HU224126B1 - Acelluláris pertussis vakcina diftéria- és tetanusz-toxoidokkal - Google Patents

Abstract

A találmány tárgya diftéria-, tetanusz- és pertussisantigénekettartalmazó vakcinakompozíció, amely az egyes antigéneket: a diftéria-toxoidot (D), tetanusz-toxoidot (T), pertussis-toxint (PT), rostoshemagglutinint (FHA) és pertaktint (69K) alacsony dózisbantartalmazza. A találmány szerinti vakcina képes a pertussismegelőzésére, miközben rendkívül alacsony reaktogenicitást mutat. Atalálmány tárgyát képezik továbbá azok a vakcinakompozíciók, amelyek afentieken kívül további antigéneket is tartalmaznak.

Description

A találmány tárgyát képezik továbbá azok a vakcinakompozíciók, amelyek a fentieken kívül további antigéneket is tartalmaznak.

HU 224 126 Β1

A leírás terjedelme 16 oldal (ezen belül 10 lap ábra)

HU 224 126 Β1

A jelen találmány új vakcinakészítményekre vonatkozik, amelyek a Bordetella pertussis 69 kd-os külső membránfehérjéjét alacsony dózisban tartalmazzák (erre a fehérjére, melyet a 0 162 639 számú európai szabadalmi leírásban ismertettek, az alábbiakban mint „69K” vagy „69K antigén” vagy mint pertaktin hivatkozunk). [A rekombináns 69K-t (P69) N. F. Fairweather és munkatársai írták le, lásd Symposium On Pertussis (Bethesda), 1990. szeptember 26-28.] A találmány különösen egy olyan vakcinára vonatkozik, amely egynél több antigént tartalmaz, előnyösen egy multivalens (többértékű) vakcina, azaz többféle betegség enyhítésére vagy kezelésére szolgáló vakcina, amelyben a 69K alacsony dózisban van jelen.

Ismert, hogy a 69K egyik lényeges komponense a pertussis hatékony megelőzésére szolgáló acelluláris, azaz nemsejtes vakcináknak (Pa-vakcinák).

Egészséges felnőttekben 5 acelluláris pertussisvakcina dózis-válaszait tanulmányozták, melyet Keitel és munkatársai tettek közzé 1996 májusában az US National Institutes of Health (NIH) által.

A 69K-tartalmú vakcinákat, köztük trivalens (háromértékű) vakcinákat, amelyek diftéria (D), tetanusz (T) és pertussis (Pa, szamárköhögés) elleni antigéneket tartalmaznak, alkalmaztak Olaszországban és Svédországban folytatott klinikai vizsgálatokban, és ezek védjegyzettek (például INFANRIX-DTPa védjegyzett néven, gyártó: SmithKIine Beecham Biologicals). Az ilyen vakcinák pertussiskomponense tipikusan pertussis-toxint (PT), fonalas hemagglutinint (FHA) és 69K-t tartalmaz. Az INFANRIX-DTPa-ban a D:T:PT:FHA:69K mennyiségei tipikusan 25Lf:10Lf:25 pg:25 pg:8 pg per 0,5 ml vakcinadózis.

Egyéb 69K-t tartalmazó multivalens vakcinák is ismertek, így például a hepatitis B elleni antigént és diftéría, tetanusz és pertussis elleni antigént (Hep B, DTPa) tartalmazó vakcinákat a WO 93/24148 számú PCT-beli közzétételi irat ismerteti. Ezekben a készítményekben a D:T:PT:FHA:69K mennyiségei ugyancsak 25Lf:10Lf:25 pg:25 pg:8 pg a vakcina 0,5 ml-es dózisaiban.

Vizsgálataink során azt találtuk, hogy egy olyan diftéria-, tetanusz- és pertussisvakcina, amely minden egyes komponenst, a diftéria-toxoidot (D), a tetanusz-toxoidot (T), a PT-t, az FHA-t és a 69K-t alacsony dózisban tartalmazza (a továbbiakban az ilyen alacsony dózisú vakcinát dtpa-vakcinának rövidítjük), megtartja azt a képességét, hogy megelőzze a pertussist (és nagyon hatékony ebben a tekintetben), miközben azzal az előnnyel rendelkezik, hogy rendkívül alacsony reaktogenicitást mutat. Az itt leírt határokon belül az ilyen vakcinák biztonságosak, amikor embereknek beadjuk azokat, és gyors védelmet indukálnak a fertőzéssel szemben. Dtpa-t és más antigéneket tartalmazó kombinált vakcinák esetében azt találtuk, hogy nincs interferencia, azaz az ilyen vakcinák nem vesztik el immunogenicitásukat, és hatékonyak embereknek történő beadás során.

Előnyösen a találmány szerinti vakcinák gyerekeknek történő beadásra alkalmasak emlékeztetőinjekció (booster) formájában, amely a korábbi egy vagy több (tipikusan 1-3) vakcinadózis beadását követi, melyek a D-, T- és Pa-antigének magasabb dózisait tartalmazzák, mint például a fentiekben leírt INFANRIX-DTPA vakcina (D:T:PT:FHA:69K=25Lf:10Lf:25 pg:25 pg:8 pg per 0,5 ml vakcinadózis). A találmány szerinti vakcinák nagy értékűek felnőtteknek és serdülőkorúaknak történő beadáskor is.

A fentiek alapján tehát a találmány tárgya egy vakcinakompozíció, amely a D-, Τ-, PT-, FHA- és 69K-antigének (azaz egy dtpa-vakcinakompozíció) mindegyikének alacsony dózisát tartalmazza. Az magától értetődik, hogy a találmány szerinti vakcinakompozíciót egy alkalmas hordozóval vagy adjuvánssal együtt formulázzuk.

A dtpa-vakcina vagy dtpa-vakcinakompozíció esetén egy dózis azt jelenti, hogy a D koncentrációja a vakcina 0,5 ml-es dózisában nem haladja meg az 5 Lf-et, és előnyösen 1-4 Lf, még előnyösebben körülbelül 2 Lf; a T koncentrációja a vakcina 0,5 ml-es dózisában nem haladja meg a 10 Lf-et, és előnyösen 2,5-7,5 Lf, még előnyösebben körülbelül 5 Lf; a PT koncentrációja a vakcina 0,5 ml-es dózisában nem haladja meg a 10 pg-ot, és előnyösen 2-10 pg, még előnyösebben körülbelül 8 pg; az FHA koncentrációja a vakcina 0,5 ml-es dózisában nem haladja meg a 10 pg-ot, és előnyösen 2-10 pg, még előnyösebben körülbelül 8 pg; és a 69K koncentrációja a vakcina 0,5 ml-es dózisában nem haladja meg a 4 pg-ot, és előnyösen 0,5-3 pg tartományban van. Még előnyösebben a 69K koncentrációja a vakcinában 2-3 pg, és legelőnyösebben körülbelül 2,5 pg pertaktin per 0,5 ml vakcinadózis.

A találmány szerinti vakcinakompozíció egyik kiviteli alakjában tartalmazhat például (körülbelül) 2,5 pg PT-t, 2,5 pg FHA-t, 0,8 pg 69K-t a vakcina 0,5 ml-es dózisában.

Előnyösen a találmány szerinti vakcinakompozíciók (megközelítőleg) 8 pg PT-t, 8 pg FHA-t és 2,5 pg 69K-t tartalmaznak a vakcina 0,5 ml-es dózisában.

Egy különösen előnyös kiviteli alakban a találmány szerinti vakcinakompozíciók 8 pg PT-t, 8 pg FHA-t,

2,5 pg 69K-t, 2 Lf D-t és 5 Lf T-t tartalmaznak a vakcina 0,5 ml-es dózisában. Ezt használtuk a „dtpa 005” vizsgálatban, melyet az alábbiakban ismertetünk.

Egy másik előnyös kiviteli formában a találmány szerinti vakcinakompozícióban a D-komponens mennyiségét megnöveltük 2,5 Lf-re.

Egy további előnyös kiviteli alakban a dtpa háromkomponensű vakcinakompozíció az alábbiakat tartalmazza:

pg PT pg FHA

2,5 pg 69K diftéria-toxoid >2 IU tetanusz-toxoid >20 IU

0,3 mg Al-sók

2,5 mg fenoxi-etanol

Ezt használtuk serdülőkorúaknái a „dtpa 003” vizsgálatban, melynek eredményeit az alábbiakban adjuk meg.

A PT-komponens adott esetben lehet rekombináns (például melyet az EP 0 306 318, EP 0 322 533,

HU 224 126 Β1

EP Ο 396 964, EP Ο 322 115 és EP 0 275 689 számú közrebocsátási iratokban ismertettek) vagy a PT-komponens lehet toxoidált, például amint az EP 0 515 415 számú közrebocsátási iratban leírták. Lásd még az EP 0 427 462 és WO 91/12020 közrebocsátási iratokat a pertussisantigének előállítására.

A találmány további tárgya egy vakcinakompozíció, amely a dtpa-t (amint a fentiekben definiáltuk) egy vagy több egyéb antigénnel kombinálva tartalmazza, előnyösen hepatitis B elleni antigénnel (Hep B), azaz Hep B-dtpa-vakcina. Ilyen típusú multivalens vakcinákat általánosan a WO 93/24148 számú közrebocsátási iratban írtak le, kivéve, hogy a D-, Τ-, TP-, FHA- és 69K-antigéneket a fentiekben definiált alacsony dózisban használták volna a készítményben. Amint a WO 93/24148 számú iratban ismertették, a hepatitis B antigén előnyösen hepatitis B felületi antigén.

A hepatitis B felületi antigén dózisa normálisan az 5-20 gg per 0,5 ml vakcinadózis.

A hepatitis B felületi antigén (HBsAg) előállítása jól dokumentált. Lásd például Harford és munkatársai: Develop. Bioi. Standard 54, 125 (1983), Gregg és munkatársai: Biotechnology 5, 479 (1987), EP-A 0 226 846, EP-A 0 299 108, melyeket referenciaként beépítünk a bejelentésbe.

A „hepatitis B felületi antigén” vagy „HBsAg” - az itt használt értelemben - bármely olyan HBsAg antigén vagy ennek fragmense lehet, amely a HBV felületi antigén antigenicitásával rendelkezik. Az magától értetődik, hogy a HBsAg S antigén [lásd Tiollais és munkatársai; Natúré 317, 489 (1985) és az abban megadott referenciák] szekvenciájának 226. aminosava mellett a HBsAg, amint itt leírtuk - kívánt esetben -, tartalmazhatja a pre-S szekvencia egészét vagy annak egy részét, amint a fenti referenciákban és az EP-A 0 278 940 közrebocsátási iratban leírták. A HBsAg - amint itt használjuk vonatkozik a variánsokra is, például az „escape mutáns”-ra (lásd WO 90/14703). Egy további szempont szerint a HBsAg tartalmazhatja az EP-A 0 414 374 számú közrebocsátási iratban ismertetett L* fehérjét, azaz egy olyan fehérjét, amelynek aminosavszekvenciája a hepatitis B vírus nagy (L) proteinje (ad vagy ay subtype) aminosavszekvenciájának részeiből áll, és azzal jellemezhető, hogy az aminosavszekvencia:

(a) az említett L protein 12-52. maradékaiból, ezt követően a 133-145. maradékaiból, majd a 175-400. maradékokból áll; vagy (b) az említett L protein 12., ezt követően 14-52., ezt követően a 133-145., majd a 175-400. maradékaiból áll.

A HBsAg az EP 0 198 474 vagy EP 0 304 578 számú közrebocsátási iratokban leírt polipeptidekre is vonatkozik.

Normálesetben a HBsAg lehet részecske formában. A részecske tartalmazhatja az S proteint önmagában, vagy lehet egy kompozíciós részecske, mint például (L*, S), amelyben az L* a fentiekben definiált, és S a hepatitis B felületi antigén S proteinjét jelenti.

Előnyösen a HBsAg-t alumínium-foszfáton adszorbeáljuk, amint azt a WO 93/24148 számú iratban közölték. Más antigének adszorbeálhatók alumíniumfoszfáton vagy alumínium-hidroxidon, de néhány esetben kielégítő eredményeket kapunk, ha a másik antigént alumínium-foszfátra adszorbeáljuk.

A találmány szerinti vakcinákba egyéb antigéneket is belefoglalhatunk, hogy multivalens vakcinákat szolgáltassunk csecsemők, serdülőkorúak vagy felnőttek számára. Egyéb alkalmas antigének lehetnek például azok az ismert antigének, amelyek védelmet nyújtanak Haemophilus influenzáé b (Hib) és/vagy polio (IPV) és/vagy hepatitis A vírus ellen (lásd WO 93/24148).

Az ilyen vakcinákban felhasználható egyéb komponensek már kereskedelmi forgalomban beszerezhetők, és részletes tájékoztatás kapható róluk a World Health Organisationtől. így például az IPV-komponens a Salk inaktivált poliovakcina lehet. Ez a komponens védelmet biztosít a hepatitis A vírus ellen, és termékként mint „Havrix” ismert (SmithKIine Beecham Biologicals), amely elölt attenuált vakcina és a HAV HM-175 törzséből származik [lásd „Inactivated Vaccines fór Hepatitis A”, F. E. Andre, A. Hepburn és E. D. Hondt: Prog. Med. Virol. 37, 72-95 (1990) és a „Havrix” termék monográfiáját a SmithKIine Beecham Biologicals publikálta (1991)]. Ennek megfelelően, a hepatitis B komponens tartalmazhatja az „S antigént, amely „Engerix-B” néven (SmithKIine Beecham Biologicals) már kereskedelmi forgalomban van.

Minden egyes vakcinadózisban az antigént olyan mennyiségben alkalmazzuk, amely immunprotektív választ indukál szignifikáns, káros mellékhatások nélkül, amelyek tipikusan a vakcinákban előfordulnak. Ez a mennyiség attól függ, hogy milyen specifikus immunogéneket alkalmazunk. Emlékeztetőoltásokat is beadhatunk. A találmány szerinti vakcinák emlékeztetőoltásai az előzőleg teljes sejtes pertussis (Pw)-vakcinával beoltott egyénekben éppen olyan hatásosak, mint az előzőleg nemteljes sejtes (acelluláris) pertussis (Pa)-vakcinával beoltott egyénekben.

Általánosságban a találmány szerinti bármely vakcinakészítményt az alábbiak szerint állíthatjuk elő. A szükséges komponenseket egy megfelelő adjuvánsra, legelőnyösebben alumínium-hidroxidra vagy alumínium-foszfátra adszorbeáljuk. Az említett komponensek teljes mértékű és stabil adszorpciójához szükséges idő után a különböző komponenseket alkalmas körülmények között kombinálhatjuk.

Egyik előnyös kiviteli mód szerint a találmány szerinti hepatitis B-tartalmú kombinált vakcinakompozíciót úgy állítjuk elő, hogy alumínium-foszfátra adszorbeált HBsAg-t egy vagy több, alumínium-hidroxidra vagy alumínium-foszfátra adszorbeált antigénnel összekeverünk.

A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük.

1. példa: Dtpa-vakcina előállítása és vizsgálata felnőtteken

A találmány szerinti dtpa-vakcinát standard metodikákkal, a WO 93/24148 számú iratban a magas dózisú DTPa-vakcina fomnulázására leírt eljárással állítottuk elő.

HU 224 126 Β1

Ezzel a vakcinával felnőtteken végzett klinikai vizsgálatban - melynek kódja „dtpa 005” - kapott eredményeket a mellékelt ábrákon mutatjuk be, amelyekben a dtpa egy találmány szerinti vakcinát jelöl, és a PRN a pertaktin (69K) rövidítésére szolgál. A dT-t a standard diftéria-tetanusz vakcina rövidítésére használjuk, mely a Behringwerkétől beszerezhető, és a diftéria-toxoidot alacsony dózisban és a tetanusz-toxoidot magas dózisban tartalmazza.

Egy nyitott, randomizált, egyetlen dózisú vizsgálatot végeztünk felnőtteken (életkor 18-45 év) Belgiumban, amelyben a fenti módon formulázott dtpa-t 60 egyénben vizsgáltuk összehasonlítva a dT-vel (Behringwerke) 60 egyénben.

A dtpa-val kezelt csoportban 28 férfit (átlagéletkor 33 év) és 32 nőt (átlagéletkor 34 év) tanulmányoztunk. A dT-csoportban 32 férfit (átlagéletkor 34 év) és 28 nőt (átlagéletkor 35 év) vizsgáltunk.

Kizártuk azokat, akik az utolsó 10 évben diftéria-, tetanusz- vagy pertussisoltást kaptak, vagy akiknek az utolsó 5 évben szamárköhögés-betegségük volt.

Szérumokat vettünk a vakcinálás előtt, és 1 hónapig a vakcinálás után, pontosan nyomon követve 15 nap múlva és nem pontosan nyomon követve 30 nap múlva.

A reaktogenicitási adatokat, antitestválaszokat, anti-PT-eredményeket, anti-FHA-eredményeket és anti-PRN- (pertaktin) eredményeket a mellékelt ábrákon mutatjuk be.

Az ábrákon látható eredmények ugyanazt mutatják, mint amit Keitel és munkatársai által közöltek a NIH (AAPT) tanulmányokban, melyeket monovalens pa-vakcinával kaptak. Hivatkozunk a SmithKIine Beecham (SB) magas, közepes (SB-Med) és alacsony dózisú készítményeire, amelyek 25 pg PT-t, 25 pg FHA-t és 8 pg 69K-t (magas); illetve 8 pg PT-t, 8 pg FHA-t és

2,5 pg 69K-t (médium); illetőleg 2,5 pg PT-t, 2,5 pg FHA-t és 0,8 pg 69K-t (alacsony) tartalmaznak.

Látható, hogy a találmány szerinti dtpa-vakcina biztonságos és immunogén felnőttekben. Továbbá a vizsgált, találmány szerinti vakcinákra felnőttekben adott immunválaszok legalább bizonyos ideig magasabbak azoknál a válaszoknál, melyeket az ismert nagy dózisú DTPa-vakcináknál megfigyeltek, melyekkel korábban a csecsemőket az USA-ban, Németországban és Olaszországban beoltották.

2. példa: Vizsgálatok serdülőkorúakban („dtpa

003”)

Egy nyitott, randozimált egyetlen dózisú vizsgálatot végeztünk 10-12 éves korú serdülőkben felhasználva a fentiekben leírt módon készített dtpa-t 120 személyben összehasonlítva a dT-vel (Finnország) 120 személyben. A találmány szerinti dtpa-vakcinának ugyanazt a mennyiségét használtuk mind a dtpa 005, mind a dtpa 003 vizsgálatokban.

A kereskedelemben kapható dT (Finnország) a diftéria-toxoidot >4 IU és a tetanusz-toxoidot >40 IU mennyiségben tartalmazza.

A dtpa-csoportban 70 fiút (átlagéletkor 10,9 év) és 49 lányt (átlagéletkor 10,8 év) vizsgáltunk. A dT-csoportba 62 fiú (átlagéletkor 10,9 év) és 56 lány (átlagéletkor 11,0 év) tartozott.

A kísérletben részt vevő serdülők életük első két évében 4 részletben DTPw-oltásban részesültek.

Azokat a személyeket kizártuk a vizsgálatból, akik a második életévük után D-, T- vagy P-oltást kaptak, vagy a betegség lefolyása alapján diftériájuk, tetanuszuk vagy szamárköhögésük volt.

Szérumokat gyűjtöttünk a vakcinálás előtt és után 1 hónappal, a vakcinálás után pontosan nyomon követve 15 nap múlva és nem pontosan nyomon követve 30 nap múlva.

A mellékelt ábrákon bemutatjuk a reaktogenicitási adatokat, antitestválaszokat, anti-PT-eredményeket, anti-FHA-eredményeket és anti-PRN- (pertaktin) eredményeket.

Az eredményekből látható, hogy a találmány szerinti dtpa-vakcina biztonságos és immunogén serdülőkben.

Megjegyzés: Az ábrákon, a felnőtteken végzett vizsgálatokban (dtpa 005) és a serdülőkön végzett vizsgálatokban (dtpa 003) kapott antitestválaszokra vonatkozó eredmények az individuális vakcinálás előtti és utáni diftéria és tetanusz elleni antitesttiterek eloszlását mutatják az egyénekben beleértve az immungenicitás átfogó analízisét (>0,1 lU/ml alsó határként meghatározott a védelemre). Geometrikusán is megadjuk az antidiftéria- (anti-D) és antitetanusz- (anti-T) antitesttitereket lU/ml-ben.

A dtpa 005 és dtpa 003 vizsgálatokra vonatkozó ábrák, amelyek az anti-ΡΤ-, anti-FHA- és anti-PRN-titereket illusztrálják, bemutatják a vakcinára adott válasz mértékét (az összes vizsgált személy számának /n/ %-ában) és az egyes vakcinakomponensekre (PT, FHA és PRN) kapott, geometrikusán ábrázolt antitesttitereket (GMT, EU/ml-ben), magukban foglalva az immungenicitás átfogó analízisét.

3. példa: Hep B-dtpa vakcina előállítása

A formulázást pontosan a WO 93/24148 számú közzétételi irat 5. példájában foglaltak szerint végeztük, kivéve, hogy a D, T, PT, FHA és 69K fentiekben definiált alacsony dózisait alkalmaztuk a teljes vakcina 0,5 ml-es dózisában.

Egyik előnyös kompozícióban a dtpa mennyiségei megközelítőleg a következők voltak: PT (8 pg), FHA (8 pg), 69K (2,5 pg), D (2 Lf) és T (5 Lf) a vakcina 0,5 ml-es dózisában.

Egy másik előnyös kiviteli alakban a D mennyiségét megnöveltük 2,5 Lf-re.

A hepatitis B felületi antigén mennyisége a vakcinakompozícióban 5 és 20 pg között variálható, és tipikusan 10 pg a vakcina 0,5 ml-es dózisában.

Claims (9)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Vakcinakompozíció, amely diftéria- (D), tetanusz(T) és acelluláris pertussis- (Pa) antigéneket és egy adjuvánst tartalmaz, és a vakcinakompozíció 0,5 ml-es dózisában D koncentrációja 1-4 Lf; T koncentrációja

   HU 224 126 Β1
2. 2,5-7,5 Lf; és a Pa-komponens PT-t (pertussis-toxoid), FHA-t (fonalas hemagglutinin) és pertaktint (69K) tartalmaz, ahol a vakcina 0,5 ml-es dózisában PT koncentrációja 2-10 pg; FHA koncentrációja 2-10 pg; és 69K koncentrációja 0,5-3 pg. 5

   2. Az 1. igénypont szerinti vakcinakompozíció, amely a vakcinakompozíció 0,5 ml-es dózisában 8 pg PT-t,

   8 pg FHA-t, 2,5 pg 69K-t, 2 Lf D-t és 5 Lf T-t tartalmaz.
3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti vakcinakompozíció, amely egy vagy több további antigént tartalmaz. 10
4. 4. A 3. igénypont szerinti vakcinakompozíció, amely további antigénként hepatitis B felületi antigént tartalmaz.
5. 5. A 4. igénypont szerinti vakcinakompozíció, amelyben a hepatitis B felületi antigén a HBsAg S antigénje.
6. 6. A 3. vagy 4. igénypont szerinti vakcinakompozíció, amely egy olyan további antigént tartalmaz, amely immunitást biztosít Hib-, polio- vagy hepatitis A-fertőzés közül egy vagy több ellen.
7. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcinakompozíció, amely formulázáshoz használt adjuvánsként alumínium-hidroxidot tartalmaz.
8. 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcinakompozíció, amely formulázáshoz alkalmazott adjuvánsként alumínium-foszfátot tartalmaz.
9. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vakcinakompozíció alkalmazása csecsemők, serdülők és felnőttek Bordetella períuss/'s-fertőzésének megelőzésére szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására.