HU217795B - Eljárás szerin és szerinszármazékok bioszintézisére - Google Patents
Eljárás szerin és szerinszármazékok bioszintézisére Download PDFInfo
- Publication number
- HU217795B HU217795B HU9400796A HU9400796A HU217795B HU 217795 B HU217795 B HU 217795B HU 9400796 A HU9400796 A HU 9400796A HU 9400796 A HU9400796 A HU 9400796A HU 217795 B HU217795 B HU 217795B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- pgd
- serine
- aeqg
- genetically engineered
- dna
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Tires In General (AREA)
- Epoxy Resins (AREA)
- Ceramic Products (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás csökkentett szerinérzékenységgel rendelkezőPGD előállítására génsebészeti módszerek alkalmazásával. A találmánytárgyát képezik továbbá csökkentett szerinérzékenységgel rendelkezőPGD, azt kódoló gén, az eljárásban alkalmazott DNS-konstrukciók és aDNS-konstrukciókkal transzformált sejtek. A találmány szerintimegoldás alkalmas szerin és szerinszármazékok bioszintetikuselőállítására. ŕ
Description
A találmány tárgyát általánosságban a szerin bioszintézise, valamint a szerinhez kapcsolódó termékek, különösen a triptofán, valamint a bioszintézis során használt módszerek és anyagok képezik.
Közelebbről, a találmány tárgya eljárás csökkentett szerinérzékenységgel rendelkező PGD előállítására, génsebészeti módszerek alkalmazásával. A találmány tárgyát képezik továbbá csökkentett szerinérzékenységgel rendelkező PGD, azt kódoló gén, az eljárásban alkalmazott DNS-konstrukciók és a DNS-konstrukciókkal transzformált sejtek.
A szerin számos sejtmetabolit bioszintézisének primer intermedierje, beleértve az olyan, gazdaságilag fontos vegyületeket, mint a kolin, glicin, cisztein és triptofán. Emellett a szerin egyes szénatomok forrásaként is működik, és a tetrahidrofolátból keletkező 5,10-metilén-tetrahidrofolát keletkezése során a sejtek összes Cr egységigényének 60-75%-át szolgáltatja. Ezeket a főegységeket számos különböző bioszintézisútban használják, például a metionin, az inozin-monofoszfát, más purinok és néhány pirimidin (például timidin és hidroxi-metil-citidin) bioszintézise során.
Az 1. ábrán bemutatott szerinbioszintetikus reakcióút általában a legtöbb szövetben és mikroorganizmusban megtalálható. Ennek a bioszintézisútnak az első lényeges lépése a 3-foszfo-D-glicerinsav (PGA) konverziója 3-foszfohidroxi-piroszőlősavvá (PHA), a 3-foszfoglicerát-dehidrogenáz-enzim (PGD) segítségével. A PGD-t kódoló gént klónozták és szekvenciáját meghatározták, és ebből származtatták a PGD-alegység aminosavszekvenciáját [Tobey and Grant, J. Bioi. Chem., 261, 12179-12183 (1980)].
Prokariótákban, főleg baktériumokban és eukariótákban, például élesztőben, de magasabb rendű eukariótákban nem, a vad típusú PGD aktivitását a celluláris szerinszint gátolja. Ezt a gátlást kinetikailag vizsgálták, és a jelentések szerint alloszterikus úton működik [Tobey and Grant, Journal of Biological Chemistry, 261, 12179-12183 (1986); Dubrow and Pizer, Journal of Biological Chemistry, 252, 1527-1551 (1977); McKitrick and Pizer, Journal of Bacteriology, 141, 235-245 (1980)].
Tosa és Pizer [Journal of Bacteriology, 106, 972-982 (1971)] egy normális körülmények között toxikus szerinanalóg, az L-szerin-hidroxamátnak a hatását vizsgálták egy Escherichia coli törzsön. Az ezt az analógot tartalmazó szaporító táptalajon való szelekció szerinrezisztens mutánsokat eredményezett. Néhány mutánsról ki lehetett mutatni, hogy módosítást tartalmaz egy PGD-hez nem kapcsoló enzimben, a szeriltRNS-szintetázban. Egy ilyen mutánsnak a nyers sejtkivonatában csökkent szerinérzékenységgel rendelkező PGD-aktivitást lehetett kimutatni [Journal of Bacteriology, 106, 972-982 (1981); 5. és 6. ábra, valamint 973. oldal alsó bal oldali oszlop, 977. oldal, alsó bal oldali oszlop].
A jelen találmány tárgya egy, a vad típusú PGD-vei összehasonlítva szeringátlásra csökkent érzékenységgel rendelkező 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt (PGD) kódoló DNS, azaz egy olyan DNS, amely olyan PGD-t kódol, amely a bioszintézisben legalább valamennyire használható enzimaktivitási szinttel rendelkezik, és amely magasabb szerinszinten is megtartja ezt az aktivitást, mint a (módosítatlan) vad típusú PGD.
Egy előnyös megvalósítási mód szerint a vad típusú PGD mikrobiális vagy élesztő PGD. Emellett a génsebészeti úton megváltoztatott DNS előnyösen olyan PGD-t kódol, amely a vad típusú PGD C-terminális 25%-ában, előnyösen az 50 C-terminális aminosavban változásokat tartalmaz. Például a génsebészeti úton megváltoztatott DNS olyan PGD-t kódolhat, amely a C-terminális teljes, illetve részleges delécióját tartalmazza. Emellett előnyös, ha a génsebészeti úton megváltoztatott DNS olyan PGD-t kódol, amely a C-terminálisban inszerciót tartalmaz (például a VAL363 és ASN364 között, illetve az ALA392 és GLN394 között), az előzőkben ismertetett deléció mellett, illetve egy attól elválasztott változásként.
A találmány tárgya továbbá:
a) az előzőkben ismertetett génsebészeti úton megváltoztatott DNS-nek megfelelő aminosavszekvenciával rendelkező PGD;
b) expressziós vektorok, amelyek a génsebészeti úton megváltoztatott DNS-t és szabályozó DNS-t tartalmaznak olyan orientációban, amely lehetővé teszi a génsebészeti úton megváltoztatott DNS expresszióját egy gazdasejtben;
c) az ilyen expressziós vektorokat tartalmazó sejtek;
d) eljárások szerin vagy szerin eredetű termékek előállítására az ilyen sejtek szaporításával. Ami a c) pontot illeti, a sejtben a vad típusú serA-gént előnyösen meg kell szüntetni.
A találmány tárgya továbbá egy olyan, génsebészeti úton megváltoztatott sejt (azaz, amely egy rekombináns genetikai konstrukciót tartalmaz), amely a 3’-végen megváltoztatott PGD-t kódoló mRNS-transzkriptumot termel, és ezt a transzkriptumot a sejt lefordítja, ezzel olyan PGD-t termel, amely a szeringátlásra csökkent érzékenységgel rendelkezik a vad típusú PGD-vel összehasonlítva.
A találmány tárgya egy fontos bioszintetikus kontrolipont szabályozás alól való felszabadítása, ezzel fokozva számos, az említett pont után álló vegyület termelődését, beleértve főleg a szerint és a szerin eredetű termékeket, azaz például a triptofánt. Más, szerinből származó celluláris metabolitok (azaz a szerin egy primer intermedier a bioszintézisükben) közé tartozik a kolin, a glicin, a cisztein és a Crdonordependens vegyületek, azaz például a metionin, inozin-monofoszfát, a purinok és néhány pirimidin (például a timidin és a hidroxi-metil-citozin).
Az alábbiakban röviden ismertetjük a függelékben található ábrákat.
Az 1. ábrán az L-szerin glükózból való bioszintézisének lépései láthatók.
A 2. ábrán a Tobey és Grant által közölt [Tobey and Grant, Journal of Biological Chemistry, 261, 12179-12183 (1986)] Escherichia coli serA-szekvencia látható, valamint a génből származtatott aminosavszekvencia.
HU 217 795 Β
A 3. ábrán az L-szerin glicinné, illetve a tetrahidrofolát N5,N1 °-metilén-tetrahidrofoláttá való biokonverziója látható.
Szerinrezisztens PGD készítése
1. Génsebészeti úton készített konstrukciók 5
A jelen találmány előnyös megvalósítási módjaiban szerin és szerinnel rokon vegyületek, azaz az előzőkben ismertetett vegyületek bioszintézisét íijuk le, szerinből kiindulva. Ezeknek a vegyületeknek a bioszintézisében a találmány szerinti első lépés a szerinre érzéketlen PGD 10 előállítása az alábbiak szerint.
Meghatároztuk, hogy a PGD-ben létezik egy speciális, szerin-feedbacket közvetítő dómén, és ez a dómén megváltoztatható, ily módon csökkenthető a szerinérzékenység, miközben a PGD-aktivitás hasznos szintje fenn- 15 tartható. A 2. ábrán egy bizonyos PGD genetikai és aminosavszekvenciája látható, amelyet az alábbiakban referenciaként használhatunk. A 2. ábrán látható szekvencia 420 aminosavat tartalmaz (beleértve az iniciáló Met-et is, amely az érett fehérjéről lehasad). A PGD-nek az a 20 doménje, amely csökkentheti a szerinérzékenységet anélkül, hogy a PGD-aktivitást tönkretenné, a molekula Cterminális 25%-ában található, legelőnyösebben az 50 C-terminális csoportban.
A PGD módosításának azok a példái, amelyek a ta- 25 lálmány oltalmi körébe tartoznak, lehetnek a C-terminális aminosavak egyes részének, illetve a teljes régiónak a deléciója, inszerciója, illetve szubsztitúciója az adott régión belül, amelyek csökkentik a szerinérzékenységet, miközben megtartják a hasznos PGD- 30 funkciót. Például ha a Val 363 és az Asn 364 közé aminosavakat szúrunk be, akkor ez növeli a PGD-nek a Κ,-értékét a vad típussal összehasonlítva, miközben a PGD aktivitása megmarad.
A Kj sokkal drasztikusabb növekedését úgy lehet el- 35 érni, hogy a C-terminális aminosavakat, illetve azok egy részét lehasítjuk. Például ha a C-terminális GTIRARLLY csoportokat ASLD-vel helyettesítjük, akkor ez néhány nagyságrenddel fokozza a Kj értékét, miközben a PGD-aktivitás használható szinten marad. Egyéb, 40 a találmány oltalmi körébe tartozó inszerció lehet például az inszerció az Ala392 és a Gln394 között.
Más hasznos módosítás lehet a C-terminális különböző deléciója, az előzőkben ismertetett inszerciók és módosítások mellett. 45
Az előzőkben leírt, szerinre érzéketlen PGD-t génsebészeti technikákkal állíthatjuk elő, ami magában foglalja a C-terminális aminosavakat kódoló 3’-vég megváltoztatását, majd egy gazdasejt transzformálását egy hordozóval, a megváltoztatott PGD-enzim expresszálása 50 céljából. A jelölt enzimeket átvizsgáljuk (az alábbiakban ismertetett módon) a szerinaffmitás (Kj) és a PGDaktivitás alapján, amit az alábbiakban részletesen ismertetünk.
2. A génsebészeti úton megváltoztatott konstrukciók átvizsgálása
Az előzőkben ismertetett módszerekkel készített genetikai konstrukciók átvizsgálásához a PGD-aktivitás és a szerinérzékenység alábbi vizsgálatait használjuk.
Jóllehet a találmány szempontjából nem kritikus, a PGD-aktivitás vizsgálata általában szükséges ahhoz, hogy megállapítsuk a megváltoztatott enzim szerinérzékenységét. Amint az a szakterületen jól ismert, az enzimaktivitás az enzimmolekulák össz-számának és az egyes molekulák katalitikus aktivitásának függvénye. Tehát, a PGD feedback-variánsok katalitikus aktivitásának összehasonlítása során olyan lépéseket kell végrehajtani, amelyekkel azoknak a mintáknak az esetében, amelyeknél a relatív katalitikus aktivitást akarjuk vizsgálni, a PGD-molekulák relatív száma megfelelően szabályozható. Számos módszer létezik, amellyel ez elvégezhető. Mivel azonban nehéz megfelelően meghatározni a génexpresszió szintjét azokban a sejtekben, amelyeket a csonkított serA-génnel transzformáltunk (a csökkent életképesség következtében), a legegyszerűbb módja a különböző konstrukciókról és a vad típusról keletkező PGD-aktivitás összehasonlításának, ha a megváltoztatott, de standard szabályozóelemeket tartalmazó serA-gént egy példányban beépítjük a kromoszómába, majd kinyerjük a transzformánsokat, és meghatározzuk a relatív katalitikus aktivitásukat, a vad típusú sejtekben keletkező PGD-vel összehasonlítva.
Bármely olyan módszer alkalmazható, amely megfelelően méri a PGD aktivitását. A PGD-aktivitást mérhetjük az előre irányuló, illetve a hátra irányuló reakcióval, McKitrick, John C. és Lewis I. Pizer módszerének alkalmazásával [Journal of Bacteriology, 141, 235-245 (1980)].
A fentiekben ismertetett enzimvizsgálat alkalmas bármely PGD-enzim szerinérzékenységének meghatározására, beleértve azokat, amelyek kémiailag módosított C-terminálissal rendelkeznek. A vizsgálatot különböző mennyiségű szerin jelenlétében végezzük el. A szerin jelenlétében mért katalitikus aktivitást a szerin távollétében mért katalitikus aktivitással hasonlítjuk össze, majd kiszámítjuk a Kj értékét.
A legtöbb esetben az az előnyös, ha csökkentjük a szerinérzékenységet anélkül, hogy jelentősen megváltoztatnánk a PGD katalitikus aktivitását. Más megvalósítási módok szerint kívánatos lehet mind a feedbackérzékenységnek, mind a katalitikus aktivitásnak a csökkentése. A használható, a 3-foszfoglicerát-kináz C-terminális aminosavszekvenciájával rendelkező konstrukciókat az 1. táblázatban soroljuk fel.
1. táblázat
A 3-foszfoglicerát-dehidrogenázok C-terminális aminosavszekvenciái
SerA
Kj/pmol Egységek
WT AEQ V—
45 5 AEQ V—
- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD
EDVAEKAL —QA MKAI PGT- -IRA RLLY <0,1 0,05
- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD
EDVAEKAL —QA MKAI PASL D >100 <0,01
HU 217 795 Β
1. táblázat (folytatás)
| SerA | Kj/pmol | Egységek | |||
| 1459 | AEQG | VLV | >100 | N/A | |
| 1507 | AEQG | VL | >100 | N/A | |
| 1508 | AEQG | VCSR ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEAD | |||
| EDVAEKAL —QA MKAI PGT- -IRA RLLY | 3,8 | 0,05 | |||
| 1509 | AEQG | V— | - -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD | ||
| EDVAEKAL SRQA MKAI PGT- -IRA RLLY | >100 | N/A | |||
| 1510 | AEQG | V— | --NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD | ||
| EDVAEKAL L | >100 | N/A | |||
| 1511 | AEQG | V— | --NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD | ||
| EDVAEKAL —QA MKAI PGT- AIRA RLLY | >100 | N/A | |||
| 1512 | AEQG | V— | - -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD | ||
| EDVAEKAL -QA MKAI PVL | >100 | N/A | |||
| 1530 | AEQG | V | |||
| CSR AIRA RLLY | >100 | N/A | |||
| 1531 | AEQG | V— | - -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD | ||
| EDVAEKAL SR AIRA RLLY | >100 | N/A |
Más, módosított 3’-végekkel rendelkező konstrukciók is a jelen találmány oltalmi körébe tartoznak, mivel egyszerű dolog a jelen találmány szerinti tesztkonstrukciókat készíteni, és transzformálni a sejteket, majd vizsgálni a PGD-aktivitás szerinnel való gátlását.
Bármely olyan vektor, amely egy szeringátlásra érzéketlen PGD-fehérje expresszióját eredményezi, a jelen találmány oltalmi körébe tartozik. Általában azonban szerinelnyelő távollétében a feedback-mentes PGD-expressziót el kell kerülni, mivel az így létrejövő magas citoplazmatikus szerinkoncentráció vagy a szerin eredetű metabolitok koncentrációja toxikus lehet a sejtekre. Tehát bármely olyan konstrukció, amely feedback-gátolt, normál katalitikus aktivitással rendelkező PGD-t kódol, és expressziós szintje hasonló a természetes généhez, a sejtbe transzformálva magas szintű PGDexpressziót és csökkent sejt-életképességet eredményez. A magas szintű szerinexpresszió toxicitása valójában szelektálhatja a csökkent PGD-expressziójú mutánsokat. Tehát miközben a multi-copy plazmidokkal való transzformáció hasznos lehet néhány megvalósítási mód szerint a konstrukciók kezdeti szűrővizsgálatában, viszont az az előnyös, ha a serA-konstrukciókat egyetlen másolatban beépítjük a genomba. Emellett a kromoszomális integráció, amint az az alábbi leírásból kitűnik, megkönnyíti a feedback-gátolt PGD aktivitásának mérését. Tehát a legtöbb megvalósítási mód szerint, ahol erős katalitikus aktvitást várunk vagy arra van szükség, előnyös, ha olyan vektorokat alkalmazunk, amelyek alkalmasak arra, hogy egyetlen példányban integrálódjanak a kromoszómába. Számos ilyen vektor és felhasználási stratégiájuk ismert a szakterületen [Backman, U.S.S.N 07/091,837, 1987 szeptember 1., amelyre a továbbiakban referenciaként hivatkozunk]. Hasznos vektorok és konstrukciók készíthetők, amelyek lehetővé teszik a sikeres transzformációt és az enzim expresszióját a megfelelő gazdaszervezetben, a kívánt tennék előállítása érdekében. Ezeknek a céloknak az elérését lehetővé tevő eszközök jól ismertek a szakterületen jártas szakember számára, és nem képezik a jelen találmány fontos részét. A megváltoztatott PGDkódoló DNS mellett az expressziós vektor más különböző elemeket is tartalmaz, amelyeket az alábbiakban ismertetünk.
Először, a vektorban található kódolószekvenciákat a megfelelő szabályozószekvenciák kísérik, amelyek a kódolószekvenciák megfelelő szintű expressziójához szükségesek, beleértve a promotereket, riboszomális kötőhelyeket és terminációs szekvenciákat. A legtöbb esetben a természetes serA szabályozószekvenciák a molekula katalitikusán aktív részének előnyös forrásai, jóllehet az világos, hogy számos más, a szakterületen jártas szakember számára ismert, vagy még ezután felfedezendő szabályozószekvencia is használható.
Másodszor, előnyös, ha olyan szekvenciák is, amelyek szelektív markereket kódolnak és/vagy riportergének is megtalálhatók a vektorban. Az ilyen szelektív markerek expressziója hasznos lehet a transzformánsok azonosításában. A megfelelő szelektív gének közé tartozik az ampicillin, tetraciklin és kloramfenikol.
Harmadszor, az az igény, hogy a plazmidvektor egy replikációs origót is tartalmazzon, nagymértékben attól függ, hogy a géneket kromoszomálisan vagy extrakromoszomálisan akarjuk fenntartani. A szakterületen jártas szakember számára ismerősek azok a stratégiák, amelyekkel a replikációs origó hiánya kiaknázható, hogy elősegítsük a kromoszómába való integrációt [Backman et al., U.S. Patent 4,743,546, amelyre a továbbiakban referenciaként hivatkozunk].
Ha egyszer előállítottuk az expressziós vektort, akkor egy megfelelő gazdaszervezetet lehet egy olyan vektorral transzformálni, amely egy szerinre érzéketlen PGD-fehérjét kódol. A legtöbb esetben hasznos lehet az olyan sejtek alkalmazása, amelyekről ismert, hogy az endogén PGD-fehérjét a szerin gátolja, és amelyekben az endogén serA-gén deletálva van, és a találmány szerinti megváltoztatott génnel van helyettesítve. Az ilyen sejtrendszerek hasznosak a szerinnel rokon metabolitok túltermelésében. A szerinre érzékeny fehérjéket tartalmazó ismert sejtek prokarióták vagy élesztők.
HU 217 795 Β
Az alábbi példák csak illusztrálják, de nem korlátozzák a találmány érvényességi körét.
1. példa
Feedback-rezisztens 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódoló serA-génallélek készítése
Az Escherichia coli KI2 serA-gént egy 6,4 kb méretű DNS-fragment formájában izoláltuk egy Sau3A részleges emésztmény formájában, amelyet a pTR264 Bell hasítási helyére klónoztunk [Backmann et al., U.S.S.N. 07/285, 128, benyújtva 1988. 12. 16.; Roberts et al., Gene, 12, 123 (1980)]. Ennek a plazmidnak a jele pKB1302. A pKB1302-plazmid DNS-nek egy 3 kb méretű SalI-Sphl-fragmentjét, amely a SerA-gént tartalmazza, a pUC19-plazmidba klónozzuk, így kapjuk a pKB 1321-plazmidot. A pKB1370-plazmidot úgy állítjuk elő, hogy egy 3 kb méretű HindlII-SalI-fragmentet, amely a serA-gént tartalmazza, a pBR322-plazmidba klónozzuk.
A feedback-rezisztens 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódoló ser A allélj eit úgy állítjuk elő, hogy Xballinkereket építünk bele a restrikciós hasítási helyeknél, a serA-gén 3’-régiójában. A pKB 1321-plazmid HincIIenzimmel való részleges emésztésével az 1793-as pozícióban tompa végeket kaptunk, ahol a linkerek beszúrása az alábbiakat eredményezi:
a) pKB1459, amely egy csonkított 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódol;
b) pKB1507, amely egy csonkított 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódol; és c) pKB1508, amely egy négyaminosavas inszertet tartalmazó 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódol.
A pKB1321 PstI restrikciós enzimmel való emésztése 3’ túlnyúló véget eredményez az 1888-as pozícióban. Tompa végeket a DNS-polimeráz I Klenow-fragmentjével állítunk elő. A linkereket a tompa végű fragmentekbe ligáljuk, így keletkezik a pKB1509-plazmid, amely egy olyan 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódol, amely két aminosavas inszertet tartalmaz, és a pKB 1510-plazmid, amely egy csonkított 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódol. A pKB1370 KpnI-gyel való emésztésével kapott fragmentet a DNS-polimeráz Klenow-fragmentjével tesszük tompa végűvé, és a beépített linkerekkel kapjuk a csonkított 3-foszfoglicerátdehidrogenázt kódoló plazmidokat, a pKB1455-öt és a pKB1512-t, illetve egy kétaminosavas inszertet tartalmazó 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt kódoló plazmidot, a pKB1511-et. A pKB1530 és pKB1531 jelű deléciós plazmidokat úgy állítjuk elő, hogy a pKB 1508-ból származó 0,8 kb méretű BamHI-Xbalfragmentet vagy a pKB 1509-ből származó 0,9 kb méretű BamHI-Xbal-fragmentet a pKB1511 5,8 kb méretű BamHI-Xbal-fragmentjével ligáljuk. Az alábbi 2. táblázatban a készített különböző konstrukciókat foglaljuk össze.
2. táblázat
| SerA-allél | Plazmid | Restrikciós hasítási hely | Linker | Eredmény |
| SerA1455 | pKB1370 | KpnI | CTAGTCTAGACTAG | Csonkított |
| SerA1459 | pKB1321 | Hindlll | CTAGTCTAGACTAG | Csonkított |
| SerA1507 | pKB1321 | Hindii | CTCTAGAG | Csonkított |
| SerA15O8 | pKB1321 | Hindii | TGCTCTAGAGCA | Inszert |
| SerA1509 | pKB1321 | PstI | GCTCTAGAGC | Inszert |
| SerA1510 | pKB1321 | PstI | TGCTCTAGAGCA | Csonkított |
| SerA1511 | pKB1370 | KpnI | GCTCTAGAGCA | Inszert |
| SerA1512 | pKB1370 | Kpnl | TGCTCTAGAGC | Csonkított |
| SerA1530 | pKB1511 + pKB1508 | Hindii+KpnI | Deléciós | |
| SerA1531 | pKB1511 + pKB1509 | PstI+KpnI | Deléciós |
Az összes konstrukciónál a kiindulási vektor, a használt restrikciós hasítási hely és a beépített linker szekvenciája jelezve van. A szerin Krértékeit az 1. táblázatban adjuk meg, valamint ezek közül a konstrukciók közül háromnak a relatív katalitikus aktivitását, a kromoszomális integrációt követően (lásd alább). Az N/A jelzés azt mutatja, hogy a konstrukció nem integrálódott kromoszomálisan, és ennélfogva az aktivitásszint nem standardizálódott.
3. Kémiai módosítások
A szakterületen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy a vad típusú PGD C-terminálisának delécióit vagy módosításait enzimatikusan vagy kémiai úton hajthatjuk végre, például különböző karboxi-peptidázokkal, beleértve a karboxi-peptidáz Y-t, illetve a laktoperoxidáz által közvetített jódozással.
4. Antiszensz mRNS használata
Egy másik módszer szerint lehetséges a szerinérzékenység in vivő körülmények között való csökkentése, a 3’-végen csonkított PGD-t kódoló transzkriptumok létrehozásával oly módon, hogy antiszensz mRNS-eket készítünk, amelyek olyan nukleotidszek55 venciákat tartalmaznak, amelyek komplementerek a természetes vagy transzformált PGD-t kódoló szekvenciák 3’-kódoló régiójának részleteivel.
C. A keresett vegyületek előállítása
Amint az a 3. ábrán látható, a szerin egy köztiter60 méke a glicin előállításának. Emellett köztiterméke az
HU 217 795 Β
N5,N10-metilén-tetrahidrofolát előállításának is, amely a metionin, purinok (beleértve az inozint) és néhány pirimidin bioszintéziséhez szükséges, generalizált Ct-donor. Tehát a szerin foszfoglicerátból való túltermelése hasznos lehet számos különböző bakteriális termelőrendszerben, beleértve a kolin-, glicin-, cisztein-, metionin-, triptofán- és valamennyi purin-, beleértve az inozin-monofoszfát-termelő rendszerben.
Az alábbi specifikus példák a találmányt illusztrálják.
2. példa
Gazdaszervezet-készítés
Egy plazmidon található serA-génben levő szekvenciákat egy Km-rezisztenciagénnel helyettesítjük. Ezt a plazmidot használjuk azután a gazdaszervezet serAgénjének inaktiválására, az allélcsere módszerével, az alábbiak szerint.
Az YMC9 (ATCC33920) serA-régióját kromoszomális DNS-ből klónozzuk, részlegesen emésztjük Sau3AI-enzimmel, PC1523-mal való komplementációval (argF58, serA27, purA54, thr-25, tonA49, relAl, spoTl), amelyet a Coli Genetic Stock Centerből lehet megszerezni (Yale University, New Haven, CT). A serA-gént hordozó 3 kb méretű fragmentet szubklónozzuk pUC19-plazmidba, így kapjuk a pKB1321plazmidot. Ebből a plazmidból egy 3 kb méretű Sall-HindlII-fragmentet újra klónozunk pBR322-be, így kapjuk a pKB 1370-plazmidot. A serA-gén 3’-végén található KpnI hasítási helyet BamHI hasítási hellyé konvertáljuk egy linkerrel, majd a keletkező serA-ban levő BamHI-fragmentet a pUC-4-KSACplazmidból (Pharmacia) származó BamHI-fragmenttel helyettesítjük, amely a Tn903 Km-rezisztenciagént tartalmazza. Ennek az új plazmidnak a jele pKB1429. Egy pKB701 jelű pBR322-származékot (ATCC 39772, lásd USSN 06/757,019, amelyre a továbbiakban referenciaként hivatkozunk) állítunk elő, amelyben az Mbol és TThlII hasítási helyeket, amelyek a replikációs origót veszik közre, KpnI hasítási helyekké alakítjuk át. A pKB 1429-ből származó serA::KanR Sall-EcoRI-fragmentet pKB70I-be klónozzuk, a replikációs origó eltávolítása céljából. Az ampicillinrezisztenciát kódoló, valamint a serA:: KanR-t tartalmazó nagy fragmentet cirkularizáljuk, és YMC9 CaCl2 transzformálására használjuk. A transzformációt követően a gazda YMC9 sejteket ampicillinszelekciónak vetjük alá. Ilyen körülmények között ampicillinrezisztens kiónok fejlődnek ki oly módon, hogy a cirkuláris DNS homológ rekombináció révén beépül a serA határolórégióiba. Az ampicillinrezisztens izolátum növekedése ampicillinszelekció távollétében az ampicillinrezisztencia-gén elvesztését eredményezi, a serA-határolórégiók ismétlődő szekvenciáival való homológ rekombináció következtében. Ezeket a törzseket a β-laktamáz termelőképességének elvesztése alapján lehetett azonosítani, AmpScreen (BRL) alkalmazásával, a gyártó előírásai szerint. Az izolált telepeket két párhuzamosban szélesztve szerin jelenlétében, illetve távollétében olyan ampicillinérzékeny telepeket lehetett azonosítani, amelyeknek minimál táptalajon való növekedéséhez szerinre van szükségük, és emellett kombinációrezisztensek.
Egy ilyen izolátum jele KB875.
3. példa
A megváltoztatott serA-szekvenciák kromoszomális integrációja allélcserével
A serA1455-allélt a kromoszómába ahhoz az eljáráshoz hasonló módon végeztük, amely eljárással a serA:: KanR-t juttattuk be, a 2. példában leírtak alapján. Röviden, egy, a serA1455-allélt hordozó SalI-HindlIIfragmentet klónozunk a pKB701-be. A plazmid replikációs origóját KpnI-es emésztéssel eltávolítjuk. A cirkularizált DNS-sel való transzformációval kapunk ampicillinrezisztens telepeket, így jön létre a jelzett törzs. Nem szelektív körülmények között való szaporítás után, AmpScreent használva és kanamicinre való replikázás után a KB904-et (serA 1455) izoláltuk, amelyről ki lehetett mutatni, hogy ampicillinre és kanamicinre érzékeny. A keletkező serA1544-allélt transzformálhatjuk Pl-transzdukcióval termelő törzsekbe [Miller, Experiments in Mól. Genetics, Cold Spring Harbor Press, 201-205 (1972)].
4. példa
A megváltoztatott serA-szekvenciák kromoszomális integrációja recD-dependens génhelyettesítéssel Egy másik megközelítést használtunk arra, hogy a serA1508-allélt a kromoszómába juttassuk. A KB875 törzset recD-vé tettük Pl-transzdukcióval V220-ból [recD, argA:TnlO. Amundsen et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, USA, 82, 5558-5562 (1986) (DSM 6823)]. Az exonukleáz V-höz szükséges lényeges gén ahhoz, hogy a JGPlOl-et kapjuk meg. A pKB1508as plazmidot linearizáljuk, és arra használjuk, hogy a JGPlOl-et szerinprototrófiára transzformáljuk, lényegében Shevell és munkatársai leírása szerint [Journal of Bacteriology, 170, 3294-3296 (1988)], így kapjuk a JGP103 törzset. A serA15O8-allélt azután Pl-transzdukcióval át lehet vinni a termelő törzsekbe [Miller, Experiments in Mól. Genetics, Cold Spring Harbor Press, 201-205 (1972)].
A túltermelt metabolitok kinyerése
A szerinnel rokon metabolitok túltermeléséhez olyan sejteket lehet készíteni, amelyek csökkent szerinérzékenységgel rendelkező PGD-t termelnek, és megfelelő körülmények között fermentorokban szaporítjuk őket, a legtöbb esetben a stacioner fázisig. A sejteket kinyerjük, majd lizáltatjuk, és a számunkra fontos metabolitokat standard biokémiai módszerekkel kinyerjük. A mikroorganizmusok szaporításának körülményeit, elveit és referenciáit, valamint a specifikus metabolitok kinyerésének leírását kézikönyvekben már leírták [Crueger and Crueger, Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology (1982); Herrmann and Somerville, Amino acids: Biosynthesis and Genetic Reguládon (1983)], amelyekre a továbbiakban referenciaként hivatkozunk.
Claims (12)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Vad típusú PGD-vel összehasonlítva csökkent szerinérzékenységű 3-foszfoglicerát-dehidrogenázt (PGD) kódoló, génsebészeti úton megváltoztatott DNS, 5 azzal jellemezve, hogy olyan, prokariótából származó PGD-t kódol, amely a vad típusú PGD C-terminális 25%-ához képest módosítást tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS, azzal jellemezve, hogy olyan PGD-t 10 kódol, amely a vad típusú PGD 50 C-terminális aminosavához képest módosítást tartalmaz.
- 3. Az 1. igénypont szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS, azzal jellemezve, hogy olyan PGD-t kódol, amely a vad típusú PGD C-terminálisához ké- 15 pest deléciót tartalmaz.AEQG V----NI A AQYL QTSA QMGY WID IEADAEQG VLV;AEQG VL;AEQG VCSR ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEADAEQG V----NI A AQYL QTSA QMGY WID IEADAEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEADAEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEADAEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEADAEQG V--------------------------AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD
- 4. Az 1. igénypont szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS, azzal jellemezve, hogy olyan PGD-t kódol, amelyben a C-terminálismódosítás a vad típusú PGD szekvenciájához képest inszerciót tartalmaz.
- 5. A 4. igénypont szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS, azzal jellemezve, hogy inszercióként a vad típusú PGD-hez képest, annak 363. VAL és 364. ASN aminosava közötti, vagy 392. ALA és 394. GLN aminosava közötti inszerciót tartalmaz.
- 6. Az 1. igénypont szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS, azzal jellemezve, hogy olyan PGD-t kódol, amely a vad típusú PGD 52 C-terminális aminosava helyett az alábbi aminosavszekvenciák bármelyikét tartalmazza:EDVAEKAL —QA MKAI PASL D;EDVAEKAL —QA MKAI PGT--IRA RLLY;EDVAEKAL SRQA MKAI PGT--IRA RLLY;EDVAEKAL L;EDVAEKAL —QA MKAI PGT- A IRA RLLY; EDVAEKAL —QA MKAI PVL;-----------------CSR AIRA RLLY;EDVAEKAL----------SR A IRA RLLY.
- 7. 3-Foszfoglicerát-dehidrogenáz, azzal jellemezve, hogy aminosavszekvenciáját az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS kódolja.
- 8. Expressziós vektor, azzal jellemezve, hogy az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS-t, valamint a génsebészeti úton megváltoztatott DNS expresszióját gazdaszervezet expressziós rendszerében lehetővé tévő helyen és orientációban található, szabályozó DNS-t tartalmaz.
- 9. Génsebészeti úton megváltoztatott DNS-t tartalmazó sejt, azzal jellemezve, hogy az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti, génsebészeti úton megváltoztatott DNS-t, valamint a génsebészeti úton megváltoztatott DNS expresszióját lehetővé tévő helyen és orientációban található, szabályozó DNS-t tartalmaz.
- 10. A 9. igénypont szerinti sejt, azzal jellemezve, hogy a sejtből a vad típusú serA-gén deletálva van.
- 11. Eljárás szerin vagy szerin eredetű, kívánt termék előállítására, azzal jellemezve, hogy a 9. vagy 10. igénypont szerinti sejtet tenyésztünk, majd a kívánt terméket kinyerjük.
- 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy termékként szerint állítunk elő.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP91121385 | 1991-12-12 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9400796D0 HU9400796D0 (en) | 1994-06-28 |
| HUT69802A HUT69802A (en) | 1995-09-28 |
| HU217795B true HU217795B (hu) | 2000-04-28 |
Family
ID=8207424
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400796A HU217795B (hu) | 1991-12-12 | 1992-08-17 | Eljárás szerin és szerinszármazékok bioszintézisére |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5618716A (hu) |
| EP (1) | EP0620853B1 (hu) |
| JP (1) | JP2584409B2 (hu) |
| KR (1) | KR0132258B1 (hu) |
| CN (1) | CN1065914C (hu) |
| AU (1) | AU668359B2 (hu) |
| BR (1) | BR9206902A (hu) |
| CA (1) | CA2124214C (hu) |
| CZ (1) | CZ285915B6 (hu) |
| DE (1) | DE69208894T2 (hu) |
| ES (1) | ES2084373T3 (hu) |
| FI (1) | FI113665B (hu) |
| HU (1) | HU217795B (hu) |
| RU (1) | RU2154671C1 (hu) |
| SK (1) | SK279805B6 (hu) |
| TW (1) | TW313589B (hu) |
| UA (1) | UA39861C2 (hu) |
| WO (1) | WO1993012235A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA926405B (hu) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4232468A1 (de) * | 1992-09-28 | 1994-03-31 | Consortium Elektrochem Ind | Mikroorganismen für die Produktion von Tryptophan und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| JP3997631B2 (ja) * | 1998-01-12 | 2007-10-24 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
| JP4066543B2 (ja) * | 1998-01-12 | 2008-03-26 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
| US6431870B1 (en) | 1999-11-30 | 2002-08-13 | Ora Metrix, Inc. | Method and apparatus for generating a desired three-dimensional digital model of an orthodontic structure |
| US6540512B1 (en) | 1999-11-30 | 2003-04-01 | Orametrix, Inc. | Method and apparatus for treating an orthodontic patient |
| US6350120B1 (en) | 1999-11-30 | 2002-02-26 | Orametrix, Inc. | Method and apparatus for designing an orthodontic apparatus to provide tooth movement |
| US6250918B1 (en) | 1999-11-30 | 2001-06-26 | Orametrix, Inc. | Method and apparatus for simulating tooth movement for an orthodontic patient |
| US6471512B1 (en) | 1999-11-30 | 2002-10-29 | Ora Metrix, Inc. | Method and apparatus for determining and monitoring orthodontic treatment |
| US6509191B2 (en) * | 2000-05-02 | 2003-01-21 | Alex Liu | Identification and characterization of a PAGODA phenotype (PGD) in plants |
| DE10331291A1 (de) * | 2003-07-10 | 2005-02-17 | Consortium für elektrochemische Industrie GmbH | Varianten der 3-Phosphoglyceratdehydrogenase mit reduzierter Hemmung durch L-Serin und dafür codierende Gene |
| EP1871274B1 (en) | 2005-03-07 | 2019-05-08 | Align Technology, Inc. | Wrinkled dental aligner |
| US20060275731A1 (en) | 2005-04-29 | 2006-12-07 | Orthoclear Holdings, Inc. | Treatment of teeth by aligners |
| DE102005049527B4 (de) * | 2005-10-17 | 2013-05-08 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur Herstellung von L-Serin, Gensequenz, Vektoren sowie Mikroorganismus |
| RU2006129690A (ru) | 2006-08-16 | 2008-02-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА ydiN, ГЕНА ydiB ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
| JP2010017082A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010017081A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| CN101939412B (zh) | 2007-09-04 | 2016-01-20 | 味之素株式会社 | 生产氨基酸的微生物以及氨基酸的生产方法 |
| JP5332237B2 (ja) * | 2008-03-06 | 2013-11-06 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| DE602009000714D1 (de) * | 2008-03-06 | 2011-03-24 | Ajinomoto Kk | L-Zystein-produzierendes Bakterium und Verfahren zur Herstellung von L-Zystein |
| KR101827230B1 (ko) | 2008-12-31 | 2018-02-07 | 메타볼릭 익스플로러 | 디올의 제조 방법 |
| JP5817529B2 (ja) * | 2009-11-30 | 2015-11-18 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| WO2012001003A1 (en) | 2010-07-02 | 2012-01-05 | Metabolic Explorer | Method for the preparation of hydroxy acids |
| DE102011075656A1 (de) | 2011-05-11 | 2012-03-29 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystin |
| DE102011078481A1 (de) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von natürlichem L-Cystein |
| DE102012208359A1 (de) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure |
| DE102012216527A1 (de) | 2012-09-17 | 2014-03-20 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure |
| WO2014049382A2 (en) | 2012-09-26 | 2014-04-03 | Metabolic Explorer | Ethylenediamine fermentative production by a recombinant microorganism |
| DE102013209274A1 (de) | 2013-05-17 | 2014-11-20 | Wacker Chemie Ag | Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Überproduktion von Gamma-Glutamylcystein und Derivaten dieses Dipeptids |
| EP3908663A1 (en) | 2019-02-20 | 2021-11-17 | Braskem S.A. | Microorganisms and methods for the production of oxygenated compounds from hexoses |
| JP7463388B2 (ja) | 2019-02-20 | 2024-04-08 | ブラスケム エス．エー． | ペントース糖およびヘキソース糖のための分解経路 |
| JP2023532871A (ja) | 2020-06-26 | 2023-08-01 | ワッカー ケミー アクチエンゲゼルシャフト | 改良されたシステイン産生株 |
| CN118742558A (zh) | 2022-03-01 | 2024-10-01 | 瓦克化学股份公司 | 改良的半胱氨酸生产菌株 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61247392A (ja) * | 1985-02-04 | 1986-11-04 | エンジニツクス インコ−ポレ−テツド | ２種またはより多くのアミノ酸を同時に産生できる組換え微生物 |
| US4743546A (en) * | 1985-02-13 | 1988-05-10 | Biotechnica International, Inc. | Controlled gene excision |
| US4753883A (en) * | 1986-05-07 | 1988-06-28 | Biotechnica International, Inc. | Enzyme deregulation |
| US4753833A (en) * | 1986-09-26 | 1988-06-28 | Fishgal Semyon I | Hollow article with zigzag projections |
| GB8828806D0 (en) * | 1988-12-09 | 1989-01-18 | Beecham Group Plc | Novel compounds |
| JP2967996B2 (ja) * | 1989-06-06 | 1999-10-25 | 協和醗酵工業株式会社 | Ｌ―トリプトファンの製造法 |
| US5120837A (en) * | 1989-09-20 | 1992-06-09 | The Nutrasweet Company | Dna encoding phe a feedback inhibition resistant enzyme analogues |
-
1992
- 1992-03-24 TW TW081102201A patent/TW313589B/zh active
- 1992-08-17 US US08/244,491 patent/US5618716A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 CZ CZ941406A patent/CZ285915B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-08-17 KR KR1019940701948A patent/KR0132258B1/ko active
- 1992-08-17 WO PCT/EP1992/001873 patent/WO1993012235A1/en active IP Right Grant
- 1992-08-17 UA UA94005362A patent/UA39861C2/uk unknown
- 1992-08-17 DE DE69208894T patent/DE69208894T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 JP JP5510540A patent/JP2584409B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 ES ES92917826T patent/ES2084373T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 AU AU24268/92A patent/AU668359B2/en not_active Expired
- 1992-08-17 HU HU9400796A patent/HU217795B/hu unknown
- 1992-08-17 CA CA002124214A patent/CA2124214C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 SK SK700-94A patent/SK279805B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-08-17 BR BR9206902A patent/BR9206902A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-08-17 RU RU94030817/13A patent/RU2154671C1/ru active
- 1992-08-17 EP EP92917826A patent/EP0620853B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-25 ZA ZA926405A patent/ZA926405B/xx unknown
- 1992-10-10 CN CN92112014A patent/CN1065914C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-06-09 FI FI942711A patent/FI113665B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK279805B6 (sk) | 1999-04-13 |
| ZA926405B (en) | 1993-04-28 |
| FI942711A (fi) | 1994-06-09 |
| RU2154671C1 (ru) | 2000-08-20 |
| WO1993012235A1 (en) | 1993-06-24 |
| TW313589B (hu) | 1997-08-21 |
| ES2084373T3 (es) | 1996-05-01 |
| CA2124214A1 (en) | 1993-06-24 |
| KR0132258B1 (ko) | 1998-04-11 |
| HUT69802A (en) | 1995-09-28 |
| HU9400796D0 (en) | 1994-06-28 |
| US5618716A (en) | 1997-04-08 |
| EP0620853B1 (en) | 1996-03-06 |
| UA39861C2 (uk) | 2001-07-16 |
| JPH06510911A (ja) | 1994-12-08 |
| DE69208894T2 (de) | 1996-07-18 |
| AU668359B2 (en) | 1996-05-02 |
| CZ285915B6 (cs) | 1999-11-17 |
| JP2584409B2 (ja) | 1997-02-26 |
| SK70094A3 (en) | 1995-03-08 |
| DE69208894D1 (de) | 1996-04-11 |
| CA2124214C (en) | 2002-04-02 |
| CZ140694A3 (en) | 1995-01-18 |
| EP0620853A1 (en) | 1994-10-26 |
| CN1073209A (zh) | 1993-06-16 |
| FI113665B (fi) | 2004-05-31 |
| CN1065914C (zh) | 2001-05-16 |
| FI942711A0 (fi) | 1994-06-09 |
| BR9206902A (pt) | 1995-11-21 |
| AU2426892A (en) | 1993-07-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU217795B (hu) | Eljárás szerin és szerinszármazékok bioszintézisére | |
| KR100275287B1 (ko) | O-아세틸세린,l-시스테인및l-시스테인 유도생성물의 제조방법 | |
| JP3331472B2 (ja) | 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法 | |
| US9279137B2 (en) | Mutant acetolactate synthase and a method for producing branched-chain L-amino acids | |
| CZ66795A3 (en) | Process for preparing micro-organisms for producing tryptophan and their use | |
| KR101947959B1 (ko) | 변이형 호모세린 디하이드로게나제 및 이를 이용한 호모세린 또는 호모세린 유래 l-아미노산의 생산 방법 | |
| US5856148A (en) | Materials and methods for biosynthesis of serine and serine-related products | |
| CZ295853B6 (cs) | DNA kódující aspartokinázu a způsob výroby L-aminokyseliny | |
| HU224055B1 (hu) | Eljárás aszparaginsav és/vagy glutaminsav családba tartozó aminosavak mikrobiális termeltetésére, és hatóanyagok az eljárásban történő alkalmazásra | |
| JP2000139471A (ja) | 発酵法によるｌ−メチオニンの製造法 | |
| US20130210097A1 (en) | Glycolic acid fermentative production with a modified microorganism | |
| DK2430152T3 (en) | A microorganism with increased L-lysine productivity and method for producing L-lysine using the same | |
| EP0286303A1 (en) | DNA and its use | |
| CZ100596A3 (en) | Dna fragment, vector and micro-organism containing genes for metabolic transformation of butyrobetaine/crotonobetaine-l-carnitine and process for preparing l-carnitine | |
| US20240060098A1 (en) | Amycolatopsis strains for vanillin production with suppressed vanillic acid formation | |
| US20240060097A1 (en) | Bioconversion of ferulic acid to vanillin | |
| CN116724113A (zh) | 组氨酸导致的反馈抑制得到减少的atp-prt变体及表达该变体的组氨酸生产菌株 | |
| CN116783290A (zh) | 组氨酸导致的反馈抑制得到减少的atp-prt变体及表达该变体的组氨酸生产菌株 | |
| CN116802283A (zh) | 组氨酸导致的反馈抑制得到减少的atp-prt变体及表达该变体的组氨酸生产菌株 | |
| CN116745412A (zh) | 组氨酸导致的反馈抑制得到减少的atp-prt变体及表达该变体的组氨酸生产菌株 | |
| CN116829705A (zh) | 组氨酸导致的反馈抑制得到减少的atp-prt变体及表达该变体的组氨酸生产菌株 |