JPS6391076A - ３種菌の培養法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は糖化菌、乳酸菌及び酪酸菌の培養法に関する。

〔従来の技術〕

活性生菌類は、応用微生物工業の各分野において重要な
役割を演じており、医薬品、食品、飼料などの原料とし
て用いられている。これらの活性生菌類の２種以上を経
口投与すると、腸管内において微生物の共生現象すなわ
ち共存する微生物が相互に有利な影響を与え合うという
現象を示す場合がある。このため２種以上の活性菌を配
合した活性菌製剤が広く用いられている。この活性生菌
混合製剤の製法としては、各画をそれぞれ単独で培養し
、得られた菌体を混合して製剤化する方法が用いられて
いる。しかし各画を単独で培養する方法では、それぞれ
の菌の培養収率な向上させることは困難であり、また窒
素源として肉エキス、ペプトン、酵母エキスなどの高価
な培地原料を用いる必要がある。

〔問題点の解決と本発明の構成〕

本発明者は、従来法の欠点を避けて、共生現象を利用す
ることによる微生物を混合培養する方法について研究を
進めた結果、本発明を完成した。

本発明は、蛋白質を窒素源、炭水化物を炭素源とする培
地を用い、糖化菌を培養したのち糖化菌を分離し、次い
でこの糖化菌分離後の培養液を含有する培地で乳酸菌を
好気的条件下に培養し、さらにこの乳酸菌培養液を含有
する培地で乳酸菌及び酪酸菌を嫌気的条件下に培養し、
酪酸菌の芽胞形成を行ったのち、乳酸菌及び酪酸菌を分
離することを特徴とする３種菌の培養法で゛ある。

本発明に用いられる糖化菌としては例えばバチルス・メ
センテリカス、バチルス・スブチリス、バチルス・ナツ
ト−なと、乳酸菌としては例エハストレプトコツ力スー
フエカーリス、ストレプトコッカス・ラクテイス、スト
レプトコッカス・フェシウムなどのほか、ラクトバチル
ス属の各画、酪酸菌としては例えばクロストリジウム・
ブチリカム、クロストリジウム命アセトブチリカムなど
があげられる。

糖化菌、乳酸菌及び酪酸菌の培養は、主に蛋白質及び炭
水化物を窒素源及び炭素源とする培地で行われる。窒素
源である蛋白質としては、コーンステイープリカー、フ
ィッシュリバー、ミルクカゼインなど、炭素源である炭
水化物としては、ばれいしょ殿粉、とうもろこし殿粉、
可溶性殿粉などが用いられる。

本発明を実施するに際しては、まず蛋白質を窒素源及び
炭水化物を炭素源とする培地（以下培地Ａと呼ぶ）を用
いて糖化菌を培養する（第１工程）。

培養は好気的条件下に行われ、培養温度は２５〜４０℃
特に６７°Ｃ程度が好ましい。培養時間は通常４〜１０
時間である。培養終了後、培養液から糖化菌を例えば濾
過により分離し、常法により芽胞形成を行う。

次いで前記の培地Ａに糖化菌培養Ｆ液を加え、乳酸菌を
接種して培養する（第２工程）。

培養条件は第１工程と同様である。糖化菌培養Ｆ液の添
加量は、培地Ａの０．２５〜１０％が好ましい。乳酸菌
は糖化菌培養液中のアミノ酸、ぶどう糖、その他の生成
物を栄養源として生育するため増殖が促進される。また
安価な培地Ａを有効に利用することができる。

第２工程で乳酸菌を培養したのち、この乳酸菌含有培養
液を培地Ａに加え、酪酸菌を接種して酪酸菌及び乳酸菌
を培養する（第３工程）。

培養は嫌気的条件下に行われ、培養温度は２５〜４０℃
特に３７℃程度が好ましい。

培養終了後、酪酸菌の芽胞形成を行い耐熱性を付与した
のち、酪酸菌及び乳酸菌を分離する。

本発明は連続的に実施することもできる。その方法を図
面により説明する。図面は本発明の実施態様を説明する
ための工程図であって、滅菌した新鮮培地を、培地貯槽
１かも糖化菌培養槽２へ送液ポンプ６Ａによって供給す
る。糖化菌培養槽２の培養液は、送液ポンプ６Ａによっ
て糖化菌分離槽４へ送る。培地の供給量と糖化菌培養液
の流出量を同じにして、糖化菌培養槽２の液量を一定に
保持し、単位時間当りの供給量及び流出量を調節するこ
とにより、糖化菌の増殖曲線における特定段階の発育菌
を選択的に増殖させることができる。

糖化菌分離槽４で培養液を濾過して糖化菌と培養Ｆ液を
分離し、糖化菌は糖化菌芽胞形成槽５へ送られる。培養
ろ液は乳酸菌培養槽６へ送り、同時に培地貯槽１から送
液ポンプ６Ｂによって乳酸菌培養槽６へ培地を供給し、
培養ろ液と培地の混合物に乳酸菌を接種する。乳酸菌増
殖後、乳酸菌含有培養液を送液ポンプ３ｃによって酪酸
菌−乳酸菌培養槽７に送り、同時にこの培養槽７へ培地
貯槽１から培地を供給し、酪酸菌を接種する。酪酸菌・
乳酸菌培養槽７には、ガスボンベ８から窒素ガス及び炭
酸ガスから成る混合ガスを供給し、嫌気的条件下に酪酸
菌及び乳酸菌を培養する。次いでこの培養液を酪酸菌芽
胞形成槽９に送り、酪酸菌に芽胞を形成させたのち、遠
心分離機１０により乳酸菌と酪酸菌を分離する。

〔発明の効果〕

本発明方法によれば、乳酸菌及び酪酸菌の培養収率を著
しく向上させることができる。これは糖化歯が発育時に
産生ずるプロテアーゼ及びアミラーゼが培地中の蛋白質
及び炭水化物を分解し、乳酸菌の増殖に必要なアミノ酸
例えばグルタミン酸、アスパラギン酸など及びぶどう糖
が産生されること、並びに乳酸菌と酪酸菌の混合培養に
よって、両方の菌が相互に増殖促進物質を産生ずるため
と考えられる。また乳酸菌を培養する場合ｌは、肉エキ
ス、ペプトン、酵母エキスなどの高価な培地原料が必要
であるが、本発明方法では、これらの培地原料を用いな
くともよいので経済的にも有利、である。

実施例 糖化歯としてバチルス・メセンテリカスＴｏ−Ａ（微工
研菌寄第８９６４号）、乳酸菌としてストレプトコッカ
ス・フエカーリスＴ−１１０（微工研菌寄第８９６６号
）及び酪酸菌としてクロストリジウム・ブチリカムＴｏ
−Ａ（微工研菌寄第８９６５号）を用い、また培地とし
てはミルクカゼイン０．５％及びばれいしょ殿粉１．０
％を含有するＣ３培地（ｐＨ７，０）を蒸気滅菌して用
い、培養温度は３７°Ｃとした。

容量１０１の糖化菌培養槽に培地１０１を入れ、好気的
条件下に６７°Ｃで糖化笛を培養した。

培養開始６時間後より糖化菌培養槽に培地を１０００ｍ
／！／時間の割合で供給しながら、培養液を１０１００
Ｏ／時間の割合で糖化菌分離槽に送り、糖化歯を分離し
た。

次いで容量５０１の乳酸菌培養槽にあらかじめ培地５０
１を入れておき、これに培地を５０ＱＱｍｌ／時間、糖
化菌培養ろ液を１０１００Ｏ／時間の割合で供給し、好
気的条件下に３７°Ｃで乳酸菌を培養した。

容量５００１の酪酸菌・乳酸菌培養槽にあらかじめ培地
５００１を入れておき、乳酸菌培養開始６時間後より、
これに培地を５００００ｍｌ／時間、乳酸菌培養液を６
０００ｍ１／時間の割合で供給し、また炭酸ガス１０％
及び窒素ガス９０％からなる混合ガスを培養槽に送り、
酪酸菌を接種して嫌気的条件下に３７℃で酪酸菌及び乳
酸菌を培養した。酪酸菌・乳酸菌培養液は５６０００ｍ
ｌ／時間の割合で酪酸菌芽胞形成槽に送り、酪酸菌が芽
胞を形成したのち、乳酸菌と酪酸菌を分離した。

こうして連続培養を行い、培養状態が安定してから、乳
酸菌培養槽及び酪酸菌・乳酸菌培養槽から検体を採取し
、ＯＹＰ白亜寒天培地を用い、検体１ｍｌ中の乳酸菌及
び酪酸菌の菌数を測定した。その結果を下記表に示す。

なお比較のため、乳酸菌培養槽に培地のみを供給して乳
酸菌を培養した場合（Ａ）及び酪酸菌・乳酸菌培養槽に
培地のみを供給して酪酸菌を単独で培養した場合（Ｂ）
の各培養液中の菌数を併せて示す。なお比較例の培地供
給量及び培養条件は実施例と同様である。

これより糖化菌培養Ｐ液含有培地を用いると、培養液を
含まない培地で乳酸菌を培養した場合（比較例Ａ）に比
べ、培養液中の乳酸菌数が１００倍以上となることが知
られる。また酪酸菌を乳酸菌と混合培養することにより
、酪酸菌を単独培養した場合（比較例Ｂ）に比べ、酪酸
菌数は約１２倍になることが知られる。

凹面の簡単な説明 図面は本発明の実施態様を説明するための工程図であっ
て、図中の記号２は糖化菌培養槽、５は糖化歯芽胞形成
槽、６は乳酸菌培養槽、７は酪酸菌・乳酸菌培養槽、９
は酪酸菌芽胞形成槽を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 蛋白質を窒素源、炭水化物を炭素源とする培地を用い、
   糖化菌を培養したのち糖化菌を分離し、次いでこの糖化
   菌分離後の培養液を含有する培地で乳酸菌を好気的条件
   下に培養し、さらにこの乳酸菌培養液を含有する培地で
   乳酸菌及び酪酸菌を嫌気的条件下に培養し、酪酸菌の芽
   胞形成を行ったのち、乳酸菌及び酪酸菌を分離すること
   を特徴とする３種菌の培養法。