HU218430B - Eljárás sertés reproduktív és légzési szindróma vírus (PRRSV) tenyésztésére és annak alkalmazása vakcinában - Google Patents

Eljárás sertés reproduktív és légzési szindróma vírus (PRRSV) tenyésztésére és annak alkalmazása vakcinában Download PDF

Info

Publication number
HU218430B
HU218430B HU9502330A HU9502330A HU218430B HU 218430 B HU218430 B HU 218430B HU 9502330 A HU9502330 A HU 9502330A HU 9502330 A HU9502330 A HU 9502330A HU 218430 B HU218430 B HU 218430B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
prrsv
vaccine
virus
tissue culture
isolate
Prior art date
Application number
HU9502330A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9502330D0 (en
HUT72917A (en
Inventor
Howard T. Hill
Michael J. Mcginley
Michael C. Meetz
Eugene C. Pirtle
Thomas Sanderson
George P. Schibley
Sabrina L. Swenson
Jeffrey J. Zimmerman
Original Assignee
Bayer Corp.
Iowa State University Research Foundation Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Corp., Iowa State University Research Foundation Inc. filed Critical Bayer Corp.
Publication of HU9502330D0 publication Critical patent/HU9502330D0/hu
Publication of HUT72917A publication Critical patent/HUT72917A/hu
Publication of HU218430B publication Critical patent/HU218430B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/815—Viral vaccine for porcine species, e.g. swine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát sertések reproduktív és légzésiszindróma-vírusa(PRRSV) olyan szövettenyészetben való sza- porítására szolgáló eljárásképezi, amely fogékony a fertőzésre, és benne a vírus elegendőmennyiségben rep- likálódik ahhoz, hogy állatokban PRRS ellenvédettség létrehozására, illetve PRRS diagnosztizálására, valamintrekombináns termékek kifejlesztése céljából a PRRSV molekulárisszerkezetének tanulmányozására alkalmazható legyen. Az eljárásban avírussal afrikaizöldmajomvesesejtvonal-szövettenyészetet oltanak be,és a replikálódott vírust összegyűjtik. ŕ

Description

A találmány tárgyát sertések reproduktív és légzési szindrómáját okozó vírus (PRRSV) izolátuma képezi. Közelebbről a találmány tárgyát sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese diagnózisára, ellene védettség létrehozására alkalmazható antigének és vakcinák, valamint ezek előállítására és alkalmazására szolgáló eljárások képezik.
A sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese gyorsan növekvő, az amerikai egyesült államokbeli és az európai sertéstenyésztők számára gazdasági károkat okozó betegség. A tünetegyüttest először az USA-ban írták le 1987-ben, két-három évvel később Európában és Kanadában is hasonló tüneteket írtak le. A tünetegyüttest több különböző néven említik, például ismeretlen eredetű sertésbetegség („mystery swine disease”), kékvetélés, kékfíilűsertés-betegség, sertések fertőző vetélése és légzőszervi tünetegyüttese (PEARS), sertések meddőségét okozó és légzőszervi tünetegyüttese (SIRS). Az alábbiakban a sertések reproduktív és légzési szindrómája (PRRS) elnevezést használjuk.
A tünetegyüttest kiváltó kórokozót egy kisméretű, burokkal rendelkező, gömb alakú RNS-vírusként azonosították, a virion átlagos átmérője 62 nm, melyben a 25-30 nm vastagságú magot burok veszi körül. A vírusnak a Togaviridae családon belül az Arterivirus nemzetségbe való sorolását javasolták. A találmány szerinti sertések reproduktív és légzési szindrómáját okozó vírus (PRRSV) izolátuma beleillik ebbe a javasolt beosztásba, és kimutattuk, hogy képes a tünetegyüttes kiváltására.
A PRRS-vírus által okozott betegségtünetek a felnőtt kocában akut és krónikus légzőszervi zavarokként jelentkeznek, a fiatal malacokban pedig a súlyostól az enyhéig teijedő légzőszervi betegség lép fel. A reprodukciós zavar a vemhesség késői szakaszában bekövetkező vetéléssel jár, amely lényegesen csökkent életben maradási esélyekkel rendelkező, mumifikálódott, koraszülött és gyenge malacok fokozott előfordulási arányát eredményezi. Szintén leírták, hogy a fertőzött kocákban krónikusan előforduló gond az ösztrusciklus késleltetett visszaállása. A légzőszervek megbetegedésének következménye fiatal malacokban magas láztól és intersticiális pneumonitisztől enyhe felső légúti tünetek (például tüsszögés, köhögés, valamint on- vagy szemváladékozás) jelentkezéséig teljed. Nemrégiben (1990-ben) végzett szerológiai vizsgálatok és állományokban végzett betegségtörténeti tanulmányok szerint az Amerikai Egyesült Államokban a sertésállományok legalább 50%-a fertőződött PRRS-vírussal, vagy azokban PRRSV-fertőzésre utaló reprodukciós zavar és légzőszervi betegség jelentkezett. A betegségre jellemző tünetegyüttes napjainkban történő elteqedésének következtében a betegség patogenezisére, epidemiológiájára és megelőzésére vonatkozó ismereteink korlátozottak. Nyilvánvaló, hogy az antigéntartalmú PRRSV hatékony szaporítása és az antigének feldolgozása megkönnyítené a sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttesének megelőzésére és terjedésének megakadályozására alkalmazható PRRSV-vakcinák kifejlesztését.
A WO 92/21375 számon közrebocsátott nemzetközi szabadalmi bejelentésben európai sertésekből izolált,
1-1102 számon deponált, Lelystad Agent nevű PRRSVizolátumot ismertetnek.
Ismeretesek továbbá az amerikai földrészről származó izolátumok is, így például a Christianson W. T. et al., Am. J. Vet. Rés., 53 (4), 485-488. (1992) irodalmi helyen az ATCC VR 2332 számon deponált izolátumot említik.
Kutatásaink során találtunk egy, a fentiektől antigénszempontból eltérő PRRSV-izolátumot, amely vakcinaként alkalmazva nagyon hatékonynak és biztonságosnak bizonyult.
Az előzőek alapján a találmány tárgyát ISU-P elnevezésű vírusizolátum képezi, amely alkalmazható sertések reproduktív és légzési szindrómájának diagnosztizálására felhasználható antigének előállítására, valamint sertések reproduktív és légzési szindrómáját okozó vírus (PRRSV) ellen védettséget jelentő immunválasz létrehozására. A találmány tárgyát képezik továbbá az antigének előállítására szolgáló eljárások, valamint az antigének alkalmazása.
A találmány előnyös megvalósítási módja szerint a PRRSV-izolátumot az alábbi eljárással kaphatjuk meg: a PRRSV-t oly módon izoláljuk, hogy vírussal fertőzött malacokból nyert 10 tömeg/térfogat% tüdőhomogenizátumot elsődleges sertés-alveolárismakrofágokkal vagy folyamatos sejttenyészettel együtt tenyésztjük 35 °C-on.
A találmány tárgyát képezi továbbá a vírus magas titerben történő szaporítása meghatározott sejtvonalban, például afrikaizöldmajom-vese folyamatos sejtvonalában (MA 104) és annak egyedi klónozott származékában (9009B).
A találmány tárgyát képezi továbbá élő vírusok vagy elölt (szokásos módon és rekombináns úton előállított) vírusantigének előállítására és alkalmazására szolgáló eljárás, valamint az antigénekből előállított vakcinák, melyeket oly módon kapunk, hogy a vírus immunológiailag hatékony mennyiségéhez hígítóanyagot vagy adjuvánst adunk.
Kimutattuk, hogy sertések közvetlen kísérletes immunizálása élő vírussal vagy a sertések élő vírussal fertőzött sertéssel történő érintkezése megelőzte a virulens PRRSV-vei orron át történő kísérletes fertőzést követően a reproduktív zavar jelentkezését.
Ugyancsak kimutattuk, hogy inaktivált adjuvánssal kevert PRRSV-vakcinák PRRS-vírussal végzett kísérletes fertőzéssel szemben védettséget hoztak létre a sertésekben, melynek létrejöttét a vakcinázott állatokban a vírusreplikáció hiánya alapján állapítottak meg, összehasonlítva a nem vakcinázott kontrollmalacokkal.
A fentiek alapján a találmány tárgyát ISU-P elnevezésű PRRSV-vírusizolátum izolálása képezi, amely vakcinákban és diagnosztikai célú vizsgálati eljárásokban alkalmazható. Az ISU-P izolátumot gyengén született malac tüdőszövetéből nyertük. Szemléltetésképp, tüdőből, lépből, valamint nyirokcsomókból 10 tömeg/térfogat% szövethomogenizátumot készítettünk az esetleges kontamináció minimalizálása céljából antibiotikummal kiegészített „Minimál Essential Media” tápfolyadékban (MEM+A-ban). A nyershomogenizátumot 4 °C-on, 1500 g-n, 15 percig végzett centrifugálással tisztítottuk.
HU 218 430 Β
A tisztított felülúszót 1:5 arányban MÉM-A tápfolyadékban hígítottuk, és 0,1 ml-t egy 25 cm2-es palackban 48 óráig tenyésztett MA-104 sejtekből vagy elsődleges alveoláris makrofágokból álló folyamatos, egyrétegű sejttenyészetre abszorbeáltattunk. Miután a vírusokat 2 órán át, 35 °C-on abszorbeálódni hagytuk, az egyrétegű sejttenyészetet MEM+A tápfolyadékkal kétszer mostuk, majd 5 ml 5%-os, gamma-besugárzással kezelt boíjúembrió-szérumot tartalmazó MEM+A tápfolyadékot adtunk hozzájuk. A vírusizolálásra használt palackokat 35 °C-on, 5% CO2-atmoszférában inkubáltuk, és a citopátiás hatás (CPE) jelentkezésére nézve naponta megvizsgáltuk. A PRRSV ISU-P törzs citopátiás hatása 5-10 sejtből álló fókuszokban a sejtek lekerekedésével kezdődött, majd a folyamat előrehaladtával a fertőzést követő 4-7. napon számos sejt piknotikussá vált, és levált a hordozóról.
Az ISU-P-izolátumról igazoltuk, hogy az egy PRRSV-izolátum, oly módon, hogy a közönségesen SDOW17-nek nevezett PRRSV csoportspecifikus monoklonális ellenanyag alkalmazásával fluoreszcens ellenanyagfestést végeztünk. Ezenkívül negatív festéssel festett vírusfertőzött sejtekben transzmissziós elektronmikroszkóppal vizsgáltuk a vírusrészecskék jelenlétét. A megfigyelt vírusrészecskék gömb alakúak voltak, burokkal rendelkeztek, a virionok átlagos átmérője 65 nm, a mag átmérője 27 nm volt. Az ily módon jellemzett vírustenyészetet alkalmaztuk vemhes kocákban a késői vetélés és a reprodukciós zavar kísérletes úton történő előidézésére (1. táblázat). Az 1. táblázat azt mutatja, hogy ISU-P-izolátummal fertőzött tüdőhomogenizátummal (PRRS-hm) vagy sejttenyészetben szaporított ISU-P-izolátummal (PRRS-tc) fertőzött vemhes kocáknál a sertések reproduktív és légzési szindrómájára (PRRS-re) jellemző tipikus betegségtünetek jelentkeztek. A PRRS-hm csoportban egy normális malac sem született. A PRRS-tc csoportban 33 született malacból csak 4 volt normális. Összehasonlításképp a nem fertőzött malacok esetében 30 malacból 29 (96,7%) normális volt az elléskor. Az a tény, hogy az ISU-P még szövettenyészetben történő tisztítást követően is képes volt PRRS-betegséget létrehozni, igazolta, hogy ez az izolátum valóban a Togaviridae családon belül az Arterivirus nemzetségbe sorolható. Kimutattuk azt is, hogy ez az izolátum enyhe intersticiális pneumoniát hozott létre kísérletesen fertőzött malacokban.
A találmány tárgyát képezi a találmány szerinti PRRSV szaporítása bizonyos szövettenyészetek sejtjeiben, melyekben a vírus hatékonyan replikálódik, és olyan szintet ér el, amely elegendő ahhoz, hogy malacokban és vemhes kocákban PRRS kísérletes fertőzéssel szemben védettség létrehozására használható vakcina előállítására alkalmazzuk. A PRRSV tenyészthető például MA 104 elnevezésű sejttenyészet (Whittaker BioProducts) sejtjeiben. Három különböző forrásból beszerzett MA 104 sejteken azonos tenyésztési feltételek alkalmazásával végzett vírustenyésztési kísérletek azt mutatták, hogy a MA 104 sejtek jelentősen különböznek a PRRSV magas titerű replikációját elősegítő képességüket tekintve. Az MA 104 (M) elnevezésű sejttenyészet (Miles Inc., „Agriculture Division, Animál Health Products Group”), melyet az alábbi kísérletek során alkalmaztunk, következetesen elősegítette a PRRSV magas titerű replikációját. Ezenkívül a Miles Inc. („Agriculture Division, Animál Health Products Group”) által előállított, 9009B elnevezésű MA 104 (M) eredetű sejtvonalklónban a PRRSV magasabb titerben replikálódik, mint a szülői sejtvonalban. Az ISU-P szaporítására tehát előnyösen a 9009B sejttenyészet sejtjeit alkalmaztuk. Az alábbiakban leírtak részletesebben szemléltetik a PRRSV ISU-P sejttenyészetben történő szaporítását.
A szövettenyészeti sejteket [MA 104 (M) és 9009B] 5% borjúembrió-szérummal kiegészített és 1,3 g/1 nátrium-hidrogén-karbonáttal pufferolt, magas glükóztartalmú, Dulbecco-féle módosított minimális esszenciális táptalajban (DMEM/HG) tenyésztettük és tartottuk fenn. A sejteket oly módon passzáltuk, hogy az átoltott sejtek száma 48 óra elteltével 80-100%-ban folyamatos egyrétegű tenyészetet eredményezzen. PRRSV ISU-P vírustörzstenyészetet 5% borjúembrió-szérummal kiegészített és PIPES-sel pH 6,8-ra pufferolt DMEM/HG táptalajban hígítottunk. A sejtréteget alacsony fertőzési multiplicitás (MOI) alkalmazásával vírussal oltottuk be, és 36 °C-on inkubáltuk. A fertőzött tenyészetekben 4-7 napig naponta vizsgáltuk a citopátiás hatás (CPE) megjelenését. A fertőzött tenyészeteket akkor gyűjtöttük össze, amikor 90-100%-os CPE volt megfigyelhető. A maximális vírusantigén-mennyiséget -70 °C-on történő egyszeri fagyasztás/olvasztás ciklust követően kaptuk. Az MA 104 (M) sejtekben történő szaporítás alkalmával az átlagos vírustiter milliliterenként 103·°-104·5 fluoreszcens ellenanyaggal meghatározott 50%-os fertőző dózis között volt (FAID50/ml). A 9009B sejtklónban történő szaporítás alkalmával 105·5-106·5 FAID50/ml vírustitert értünk el.
Az ilyen nagyságrendű titer lehetővé teszi, hogy elegendő mennyiségű antigént adjunk 50 liternél nagyobb térfogatban, kereskedelmi méretekben előállított PRRSV-vakcinakészítményhez. A szakember számára ismert, hogy miután a PRRSV-t olyan titerben szaporítottuk, hogy abból nagy mennyiségű antigént nyerjünk, abból a gyakorlatban ismert eljárásokkal, például a vírusból történő extrahálással a találmány szerint hatékony vírusszármazékok, valamint alegységek állíthatók elő. A védettséget létrehozó antigéneket azonosíthatjuk továbbá molekuláris szinten, és előállíthatjuk, valamint expresszálhatjuk rekombináns technológia alkalmazásával.
A vakcinakészítményekben felhasznált, vírustartalmú folyadékokat két eljárás alkalmazásával inaktiváltuk. Az inaktiválás céljára a formaiint és a bináris etilén-imint (BEI) választottuk. Az inaktiválást szokásos eljárásokkal végeztük, melyeket az alábbiakban részletesebben ismertetünk. A formaiinnal végzett inaktiválást oly módon végeztük, hogy a vírustartalmú folyadékot 37%-os formaldehid törzsoldattal elegyítettük 0,05% formalin-végkoncentráció alkalmazásával. A formaiin-vírus elegyet állandó keverés mellett, 24 óráig szobahőmérsékleten (körülbelül 25 °C-on) tartottuk. Mintákat vettünk 0, 8, 12 és 24 óra elteltével, és azok3
HU 218 430 Β bán a 9009B sejtekben élő vírus jelenlétét vizsgáltuk. A citopátiás hatás és a csoportspecifikus monoklonális ellenanyaggal végzett fluoreszcens festés azt mutatta, hogy csak a „0 óra” időpontban vett mintában volt élő PRRSV kimutatható.
A BEI-vel végzett inaktiválást oly módon végeztük, hogy 0,1 mol/1 BEI törzsoldatot (20,5 g/1 2-brómetil-amin-HBR 0,175 n NaOH-ban) vírustartalmú folyadékkal elegyítettünk 1,0 mmol/1 BEI végkoncentrációban. A vírusinaktiválást oly módon végeztük, hogy a BEI-vírus elegyet állandó keverés mellett 48 óráig szobahőmérsékleten tartottuk. A vírusinaktiválást 1,0 mol/1 nátrium-tioszulfát hozzáadásával állítottuk le, 0,1 mmol/1 végkoncentrációban, 2 órás keveréssel. Mintákat vettünk 0, 2,4, 8,12, 24 és 48 óra elteltével, és a fentiekben leírtak alapján azokat élő vírus jelenlétére vizsgáltuk. Csak a 0,2 és 4 óra elteltével vett mintákban volt élő PRRSV kimutatható.
A találmány szerinti módosított élő vagy gyengített vírusvakcina előállítása céljára a PRRSV-t úgy módosítottuk, hogy az korlátozott mértékben képes legyen a gazdaszervezet fertőzésére, de abban ne okozzon betegségtüneteket. Az ilyen vírusmódosítást szokásos módon úgy érhetjük el, hogy a vírust nem gazdaszervezet eredetű sejteken, például afrikaizöldmajomvese-sejteken passzáljuk. Eleinte előfordulhat, hogy a vírus nem szaporodik jól, vagy egyáltalán nem szaporodik. Az utóbbi esetben szükség lehet arra, hogy a vírust adaptáljuk a sejttenyészetben való szaporodáshoz. Ezt úgy érhetjük el, hogy a vírust magas vagy alacsony fertőzési multiplicitás (MOI) mellett adjuk a sejttenyészethez. Más eljárás szerint a vírusokat kényszerpasszálhatjuk vagy vakon passzálhatjuk a sejteken, míg elegendő citopátiás hatás lesz megfigyelhető, ami a vírus adaptálódására utal. Amint az adaptálódás megtörtént, a vírustiter emelkedni fog, amint az megfigyelhető volt akkor, amikor a PRRSV ISU-P-izolátumot MA 104 (M) sejtvonalról 9009B sejtvonalra passzáltuk. Az 1. táblázatból látható, hogy a szövettenyészeten passzált PRRSV ISU-P (PRRSV-tc) virulenciája kisebb, mint a tüdóhomogenizátumból izolált formáé, ami az adaptáció tipikus eredménye. A 2. táblázatban összefoglalt adatok azt mutatják, hogy a találmány szerinti vakcina előállítására alkalmazott eljárások különösen hatékonyak PRRS-sel szemben védettség létrehozására.
Az inaktivált PRRSV ISU-P-izolátumhoz adjuvánst adtunk az alábbiak szerint. Az inaktivált folyadék adjuvánsként az alábbiak közül valamelyiket tartalmazta: Freund-féle komplett adjuváns (FCA), Freund-féle inkomplett adjuváns (FIA), karbopolalapú adjuváns, valamint „Diamond Scientific Adjuvant B” (Adj-B). Ezek az adjuvánsok a vakcinagyártás során alkalmazott főbb adjuvánstípusokat képviselik. Olajalapú adjuváns például az FCA, FIA és ADJ-B. Vizes alapú adjuváns például a karbopol. Az inaktivált PRRSV ISU-P kívánt esetben megfelelő tartósítószert is tartalmaz.
FCA-t és FIA-t tartalmazó vakcinakészítményeket úgy állítottunk elő, hogy az inaktivált vírust, tipikusan egyenlő mennyiségű vírustartalmú folyadékot és adjuvánst, egy 18-as méretű, két kivezetésű összekötő rész és két fecskendő segítségével emulgeáltuk. A folyadékot addig nyomtuk át ismételten az eszközön a fecskendők között, míg sűrű, félfolyékony emulziót nem kaptunk. Az emulziót azonnal fecskendőkbe töltöttük az adagolás céljára.
Adj-B-t tartalmazó vakcinakészítményeket oly módon állítottunk elő, hogy Adj-B törzsoldatot egyenlő térfogatú inaktivált PRRSV ISU-P-vírus-tartalmú folyadékkal elegyítettünk. Az adjuvánst és a vírust 1 óráig, szobahőmérsékleten végzett keveréssel elegyítettük. Az adjuvánst tartalmazó vakcinát aszeptikus feltételek mellett több dózist tartalmazó steril ampullákba töltöttük, és az adagolásig 4 °C-on tároltuk.
A találmány szerinti különböző vakcinakészítmények az inaktiválást megelőző mindössze 105-° FAID50/ml PRRS ISU-P-vírustitemek megfelelő vírust tartalmaztak.
Annak kimutatására, hogy az ISU-P PRRSV-izolátum a sertések reproduktív és légzőszervi tünetegyüttese ellen védettséget hoz létre, két vizsgálatot végeztünk, melyek vakcinázásból és kísérletes fertőzésből álltak. Az első vizsgálatban 4 kocát immunizáltunk élő PRRSV ISU-P-vírussal szájon, illetve orron át (oronazális úton), vagy közvetlenül, vagy beteg malacokkal való kontaktus révén. Két azonos korú kocát nem immunizáltunk (nem fertőztünk), és azokat elkülönítve tartottuk kontroliokként. A közvetlen úton történő fertőzéssel vakcinázott állatoknak (#57 és #58) 3,0 ml vírusinokulumot adagoltunk orron át. Ezekben indirekt fluoreszcensellenanyag-vizsgálat alapján megállapítottuk, hogy a fertőzést követő 14. napra szerokonverzió jött létre. A kontakt úton fertőzött kocák (#476 és #480) szájon, illetve orron át (oronazális úton) immunizálódtak, miután azokat beteg malacokkal szoros kontaktusban tartottuk. Ezekben a kocákban a fertőzést követő 90. napra jött létre szerokonverzió. A szerokonverzió létrejöttét l:20-nál nagyobb IFA-titer alapján állapítottuk meg.
Miután az immunizált kocákban létrejött a szerokonverzió, azok ösztrusciklusát szinkronizáltuk, és az állatokat fedeztettük. A vemhesség létrejöttét ultrahangvizsgálattal igazoltuk. A gesztáció 90. napján a vakcinázott és kontroll-vemheskocáknak 3,0 ml PRRS-vírust adagoltunk kísérletes fertőzésként lxlO4 FAID50-titerben, orron át.
A kontrollállatokban (#52 és #477) kialakultak a betegségre jellemző korai tünetek, azaz a kísérletes fertőzést követő 2-3. napra étvágyuk csökkent, testhőmérsékletük emelkedett (39,4-40 °C). Az ISU-P-izolátummal fertőzött (vakcinázott) kocákban nem jelentkeztek a betegségre jellemző klinikai tünetek. Ezek az eredmények a reproduktív és légzőszervi tünetegyüttes klinikai megnyilvánulásával szemben kialakult védettségre utalnak.
Valamennyi kocát a malacok elválasztásáig (az ellést követő 4. hétig) tartottuk. A 2. táblázat a fenti kísérlet során született malacok eredményeit mutatja.
Az ellési eredmények értékelésekor feljegyeztük a gesztáció hosszát (a PRRS-fertőzés rendszerint lerövidíti a gesztáció idejét), a koraszülötteket vagy halva született főtuszokat, a gyenge malacokat és a mumifikálódott malacokat. Ezek az ellési rendellenességek mind a vemhes
HU 218 430 Β kocákban vagy emsékben létrejött PRRS-fertőzésre utalnak. Feljegyeztük továbbá a normális malacok számát.
A kontrollkocák egyike sem ellett normális malacot (22 malacból 0 normális). A 22 malacból hét (7) halva született, és a 22-ből 15 gyenge volt elléskor. A kontrollkocák vemhességének ideje 2,5 nappal lerövidült, ami tipikus a vemhes kocákban létrejött PRRS-fertőzésre. Az immunizált csoportban (n=50) 40 normális malac született (80%). Az 50 malac közül hat (6) halva született, és az 50-ből 4 főtusz az ellés idejére mumifikálódott. A vakcinázott csoportban nem volt gyenge malac. Nyilvánvaló, hogy a megelőzően élő PRRS ISU-P-izolátummal fertőzött, fedeztetett, majd kísérletesen fertőzött kocákban védettség jött létre a kísérletes fertőzéssel szemben, amint azt a kocákban a betegségre jellemző közvetlen klinikai tünetek hiánya, valamint azok főtuszainak védettsége mutatja.
Belátható, hogy mivel a fenti vizsgálatban a kocák szerológiai státusának meghatározására használt IFAvizsgálati reagens PRRSV ISU-P-izolátumból származott, és mivel közvetlen kapcsolat van a kocák szerológiai státusa és a PRRS-sel szembeni védettség között, a PRRSV ISU-P-izolátum alkalmazható diagnosztikai célú vizsgálati eljárásokban, például a fenti indirekt fluoreszcensellenanyag-vizsgálati eljárásban, ELISAeljárásokban, szérumneutralizációs vizsgálati eljárásokban, direkt fluoreszcensellenanyag-vizsgálati eljárásokban és a gyakorlatban ismert egyéb, diagnosztikai célú vizsgálatokban. A találmány szerint tehát a PRRSV ISU-P-izolátumból származó antigének alkalmazásával diagnosztikai célú vizsgálati eljárás végezhető.
A vakcinázást és kísérletes fertőzést magában foglaló második vizsgálatban fiatal (4-6 hetes) malacokat vakcináztunk több, inaktivált, adjuvánst tartalmazó PRRSV ISU-P-vakcinával. Egy vakcinázásra használt antigénkészítményt PRRSV ISU-P-izolátumból a fent ismertetettek szerint, BEI-vel történő inaktiválással állítottunk elő, és Carbopollal, FCA/FIA-val vagy Adj-Bvel adjuváltuk. Egy vakcinázásra használt második antigénkészítményt PRRSV ISU-P-izolátumból a fent ismertetettek szerint, formáimnál történő inaktiválással állítottunk elő, és ahhoz az előző három adjuváns egyikét adtuk. Három kontrollvakcinát készítettünk annak bizonyítására, hogy az adjuvánsok és sejtek nem váltanak ki hamis immunológiai választ. A kontrollvakcinákat úgy állítottuk elő, hogy nem fertőzött szövettenyészeti sejtekhez adjuvánst adtunk. Mindegyik vakcinával két malacot vakcináztunk. A vakcinákat bőr alá adagoltuk a 0., 21., 42. és 64. napon. Az utolsó vakcinázást követően 7 nappal a malacokat orron át 103·5 FAID50 virulens élő PRRS-vírussal kísérletesen fertőztük. A kísérletes fertőzést követően valamennyi malacot naponta megfigyeltük, hogy bennük a betegség klinikai tünetei jelentkeznek-e. Ezenkívül vérmintákat vettünk, és azokból szövettenyészetben kíséreltük meg a vírust kimutatni. A kísérletes fertőzést követően a véráramban kimutatott élő vírus virémiára utal.
Szérumneutralizációs titereket határoztunk meg a vizsgálat kezdetén, a kísérletes fertőzés napján és a kísérletes fertőzést követő 19. napon. Megjegyzendő, hogy a szérumneutralizációs vizsgálat kevésbé érzékeny, mint az előző kísérlet során alkalmazott IFA-vizsgáló eljárás. Ezért ezek a titerek nem hasonlíthatók össze az előző titereredményekkel.
A 3. táblázatban a kísérletes fertőzés eredményeit foglaltuk össze. Sem a vakcinázott, sem a kontrollmalacokban nem voltak betegségtünetek megfigyelhetők. Továbbá sem a vakcinázott, sem a kontrollmalacokban nem volt mérhető szérumneutralizációs titer a vakcinázási időszak során. Ez arra utal, hogy ezen időszak alatt nem találkoztak élő vírussal (a kontrollok negatívak maradtak), valamint a vakcinák nem váltottak ki a szérumneutralizációs eljárással kimutatható mértékű humorális választ. Az a tény, hogy a kísérletes fertőzést követően jelentős szérumneutralizációs titer volt mérhető, azt jelenti, hogy valamennyi malacot hatékonyan fertőztük kísérletesen az élő PRRS-vírussal. A kísérletes fertőzés hatékonyságának a bizonyítéka a kontrollmalacok között virémiát mutató malacok százalékos aránya. A kontrollmalacok között egy kivételével mind (87,5%) fertőződött. A vakcinázott malacokban olyan erős volt az immunválasz, hogy az képes volt megakadályozni a virémiát. A vakcinázott malacok között 12 közül csak egyben (8,3%) jött létre virémia. A vakcinák tehát védettséget hoztak létre a malacok 91,7%-ában.
Anélkül, hogy következtetéseinket valamely elméletre korlátoznánk, megállapítjuk, hogy az eredeti PRRSV-izolátum kényszerpasszálása az MA104 (M) afrikaizöldmajom-sejtek egy különleges módon adaptált kiónján (9009B) sikeresen módosította a vírus egy vagy több epitópját, ami ennek a vírusnak egy nagyobb immunogén hatással rendelkező formájához vezetett, amely olyan területen alkalmazható vakcina előállítását teszi lehetővé, ahol más kutatók kudarcot vallottak.
Bár az előbbiekben a szemléltetés kedvéért a találmány szerinti megoldást részletesen ismertettük, nyilvánvaló, hogy ezek a részletek csak a szemléltetést szolgálták, és a gyakorlatban járatos személy azokat megváltoztathatja anélkül, hogy a találmány szellemétől vagy tárgykörétől eltérne.
1. táblázat
Késői vetélés és reprodukciós zavar kiváltása PRRSV ISU-P-izolátummal fertőzött kocákban, összehasonlítva nem fertőzött kontrollkocákkal
1. PRRSV-fertőzött csoport
Koca # A gesztáció hossza3 Víruskészítmény Koraszülött Gyenge Mumifikálódott Normális
57 112 nap PRRS-hmb 6 8 0 0
54 108 nap PRRS hm 6 1 0 0
HU 218 430 Β
1. táblázat (folytatás)
Koca# A gesztáció hossza» Víruskészítmény Koraszülött Gyenge Mumifikálódott Normális
649 112 nap PRRS-hm 3 7 0 0
58 112 nap PRRS-hm 4 4 3 0
166 112 nap PRRS-tcc 0 2 6 1
164 113 nap PRRS-tcd 2 2 5 1
80 110 nap PRRS tce 2 2 2 2
Összesen 23 26 16 4
11. Nem fertőzött kontrollcsoport
Koca # A gesztáció hossza» V íruskészítmény Koraszülött Gyenge Mumifikálódott Normális
52 114 nap nincs 0 0 0 11
56 115 nap nincs 0 0 0 12
163 116 nap nincs 1 0 0 7
Összesen 1 0 0 30
a=\sertés normális gesztációs periódusa 114 nap.
b=Az inokulum PRRSV-pozitív gnotobiotikus malacok tüdőhomogenizátuma volt.
c=Szövettenyészetből származó PRRSV, milliliterenként 103·0 fluoreszcens ellenanyaggal meghatározott 50%-os fertőző dózis (FAID50/mI). d=Szövettenyészetből származó PRRSV, 104 0 FAID50/ml. e=Szövettenyészetből származó PRRSV, 1O5·0 FAID50/ml.
2. táblázat
ISU-P-izolátummal immunizált és nem immunizált kocák ellési eredményei
Emse # IFA-titer A gesztáció hossza Koraszülött vagy elhalt Gyenge malac Mumifikálódott Normális
57v + 113 nap 2* 0 0 7
58v + 114 nap 4 0 3 11
476v + 113 nap 0 0 1 10
480v + 114 nap 0 0 0 12
52c - 111 nap 5 7 0 0
477 - 112 nap 2 8 0 0
Összesen 6 vakcinázott 7 kontakt 0 vakcinázott 15 kontakt 4 vakcinázott 0 kontakt 40 vakcinázott 0 kontakt
+: 20-nál nagyobb IFA-titert jelent. -: 20-nál kisebb IFA-titert jelent, v: vakcinázott.
c: kontroll.
3. táblázat
Inaktivált PRRSV-vakcina-vizsgálatok összefoglalása
Átlag SN-titer a kísérletes fertőzéskor Átlag SN a kísérletes fertőzést követően3 Vírusizolálásb
Vakcinázott csoport
BEI, PRRS-Carbopol n=2 < 1:2 1:82 neg/neg
BEI, PRRS-FCA/FIA n=2 < 1:2 1:4 neg/neg
BEI, PRRS Adj-B n=2 < 1:2 1:5 neg/neg
Form., PRRS-Carbopol n=2 < 1:2 1:23 neg/poz
Form., PRRS-FCA/FIA n=2 < 1:2 1:2 neg/neg
Form., PRRS-Adj-B n=2 1:3 1:8 neg/neg
HU 218 430 Β
3. táblázat (folytatás)
Átlag SN-titer a kísérletes fertőzéskor Átlag SN a kísérletes fertőzést követően3 Vírusizolálásb
Alvakcinázott csoport
Álantigén-Carbopol n=2 < 1:2 < 1:2 poz/poz
Álantigén-FCA/FIA n=2 < 1:2 < 1:2 poz/poz
Álantigén - Adj-B n=2 < 1:2 < 1:2 poz/poz
3=Szérumneutralizációs (SN) válasz a kísérletes fertőzést követő 19. napon, a kísérlet befejezésekor.
b=Vírusizolálás a plazmából a kísérletes fertőzést követő 19 napos vizsgálati időszak során bármikor. A vírus jelenlétét 9009B sejteken a CPE alapján mutattuk ki, majd ugyanazon sejtek DDOW17 jelzésű PRRSV-csoportfajlagos monoklonális ellenanyaggal való FA-festéscvel igazoltuk.

Claims (17)

1. Sertés reproduktív és légzésiszindróma-vírus (PRRSV) ISU-P jelű izolátuma, amely ATCC VR 2402 számon van deponálva.
2. Afrikaizöldmajomvese-sejtvonal 9009 B jelű klón, amely ATCC CRL 11302 számon van deponálva.
3. Eljárás az 1. igénypont szerinti PRRSV-izolátum szövettenyészetben való szaporítására, azzal jellemezve, hogy vírussal szövettenyészetet oltunk be, és a replikálódott vírust összegyűjtjük.
4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szövettenyészetként egy sejtvonalat alkalmazunk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szövettenyészetként egy afríkaizöldmajomvesesejtvonalat alkalmazunk.
6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a 2. igénypont szerinti affikaizöldmajomvese-sejtvonalat alkalmazzuk.
7. Szövettenyészet, amely az 1. igénypont szerinti PRRSV-izolátumot tartalmazza.
8. A 7. igénypont szerinti szövettenyészet 25 liternél nagyobb kereskedelmi mennyiségben, amelynek FAID50-titere nagyobb mint 105-°/ml.
9. Eljárás sertésekben PRRS ellen védettség létrehozására alkalmas vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, az 1. igénypont szerinti PRRSV-izolátumot állítunk elő, a szövettenyészet sejtjeiből a vírusokat kiszabadítjuk, az antigénkoncentrációt hígítással, koncentrálással vagy extrahálással egy módosított élő - előnyösen gyengített -, inaktivált, alegység vagy rekombináns készítmény immunológiailag hatékony mennyiségének megfelelő értékre állítjuk be.
10. Vakcina, amely az 1. igénypont szerinti PRRSVizolátumot tartalmazza.
11. Vakcina, amely a 9. igénypont szerinti eljárással van előállítva, és a PRRSV-t módosított élő - előnyösen gyengített - és folyékony, fagyasztott vagy szárított formában tartalmazza.
12. A 10. vagy 11. igénypont szerinti vakcina, amely a PRRSV-t inaktivált, adjuvált formában tartalmazza, és adott esetben megfelelő tartósítószert is tartalmaz.
13. A 12. igénypont szerinti vakcina, amely olajalapú vagy vizes alapú adjuvánst tartalmaz.
14. A 13. igénypont szerinti vakcina, amely adjuvánsként Freund-féle komplett adjuvánst vagy Freundféle inkomplett adjuvánst tartalmaz.
15. A 13. igénypont szerinti vakcina, amely inaktiválószerként bináris etilén-imint, béta-propiolaktont vagy formaiint tartalmaz.
16. A 11. igénypont szerinti vakcina, amely afrikaizöldmajomvesesejtvonal-szövettenyészeten növesztett PRRSV-t tartalmaz.
17. A 16. igénypont szerinti vakcina, amely egy, a
2. igénypont szerinti affikaizöldmajomvesesejtvonalklón-szövettenyészeten növesztett PRRSV-t tartalmaz.
HU9502330A 1993-02-08 1994-01-26 Eljárás sertés reproduktív és légzési szindróma vírus (PRRSV) tenyésztésére és annak alkalmazása vakcinában HU218430B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1491593A 1993-02-08 1993-02-08

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9502330D0 HU9502330D0 (en) 1996-05-28
HUT72917A HUT72917A (en) 1996-06-28
HU218430B true HU218430B (hu) 2000-08-28

Family

ID=21768529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9502330A HU218430B (hu) 1993-02-08 1994-01-26 Eljárás sertés reproduktív és légzési szindróma vírus (PRRSV) tenyésztésére és annak alkalmazása vakcinában

Country Status (21)

Country Link
US (2) US5510258A (hu)
EP (1) EP0683816B1 (hu)
JP (1) JP3710095B2 (hu)
KR (1) KR100374295B1 (hu)
CN (1) CN1080300C (hu)
AT (1) ATE197314T1 (hu)
AU (1) AU681874B2 (hu)
BG (1) BG63170B1 (hu)
CZ (1) CZ289743B6 (hu)
DE (1) DE69426228T2 (hu)
DK (1) DK0683816T3 (hu)
ES (1) ES2152304T3 (hu)
FI (1) FI117513B (hu)
GR (1) GR3035257T3 (hu)
HU (1) HU218430B (hu)
NO (1) NO317662B1 (hu)
NZ (1) NZ261992A (hu)
PL (1) PL178609B1 (hu)
PT (1) PT683816E (hu)
SK (1) SK98695A3 (hu)
WO (1) WO1994018311A1 (hu)

Families Citing this family (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0587780B2 (en) * 1991-06-06 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits
US5846805A (en) 1991-08-26 1998-12-08 Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells
US6080570A (en) * 1991-08-26 2000-06-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome
US6982160B2 (en) * 1991-08-26 2006-01-03 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions that include SIRS virus
US6042830A (en) * 1992-08-05 2000-03-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Viral agent associated with mystery swine disease
US5695766A (en) 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
US6773908B1 (en) 1992-10-30 2004-08-10 Iowa State University Research Foundation, Inc. Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
US6380376B1 (en) 1992-10-30 2002-04-30 Iowa State University Research Foundation Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
US6592873B1 (en) 1992-10-30 2003-07-15 Iowa State University Research Foundation, Inc. Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids
ES2074950B1 (es) * 1993-09-17 1996-03-16 Iberica Cyanamid Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda.
US5690940A (en) * 1995-06-21 1997-11-25 Regents Of The University Of Minnesota Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof
ES2102971B1 (es) * 1996-01-25 1998-03-01 Hipra Lab Sa Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion.
SK119498A3 (en) * 1996-03-01 1999-07-12 Schering Corp Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US6015663A (en) * 1996-03-01 2000-01-18 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Restriction enzyme screen for differentiating porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains
US5866401A (en) * 1996-03-01 1999-02-02 Schering Corporation Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US5976537A (en) * 1996-07-02 1999-11-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
DK0835930T3 (da) * 1996-10-09 2001-06-18 Akzo Nobel Nv Europæiske vaccinestammer af porcint reproduktions- og respirationssyndrom-virus. (PRRSV)
US20040224327A1 (en) * 1996-10-30 2004-11-11 Meulenberg Johanna Jacoba Maria Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
WO2000053787A1 (en) 1999-03-08 2000-09-14 Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Dierg Ezondheid B.V. Prrsv vaccines
EP0839912A1 (en) * 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
WO1998035023A1 (en) * 1997-02-07 1998-08-13 Origen, Inc. Method for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus for use as vaccines and diagnostic assays
AU754938B2 (en) 1997-05-06 2002-11-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRSV antigenic sites identifying peptide sequences of PRRS virus for use in vaccines or diagnostic assays
WO1999002184A1 (en) * 1997-07-10 1999-01-21 Regents Of The University Of Minnesota Causative agent of sow abortion and mortality syndrome (sams), vaccine compositions, antibodies and method
UA78180C2 (uk) 1997-10-03 2007-03-15 Меріаль Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти
FR2772047B1 (fr) 1997-12-05 2004-04-09 Ct Nat D Etudes Veterinaires E Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection
NZ501264A (en) 1998-12-22 2001-09-28 Pfizer Prod Inc Polynucleotide DNA sequence encoding an infectious RNA molecule encoding a North American PRRS
DK1183332T3 (da) 1999-04-22 2010-09-06 Us Agriculture Porcint Reproduktions- og Respirations Syndrom-vaccine baseret på isolere JA-142
US6497883B1 (en) * 1999-06-10 2002-12-24 Merial Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine
ES2170622B1 (es) * 1999-12-03 2004-05-16 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Clones y vectores infectivos derivados de coronavirus y sus aplicaciones.
AU782907B2 (en) * 1999-12-20 2005-09-08 Simon Johannes Barteling Method of inactivating microorganisms
DE60121545T2 (de) * 2000-02-08 2007-06-28 Regents Of The University Of Minnesota, Minneapolis Virus des porcinen reproduktiven und respiratorischen syndroms und dessen verwendung
US6740490B2 (en) * 2001-01-29 2004-05-25 Kansas State University Research Foundation Identification and applications of porcine reproductive and respiratory syndrome virus host susceptibility factor(s) for improved swine breeding
US6841364B2 (en) 2002-01-22 2005-01-11 Protatek International, Inc. Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
BRPI0510928A (pt) 2004-06-18 2007-11-13 Univ Minnesota identificação de organismos viralmente infectados e vacinados
US7632636B2 (en) 2004-09-21 2009-12-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use
SI2281829T1 (sl) 2004-12-30 2015-03-31 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 imunogeni sestavki za uporabo v postopku preprečevanja PCV2 infekcije
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
UA95778C2 (ru) 2005-06-24 2011-09-12 Риджентс Оф Зе Юниверсити Оф Миннесота Вирусы репродуктивно-респираторного синдрома свиней, их инфекционные клоны и мутанты и способы применения
JP5394750B2 (ja) 2005-12-29 2014-01-22 ベーリンガー インゲルハイム フェトメディカ インコーポレイテッド 多価ｐｃｖ２免疫原性組成物及び当該組成物を製造する方法
CN100523177C (zh) * 2007-01-09 2009-08-05 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用
US8202717B2 (en) 2007-01-12 2012-06-19 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Non-simian cells for growth of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus
US7666585B2 (en) * 2007-06-15 2010-02-23 Protatek International, Inc. Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations
CN101848995A (zh) * 2007-06-25 2010-09-29 南达科他州立大学 重组的北美1型猪繁殖与呼吸综合征病毒及使用方法
FI122778B (fi) 2008-03-31 2012-06-29 Metso Power Oy Pyrolyysimenetelmä kattilan yhteydessä ja pyrolyysilaitteisto
CN101363865B (zh) * 2008-05-26 2013-03-06 北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司 一种猪蓝耳病毒胶体金检测试纸条、其制备方法及其应用
UA106475C2 (uk) * 2008-08-25 2014-09-10 Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. Спосіб вакцинації свині проти високопатогенного репродуктивно-респіраторного синдрому свиней (hp prrs)
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
SI2475384T1 (sl) 2009-09-10 2016-12-30 Merial, Inc. Nove formulacije cepiva, ki obsegajo adjuvante, vsebujoče saponin
MY186535A (en) 2011-02-17 2021-07-26 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Novel european prrsv strain
WO2012110490A1 (en) 2011-02-17 2012-08-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Commercial scale process for production of prrsv
US9187731B2 (en) 2011-07-29 2015-11-17 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells
US9315781B2 (en) 2011-07-29 2016-04-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Infectious CDNA clone of european PRRS virus and uses thereof
LT2741740T (lt) 2011-08-12 2017-08-10 Merial, Inc. Biologinių produktų, ypatingai vakcinų, vakuuminis konservavimas
MX366051B (es) 2012-12-07 2019-06-26 Univ Illinois Composiciones del virus del síndrome reproductor y respiratorio de porcino y sus usos.
EP2968513A2 (en) 2013-03-15 2016-01-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use
BR112016006192A2 (pt) 2013-09-25 2017-09-26 Zoetis Services Llc composição de vacina de divergente de pcv2b e métodos de uso
TWI745278B (zh) 2014-10-10 2021-11-11 以色列商艾畢克生物實驗有限公司 發泡性降低之疫苗組合物
CN104694485A (zh) * 2015-02-13 2015-06-10 广西壮族自治区兽医研究所 Z-ietd-fmk在提高prrsv体外培养滴度方面的应用及其方法
AU2017286727B2 (en) 2016-06-17 2024-02-08 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Novel immunogenic formulations comprising linear or branched polyacrylic acid polymer adjuvants

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5213795A (en) * 1990-10-24 1993-05-25 Oxford Encephalomyocarditis virus vaccine
EP0587780B2 (en) * 1991-06-06 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits
CA2076744C (en) * 1991-08-26 2000-06-27 Danny W. Chladek Viral agent associated with mystery swine disease
WO1993003760A1 (en) * 1991-08-26 1993-03-04 James Edward Collins Sirs vaccine and diagnosis method
AU2696792A (en) * 1991-09-16 1993-04-27 David A Benfield Vaccine for mystery swine disease and method for diagnosis thereof
JPH07501049A (ja) * 1991-10-14 1995-02-02 アクゾ・ノベル・エヌ・ベー ブタ生殖・呼吸系症候群ワクチン及び診断方法
FR2682966B1 (fr) * 1991-10-29 1994-12-02 Rhone Merieux Preparation d'antigenes et de vaccins du virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie.
US5695766A (en) * 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome

Also Published As

Publication number Publication date
CZ203195A3 (en) 1995-12-13
JPH08506486A (ja) 1996-07-16
CZ289743B6 (cs) 2002-03-13
NO953091L (no) 1995-08-07
PL310126A1 (en) 1995-11-27
PL178609B1 (pl) 2000-05-31
FI953731A0 (fi) 1995-08-04
DK0683816T3 (da) 2001-01-08
NO953091D0 (no) 1995-08-07
JP3710095B2 (ja) 2005-10-26
DE69426228D1 (de) 2000-12-07
ATE197314T1 (de) 2000-11-15
AU681874B2 (en) 1997-09-11
CN1117742A (zh) 1996-02-28
EP0683816A1 (en) 1995-11-29
HU9502330D0 (en) 1996-05-28
SK98695A3 (en) 1996-11-06
DE69426228T2 (de) 2001-03-01
NO317662B1 (no) 2004-11-29
US5587164A (en) 1996-12-24
PT683816E (pt) 2001-03-30
NZ261992A (en) 1996-06-25
CN1080300C (zh) 2002-03-06
GR3035257T3 (en) 2001-04-30
EP0683816B1 (en) 2000-11-02
FI117513B (fi) 2006-11-15
ES2152304T3 (es) 2001-02-01
AU6128594A (en) 1994-08-29
BG99850A (bg) 1996-02-28
KR100374295B1 (ko) 2003-12-24
WO1994018311A1 (en) 1994-08-18
HUT72917A (en) 1996-06-28
US5510258A (en) 1996-04-23
BG63170B1 (bg) 2001-05-31
FI953731A (fi) 1995-08-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU218430B (hu) Eljárás sertés reproduktív és légzési szindróma vírus (PRRSV) tenyésztésére és annak alkalmazása vakcinában
EP0676467B1 (en) European vaccine strains of the porcine reproductive respiratory syndrome virus (PRRSV)
EP0830142B1 (en) Prrs (porcine reproductive and respiratory syndrome) virus vaccine
CA2225388C (en) Low pathogenicity prrs live virus vaccines and methods of preparation thereof
JP3722794B2 (ja) Ｓｉｒｓワクチンおよびｓｉｒｓ診断方法
KR100484041B1 (ko) 돼지생식 및 호흡증후군 바이러스의 유럽백신 균주
EP0835929A1 (en) New attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (prrs), vaccines and diagnostic means obtainable with said strain, and production process
US9579373B2 (en) Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use
WO1998000165A1 (en) Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
RU2187333C2 (ru) Вакцина для защиты свиней от репродуктивного и респираторного синдрома и способ защиты свиней
JP3043353B2 (ja) ワクチン
RU2780233C2 (ru) Способ профилактического лечения свиней
CA2155533C (en) Process for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its use in vaccines
JPH0773494B2 (ja) ウシのウイルス性下痢症ウイルス変異株の製法
MXPA97010149A (en) Live pathogenicity live virus vaccines and methods of preparation of mis
MXPA97007302A (en) New attenuated cepa of the virus causing the respiratory and reproductive swine syndrome (prrs), vaccines and diagnostic media obtained with the same and the procedures for your obtenc

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees