CZ285915B6 - Materiály a metody pro biosyntézu serinu a produktů odvozených od serinu - Google Patents
Materiály a metody pro biosyntézu serinu a produktů odvozených od serinu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ285915B6 CZ285915B6 CZ941406A CZ140694A CZ285915B6 CZ 285915 B6 CZ285915 B6 CZ 285915B6 CZ 941406 A CZ941406 A CZ 941406A CZ 140694 A CZ140694 A CZ 140694A CZ 285915 B6 CZ285915 B6 CZ 285915B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- aeqg
- qtsa
- edvaekal
- aqyl
- iead
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
- Tires In General (AREA)
- Epoxy Resins (AREA)
- Ceramic Products (AREA)
Abstract
DNA kodující 3-fosfoglycerát dehydrogenasu (PGD) se sníženou citlivostí k inhibici serinem ve srovnání s divokým typem PGD - tj. DNA, kodující PGD, která má alespoň nějakou enzymatickou aktivitu použitelnou pro biosyntézu a která si udržuje tuto aktivitu při vyšších hladinách serinu než (nemodifikovaná) PGD divokého typu. Jsou také popsány: a) PGD, mající aminokyselinovou sekvenci výše popsané zkonstruované DNA, b) expesní vektory, obsahující zkonstruovanou DNA a regulační DNA umístěnou a orientovanou pro expresi zkosntruované DNA v hostitelském expresním systému, c) buňky, obsahující takové expresní vektory a d) způsoby produkce serinu a produktů odvozených od serinu kultivací takových buněk.
ŕ
Description
Oblast techniky
Vynález se týká zkonstruované DNA, kódující 3-fosfoglycerát dehydrogenasu (PGD), se sníženou citlivostí k inhibici serinem ve srovnání s divokým typem PGD. Dále se týká 3fosfoglycerát dehydrogenasy, mající aminokyselinovou sekvenci kódovanou zkonstruovanou DNA, expresního vektoru, obsahujícího tuto zkonstruovanou DNA, buňky, obsahující tuto zkonstruovanou DNA a způsobu produkce požadovaného produktu, kterým je serin nebo cholin, glycin, cystein nebo tryptofan.
Dosavadní stav techniky
Serin je primární meziprodukt v biosyntéze velkého množství buněčných metabolitů, zahrnujících takové ekonomické důležité sloučeniny jako je cholin, glycin, cystein a tryptofan. Navíc serin figuruje jako jediný donor uhlíku a je odpovědný za 60 až 75 % buněčné celkové potřeby C] jednotek při produkci 5,10-methylentetrahydrofolátu z tetrahydrofolátu. Tyto Ci jednotky jsou užívány v mnoha různých biosyntetických cestách, zahrnujících syntézy methioninu, inosin monofosfátu, jiných purinů a některých pyrimidinů (např. thymidinu a hydroxymethyl-citidinu).
Cesta biosyntézy šeřinu uvedená na obr. 1 je obecně dostupná mnoha různými tkáněmi a mikroorganismy. Prvním provedeným stupněm v této cestě je konverze 3-fosfo-D-glycerové kyseliny (PGA) na 3-fosfohydroxypyrohroznovou kyselinu (PHA) působením enzymu 3fosfoglycerát dehydrogenasy CPGD). Byl klonován a sekvenován gen, kódující PGD a byla dedukována aminokyselinová sekvence PGD subjednotky. (Tobey a Grant, J. Biol. Chem. 261:12179-12183(1980)).
U prokaryot (zejména bakterií) a mikroorganismů, jako jsou kvasinky, ale ne u vyšších eukaryt, je aktivita divokého typu PGD inhibována buněčnými serinovými hladinami. Tato inhibice byla kineticky studována a byla zpracována v různých pracích Tobey a Grant; J. Biol. Chem., 261:121 79-12183 (1986), Dubrow a Pizer, J. Biol.Chem. 252:1527-1551 (1977), McKitrick a Pizer, J. Bacteriol, 141:235-245(1980).
Tosa a Pizer, J. Bacteriol. 106:972-982 (1971) studovali vliv normálně toxického serinového analogu, L-serinhydroxamátu, na kmen E. coli. Selekce na růstovém médiu, obsahujícím tento analog, poskytla mutanty rezistentní k šeřinu. U některých mutantů bylo zjištěno, že mají modifikaci v enzymu nevztaženému k PGD, seryl-tRNA syntetase. Surový extrakt jednoho mutantu vykazuje PGD aktivitu se sníženou citlivostí k šeřinu (viz. J. Bacteriol. 106:972-982 (1971), obr. 5, tabulka 6 a viz str. 973, spodek levého sloupce, str. 977, spodek levého sloupce).
Podstata vynálezu
Jeden aspekt vynálezu obecně poskytuje DNA kódující 3-fosfoglycerát dehydrogenasu (PGD) se sníženou citlivostí k inhibici serinem ve srovnání s divokým typem PGD - tj. DNA kódující PGD, která má alespoň nějakou hladinu enzymatické aktivity, použitelnou pro biosyntézu a která si takovou aktivitu udržuje při vyšších hladinách šeřinu, než je tomu u (nemodifikovaného) divokého typu PGD.
Předmětem předloženého vynálezu tedy je zkonstruovaná DNA, kódující 3-fosfoglycerát dehydrogenasu (PGD), se sníženou citlivostí k inhibici serin ve srovnání s divokým typem PGD,
-1 CZ 285915 B6 kde tato DNA kóduje PGD, obsahující alespoň inzerci mezi aminokyselinami 363 a 364, nebo inzerci mezi aminokyselinami 394 a 395, nebo inzerci mezi aminokyselinami 403 a 404, nebo deleci aminokyselin 364 až 402, nebo deleci aminokyselin 395 až 403, nebo deleci 46 Cterminálních aminokyselin, nebo deleci 45-C terminálních aminokyselin, nebo deleci kterékoliv 5 ze 7 C-terminálních aminokyselin, která kóduje PGD, obsahující následující sekvence aminokyselin
| AEQG | V--- -NIA | AQYL | QTSA | QMGY | WID | IEAD | EDVAEKAL | --QA | MKAI | PÁSL | D; | |
| AEQG | VLV; | |||||||||||
| AEQG | VL; | |||||||||||
| AEQG | VCSR ΑΝΙΑ | AQYL | QTSA | QMGY | WID | IEAD | EDVAEKAL | --QA | MKAI | PGT- | -IRA | RLLY |
| AEQG | V----NIA | AQYL | QTSA | QMGY | WID | IEAD | EDVAEKAL | SRQA | MKAI | PGT- | -IRA | RLLY |
| AEQG | V----NIA | AQYL | QTSA | QMGY | WID | IEAD | EDVAEKAL | L; | ||||
| AEQG | V--- -NIA | AQYL | QTSA | QMGY | WID | IEAD | EDVAEKAL | --QA | MKAI | PGT- | AIRA | RLLY. |
| AEQG | V----NIA | AQYL | QTSA | QMGY | WID | IEAD | EDVAEKAL | --QA | MKAI | PVL; |
AEQG V............... CSR AIRA RLLY;
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL----------SR AIRA, RLLY;
AEQG VCSR ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTIRARLL;
AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTIRARLL;
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTIRARL;
AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTIRAR;
AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTIRA;
AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTIR;
AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGTI;
AEQG V---, -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGT;
výhodně tato zkonstruovaná DNA, která kóduje PGD, obsahující alteraci v 50 C-terminálních aminokyselinách divokého typu PGD.
Dále je předmětem vynálezu zkonstruovaná DNA, která kóduje PGD, obsahující C-terminální deleci divokého typu PGD. Dále se vynález týká zkonstruované DNA, ve které C-terminální alterace zahrnuje inzerci do sekvence divokého typu PGD, obzvláště inzerci mezi VAL 363 a ASN 364 nebo mezi ALA 392 a GLN 394 divokého typu PGD.
Zkonstruovaná DNA podle vynálezu, kde tato DNA kóduje PGD, má výhodně jednu z následujících aminokyselinových sekvencí
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -- QA MKAI
PÁSL D,
AEQG VLV,
AEQG VL,
AEQG VCSR ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -- QA MKAI
PGT- -IRA RLLY,
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL SRQA MKAI
PGT- -IRA RLLY,
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL L,
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI
PGT- AIRA RLLY,
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PVL,
AEQG V---.... CSR
AIRA RLLY,
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL---------SR AIRA RLLY,
-2CZ 285915 B6 místo 52 C-terminálních aminokyselin divokého typu PGD.
Dále je předmětem předloženého vynálezu 3-fosfoglycerátdehydrogenasa, mající aminokyselinovou sekvenci kódovanou výše uvedenou zkonstruovanou DNA, expresní vektor, obsahující výše uvedenou zkonstruovanou DNA a regulační DNA, umístěnou a orientovanou pro expresi uvedené zkonstruované DNA v hostitelském expresním systému.
Také je předmětem předloženého vynálezu buňka, obsahující výše uvedenou zkonstruovanou DNA a regulační DNA, umístěnou a orientovanou pro expresi uvedené zkonstruované DNA v uvedené buňce, obzvláště buňka, která je deletována pro divoký typ ser-A.
Konečně je předmětem předloženého vynálezu způsob produkce požadovaného produktu, kterým je serin nebo cholin, glycin, cystein nebo tryptofan, který zahrnuje kultivaci buňky, obsahující uvedenou zkonstruovanou DNA a regulační DNA, umístěnou a orientovanou pro expresi uvedené zkonstruovaná DNA v uvedené buňce a získání požadovaného produktu. Výhodně je uvedeným produktem serin.
Vynález poskytuje odstranění kontroly důležitého biosyntetického kontrolního bodu, čímž zvyšuje produkci mnoha sloučenin ve směru od tohoto bodu, zahrnujících, zejména serin a produkty odvozené od šeřinu jako je tryptofan. Jiné buněčné metabolity odvozené od šeřinu (tj. serin je první meziprodukt v jejich biosyntéze) zahrnují cholin, glycin, cystein s C(-donorzávislé sloučeniny jako je methionin, inosinmonofosfát, puriny a některé pyrimidiny (například thymidin a hydroxymethylcytosin).
Popis obrázků na připojených výkresech
Obr. 1 znázorňuje stupně biosyntézy L-serinu z glukózy.
Obr. 2 je sekvence E. coli ser - A genu uváděná Tobey-em a Grantem (viz citace dříve) a aminokyselinová sekvence vydedukovaná z genu.
Obr. 3 znázorňuje biokonverzi L-serinu a tetrahydrofolátu na glycin s N5, N10-methylentetrahydrofolátu.
Poskytnutí PGD necitlivého k šeřinu
1. Geneticky zpracované konstrukce.
Výhodná provedení vynálezu poskytují biosyntézu šeřinu a produktů odvozených od šeřinu, např. produktů popsaných výše, získaných biosyntézou ze šeřinu. První stupeň v biosyntéze těchto sloučenin podle vynálezu je poskytnutí PGD necitlivé k šeřinu, jak je to diskutováno dále.
Bylo stanoveno, že zde existuje specifická serinová zpětná vazba, ovlivňující domény PGD a že domény mohou být alterovány pro snížení citlivosti k šeřinu při udržení vhodných hladin PGD aktivity. Obr. 2 ukazuje jednu výhodnou PGD genetickou a aminokyselinovou sekvenci, která může být použita pro srovnání v následující diskusi. Sekvence na obr. 2 obsahuje 410 aminokyselin (včetně počátečního Met, který je ze zralého proteinu odštěpen. Doména PGD, která může snižovat serinovou citlivost, bez narušení PGD aktivity, je v C-terminálních 25 % molekuly, nejvýhodněji jí je 50 C-koncových zbytků.
Příklady PGD modifikací, které spadají do vynálezu jsou delece některých nebo všech Cterminálních 42 aminokyselin, nebo inzerce nebo substituce v takovém regionu, který redukuje citlivost k šeřinu při udržení použitelné PGD funkce. Například inzerce aminokyselinových
-3CZ 285915 B6 zbytků mezi Val 363 a Asn 364 bude zvyšovat K; PGD oproti divokému typu, při udržení PGD aktivity.
Dramatičtější zvýšení v K; se dosáhnou delecí některých nebo všech C-terminálních aminokyselinových zbytků. Například, delece C-terminálních zbytků GTIRARLLY a nahrazení ASLD zvyšuje K; o několik řadů, při udržení použitelné PGD aktivity. Jinými inzercemi v rozsahu vynálezu jsou inzerce mezi Ala392 a Gln394.
Jiné použitelné modifikace zahrnují delece od C-konce navíc k inzercím a modifikacím diskutovaným výše.
Geny, kódující k šeřinu necitlivou PGD popsanou výše, mohu být konstruovány technikami genetického inženýrství, které zahrnují alteraci 3' konce kódujícího regionu, kódujícího Cterminální aminokyseliny a pak transformaci hostitelského kmene svehikulem pro expresi alterovaného PGD enzymu.
Kandidáti alterovaných enzymů jsou screenováni (jak je popsáno dále) na serinovou afinitu (K) a PGD aktivitu způsoby, které jsou obecně popsány dále.
2. Screening geneticky zpracovaných konstrukcí.
Ve screeningu genetických konstrukcí vyrobených výše popsanými metodami, byly použity následující zkoušky PGD aktivity a serinové citlivosti.
I když není pro vynález kritická, je zkouška PGD aktivity obecně nezbytná za účelem zjištění stupně serinové citlivosti alterovaného enzymu. Jak je v oboru známo, je enzymová aktivita funkcí celkového počtu enzymových molekul a katalytické aktivity každé molekuly. Tak ve srovnání katalytické aktivity PGD zpětnovazebných variant, stupně musí být podniknuty kroky adekvátní kontroly relativního počtu PGD molekul u vzorků, se kterými je relativní katalytická aktivita porovnávána. Existuje řada způsobů, kterými to lze provést. Nicméně proto, že je obtížné adekvátně stanovit hladinu exprese genu v buňkách transformovaných zkrácenými ser A-geny (díky snížené viabilitě), nej vhodnější cestou pro porovnání PGD aktivity produkované z různých konstruktů a divokého typuje chromozomální integrace alterovaného ser A-genu, obsahujícího standardní regulační prvky v jediné kopii s následujícím shromážděním transformantů a stanovením relativní katalytické aktivity ve srovnání s PGD z divokého typu buněk.
Může být použita jakákoliv metoda vhodná pro měření PGD aktivity. PGD aktivita může být měřena detekcí buď přední, nebo reverzní reakce metodou popsanou McKitrickem Johnem C. a Lewisem I. Pizerem (1980) J. Bacteriol. 141 235-345.
Enzymatická zkouška popsaná výše je vhodná pro stanovení serinové citlivosti pro jakýkoliv PGD enzym, zahrnující ty, které mají chemicky modifikovaný C-konec. Zkouška se provádí za přítomnosti různých hladin šeřinu. Katalytická aktivita v přítomnosti šeřinu je srovnávána s katalytickou aktivitou za nepřítomnosti šeřinu a vypočte se KP
Ve většině případů bude výhodné snížit serinovou citlivost bez významné změny PGD katalytické aktivity. V ještě dalších provedeních může být žádoucí snížit jak zpětnovazebnou citlivost, tak katalytickou aktivitu. Dále je možno použít konstrukce, mající C-terminální aminokyselinovou sekvenci 3-fosfoglycerát dehydrogenas uvedené v tabulce 1.
-4CZ 285915 B6
Tabulka 1
C-terminální aminokyselinové sekvence 3-fosfoglycerát dehydrogenas
SerA sekvence ki/gm jednotky
WT 1455 1459
1507
1508
1509
1510
1511
1512
1530
1531 aeqg v— -nia aqyl qtsa qmgy wid iead edvaekal -qa mkai pgt- -irarlly AEQG V— -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -QA MKAI PÁSL D AEQG VLV
AEQG VL
AEQG VCSR ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -QA MKAI PGT- -IRA RLLY AEQG V— -NIA AQY“ QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL SRQA MKAI PGT- -IRA RLLY AEQG V— -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL L
AEQG V— -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -QA MKAI PGT- AIRA RLLY
AEQG V— -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -QA MKAI PVL
AEQG V— ---------------------------- -- -CSR AIRA RLLY
AEQG V— -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL----- -SR AIRA RLLY
| <o,l | 0,05 |
| >100 | <0,01 |
| >100 | N/A |
| >100 | N/A |
| 3,8 | 0,05 |
| >100 | N/A |
| >100 | N/A |
| >100 | N/A |
| >100 | N/A |
| >100 | N/A |
| >100 | N/A |
Jiné konstrukce s modifikovanými 3' konci také spadají do rozsahu předloženého vynálezu, protože je jednoduché připravit testované konstrukty a transformované buňky podle předloženého vynálezu a testovat na serinovou inhibici PGD aktivity.
Jakýkoliv vektor, který vede k expresi PGD proteinu postrádající citlivost k inhibici serinem se týká předloženého vynálezu. Obecně by však za nepřítomnosti citlivosti k šeřinu, mohlo být dosaženo vysokých hladin exprese zpětné vazby prosté PGD i když výsledné cytoplasmické hladiny šeřinu nebo od šeřinu odvozených metabolitů mohou být pro buňku toxické. Obecně u jakéhokoliv konstruktu, kódujícího zpětnovazebně inhibovanou PGD s normální katalytickou aktivitou a expresními hladinami podobnými hladinám nativního genu, by transformace měla vést k vysokým hladinám PGD exprese a zvýšené buněčné viabilitě. Toxicita vysokých hladin produkovaného šeřinu může ve skutečnosti selektovat mutanty se zvýšenou PGD expresí. Zatímco transformace za použití multi-kopiových plasmidů může být vhodná v počátečním screeningu konstruktů s určitými provedeními, je preferována chromosomální integrace ser-A konstruktů vjediných kopiích do genomu. Alternativně, chromosomální integrace jak je popsána dále, usnadňuje měření aktivity zpětné vazby deletované PGD. Ve většině provedení, kde je očekávána nebo požadována silná katalytická aktivita, je výhodné použít vektorů vhodných pro jednokopiovou chromosomální integraci. Mnoho takových vektorů a strategií pro jejich použití je v oboru známo. Viz např. Backman, U.S.S.N. 07/091837, podáno 1. září 1987 - citován jako odkaz. Vhodné vektory a konstrukty mohou být získány úspěšnou transformací a expresí enzymu ve vhodném hostiteli pro produkci požadovaného produktu. Prostředky pro dosažení tohoto jsou dobře známy odborníkům v oboru a nejsou podstatou předloženého vynálezu. Navíc k alterované PGD-kódující DNA, bude expresní vektor obsahovat různé jiné dále popsané prvky.
Za prvé, kódující sekvence přítomné ve vektoru budou spojeny s vhodnými regulačními prvky nezbytnými pro vhodnou hladinu exprese kódujících sekvencí, zahrnujícími promotory, ribosomová vazebná místa a koncové sekvence. Ve většině případů nativní ser-A regulační sekvence bude preferovaným zdrojem katalyticky aktivní části molekuly, i když je známo, že může být použito mnoho jiných regulačních sekvencí, které jsou známy v oboru nebo ještě mohou být objeveny.
Za druhé, je preferováno, že sekvence, kódující selektivní markéry a/nebo reportér geny, spolu se vhodnými regulačními prvky, budou také přítomny ve vektoru. Exprese takových selektivních markérů je použitelná při identifikaci transformantů. Vhodné selektivní markerové geny zahrnují geny kódující ampicilin, tetracyklin a chloramfenikol.
Za třetí, požadavek na počátek replikace na plasmidovém vektoru závisí velmi na požadavku udržení genů chromosomálně nebo extrachromosomálně. Odborníkům v oboru budou zřejmé
-5CZ 285915 B6 různé strategie, ve kterých může být využita ztráta počátku replikace pro promotování integrace do chromosomu, viz např. Backman a spol., US patent 4743546, uváděný zde jako odkaz.
Jakmile je zkonstruován expresní vektor, může být vhodná hostitelská buňka transformována 5 vektorem, obsahujícím transkripční jednotku, kódující k šeřinu necitlivý PGD protein. Ve většině případů je vhodné použít buňky, o kterých je známo, že endogenní PGD protein je inhibován serinem a ve kteiých je endogenní ser-A gen deletován a nahrazen alterovaným genem podle vynálezu. Takové buněčné systémy jsou vhodné pro nadprodukci od šeřinu odvozených metabolitů. Buňkami, známými, že obsahují k šeřinu citlivé proteiny jsou prokaryota io a kvasinky.
Pro všechny konstrukty jsou uvedeny počáteční vektor, použité restrikční místo a sekvence inzertovaného íinkeru. K; hodnoty pro serin jsou uvedeny v tabulce 1, jakož i relativní katalytické aktivity pro tři z těchto konstruktů po chromosomální integraci (popsána dále). N/A 15 znamená, že konstrukce nebyly chromosomálně integrovány a jejich hladina aktivity proto nebyla standardizována.
3. Chemické modifikace
Odborníkům v oboru bude zřejmé, že delece nebo modifikace C-konce divokého typu PGD mohou být provedeny enzymaticky nebo chemicky, např. různými karboxypeptidasami, včetně karboxypeptidaxy Y nebo laktoperoxidasou zprostředkovanou jodací.
4. Použití „antisence“ mRNA
Alternativně je možné snižovat serinovou citlivost in vivo generováním PGD-kódujících transkriptů zkrácených na 3' konci prostřednictvím produkce „antisense“ mPNA, které obsahují nukleotidové sekvence komplementární k částem 3' kódujícího regionu nativních nebo transformovaných PGD kódujících sekvencí.
5. Produkce požadovaných sloučenin
Jak je uvedeno na obr. 3, je serin meziproduktem v přípravě glycinu. Je také meziproduktem v produkci N5, N10-methylentetrahydrofolátu, který je generalizovaným Cl donorem podstatným 35 pro syntézu methioninu, purinů (včetně inosinu) a některých pyrimidinů. Nadprodukce šeřinu z fosfoglycerátu může být dosaženo ve velkém rozsahu bakteriálních produkčních systémů, zahrnujících produkční systémy pro cholin, glycin, cystein, methionin, tryptofan a všechny puriny včetně inosinmonofosfátu.
Následující specifické příklady ilustrují vynález.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Konstrukce ser-A genových alel kódujících zpětnovazebně rezistentní 3-fosforylglycerát dehydrogenasy
E.coli K12 ser-A gen byl izolován na 6,4 Kb DNA fragmentu ze Seu3A parciálního štěpu klonovaného do Bell místa pTR264. Viz Backman a spol., U.S.S.N. 07(285128, podáno 16. prosince 1988 a Roberts a spol., Gene 12:123 (1980). Tento plasmid byl nazván pKB1302. 3
-6CZ 285915 B6
KbSalI až SpHI fragment pKB1302 DNA, obsahující Ser-A gen byi klonován do pUC19 pro přípravu pKB1321. pKB1370 byl generován klonováním 3 Kb HindlII až Sáli fragmentu, obsahujícího ser-A gen do pBR322.
Alely ser-A kódující zpětnovazebně rezistentní 3-fosfoglycerát dehydrogenasy byly generovány inzercí Xbal linkerů na restrikční místa v 3' regionu ser-A genu. Parciální štěpení plasmidu pKB1321 pomocí HindlI poskytuje tupé konce v poloze 1793, kde inzerce linkerů poskytla: a) pKB1459, kódující zkrácenou 3-fosfogIycerát dehydrogenasu, b) pKB1507, kódující zkrácenou 3-fosfoglycerát dehydrogenasu a c) pKB1508, který kóduje 3-fosfoglycerát dehydrogenasu s inzertem čtyř aminokyselinových zbytků.
Pst digesce pKB 1321 poskytuje 3' přesah v poloze 1888. Tupé konce byly generovány působením Klenowova fragmentu DNA polymerasy I. Linkery byly ligovány ke fragmentům s tupými konci a získanými plasmidy byly pKB1509, které kódují 3-fosfoglycerát dehydrogenasu s inzertem dvou aminokyselin a pKB1510, který kóduje zkrácenou 3-fosfoglycerát dehydrogenasu. KpnI digest pKB1370 byl upraven na tupé konce Klenowovým fragmentem DNA polymerasy I a inzertované linkery poskytly plasmidy, kódující zkrácenou 3-fosfoglycerát dehydrogenasu, pKB1455 a pKB1512, nebo 3-fosfoglycerát dehydrogenasu se dvěma aminokyselinovými zbytky jako inzerty, pKB1511. Delece plasmidů pKB1530 a pKB1531 byly generovány inzercí 0,8 Kb BamHI kXbal fragmentu zpKB1508 nebo 0,9 Kb BamHI kXbal fragmentu z pKB1509, do 5,8 Kb BamHi k Xbal fragmentu pKB1511.
Následující tabulka 2 shrnuje různé připravené konstrukty.
Tabulka 2
| Ser A alela | plasmid | Restrikční místo | linker | výsledek |
| Ser A 1455 | pKB 1370 | KpnI | CTAGTCTAGACTAG | zkrácený |
| Ser A 1459 | pKB 1321 | Hind II | CTAGTCTAGACTAG | zkrácený |
| Ser A 1507 | pKB 1321 | HindlI | CTCTAGAG | zkrácený |
| Ser A 1508 | pKB 1321 | HindlI | TGCTCTAGAGCA | inzert |
| Ser A 1509 | pKB 1321 | Pstl | GCTCTAGAGC | inzert |
| Ser A 1510 | pKB 1321 | Pstl | TGCTCTAGAGCA | zkrácený |
| Ser A 1511 | pKB 1370 | KpnI | GCTCTAGAGCA | inzert |
| Ser A 1512 | pKB 1370 | KpnI | TGCTCTAGAGC | zkrácený |
| Ser A 1530 | pKB 1511 +pKB 1508 | Hind Π + Κρη I | deletovaný | |
| Ser A 1531 | pKB 1511 +pKB 1509 | Pst I + Κρη I | deletovaný |
Příklad 2
Příprava hostitelského kmene
Sekvence vlastní plasmidu nesoucímu ser-A gen byly nahrazeny genem rezistence ke kanamycinu. Tento plasmid pak byl použit k inaktivaci hostitelského kmene ser-A genu pomocí alelové výměny následujícím způsobem:
ser-A region YMC9 (ATCC33920) byl klonován ze chromosomální DNA, částečně štěpen pomocí Sau 3AI, komplementací PC1523 (arglól, argF58, serA27, purA54, thr-25, tonA49, relAl, spoTl), získaného z Coli Genetic Stock Center, Yale University, New Haven, CT. 3 kb fragment, nesoucí ser-A gen byl subklonován do pUC19 za zniku plasmidu nazvaného pKB1321. Z tohoto plasmidu byl 3 kb Sáli až HindlII fragment reklonován do pBR322 za poskytnutí plasmidu pKB1370. KpnI místo na 3'konci ser-A genu bylo konvertováno na BamHI linkerem a BamHI fragment vložený do výsledného ser-A byl nahrazen BamHI fragmentem zpUC-4-KSAC (Pharmacia), obsahujícím Tn903 gen kanamycinové rezistence. Tento nový plasmid byl označen pKB1429. Derivát pBR322 nazvaný pKB 701 (ATCC 39772) viz USSN 06/757019-citována jako reference- byl generován, ve kterém Mbol a TThlII 1 doprovázející počátek replikace, byly konvertovány na Κρη I místa. Sáli až EcoRI fragment, obsahující ser-A: KanR zpKB1429 byl klonován do pKB701 za vzniku pKB1438. pKB1438 byl štěpen pomocí KpnI pro odstranění ori regionu. Velký fragment, obsahující region, kódující ampicilinovou rezistenci jakož i ser-A: KanR, byl cirkularizován a použit v CaCl? transformaci YMC9. Po transformaci byly hostitelské YMC9 buňky umístěny do ampicilinové selekce. Za těchto podmínek se ampicilin rezistentní geny vyvinuly inkorporací cirkulámí DNA homologní rekombinací v ser-A gen doprovázejících regionech. Růst ampicilin rezistentního izolátu v nepřítomnosti ampicilinové selekce vede ke ztrátě genu ampicilinové rezistence homologní rekombinací opakujících se sekvencí ser-A gen doprovázejících regionů. Takové kmeny byly identifikovány ztrátou produkce β-laktamasy za použití AmpScreen (BRL) podle nároku výrobce. Dvojité očkování jednotlivých kolonií na médium za přítomnosti a nepřítomnosti šeřinu odhaluje ampicilin citlivé klony vyžadující serin pro růst na minimálním mediu a které jsou také rezistentní ke kanamycinu. Jeden z těchto izolátů byl nazván KB875.
Příklad 3
Chromosomální integrace alterovaných ser-A sekvencí alelovou výměnou ser-A 145 5 alela byla zavedena do chromosomu způsobem analogickým způsobu použitému pro zavedení ser-A: KanR jak je uvedeno v příkladu 2. Stručně, fragment (Sáli až HindlII) nesoucí ser-A1455 alelu byl klonován do pKB701. Plasmidový počátek byl odstraněn KpnI štěpením. Pro transformaci na ampicilinovou rezistenci byla použita cirkularizovaná DNA za poskytnutí kmene, který je požadován.
Po neselektivním růstu, za použití Ampscreenu a replikovaného plátování na kanamycin, byl izolován KB904 (ser-A1455) a zjištěno, že je citlivý kampicilinu a kanamycinu KB904. Výsledná ser-A1544 alela může být přenesena do produkčních kmenů PÍ transdukcí. Miller (1972) Experiments In Mol. Genetics Cold Spring Harbor Press, str. 201-205.
Příklad 4
Chromosomální integrace alterovaných ser-A sekvencí přemístěním recD závislého genu
Jiný přístup byl použit pro přemístění ser-A1508 alely na chromosomu. Kmen KB875 byl připraven recD PÍ transdukcí zV220 (recD, argA:Tnl0. Amundsen a spol., (1986)Proc. Acad.Sci., USA 82 5558-5562) (DSM 6823). Gen pro podstatnou třetí podjednotku exonukleasy V. za vzniku JGP101. Plasmid pKB1508 byl linearizován a použit pro transformaci JPG101 na serin prototrofní v podstatě jak je popsáno Shevellem a spol., (1988) J.Bacteriol. 170 32943296, za vzniku JGP103. ser-A1508 alela pak může být přemístěna do produkčních kmenů PÍ transdukcí. Miller a spol., Experiments in Mol. Genetics Cold Spring Harbor Lab., str. 201-205 (1972).
-8CZ 285915 B6
Získání nadprodukovaných metabolitů
Pro nadprodukci od šeřinu odvozených metabolitů mohou být připraveny buňky, které produkují PGD se sníženou citlivostí k šeřinu a kultivovány ve fermentorech za vhodných podmínek, ve většině případů ve stacionární fázi. Buňky pak budou sklizeny a lyžovány a požadovaný metabolit připraven podle standardních biochemických postupů. Podmínky, zásady a reference pro kultivaci mikrobů a získání specifických metabolitů jsou poskytnuty v práci autorů Cruegera a Cruegera (1982) (Biotechnology: A Textbook of Industrial Microbiology) a Herrmanna a Somerville-a (1983) (Amino Acids: Biosynthesis and Genetics Regulation), které zde jsou zahrnuty jako citace.
Claims (12)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Zkonstruovaná DNA, kódující 3-fosfoglycerát dehydrogenasu (PGD), se sníženou citlivostí k inhibici serinem ve srovnání s divokým typem PGD, kde tato DNA kóduje PGD, obsahující alespoň inzerci mezi aminokyselinami 363 a 364, nebo inzerci mezi aminokyselinami 394 a 395, nebo inzerci mezi aminokyselinami 403 a 404, nebo deleci aminokyselin 364 až 402, nebo deleci aminokyselin 395 až 403, nebo deleci 46 C-terminálních aminokyselin, nebo deleci 45 Cterminálních aminokyselin, nebo deleci kterékoliv ze 7 C-terminálních aminokyselin, která kóduje PGD, obsahující následující sekvence aminokyselin
AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG VLV; AEQG VL; AEQG VCSP. ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG v--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V--- AEQG v--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG VCSR ΑΝΙΑ. AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG v--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V----NIA. AQYL QTSA QMGY WiD IEAD EDVAEKAL AEQG V----NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL AEQG V---( -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL--QA MKAI PÁSL D;--QA MKAI PGT- -IRA RLLY; SRQA MKAI PGT- -IRA RLLY; L; --QA MKAI PGT- AIRA RLLY; --QA MKAI PVL; -CSR AIRA RLLY; — — --SR AIRA RLLY; --QA MKAI PGTIRARLL; --QA MKAI PGTIRARLL; --QA MKAI PGTIRARL; - -QA MKAI PGTIRAR; --QA MKAI PGTIRA; --QA MKAI PGTIR; --QA MKAI PGTI; --QA MKAI PGT; - 2. Zkonstruovaná DNA podle nároku 1, která kóduje PGD, obsahující alteraci v 50 Cterminálních aminokyselinách divokého typu PGD.
- 3. Zkonstruovaná DNA podle nároku 1, která kóduje PGD, obsahující C-terminální deleci divokého typu PGD.
- 4. Zkonstruovaná DNA podle nároku 1, ve které C-terminální alterace zahrnuje inzerci do sekvence divokého typu PGD.
- 5. Zkonstruovaná DNA podle nároku 4, ve které je uvedená inzerce mezi VAL 363 a ASN 364 nebo mezi ALA 392 a GLn 394 divokého typu PGD.-9CZ 285915 B6
- 6. Zkonstruovaná DNA podle nároku 1, kde tato DNA kóduje PGD, mající jednu z následujících aminokyselinových sekvencíAEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL -- QA MKAIPÁSL D,AEQG VLV,AEQG VL,
AEQG VCSR ΑΝΙΑ AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL - - QA MKAI PGT- -IRA RLLY, AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL SRQA MKAI PGT- -IRA RLLY, AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL L, AEQG v--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PGT- A1RA RLLY, AEQG V--- -NIA AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --QA MKAI PVL, AEQG V--- --CSR A1RA RLLY, AEQG V--- -NIA . AQYL QTSA QMGY WID IEAD EDVAEKAL --SR AIRA RLLY, místo 52 C-terminálních aminokyselin divokého typu PGD. - 7. 3-Fosfoglycerátdehydrogenasa, mající aminokyselinovou sekvenci kódovanou zkonstruovanou DNA podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6.
- 8. Expresní vektor, obsahující zkonstruovanou DNA podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 a regulační DNA, umístěnou a orientovanou pro expresi uvedené zkonstruované DNA v hostitelském expresním systému.
- 9. Buňka, obsahující zkonstruovanou DNA podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 a regulační DNA, umístěnou a orientovanou pro expresi uvedené zkonstruované DNA v uvedené buňce.
- 10. Buňka podle nároku 9, která je deletována pro divoký typ ser-A.
- 11. Způsob produkce požadovaného produktu, kterým je serin nebo cholin, glycin, cystein nebo tryptofan, vyznačující se tím, že zahrnuje kultivaci buňky, obsahující zkonstruovanou DNA podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 a regulační DNA umístěnou a orientovanou pro expresi uvedené zkonstruované DNA v uvedené buňce a získání požadovaného produktu.
- 12. Způsob podle nároku 11, vyznačující se tím, že uvedeným produktem je serin.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP91121385 | 1991-12-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ140694A3 CZ140694A3 (en) | 1995-01-18 |
| CZ285915B6 true CZ285915B6 (cs) | 1999-11-17 |
Family
ID=8207424
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ941406A CZ285915B6 (cs) | 1991-12-12 | 1992-08-17 | Materiály a metody pro biosyntézu serinu a produktů odvozených od serinu |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5618716A (cs) |
| EP (1) | EP0620853B1 (cs) |
| JP (1) | JP2584409B2 (cs) |
| KR (1) | KR0132258B1 (cs) |
| CN (1) | CN1065914C (cs) |
| AU (1) | AU668359B2 (cs) |
| BR (1) | BR9206902A (cs) |
| CA (1) | CA2124214C (cs) |
| CZ (1) | CZ285915B6 (cs) |
| DE (1) | DE69208894T2 (cs) |
| ES (1) | ES2084373T3 (cs) |
| FI (1) | FI113665B (cs) |
| HU (1) | HU217795B (cs) |
| RU (1) | RU2154671C1 (cs) |
| SK (1) | SK279805B6 (cs) |
| TW (1) | TW313589B (cs) |
| UA (1) | UA39861C2 (cs) |
| WO (1) | WO1993012235A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA926405B (cs) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4232468A1 (de) * | 1992-09-28 | 1994-03-31 | Consortium Elektrochem Ind | Mikroorganismen für die Produktion von Tryptophan und Verfahren zu ihrer Herstellung |
| JP3997631B2 (ja) | 1998-01-12 | 2007-10-24 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
| JP4066543B2 (ja) * | 1998-01-12 | 2008-03-26 | 味の素株式会社 | 発酵法によるｌ−セリンの製造法 |
| US6431870B1 (en) | 1999-11-30 | 2002-08-13 | Ora Metrix, Inc. | Method and apparatus for generating a desired three-dimensional digital model of an orthodontic structure |
| US6250918B1 (en) | 1999-11-30 | 2001-06-26 | Orametrix, Inc. | Method and apparatus for simulating tooth movement for an orthodontic patient |
| US6350120B1 (en) | 1999-11-30 | 2002-02-26 | Orametrix, Inc. | Method and apparatus for designing an orthodontic apparatus to provide tooth movement |
| US6471512B1 (en) | 1999-11-30 | 2002-10-29 | Ora Metrix, Inc. | Method and apparatus for determining and monitoring orthodontic treatment |
| US6540512B1 (en) | 1999-11-30 | 2003-04-01 | Orametrix, Inc. | Method and apparatus for treating an orthodontic patient |
| US6509191B2 (en) * | 2000-05-02 | 2003-01-21 | Alex Liu | Identification and characterization of a PAGODA phenotype (PGD) in plants |
| DE10331291A1 (de) * | 2003-07-10 | 2005-02-17 | Consortium für elektrochemische Industrie GmbH | Varianten der 3-Phosphoglyceratdehydrogenase mit reduzierter Hemmung durch L-Serin und dafür codierende Gene |
| CA2609151A1 (en) | 2005-03-07 | 2006-09-14 | Align Technology, Inc. | Variations of dental aligners |
| US20060275731A1 (en) | 2005-04-29 | 2006-12-07 | Orthoclear Holdings, Inc. | Treatment of teeth by aligners |
| DE102005049527B4 (de) * | 2005-10-17 | 2013-05-08 | Forschungszentrum Jülich GmbH | Verfahren zur Herstellung von L-Serin, Gensequenz, Vektoren sowie Mikroorganismus |
| RU2006129690A (ru) | 2006-08-16 | 2008-02-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА ydiN, ГЕНА ydiB ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ |
| JP2010017081A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| JP2010017082A (ja) * | 2006-10-10 | 2010-01-28 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−アミノ酸の製造法 |
| EP2192170B1 (en) | 2007-09-04 | 2017-02-15 | Ajinomoto Co., Inc. | Amino acid-producing microorganism and method of producing amino acid |
| DE602009000714D1 (de) * | 2008-03-06 | 2011-03-24 | Ajinomoto Kk | L-Zystein-produzierendes Bakterium und Verfahren zur Herstellung von L-Zystein |
| JP5332237B2 (ja) * | 2008-03-06 | 2013-11-06 | 味の素株式会社 | Ｌ−システイン生産菌及びｌ−システインの製造法 |
| CN102341502B (zh) | 2008-12-31 | 2015-07-01 | 代谢探索者公司 | 用于制备二醇的方法 |
| CN102639691B (zh) * | 2009-11-30 | 2014-04-16 | 味之素株式会社 | 生产l-半胱氨酸的细菌以及生产l-半胱氨酸的方法 |
| WO2012001003A1 (en) | 2010-07-02 | 2012-01-05 | Metabolic Explorer | Method for the preparation of hydroxy acids |
| DE102011075656A1 (de) | 2011-05-11 | 2012-03-29 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystin |
| DE102011078481A1 (de) | 2011-06-30 | 2013-01-03 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von natürlichem L-Cystein |
| DE102012208359A1 (de) | 2012-05-18 | 2013-11-21 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure |
| DE102012216527A1 (de) | 2012-09-17 | 2014-03-20 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur fermentativen Produktion von L-Cystein und Derivaten dieser Aminosäure |
| WO2014049382A2 (en) | 2012-09-26 | 2014-04-03 | Metabolic Explorer | Ethylenediamine fermentative production by a recombinant microorganism |
| DE102013209274A1 (de) | 2013-05-17 | 2014-11-20 | Wacker Chemie Ag | Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Überproduktion von Gamma-Glutamylcystein und Derivaten dieses Dipeptids |
| CN113710807A (zh) | 2019-02-20 | 2021-11-26 | 布拉斯科公司 | 用于由己糖生产含氧化合物的微生物和方法 |
| WO2020168408A1 (en) | 2019-02-20 | 2020-08-27 | Braskem S.A. | Degradation pathway for pentose and hexose sugars |
| EP4172310A1 (de) | 2020-06-26 | 2023-05-03 | Wacker Chemie AG | Verbesserte cystein produzierende stämme |
| WO2023165684A1 (de) | 2022-03-01 | 2023-09-07 | Wacker Chemie Ag | Verbesserte cystein produzierende stämme |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0190921A3 (en) * | 1985-02-04 | 1988-01-13 | Engenics, Inc. | Method for the overproduction of amino acids |
| US4743546A (en) * | 1985-02-13 | 1988-05-10 | Biotechnica International, Inc. | Controlled gene excision |
| US4753883A (en) * | 1986-05-07 | 1988-06-28 | Biotechnica International, Inc. | Enzyme deregulation |
| US4753833A (en) * | 1986-09-26 | 1988-06-28 | Fishgal Semyon I | Hollow article with zigzag projections |
| GB8828806D0 (en) * | 1988-12-09 | 1989-01-18 | Beecham Group Plc | Novel compounds |
| JP2967996B2 (ja) * | 1989-06-06 | 1999-10-25 | 協和醗酵工業株式会社 | Ｌ―トリプトファンの製造法 |
| US5120837A (en) * | 1989-09-20 | 1992-06-09 | The Nutrasweet Company | Dna encoding phe a feedback inhibition resistant enzyme analogues |
-
1992
- 1992-03-24 TW TW081102201A patent/TW313589B/zh active
- 1992-08-17 ES ES92917826T patent/ES2084373T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 EP EP92917826A patent/EP0620853B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 HU HU9400796A patent/HU217795B/hu unknown
- 1992-08-17 CZ CZ941406A patent/CZ285915B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-08-17 BR BR9206902A patent/BR9206902A/pt not_active Application Discontinuation
- 1992-08-17 UA UA94005362A patent/UA39861C2/uk unknown
- 1992-08-17 RU RU94030817/13A patent/RU2154671C1/ru active
- 1992-08-17 SK SK700-94A patent/SK279805B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-08-17 AU AU24268/92A patent/AU668359B2/en not_active Expired
- 1992-08-17 DE DE69208894T patent/DE69208894T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 JP JP5510540A patent/JP2584409B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 US US08/244,491 patent/US5618716A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 WO PCT/EP1992/001873 patent/WO1993012235A1/en active IP Right Grant
- 1992-08-17 CA CA002124214A patent/CA2124214C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-08-17 KR KR1019940701948A patent/KR0132258B1/ko active
- 1992-08-25 ZA ZA926405A patent/ZA926405B/xx unknown
- 1992-10-10 CN CN92112014A patent/CN1065914C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-06-09 FI FI942711A patent/FI113665B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1993012235A1 (en) | 1993-06-24 |
| BR9206902A (pt) | 1995-11-21 |
| CN1065914C (zh) | 2001-05-16 |
| HUT69802A (en) | 1995-09-28 |
| JPH06510911A (ja) | 1994-12-08 |
| ES2084373T3 (es) | 1996-05-01 |
| FI942711A (fi) | 1994-06-09 |
| DE69208894T2 (de) | 1996-07-18 |
| EP0620853A1 (en) | 1994-10-26 |
| FI942711A0 (fi) | 1994-06-09 |
| CA2124214C (en) | 2002-04-02 |
| KR0132258B1 (ko) | 1998-04-11 |
| AU2426892A (en) | 1993-07-19 |
| DE69208894D1 (de) | 1996-04-11 |
| ZA926405B (en) | 1993-04-28 |
| CA2124214A1 (en) | 1993-06-24 |
| SK279805B6 (sk) | 1999-04-13 |
| SK70094A3 (en) | 1995-03-08 |
| EP0620853B1 (en) | 1996-03-06 |
| HU9400796D0 (en) | 1994-06-28 |
| JP2584409B2 (ja) | 1997-02-26 |
| RU2154671C1 (ru) | 2000-08-20 |
| TW313589B (cs) | 1997-08-21 |
| UA39861C2 (uk) | 2001-07-16 |
| FI113665B (fi) | 2004-05-31 |
| CZ140694A3 (en) | 1995-01-18 |
| HU217795B (hu) | 2000-04-28 |
| US5618716A (en) | 1997-04-08 |
| AU668359B2 (en) | 1996-05-02 |
| CN1073209A (zh) | 1993-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ285915B6 (cs) | Materiály a metody pro biosyntézu serinu a produktů odvozených od serinu | |
| JP3331472B2 (ja) | 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法 | |
| JP3783065B2 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| CA2214498C (en) | Process for producing l-amino acid through fermentation | |
| KR100275287B1 (ko) | O-아세틸세린,l-시스테인및l-시스테인 유도생성물의 제조방법 | |
| KR100526316B1 (ko) | 아스파테이트 및 글루타메이트계열 아미노산의 미생물적제조방법과 이 방법에 사용되는 작용제 | |
| KR101947959B1 (ko) | 변이형 호모세린 디하이드로게나제 및 이를 이용한 호모세린 또는 호모세린 유래 l-아미노산의 생산 방법 | |
| US5856148A (en) | Materials and methods for biosynthesis of serine and serine-related products | |
| US7582460B2 (en) | 3-phosphoglycerate dehydrogenase variants whose inhibition by L-serine is reduced, and genes encoding them | |
| US20130210097A1 (en) | Glycolic acid fermentative production with a modified microorganism | |
| DK2430152T3 (en) | A microorganism with increased L-lysine productivity and method for producing L-lysine using the same | |
| CZ100596A3 (en) | Dna fragment, vector and micro-organism containing genes for metabolic transformation of butyrobetaine/crotonobetaine-l-carnitine and process for preparing l-carnitine | |
| KR100319566B1 (ko) | 발효법에의한l-트레오닌의생산방법 | |
| MXPA97007921A (en) | Procedure for the production of l-aminoacidomediantefermentac |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20120817 |