド、デオキシリボヌクレオシド）の量は、各培
地１ｌ当たり約 10 から約 5000 mg 、好ましくは約 10
から約 100 mg の範囲である。
べきリボヌクレオチド前駆物質（即ち遊離塩基、リボヌ
クレオシド、デオキシリボヌクレオシド）の量は、各培
地１ｌ当たり約 10 から約 5000 mg 、好ましくは約 10
から約 100 mg の範囲である。
【０００９】さらに他の好ましい実施態様によれば、１
ｌの乳当たり約 50 から 100 mgの量の鉄を培地に、加
える。
ｌの乳当たり約 50 から 100 mgの量の鉄を培地に、加
える。
【００１０】さらに、培地は、当業者が入手可能な現存
のアミノ酸である、少なくとも４つのアミノ酸により補
足される。乳の基体に加えるアミノ酸の量は、１ l の
乳当たり約 10 から約 200 mg の範囲、好ましくは約 5
0 から 100 mg の範囲である。さらに、好ましい実施態
様によれば、アミノ酸はシステイン、アラニン、セリン
およびイソロイシンからなる群から選択され、それらの
アミノ酸は特にラクトバチルス属の増殖条件を改善する
ことが分かった。
のアミノ酸である、少なくとも４つのアミノ酸により補
足される。乳の基体に加えるアミノ酸の量は、１ l の
乳当たり約 10 から約 200 mg の範囲、好ましくは約 5
0 から 100 mg の範囲である。さらに、好ましい実施態
様によれば、アミノ酸はシステイン、アラニン、セリン
およびイソロイシンからなる群から選択され、それらの
アミノ酸は特にラクトバチルス属の増殖条件を改善する
ことが分かった。
【００１１】さらに他の好ましい実施態様によれば、培
地は、アスコルビン酸、ビタミンＥ、トコトリエノー
ル、ユビキノール、β−カロテンおよび他のカロチノイ
ド、ロスマリン化合物（例えばカルノソール）および他
のフラボノイドのような還元活性を供する化合物、およ
びグルタチオン、リポ酸、N-アセチルシステインを包含
する他の含硫抗酸化剤、又はスルフヒドリル基、システ
イン又はチオグリコール酸を有する化合物、又はそれら
の混合物を補足することもできる。アミノ酸のその使用
に関しては、そのような還元活性を供する化合物として
システインが好ましい。
地は、アスコルビン酸、ビタミンＥ、トコトリエノー
ル、ユビキノール、β−カロテンおよび他のカロチノイ
ド、ロスマリン化合物（例えばカルノソール）および他
のフラボノイドのような還元活性を供する化合物、およ
びグルタチオン、リポ酸、N-アセチルシステインを包含
する他の含硫抗酸化剤、又はスルフヒドリル基、システ
イン又はチオグリコール酸を有する化合物、又はそれら
の混合物を補足することもできる。アミノ酸のその使用
に関しては、そのような還元活性を供する化合物として
システインが好ましい。
【００１２】培地に含まれる乳由来の基体は、全脂肪乳
又は部分的に脱脂した乳、脱脂乳又はＵＨＴ乳のような
全ての乳の変形であることができ、又は乾燥した粉乳か
ら水の添加により調製することができる。液状乳の基体
はそのようなものを使用することができ、又は例えば水
のような他のよく知られている成分を、乳を望ましい程
度に希釈するために加えることができる。
又は部分的に脱脂した乳、脱脂乳又はＵＨＴ乳のような
全ての乳の変形であることができ、又は乾燥した粉乳か
ら水の添加により調製することができる。液状乳の基体
はそのようなものを使用することができ、又は例えば水
のような他のよく知られている成分を、乳を望ましい程
度に希釈するために加えることができる。
【００１３】図について、図１は、 L. ジョンソニィ L
al (ＮＣＣ 533) を１％の酵母抽出液および４つのリボ
ヌクレオシド、４つのアミノ酸と硫酸第１鉄の混合物を
補足した 10 ％の脱脂および全脂のＵＨＴ乳の中で 24
時間培養後に得たラビット（ＲＡＢＩＴ）曲線間の比較
を示す。 (1) 全脂ＵＨＴ乳＋４つのリボヌクレオシド＋４つのア
ミノ酸； (2) 全脂ＵＨＴ乳＋酵母抽出液； (3) 脱脂
乳＋酵母抽出液； (4) 脱脂乳＋４つのリボヌクレオシ
ド＋４つのアミノ酸＋硫酸第１鉄； (5) 脱脂乳＋アデ
ノシンおよびグアノシン＋４つのアミノ酸＋硫酸第１
鉄。
al (ＮＣＣ 533) を１％の酵母抽出液および４つのリボ
ヌクレオシド、４つのアミノ酸と硫酸第１鉄の混合物を
補足した 10 ％の脱脂および全脂のＵＨＴ乳の中で 24
時間培養後に得たラビット（ＲＡＢＩＴ）曲線間の比較
を示す。 (1) 全脂ＵＨＴ乳＋４つのリボヌクレオシド＋４つのア
ミノ酸； (2) 全脂ＵＨＴ乳＋酵母抽出液； (3) 脱脂
乳＋酵母抽出液； (4) 脱脂乳＋４つのリボヌクレオシ
ド＋４つのアミノ酸＋硫酸第１鉄； (5) 脱脂乳＋アデ
ノシンおよびグアノシン＋４つのアミノ酸＋硫酸第１
鉄。
【００１４】図２は、 L. ガリナラム ＤＳＭ 33199T
の成長における、４つのリボヌクレオシド、４つのアミ
ノ酸および硫酸第１鉄を有する 10 ％脱脂および全脂Ｕ
ＨＴ乳の補足の影響を示す。 (1) 10 ％の脱脂乳；
(2) 10 ％の脱脂乳＋４つのアミノ酸＋４つのリボヌク
レオシド＋硫酸第１鉄； (3) 全脂ＵＨＴ乳； (4) 全
脂ＵＨＴ乳＋４つのアミノ酸＋４つのリボヌクレオシド
＋硫酸第１鉄。
の成長における、４つのリボヌクレオシド、４つのアミ
ノ酸および硫酸第１鉄を有する 10 ％脱脂および全脂Ｕ
ＨＴ乳の補足の影響を示す。 (1) 10 ％の脱脂乳；
(2) 10 ％の脱脂乳＋４つのアミノ酸＋４つのリボヌク
レオシド＋硫酸第１鉄； (3) 全脂ＵＨＴ乳； (4) 全
脂ＵＨＴ乳＋４つのアミノ酸＋４つのリボヌクレオシド
＋硫酸第１鉄。
【００１５】本発明に導かれる広範な研究の間に、種々
のパラメーターが乳を基体とした培地にてラクトバチル
ス属の増殖の原因となると思われることが分かった。
のパラメーターが乳を基体とした培地にてラクトバチル
ス属の増殖の原因となると思われることが分かった。
【００１６】牛乳は特異含量のリボヌクレオシドを有す
ることは知られているが、生産の季節および国により変
化する。プリン誘導体はほんの少量あるが、乳中のリボ
ヌクレオシドの約 95 ％以上はオロチン酸であり、それ
は細菌の細胞によりピリミジン前駆物質として使用され
る。乳中の低含量のアデニンおよびグアニン・ヌクレオ
チドは、 L. カゼイおよび L. プランタラムのようなＤ
ＮＡおよびＲＮＡ前駆物質の「新たな」合成を行うこと
ができる、ある菌株の条件付きで細菌の増殖に否定的に
影響する。しかし、プリン誘導体を乳に加えた時、ある
場合には抑制的な影響さえ観察された。
ることは知られているが、生産の季節および国により変
化する。プリン誘導体はほんの少量あるが、乳中のリボ
ヌクレオシドの約 95 ％以上はオロチン酸であり、それ
は細菌の細胞によりピリミジン前駆物質として使用され
る。乳中の低含量のアデニンおよびグアニン・ヌクレオ
チドは、 L. カゼイおよび L. プランタラムのようなＤ
ＮＡおよびＲＮＡ前駆物質の「新たな」合成を行うこと
ができる、ある菌株の条件付きで細菌の増殖に否定的に
影響する。しかし、プリン誘導体を乳に加えた時、ある
場合には抑制的な影響さえ観察された。
【００１７】L. ジョンソニィ、 L. ガセリィ、 L. ク
リスパトス、 L. アミロボラス、 L.ガリィナラムおよ
び L. アシドフィラスのようなあるラクトバシルス菌株
は乳中で高濃度で再生できないので、異なる化学物質の
組合せが研究され、不確定な組成の成長刺激性物質に置
換できることが仮説としてとりあげられる。
リスパトス、 L. アミロボラス、 L.ガリィナラムおよ
び L. アシドフィラスのようなあるラクトバシルス菌株
は乳中で高濃度で再生できないので、異なる化学物質の
組合せが研究され、不確定な組成の成長刺激性物質に置
換できることが仮説としてとりあげられる。
【００１８】他の推定される刺激性物質の同一性を見つ
けるため、数度の試験をリボヌクレオチド前駆体、即
ち、遊離塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミ
ン、ウラシル）、リボヌクレオシド（アデノシン、シチ
ジン、ウリジン、グアノシン）および 2' −デオキシリ
ボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノ
シン、デオキシシチジン、デオキシウリジンおよびチミ
ジン）で行った。それらは、各種濃度で濃縮したアルカ
リ性又は中性溶液として乳に補足した。
けるため、数度の試験をリボヌクレオチド前駆体、即
ち、遊離塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミ
ン、ウラシル）、リボヌクレオシド（アデノシン、シチ
ジン、ウリジン、グアノシン）および 2' −デオキシリ
ボヌクレオシド（デオキシアデノシン、デオキシグアノ
シン、デオキシシチジン、デオキシウリジンおよびチミ
ジン）で行った。それらは、各種濃度で濃縮したアルカ
リ性又は中性溶液として乳に補足した。
【００１９】リボヌクレオシドを添加することにより、
最も強力な効果を示すアデノシンおよびグアノシンで
は、乳中の、ラクトバチルス属の増殖条件を改善する。
この知見は、乳中の低濃度のプリンは、乳中の細菌の増
殖に明らかに否定的な影響をおよぼすとの仮説を確認し
た。一般に、高含量のオロチン酸は、ラクトバチルス属
の増殖のために刺激的因子を示し、ピリミジン塩基を合
成させることが分かった。好気性および嫌気性条件で遊
離塩基およびデオキシリボヌクレオシドの添加により、
pH 値の重大な差は、検出されなかった。特に嫌気性の
環境におけるリボヌクレオシドに関する、正の影響を示
す、細菌の増殖の１対数以上の改善が観察された。
最も強力な効果を示すアデノシンおよびグアノシンで
は、乳中の、ラクトバチルス属の増殖条件を改善する。
この知見は、乳中の低濃度のプリンは、乳中の細菌の増
殖に明らかに否定的な影響をおよぼすとの仮説を確認し
た。一般に、高含量のオロチン酸は、ラクトバチルス属
の増殖のために刺激的因子を示し、ピリミジン塩基を合
成させることが分かった。好気性および嫌気性条件で遊
離塩基およびデオキシリボヌクレオシドの添加により、
pH 値の重大な差は、検出されなかった。特に嫌気性の
環境におけるリボヌクレオシドに関する、正の影響を示
す、細菌の増殖の１対数以上の改善が観察された。
【００２０】リボヌクレオシドおよび最強の酸性濃度を
それぞれ添加してラクトバチルス属の数を増加するため
の最良の改善はアデノシン、グアノシン、および／又は
シチジンおよびウリジンの、各 0.1 g／l の量の添加に
より達成された。この混合物はそれだけで酵母抽出物の
添加により達成される能力に匹敵する濃度、 L. ジョン
ソニィ、 L. アシドフィラスおよび L. ガリナラムの増
殖を支持する能力を、示すけれども（図１，２および表
３参照）、 L. アミロボルス、 L. クリスパトスおよび
L. ガセリィ由来の他のラクトバチルス菌株では、著し
い明白な効果が観察されなかった。
それぞれ添加してラクトバチルス属の数を増加するため
の最良の改善はアデノシン、グアノシン、および／又は
シチジンおよびウリジンの、各 0.1 g／l の量の添加に
より達成された。この混合物はそれだけで酵母抽出物の
添加により達成される能力に匹敵する濃度、 L. ジョン
ソニィ、 L. アシドフィラスおよび L. ガリナラムの増
殖を支持する能力を、示すけれども（図１，２および表
３参照）、 L. アミロボルス、 L. クリスパトスおよび
L. ガセリィ由来の他のラクトバチルス菌株では、著し
い明白な効果が観察されなかった。
【００２１】補足物としてリボヌクレオシドの代わり
に、乳に遊離塩基（アデニン、シトシン、ウラシル、チ
ミンおよびグアニン）を添加した場合、同様な結果が得
られた。しかしその場合、菌株はマグネシウムおよびア
スパラギン酸に対する要求を示す傾向があった。
に、乳に遊離塩基（アデニン、シトシン、ウラシル、チ
ミンおよびグアニン）を添加した場合、同様な結果が得
られた。しかしその場合、菌株はマグネシウムおよびア
スパラギン酸に対する要求を示す傾向があった。
【００２２】さらに、数度の試験を、異なる2'−デオキ
シヌクレオシドを乳に補足することにより行った。それ
は単にある特定な菌株の生存可能な細胞数の増加をもた
らした。
シヌクレオシドを乳に補足することにより行った。それ
は単にある特定な菌株の生存可能な細胞数の増加をもた
らした。
【００２３】単独で乳に加えた場合、上記の化学物質の
どれも多数の異なる菌株の増殖を高水準で支持できなか
ったという上記の知見にもかかわらず、驚くべきこと
に、アミノ酸、リボヌクレオシドおよび鉄（例えば硫酸
鉄の形態で）からなる組合わせは、異なるラクトバチル
ス種の増殖を実際に促進することが分かった。上記の組
合せ混合物の中の異なる化合物の数を最低限度に減じた
実験において、乳に加えることを指定された各化合物の
最小数は、少なくとも２つのリボヌクレオシド、好まし
くはアデノシンおよびグアノシン、４つのアミノ酸およ
び鉄であることが分った。この混合物は、ジョンソング
ループの菌株のような種々の異なるラクトバシルス菌株
の増殖を、酵母抽出物又はペプトンを乳に添加すること
によって得られるものに匹敵する細胞数および最終の p
H について改善することができた。
どれも多数の異なる菌株の増殖を高水準で支持できなか
ったという上記の知見にもかかわらず、驚くべきこと
に、アミノ酸、リボヌクレオシドおよび鉄（例えば硫酸
鉄の形態で）からなる組合わせは、異なるラクトバチル
ス種の増殖を実際に促進することが分かった。上記の組
合せ混合物の中の異なる化合物の数を最低限度に減じた
実験において、乳に加えることを指定された各化合物の
最小数は、少なくとも２つのリボヌクレオシド、好まし
くはアデノシンおよびグアノシン、４つのアミノ酸およ
び鉄であることが分った。この混合物は、ジョンソング
ループの菌株のような種々の異なるラクトバシルス菌株
の増殖を、酵母抽出物又はペプトンを乳に添加すること
によって得られるものに匹敵する細胞数および最終の p
H について改善することができた。
【００２４】さらに、上記の化学物質の組合せを補足し
た培地からなる混合物に鉄を加えることは、得た結果を
改善することが分かった。この知見は、乳はその豊富な
組成にもかかわらず、ラクトフェリンとして複合されて
いる鉄に強い欠陥があるから、その中で増殖するどの微
生物に利用できないと説明することができる。
た培地からなる混合物に鉄を加えることは、得た結果を
改善することが分かった。この知見は、乳はその豊富な
組成にもかかわらず、ラクトフェリンとして複合されて
いる鉄に強い欠陥があるから、その中で増殖するどの微
生物に利用できないと説明することができる。
【００２５】従って、最良の結果は、アデノシン、グア
ノシン、および／又はシチジンおよびウリジンを各 0.1
g／l の量で、アラニン、セリン、イソロイシン、シス
テイン (各 0.05 g／l) および FeSO4 (0.1 g／l) の添
加により得られた。
ノシン、および／又はシチジンおよびウリジンを各 0.1
g／l の量で、アラニン、セリン、イソロイシン、シス
テイン (各 0.05 g／l) および FeSO4 (0.1 g／l) の添
加により得られた。
【００２６】脱脂および全脂の両者のＵＨＴ乳は、上記
の化合物の組合せを補足した時、最上の結果を得ると言
う事実は、乳の脂肪成分がラクトバチルスの成長を刺激
する役割を有しないと同様に、殺菌処理（ＵＨＴ）が乳
の細菌の成長を支持する可能性に否定的に影響しない、
と言う仮定に導いた。
の化合物の組合せを補足した時、最上の結果を得ると言
う事実は、乳の脂肪成分がラクトバチルスの成長を刺激
する役割を有しないと同様に、殺菌処理（ＵＨＴ）が乳
の細菌の成長を支持する可能性に否定的に影響しない、
と言う仮定に導いた。
【００２７】
【発明の実施形態】次の例は限定されることなく、本発
明を具体的に説明する。 例細菌菌株および培養条件 L. ジョンソニィ菌株 ＡＴＣＣ 33200T ， Lal (ＮＣ
Ｃ 533) , ＡＴＣＣ11506（以前は L. アシドフィラス
Ｒ−26として知られていた），ＡＴＣＣ 332, ＤＳＭ20
553, , L. アシドフィラス ＡＴＣＣ 4356T , La 1
0 (ＮＣＣ 90) , L. ガセリィＤＳＭ 20243T , L. ク
リスパトス ＤＳＭ 20531T , L. アミロボラス ＤＳ
Ｍ 20584T および L. ガリィナラム ＤＳＭ 33199T
を、ＭＲＳ (Difco) ブロス又は寒天の中で、37℃で増
殖した。滅菌水中の脱脂乳 (Difco) 10％ W／V および
全脂ＵＨＴ乳（パルマラート，イタリア）を使って、増
殖検定を行った。栄養分が培地を経て移行するのを避け
るため、２度洗浄し、最後に同量の無菌蒸留水で再度懸
濁した１昼夜ＭＲＳ培地の１％を、ミルクチューブに摂
取した。培養パラメーター ミルクチューブは、好気的にサーモスタット (Sorvall
Heraeus) の中で 37℃で 24 時間、および嫌気性イン
キュベーター (モデル 1024，フォーマ・サイエンティ
フィック，米国) の中で嫌気的に 37 ℃で 24 時間培養
をした。乳の補足 乳に補足する化学物質は、メルク・インデックス社によ
り調製された濃縮溶液として加えた。乳の最終 pH は、
補足後、４Ｎの NaOH を使用して 6.8 に調節した。10
％の脱脂乳溶液および全脂ＵＨＴ乳の最終 pH は、それ
ぞれ 6.8 および 6.7 であった。細菌増殖の評価 増殖の結果は、細胞の計測数により評価し、そして最終
pH の測定は、 37 ℃で 24 時間の培養後行った。細菌
インピーデンス技術の急速分析 (ＲＡＢＩＴ) (ドン・
ホイットリィ・サイエンティフィック社、ウエスト・ヨ
ークシャ、英国) を使って、脱脂および全脂ＵＨＴ乳
で、 37 ℃で 24 時間の試験を行った。L. ジョンソニ
ィＡＴＣＣ 33200および L. ジョンソニィ Lal (ＮＣＣ
533)の菌株を含むジョンソングループＡおよびＢの６
種全部の記載された 11 菌株を使用して実験を行ない、
乳中の栄養要求量を測定した。その結果は、乳中の菌増
殖に及ぼす酵母抽出物およびその他の化学的に不確定な
組成の物質の正の影響を再起し得るある化学物質の同定
に導いた。調査中の菌株は10％脱脂および全脂ＵＨＴ乳
の両者の中で増殖することができないことが立証され
た。 L. ジョンソニィに対する表１に要約された結果
は、 24 時間培養後にこれらの天然の培地の適度な酸性
化が生じ、その結果、たとえ培養を嫌気性の条件下で行
っても、最終の成長可能な細胞数に１対数未満の増加を
示している。脱脂および全脂ＵＨＴ乳の両者における同
様な性質は、 L. ガセリィ、 L. アミロボラス、 L. ク
リスパトス、 L. アシドフィラスおよび L. ガリナラム
のタイプの菌株にも観察された。脱脂乳を１％ V／V の
酵母抽出物 (アドサ、イタリア) で補足すると、成長可
能な細胞数は２対数の改善となった。この結果は全脂Ｕ
ＨＴ乳を使用して確認することがきた。 24 時間培養
後、4.0 の最終 pH は酵母抽出物の添加により、得られ
た（表１）。最上の細菌の成長のために必要とした最終
の酵母抽出液濃度は、0.1 から 1.0％ v／v に変化し
た。異臭と色の変化の発生は、この物質を補足した発酵
した乳製品の中に観察することができる。
明を具体的に説明する。 例細菌菌株および培養条件 L. ジョンソニィ菌株 ＡＴＣＣ 33200T ， Lal (ＮＣ
Ｃ 533) , ＡＴＣＣ11506（以前は L. アシドフィラス
Ｒ−26として知られていた），ＡＴＣＣ 332, ＤＳＭ20
553, , L. アシドフィラス ＡＴＣＣ 4356T , La 1
0 (ＮＣＣ 90) , L. ガセリィＤＳＭ 20243T , L. ク
リスパトス ＤＳＭ 20531T , L. アミロボラス ＤＳ
Ｍ 20584T および L. ガリィナラム ＤＳＭ 33199T
を、ＭＲＳ (Difco) ブロス又は寒天の中で、37℃で増
殖した。滅菌水中の脱脂乳 (Difco) 10％ W／V および
全脂ＵＨＴ乳（パルマラート，イタリア）を使って、増
殖検定を行った。栄養分が培地を経て移行するのを避け
るため、２度洗浄し、最後に同量の無菌蒸留水で再度懸
濁した１昼夜ＭＲＳ培地の１％を、ミルクチューブに摂
取した。培養パラメーター ミルクチューブは、好気的にサーモスタット (Sorvall
Heraeus) の中で 37℃で 24 時間、および嫌気性イン
キュベーター (モデル 1024，フォーマ・サイエンティ
フィック，米国) の中で嫌気的に 37 ℃で 24 時間培養
をした。乳の補足 乳に補足する化学物質は、メルク・インデックス社によ
り調製された濃縮溶液として加えた。乳の最終 pH は、
補足後、４Ｎの NaOH を使用して 6.8 に調節した。10
％の脱脂乳溶液および全脂ＵＨＴ乳の最終 pH は、それ
ぞれ 6.8 および 6.7 であった。細菌増殖の評価 増殖の結果は、細胞の計測数により評価し、そして最終
pH の測定は、 37 ℃で 24 時間の培養後行った。細菌
インピーデンス技術の急速分析 (ＲＡＢＩＴ) (ドン・
ホイットリィ・サイエンティフィック社、ウエスト・ヨ
ークシャ、英国) を使って、脱脂および全脂ＵＨＴ乳
で、 37 ℃で 24 時間の試験を行った。L. ジョンソニ
ィＡＴＣＣ 33200および L. ジョンソニィ Lal (ＮＣＣ
533)の菌株を含むジョンソングループＡおよびＢの６
種全部の記載された 11 菌株を使用して実験を行ない、
乳中の栄養要求量を測定した。その結果は、乳中の菌増
殖に及ぼす酵母抽出物およびその他の化学的に不確定な
組成の物質の正の影響を再起し得るある化学物質の同定
に導いた。調査中の菌株は10％脱脂および全脂ＵＨＴ乳
の両者の中で増殖することができないことが立証され
た。 L. ジョンソニィに対する表１に要約された結果
は、 24 時間培養後にこれらの天然の培地の適度な酸性
化が生じ、その結果、たとえ培養を嫌気性の条件下で行
っても、最終の成長可能な細胞数に１対数未満の増加を
示している。脱脂および全脂ＵＨＴ乳の両者における同
様な性質は、 L. ガセリィ、 L. アミロボラス、 L. ク
リスパトス、 L. アシドフィラスおよび L. ガリナラム
のタイプの菌株にも観察された。脱脂乳を１％ V／V の
酵母抽出物 (アドサ、イタリア) で補足すると、成長可
能な細胞数は２対数の改善となった。この結果は全脂Ｕ
ＨＴ乳を使用して確認することがきた。 24 時間培養
後、4.0 の最終 pH は酵母抽出物の添加により、得られ
た（表１）。最上の細菌の成長のために必要とした最終
の酵母抽出液濃度は、0.1 から 1.0％ v／v に変化し
た。異臭と色の変化の発生は、この物質を補足した発酵
した乳製品の中に観察することができる。
【００２８】L. ジョンソニィ La 1 (ＮＣＣ 533) の 1
0 ％脱脂ＵＨＴ乳中で 24 時間培養後、および 1％酵母
抽出液を補足後の、最終 pH と細胞の計測数。全ての結
果は、菌株ＡＴＣＣ 332を除く、他の調査した L. ジョ
ンソニィ菌株に対して再確認された。
0 ％脱脂ＵＨＴ乳中で 24 時間培養後、および 1％酵母
抽出液を補足後の、最終 pH と細胞の計測数。全ての結
果は、菌株ＡＴＣＣ 332を除く、他の調査した L. ジョ
ンソニィ菌株に対して再確認された。
【表１】
【００２９】19 のアミノ酸 (アラニン、グリシン、ヒ
スチジン、リシン、フェニルアラニン、プロリン、セリ
ン、トレオニン、システィン、アルギニン、アスパラギ
ン酸、アスパラギン、グルタミン酸、イソロイシン、ロ
イシン、メチオニン、チロシン、トリプトファンおよび
バリン) の混合物を、脱脂乳 (各アミノ酸の最終濃度0.
05 g／l v／v) に加え、 L. ジョンソニィの増殖につい
て、酵母抽出液の添加後の酸性化水準に殆ど匹敵する正
の影響を得た。アミノ酸の補足後、4.1 の最終 pH が測
定されたが、細胞計測数はまだ満足すべきものではなか
った (4 x 10E ＋08 cfu／ml) 。
スチジン、リシン、フェニルアラニン、プロリン、セリ
ン、トレオニン、システィン、アルギニン、アスパラギ
ン酸、アスパラギン、グルタミン酸、イソロイシン、ロ
イシン、メチオニン、チロシン、トリプトファンおよび
バリン) の混合物を、脱脂乳 (各アミノ酸の最終濃度0.
05 g／l v／v) に加え、 L. ジョンソニィの増殖につい
て、酵母抽出液の添加後の酸性化水準に殆ど匹敵する正
の影響を得た。アミノ酸の補足後、4.1 の最終 pH が測
定されたが、細胞計測数はまだ満足すべきものではなか
った (4 x 10E ＋08 cfu／ml) 。
【００３０】乳中における L. ジョンソニィの増殖に対
して本質的役割を有するこれらのアミノ酸を測定するた
めに、「オミッション (omission) 技術」(ライター・
ビー& オラム・ジェイ・ディー, J. D, J. Dairy Res,
29 (1962 年), 63-77) は、菌株ＡＴＣＣ 33200T を、
脱脂乳に加え、４つのリボヌクレオシド＋硫酸第１鉄
（正の調節）を加え、１つの特定成分に由来する上記の
19 のアミノ酸の混合物をそれぞれ所定の時間で補足し
て適用した。細菌インピーデンス技術（ＲＡＢＩＴ）の
急速分析により、４つのアミノ酸（システィン、アラニ
ン、セリンおよびイソロイシン）を同定し、優れた結果
を示した。後者の３つは、外因的に乳に加えた時に、試
験した菌株に対して刺激物であると考えられた。
して本質的役割を有するこれらのアミノ酸を測定するた
めに、「オミッション (omission) 技術」(ライター・
ビー& オラム・ジェイ・ディー, J. D, J. Dairy Res,
29 (1962 年), 63-77) は、菌株ＡＴＣＣ 33200T を、
脱脂乳に加え、４つのリボヌクレオシド＋硫酸第１鉄
（正の調節）を加え、１つの特定成分に由来する上記の
19 のアミノ酸の混合物をそれぞれ所定の時間で補足し
て適用した。細菌インピーデンス技術（ＲＡＢＩＴ）の
急速分析により、４つのアミノ酸（システィン、アラニ
ン、セリンおよびイソロイシン）を同定し、優れた結果
を示した。後者の３つは、外因的に乳に加えた時に、試
験した菌株に対して刺激物であると考えられた。
【００３１】同定されたアミノ酸のうち最も強力な役割
はシスティンが有すると見なされ、乳中にこのシスティ
ン又はシスチンが欠如すると、細菌の増殖に否定的な影
響を有することが確認された。SH基の役割は、嫌気的生
存によって完全に置き換えることができないと思われ
る。 L. ジョンソニィ培養物の嫌気性培養により実現し
た酸素の欠如は、システインを脱脂又は全脂乳に補足し
た時に得られた同じ増殖結果を達成できなかった。
はシスティンが有すると見なされ、乳中にこのシスティ
ン又はシスチンが欠如すると、細菌の増殖に否定的な影
響を有することが確認された。SH基の役割は、嫌気的生
存によって完全に置き換えることができないと思われ
る。 L. ジョンソニィ培養物の嫌気性培養により実現し
た酸素の欠如は、システインを脱脂又は全脂乳に補足し
た時に得られた同じ増殖結果を達成できなかった。
【００３２】pH の測定値は、この化合物の存在におい
て好気的条件下で得た 3.9 の pH に対して、システイ
ンのない場合に嫌気性の条件下で pH 4.3 の数値を示し
た。しかし、システインを除くと、嫌気性よりはむしろ
好気性の環境下で成長可能な細胞数は一層重大な損失と
なった。 L. ジョンソニィを好気性条件下で培養した
時、チオグリコール酸の溶液 (最終濃度 0.5％ v／v)
はシステインに代わるべき能力を示し、1.0 x 10E ＋09
cfu／ml 以上の高い細胞計測数を得た。４つの言及し
たアミノ酸（システイン、アラニン、セリンおよびイソ
ロイシン）による刺激作用にかかわらず、予期しない否
定的影響が全ての他の 15 のアミノ酸（例えば図３参
照）に対して観察された。
て好気的条件下で得た 3.9 の pH に対して、システイ
ンのない場合に嫌気性の条件下で pH 4.3 の数値を示し
た。しかし、システインを除くと、嫌気性よりはむしろ
好気性の環境下で成長可能な細胞数は一層重大な損失と
なった。 L. ジョンソニィを好気性条件下で培養した
時、チオグリコール酸の溶液 (最終濃度 0.5％ v／v)
はシステインに代わるべき能力を示し、1.0 x 10E ＋09
cfu／ml 以上の高い細胞計測数を得た。４つの言及し
たアミノ酸（システイン、アラニン、セリンおよびイソ
ロイシン）による刺激作用にかかわらず、予期しない否
定的影響が全ての他の 15 のアミノ酸（例えば図３参
照）に対して観察された。
【００３３】0.1 g／l (v／v) の遊離塩基 (アデニン、
シトシン、グアニン、ウラシルおよびチミン) 、リボヌ
クレオシド (アデノシン、シチジン、グアノシン、ウリ
ジン) 又はデオキシリボヌクレオシド ( 2' −デオキシ
アドノシン、 2 ' −デオキシグアノシン、 2' −デオ
キシシチジン、 2' −デオキシウリジン、チミジン)を
補足した 10 ％の脱脂乳 (初期の pH 6.8) 中におい
て、 L. ジョンソニィ Lal (NCC 533) を37℃で 24 時
間培養後の最終 pH 。
シトシン、グアニン、ウラシルおよびチミン) 、リボヌ
クレオシド (アデノシン、シチジン、グアノシン、ウリ
ジン) 又はデオキシリボヌクレオシド ( 2' −デオキシ
アドノシン、 2 ' −デオキシグアノシン、 2' −デオ
キシシチジン、 2' −デオキシウリジン、チミジン)を
補足した 10 ％の脱脂乳 (初期の pH 6.8) 中におい
て、 L. ジョンソニィ Lal (NCC 533) を37℃で 24 時
間培養後の最終 pH 。
【表２】 遊離塩基： アデニン、シトシン、グア
ニン、ウラシルおよびチミン リボヌクレオシド： アデノシン、シチジン、グ
アノシン、ウリジン デオキシリボヌクレオシド： 2−デオキシアデノシン、
2−デオキシグアノシン、2−デオキシシチジン、 2−
デオキシウリジン、チミジン 類似の結果は、他の菌株、例えば L. ジョンソニィＡＴ
ＣＣ 33200T に対して得られた。
ニン、ウラシルおよびチミン リボヌクレオシド： アデノシン、シチジン、グ
アノシン、ウリジン デオキシリボヌクレオシド： 2−デオキシアデノシン、
2−デオキシグアノシン、2−デオキシシチジン、 2−
デオキシウリジン、チミジン 類似の結果は、他の菌株、例えば L. ジョンソニィＡＴ
ＣＣ 33200T に対して得られた。
【００３４】好気性および嫌気性の培養条件下の 10 ％
脱脂乳および４つのリボヌクレオシド、４つのアミノ酸
および硫酸鉄を補足した全脂ＵＨＴ乳中で L. ジョンソ
ニィLal (ＮＣＣ 533) および他の L. ジョンソニィ菌
株を37℃で 24 時間培養後の最終 pH 。
脱脂乳および４つのリボヌクレオシド、４つのアミノ酸
および硫酸鉄を補足した全脂ＵＨＴ乳中で L. ジョンソ
ニィLal (ＮＣＣ 533) および他の L. ジョンソニィ菌
株を37℃で 24 時間培養後の最終 pH 。
【表３】 類似の結果が他の菌株に対して得られた。
【図１】図１は、 L. ジョンソニィ Lal (ＮＣＣ 533)
を、１％の酵母抽出液および４つのリボヌクレオシド、
４つのアミノ酸と硫酸第１鉄の混合物を補足した 10 ％
脱脂および全脂のＵＨＴ乳の中で 24 時間の培養後に得
たＲＡＢＩＴカーブ間の比較を示す。
を、１％の酵母抽出液および４つのリボヌクレオシド、
４つのアミノ酸と硫酸第１鉄の混合物を補足した 10 ％
脱脂および全脂のＵＨＴ乳の中で 24 時間の培養後に得
たＲＡＢＩＴカーブ間の比較を示す。
【図２】図２は、 L. ガリナラム ＤＳＭ 33199T の成
長における、４つのリボヌクレオシド、４つのアミノ酸
および硫酸第１鉄を有する 10 ％脱脂および全脂ＵＨＴ
乳の補足の影響を示す。
長における、４つのリボヌクレオシド、４つのアミノ酸
および硫酸第１鉄を有する 10 ％脱脂および全脂ＵＨＴ
乳の補足の影響を示す。
【符号の説明】 図１において、(1) は全ＵＨＴ乳＋４つのリボヌクレオ
シド＋４つのアミノ酸；(2) は全脂ＵＨＴ乳＋酵母抽出
物；(3) は脱脂乳＋酵母抽出物；(4) は脱脂乳＋４つの
リボヌクレオシド＋４つのアミノ酸＋硫酸第１鉄；(5)
は脱脂乳＋アデノシンおよびグアノシン＋４つのアミノ
酸＋硫酸第１鉄を示す。 図２において、(1) は10％脱脂乳；(2) は10％脱脂乳＋
４つのアミノ酸＋４つのリボヌクレオシド＋硫酸第１
鉄；(3) は全脂ＵＨＴ乳；(4) は全脂ＵＨＴ乳＋４つの
アミノ酸＋４つのリボヌクレオシド＋硫酸第１鉄を示
す。
シド＋４つのアミノ酸；(2) は全脂ＵＨＴ乳＋酵母抽出
物；(3) は脱脂乳＋酵母抽出物；(4) は脱脂乳＋４つの
リボヌクレオシド＋４つのアミノ酸＋硫酸第１鉄；(5)
は脱脂乳＋アデノシンおよびグアノシン＋４つのアミノ
酸＋硫酸第１鉄を示す。 図２において、(1) は10％脱脂乳；(2) は10％脱脂乳＋
４つのアミノ酸＋４つのリボヌクレオシド＋硫酸第１
鉄；(3) は全脂ＵＨＴ乳；(4) は全脂ＵＨＴ乳＋４つの
アミノ酸＋４つのリボヌクレオシド＋硫酸第１鉄を示
す。
フロントページの続き (72)発明者 ロベルト レニーロ スイス国 ル モン プルラン、シュマン ポディーユ、24 (72)発明者 ロレンゾ、モレリイ イタリア国 ピアセンカ、ビア シッタデ ラ、２
Claims (9)
- 【請求項１】 少なくとも４つのアミノ酸、リボヌクレ
オシドおよび鉄を、ラクトバチルス属の増殖を促進する
のに充分な量添加することを特徴とする、乳由来の基体
を含むラクトバチルス属の増殖用培地。 - 【請求項２】 リボヌクレオシドの量は約１から約 500
mg／l の範囲、好ましくは約 10 から約 100 mg／l の
範囲である、請求項１に記載の培地。 - 【請求項３】 リボヌクレオシドはアデノシン又はグア
ノシンである、請求項１又は請求項２に記載の培地。 - 【請求項４】 １ l の乳当たり約 10 から約 200 mg
の鉄、好ましくは約50 から約 100 mg の範囲の量を含
む、請求項１から３の何れか１項に記載の培地。 - 【請求項５】 加えるアミノ酸は、１ l の乳当たり約
10 から約 200 mgの、好ましくは約 50 から約 100 mg
の範囲の量の、好ましくはシステイン、アラニン、セリ
ンおよびイソロイシンである、請求項１から４の何れか
１項に記載の培地。 - 【請求項６】 還元活性を供する化合物を含む、請求項
１から５の何れか１項に記載の培地。 - 【請求項７】 還元活性を供する化合物は、システイ
ン、チオグリコール酸、アスコルビン酸又はその混合物
から成る群から選択される、請求項６に記載の培地。 - 【請求項８】 ジョンソングループＡおよびＢに属する
ラクトバチルス属を培養するための、請求項１から７の
何れか１項に記載の培地の使用。 - 【請求項９】 発酵した、又は発酵していない乳製品の
製造のための、請求項１から７の何れか１項に記載の培
地の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99108717A EP1048215B2 (en) | 1999-04-30 | 1999-04-30 | Enhanced growth of lactic acid bacteria in milk |
| EP99108717.2 | 1999-04-30 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000316567A true JP2000316567A (ja) | 2000-11-21 |
| JP3652217B2 JP3652217B2 (ja) | 2005-05-25 |
Family
ID=8238096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000126769A Expired - Fee Related JP3652217B2 (ja) | 1999-04-30 | 2000-04-27 | ラクトバチルス属の増殖用培地 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6521443B1 (ja) |
| EP (1) | EP1048215B2 (ja) |
| JP (1) | JP3652217B2 (ja) |
| AR (1) | AR023802A1 (ja) |
| AT (1) | ATE272320T1 (ja) |
| BR (1) | BR0002150A (ja) |
| CA (1) | CA2306732A1 (ja) |
| DE (1) | DE69919130T3 (ja) |
| DK (1) | DK1048215T3 (ja) |
| ES (1) | ES2226228T5 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005012503A1 (ja) * | 2003-07-30 | 2005-02-10 | Bhph Company Limited | 新規乳酸菌並びに生体賦活型乳酸菌製剤及び生体に対する感染症の予防剤と治療剤 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1227827B1 (en) * | 1999-10-26 | 2005-03-09 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Lactic acid bacteria for the treatment and/or prophylaxis of giardiasis |
| EP1493806A1 (en) * | 2003-07-02 | 2005-01-05 | Chr. Hansen A/S | Use of compounds involved in biosynthesis of nucleic acids as cryoprotective agents |
| CN102747026A (zh) * | 2005-01-05 | 2012-10-24 | 科·汉森有限公司 | 化合物在生物合成核酸以增加细菌培养物的产率中的应用 |
| DK2251416T3 (en) * | 2005-01-05 | 2018-10-29 | Chr Hansen As | Use of Compounds Involved in the Biosynthesis of Nucleic Acids to Increase the Yield of Bacterial Cultures |
| WO2011018472A2 (en) | 2009-08-14 | 2011-02-17 | Basf Se | Methods in cell cultures, and related inventions, employing certain additives |
| WO2015024593A1 (en) | 2013-08-20 | 2015-02-26 | Chr. Hansen A/S | Method for growth of bacterial cells |
| US20200009174A1 (en) * | 2017-02-28 | 2020-01-09 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Synergistic composition for maintenance of healthy balance of microflora |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT272817B (de) * | 1965-04-02 | 1969-07-25 | Evog Ets Verwalt & Org | Verfahren zur Herstellung von Milchprodukten |
| IT945910B (it) † | 1971-04-08 | 1973-05-10 | Erra C Spa | Prodotto dietetico impiegabile quale intergratore dell alimenta zione umana con particolare riferi mento all infanzia agli stati di convalescenza di gravidanza d allat tamento e dell eta senile e procedi mento per la sua fabbricazione |
| JPS52154590A (en) * | 1976-05-21 | 1977-12-22 | Seikenkai | Cultivating and preserving method of deodorising lactobucillus and liling cell preparation |
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