SU1316239A1

SU1316239A1 - Способ получени протеолитических ферментов

Info

Publication number: SU1316239A1
Application number: SU843794948A
Authority: SU
Inventors: В.А. Говорунова; П.В. Бабаева; В.В. Шевцов; Ф.Н. Чегодаев; А.И. Пахтуев; Т.Ф. Ломовская; В.И. Коровкин; Л.Л. Сидорова
Original assignee: Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной микробиологии; Всесоюзный научно-исследовательский проектно-конструкторский институт прикладной биохимии
Priority date: 1984-09-24
Filing date: 1984-09-24
Publication date: 1991-07-30

Abstract

Изобретение относитс к микробиологической промышленности, в ч аст- НОСТ.И, к получение биологически активных веществ протеолитических ферментов И инсектицидного комплекса. Целью изобретени вл етс одновременное получение, инсектицида и про- теолитических ферментов на одной питательной среде. Дл одновременного .получени на одной питательной среде протеолитических ферментов и инсектицида используют штаммы бактерий Bacillus thuringiensis v. galleria 69-6 - промьшленный продуцент инсектицидного препарата-энтобактерина и Bacillus thuringiensis v. galleriae GFP-51 - продуцент протеолитических ферментов. Посевные вегетативные культуры используют дл засева чфер- ментациойной среды, содержащей источники азота, углерода и стимул торы роста. В ферментационную среду внос т вначале посевной материал штамма Вас. thuringiensis v. galleriae GFP-51. При выходе культуры на стадию экспоненциальной фазы роста внос т посевной материал штамма Вас. thuringiensis V. galliae 69-6 при Соотношении посевных доз 9:1. Культивирование провод т при , 220об/мин, в качапочных колбах. Длительность ферментации (до 95% высыпани спор). составл ет 44-48 ч. По окончании ферментации биомассу отдел ют, от культу- ральной жидкости центрифугированием. Из культуральной жидкости одним из промьгашенньп методов получают ферментный препарат. Биомасса используетс в качестве биологического инсектицида , t табл. с (Л с 1чЭ ОЭ 0

Description

Изобретение относитс к микробиологической промьшленности, в частности к получению биологически активных веществ - протеолитических ферментов и инсектицидного комплекса.

Цель изобретени - одновременное получение инсектицида на одной питательной среде.

Пример. Дл одновременного получени на одной питательной среде протеолитических ферментов и инсектицида используют следующие штаммы.

Штамм 69-6 Вас. thuringiensis V. galleriae - промышленный продуцент инсектицидного препарата - энтобак- терина. Штамм GFP-51 Вас. thuringien- 818 V. gallferiae - продуцент протеолитических ферментов депонирован в ЦМГГМ ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ .

Именно эти штаммы из большого количества изученньк микробных ассоци - аций не про вл ют антагонистических свойств и представл ют собой перспекг тивную микробную ассоциацию.

Дл получени посевного материала используют культуры микроорганизмовJ выращенные до спорового состо ни на СПА. Перед засевом в МПВ с целью получени посевного материала споры прогревают при 75 С 15 мин. Затем. культуры подращивают в МПВ при 220 об/мин, 30 с, в колбах емкостью 750 ш. Полученные посевные вегетативные культуры используют дл засе-

штаммов

активность биомассы LKjp (сп./мл)

Культивирование провод т при , . 220 об/мин, в качалочных колбах емкостью 750 мл. Длительность ферментации (до 95% высыпани спор) составл ет 44-48 ч. По окончании ферментации биомассу отдел ют от культу- ральной жидкости центрифугированием Из культуральной жидкости одним из промьш1ленных методов - методом осаждени белков ацетоном получают ацева ферментацирнной среды. Состав ферментационной среды и услови ферментации при совместном раздельном выращивании штаммов, %: ,05 .

MnSO . CaCl, KjHPO , CuSO

0,04

0,23

0,08

1,13

0,001

0,01

0,02

Na-цитрат

(NH)S04

Кормовые сухие,

, дрожжи2

Кукурузный экстракт0 ,5

Срева мука 0,5 рН среды до 7,2-7,3 довод т до 40% NaOH.

В ферментационную среду внос т вначале посевной материал штамма GFP-51 Вас. thuringiensis v. galleriae и при выходе культуры на стади экспоненциальной фазы роста внос т посевной материал штамма 69-6 Вас, thuri giensis v. galleriae в соотношении .9:1. При других пропорци х псевных доз поставленна цель не до- стигаетс .

В таблице показано вли ние соотн рени посевных доз штаммов GFP-51 и 69-6 Вас. thuringiensis v. galleriae на синтез биологически активны веществ (БАВ).

25-50

30-80 70-140

(1-3)-1ов (4-9)-10 (3-7).10

тоновый ,порошок - ферментный препарат . Протеологическа активность ацетонового порошка определ етс модифицированным методом Ансона. Биомасса используетс в качестве биологического инсектицида. Инсектицидна активность (LKjj) штаммов определ етс по ГОСТ 21108-75,нтoбaктepин сухой.

Таким образом, при использовании предлагаемого способа повышаетс коэффициент использовани оборудовани в результате того, что за одну ферментацию из одного ферментера можно получи Ь два продукта - ферментный препарат и биологический инсектициду вследствие комплексного использовани продуктов культивировани расход питательной среды сокращаетс вдвое; продукты культивировани используютс полиостью, что предполагает возможность организации малоотходного производства .

Форму л а и 3 о б ре тени

Способ получени протеолитических ферментов путем приготовлени посевного материала штамма бактерий Bacillus thuringienaie var. galleriae

GFP-51, засев и .культивирование в жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и стимул торы роста, с последующим отделением биомассы и выделением из культураль- ной жидкости протеолитических ферментов , о т л и ч а и и с тем, что, с целью одновременного получени инсектицида, на стадии экспоненциального роста в питательную среду допол-. нительно внос т посевной материал штамма бактерий Bacillus thuringi- ensis var. galleriae 69-6, при этом посевной материал каждого из

штамм ов берут в соотношении,

соответственно равном 9:1, а отделенна от культуральной жидкости биомасса вл етс инсектицидом .

Claims

Форму ла изобретения

15 »

Способ получения протеолитических ферментов путем приготовления посевного материала штамма бактерий Bacillus thuringiensis var. galleriae

GFP-51, засев и культивирование в жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода й стимуляторы роста, с последующим отделением биомассы и выделением из культуральной жидкости протеолитических ферментов, отличающийся тем, что, с целью одновременного получения инсектицида, на стадии экспоненциального роста в питательную среду допол-. нительно вносят посевной материал штамма бактерий Bacillus thuringiensis var. galleriae 69-6, при этом посевной материал каждого из штаммов берут в соотношении, соответственно равном 9:1, а отделенная от культуральной жидкости биомасса является инсектицидом .