CZ289743B6 - Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu PRRSV, způsob kultivace PRRSV, tkáňová kultura, způsob přípravy vakcíny a vakcína obsahující PRRSV izolát - Google Patents
Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu PRRSV, způsob kultivace PRRSV, tkáňová kultura, způsob přípravy vakcíny a vakcína obsahující PRRSV izolát Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289743B6 CZ289743B6 CZ19952031A CZ203195A CZ289743B6 CZ 289743 B6 CZ289743 B6 CZ 289743B6 CZ 19952031 A CZ19952031 A CZ 19952031A CZ 203195 A CZ203195 A CZ 203195A CZ 289743 B6 CZ289743 B6 CZ 289743B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- prrsv
- virus
- tissue culture
- vaccine
- isolate
- Prior art date
Links
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 title claims abstract description 77
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 7
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 53
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims abstract description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 24
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 14
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 claims description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 claims description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 8
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 6
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 3
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 2
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 2
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine;hydron;bromide Chemical compound [Br-].[NH3+]CCBr WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101100121891 Pisum sativum SBEI gene Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 208000017443 reproductive system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/815—Viral vaccine for porcine species, e.g. swine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Izol t viru vep°ov ho reproduk n ho a respira n ho syndromu (PRRSV) ozna en² jako ISU-P a ulo en² pod p° stupov²m slem ATCC VR 2402. Zp sob kultivace tohoto PRRSV izol tu ve tk ov kultu°e, kter je citliv na infekci pro replikaci viru na mno stv dostate n k ochran ivo ich p°ed PRRS nebo identifikaci molekulov struktury PRRSV pro v²voj rekombinantn ch produkt , kter² zahrnuje inokulaci tk ov kultury virem a z sk n replikovan ho viru. Do rozsahu °e en n le rovn tk ov kultura obsahuj c PRRSV v² e uveden² izol t a zp sob p° pravy vakc ny · inn p°i ochran vep° p°ed PRRS, spo vaj c v tom, e se p°iprav izol t PRRSV, uvoln se virus do tk ov kultury a uprav se antigenn hmota z°ed n m, zkoncentrov n m nebo extrakc , p°i em se z sk imunologicky · inn mno stv antigenn hmoty pro modifikovan² iv² (zeslaben²), inaktivn , podjednotkov² nebo rekombinantn p° pravek.\
Description
Oblast techniky
Vynález se týká izolátu viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu („porcine reproductive and respirátory syndrom virus“ - PRRSV) označený jako ISU-P. Rovněž se předmětný vynález týká způsobu kultivace PRRSV izolátu ve tkáňové kultuře, která je citlivá na infekci, tkáňové kultury obsahující PRRSV izolát a způsobu přípravy vakcíny účinné při ochraně vepřů před PRRSV. Obecně se předložený vynález týká diagnostických a ochranných antigenů a vakcín pro reprodukční a respirační chorobu selat a způsobů jeho výroby a použití.
Dosavadní stav techniky
Reprodukční a respirační syndrom vepřů je rychle se rozmáhajícím ekonomicky devastujícím problémem v USA a rovněž tak i v evropské produkci vepřů. Tento syndrom byl nejprve popsán v USA v roce 1987, přičemž o dva roky později byly tyto závěry potvrzeny podobnými výzkumy v Evropě a Kanadě. Syndrom choroby byl označován mnoha různými názvy, zahrnujícími záhadnou chorobu prasnic, abortus blau, choroba selat s modrýma ušima, epidemický abortus u vepřů a respirační syndrom (PEARS), syndrom neplodnosti a respirační syndrom u prasnic (SIRS - swine infertility and respirátory syndrome). Název reprodukční a respirační syndrom u vepřů (PRRS) byl používán až později.
Etiologické činidlo schopné reprodukovat syndrom choroby bylo identifikováno jako malý obalový sférický RNA virus, s průměrným průměrem virionu 62 nm a 25 - 30 nm velkým jádrem obklopeným obalem. Virus byl předběžně zařazen jako člen rodu Arterivirus v rodině Togaviridae. Zde popsaný izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu (PRRSV) naplňuje tuto předběžnou klasifikaci a byl shledán reprodukujícím chorobný syndrom.
Chorobný syndrom spojený s PRRSV je charakterizován akutním a chronickým selháním schopnosti reprodukce u dospělých prasnic a obtížnou až střední respirační chorobou u mladých podsvinčat. Reprodukční selhání je charakterizováno pozdním potratem, což vede ke zvýšenému výskytu mumifíkovaných, mrtvě narozených a oslabených narozených selat s výrazně sníženými šancemi na přežití. Rovněž byly popsány chronické problémy s opožděným navrácením dělohy u infikovaných prasnic. Následující respirační choroba zahrnuje stavy od horečky a intersticiální pneumonitis až znaky střední choroby horních cest dýchacích (tj. kýchání, kašlání a nasální nebo oční potíže) u malých podsvinčat. V poslední době (1990) sérologické a chovné studie indikují, že alespoň 50 % chovu vepřů v USA bylo vystaveno PRRSV nebo prošlo chorobou reprodukčního selhání a respirační chorobou indikovanou u PRRSV infekce.
Vzhledem k nebezpečnosti tohoto chorobného syndromu byly v poslední době studie patogeneze, epidemiologie a kontroly choroby omezeny. Je třeba chápat, že účinný vývoj a propagace antigenů, obsahujících PRRSV, bude usnadňovat vývoj PRRSV vakcíny za účelem prevence a kontroly reprodukčního a respiračního syndromu u vepřů.
Podstata vynálezu
Podstatou předmětného vynálezu je izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu (PRRSV) označený jako ISU-P a uložený pod přístupovým číslem ATCC VR 2402.
Do rozsahu vynálezu rovněž náleží způsob kultivace výše uvedeného PRRSV izolátu ve tkáňové kultuře, která je citlivá na infekci, pro replikaci viru na množství dostatečné k ochraně živočichů
-1 CZ 289743 B6 před PRRS nebo identifikaci molekulové struktury PRRSV pro vývoj rekombinantních produktů, jehož podstata spočívá v tom, že zahrnuje inokulaci tkáňové kultury virem a získání replikovaného viru.
Ve výhodném provedení tohoto postupu tkáňová kultura obsahuje buněčnou linii, a podle nej výhodnějšího provedení je tkáňovou kulturou buněčná linie,-Afričan Green Moneky Kidney“.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží tkáňová kultura obsahující výše definovaný PRRSV izolát.
Ve výhodném provedení je tato tkáňová kultura v průmyslovém měřítku nad 25 litrů při fluorescenční protilátkové infekční dávce 50 na ml, FAID50 titru větším než 105,0/ml.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží způsob přípravy vakcíny účinné při ochraně vepřů před PRRS, jehož podstata spočívá v tom, že se připraví výše definovaný izolát PRRSV, uvolní se virus do tkáňové kultury a upraví se antigenní hmota zředěním, zkoncentrováním nebo extrakcí, přičemž se získá imunologicky účinné množství antigenní hmoty pro modifikovaný živý (zeslabený), inaktivní, podjednotkový nebo rekombinantní přípravek.
Do rozsahu předmětného vynálezu rovněž náleží vakcína obsahující výše definovaný PRRSV izolát.
Ve výhodném provedení je tato vakcína připravená výše definovaným postupem, ke PRRSV je modifikovaný živý (zeslabený), a je v kapalné, zmrazené nebo vysušené formě.
Výhodná je podle předmětného vynálezu vakcína, ve které PRRSV je inaktivován a smísen s adjuvans a případně obsahuje vhodnou konzervační přísadu. Výhodně je adjuvans buďto na bázi oleje nebo na bázi vody. Podle ještě výhodnějšího provedení je adjuvans vybráno ze skupiny zahrnující Freundovo kompletní adjuvans a Freundovo nekompletní adjuvans.
V případě vakcíny podle vynálezu je výhodně uvedeným inaktivovaným činidlem binární ethylenimin, beta propiolakton nebo formalin.
Výhodná je podle předmětného vynálezu rovněž vakcína, kde tkáňovou kulturou je buněčná linie , Afričan Green Monkey Kidney“.
Předmětem vynálezu je tedy virový izolát, označený jako ISU-P, který je použitelný při přípravě antigenů pro diagnostiku reprodukčního a respiračního syndromu u vepřů a vyvolání ochranné imunitní odezvy na virus reprodukčního a respiračního syndromu vepřů (PRRSV).
V předloženém provedení podle vynálezu může být PRRSV izolát získán způsobem zahrnujícím izolaci PRRSV ko-kultivací 10% hmotn./obj. plicních homogenátů z virem infikovaných podsvinčat s primární alveolámí makrofágovou nebo kontinuální buněčnou kulturou při teplotě 35 °C.
Předložený vynález dále zahrnuje rozmnožování viru na vysoký titr v určitých buněčných liniích jako je „Afričan Green Monkey Kidney“ kontinuální buněčná linie (MA 104) a její unikátní klonovaný derivát (9009B).
V rozsahu řešení jsou rovněž způsoby přípravy a použití živých virových nebo usmrcených virových antigenů (běžných nebo rekombinantních) a vakcíny, které se z nich získají kombinací imunologicky účinného množství viru s ředidlem a/nebo přísadou.
-2CZ 289743 B6
Podle vynálezu bylo zjištěno, že přímá experimentální imunizace prasnic živým virem nebo kontaktem s prasnicemi imunizovanými živým virem, brání reprodukčnímu selhání po intranasálním podnětu virulentním PRRSV.
Podle vynálezu bylo rovněž zjištěno, že inaktivované PRRSV vakcíny s přísadami chrání podsvinčata před PRRS infekcí po podnětu měřeno ztrátou replikace viru ve vakcinátech ve srovnání a nevakcinovanými kontrolními podsvinčaty.
Jak je uvedeno výše, je předložený vynález zaměřen na izolaci PRRSV virového izolátu ISU-P za účelem získání virových antigenů pro použití ve vakcínách a diagnostických studiích. ISU-P izolát byl získán z plicní tkáně oslabených narozených selat. Ilustrativně je možno uvést, že se získá tkáňový homogenát z plic, slinivky a lymfatických žláz o koncentraci 10% hmotn./obj. v minimálním základním médiu (Minimal Essential Media) doplněném antibiotiky (MEM+A) pro minimalizaci potenciální kontaminace. Surový homogenát se vyčeří a odstřeďuje při teplotě 4 °C po dobu 15 minut při 1500 x g. Čirý supematant se zředí 1 : 5 v MEM+A a 1,0 ml se potom adsorbuje na 48 hodin starou konfluentní monovrstvu MA 104 buněk nebo primárních alveolámích makrofágů v nádobkách s plochou 25 cm2. Po 2 hodinách adsorpční periody při 35 °C se monovrstvy promyjí dvakrát s MEM+A a 5,0 ml MEM+A doplněných 5,0 % gammaozářeného fetálního telecího séra. Virové izolační lahvičky se potom inkubují při teplotě 35 °C v 5% CO2 atmosféře a denně se pozorují na výskyt cytopatických účinků (CPE). PRRSV ISU-P cytopatický účinek začne obklopením malého místa 5 až 10 buněk a pokračuje až do stavu, kdy je mnoho buněk pyknotických a oddělí se od substrátu během průběhu 4 až 7 dnů po infekci.
ISU-P izolát byl potvrzen jako PRRSV izolát fluorescenčním vybarvením protilátky s PRRSV skupinou specifické monoklonální protilátky, označení publikované domény SDOW17. Navíc byly negativně vybarvené virem infikované buňky zkoušeny transmisní elektronovou mikroskopií na přítomnost virových částic. Pozorované virové částice byly sférické a obalené virionem s průměrným průměrem 65 nm a průměrem jádra 27 nm. Tkáňová virová kultura charakterizovaná tímto způsobem byla použita pro pokusnou reprodukci pozdního potratu a reprodukčního selhání u březích prasnic (tabulka 1). Tabulka 1 ukazuje, že březí mladé prasnice vystavené buď ISU-P infikovaným plicním homogenátům (PRRS-hm) nebo ISU-P pěstovanému v buněčné kultuře (PRRS-tc) demonstrují typické znaky reprodukčního a respiračního syndromu vepřů (PRRS). V PRRS-hm skupinách nebyla nalezena žádná normální vržená selata. V PRRS-tc skupinách byla pouze 4 ze 33 selat vržena normálně. Ve srovnání bylo 29 ze 30 (96,7 %) nevystavených selat při vrhu normálních. Skutečnost, že ISU-P i po purifikaci tkáňové kultury může reprodukovat PRRS, potvrzuje, že izolát je správně klasifikován jako rod Arterivirus v rodině Togaviridae. Tento izolát byl také shledán jako produkující mírnou intersticiální pneumonii u pokusně infikovaných selat.
Charakteristickým znakem předloženého vynálezu je to, že PRRSV podle vynálezu může růst v určitých buňkách tkáňové kultury, které účinně replikuji virus na hladinu dostačující k poskytnutí antigenní hmoty nezbytné k inkorporování do vakcín, které mohou chránit selata a/nebo březí mladé prasnice nebo prasnice před PRRS podnětem. Pro ilustraci je možno uvést, že PRRSV může být pěstován na tkáňové buněčné kultuře označené MA104 od Whittaker BioProducts. Pokusy s množením viru používající stejné kultivační podmínky, s MA104 buňkami získanými ze tří různých zdrojů naznačují, že existuje vysoký stupeň variability mezi MA104 buňkami, pokud jde o schopnost podporovat PRRSV replikaci na vysoký titr. Jedna MA104 buněčná kultura označená MA104(M) od Miles lne., Agriculture Division, Animal Health Products Group, a použitá ve výše popsaných studiích, konzistentně podporuje PRRSV replikaci na vysoký titr. Dále klon buněčné linie, vyvinutý v Miles lne., Agriculture Division, Animal Health Products Group, který je odvozen od MA104(M), označený 9009B, podporuje replikaci PRRSV na titry vyšší než rodičovská buněčná linie. Preferovanou tkáňovou buněčnou kulturou pro růst ISU-P je 9009B. Dále je podrobnější popis propagace buněčné kultury PRRSV ISU-P.
-3 CZ 289743 B6
Buňky tkáňové kultury (MA104(M) a 9009B) byly kultivovány a udržovány vDulbeccově modifikovaném minimálním základním médiu, s vysokým obsahem glukózy (DMEM/HG), doplněném 5 % fetálního telecího séra a pufrovaném 1,3 g/1 hydrogenuhličitanu sodného. Buněčné pasáže byly provedeny s dostatečným počtem buněk pro udržení konfluentní monovrstvy po 5 dobu 48 hodin. PRRSV ISU-P virové základy byly zředěny v DMEM/HG + 5 % fetálního séra pufrovaného na pH 6,8 s PIPES. Vir byl inokulován na buněčnou vrstvu při malé multiplicitě infekce (MOI) a inkubován při teplotě 36 °C. Infikované kultury byly pozorovány denně na CPE po dobu 4 až 7 dnů. Infikované kultury byly sklizeny, když byl evidentní 90 až 100% CPE. Maximální virová antigenní hmota byla získána po jednom cyklu zmrazení na 10 -70 °C/roztátí. Průměrný virový titr získaný z propagace v MA104(M) buňkách se pohybuje od
103,0 až 104’5 fluorescentní protilátkové infekční dávky/ml (FAID5o/ml). Virové titry dosažené propagací v9009B buněčném klonu se pohybují od 105’5 do 106’5 FAIDso/ml. Titry v tomto rozsahu umožňují, aby byla inkorporována dostatečná antigenní hmota do komerčních PRRSV vakcínových přípravků většího objemu než 50 1.
Pro odborníky pracující v daném oboru je zřejmé, že vzhledem k tomu, že PRRSV může být rozmnožován na vysoké hladiny antigenní hmoty, deriváty viru, zahrnující jeho podjednotky, které jsou účinné podle vynálezu, mohou být získány prostředky běžně známými v tomto oboru, jako je například extrakce z viru. Dále mohou být ochranné antigeny identifikovány 20 v molekulové úrovni a reprodukovány a exprimovány za použití rekombinantní technologie.
Virální kapaliny pro vakcínové přípravky byly inaktivovány dvěma metodami. Zvolenými inaktivanty byly formalin a binární ethylenimin (BEI). Inaktivace byla provedena standardními metodami zde podrobněji popsanými. Formalinová inaktivace byla provedena smísením virálních 25 kapalin se zásobním 37% formaldehydem na konečnou koncentraci formalinu 0,05 %. Směs formalin-virus byla udržována při teplotě místnosti (přibližně 25 °C) za nepřetržitého míchání po dobu 24 hodin. Vzorky byly odebírány v čase 0, 8, 12 a 24 hodin a zkoušeny na živý virus v9009B buňkách. Cytopatický efekt a fluorescenční vybarvení se skupinou specifické monoklonální protilátky detekující živý PRRSV se projevily pouze v době = 0 hodin.
Inaktivace sBEI byla provedena spojením zásobního 0,1 M BEI (20,5 g/1 2-brom-ethylaminu HBR v 0,175 N NaOH) s virálními kapalinami na konečnou koncentraci 1,0 mM BEI. Inaktivace byla provedena udržováním směsi BEI-virus při teplotě místnosti za konstantního míchání po dobu 48 hodin. Virová inaktivace byla ukončena přídavkem 1,0 M thiosíranu sodného na 35 konečnou koncentraci 0,1 mM za míchání po 2 hodiny. Vzorky byly odebírány v časech 0, 2, 4,
8, 12, 24 a 48 hodin a zkoumány na živý virus jak je popsáno výše. Živé PRRSV byly detekovány pouze v časech = 0,2 a 4 hodiny.
Při přípravě modifikované živé nebo zeslabené vakcíny podle vynálezu je PRRSV změněn tak, že 40 ještě může infikovat hostitele omezeným způsobem, ale nemůže působit znaky choroby u hostitele. Normálně se taková změna viru provádí jeho pasážováním v nehostitelské buňce, jako jsou buňky „Afričan Green Monkey“ ledvin. Na počátku virus neroste dobře nebo neroste vůbec. V tomto případě může být nezbytné zesílit virus tak, aby se adaptoval na růst v buněčné kultuře. Toho může být dosaženo přídavkem viru k buněčné kultuře při vysoké nebo nízké 45 multiplicitě infekce (MOI). Alternativně může být virus posílen pasážováním nebo slepým pasážováním samotným s buňkami, až je pozorován cytopatický efekt, což indikuje, že virus byl adaptován. Jakmile bylo dosaženo adaptace, zvyšuje se titr viru, což je možno pozorovat když je PRRSV izolát ISU-P pasážován zMA104(M) buněčné linie do 9009B buněčné linie. Tabulka 1 ukazuje, že tkáňovou kulturou pasážovaný PRRSV ISU-P (PRRS-tc) může být méně virulentní 50 než ten, který byl izolován z plicního homogenátu, jako typický výsledek adaptace. Hodnoty popsané v tabulce 2 indikují, že způsob výroby vakcín podle předloženého vynálezu poskytuje vakcíny, které jsou zejména účinné při dosažené ochrany proti PRRS.
Inaktivovaný PRRSV ISU-P byl zpracován s přísadami následovně. K inaktivovaným kapalinám 55 byly přidány přísady vybrané ze skupiny, zahrnující Freundovo kompletní adjuvans (FCA),
-4CZ 289743 B6
Freundovo nekompletní adjuvans (FIA), adjuvans na bázi carbopolu a Diamond Scientific Adjuvans B (adj B). Tato adjuvans představují hlavní typy používané při výrobě vakcín. Adjuvans na bázi oleje představují FCA, FIA a ADJ B. Adjuvans na bázi vody jsou představována carbopolem. Inaktivovaný PRRSV ISU-P může popřípadě obsahovat vhodnou chránící látku.
Vakcínoné přípravky s FCA a FIA byly připraveny emulgací inaktivovaného viru, obvykle ve stejných objemech inaktivované virové kapaliny a adjuvans za použití 18 guage dvojitého luer uzavíracího zařízení a dvou stříkaček. Kapaliny byly stlačovány opakovaně sestavou mezi stříkačkami až do vytvoření husté polopevné emulze. Emulze byly plněny přímo do stříkaček pro podávání.
Vakcínové přípravky s Adj B byly připraveny smísením zásobního Adj B se stejným objemem inaktivované PRRSV ISU-P virové kapaliny. Adjuvans a virus byly míšeny za míchání při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Vakcína s adjuvans byla asepticky přenesena do sterilních multidávkových lahviček a skladována při teplotě 4 °C před podáním.
Vakcíny na bázi carbopolu byly připraveny smísením zásobního carbopolového adjuvans s inaktivovanými virovými kapalinami na konečnou koncentraci adjuvans 10% obj./obj. Adjuvans a virus byly smíseny mícháním při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Vakcína s adjuvans byla asepticky přenesena do sterilních multidávkových lahviček a skladována při teplotě 4 °C před podáním.
PRRSV ISU-P virus v preinaktivačním titru nízkém až 105,0 FAID50/ml byl použit v různých vakcínových přípravcích, jak je popsáno v tomto textu.
Za účelem prokázání, že PRRSV izolát ISU-P by mohl chránit proti reprodukčnímu a respiračnímu syndromu vepřů, byly provedeny dvě studie vakcinace/podnět. V první studii byly 4 mladé prasnice imunizovány živým PRRSV ISU-P oronasálním vystavením viru buď přímou cestou nebo kontaktem s nemocnými selaty. Dvě mladé prasnice stejného stáří byly ponechány neimunizované (nevystavené) a byly ustájeny odděleně a sloužily jako kontrola. Přímo vystavené vakcináty (č. 57 a č. 58) dostaly 3,0 ml virového inokula intranasálně. Tyto prasnice serokonvertovaly 14 dnů po vystavení podle Indirect Fluorescent Antibory Test. Kontaktů vystavené mladé prasnice (č. 476 a č. 480) byly imunizovány orální cestou po umístění do těsného kontaktu s nemocnými selaty. Tato selata serokonvertovala 90 dnů po expozici. Serokonverze je indikována IFA titrem vyšším než 1 : 20.
Poté co imunizované mladé prasnice serokonvertovaly, byl jejich estrus synchronizován a byly březí. Březost byla potvrzena ultrazvukem. 90. den březosti dostaly vakcinované a kontrolní březí mladé prasnice 3,0 ml PRRS virového podnětu intranasálně při titru 1 x 104 FAID50.
Kontrolní mladé prasnice č. 52 a č. 477 demonstrují časné znaky choroby tím, že mají sníženou chuť ke krmení a zvýšené tělesné teploty (39,4-39,9 °C) dva až tři dny po podnětu. Žádné klinické znaky nebyly zaznamenány u ISU-P vystavených (vakcinovaných) mladých prasnic. Tyto výsledky demonstrují ochranu před klinickým syndromem respirační choroby.
Všechny mladé prasnice byly chovány až do odstavení mláďat (4 týdny po vrhu). Tabulka 2 ukazuje výsledky z tohoto pokusu.
Výsledky jsou u vrhu zaznamenány jako délka březosti (délka březosti je normálně zkrácena PRRS infekcí), mrtvě narozenými nebo mrtvými plody, oslabenými selaty a mumiemi. Tyto obtíže při vrhu jsou všechny indikací pro PRRS infekci u březích mladých prasnic nebo prasnic. Navíc byl zaznamenán počet normálních selat.
-5CZ 289743 B6
Žádná z kontrolních mladých prasnic nevrhla normální selata (0 až 22 selat je normální). Sedm (7) ze 22 selat se narodilo mrtvých a 15 až 22 selat bylo oslabených. Délka březosti u kontrolních mladých prasnic byla zkrácena o 2,5 dne, což je typické pro RPRRS u březích prasnic. V imunizované skupině (n = 50) 40 selat nebo 80 % bylo narozeno normálně. Šest (6) z 50 selat bylo narozeno mrtvých a 4 z 50 plodů se jevily při vrhu jako mumifikované. Ve vakcinované skupině nebyla žádná oslabené selata. Je zřejmé, že mladé prasnice předem vystavené živému PRRSVISU-P, které byly zabřeznuty a pak jim byl podán podnět, jsou chráněny před podnětem, jak je demonstrováno ztrátou přímých klinických znaků choroby u mladých prasnic a ochranou plodů, které nesou.
Je zřejmé, že protože IFA testovací činidla, která byla použita pro stanovení serostatusu mladých prasnic v této studii, byla odvozena od PRRSV ISU-P a protože je zde přímý vztah mezi stavem séra mladých prasnic a ochranou před PRRS, PRRSV ISU-P izolát by mohl být použitelný v diagnostických testech, jako jsou Indirect Fluorescent Antibody testy, jak je zde demonstrováno, ELISA-testech, zkouškách sérové neutralizace, Direct Fluorescent Antibody zkouškách a jiných diagnostických zkouškách. Proto mohou být podle vynálezu připraveny a použity diagnostické zkoušky odvozené od antigenů získaného z PSSSV ISU-P.
Ve druhé studii vakcinace/podnět, byla mladá selata (4 až 6 týdnů stará) vakcinována několika inaktivovanými, adjuvans obsahujícími PRRSV ISU-P vakcínami. Vakcínový antigenový pool byl připraven inaktivací PRRSV ISU-P s BEI jak bylo dříve uvedeno a zpracován s přísadou buď Carbopol, FCA/FIA nebo Adj B. Druhý vakcínový pool byl připraven inaktivací PRRSV ISU-P s formalinem jak již bylo popsáno a zpracován se stejnými uvedenými 3 přísadami. Byly připraveny tři imitované vakcíny za účelem potvrzení toho, že přísady a buňky by neměly stimulovat falešnou imunologickou odpověď. Imitované vakcíny byly připraveny přidáním neinfikovaných buněk tkáňové kultury. Každou vakcínou byla infikována dvě selata. Vakcíny byly podávány subkutánně ve dnech 0, 21, 42 a 64. Sedm dní po poslední vakcinaci byl selatům podán podnět intranasálně 103'5 FAID50 virulentního živého PRRSV. Všechna- selata byla po podnětu denně sledována na klinické znaky choroby. Navíc byly odebírány vzorky krve a zpracovány pro získání viru ve tkáňové kultuře. Živý virus nalezený v krevním proudu po podnětu znamená, že se objevila viremie.
Sérové neutralizační titry byly hodnoceny na počátku studie, v den podnětu a 19 dnů po podnětu. Je třeba poznamenat, že test sérové neutralizace je méně citlivý než IFA test použitý v předchozí studii. Proto nebylo možno porovnat tyto titrové výsledky s předcházejícími titrovými výsledky.
Tabulka 3 uvádí výsledky podnětu. Nebyly pozorovány žádné klinické znaky choroby u vakcinovaných nebo kontrolních selat. Dále ani vakcináty ani kontroly nevyvinuly titry sérové neutralizace během vakcinační periody. Toto indikuje, že nebyly vystaveny živému viru během této časové periody (kontroly zůstaly negativní) a také to indikuje, že vakcíny nestimulovaly humorální odezvu dosti vysokou ktomu, aby byla měřena sérovým neutralizačním testem. Skutečnost, že sérová neutralizace titrové odezvy po podnětu byla významná indikuje, že všechna selata byla účinně podnícena živým PRRS virem. Ověřením tohoto vystavení podnětu jsou procenta kontrolních selat demonstrujících viremii. Všechna kontrolní selata bez jednoho (87,5 %) byla infikována. Imunitní odpověď u vakcinovaných selat byla tak silná, že byla schopna blokovat viremii. Pouze 1 ze 12 vakcinovaných selat (8,3 %) demonstrovalo viremii. Vakcína tak chrání 91,7 % selat.
Aniž by následující skutečnosti byly omezovány nebo vázány na nějakou teorii, předpokládá se, že zesilující pasážování původního PRRSV izolátu přes specificky upraveny klon MA104(M) Afričan Green Monkey Cells (9009B) mohlo úspěšně změnit jeden nebo více epitopů viru, což vede ke zvýšené imunogenicitě tohoto viru a je tak umožněna výroba vakcíny v oblasti, kde dosud vědci nebyl úspěšní.
-6CZ 289743 B6
Tabulka 1: Reprodukce pozdního abortu a reprodukčního selhání u prasnic vystavených PRRSV izolátu ISU-P ve srovnání s nevystavenými kontrolními prasnicemi
I. PRRS vystavená skupina
| prasnice č. | doba březosti příprava viru (a) | mrtvě nar. | oslabená | mumie | normální | |
| 57 | 112 dnů | PRRS-hmb | 6 | 8 | 0 | 0 |
| 54 | 108 dnů | PRRS-hm | 6 | 1 | 0 | 0 |
| 649 | 112 dnů | PRRS-hm | 3 | 7 | 0 | 0 |
| 58 | 112 dnů | PRRS-hm | 4 | 4 | 3 | 0 |
| 166 | 112 dny | PRRS-tcc d | 0 | 2 | 6 | 1 |
| 164 | 113 dnů | PRRS-tc | 2 | 2 | 5 | 1 |
| 80 | 110 dnů | PRRS-tce | 2 | 2 | 2 | 2 |
| celkem | 23 | 26 | 16 | 4 |
a = normální doba březosti prasnic je 114 b = PRRSV pozitivní gnotobiotický plicní homogenát selat jako inokulum c = tkáňová kultura získaná z PRRSV, IO3,0 fluorescentní protilátková infekční dávka 50 na ml (FAID50/ml) d = tkáňová kultura odvozená od PRRSV, IO4,0 FAID50/ml e = tkáňová kultura odvozená od PRRSV, IO5,0 FAID50/ml
II. Nevystavená kontrolní skupina
| prasnice č. | délka březosti | příprava viru | mrtvě nar. | oslabená | mumie | normální |
| 52 | 114 dnů | na | 0 | 0 | 0 | 11 |
| 56 | 115 dnů | na | 0 | 0 | 0 | 12 |
| 163 | 116 dnů | na | 1 | 0 | 0 | 7 |
| celkem | 1 | 0 | 0 | 30 |
Tabulka 2: Výsledky vrhu ISU-P imunizovaných a neimunizovaných mladých prasnic
| prasnice č. | IFA titr | délka březosti | mrtvě narozená nebo mrtvá | oslabená selata | mumie | normální |
| 57V | + | 113 dnů | 2X | 0 | 0 | 7 |
| 58V | + | 114 dnů | 4 | 0 | 3 | 11 |
| 476V | + | 113 dnů | 0 | 0 | 1 | 10 |
| 480V | + | 114 dnů | 0 | 0 | 0 | 12 |
| 52C | — | 111 dnů | 5 | 7 | 0 | 0 |
| 477 | - | 112 dnů | 2 | 8 | 0 | 0 |
| celkem | 6 vakc. | 0 vakc. | 4 vakc. | 40 vakc. | ||
| 7 kont. | 15 kont. | 0 kont. | 0 kont. |
+ označuje IFA titr nad 20
- označuje IFA titr pod 20 V označuje vakcináty
C označuje kontroly
Tabulka 3: Souhrn pokusů s PRRSV inaktivovanou vakcínou
| Vakcínová skupina | průměrná SN každého podnětu | průměrná SN každého podnětu3 | virová izolace |
| BEI, PRRS-Carbopol n=2 | <1:2 | 1:82 | neg/neg. |
| BEI, PRRS-FCA/FIA n=2 | <1:2 | 1:4 | neg/neg. |
| BEI, PRRS-Adj B n=2 | <1:2 | 1:5 | neg/neg. |
| From., PRRS-Carbopol n=2 | <1:2 | 1:23 | neg/poz. |
| Form., PRRS-FCA/FIA n=2 | <1:2 | 1:2 | neg/neg. |
| Form., PRRS-AdjB n=2 | <1:3 | 1:8 | neg/neg. |
| imitovaná vakcínová skupina | |||
| imitace AG-carbopol n=2 | <1:2 | <1:2 | poz/poz. |
| imitace AG-FCA/FIA n=2 | <1:2 | <1:2 | poz/poz. |
| imitace AG-AdjB n=2 | <1:2 | <1:2 | poz/poz. |
a = SN odezva 19. den po podnětu, ukončení pokusu b = virová izolace z plazmy v jakoukoliv dobu během 19. dne po podnětu periody testu virová izolace detekována CPE v9009B buňkách a potvrzená FA vybarvením stejného PRRSV skupinou specifické monoklonální protilátky SD0W17
I když byl vynález podrobně popsán za účelem ilustrace, je třeba chápat, že to bylo provedeno 10 pro účely ilustrace a že je možno učinit různé variace, což bude zřejmé odborníkům v oboru, aniž by byl porušen rozsah a myšlenka vynálezu, který je omezen pouze předloženými nároky.
Claims (14)
1. Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu (RRSV) označený jako 20 ISU-P a uložený pod přístupovým číslem ATCC VR 2402.
2. Způsob kultivace PRRSV izolátu podle nároku 1 ve tkáňové kultuře, která je citlivá na infekci, pro replikaci viru na množství dostatečné k ochraně živočichů před PRRS nebo identifikaci molekulové struktury PRRSV pro vývoj rekombinantních produktů, vyznaču-
25 jící se tím, že zahrnuje inokulaci tkáňové kultury virem a získání replikovaného viru.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že tkáňová kultura obsahuje buněčnou linii.
30
4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že tkáňovou kulturou je buněčná linie „Afričan Green Monkey Kidney“.
5. Tkáňová kultura obsahující PRRSV izolát podle nároku 1.
35
6. Tkáňová kultura podle nároku 5 v průmyslovém měřítku nad 25 litrů při fluorescenční protilátkové infekční dávce 50 na ml, FAID50 titru větším než 105,0/ml.
7. Způsob přípravy vakcíny účinné při ochraně vepřů před PRRS, vyznačující se tím, že se připraví izolát PRRSV podle nároku 1, uvolní se virus do tkáňové kultury a upraví 40 se antigenní hmota zředěním, zkoncentrováním nebo extrakcí, přičemž se získá imunologicky účinné množství antigenní hmoty pro modifikovaný živý zeslabený, inaktivní, podjednotkový nebo rekombinantní přípravek.
-8CZ 289743 B6
8. Vakcína obsahující PRRSV izolát podle nároku 1.
9. Vakcína připravená postupem podle nároku 7, kde PRRSV je modifikovaný živý zeslabený, a je v kapalné, zmrazené nebo vysušené formě.
10. Vakcína podle nároku 8 nebo 9, kde PRRSV je inaktivován a smísen s adjuvans a případně obsahuje vhodnou konzervační přísadu.
11. Vakcína podle nároku 10, kde adjuvans je buďto na bázi oleje nebo na bázi vody.
12. Vakcína podle nároku 11, kde adjuvans je vybráno ze skupiny zahrnující Freundovo kompletní adjuvans a Freundovo nekompletní adjuvans.
13. Vakcína podle nároku 11, kde inaktivovaným činidlem je binární ethylenimin, beta propiolakton nebo formalin.
14. Vakcína podle nároku 9, kde tkáňovou kulturou je buněčná linie „Afričan Green Monkey Kidney“.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US1491593A | 1993-02-08 | 1993-02-08 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ203195A3 CZ203195A3 (en) | 1995-12-13 |
| CZ289743B6 true CZ289743B6 (cs) | 2002-03-13 |
Family
ID=21768529
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19952031A CZ289743B6 (cs) | 1993-02-08 | 1994-01-26 | Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu PRRSV, způsob kultivace PRRSV, tkáňová kultura, způsob přípravy vakcíny a vakcína obsahující PRRSV izolát |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5510258A (cs) |
| EP (1) | EP0683816B1 (cs) |
| JP (1) | JP3710095B2 (cs) |
| KR (1) | KR100374295B1 (cs) |
| CN (1) | CN1080300C (cs) |
| AT (1) | ATE197314T1 (cs) |
| AU (1) | AU681874B2 (cs) |
| BG (1) | BG63170B1 (cs) |
| CZ (1) | CZ289743B6 (cs) |
| DE (1) | DE69426228T2 (cs) |
| DK (1) | DK0683816T3 (cs) |
| ES (1) | ES2152304T3 (cs) |
| FI (1) | FI117513B (cs) |
| GR (1) | GR3035257T3 (cs) |
| HU (1) | HU218430B (cs) |
| NO (1) | NO317662B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ261992A (cs) |
| PL (1) | PL178609B1 (cs) |
| PT (1) | PT683816E (cs) |
| SK (1) | SK98695A3 (cs) |
| WO (1) | WO1994018311A1 (cs) |
Families Citing this family (64)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2290906C (en) | 1991-06-06 | 2003-04-01 | Stichting Centraal Diergeneeskundig Instituut | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
| US6080570A (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Method of producing a vaccine for Swine Infertility and Respiratory Syndrome |
| US5846805A (en) | 1991-08-26 | 1998-12-08 | Boehringer Ingelheim Animal Health, Inc. | Culture of swine infertility and respiratory syndrome virus in simian cells |
| US6042830A (en) * | 1992-08-05 | 2000-03-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Viral agent associated with mystery swine disease |
| US6982160B2 (en) * | 1991-08-26 | 2006-01-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Immunogenic compositions that include SIRS virus |
| US6380376B1 (en) | 1992-10-30 | 2002-04-30 | Iowa State University Research Foundation | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
| US5695766A (en) | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
| US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| ES2074950B1 (es) * | 1993-09-17 | 1996-03-16 | Iberica Cyanamid | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
| US5690940A (en) * | 1995-06-21 | 1997-11-25 | Regents Of The University Of Minnesota | Low pathogencity PRRS live virus vaccines and methods of preparation thereof |
| ES2102971B1 (es) * | 1996-01-25 | 1998-03-01 | Hipra Lab Sa | Nueva cepa atenuada del virus causante del sindrome respiratorio y reproductivo porcino (prrs), las vacunas y medios de diagnostico obtenibles con la misma y los procedimientos para su obtencion. |
| BR9708443B1 (pt) * | 1996-03-01 | 2012-06-12 | vacina contra a sÍndrome reprodutiva e respiratària em porcinos. | |
| US5866401A (en) * | 1996-03-01 | 1999-02-02 | Schering Corporation | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| US6015663A (en) * | 1996-03-01 | 2000-01-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Restriction enzyme screen for differentiating porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains |
| US5976537A (en) * | 1996-07-02 | 1999-11-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine |
| FR2751224B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-20 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies respiratoires et de reproduction des porcs |
| EP0835930B1 (en) * | 1996-10-09 | 2001-01-31 | Akzo Nobel N.V. | European vaccine strains of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
| US20040224327A1 (en) * | 1996-10-30 | 2004-11-11 | Meulenberg Johanna Jacoba Maria | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| EP0839912A1 (en) * | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
| WO1998035023A1 (en) * | 1997-02-07 | 1998-08-13 | Origen, Inc. | Method for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus for use as vaccines and diagnostic assays |
| CA2289980C (en) | 1997-05-06 | 2010-07-20 | Antonie Paul Van Nieuwstadt | Prrsv antigenic sites identifying peptide sequences of prrs virus for use in vaccines or diagnostic assays |
| WO1999002184A1 (en) * | 1997-07-10 | 1999-01-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Causative agent of sow abortion and mortality syndrome (sams), vaccine compositions, antibodies and method |
| UA78180C2 (uk) | 1997-10-03 | 2007-03-15 | Меріаль | Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти |
| FR2772047B1 (fr) | 1997-12-05 | 2004-04-09 | Ct Nat D Etudes Veterinaires E | Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection |
| CA2290220C (en) | 1998-12-22 | 2013-11-19 | Pfizer Products Inc. | An infectious cdna clone of north american porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) virus and uses thereof |
| EP1157121B1 (en) | 1999-03-08 | 2013-04-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH | Prrsv replicon |
| ES2388909T3 (es) * | 1999-04-22 | 2012-10-19 | The United States Of America, As Represented Bythe Secretary Of Agriculture | Vacuna contra el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino basada en aislado JA-142 aislada |
| US6497883B1 (en) * | 1999-06-10 | 2002-12-24 | Merial | Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine |
| ES2170622B1 (es) * | 1999-12-03 | 2004-05-16 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Clones y vectores infectivos derivados de coronavirus y sus aplicaciones. |
| EP1240310B1 (en) * | 1999-12-20 | 2008-01-23 | Agricultural Research Council | Method of inactivating microorganisms |
| WO2001059077A1 (en) * | 2000-02-08 | 2001-08-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus and methods of use |
| US6740490B2 (en) * | 2001-01-29 | 2004-05-25 | Kansas State University Research Foundation | Identification and applications of porcine reproductive and respiratory syndrome virus host susceptibility factor(s) for improved swine breeding |
| US6841364B2 (en) | 2002-01-22 | 2005-01-11 | Protatek International, Inc. | Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof |
| US7906311B2 (en) | 2002-03-20 | 2011-03-15 | Merial Limited | Cotton rat lung cells for virus culture |
| RU2220202C1 (ru) * | 2002-04-25 | 2003-12-27 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Штамм "бд" вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней для изготовления диагностических и вакцинных препаратов |
| RU2219946C1 (ru) * | 2002-04-25 | 2003-12-27 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Вирусвакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней |
| RU2232596C1 (ru) * | 2002-10-16 | 2004-07-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Способ изготовления вирус-вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней |
| MXPA06015105A (es) | 2004-06-18 | 2007-03-26 | Univ Minnesota | Identificacion de organismos viralmente infectados y vacunados. |
| US7632636B2 (en) | 2004-09-21 | 2009-12-15 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use |
| HUE033621T2 (en) | 2004-12-30 | 2017-12-28 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc | PCV2 immunogenic compositions and methods for preparing such compositions |
| US7691368B2 (en) | 2005-04-15 | 2010-04-06 | Merial Limited | Vaccine formulations |
| CA2894069C (en) | 2005-06-24 | 2019-02-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Prrs viruses, infectious clones, mutants thereof, and methods of use |
| EP1968630B1 (en) | 2005-12-29 | 2018-01-24 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Multivalent pcv2 immunogenic compositions |
| CN100523177C (zh) * | 2007-01-09 | 2009-08-05 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用 |
| MX2009007457A (es) | 2007-01-12 | 2009-08-12 | Univ Illinois | Celulas que no son de mono para el desarrollo del virus del sindrome porcino reproductor y respiratorio (prrs). |
| US7666585B2 (en) * | 2007-06-15 | 2010-02-23 | Protatek International, Inc. | Construction of chimera PRRSV, compositions and vaccine preparations |
| CN101848995A (zh) * | 2007-06-25 | 2010-09-29 | 南达科他州立大学 | 重组的北美1型猪繁殖与呼吸综合征病毒及使用方法 |
| FI122778B (fi) | 2008-03-31 | 2012-06-29 | Metso Power Oy | Pyrolyysimenetelmä kattilan yhteydessä ja pyrolyysilaitteisto |
| CN101363865B (zh) * | 2008-05-26 | 2013-03-06 | 北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司 | 一种猪蓝耳病毒胶体金检测试纸条、其制备方法及其应用 |
| UA106475C2 (uk) * | 2008-08-25 | 2014-09-10 | Берингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. | Спосіб вакцинації свині проти високопатогенного репродуктивно-респіраторного синдрому свиней (hp prrs) |
| TWI627281B (zh) | 2009-09-02 | 2018-06-21 | 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 | 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物 |
| NZ598645A (en) | 2009-09-10 | 2014-07-25 | Merial Ltd | New vaccine formulations comprising saponin-containing adjuvants |
| MX346636B (es) | 2011-02-17 | 2017-03-27 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Procedimiento para la produccion a escala comercial de prrsv. |
| PL2675475T3 (pl) | 2011-02-17 | 2015-12-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Nowy europejski szczep prrs |
| US9187731B2 (en) | 2011-07-29 | 2015-11-17 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells |
| US9315781B2 (en) | 2011-07-29 | 2016-04-19 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Infectious CDNA clone of european PRRS virus and uses thereof |
| HUE035774T2 (en) | 2011-08-12 | 2018-05-28 | Merial Inc | Biological substances, in particular vaccines, preserved by vacuum |
| MX366051B (es) | 2012-12-07 | 2019-06-26 | Univ Illinois | Composiciones del virus del síndrome reproductor y respiratorio de porcino y sus usos. |
| WO2014150822A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use |
| CN105579060B (zh) | 2013-09-25 | 2021-03-16 | 硕腾服务有限责任公司 | Pcv2b趋异株疫苗组合物以及使用方法 |
| TWI745278B (zh) | 2014-10-10 | 2021-11-11 | 以色列商艾畢克生物實驗有限公司 | 發泡性降低之疫苗組合物 |
| CN104694485A (zh) * | 2015-02-13 | 2015-06-10 | 广西壮族自治区兽医研究所 | Z-ietd-fmk在提高prrsv体外培养滴度方面的应用及其方法 |
| LT3471760T (lt) | 2016-06-17 | 2025-02-25 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Nauji imunogeniniai preparatai, apimantys linijinių arba šakotų poliakrilo rūgšties polimerų adjuvantus |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5213795A (en) * | 1990-10-24 | 1993-05-25 | Oxford | Encephalomyocarditis virus vaccine |
| CA2290906C (en) * | 1991-06-06 | 2003-04-01 | Stichting Centraal Diergeneeskundig Instituut | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
| CA2076744C (en) * | 1991-08-26 | 2000-06-27 | Danny W. Chladek | Viral agent associated with mystery swine disease |
| JP3473700B2 (ja) * | 1991-08-26 | 2003-12-08 | ボーリンガー・インゲレイム・ヴェトメディカ・インコーポレーテッド | Ｓｉｒｓワクチンおよびｓｉｒｓ診断方法 |
| WO1993006211A1 (en) * | 1991-09-16 | 1993-04-01 | Collins James E | Vaccine for mystery swine disease and method for diagnosis thereof |
| DE69206631T2 (de) * | 1991-10-14 | 1996-05-15 | Akzo Nobel Nv | Impfstoff gegen das Fortpflanzungs- und Atmungssyndrom bei Schweinen (PRRS) und Diagnose. |
| FR2682966B1 (fr) * | 1991-10-29 | 1994-12-02 | Rhone Merieux | Preparation d'antigenes et de vaccins du virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie. |
| US5695766A (en) * | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
-
1994
- 1994-01-26 CZ CZ19952031A patent/CZ289743B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-01-26 DE DE69426228T patent/DE69426228T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-01-26 EP EP94907895A patent/EP0683816B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-01-26 KR KR1019950703246A patent/KR100374295B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1994-01-26 WO PCT/US1994/000951 patent/WO1994018311A1/en active IP Right Grant
- 1994-01-26 SK SK986-95A patent/SK98695A3/sk unknown
- 1994-01-26 ES ES94907895T patent/ES2152304T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-01-26 AU AU61285/94A patent/AU681874B2/en not_active Ceased
- 1994-01-26 JP JP51810194A patent/JP3710095B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-01-26 DK DK94907895T patent/DK0683816T3/da active
- 1994-01-26 PT PT94907895T patent/PT683816E/pt unknown
- 1994-01-26 AT AT94907895T patent/ATE197314T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-01-26 HU HU9502330A patent/HU218430B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-01-26 NZ NZ261992A patent/NZ261992A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-01-26 PL PL94310126A patent/PL178609B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-01-26 CN CN94191129A patent/CN1080300C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-06-01 US US08/252,612 patent/US5510258A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-12-06 US US08/349,865 patent/US5587164A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-08-04 FI FI953731A patent/FI117513B/fi active IP Right Grant
- 1995-08-07 NO NO19953091A patent/NO317662B1/no unknown
- 1995-08-08 BG BG99850A patent/BG63170B1/bg unknown
-
2001
- 2001-01-17 GR GR20010400077T patent/GR3035257T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69426228T2 (de) | 2001-03-01 |
| CZ203195A3 (en) | 1995-12-13 |
| JP3710095B2 (ja) | 2005-10-26 |
| NZ261992A (en) | 1996-06-25 |
| JPH08506486A (ja) | 1996-07-16 |
| HUT72917A (en) | 1996-06-28 |
| US5587164A (en) | 1996-12-24 |
| EP0683816A1 (en) | 1995-11-29 |
| BG99850A (bg) | 1996-02-28 |
| US5510258A (en) | 1996-04-23 |
| AU681874B2 (en) | 1997-09-11 |
| BG63170B1 (bg) | 2001-05-31 |
| CN1080300C (zh) | 2002-03-06 |
| FI117513B (fi) | 2006-11-15 |
| FI953731L (fi) | 1995-08-04 |
| CN1117742A (zh) | 1996-02-28 |
| PT683816E (pt) | 2001-03-30 |
| DK0683816T3 (da) | 2001-01-08 |
| HU218430B (hu) | 2000-08-28 |
| GR3035257T3 (en) | 2001-04-30 |
| PL178609B1 (pl) | 2000-05-31 |
| KR100374295B1 (ko) | 2003-12-24 |
| NO317662B1 (no) | 2004-11-29 |
| HU9502330D0 (en) | 1996-05-28 |
| DE69426228D1 (de) | 2000-12-07 |
| ATE197314T1 (de) | 2000-11-15 |
| NO953091L (no) | 1995-08-07 |
| AU6128594A (en) | 1994-08-29 |
| EP0683816B1 (en) | 2000-11-02 |
| FI953731A0 (fi) | 1995-08-04 |
| PL310126A1 (en) | 1995-11-27 |
| WO1994018311A1 (en) | 1994-08-18 |
| SK98695A3 (en) | 1996-11-06 |
| NO953091D0 (no) | 1995-08-07 |
| ES2152304T3 (es) | 2001-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ289743B6 (cs) | Izolát viru vepřového reprodukčního a respiračního syndromu PRRSV, způsob kultivace PRRSV, tkáňová kultura, způsob přípravy vakcíny a vakcína obsahující PRRSV izolát | |
| EP0676467B1 (en) | European vaccine strains of the porcine reproductive respiratory syndrome virus (PRRSV) | |
| JP2750557B2 (ja) | 豚ミステリー病に関連するウイルス性因子 | |
| US6001370A (en) | Attenuated strain of the virus causing the porcine reproductive respiratory syndrome (PRRS), and vaccines | |
| CZ361697A3 (cs) | Virová agens asociovaná se záhadnou chorobou prasat | |
| JPH08188515A (ja) | 組織培養物において効能のあるトキソプラズマ ゴンデイ ブラデイゾイトワクチンの生産 | |
| US20090238844A1 (en) | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains and compositions | |
| US5213795A (en) | Encephalomyocarditis virus vaccine | |
| JP3043353B2 (ja) | ワクチン | |
| JPH0710775A (ja) | ネコ腸内コロナウイルス由来のイヌコロナウイルスワクチン | |
| CA2155533C (en) | Process for growing porcine reproductive and respiratory syndrome virus and its use in vaccines | |
| US6416764B1 (en) | Vaccine | |
| RU2780233C2 (ru) | Способ профилактического лечения свиней | |
| MXPA97007302A (en) | New attenuated cepa of the virus causing the respiratory and reproductive swine syndrome (prrs), vaccines and diagnostic media obtained with the same and the procedures for your obtenc |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20080126 |