JP2000245453A - 酵素の活性化方法 - Google Patents
酵素の活性化方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】酵素を酵素反応に使用する場合、酵素反応の前
段階において、酵素の活性を高める方法を提供する。 【解決手段】酵素反応に使用される酵素を活性化する方
法であって、同酵素を電解生成水に溶解して活性化す
る。
段階において、酵素の活性を高める方法を提供する。 【解決手段】酵素反応に使用される酵素を活性化する方
法であって、同酵素を電解生成水に溶解して活性化す
る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、α−アミラーゼ、
酸性プロテアーゼ、リパーゼ等、酵素反応に使用される
酵素を活性化する方法に関する。
酸性プロテアーゼ、リパーゼ等、酵素反応に使用される
酵素を活性化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】食品素材の調理、加工等、食品加工にお
ける酵素反応に関与する酵素には多くの種類があり、そ
の主要な酵素としては、α−アミラーゼ、酸性プロテア
ーゼ、リパーゼ等が知られている。α−アミラーゼは、
澱粉を分解してデキストリン、異性化糖、ブドウ糖、水
飴、マルトース、マルトオリゴ糖、シクロデキストリ
ン、カップリングシュガー等の製造に使用され、酸性プ
ロテアーゼは、醤油、味噌、麺つゆ、焼き肉のたれ、ド
レッシング等の製造に使用され、リパーゼは、脂肪酸、
石鹸、糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、香料、メント
ール等の製造に使用される。これらの酵素の使用に際し
ては、酵素反応の前段階において、酵素の活性を高めて
おくことが有利である。
ける酵素反応に関与する酵素には多くの種類があり、そ
の主要な酵素としては、α−アミラーゼ、酸性プロテア
ーゼ、リパーゼ等が知られている。α−アミラーゼは、
澱粉を分解してデキストリン、異性化糖、ブドウ糖、水
飴、マルトース、マルトオリゴ糖、シクロデキストリ
ン、カップリングシュガー等の製造に使用され、酸性プ
ロテアーゼは、醤油、味噌、麺つゆ、焼き肉のたれ、ド
レッシング等の製造に使用され、リパーゼは、脂肪酸、
石鹸、糖脂肪酸エステル等の界面活性剤、香料、メント
ール等の製造に使用される。これらの酵素の使用に際し
ては、酵素反応の前段階において、酵素の活性を高めて
おくことが有利である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来、酵素の使用に際
しては、酵素反応の前段階で、酵素を蒸留水、または反
応液のｐＨに合わせた緩衝液に溶解して酵素溶液にする
手段が採られている。これは、通常、酵素反応が最適な
範囲のｐＨで行われるため、酵素溶液を添加した際に反
応液が最適なｐＨの範囲から外れないようにするためで
ある。換言すれば、かかる手段は、酵素の活性を予め高
めるものではない。
しては、酵素反応の前段階で、酵素を蒸留水、または反
応液のｐＨに合わせた緩衝液に溶解して酵素溶液にする
手段が採られている。これは、通常、酵素反応が最適な
範囲のｐＨで行われるため、酵素溶液を添加した際に反
応液が最適なｐＨの範囲から外れないようにするためで
ある。換言すれば、かかる手段は、酵素の活性を予め高
めるものではない。
【０００４】従って、本発明の目的は、酵素を酵素反応
に使用する場合、酵素反応の前段階において、酵素の活
性を高める方法を提供することにある。
に使用する場合、酵素反応の前段階において、酵素の活
性を高める方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、酵素反応に使
用される酵素を活性化する方法であって、同酵素を電解
生成水に溶解して活性化することを特徴とするものであ
り、前記電解生成水としては、希釈食塩水を電気分解し
て得られる電解生成水を採用することが好ましい。
用される酵素を活性化する方法であって、同酵素を電解
生成水に溶解して活性化することを特徴とするものであ
り、前記電解生成水としては、希釈食塩水を電気分解し
て得られる電解生成水を採用することが好ましい。
【０００６】本発明に係る酵素の活性化方法において
は、前記酵素としてα−アミラーゼを採用する場合には
前記電解生成水として電解生成アルカリ性水を採用する
こと、前記酵素として酸性プロテアーゼを採用する場合
には前記電解生成水として電解生成酸性水を採用するこ
と、前記酵素としてリパーゼを採用する場合には前記電
解生成水として電解生成酸性水を採用することができ
る。
は、前記酵素としてα−アミラーゼを採用する場合には
前記電解生成水として電解生成アルカリ性水を採用する
こと、前記酵素として酸性プロテアーゼを採用する場合
には前記電解生成水として電解生成酸性水を採用するこ
と、前記酵素としてリパーゼを採用する場合には前記電
解生成水として電解生成酸性水を採用することができ
る。
【０００７】
【発明の作用・効果】本発明に係る酵素の活性化方法に
よれば、図２、図４、図６に示すグラフを参照すれば明
らかなように、酵素を水道水等通常の水（ｐＨ約７）に
溶解する場合に比較して、酵素の活性が高くなってい
る。特に、酵素としてα−アミラーゼを採用する場合に
は、電解生成水として電解生成アルカリ性水を採用する
ことにより、酵素として酸性プロテアーゼを採用する場
合には、電解生成水として電解生成酸性水を採用するこ
とにより、また、酵素としてリパーゼを採用する場合に
は、電解生成水として電解生成酸性水を採用することに
より、酵素の活性を高めることができる。
よれば、図２、図４、図６に示すグラフを参照すれば明
らかなように、酵素を水道水等通常の水（ｐＨ約７）に
溶解する場合に比較して、酵素の活性が高くなってい
る。特に、酵素としてα−アミラーゼを採用する場合に
は、電解生成水として電解生成アルカリ性水を採用する
ことにより、酵素として酸性プロテアーゼを採用する場
合には、電解生成水として電解生成酸性水を採用するこ
とにより、また、酵素としてリパーゼを採用する場合に
は、電解生成水として電解生成酸性水を採用することに
より、酵素の活性を高めることができる。
【０００８】これらの結果は、酵素を酵素反応に使用す
るに際して電解生成水に溶解することにより酵素の活性
化を図ることができること、個々の酵素については、電
解生成水を使用する酵素に対応して適宜選択することに
よりその活性化を図ることを教示している。
るに際して電解生成水に溶解することにより酵素の活性
化を図ることができること、個々の酵素については、電
解生成水を使用する酵素に対応して適宜選択することに
よりその活性化を図ることを教示している。
【０００９】電解生成水が酵素の活性を高める理由は定
かではないが、非電解生成水でｐＨのみを変化させた水
を溶解液として採用した比較例（図２、図４、図６に示
す１点鎖線グラフ）を参照すれば、電解生成水を溶解液
として採用した場合には、比較例に比して酵素の活性を
一層高めている。酵素の活性が溶解液のｐＨに依存する
ことは知られているが、電解生成水の場合には、ｐＨ以
外の機能が大きく寄与していることが認められる。
かではないが、非電解生成水でｐＨのみを変化させた水
を溶解液として採用した比較例（図２、図４、図６に示
す１点鎖線グラフ）を参照すれば、電解生成水を溶解液
として採用した場合には、比較例に比して酵素の活性を
一層高めている。酵素の活性が溶解液のｐＨに依存する
ことは知られているが、電解生成水の場合には、ｐＨ以
外の機能が大きく寄与していることが認められる。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明に係る酵素の活性化方法に
ついての具体的例を、α−アミラーゼ（実験例１）、酸
性プロテアーゼ（実験例２）、リパーゼ（実験例３）に
ついて説明する。
ついての具体的例を、α−アミラーゼ（実験例１）、酸
性プロテアーゼ（実験例２）、リパーゼ（実験例３）に
ついて説明する。
【００１１】（実験例１）α−アミラーゼとしてアミラ
ーゼVIII−Ａ（シグマ株式会社社製：大麦麦芽起源）を
採用するとともに、酵素を活性化するための供試水とし
て下記に示す電解モデル水（電解生成水）およびｐＨモ
デル水を採用して、図１のフローチャートに示す方法で
酵素の活性化実験を下記の条件で行った。
ーゼVIII−Ａ（シグマ株式会社社製：大麦麦芽起源）を
採用するとともに、酵素を活性化するための供試水とし
て下記に示す電解モデル水（電解生成水）およびｐＨモ
デル水を採用して、図１のフローチャートに示す方法で
酵素の活性化実験を下記の条件で行った。
【００１２】電解モデル水：蒸留水に塩化ナトリウムを
溶解して１００ｍｇ／ｌの濃度の塩化ナトリウム水溶液
を調製して、この水溶液を原水として有隔膜電解して得
た電解生成水（ｐＨ３，ｐＨ４，ｐＨ１０，ｐＨ１
１）。ｐＨモデル水：蒸留水に水酸化ナトリウムまたは
塩酸を添加して各種のｐＨの水溶液（ｐＨ３，ｐＨ４，
ｐＨ１０，ｐＨ１１）を調製し、この水溶液に塩化ナト
リウムを添加してＮａイオン濃度を電解モデル水の原水
と一致させた水溶液（Ｎａイオン濃度３９．３ｍｇ／
ｌ）。
溶解して１００ｍｇ／ｌの濃度の塩化ナトリウム水溶液
を調製して、この水溶液を原水として有隔膜電解して得
た電解生成水（ｐＨ３，ｐＨ４，ｐＨ１０，ｐＨ１
１）。ｐＨモデル水：蒸留水に水酸化ナトリウムまたは
塩酸を添加して各種のｐＨの水溶液（ｐＨ３，ｐＨ４，
ｐＨ１０，ｐＨ１１）を調製し、この水溶液に塩化ナト
リウムを添加してＮａイオン濃度を電解モデル水の原水
と一致させた水溶液（Ｎａイオン濃度３９．３ｍｇ／
ｌ）。
【００１３】酵素活性測定キット：アミラーゼＢ−テス
トワコー（和光純薬工業株式会社製、発色酵素液キッ
ト、基質液キット、反応停止液キット）。活性測定：試
験管に酵素溶液０．０１ｍｌと発色酵素液キット１ｍｌ
を入れて反応開始液としてこれを３７℃で５分間加温
し、次いでこれに基質液キット１ｍｌを入れて３７℃で
１０分間反応させ、最後にこれに反応停止液キット２ｍ
ｌを入れて反応を停止する。この反応液を分光光度計で
６２０ｎｍの吸光度を測定し、この吸光度に基づいて酵
素量を算出する。
トワコー（和光純薬工業株式会社製、発色酵素液キッ
ト、基質液キット、反応停止液キット）。活性測定：試
験管に酵素溶液０．０１ｍｌと発色酵素液キット１ｍｌ
を入れて反応開始液としてこれを３７℃で５分間加温
し、次いでこれに基質液キット１ｍｌを入れて３７℃で
１０分間反応させ、最後にこれに反応停止液キット２ｍ
ｌを入れて反応を停止する。この反応液を分光光度計で
６２０ｎｍの吸光度を測定し、この吸光度に基づいて酵
素量を算出する。
【００１４】実験方法：図１のフローチャートに示す方
法にて実施する。先ず、α−アミラーゼ８５ｍｇに供試
水を加えて１００ｍｌの定容とした酵素溶液を調製し、
この酵素溶液０．０１ｍｌ中に発色酵素液キット１ｍｌ
を添加して３７℃で５分間加温し、次いで基質液キット
１ｍｌを添加して反応開始液として酵素反応を開始す
る。酵素反応においては、３７℃で１０分間正確に加温
して行い、その後反応停止液キット２ｍｌを添加して反
応を停止する。この反応液を分光光度計で６２０ｎｍの
吸光度を測定する。
法にて実施する。先ず、α−アミラーゼ８５ｍｇに供試
水を加えて１００ｍｌの定容とした酵素溶液を調製し、
この酵素溶液０．０１ｍｌ中に発色酵素液キット１ｍｌ
を添加して３７℃で５分間加温し、次いで基質液キット
１ｍｌを添加して反応開始液として酵素反応を開始す
る。酵素反応においては、３７℃で１０分間正確に加温
して行い、その後反応停止液キット２ｍｌを添加して反
応を停止する。この反応液を分光光度計で６２０ｎｍの
吸光度を測定する。
【００１５】本実験における各供試水、酵素溶液、反応
開始液の性質変化の状態を表１および表２に示すととも
に、各供試水に基づく酵素の活性状態を表３および表４
に示す。また、各供試水に基づくｐＨと酵素活性比との
関係を図２に示す。但し、図２に示す酵素活性比は、ｐ
Ｈ７の原水における酵素活性を１とする各酵素活性の比
率を意味する。但し、酵素活性の値は５回測定した場合
の平均値である。
開始液の性質変化の状態を表１および表２に示すととも
に、各供試水に基づく酵素の活性状態を表３および表４
に示す。また、各供試水に基づくｐＨと酵素活性比との
関係を図２に示す。但し、図２に示す酵素活性比は、ｐ
Ｈ７の原水における酵素活性を１とする各酵素活性の比
率を意味する。但し、酵素活性の値は５回測定した場合
の平均値である。
【００１６】
【表１】
【００１７】
【表２】
【００１８】
【表３】
【００１９】
【表４】
【００２０】酵素活性については、供試水がアルカリ性
域では酵素活性が上昇して、かつ酸性域では酵素活性が
低下している。この傾向は電解モデル水、ｐＨモデル水
ともに共通しているが、アルカリ性域での酵素活性の上
昇率および酸性域では酵素活性の低下率は、ｐＨモデル
水に比較して電解モデル水が大きい。特に、両モデル水
がｐＨ１１である場合の酵素活性に着目すると、酵素活
性は、電解モデル水においては２０％上昇しているのに
対して、ｐＨモデル水においては７％であって、電解モ
デル水とｐＨモデル水との間では酵素に対する活性化の
作用に大きな差があることが認められる。
域では酵素活性が上昇して、かつ酸性域では酵素活性が
低下している。この傾向は電解モデル水、ｐＨモデル水
ともに共通しているが、アルカリ性域での酵素活性の上
昇率および酸性域では酵素活性の低下率は、ｐＨモデル
水に比較して電解モデル水が大きい。特に、両モデル水
がｐＨ１１である場合の酵素活性に着目すると、酵素活
性は、電解モデル水においては２０％上昇しているのに
対して、ｐＨモデル水においては７％であって、電解モ
デル水とｐＨモデル水との間では酵素に対する活性化の
作用に大きな差があることが認められる。
【００２１】以上のことから、酵素の活性化を図るには
電解生成水が有効であること、酵素としてα−アミラー
ゼを採用する場合には、電解生成アルカリ性水が極めて
有効であることが判明した。電解生成アルカリ性水のこ
のような効果は、ｐＨモデル水とを比較すればｐＨのみ
に起因するものではなく、また、表１および表２に示す
ｐＨおよび酸化還元電位（ＯＲＰ）の値が電解生成アル
カリ性水とｐＨモデル水との間で差がないことから、ｐ
Ｈおよび酸化還元電位にのみに起因するものでないもの
と認められる。従って、電解生成水の酵素の活性化に及
ぼす作用は、ｐＨ、酸化還元電位、および、その他の潜
在する機能の総合によるものと判断される。
電解生成水が有効であること、酵素としてα−アミラー
ゼを採用する場合には、電解生成アルカリ性水が極めて
有効であることが判明した。電解生成アルカリ性水のこ
のような効果は、ｐＨモデル水とを比較すればｐＨのみ
に起因するものではなく、また、表１および表２に示す
ｐＨおよび酸化還元電位（ＯＲＰ）の値が電解生成アル
カリ性水とｐＨモデル水との間で差がないことから、ｐ
Ｈおよび酸化還元電位にのみに起因するものでないもの
と認められる。従って、電解生成水の酵素の活性化に及
ぼす作用は、ｐＨ、酸化還元電位、および、その他の潜
在する機能の総合によるものと判断される。
【００２２】（実験例２）酸性プロテアーゼとしてプロ
テアーゼXXIII（シグマ株式会社社製：Aspergillus ory
use起源）を採用するとともに、酵素を活性化するため
の供試水としては実験例１で使用した電解モデル水（電
解生成水）およびｐＨモデル水を採用して、図３のフロ
ーチャートに示す方法で酵素の活性化実験を下記の条件
で行った。
テアーゼXXIII（シグマ株式会社社製：Aspergillus ory
use起源）を採用するとともに、酵素を活性化するため
の供試水としては実験例１で使用した電解モデル水（電
解生成水）およびｐＨモデル水を採用して、図３のフロ
ーチャートに示す方法で酵素の活性化実験を下記の条件
で行った。
【００２３】酸性プロテアーゼ：プロテアーゼXXIII。
緩衝液：マッキルベイン緩衝液ｐＨ３（燐酸二ナトリウ
ム、クエン酸）。カゼイン溶液：カゼイン（発色用）２
ｇに１０倍に薄めた乳酸５ｍｌを加え、さらに蒸留水を
加えて完全に白濁状に溶解するまで掻き混ぜる。この白
濁液を一度沸騰させてから冷却し、これにｐＨ３のマッ
キルベイン緩衝液２０ｍｌを加え、さらに蒸留水を加え
て１００ｍｌに定容。 チロシン標準溶液：Ｌ−チロシン１０．０ｍｇに１Ｎ塩
酸１ｍｌを加えて全容を１００ｍｌとして、これを原液
（１００ｍｇ／ｌ）とする。検量線は原液を使用し、標
準液として０ｍｇ／ｌ，２５ｍｇ／ｌ，７５ｍｇ／ｌ，
１００ｍｇ／ｌのものを使用。
緩衝液：マッキルベイン緩衝液ｐＨ３（燐酸二ナトリウ
ム、クエン酸）。カゼイン溶液：カゼイン（発色用）２
ｇに１０倍に薄めた乳酸５ｍｌを加え、さらに蒸留水を
加えて完全に白濁状に溶解するまで掻き混ぜる。この白
濁液を一度沸騰させてから冷却し、これにｐＨ３のマッ
キルベイン緩衝液２０ｍｌを加え、さらに蒸留水を加え
て１００ｍｌに定容。 チロシン標準溶液：Ｌ−チロシン１０．０ｍｇに１Ｎ塩
酸１ｍｌを加えて全容を１００ｍｌとして、これを原液
（１００ｍｇ／ｌ）とする。検量線は原液を使用し、標
準液として０ｍｇ／ｌ，２５ｍｇ／ｌ，７５ｍｇ／ｌ，
１００ｍｇ／ｌのものを使用。
【００２４】酵素溶液の調製：酸性プロテアーゼ２５ｍ
ｇに供試水を加えて２５ｍｌに定容し、室温（２５℃）
で５分間放置したもの。酵素活性の表示：酸性プロテア
ーゼの活性は、４０℃で６０分間に１μｇのチロシン相
当量の呈色を示す活性を１単位（１Ｕ）とする。酵素活
性（１Ｕ／ｍｌ）＝生成チロシン量×６／１（反応液
量）×１／０．５（酵素液量）。
ｇに供試水を加えて２５ｍｌに定容し、室温（２５℃）
で５分間放置したもの。酵素活性の表示：酸性プロテア
ーゼの活性は、４０℃で６０分間に１μｇのチロシン相
当量の呈色を示す活性を１単位（１Ｕ）とする。酵素活
性（１Ｕ／ｍｌ）＝生成チロシン量×６／１（反応液
量）×１／０．５（酵素液量）。
【００２５】実験方法：図３のフローチャートに示す方
法にて実施する。先ず、カゼイン溶液１．５ｍｌに緩衝
液１．０ｍｌを加えて４０℃で５分間加温し、このカゼ
イン溶液に予め調製した酵素溶液０．５ｍｌを加えて反
応開始液として酵素反応を開始する。酵素反応において
は、４０℃で６０分間反応させた後、０．４Ｍトリクロ
ール酢酸溶液（ＴＣＡ）３ｍｌを加えて反応を停止し、
反応停止液中の沈殿を濾別する。得られた濾液１ｍｌを
分取し、この濾液に０．４Ｍ炭酸ナトリウム溶液５ｍｌ
と０．４Ｎフェノール試薬１ｍｌを加えて４０℃で３０
分間発色を行い、６６０ｎｍの吸光度を測定する。
法にて実施する。先ず、カゼイン溶液１．５ｍｌに緩衝
液１．０ｍｌを加えて４０℃で５分間加温し、このカゼ
イン溶液に予め調製した酵素溶液０．５ｍｌを加えて反
応開始液として酵素反応を開始する。酵素反応において
は、４０℃で６０分間反応させた後、０．４Ｍトリクロ
ール酢酸溶液（ＴＣＡ）３ｍｌを加えて反応を停止し、
反応停止液中の沈殿を濾別する。得られた濾液１ｍｌを
分取し、この濾液に０．４Ｍ炭酸ナトリウム溶液５ｍｌ
と０．４Ｎフェノール試薬１ｍｌを加えて４０℃で３０
分間発色を行い、６６０ｎｍの吸光度を測定する。
【００２６】本実験における電解モデル水を使用した供
試水、酵素溶液、反応開始液の性質変化の状態を表５に
示すとともに、同供試水に基づく酵素の活性状態を表６
に示す。また、電解モデル水およびｐＨモデル水を供試
水とするｐＨと酵素活性比との関係を図４のグラフに示
す。但し、図４に示す酵素活性比は、ｐＨ７の原水にお
ける酵素活性を１とする各酵素活性の比率を意味する。
試水、酵素溶液、反応開始液の性質変化の状態を表５に
示すとともに、同供試水に基づく酵素の活性状態を表６
に示す。また、電解モデル水およびｐＨモデル水を供試
水とするｐＨと酵素活性比との関係を図４のグラフに示
す。但し、図４に示す酵素活性比は、ｐＨ７の原水にお
ける酵素活性を１とする各酵素活性の比率を意味する。
【００２７】
【表５】
【００２８】
【表６】
【００２９】酵素活性については、供試水が酸性域では
酵素活性が上昇し、かつアルカリ性域では酵素活性が低
下している。この傾向は電解モデル水、ｐＨモデル水と
もに共通しているが、酸性性域での酵素活性の上昇率お
よびアルカリ性域では酵素活性の低下率は、ｐＨモデル
水に比較して電解モデル水が大きい。電解モデル水がｐ
Ｈ３である場合には酵素活性が４２％上昇し、電解モデ
ル水がｐＨ４である場合には酵素活性が３８％上昇して
いて、ｐＨモデル水に比較して酵素活性化が高い。
酵素活性が上昇し、かつアルカリ性域では酵素活性が低
下している。この傾向は電解モデル水、ｐＨモデル水と
もに共通しているが、酸性性域での酵素活性の上昇率お
よびアルカリ性域では酵素活性の低下率は、ｐＨモデル
水に比較して電解モデル水が大きい。電解モデル水がｐ
Ｈ３である場合には酵素活性が４２％上昇し、電解モデ
ル水がｐＨ４である場合には酵素活性が３８％上昇して
いて、ｐＨモデル水に比較して酵素活性化が高い。
【００３０】以上のことから、酵素の活性化を図るには
電解生成水が有効であること、酵素として酸性プロテア
ーゼを採用する場合には、電解生成酸性水が極めて有効
であることが判明した。電解生成酸性水のこのような効
果は、ｐＨモデル水とを比較すればｐＨのみに起因する
ものではなく、電解生成酸性水の電解機能の総合による
ものと認められる。
電解生成水が有効であること、酵素として酸性プロテア
ーゼを採用する場合には、電解生成酸性水が極めて有効
であることが判明した。電解生成酸性水のこのような効
果は、ｐＨモデル水とを比較すればｐＨのみに起因する
ものではなく、電解生成酸性水の電解機能の総合による
ものと認められる。
【００３１】（実験例３）リパーゼとして生化学工業株
式会社製リパーゼ（Rhizopus delemar起源）を採用する
とともに、酵素を活性化するための供試水としては実験
例１で使用した電解モデル水（電解生成水）およびｐＨ
モデル水を採用して、図５のフローチャートに示す方法
で酵素の活性化実験を下記の条件で行った。
式会社製リパーゼ（Rhizopus delemar起源）を採用する
とともに、酵素を活性化するための供試水としては実験
例１で使用した電解モデル水（電解生成水）およびｐＨ
モデル水を採用して、図５のフローチャートに示す方法
で酵素の活性化実験を下記の条件で行った。
【００３２】基質：トリオレン。緩衝液：０．０５Ｍで
ｐＨが５．６の酢酸緩衝液。賦活剤：０．１ＭＣａＣｌ
2溶液。反応停止剤：エタノール。酵素溶液の調製：リ
パーゼ１０ｍｇに供試水を加えて１０ｍｌに定容し、室
温（２５℃）で５分間放置したもの。
ｐＨが５．６の酢酸緩衝液。賦活剤：０．１ＭＣａＣｌ
2溶液。反応停止剤：エタノール。酵素溶液の調製：リ
パーゼ１０ｍｇに供試水を加えて１０ｍｌに定容し、室
温（２５℃）で５分間放置したもの。
【００３３】実験方法：図５のフローチャートに示す方
法にて実施する。先ず、トリオレン０．４８ｍｌに酢酸
緩衝液１．８ｍｌおよび賦活剤であるＣａＣｌ2溶液
０．２ｍｌを加えて３０℃で１０分間加温し、これに酵
素溶液０．２ｍｌを加えて反応開始液として酵素反応を
開始する。酵素反応においては、３０℃で３０分間振と
うしつつ反応させた後、反応液にエタノール８ｍｌを加
えて反応を停止し、反応停止させた反応液を酵素活性測
定に供する。
法にて実施する。先ず、トリオレン０．４８ｍｌに酢酸
緩衝液１．８ｍｌおよび賦活剤であるＣａＣｌ2溶液
０．２ｍｌを加えて３０℃で１０分間加温し、これに酵
素溶液０．２ｍｌを加えて反応開始液として酵素反応を
開始する。酵素反応においては、３０℃で３０分間振と
うしつつ反応させた後、反応液にエタノール８ｍｌを加
えて反応を停止し、反応停止させた反応液を酵素活性測
定に供する。
【００３４】酵素活性測定：反応液にエタノール８ｍｌ
および蒸留水２．６８ｍｌを加えて、撹拌しつつ０．０
１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ９まで滴定し、下式により
酵素活性を算出する（０．０１Ｎ水酸化ナトリウム１ｍ
ｌに相当するオレイン酸量を１単位（Ｕ）とする。但
し、ブランクテストには、酵素溶液に代えて蒸留水を使
用）。
および蒸留水２．６８ｍｌを加えて、撹拌しつつ０．０
１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ９まで滴定し、下式により
酵素活性を算出する（０．０１Ｎ水酸化ナトリウム１ｍ
ｌに相当するオレイン酸量を１単位（Ｕ）とする。但
し、ブランクテストには、酵素溶液に代えて蒸留水を使
用）。
【００３５】リパーゼ活性（unit）＝５×（Ｔ−Ｔb）
×ｎ Ｔ：試料の水酸化ナトリウム滴下量、Ｔb：ブラ
ンクテストでの水酸化ナトリウム滴下量、ｎ：希釈率。
×ｎ Ｔ：試料の水酸化ナトリウム滴下量、Ｔb：ブラ
ンクテストでの水酸化ナトリウム滴下量、ｎ：希釈率。
【００３６】本実験における電解モデル水を使用した供
試水、酵素溶液、反応開始液の性質変化の状態を表７に
示すとともに、同供試水に基づく酵素の活性状態を表８
に示す。また、電解モデル水およびｐＨモデル水を供試
水とするｐＨと酵素活性比の関係を図６のグラフに示
す。但し、図６に示す酵素活性比は、ｐＨ７の原水にお
ける酵素活性を１とする各酵素活性の比率を意味する。
試水、酵素溶液、反応開始液の性質変化の状態を表７に
示すとともに、同供試水に基づく酵素の活性状態を表８
に示す。また、電解モデル水およびｐＨモデル水を供試
水とするｐＨと酵素活性比の関係を図６のグラフに示
す。但し、図６に示す酵素活性比は、ｐＨ７の原水にお
ける酵素活性を１とする各酵素活性の比率を意味する。
【００３７】
【表７】
【００３８】
【表８】
【００３９】酵素活性については、供試水が酸性域では
酵素活性が上昇し、かつアルカリ性域では酵素活性が低
下している。この傾向は電解モデル水、ｐＨモデル水と
もに共通しているが、酸性域での酵素活性の上昇率は電
解モデル水が大きく、アルカリ性域での低下率はｐＨモ
デル水が大きい。電解モデル水がｐＨ３である場合には
酵素活性が１８％上昇し、電解モデル水がｐＨ４である
場合には酵素活性が１６％上昇していて、ｐＨモデル水
に比較して酵素活性化が高い。
酵素活性が上昇し、かつアルカリ性域では酵素活性が低
下している。この傾向は電解モデル水、ｐＨモデル水と
もに共通しているが、酸性域での酵素活性の上昇率は電
解モデル水が大きく、アルカリ性域での低下率はｐＨモ
デル水が大きい。電解モデル水がｐＨ３である場合には
酵素活性が１８％上昇し、電解モデル水がｐＨ４である
場合には酵素活性が１６％上昇していて、ｐＨモデル水
に比較して酵素活性化が高い。
【００４０】以上のことから、酵素の活性化を図るには
電解生成水が有効であること、酵素としてリパーゼを採
用する場合には、電解生成酸性水が極めて有効であるこ
とが判明した。電解生成酸性水のこのような効果は、ｐ
Ｈモデル水とを比較すればｐＨのみに起因するものでな
いものではなく、電解生成酸性水の電解機能の総合によ
るものと認められる。
電解生成水が有効であること、酵素としてリパーゼを採
用する場合には、電解生成酸性水が極めて有効であるこ
とが判明した。電解生成酸性水のこのような効果は、ｐ
Ｈモデル水とを比較すればｐＨのみに起因するものでな
いものではなく、電解生成酸性水の電解機能の総合によ
るものと認められる。
【図１】α−アミラーゼの活性化実験を実施するための
フローチャートである。
フローチャートである。
【図２】α−アミラーゼの活性化実験における供試水の
ｐＨと酵素活性比との関係を示すグラフである。
ｐＨと酵素活性比との関係を示すグラフである。
【図３】酸性プロテアーゼの活性化実験を実施するため
のフローチャートである。
のフローチャートである。
【図４】酸性プロテアーゼの活性化実験における供試水
のｐＨと酵素活性比との関係を示すグラフである。
のｐＨと酵素活性比との関係を示すグラフである。
【図５】リパーゼの活性化実験を実施するためのフロー
チャートである。
チャートである。
【図６】リパーゼの活性化実験における供試水のｐＨと
酵素活性比との関係を示すグラフである。
酵素活性比との関係を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 新谷 浩介 愛知県豊明市栄町南館３番の16 ホシザキ 電機株式会社内 (72)発明者 滝波 弘一 島根県松江市内中原町237−３ (72)発明者 和泉 好計 鳥取県鳥取市湖山町西４丁目110 鳥取大 学白浜（二）宿舎ＲＣ２−302 Ｆターム(参考） 4B050 DD03 DD13 HH01 KK02 4D061 DA03 DB07 DB08 EA02 EB02 EB12 ED13
Claims (5)
- 【請求項１】酵素反応に使用される酵素を活性化する方
法であり、同酵素を電解生成水に溶解して活性化するこ
とを特徴とする酵素の活性化方法。 - 【請求項２】請求項１に記載の酵素の活性化方法におい
て、前記電解生成水は希釈食塩水を電気分解して得られ
る電解生成水であることを特徴とする酵素の活性化方
法。 - 【請求項３】請求項１に記載の酵素の活性化方法におい
て、前記酵素としてα−アミラーゼを採用し、かつ、前
記電解生成水として電解生成アルカリ性水を採用するこ
とを特徴とする酵素の活性化方法。 - 【請求項４】請求項１に記載の酵素の活性化方法におい
て、前記酵素として酸性プロテアーゼを採用し、かつ、
前記電解生成水として電解生成酸性水を採用することを
特徴とする酵素の活性化方法。 - 【請求項５】請求項１に記載の酵素の活性化方法におい
て、前記酵素としてリパーゼを採用し、かつ、前記電解
生成水として電解生成酸性水を採用することを特徴とす
る酵素の活性化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05698599A JP4347940B2 (ja) | 1999-03-04 | 1999-03-04 | 酵素の活性化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05698599A JP4347940B2 (ja) | 1999-03-04 | 1999-03-04 | 酵素の活性化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000245453A true JP2000245453A (ja) | 2000-09-12 |
| JP4347940B2 JP4347940B2 (ja) | 2009-10-21 |
Family
ID=13042801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05698599A Expired - Fee Related JP4347940B2 (ja) | 1999-03-04 | 1999-03-04 | 酵素の活性化方法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4347940B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1669442A2 (en) | 2004-12-09 | 2006-06-14 | Kao Corporation | Method of activating alpha-amylase |
| JP2007325553A (ja) * | 2006-06-08 | 2007-12-20 | Kao Corp | α−アミラーゼの活性化方法 |
| JP2007325554A (ja) * | 2006-06-08 | 2007-12-20 | Kao Corp | α−アミラーゼの活性化方法 |
| JP2021101639A (ja) * | 2019-12-25 | 2021-07-15 | 株式会社ミカサ | 動物の飼育方法、堆肥の製造方法、および酵素反応の制御方法 |
-
1999
- 1999-03-04 JP JP05698599A patent/JP4347940B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1669442A2 (en) | 2004-12-09 | 2006-06-14 | Kao Corporation | Method of activating alpha-amylase |
| US7863235B2 (en) | 2004-12-09 | 2011-01-04 | Kao Corporation | Method of activating α-amylase with oxidizing agents |
| JP2007325553A (ja) * | 2006-06-08 | 2007-12-20 | Kao Corp | α−アミラーゼの活性化方法 |
| JP2007325554A (ja) * | 2006-06-08 | 2007-12-20 | Kao Corp | α−アミラーゼの活性化方法 |
| JP4628999B2 (ja) * | 2006-06-08 | 2011-02-09 | 花王株式会社 | α−アミラーゼの活性化方法 |
| JP4628998B2 (ja) * | 2006-06-08 | 2011-02-09 | 花王株式会社 | α−アミラーゼの活性化方法 |
| JP2021101639A (ja) * | 2019-12-25 | 2021-07-15 | 株式会社ミカサ | 動物の飼育方法、堆肥の製造方法、および酵素反応の制御方法 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4347940B2 (ja) | 2009-10-21 |
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