BG99850A - Метод за култивиране на вируса на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата и приложението му за получаване на ваксина - Google Patents

Метод за култивиране на вируса на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата и приложението му за получаване на ваксина Download PDF

Info

Publication number
BG99850A
BG99850A BG99850A BG9985095A BG99850A BG 99850 A BG99850 A BG 99850A BG 99850 A BG99850 A BG 99850A BG 9985095 A BG9985095 A BG 9985095A BG 99850 A BG99850 A BG 99850A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
vaccine
pigs
vrpsp
virus
adjuvant
Prior art date
Application number
BG99850A
Other languages
English (en)
Other versions
BG63170B1 (bg
Inventor
Thomas Sanderson
Michael MCGINLEY
Jeffrey Zimmerman
Howard HILL
Michael Meetz
Eugene Pirtle
Sabrina Swenson
George Shibley
Original Assignee
Thomas Sanderson
Michael MCGINLEY
Jeffrey Zimmerman
Howard HILL
Michael Meetz
Eugene Pirtle
Sabrina Swenson
Bayer Corporation
Iowa State University Research Foundation Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Thomas Sanderson, Michael MCGINLEY, Jeffrey Zimmerman, Howard HILL, Michael Meetz, Eugene Pirtle, Sabrina Swenson, Bayer Corporation, Iowa State University Research Foundation Inc. filed Critical Thomas Sanderson
Publication of BG99850A publication Critical patent/BG99850A/bg
Publication of BG63170B1 publication Critical patent/BG63170B1/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/10011—Arteriviridae
    • C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
    • Y10S424/815—Viral vaccine for porcine species, e.g. swine

Abstract

Изобретението се отнася до метод за култивиране на ВРРСП (вирус на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата) в тъканна култура, която е чувствителна към инфекция с вируса и позволява той да се реплицира в количество, достатъчно, за да се осигури защитата на животни срещу РРСП, или достатъчно, за да се използва за диагностика на РРСП илиза определяне молекулната структура на ВРРСП с цел разработването на рекомбинантни продукти. Методът включва инокулиране на вируса в тъканната култура и изолиране на реплицирания вирус. </P>

Description

МЕТОД ЗА КУЛТИВИРАНЕ НА ВИРУСА НА РЕПРОДУКТИВНИЯ И РЕСПИРАТОРЕН
СИНДРОМ ПРИ ПРАСЕТАТА И ИЗПОЛЗУВАНЕТО МУ ЗА ПОЛУЧАВАНЕ НА ВАКСИНИ
ПРЕДШЕСТВУВАЩОСЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТА
Предмет на Изобретението·. Настоящото изобретение се отнася за изолат от вируса на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата (ВРРСП). По-специално, изобретението се отнася за диагностични и защитни антигени и за ваксина срещу репродуктивната и респираторна болест при прасетата, както и за методите на тяхното получаване и използуване
Кратко
Описание на
Приоригета
Репродуктивния и респираторен синдром при прасетата възниква неочаквано като проблемно заболяване тежки икономически последици за американските и европейски свинепроизводители
Синдромът беше описан за първи път в САЩ през 1987, като две до три години покъсно подобни описания се появяват в Европа и Канада. За се използуват най синдрома различни
на заболяването се съобщава наименования, включващи , като мистерийна болест по свинете, син аборт (abortus blau), болест на сините нши при прасетата, респираторен синдром и синдром на епидемичните аборти при прасетата (РСЕАП), респираторен синдром и синдром на безплодието при свинете (РСБС). Тнк се използнва наименованието репродуктивен и респираторен синдром при прасетата (РРСП).
Етиологичният агент, способен да възпроизведе синдрома на заболяването, беше иденти*ициран като малък сферичен РНК вирне с обвивка, със среден диаметър на вириона от 62 нм и сърцевина 25-30 нм, заобиколена от обвивката. Този вирне е бил класифициран предварително като член на рода Ar tervirus от семейство Toqaviridae.
Изолатът от вируса на репродуктивния и респираторен синдрам при прасетата (ВРРСП), описан тнк, отговаря на тази предварителна класификация и беше показано, че той възпроизвежда синдрома на заболяването
Синдромът на заболяването, свързан
ВРРСП, се характеризира с остра и хронична загуба на възпроизводство при възрастни женски свине и способността за тежка до слаба дихателна (респираторна) болест при младите прасета. Загнбата на репродуктивната способност се характеризира с аборти в напреднал стадий на бременност, водещи до зачестяване случаите на мнмиФицирани и мъртвородени прасета, както и на случаите на раждане на слаботелесни прасета със значително намалени шансове за преживяване. Описани бяха също така и хроничини проблеми, изразяващи се в забавено разгонване (естрнс) на свинете след инфекция
Респираторната болест, следствие от инфекцията, се движи в границите от силно изявена треска и интерстициална пневмони я до слаби признаци, засягащи горните дихателни пътища (т.е. кихане, кашляне, отделяне на секрет от очите или носа) при •· • · •· •· • · ·· ···· • · · · • ···· • · ···1 • ·· ·· ··· младите прасета. Неотдавнашни (1990) серологични изследвания и изследвания върха миналото на свинските стада показват, че наймалко 507. от свинските стада в
САЩ са били изложени на ВРРСП или са претърпяли загуба на размножителната способност
Поради скорошното появяване на този болестен синдром, изследвани ята върху патогенезата, епидемиологи ята контрола над болестта са ограничени
Както ще бъде показано, е*ективното нанножаване и обработване на антитгените, съдържащи се във ВРРСП, ще улесни разработването на ВРРСП-ваксина като помощно средство за предпазване (от ) контрол над репродуктивния и респираторен синдром при прасетата
ОБОБЩЕНО ПРЕДСТАВЯНЕ НА
ИЗОБРЕТЕНИЕТО съгласие с гореказаното, настоящото изобретение включва вирусен изолат, обозначен като
ISU-Р, който може да се използува за получаване на антигени за диагностика на репродуктивния респираторен синдром при прасетата и за на защитен имунен отговор срещу вируса на репродуктивния респираторен синдром при прасетата (ВРРСП)
Изобретението включва също така методите за получаване използуване на антигени те
В настоящия вид на изобретението ВРРСП-изолатът може да се получи чрез метод, включващ изолирането на ВРРСП чрез кокнлтивиране при 35°С на 107. тегло/обем (т/о) белодробни хомогенати от прасета, инфектирани с вируса, с първични алвеоларни макроФаги на прасе или с култури на непрекъсната клетъчна линия.
Настоящото изобретение включва още и рамножаването на вируса до висок титър в определени клетъчни линии, такива като • · •· •· •· ·· ·♦ ·· .......
·· · *·· • · · · ·· · . . . ·· ·
.. ·· ·· ·· ···· • · • ··· • · · · непрекъснатата Бъбречна клетъчна линия от Африканска Зелена
Маймнна (МА 104) и нейната производна уникалната клонирана линия 9ОО9В
Изобретението съдържа също така и методи за получаване и вирне и (обикновени или рекомбинантни) и на ваксините, които се получават от тях чрез комбиниране на имунологично ефективни количества от вируса, съответно с разредител и/или адювант.
Беше установено, че директната експериментална имунизация на свине с жив вирне или контактът със свине, имунизирани с жив вирне, възпрепятствнват загнбата на репродуктивната способност след интраназално заразяване с вирулентен ВРРСП.
Беше намерено също така, че инактивирани ВРРСП-ваксини, комбинирани с адювант, предпазват прасетата от инфекция с ВРРСП след заразяване, което се установява по липсата на вирнена репликация във ваксинираните в сравнение с неваксинирани те, контролни прасета.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Както е отбелязано по-горе, настоящото изобретение е насочено към изолирането на вирусния изолат
ISU-P на ВРРСП с цел получаването на вирусни антигени, които да се използуват за направата на ваксини и за диагностични тестове
ISU-Р-изолатът беше получен от белодробната тъкан на прасе, родило се слаботелесно. За илюстрация: беше приготвен 107. т/о тъканен хомогенат от бял дроб, далак и лимфни възли в средата Minimal
Essential Media (МЕМ+А), допълнена с антибиотици за свеждане до минимум на възможността за замърсяване. Грубият хомогенат беше избистрен чрез центрофугиране на 4°С за 15 мин при 1500 х д.
Избистрената надстояща течност мл от нея беше клетки МА 104 обем 25 см адсорбиран върхн или от първични беше разредена алвеоларни
След двучасов период на монослоевете Бяха прибавени 5,0 мл серум, облъчен с промити два пъти с
МЕМ+А-среда, допълнена • · · · · • · · ·· ···
1:5 с макрофаги
МЕМ+А и 1,0 монослой от матраци с адсорбиране
МЕМ+А и към при 35°С тях бяха с 57. Фетален телешки гама-лъчи. Матраците за изолиране на вируса бяха инкубирани на 35°С в атмосфера от 57 С03 и проверявани ежедневно за появата на цитопатичен ефект (ЦПЕ) еФект на ВРРСП
ISU-P започваше с оформянето на струпвания от 5 до клетки продължаваше повечето клетки пикнотични отлепването им
Цитопатичният малки кръгли превръщането на от снбстрата в продължение на 4 до дни след инФекци ята чрез
Беше потвърдено, че
ISU-Р-изолатът е изолат на ВРРСП оцвет яване моноклонално «лиоресцентно анти т яло, специфично за групата на ВРРСП и обозначавано в специалната литератора като
SD0W17
Освен това, негативно оцветените клетки, инфектирани вируса , Бяха изследвани чрез трансмисионна елект ронна микроскопия за наличието на вирусни частици.
Наблюдаваните вирусни частици бяха СФерични, с обвивка, със среден диаметър на вириона от 65 нм и с диаметър на сърцевината от 27 нм. Вирусът от тъканната култура, охарактеризиран по този начин, беше използуван за екскпериментално възпроизвеждане на аборт напреднал стадий на бременност загуба на репродуктивната способност при Бременни свине (Таблица
Таблица 1 показва, че бременни свине, изложени както на инфектирани с ISU-P белодробни хомогенати (РРСП-хм), така и на при прасетата (РРСП). В групата РРСП-хм не бяха опрасени
ISU-P, култивиран в клетъчна култура (РРСП-тк), показват типични болестни признаци на репродуктивния и респираторен синдром ·· ·· • ·· • ··· • ·· • ·· ···· • ·· ··· нормални прасета. В грнпата РРСП—тк
DI 33 бяха опрасени само четири нормални прасетa
За сравнение 29 от 30 (96,77.) от неизложените на
Фактът, че IGU-P вируса прасета бяха нормални при опрасването дори след пречистване в тъканна култура може да възпроизвежда болестта на РРСП, потвърждава, че този изолат е класифициран коректно като член на рода Artervirus от семейство Toqaviridae Беше намерено също така, че този изолат предизвиква слаба интерстициална пневмония в експериментално инфектирани прасета.
Характерна особеност на изобретението е това, че ВРРСП, съгласно изобретението, може да се култивира в определени тъканнокултурални клетки, които ефективно реплицират вируса до ниво, напълно достатъчно, за да обезпечи антигенната маса, необходима за включване във ваксини, които могат да предпазят прасетата и/или бременните свине от заразяване с ВРРСП. За илюстрация} ВРРСП може да се култивира в тъканнокултурална клетка, обозначена от Whittaker BioProducts МА 104. Опити за размножаване на вируса при спазване на еднакви условия за култивиране и използуване на МА 104 клетки, получени от три
различни източника, показват, че съществува голямо различие между МА
104 клетките по отношение на тяхната способност да поддържат репликацията на ВРРСП във висок титър
Една клетъчна
МА 104, обозначена
МА 104(М) от
Miles Inc.,
Agriculture
Division,
Animal
Неа1th
Products
Group, и използувана описаните тук изследвани я, действително способствуваше за репликацията на
ВРРСП до висок титър. Освен това, клон клетъчна линия, получен от Miles Inc., Agriculture
Division, Animal Health Products Group, който произлизаше от МА
104(М), обозначен 9009В, поддържаше репликацията на ВРРСП в повисоки титри, отколкото родителската клетъчна линия. Поради това • · · · предпоч нтанатa тъканнокалтурална клетка за култивиране на
ISU-P • е 9009В. Следващото изложение още по-пълно онагледява размножаването на ВРРСП ISU-P в клетъчна култура.
Клетки от тъканна култура fMA 104 (М) и 9009BJ бяха култивирани и съхранявани в средата Dulbecco's modified minimum essential media, c високо съдържание на глюкоза (DMEM/HG), допълнена с 57. «етален телешки серум и буферирана с 1,3 г/л натриев бикарбонат. Препосяването на клетките беше правено с брой клетки, достатъчен за образуването на Θ0-1007. конФлуентен
монослой в рамките на 4Θ часа. Концентрираните вирусни прерарати на ВРРСП ISLi-Р бяха разреждани в DMEM/HG + 57. Фетален телешки серум, бу*ереран go pH 6,8 с PIPES. Вирусът беше инокулиран в клетъчния слой при ниска множественост на инфекцията (ИНИ) и инкнбиран на 36°С. Инфектираните култури бяха наблюдавани ежедневно в продължение на 4-7 дни за ЦПЕ. Инфектираните култури бяха събирани, когато се наблюдаваше 90-1007. ЦПЕ. Максимална вирусна антигенна маса беше получена след един цикъл на замразяване на -70°С и размразяване. Средните вирусни титри при размножаването в МА 1094(М)-клетки достигаха от 103° до 10А’®
Инфекциозна Доза на Флуоресцентното Антитяло -,о/мл (FAID Во/мл).
Вирусните титри, постигнати при размножаване в клетъчния клон
9009В, достигаха от 10°’e до 10A>s FAID »о/мл.
Титри от този порядък правят възможно включването на достатъчно антигенна маса в рецепти за ВРРСП-ваксини от промишлен мащаб с обем по-голям от
л.
Както биха забелязали опитните специалисти, в случай, че вирусът може да се размножи до големи количества антигенна маса, чрез способи, известни в областта, като екстракция от вируса, могат да се получат, съгласно изобретението, ефективни производни на този вирус, включващи снбединици от него.
• · · · • · · • · · • ·
Защитните антигени допълнително могат ga се идентифицират на молекулно ниво, да се възпроизведат експресират чрез използуване на рекомбинантната технология.
За включване във ваксинални препарати вирусните суспенсии бяха инактивирани по два метода. Бяха избрани инактивиращите агенти Формалин и бинарен етиленимин (БЕИ)
Инактивирането беше извършено чрез стандартни методи, които тук са описани по-подробно.
Формалиновото инактивиране беше извършено чрез смесване на вирусните снспенсии с концентриран
377. Формалдехид до крайна концентрация на Формалина 0,05%.
Сместа
Формалин-вирус беше държана на стайна температура (приблизително 25°С) при постоянно разбъркване в продължение на часа. Бяха вземани проби във времената 0, 8, 12 и 24 часа, клетки. Чрез цитопатичния е*ект и Флуоресцентното оцветяване със специфични за групата моноклонални антитела живи ВРРСП бяха открити само във време часа
Инактивирането с
БЕИ беше извършено чрез» комбиниране на концентриран 0,1 М БЕИ (20,5 г/л 2-бромо-етиламин HBR в 0,175 N
NaOH) с вирусните снспенсии до крайна концентрация на БЕИ 1,0 мМ. Инактивирането беше проведено чрез оставяне на сместа БЕИна стайна температура при постоянно разбъркване в продължение на 48 часа. Инактивирането на вируса беше спряно чрез добавянето на
1,0 натриев т иоснлФат до крайна концентрация от 0,1 мМ при разбъркване за два часа. Проби бяха вземани във времената 0, 2,
4, 8, 12, 24, и 48 часа и определяни за наличието на жив вирус беше установен само във времената
0, 2 и 4 часа
За приготвянето на жива или на атенюираната ваксина на изобретението, ВРРСП се променя така, че • · • · · · той все още може да инфектира по ограничен начин гостоприемника, но не може да причини признаци на заболяването в гостоприемника
Обикновено подобно изменение на вирнса намира място чрез препосяването мн в не-гостоприемна клетка, каквито са бъбречните клетки на Африканската Зелена Маймнна. Първоначално вирнсът може да не расте добре или въобще да не расте
В последния слнчай може да се окаже необходимо вирнсът принудително да се адаптира към растеж в клетъчната кнлтнра
Това може да се направи чрез прибавяне на кнлтнра при висока или ниска множественост на инфекция (МНИ )
Като алтернатива вирнсът може да се перпосява целенасочено или на сляпо заедно с клетките, докато се получи достатъчен цитопатичен еФект, което ще означава , че вирусите са се адаптирали. В процеса на адаптиране титърът на вирнса ще нараства, както се наблюдава, когато ВРРСПизолатът
ISU-P се препосее от клетъчна линия МА 104 (М) в клетъчна линия 9009В
Таблица 1 показва, че пасираният в тъканна кнлтнра
ВРРСП ISU-P ( тк ) може да бъде по-слабо вирулентен, отколкото изолираният от белодробни хомогенати, което е типичен резнлтат от адаптирането. Данните, преде т авени в Таблица 2,
показват, че методът за правене на ваксини, в съгласие с това изобретение, е особено ефективен придаването на защита срещи
РРСП следва отбрани
Инактивираният ВРРСП ISU—Р
Инактивираните снспенсии от грнпата, състояща се беше свързан с адювант, както бяха свързани с адюванти, от пълен адювант на Фройнд (FCA), непълен адювант на Фройнд (FIA), адювант на основата на карбопол и адювант В на Diamond Scientific (Adj В). Тези призводс твото на ваксини
Мастноразтворимите адюванти са прдставени от FCA,
FIA и ADJ В
Водоразтворимите адюванти адюванти представляват основните типове, използнвани в
• · • · · · • ··· · · · · · ···· • ·· ··· ·· ·· ··· · ···· ···· · · ·· ·· ·· ·· ····· представени от карБопол. Инактивираният ВРРСП ISU-P може да съдържа, но не задължително, подходящ консервант.
Ваксиналните препарати с FCA и FIA Бяха приготвени чрез емулгиране на инактивирания вирне, обикновено в равни обеми от инактивираната вирусна суспенсия и от адюванта чрез използуване на 18-калибров двупоточенен апарат и две спринцовки. Флуидите бяха прекарвани няколкократно през връзката межди спринцовките до образуването на сгъстена, полу-твърда емурсия. Емулсиите Бяха включени направо в спринцовки за инжектиране.
Ваксиналните препарати с Adj В Бяха приготвени чрез смесване на концентриран Adj В с равен обем вирусна суспенсия на инактивиран ВРРСП ISU-P. Адювантът и вирусът Бяха смесени чрез разбъркване на стайна температура за един час. Адювантната ваксина Беше прехвърлена асептично в стерилни мултидозови спринцовки и съхранявана на 4°С до инжектирането.
Ваксиналните препарати на основата на карБопол Бяха приготвени чрез смесване на концентриран карбополов адювант с инактивирани вирусни суспенсии до крайна концентрация на адюванта 107. об/об. Адювантът и вирусът бяха смесени чрез разбъркване на стайна температура за 4 часа. Адювантната ваксина беше прехвърлена асептично в стерилни мултидозови спринцовки и съхранявана на 4°С до инжектирането.
В различните ваксинални припарати, които са описани,
Беше използуван ВРРСП ISU-P вирус с титър преди инактивирането 10»’° FAID^o/мл.
За да се покаже, че ВРРСП-изолатът ISU-P Би могъл да осигури защита срущу репродуктивния и респираторен синдром при прасетата, Бяха проведени две изследвания от типа ваксиниране/заразяване. В първото изследване 4 свине Бяха имунизирани ороназално с жив ВРРСП ISU-P или по директен път, • · · · · · или чрез контакт със заболели прасета. Две свине на същата възраст не бяха имунизирани (неизложени на вируса) и бяха отглеждани отделно, за да послужат сато контроли. В прасетата, ваксинирани директно (#57 и #58) бяха въведени интраназално 3,0 мл от вирусния инокулат. Серумна конверсия беше наблюдавана 14 дни след заразяването, съгласно Индиректния Тест с Флуоресцентно Антитяло. Заразените чрез контакт свине (#476 и #480) бяха имунизирани ороназално след преместването им в близък контакт със заболели прасета. Тези прасета показаха серумна конверсия 90 дена след заразяването. Показател за серумна конверсия е IFA титър по-висок от 1:20.
След серумната конверсия на имунизираните свине техните периоди на разгонване бяха синхронизирани и те бяха оплодени. Бременността беше потвърдена с видеозон. На 90—тия ден от износването на бременността във ваксинираните и контралните бременни свине бяха въведени интраназално 3,0 мл от инфекциозния ВРРСП с титър 1 X 10^ FAIDec>.
Контролните свине #52 и #477 показаха ранни признаци на заболяването , което се изразяваше в понижен апетит и повишена телесна температура (103-104°F) за два до три дни след заразяването. Във ваксини рани те с IGU—Р свине не бяха забелязани клинични признаци на заболяването. Тези резултати показват предпазване от клиничния респираторен болестен синдром.
Всички свине бяха държани до отбиване на прасетата (четири седмици след опрасването). Таблица 2 показва резултатите от опрасването при този експеримент.
Резултатите от опрасването бяха представени като продължителност на износването (при инфекция с ВРРСП периодът на износване обикновено се скъсява), мъртвородени или мъртви плодове, слаботелесни прасета и мумии. Всички тези трудности при • · · · • · • · • · • · на бременните свине с опрасването са показателни за
ВРРСП. Отбелазан е допълнително
Нито една свиня от прасета (0 от 22 прасета бяха бяха мъртвородени и 15 от 22
Продължи телност та скъсена с 2,5 дни, • · « · инфекция и броят на нормалните прасета контролните не опраси нормални нормални)
Седем (7) от 22 прасета родени прасета бяха слаботелесни на износването при контролните свине беше което е типично за РРСП при бременни свине. В имунизираната група (п=50) 40 прасета или Θ0Ζ бяха родени нормални. Шест (ό) от прасета бяха мъртвородени и 4 от 50 плодове изглеждаха мумифицирани при опрасването
Във ваксинираната група нямаше слаботелесни прасета
Ясно свине, предварително имунизирани с жив ВРРСП ISU-P, след това оплодени и заразени, са предпазени от зараза, както показват липсата на директни клинични признаци на заболяването при свинете и предпазването на плодовете, които те носят
Както би могло да се забележи, тъй като реагентите за
IFA-теста, които бяха използувани за определяне серумния статнс на свинете в това изследване, бяха получени от ВРРСП ISU-P и тъй като съществува директна връзка между серумния статус на свинете
и предпазването им от РРСП, изолатът на ВРРСП ISU-P може да се прилага в диагностични тестове, такива като Индиректни
Тестове с
Флуоресцентно
Анти т яло, както е показано елайзи (ЕИ5А=ензимносвързан имуносорбентен анализ, елайза) , тестове за серумна неутрализация, Директни Тестове чрез Флуоресцентно
Антитяло и дрнги диагностични анализи , познати на специалистите
Следователно, съгласно изобретението могат да се подготвят и провеждат диагностични тестове антигени, получени от
ВРРСП
ISU-P
Във второто изследване по ваксиниране/заразяване млади прасета (на възраст от 4 до 6 седмици) бяха ваксинирани с •· • · •· •· няколко инактивирани ВРРСП ISU—Р-адювантни пул на ваксините беше ваксини
Антигеннмят приготвен чрез инактивиране на
ВРРСП ISU-P с БЕИ, както беше описано по-рано, и свързването ма с Карбопол,
FCA/FIA или Adj В
Втори пул от ваксинални антигени беше приготвен чрез инактивиране на ВРРСП
ISU-P с Формалин, както беше описано по-рано и свързването пн със същите три адюванта.
Бяха направени и три псевдоваксини, за да е сигурно, че адювантите и клетките не биха могли да стимулират Фалшив имунологичен отговор
Псевдоваксини те бяха приготвени чрез свързването на неинфектирани т ъ к а н н о к н л т ·. .< р а л н и клетки с адювантите
С всяка от ваксините бяха инжектирани по две прасета. Ваксините бяха инжектирани подкожно в дните 0,
21, 42 и
Седем дни след ваксинацията прасетата бяха заразени интраназално с 103’»
FAID-,ο жив вирулентен ВРРСП
След заразявянето всички прасета бяха преглеждани ежедневно за появата на клинични признаци на заболяването, Допълнително бяха събирани кръвни проби и обработвани за получаването на вирне в тъканна кнлтнра. Откриването на жив вирус в кръвния ток след заразяването сигнализираше за настъпила вирения
Титрите на серумна неутрализация бяха оценени в началото на изследването, в деня на заразяването и на 19-ия ден след заразяването
Би трябвало да се отбележи , че тестът на серумна неутрализация е по-малко чувствителен, отколкото IFA-тестът в предишното изследване. Поради това тези резултати за титъра не могат да се сравнят с предишните стойности за титрите
Таблица три представя резултатите от заразяването
Не бяха наблюдавани клинични признаци на заболяването във ваксинираните или в контролните прасета
Освен това, в периода на ваксинацията нито ваксинираните, нито контролните животни, показаха титри на серумна неутрализация. Това означава, че за ·· • ·· •· • ·· • ·· • · липсва оставаха отрицателни) стимулираха достатъчно измери чрез • · •· •· *· •· ·· среща с означава ·· ··· • · · • · · · · ··· ·· ··· жив също, вирне (контролите не ваксините не силен хнморален отговор, който да се теста на серумна неутрализация. Фактът , не отговорът чрез титър на серумна неутрализация беше значетелен след заразявянето, означава, че всички прасета бяха ефективно заразени с жив РРСП—вирус. Доказателство за осъществяване на тази зараза е процентът контролни прасета, проявяващи виремия. Всички, с изключение на едно от контролните прасета (87,57.) бяха инфектирани. Имунният отговор във ваксинираните прасета беше толкова силен, че те бяха в състояние да блокират виремията. Само едно от 12 ваксинирани прасета (8,37.) прояви виремия. Следователно, ваксините предпазваха 91,77. от прасетата.
Без да обвързваме изобретението с някаква определена
ВРРСП-изолат в специално адаптиран клон от клетки на Африканска
Зелена Маймуна (9009В) би могло успешно да промени един или имуногенност на този вирус позволяваща получаването на ваксина, каквато други учени не са успяли да получат
ТАБЛИЦА 1: Възпроизве/кцане на аборт θ напрецнал бременност и загнба на размножителната способност г стадий на три свине, контролни
заразени с ВРРСП ISU-P в сравнение свине. с незаразени,
I.........Г рнп ia, заразена с ВРРСП
Свиня Продължителност Вирнсен Мъртво Слаби Мумии Нормални
# на износване/а препарат родени
57 112 дни РРСП-хм13 6 В 0 0
54 10Θ дни РРСП-хм ό 1 0 0
649 112 дни РРСП-хм 3 7 0 0
5Θ 112 дни РРСП-хм 4 4 3 0
166 112 дни РРСП-т к = 0 2 6 1
164 113 дни РРСП-тк^ 2 2 5 1
Θ0 110 дни РРСП-тк- 2 2 2 2
Общо 23 26 16 4
а = Нормалният период на износване на бременн остта при свинете е
114 дни
Ь ВРРСП—пози т и вен инокнлнм от белодробен хомогенат на
гнотоби отично прасе
с = ВРРСП, получен от тъканна ку лтура, 1Q3. о инфекциозна доза на
Флуоресцентното антитя ло 50 на мл (FAID 50/мл)
d = ВРРСП, получен от тъканна ку лтура, 10*-° FAID50/ma
е = ВРРСП, получен от тъканна ку лтура, 10»-° FAID50/ma
II- Кон 1тролна група, незаразена с ВРРСП
Свиня Продължи телнос т Ви русен Мъртво Слаби Мумии Нормални
# на износване/а препарат родени
52 114 дни но 0 0 0 11
56 115 дни но 0 0 0 12
163 116 дни но 1 0 0 7
Общо 1 0 0 30
• · • · · ·
ТАБЛИЦА 2 s Резултати от опрасването на имунизирани с ISU—Р и неимунизирани свине
• · • · • · · • ·
Ιό
СВИНЯ IFA- ПРОДЪЛЖИТЕЛНОСТ МЪРТВО- СЛАБИ МУМИИ НОРМАЛНИ
№ ТИТЪР НА ИЗНОСВАНЕ РОДЕНИ ПРАСЕТА ИЛИ УМРЕЛИ
57v + 113 дни 2* 0 0 7
5θν + 114 дни 4 0 3 11
476ν 113 дни 0 0 1 10
4ΘΟν + 114 дни 0 0 0 12
52c - 111 дни 5 7 0 0
477 - 112 дни 2 8 0 0
ОБЩО 6 вакс. 0 вакс. 4 вакс. 40 вакс .
7 конт. 15конт. 0 конт. 0 конт .
+ означава IFA-титър > 20
- означава IFA-титър < 20 ν означава ваксинирани свине с означава контролни свине • ·
ТАБЛИЦА 3: Обобщение на изпитанията с ваксина от инактивиран вирне
грнпи ваксини Средна СН всяко заразяване
БЕИ, РРСП-
Карбопол п=2 <1:2
БЕИ, РРСП-
FCA/FIA н=2 < 1; 2
БЕИ, РРСП-
Adj В п=2 <1:2
Форм.,РРСП-
Карбопол п=2 <1:2
Форм.,РРСП—
FCA/FIA п=2 <1:2
Форм.,РРСП-
Adj В п=2 <1:3
Средна СН Изолиране на
след заразяване* вирне
1:82 нег/нег
1:4 нег/нег
1:5 нег/нег
1:23 нег/поз
1:2 нег/нег
1:8 нег/нег
грнпипсевдоваксини
Псевдо AG-
карбопол п=2 <1:2 <1:2 поз/поз
Псевдо AG-
FCA/FIA п=2 <1:2 <1:2 поз/поз
Псевдо AG-
AdjB п=2 <1:2 <1:2 поз/поз
а = СН-отговор на 19-тия ден след заразяването, прекратяване на експеримента.
b = Изолиране на вирне от плазма по всяко време от 19 дневния период на тестиране след заразяването. Изолирането на вирне беше установено чрез ЦПЕ върху 9009В клетки и потвърдено чрез ФА-оцветяване на тези клетки с моноклоналното антитяло SD0W17, специфично за грнпата на ВРРСП.
Въпреки че за целите на онагледяването изобретението беше описано подробно по-горе, трябва да се разбере, че подобно детайлно описание обслнжва само тази цел, и че специалистите могат да направят изменения без да се отдалечават от днха и съдържанието на изобретението, с изключение на ограничинията, наложени от претенциите.

Claims (3)

  1. ПРЕТЕНЦИИ
    l.Megog за култивиране на ВРРСП (вирне на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата) в тъканна кнлтнра, която е и позволява той да се реплицира в количество, достатъчно да се осигури зашитата на животни срещи
    РРСП, или доастатъчно, за да използува за диагностика на РРСП или за определяне молекулната стрнктнра на
    ВРРСП с цел разработването рекомбинантни продукти
    Методът включва инокнлиране на вирнса в тъканната кнлтнра и изолиране на реплицирания вирне
    Методът на претенция където тъканната к нлтура включва клетъчна линия.
    Методът на претенци я
  2. 2, където тъканната кнлтнра представлява бъбречна клетъчна линия от
    Зелена Африканска
    Маймнна.
    Методът на претеци я
  3. 3, където бъбречната клетъчна линия от Африканска Зелена Маймуна е от типа, обозначаван като
    МА 104(М).
    Методът на претенция 4, където клетъчната линия клон от клетките на
    Африканската
    Зелена Маймнна, който клон обозначен като 9009В.
    6.
    Тъканна кнлтнра съдържаща
    ВРРСП както проклами рано в претенция 1
    Тъканна кнлтнра съдържаща
    ВРРСП както проклами рано в претенция 2.
    8.
    Тъканна кнлтнра съдържаща
    ВРРСП както проклами рано в претенция 3.
    9.
    Тъканна кнлтнра, съдържаща ВРРСП, получен съгласно
    10=«°/мл.
    претенци я
    1 в промишлен мащаб > от 25 л при FAID-ю-титър >
    ····
    10. Метод за получаване на ваксина, ефективна за предпазване на прасета от РРСП, включващ обезпечаване на ВРРСП, съгласно претенция 1, освобождаване на вируса от тъканнокнлтуралните клетки и приготвянето на антигенната маса чрез разреждане, концентриране или екстракция, за да се получи имунологично ефективно количество от антигенната маса за целите на модифициран жив (атенюиран), инактивиран, снбединичен или рекомбинантен препарат.
    11. Метод за адаптиране на ВРРСП с цел получаване на модифицирана жива или атенюирана ваксина чрез целенасочено препосяване на ВРРСП в не-rocтоприемни клетки и клетъчни линии, докато вирусът престане да причинява признаци на РРСП.
    12. Ваксина, която се приготвя чрез метода на претенция
    10, където ВРРСП е модифициран жив (атенюиран) и се намира в течно, замръзено или сухо състояние
    Ваксината, приготвена по метода на претенция 9, където
    ВРРСП се инактивира и свързва с адювант някои случаи съдържа подходящ консервант
    Ваксината на претенция
    13, където адювантът е или мастноразтворим или водоразтворим
    Ваксината на претенция
    13, където адювантът се избира от групата, състояща се от пълен адювант на Фройнд, непълен адювант на
    Фройнд, адювант на основата на карбопол и адювант
    В на Diamond
    Scientific
    Ваксината на претенция
    13, където инактивиращият агент е бинарен етиленимин, бета пропиолактон или
    Формалин
    17. Ваксината, приготвена съгласно метода на претенция
    10, където тъканната култура представлява клетъчна линия от типа, класифициран като клетки на Зелената Африканска Маймуна.
    ···· ·· ·· • · · • · ·· ·· ·· ·· •· • · •· •· • · ·· • · · ··· ie
    Ваксината, приготвена съгласно
    10, където клетките клон клетъчна линия където метода на Африканската Зелена Маймуна , обозначаван 9009В
    19. Ваксина , приготвена съгласно метода на ант игенната (атенюмра), маса се инак тиви ра, екстрахира и се използува като получава чрез рекомбинантната технология където където
    ВРРСП
    ВРРСП усилване на
    Ваксина включва на претенция представляват претенция 10, модифицира жива субединица или се приготвена чрез* метода множество от
    Ваксина, приготвена представлява изолат,
    Метод за изменение на претенция
    10,
    ВРССП-изолат и чрез метода на претенци я
    10, обозначен като ISLJ-P на епитопите на ВРРСП с имуногенността чрез целенасочено цел препосяване на вируса в бъбречна клетъчна линия на Африканска Зелена Маймуна, обозначена 9009В
    23. Ваксина приготвена от
    ВРРСП на претенция 22.
BG99850A 1993-02-08 1995-08-08 Метод за култивиране на вируса на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата и приложението му за получаване на ваксина BG63170B1 (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1491593A 1993-02-08 1993-02-08
PCT/US1994/000951 WO1994018311A1 (en) 1993-02-08 1994-01-26 Process for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its use in vaccines

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG99850A true BG99850A (bg) 1996-02-28
BG63170B1 BG63170B1 (bg) 2001-05-31

Family

ID=21768529

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG99850A BG63170B1 (bg) 1993-02-08 1995-08-08 Метод за култивиране на вируса на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата и приложението му за получаване на ваксина

Country Status (21)

Country Link
US (2) US5510258A (bg)
EP (1) EP0683816B1 (bg)
JP (1) JP3710095B2 (bg)
KR (1) KR100374295B1 (bg)
CN (1) CN1080300C (bg)
AT (1) ATE197314T1 (bg)
AU (1) AU681874B2 (bg)
BG (1) BG63170B1 (bg)
CZ (1) CZ289743B6 (bg)
DE (1) DE69426228T2 (bg)
DK (1) DK0683816T3 (bg)
ES (1) ES2152304T3 (bg)
FI (1) FI117513B (bg)
GR (1) GR3035257T3 (bg)
HU (1) HU218430B (bg)
NO (1) NO317662B1 (bg)
NZ (1) NZ261992A (bg)
PL (1) PL178609B1 (bg)
PT (1) PT683816E (bg)
SK (1) SK98695A3 (bg)
WO (1) WO1994018311A1 (bg)

Families Citing this family (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ATE118352T1 (de) 1991-06-06 1995-03-15 Stichting Centr Diergeneeskund Erreger der mysteriösen schweinekrankheit,impfstoff-zusammensetzungen und diagnose kits.
US5846805A (en) 1991-08-26 1998-12-08 Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells
US6042830A (en) * 1992-08-05 2000-03-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Viral agent associated with mystery swine disease
US6982160B2 (en) * 1991-08-26 2006-01-03 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions that include SIRS virus
US6080570A (en) * 1991-08-26 2000-06-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome
US6592873B1 (en) 1992-10-30 2003-07-15 Iowa State University Research Foundation, Inc. Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids
US6380376B1 (en) 1992-10-30 2002-04-30 Iowa State University Research Foundation Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
US5695766A (en) 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome
US6773908B1 (en) * 1992-10-30 2004-08-10 Iowa State University Research Foundation, Inc. Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV)
ES2074950B1 (es) * 1993-09-17 1996-03-16 Iberica Cyanamid Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda.
US5690940A (en) * 1995-06-21 1997-11-25 Regents Of The University Of Minnesota Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof
ES2102971B1 (es) * 1996-01-25 1998-03-01 Hipra Lab Sa Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion.
US6015663A (en) * 1996-03-01 2000-01-18 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Restriction enzyme screen for differentiating porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains
CN1165342C (zh) * 1996-03-01 2004-09-08 先灵公司 猪生殖和呼吸综合症疫苗
US5866401A (en) * 1996-03-01 1999-02-02 Schering Corporation Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
US5976537A (en) * 1996-07-02 1999-11-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine
PT835930E (pt) * 1996-10-09 2001-06-29 Akzo Nobel Nv Estirpes europeias de vacina do virus do sindroma reprodutivo e respiratorio porcino (prrsv)
WO2000053787A1 (en) * 1999-03-08 2000-09-14 Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Dierg Ezondheid B.V. Prrsv vaccines
US20040224327A1 (en) * 1996-10-30 2004-11-11 Meulenberg Johanna Jacoba Maria Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
EP0839912A1 (en) * 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
WO1998035023A1 (en) * 1997-02-07 1998-08-13 Origen, Inc. Method for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus for use as vaccines and diagnostic assays
ES2289781T3 (es) 1997-05-06 2008-02-01 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Sitios antigenicos prrsv que identifican secuencias de peptidos de virus prrs, para su uso en vacunas de ensayos de diagnosticos.
WO1999002184A1 (en) * 1997-07-10 1999-01-21 Regents Of The University Of Minnesota Causative agent of sow abortion and mortality syndrome (sams), vaccine compositions, antibodies and method
UA78180C2 (uk) 1997-10-03 2007-03-15 Меріаль Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти
FR2772047B1 (fr) * 1997-12-05 2004-04-09 Ct Nat D Etudes Veterinaires E Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection
CA2290220C (en) 1998-12-22 2013-11-19 Pfizer Products Inc. An infectious cdna clone of north american porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) virus and uses thereof
AU4482200A (en) 1999-04-22 2000-11-10 United States Department Of Agriculture Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine, based on isolate ja-142
US6497883B1 (en) * 1999-06-10 2002-12-24 Merial Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine
ES2170622B1 (es) * 1999-12-03 2004-05-16 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Clones y vectores infectivos derivados de coronavirus y sus aplicaciones.
DE60037907T2 (de) * 1999-12-20 2009-07-09 Agricultural Research Council Verfahren zur inaktivierung von mikroorganismen
US7041443B2 (en) * 2000-02-08 2006-05-09 Regents Of The University Of Minnesota Porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of use
US6740490B2 (en) * 2001-01-29 2004-05-25 Kansas State University Research Foundation Identification and applications of porcine reproductive and respiratory syndrome virus host susceptibility factor(s) for improved swine breeding
US6841364B2 (en) 2002-01-22 2005-01-11 Protatek International, Inc. Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
US7611717B2 (en) 2004-06-18 2009-11-03 Regents Of The University Of Minnesota Identifying virally infected and vaccinated organisms
US7632636B2 (en) 2004-09-21 2009-12-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use
ES2629679T3 (es) 2004-12-30 2017-08-14 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Composiciones inmunogénicas para PCV2 y métodos para producir composiciones de este tipo
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
CA3033206C (en) 2005-06-24 2021-10-19 Regents Of The University Of Minnesota Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use
PL1968630T3 (pl) 2005-12-29 2018-08-31 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Multiwalentne immunogenne kompozycje PCV2
CN100523177C (zh) * 2007-01-09 2009-08-05 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用
PL2106440T3 (pl) 2007-01-12 2016-02-29 Univ Illinois Komórki niepochodzące od małp do hodowli wirusa zespołu rozrodczo-oddechowego świń (PRRS)
US7666585B2 (en) * 2007-06-15 2010-02-23 Protatek International, Inc. Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations
EP2181189B1 (en) * 2007-06-25 2012-06-20 South Dakota State University Recombinant north american type 1 porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of use
FI122778B (fi) 2008-03-31 2012-06-29 Metso Power Oy Pyrolyysimenetelmä kattilan yhteydessä ja pyrolyysilaitteisto
CN101363865B (zh) * 2008-05-26 2013-03-06 北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司 一种猪蓝耳病毒胶体金检测试纸条、其制备方法及其应用
WO2010025109A1 (en) * 2008-08-25 2010-03-04 Boehringer Ingelheim Vetmedia, Inc. Vaccine against highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome (hp prrs)
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
WO2011031850A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Merial Limited New vaccine formulations comprising saponin-containing adjuvants
MX355058B (es) 2011-02-17 2018-04-04 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Nueva cepa del prrsv europea.
CA2827337C (en) 2011-02-17 2019-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Commercial scale process for production of prrsv
WO2013017570A1 (en) 2011-07-29 2013-02-07 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Novel prrs virus inducing type i interferon in susceptible cells
US9187731B2 (en) 2011-07-29 2015-11-17 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells
JP6041361B2 (ja) 2011-08-12 2016-12-07 メリアル インコーポレイテッド 生物学的製品、特にはワクチンの真空保存
US9149518B2 (en) 2012-12-07 2015-10-06 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Porcine reproductive and respiratory syndrome virus compositions and uses thereof
WO2014150822A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use
EP4091629A1 (en) 2013-09-25 2022-11-23 Zoetis Services LLC Pcv2b divergent vaccine composition and methods of use
TWI745278B (zh) 2014-10-10 2021-11-11 以色列商艾畢克生物實驗有限公司 發泡性降低之疫苗組合物
CN104694485A (zh) * 2015-02-13 2015-06-10 广西壮族自治区兽医研究所 Z-ietd-fmk在提高prrsv体外培养滴度方面的应用及其方法
AU2017286727B2 (en) 2016-06-17 2024-02-08 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Novel immunogenic formulations comprising linear or branched polyacrylic acid polymer adjuvants

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5213795A (en) * 1990-10-24 1993-05-25 Oxford Encephalomyocarditis virus vaccine
ATE118352T1 (de) * 1991-06-06 1995-03-15 Stichting Centr Diergeneeskund Erreger der mysteriösen schweinekrankheit,impfstoff-zusammensetzungen und diagnose kits.
CA2116348C (en) * 1991-08-26 2001-07-03 James E. Collins Sirs vaccine and diagnosis method
CA2076744C (en) * 1991-08-26 2000-06-27 Danny W. Chladek Viral agent associated with mystery swine disease
AU2696792A (en) * 1991-09-16 1993-04-27 David A Benfield Vaccine for mystery swine disease and method for diagnosis thereof
EP0610250B2 (en) * 1991-10-14 2008-10-29 Intervet International BV Porcine reproductive respiratory syndrome (prrs) vaccine and diagnostic
FR2682966B1 (fr) * 1991-10-29 1994-12-02 Rhone Merieux Preparation d'antigenes et de vaccins du virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie.
US5695766A (en) * 1992-10-30 1997-12-09 Iowa State University Research Foundation Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome

Also Published As

Publication number Publication date
CN1117742A (zh) 1996-02-28
HU9502330D0 (en) 1996-05-28
HU218430B (hu) 2000-08-28
PL310126A1 (en) 1995-11-27
US5510258A (en) 1996-04-23
JP3710095B2 (ja) 2005-10-26
PL178609B1 (pl) 2000-05-31
ES2152304T3 (es) 2001-02-01
FI953731A (fi) 1995-08-04
DE69426228T2 (de) 2001-03-01
NO317662B1 (no) 2004-11-29
DE69426228D1 (de) 2000-12-07
SK98695A3 (en) 1996-11-06
FI953731A0 (fi) 1995-08-04
CZ203195A3 (en) 1995-12-13
AU681874B2 (en) 1997-09-11
NZ261992A (en) 1996-06-25
CZ289743B6 (cs) 2002-03-13
CN1080300C (zh) 2002-03-06
EP0683816B1 (en) 2000-11-02
ATE197314T1 (de) 2000-11-15
US5587164A (en) 1996-12-24
PT683816E (pt) 2001-03-30
DK0683816T3 (da) 2001-01-08
NO953091D0 (no) 1995-08-07
AU6128594A (en) 1994-08-29
EP0683816A1 (en) 1995-11-29
GR3035257T3 (en) 2001-04-30
BG63170B1 (bg) 2001-05-31
FI117513B (fi) 2006-11-15
HUT72917A (en) 1996-06-28
WO1994018311A1 (en) 1994-08-18
KR100374295B1 (ko) 2003-12-24
JPH08506486A (ja) 1996-07-16
NO953091L (no) 1995-08-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG99850A (bg) Метод за култивиране на вируса на репродуктивния и респираторен синдром при прасетата и приложението му за получаване на ваксина
EP0601062B1 (en) Sirs vaccine and diagnosis method
US6110468A (en) Vaccine for swine infertility and respiratory syndrome and method of use thereof
JP3715675B2 (ja) ブタ生殖呼吸症候群ウイルス（ｐｒｒｓｖ）のヨーロッパワクチン株
US6001370A (en) Attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (PRRS), and vaccines
US7264804B2 (en) Kits for detecting anti-SIRS antibodies
US6080570A (en) Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome
US3959466A (en) Highly attenuated cytomegalovirus vaccine and production thereof
KR100531491B1 (ko) 백신으로서 소 호흡 코로나바이러스
US3544680A (en) Intranasal immunization against rubella
JP3043353B2 (ja) ワクチン
US4618493A (en) Temperature sensitive strains of bovine viral diarrhoea virus, preparation thereof and vaccines containing them
MXPA97007302A (en) New attenuated cepa of the virus causing the respiratory and reproductive swine syndrome (prrs), vaccines and diagnostic media obtained with the same and the procedures for your obtenc