CZ295954B6 - Vakcinační prostředek - Google Patents

Abstract

Vakcinační prostředek obsahuje difterický antigen (D), tetanový antigen (T) a bezbuněčný antigen pertuse (Pa) a pomocné činidlo, kde koncentrace D je 1 až 4 Lf na dávku 0,5 ml vakcíny, koncentrace T je 2,5 až 7,5 Lf na dávku 0,5 ml vakcíny a Pa složka obsahuje PT (toxoid Bordetella pertussis, popřípadě rekombinantní), FHA (vláknitý hemaglutinin) a pertactin (69K), kde koncentrace PT je 2 až 10 .mi.g na dávku 0,5 ml vakcíny, koncentrace FHA je 2 až 10 .mi.g na dávku 0,5 ml vakcíny a koncentrace 69K je 0,5 až 3 .mi.g na dávku 0,5 ml vakcíny. Mimoto může vakcína ještě obsahovat přídatné antigeny. Pomocným prostředkem je s výhodou hydroxid nebo fosforečnan hlinitý.

Description

Předkládaný vynález se týká nových vakcinačních prostředků, které obsahují nízkou dávku 69 kD proteinu zevní membrány Bordetella pertussis (který je zde označován jako 69K nebo 69K antigen nebo pertacin a který je popsán v Evropské patentové přihlášce 0 162 639). Rekombinantní 69K (P69) byl popsán v N.F. Fairweather et al., Symposium On Pertussis (Bethesda), 26 - 28.10.1990). Vynález se přesněji týká vakcíny obsahující více než jeden antigen, zejména multivalentní vakcíny, to znamená vakcíny pro zmírnění nebo léčbu.více než jednoho onemocnění, ve které je obsažena nízká dávka 69K Předkládaný vynález se také týká výroby takové vakcíny a použití takové vakcíny v lékařství.

Dosavadní stav techniky

Je známo, že 69K. je významnou složkou bezbuněčných vakcín proti Bordetella pertussis (Pa vakcína) pro účinnou prevenci černého kašle. Studie odpovědí na dávku pro 5 bezbuněčných vakcín proti černému kašli byla publikována U. S. National Institutes of Health (NIH) v květnu 1996 (Keitel, W. et al.).

Vakcíny obsahující 69K včetně trivalentních vakcín s obsahem antigenu záškrtu (D), antigenu tetanu (T) a antigenu pertuse (Pa) byly popsány v klinických testech v Itálii a ve Svédsku a jsou komerčně dostupné (například pod obchodním názvem INFANRIX-DTPa (SmithKline Beecham Biologicals)). Obvykle je pertussovou složkou vakcíny toxin Bordetella pertussis (PT), vláknitý haemagglutinin (FHA) a 69K. V INFANRIX-DTPa (obchodní známka) je množství D : T : PT : FHA : 69K typicky 25Lf: lOLf: 25 pg : 25 pg : 8 pg na 0,5ml objem vakcíny.

Jiné multivalentní vakcíny obsahující 69K jsou také známé, například vakcína obsahující antigen proti hepatidě B a antény proti záškrtu, tetanu a černému kašli (Hep B, DTPa) byla popsána ve WO 93/24 148. V této vakcíně množství D : T : PT : FHA :65K je 25Lf: lOLf: 25 pg : 25 pg : 8 pg na 0,5ml objem vakcíny. (Lf je proteinová koncentrace)

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že vakcína proti záškrtu, tetanu a černému kašli obsahující nízké dávky difterického toxoidu (D), tetanického toxoidu (T), PT, FHA a 69K (zde je taková vakcína obsahující nízké dávky označována jako dtpa vakcína) si uchovává schopnost bránit vzniku černého kašle vzniku černého kašle (a je v tomto ohledu vysoce účinná) a zároveň má tu výhodu, že vykazuje výjimečně nízkou incidenci vedlejších účinků. Ve zde uvedených mezích jsou takové vakcíny při podání lidem bezpečné a indukují rychlou ochranu před infekcí. U kombinovaných vakcín obsahujících dtpa a jiné antigeny bylo zjištěno, že zde neexistuje žádná interference, tj. že jsou u vakcín nedochází ke ztrátě imunogenního účinku, a že jsou účinné při podání lidem.

Zejména jsou vakcíny podle předkládaného vynálezu vhodné pro podání dětem jako dosycovací dávka po předchozím podání jedné nebo více (obvykle přibližně do 3) dávek vakcíny obsahující vyšší dávky (D:T a Pa antigenů, jako je INFANRIX-DTPa vakcína popsaná výše (D : T : PT : FHA : 69K je 25Lf: lOLf: 25 pg : 25 pg : 8 pg na 0,5 ml objem vakcíny). Vakcíny podle předkládaného vynálezu jsou také vhodné pro podání dospělým a adolescentům.

V souladu s tím obsahuje předkládaný vynález vakcinační prostředek obsahující nízkou dávku každého z antigenu D, T, PT, FHA a 69K (tj. dtpa vakcinační prostředek). Mělo by být jasné, že

-1 CZ 295954 B6 vakcinační prostředek podle předkládaného vynálezu je vyroben s vhodným nosičem nebo pomocným činidlem.

Termín dtpa vakcína nebo dtpa vakcinační prostředek označuje dávku, kde koncentrace D na 0,5 ml objem vakcíny nepřesahuje 5 Lf a výhodně je 1 až 4 Lf, lépe přibližně 2 Lf; koncentrace T na 0,5 ml objem vakcíny nepřesahuje 10 Lf a výhodně je 2,5 až 7,5 Lf, lépe přibližně 5 Lf; koncentrace PT na 0,5 ml objem vakcíny nepřesahuje 10 pg a výhodně je 2 až 10 pg, lépe přibližně 8 pg; koncentrace FHA na 0,5 ml objem vakcíny nepřesahuje 10 pg a výhodně je 2 až 10 pg, lépe přibližně 8 pg; a koncentrace 69K na 0,5 ml objem vakcíny nepřesahuje 4 pg a výhodně je 0,5 až 3 pg na 0,5ml vakcíny. Výhodněji je koncentrace 69K ve vakcíně v rozmezí od 2 do 3 pg a nejlépe přibližně 2,5 pg pertacinu na 0,5ml dávku vakcíny.

V jednom provedení může vakcinační prostředek podle předkládaného vynálezu obsahovat (přibližně) například PT (2,5 pg), FHA (2,5 pg), 69K (0,87 pg) na dávku 0,5 ml vakcíny.

Ve výhodném provedení může vakcinačním prostředek podle předkládaného vynálezu obsahovat (přibližně) například PT (8 pg), FHA (8 pg), 69K (2,5 pg) na dávku 0,5 ml vakcíny.

V zejména výhodném provedeni může vakcinační prostředek podle předkládaného vynálezu obsahovat PT (8 pg), FHA (8 pg), 69K (2,5 pg), D (2 Lf) a T (5 Lf) na dávku 0,5 ml vakcíny. Tato vakcína byla použita ve studii dtpa 005 uvedené dále.

V jiném výhodném provedení vakcinačního prostředku podle předkládaného vynálezu je množství D složky zvýšeno na 2,5 Lf.

V dalším výhodném provedení je složení dtpa trojsložkového vakcinačního prostředku následující:

PT 8 pg

FHA 8 pg

69K 2,5 pg difterický toxoid > 2 IU tetanický toxoid > 20 IU soli Al 0,3 mg fenoxyethanol 2,5 mg

Tato vakcína byla použita ve studii na adolescentech, která je známá jako dtpa 003 a jejíž výsledky jsou uvedeny dále.

Volitelně může být PT složka rekombinantní (například jak je popsána v Evropských patentových přihláškách EP 0 306 318, EP 0 322 533, EP 0396 964, EP 0 322 115 a EP 0 275 689), nebo může být PT složka toxoidová, například jak je popsáno v EP 0515 415. Pro přípravu antigenu Bordetella pertussis viz též EP 0 427 462 a WO 91/12020.

V dalším provedení obsahuje vynález vakcinační prostředek obsahující dtpa (jak je zde definována) v kombinaci s jedním nebo více dalšími antigeny, zejména s antigeny proti hepatitidě B (tj. Hep B - dtpa vakcína). Takové multivalentní vakcíny jsou obecně vyrobeny postupem popsaným ve WO 93/24 148 s tou výjimkou, že v prostředku se použije nízká dávka každého z D, T, PT, FHA a 69K, jak je zde definována. Jak je uvedeno ve WO 93/24 148, antigenem viru hepatitidy B je výhodně povrchový antigen viru hepatitidy B.

Dávka povrchového antigenu viru hepatitidy B bude obyčejně v rozmezí 5 až 20 pg na dávku 0,5 ml vakcíny.

-2CZ 295954 B6

Příprava povrchového antigenu viru hepatitidy B (HBsAg) je dobře známá. Viz například Harford et al., v Devolop. Biol. Standard 54, str. 125 (1983), Gregg et al., v Biotechnology, 5, str. 479 (1987), EP-A-0 226 846, EP-A-0 299 108 a odkazy zde citované.

Termín povrchový antigen viru hepatitidy B nebo HBsAg, jak je zde použit, označuje jakýkoliv HBsAg antigen nebo jeho fragment, který vykazuje antigenicitu povrchového antigenu HBV. Mělo by být jasné, že kromě sekvence 226 aminokyselin HBsAg S antigenu (viz Tiollais et al., Nátuře, 317: 489 (1985) a odkazy zde citované) může HBsAg, jak je zde popsán, obsahovat, pokud je to žádoucí, celou nebo část pre-S sekvence, jak je popsána ve výše uvedeném odkazu a v EP-A-0 278 940. HBsAg, jak je zde popsán, může také označovat varianty, například escape mutant popsaný ve WO 91/14 703. V dalším aspektu může HBsAg obsahovat protein označený jako L*, popsaný v Evropské patentové přihlášce 0 414 374, to znamená protein, jehož aminokyselinová sekvence se skládá z částí aminokyselinové sekvence velkého proteinu (L) (subtypu ad nebo ay) viru hepatitidy B, kde aminokyselinová sekvence proteinu se skládá ze:

(a) zbytků 12-52, po kterých následují zbytky 133 - 145, po kterých následují zbytky 175 - 400 uvedeného L proteinu; nebo (b) zbytku 12, po kterém následují zbytky 14-52, po kterých následují zbytky 133 - 145, po kterých následují zbytky 175 - 400 uvedeného L proteinu.

HBsAg může také označovat polypeptidy popsané v ΕΡ0 198 474 nebo EP 304 578.

Obyčejně bude HBsAg ve formě částic. Může obsahovat samotný S protein, nebo se může jednat o složené částice, například (L*,S), kde L* je definován výše a S je S-protein povrchové antigenu viru hepatitidy B.

Výhodně bude HBsAg adsorbován na fosforečnan hlinitý, jak je popsáno ve WO 93/24 148. Jiné antigeny mohou být adsorbovány na fosforečnan hlinitý nebo na hydroxid hlinitý, ale v některých případech mohou být uspokojivé výsledky získány pouze tehdy, pokud je jiný antigen adsorbován na fosforečnan hlinitý.

Vakcíny podle předkládaného vynálezu mohou obsahovat další antigeny, za zisku dalších multivalentních vakcín pro použití u dětí, adolescentů nebo dospělých. Uvedené další antigeny mohou být například ty, o kterých je v oboru známo, že vyvolávají ochranu před infekcí Haemophilus influenzae b (Hib) a/nebo poliovirem (IPV) a/nebo virem hepatitidy A, jak je uvedeno ve WO 93/24 148.

Vhodné složky pro takové vakcíny jsou již komerčně dostupné a podrobnosti mohou být získány od Světové zdravotnické organizace. Například, IPV složka může být Salk inaktivovaná poliovakcína. Složkou umožňující ochranu před infekcí virem hepatitidy A je výhodně výrobek s názvem Havrix (SmithKline Beecham Biologicals), což je usmrcená atenuovaná vakcína odvozená od kmene HM-175 HAV (viz Inactivated Candidate Vaccines for Hepatitis A, F.E. André, A. Hepbum a E. D'Hondt, Prog. Med. Virol. svazek 37: strany 72 - 95 (1990) a monografie k výrobku Havrix publikovaná SmithKline Beecham Biologicals (1991)). Výhodně může složka hepatitidy B obsahovat S antigen, který je již obsažen v komerčně dostupné vakcíně Engerix-B (SmithKline Beecham Biologicals).

Množství antigenu v každé dávce vakcíny je vybráno jako množství, které indukuje imunoprotektivní odpověď bez významných, nežádoucích vedlejších účinků v obvyklé vakcíně. Takové množství se bude velmi lišit podle toho, které specifické imunogeny jsou použity. Obyčejně bude každá dávka obsahovat 15 až 50 pg celkového imunogenu. Mohou být podány dosycovací injekce. Dosycovací injekce vakcín podle předkládaného vynálezu u subjektů primovakcinovaných vakcínou obsahující celé buňky Bordetella pertussis (Pw) jsou stejně účinné, jako u subjektů primovakcinovaných bezbuněčnou vakcínou proti černému kašli (Pa).

-3CZ 295954 B6

Obecně mohou být vakcinační prostředky jakéhokoliv provedení předkládaného vynálezu připraveny následujícím způsobem. Požadované složky jsou adsorbovány na vhodné pomocné činidlo, nejlépe na hydroxid hlinitý nebo fosforečnan hlinitý. Po době dostatečné pro dokončení a stabilizaci adsorpce příslušných složek mohou být různé složky kombinovány za vhodných podmínek.

Ve výhodném provedení přípravy kombinovaného vakcinačního prostředku obsahujícího hepatitidu B podle předkládaného vynálezu je zde poskytnut způsob, který obsahuje smísení HBsAg adsorbovaného na fosforečnan hlinitý s jedním nebo více antigeny adsorbovanými na hydroxid hlinitý nebo fosforečnan hlinitý.

Následující příklady dokreslují vynález.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Příprava dtpa vakcinačního prostředku a studie na dospělých

Dtpa vakcína podle předkládaného vynálezu se připraví standardní technikou podle postupu pro výrobu vakcíny obsahující vyšší dávku DTP, který je popsán ve WO 93/24 148.

Výsledky získané s vakcínou v klinické studii označené dtpa 005 jsou uvedeny na připojených výkresech, ve kterých dtpa označuje vakcínu podle předkládaného vynálezu a PRN je zkratka pro pertactin (69K). Zkratka dT označuje standardní vakcínu proti záškrtu-tetanu od Behringwerke, která obsahuje nízkou dávku difterického toxoidu a vyšší dávku tetanického toxoidu.

Otevřená, randomizovaná jednodávková studie byla provedena na dospělých jedincích věku 18 až 45 let v Belgii za použití dtpa připravené způsobem popsaným výš u 60 jedinců a za použití dT (Behring) ve srovnávací skupině 60 jedinců.

Pro dtpa skupina zahrnovala 28 žen (průměrný věk 33 let) a 32 mužů (průměrný věk 33 let). Pro dT skupina zahrnovala 32 žen (průměrný věk 34 let) a 28 mužů (průměrný věk 35 let).

Vyloučeni byli ti jedinci, u kterých proběhla vakcinace proti záškrtu, tetanu nebo černému kašli v průběhu posledních 10 let nebo kteří onemocněli černým kašlem v průběhu posledních 5 let.

Sérum bylo získáno před vakcinací a jeden měsíc po vakcinaci, s nutnou kontrolou po 15 dnech a volitelnou kontrolou po 30 dnech.

Data incidence vedlejších účinků, proti látkových odpovědí, anti-PT výsledků, anti-FHA výsledků a anti-PRN (pertactin) výsledků jsou uvedena na připojených výkresech.

Na připojených výkresech jsou také uvedena data pro monovalentní pa vakcínu použitou v NIH (AAPT) studiích popsaných v Keitel et al., References to SmithKline Beechanťs (SB's) High, Medium (SB-Med) a Low formulations, které obsahují, v příslušném pořadí: PT (25 pg), FHA (25 pg) a 69K (8 pg) (High); PT (8 pg), FHA (8 pg) a 69K (2,5 pg) (Medium); a PT (2,5 pg), FHA (2,5 pg) a 69K (0,8 pg) (Low) .

Zkratka pg znamená mikrogram.

Z výsledků je zřejmé, že dtpa vakcína podle předkládaného vynálezu byla bezpečná a účinná u dospělých. Kromě toho, imunitní odpověď na vakcíny podle předkládaného vynálezu se zdá být alespoň několikrát vyšší než imunitní odpověď pozorovaná pro známé vakcíny obsahující vyšší dávky DTP, které byly podávány dříve dětem v USA, Německu a Itálii.

-4CZ 295954 B6

Příklad 2: Studie na adolescentech (dtpa 003)

Otevřená, randomizovaná jednodávková studie byla provedena na adolescentech věku 10 až 12 let ve Finsku za použití dtpa připravené způsobem popsaným výš u 120 jedinců a za použití dT (Finiand) ve srovnávací skupině 120 jedinců. Stejná dávka dtpa vakcíny podle předkládaného vynálezu byla použita ve studiích dtpa 005 a dtpa 003.

Komerčně dostupná (Finiand) dT obsahovala: difterický toxoid > 4 IU, tetanický toxoid > 40 IU.

Pro dtpa skupina zahrnovala 70 dívek (průměrný věk 10,9 let) a 49 chlapců (průměrný věk 10,8 let). Pro dT skupina zahrnovala 62 dívek (průměrný věk 10,9 let) a 56 chlapců (průměrný věk 11,0 let).

Jedinci zahrnutí ve studii dostaly až 4 dávky DTPw během prvních dvou let života.

Vyloučeni ze studie byli ti jedinci, u kterých proběhla D, T nebo P vakcinace po druhém roce života nebo měly anamnézu 10 onemocnění černým kašlem.

Sérum bylo získáno před vakcinací a jeden měsíc po vakcinaci, s nutnou kontrolou po 15 dnech a volitelnou kontrolou po 30 dnech.

Data indukce vedlejších účinků, protilátkových odpovědí, anti-PT výsledků, anti-FHA výsledků a anti-PRN (pertactin) výsledků jsou uvedena na připojených výkresech.

Z výsledků je zřejmé, že dtpa vakcína podle předkládaného vynálezu byla bezpečná a účinná u adolescentů.

Upozornění: Na obrázcích ukazují výsledky týkající se protilátkových odpovědí pro studii na dospělých (dtpa 005) a na adolescentech (dtpa 003) distribuci jednotlivých pre- a postvakcinačních titrů protilátek proti záškrtu a tetanu pro subjekty zahrnuté v celkové analýze imunogenního účinku (> 0,1 IU/ml je hraniční hodnota pro ochranu). Také je uveden geometrický průměr titrů anti-difterických a anti-tetanových protilátek v IU/ml.

Obrázky pro dtpa 005 a dtpa 003 studie, které ilustrují anti-PT, anti-FHA a anti-PRN titry, ukazují rychlost odpovědi na vakcinaci (v % celkového rozpočtu subjektů -n-) a geometrický průměr titru protilátek (GMT, v EU/ml) pro složky vakcíny PT, FHA a PRN u subjektů zahrnutých v celkové analýze imunogenního účinku.

Příklad 3: Příprava Hep B - dtpa vakcíny

Vakcinační prostředek byl připraven způsobem uvedeným v příkladu 5 WO 93/24 148 s tou výjimkou, že pro výrobu dávky 0,5 ml vakcíny byly použity nízké dávky D, T, PT, FHA a 69K, jak jsou zde definovány.

Výhodné složení dtpa je přibližně následující: PT (8 pg) , FHA (8 pg), 69K (2,5 pg), D (2 Lf) a T (5 Lf) na dávku 0,5 ml vakcíny.

V jiném výhodném prostředku je množství D zvýšeno na 2,5 Lf.

Množství povrchového antigenu viru hepatitidy B ve vakcinačním prostředku se může lišit od 5 až 20 pg a obvykle je 10 pg na dávku 0,5 ml vakcíny.

Claims (8)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Vakcinační prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje difterický antigen (D), tetanový antigen (T) a bezbuněčný antigen pertuse (Pa) a pomocné činidlo, kde koncentrace D je 1 až 4 Lf na dávku 0,5 ml vakcíny, koncentrace T je 2,5 až 7,5 Lf na dávku 0,5 ml vakcíny a Pa složka obsahuje PT (toxoid Bordetella pertussis, popřípadě rekombinantní), FHA (vláknitý hemaglutinin) a pertactin (69K), kde koncentrace PT je 2 až 10 pg na dávku 0,5 ml vakcíny, koncentrace FHA je 2 až 10 pg na dávku 0,5 ml vakcíny a koncentrace 69K je 0,5 až 3 pg na dávku 0/5 ml vakcíny.
2. 2. Vakcinační prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že má složení PT (8 pg), FHA (8 pg), 69K (2,5 pg), D (2 LF) a T (5 LF) na dávku 0,5 ml vakcíny.
3. 3. Vakcinační prostředek podle nároku 1 nebo2, vyznačující se tím, že dále obsahuje jeden nebo více přídatných antigenů.
4. 4. Vakcinační prostředek podle nároku 3, v y z n a č uj í c í se t í m , že dalším antigenem je povrchový antigen viru hepatitidy B.
5. 5. Vakcinační prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že povrchový antigen viru hepatitidy B je S-anigen HBsAg.
6. 6. Vakcinační prostředek podle nároku 3 nebo 4, vyznačující se tím, že obsahuje další antigen, který vyvolává imunitu proti jedné nebo většímu počtu infekcí, vyvolaných Hib, poliovirem nebo virem hepatitidy A.
7. 7. Vakcinační prostředek podle některého z nároků 1 až6, vyznačující se tím, že pomocným činidlem použitým v prostředku je hydroxid hlinitý.
8. 8. Vakcinační prostředek podle některého z nároků 1 až7, vyznačující se tím, že pomocným činidlem použitým v prostředku je fosforečnan hlinitý.