HU186108B - Process for producing stabile s-adenosylmethionine - Google Patents

Process for producing stabile s-adenosylmethionine Download PDF

Info

Publication number
HU186108B
HU186108B HU822725A HU272582A HU186108B HU 186108 B HU186108 B HU 186108B HU 822725 A HU822725 A HU 822725A HU 272582 A HU272582 A HU 272582A HU 186108 B HU186108 B HU 186108B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
sam
acid
solution
salts
salt
Prior art date
Application number
HU822725A
Other languages
English (en)
Inventor
Frederico Gennari
Original Assignee
Bioresearch Spa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=11208488&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU186108(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bioresearch Spa filed Critical Bioresearch Spa
Publication of HU186108B publication Critical patent/HU186108B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis

Description

A találmány az S-adenozii-metionin (SAM) sók új csoportjára vonatkozik, amelyek még 45 °C hőmérsékleten is gyakorlatilag végtelen hosszú ideig stabilak.
Ismeretes, hogy az (I) általános képletű S-adenozil-metionin valamennyi élő szervezetben jelenlévő természetes anyag, amelyet a szervezeben egy specifikus enzim szintetizál.
A SAM számos, az emberi szervezet szempontjából alapvetően fontos metabolikus folyamatban vesz részt, ennéfogva hiánya a szervezet különböző működési zavarainak alapját képezi.
Bár a termék biológiai fontosságát már néhány évtizede ismerjük, vizsgálatának és ennélfogva gyógyszerként történő felhasználásának a lehetősége csak a legutóbbi években merült fel a 0 °C-ot meghaladó hőmérsékleten mutatott rendkívüli instabilitása miatt.
Ebből a szempontból csak 1975-ben sikerült a jelen találmány bejelentőjének egy olyan SAM sót készíteni, amely elég stabil volt 25 °C-on (3 893 999. sz. USA szabadalmi leírás), majd ezt követte néhány só, amelynek stabilitása 45 °C-on megfelelő volt (3 954726/1976. sz. és 4057686/1977. sz. USA szabadalmi leírások).
Pontosabban a 3 893 999/1975. sz. USA szabadalmi leírás SAM tri(para-toluolszulfonátot) a 3 954726/1976. sz. USA szabadalmi leírás a SAM diszulfát-di(para-toluol-szulfonátot) és a 4 057 686/ 1977. sz. USA szabadalmi leírás a SAM sók egy csoportját írja le, amelyek általában SAM· 4RSO3H vagy SAM 3RSO3H képlettel jelölhetők, amelyben RSO3H egy szulfonsav ekvivalens menynyiségét jelenti, amely részben kénsav ekvivalens mennyiségével helyettesíthető. Ezeket a sókat SAM-ból metán-, etán-, Ι-n-dodekán-, 1-n-oktadekán-, 2-klór-etán-, 2-bróm-etán-, 2-hidroxi-etán-, 3-hidroxi-propán-, d-, 1- vagy dl-10-kámfor-, d-, 1- vagy dl-3-bróm-kámfor-10-szulfonsavval cisztein-, benzol-, ρ-klór-benzol-, 2-mezitll-benzol-, 4-bifenil-, 1-naftalin-, 2-naftalin-szulfonsavval, 5-szulfonszalicilsavval, p-acetil-benzolszulfonsavval, 1,2-etán-diszulfonsawal, o-benzol-diszulfonsawal vagy kondroitikénsavval képezik vagy a felsorolt savak és kénsav kettős sóit állítják elő.
Az utóbbi találmány bejelentője közölte, hogy nem tudja megmagyarázni, hogy miért csak az általa az igénypontokban magadott sók stabilak. A korábbi módszerekkel előállított SAM-sók (monoklorid és diszulfát) 4 °C-on tartva legfeljebb korlátozott ideig stabilak. Arra sem tud magyarázatot adni, hogy a triparatoluolszulfonát miért csak 25 °C-ig stabil, ha a diszulfát-diparatoluolszulfonát 45 °C-ig.
Nem várt módon arra a felismerésre jutottunk, és a jelen találmány tárgyát az képezi, hogy stabil SAM sók képezhetők, ha SAM-ból 4—6 mólnyi erős, 2,5-nél kisebb pK-jú szervetlen savval sót képezünk.
Pontosabban, nem várt módon azt észleltük, hogy ha SAM-ból egy 2,5-nél kisebb pK-jú savval sót képezünk, maximális stabilitású só keletkezik, ha a só 5 mólnyi savat tartalmaz, 4 vagy 6 mól savat tartalmazó sók stabilitása is jó, de határozottan gyengébb.
Az 1—3 mól savat tartalmazó sók teljesen hasz2 nálhatatlanok terápiás szempontból, mivel ezeknél erős lebomlás tapasztalható.
Hangsúlyozni kell, hogy mivel a találmány szerinti új sók mind a humán gyógyászatban kerülnek alkalmazásra, még egész kis mennyiségű lebomlott termék jelenléte sem engedhető meg, nemcsak azért, mert ez a lebomlott anyag mennyiségének megfelelő hatáscsökkenést jelent, hanem különösen azért, mert a bomlás egyidejűleg olyan metabolitok képződését jelenti, amelyek gyengén toxikusnak bizonyultak és képesek megzavarni a biológiai folyamatokat.
Azt is észleltük, és ez a jelen találmány további tárgyát képezi, hogy az új SAM sók stabilitását közvetlenül befolyásolja a környezet polaritása, különösen a jelenlevő nedvességtartalom, ezért módszereket keresünk a nedvességtartalomnak közel nullára való csökkentésére.
A jelen találmány szerinti sók a (II) általános képletnek felelnek meg, ahol X egy 2,5-nél kisebb pK-jú erős szervetlen sav egyenértéknyi mennyisége, n pedig 4,5 vagy 6.
Ténylegesen azt találtuk, hogy X csupán a HCl, H2SO4 vagy H3PO4-nek megfelelő sav lehet, mivel a HNO3 és HCIO4 olyan savak, amelyek gyógyászatilag elfogadhatatlanok toxitásuk miatt, a HBr és HJ pedig nem használható, mert a SAM demetileződését okozzák.
A savaknak, amelyek az új sók elkészítéséhez használhatók a jelen találmány szerint, pK értékük az alábbi:
HCl:pK < 0,5
H2SO4:pK < 0,5 (1. lépés); pK= 1,92 (2. lépés) H3PO4:pK = 2,12 (1· lépés)
Pontosabban a jelen találmány tárgyát képező új a (II a), (II b) vagy (II c) általános képletek alá ahol X= Cl~, 1/2 (SÓT) vagy H2POTion.
Az új sók az embergyógyászatban számos területén nagyon hasznosnak bizonyultak, például májvédő anyagként, amint ez a továbbiakból jobban ki fog tűnni.
Ezek a következő lényeges lépéseket tartalmazó eljárással készülnek, amelyek mind elengedhetetlenek ahhoz, hogy egy abszolút állandó és reprodukálható gyógyszerészeti tisztaságú terméket kapjunk:
a) Egy nyers SAM-só tömény vizes oldatának készítése bármilyen ismert módszerrel;
b) az oldat tisztítása kromatográfiával, egy gyengén savas ioncserélő gyantával töltött oszlopon való átfolyatással;
c) a SAM eluálása a kívánt sav híg vizes oldatával;
d) az eluátum titrálása és a savmennyiség beállítása a jelenlevő SAM-mennyiség szigorúan stöchiometrikus arányának megfelelően;
e) az eluátum koncentrálása;
f) liofilizálás.
Az (a) lépésben készített vizes oldat nyilvánvalóan bármely oldható SAM-sót tartalmazhat, mivel az anion a következő lépésben az oszlopon való átbocsátáskor eltűnik és így az eljárás további részében nem zavar. Általában, a szokásos eljárásokkal a SAM-ot élesztőből extrahálva és koncentrálva SAM + iont és SO4— iont tartalmazó oldatot kapunk.
-2:36 108
Az összes esetekben az oldat pH-ja 6 és 7 közé van beállítva, előnyösen 6,5.
A kromatográfiás tisztítás lépése (b) előnyösen Amberlite IR50 vagy Amberlite CG50 alkalmazásával végezhető. 5
A e) lépés eluálását előnyösen a megfelelő sav 0,1 I n vizes oldatával végezzük.
Ha az eluátum titrálása (d-lépés) azt mutatja, hogy a jelenlevő sav ekvivalens mennyisége kisebb a szükségesnél (4, 5 vagy 6-nál), ahogy ez lenni szó- 10 kott, akkor a hiányzó mennyiségnek pontosan megfelelő savmennyiséget kereskedelmi minőségű koncentrált vizes oldat formájában adjuk hozzá.
Ha azonban kiderül, hogy fölös mennyiségű sav van jelen, ez kiküszöbölhető, ha az oldatot erősen 15 bázisos, OH- formájú ioncserélő gyantával kezeljük, például Amberlite IRA-401-eI.
Áz (e) lépésben az eluátumot optimális értékre bekoncentráljuk az utána következő liofilizálási eljáráshoz, vagyis egy 50—100 g/1 közötti értékre, 20 előnyösen 70 g/l-re.
A végső liofilizálást a szokásos módszerekkel végezve 100%-os tisztaságú, teljesen kristályos sót kapunk.
Ha a liofilizálást egy megfelelő inért anyag jelen- 25 létében végezzük, kevesebb visszamaradó nedvességet tartalmazó, ezért stabilabb terméket kapunk.
Még pontosabban azt találtuk, hogy ha a készített sót injektálható gyógyszer formájában való felhasználásra szánjuk, a liofilizálást mannit jelen- 30 létében kell végezni. Ha azonban a kapott sót orális tabletták készítésére használjuk, a liofilizálást porított kovasav jelenlétében kell elvégezni.
A következőkben néhány gyakorlati példát közlünk csupán szemléltetésül annak érdekében, hogy 35 az új termékeket könnyebben lehessen elkészíteni.
/. példa
110 1 etil-acetátot és 110 1 vizet adunk szobahő- 40 mérsékleten SAM-mal dúsított (6,88 g/kg) 900 kg élesztőhöz, Schlenk szerint (Enzymológia, 29, 283 (1965)).
percnyi élénk keverés után 5001 0,35 n kénsavat adunk hozzá, és a keverést további másfél órán 45 keresztül folytatjuk.
Az elegyet szűrjük és a maradékot vízzel mosva 4,40 g/1 SAM-ot tartalmazó 1400 1 oldat keletkezik, ami megfelel a kiindulóanyagban jelenlevő anyag 99,5%-ának. 5θ
Az oldathoz keverés közben 23 g pikrolonsavat adunk 250 1 metil-etil-ketonban.
Éjszakán át állni hagyva a csapadékot centrifugálassal elválasztjuk és vízzel mossuk.
A csapadékot szobahőmérsékleten, keverés közben feloldjuk 62 liter 1 n metanolos kénsavoldatban.
Az oldhatatlan rész kiszűrése után az oldathoz 500 liter acetont adunk.
Ha a csapadék teljesen leülepedett, a felülúszó oldatot dekantáljuk és az oldhatatlan maradékot kevés acetonnal mossuk,
A csapadékot feloldjuk 800 1 desztillált vízben, hozzáadunk 2 kg derítőszenet és az elegyet szűrjük.
Előkészítünk egy oszlopot 200 liter Amberlite IRC 50 + gyantával és óvatosan mossuk desztillált vízzel.
Az előzőekben kapott vizes oldathoz 4,8 kg jégecetet adunk keverés közben, majd 2 π NaOH-t amíg 6,5-es pH-t kapunk.
Az oldatot 400 1/óra sebességgel engedjük át a gyantaoszlopon és ezt a sebességet tartjuk az egész folyamat alatt.
Ezután 200 1 desztillált vizet, 1600 1 0,1 mól/l-es savat és további 200 1 desztillált vizet engedünk át egymás után.
A SAM-t 400 1 0,1 n kénsavval eluáljuk. A kapott eluátum kb. 4 kg SAM-et tartalmaz és vákuumban 60 literre pároljuk be.
Hozzáadunk 0,5 kg csontszenet, majd megszűrjük az elegyet. Az oldatot megtitráljuk.
Koncentrált kénsavat adunk az oldathoz, amíg 2,5:1 H2SO4/SAM mólarányt kapunk, majd liofilizáljuk az oldatot.
6,5 kg terméket kapunk, amelynek összetétele a következő: SAM’ 61%; H2SO4 37,5%; H2O 1,5%.
A só kristályos halmazállapotú és több, mint 20%-ban oldódik vízben színtelen oldat képződése közben, de a közönséges szerves oldószerekben oldhatatlan.
Az Anal. Biochem. 4, 16—28 (1971) szerint végzett vékonyrétegkromatográfia azt mutatja, hogy a termék szennyeződésektől mentes.
Az 1. táblázat tartalmazza az analitikai adatokat, amelyek megfelelnek a következő képletü vegyületnek:
C,5H22N6O5S- 2,5H2SO4 0,5H2O
I. táblázat
Só összegképlet N (%) számított talált számított S(%) talált S-adenozü-metionin (%) számított talált E 1%, (256nm) (6nH2 SO4)
SA.M-2H2SO4O.4H2 C15H26N6O13S3 ’ 0,4 H2O 13,98 14,00 15,97 16,01 66,2 66,3 242
SAM-2.5H2SO4O.5H2O Ci5H27NéOljS3,5'0,5 H2O 12,89 - 12,66 17,18 17,15 61,0 60,9 223
SAM' 3H2SO4-0,7 H2O Ci5H2eN6Oi7S4-0,7 H2O 11,91 11,89 18,16 18,05 56,5 56,4 207
SAM -4HC10.4 H2O C15H26N6O5SCI4'0,4 H2O 15,25 15,55 5,81 5,93 72,2 72,4 264
SAM -5HC10.5 H2O C15H27N6O5SCI5 0,5 H2O 14,26 14,25 5,43 5,44 67,6 67,6 247
SAM -6HC10.7 H2O CisHasNsOjSClfc O,? H2O 13,33 13,15 5,08 5,03 63,2 63,1 231
SAM 4H3PO4 0,4 H2O C13H34N6O21SP4 0,4 H2O 10,53 10,54 4,01 4,03 50,7 49,9 176
SAM · 5H3PO4 0,5 H2O C15H37N6O25SP5 0,5 H2O 9,35 9,33 3,56 3,55 44,4 44,4 156
SAM 6H3PO4 0,7 H2O C15H40N6O29SP6 0,7 H2O 8,4 8,38 3,2 3,2 39,9 39,9 140
-3186108
Az új vegyületet nikotinamidnak és guanidiecetsavnak SAM-al való enzimetikus metilezésén alapuló enzimatikus módszerrel is azonosítottuk [G. L. Cantoni, J. Bioi. Chem, 189, 745 (1951); G. De La Hóba B. A. Jameison, S. H. Műddé, Η. H. Richards, J. Am. Chem. Soc, 81, 3975 (1959)].
Az eljárást a fenti módon a megismételve, de liofilizálás előtt annyi kénsavat adva hozzá, hogy a mólarány 3:1 legyen SAM-ra vonatkoztatva, a SAM 3H2SO4 0,7H2O sót kapjuk, amelynek analitikai adatai az 1. táblázatban láthatók.
Hasonlóképpen, a HjSQ»/SAM mólarányt liofilizálás előtt 2:l-re csökkentve a SAM 2H2SO4 0,4H2O sót kapjuk, amelynek analitikai adatai az 1, táblázatban vannak feltüntetve.
2. példa
1001 izobutil-alkoholban oldott 11,5 kg pikrolonsavat élesztősejtek lízisével kapott 700 1 oldathoz adjuk, ugyanazt a nyersanyagot és módszert használva, mint az I. példában.
Miután éjszakán át állni hagytuk az elegyet, a keletkezett csapadékot centrifugálással elválasztjuk.
A csapadékot szobahőmérsékleten keverés közben feloldjuk 31 1 1 n etanolos kénsavoldatban.
A kevés oldhatatlan anyag kiszűrése után az oldathoz 250 1 dietil-étert adunk.
Állni hagyjuk, majd az elegyet szűrjük és a szilárd anyagot kevés éterrel mossuk. Vákuumban szárítjuk.
A szilárd anyagot 400 1 vízben oldjuk, hozzáadunk 1 kg derítőszenet és az elegyet szűrjük.
Jégecetet adunk hozzá, a pH-t 6,5-re állítjuk be, és az oldatot egy Amberlite IRC 50-el töltött oszlopon engedjük át, az 1. példában leírtak szerint.
Az oszlopból a SAM-t 2001 0,1 n sósavval eluáljuk.
Vákuumban 30 liternyi térfogatra pároljuk, majd hozzáadunk 0,25 kg aktív szenet és az elegyet szűrjük. Az oldatot megtitráljuk és annyi tömény sósavat adunk hozzá, hogy a HCI/SAM mólarány 5:1 legyen. Az oldatot liofilizáljuk.
2,8 kg terméket kapunk az alábbi összetétellel:
SAM+ 67,6%; HC1 30,9%; H2O 1,5%.
A só kristályos halmazállapotú és több mint 20%-ban oldódik vízben, színtelen oldat keletkezése közben. A közönséges szerves oldószerekben rosszul oldódik.
Az 1. példa szerinti vékonyrétegkromatográfia azt mutatja, hogy a termék szennyeződéstől mentes.
Az 1. táblázatban feltüntetett elemzési adatok megfelelnek az alábbi képietű terméknek:
C15H22N6O5S- 5HC1
Az új vegyületet is azonosítottuk az 1. példában ismertetett enzimatikus módszerrel.
Az 1. példában megadott módon eljárva különböző sóképzési fokú sók készíthetők, különösen az alábbiak:
SAM-4HCL0,4 H2O SAM -6HC10,7 H2O amelyeknek analitikai adatai az 1. táblázatban láthatók.
3. példa
Az. 1. példában leírt eljárást azonos módon megismételjük, de 4,75 kg pirogénmentes mannitot adunk az oldathoz liofilizálás előtt. Ezután az oldatot a szokásos módon liofilizáljuk.
Liofilizálás-elősegítőként mannit hozzáadása 0,1% maradék nedvességtartalmú termék készítését teszi lehetővé.
Az így kapott termék alkalmas injektálható gyógyszerré való feldolgozásra.
4. példa
Az 1. példában leírt eljárást követjük. Az oldathoz liofilizálás előtt 4 kg Aerosilt (poralakú kovasav) adunk és a keletkezett kolloid oldatot liofilizáljuk.
Liofilizálás-elősegítőként Aerosil hozzáadása 0,2% nedvességtartalmú termék készítését teszi lehetővé.
Az így kapott termék alkalmas orális adagolású tabiettáká való feldolgozásra.
5. példa
A 2. példában leírt eljárást követjük, de a SAM-t 0,1 mól/l-es foszforsav oldattal eluáljuk 0,1 n sósav helyett.
Liofilizálás előtt annyi tömény foszforsavat kell hozzáadni, hogy 5:1-es H3PO4/SAM mólarányt kapjunk.
4,26 kg terméket kapunk, az alábbi összetétellel:
SAM+ 44,4%; H3PO4 54,6%; H2o 1%.
Az analitikai adatokat az 1. táblázatban tüntetjük fel, és ezek az alábbi képietű terméknek felelnek meg:
C,5H22N6O5S · 5H3PO4 · 0,5 H2O
Az 1, példa szerint vékonyrétegkromatográfia azt mutatja, hogy a vegyület szennyeződésmentes.
Az új vegyületet az 1. példában leírt enzimatikus módszerrel is azonosítottuk.
Az 1. példábal leírtak szerint eljárva különböző fokú sóképzésű sók készíthetők, különösen az alábbiak:
SAM-4H3PO4 0,4 H2O SAM 6H3PO4-0,7 HiO amelyeknek analitikai adatai az 1. táblázatban láthatók.
Az ismertetett módon készült sókon stabilitási vizsgálatokat végeztünk a terméket hőszabályozós kályhában 54 °C-on tartva, és a maradék sómennyiséget pontos időközökben meghatároztuk. A vizsgálatokat az ismert módszerrel (2963 533. sz. USA szabadalmi leírás szerint) készített SAM-n HC1 sókkal összehasonlítva végeztük, ahol n = 1,2 és 3. és a szintén ismert módszerrel (1 803 978. sz. NSZK szabadalmi leírás szerint) készített SAM x n H2SO4 sókkal, ahol n = 0,5 1 és 1,5.
186 108
A következő táblázatokaz elbomlott sók százalékarányát mutatják a megadott időpontokban:
2. táblázat
S-adenozil-metionin · HC1
n maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 °C-on. ha eltelt 360 nap
120 nap 180 nap 240 nap
1 0,2% 100% 100% 100% 100% 100%
2 0,5% 80% 100% 100% 100% 100%
3 0.8% 30% 60% 80% 100% 100%
4 I % 5% 10% 14% 17% 20%
5 ’ 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5%
6 2 % 5% 10% 14% 17% 20%
A maradék SAM százalékarányát a feltüntetett időpontokban egy új, a későbbiekben ismertetett módszerrel határozzuk meg, amely a méréseknél maximális pontosságot biztosít, mivel lehetővé teszi, hogy a SAM-t teljesen elválasszuk az összes lehetséges bomlástermékektől.
Ebből a szempontból azt találtuk, hogy a mostanáig használt módszerrel, amelyben egy Dowex 50 ioncserélő gyantával töltött analitikai oszlopot használnak [Schlenk és De Palma: J. Bioi. Chem. 229 (1957)], a SAM elválasztása bizonyos bomlástermékektől, különösen metil-tio-adenozintól, nem tökéletes és ezért hibákat okozott a SAM stabilitásának kiértékelésében, amely jobbnak tűnt, mint amilyen valójában.
A SAM meghatározásának jelenlegi módszere HPLC alkalmazásán alapul.
Alkalmazott analitikai körülmények:
Oszlop: Partisii 10 SCX, 2,5 x 250 mm
Eluálószer: 0,1 mól/1 pH 4-es ammónium-forminát, 20% metanol tartalommal a HPLC-hez
Áramlás: 1 ml/perc
SAM-retenciós idő: kb. 400 másodperc
A 2,3,4 és 5. táblázatok adataiból kitűnik, hogy
3. táblázat
SAM · n H2SO4
n maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 ’C-on, ha eltelt 360 nap
120 nap 180 nap 240 nap
0,5 0.2% 100% 100% 100% 100% 100%
1 0,5% 80% 100% 100% 100% 100%
1,5 0,8% 30% 60% 80% 100% 100%
2 1 % 5% 10% 14% 17% 20%
3,5 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5%
3 2 % 5% 10% 14% 17% 20%
SAM’ 1,5 H2SO4 n HC1 4. táblázat
n maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 120 nap °C-on, ha eltelt 180 240 nap nap 360 nap
1 1 % 5% 10% 14% 17% 20%
2 1,5% — 1,5% 3% 4,5% 5%
3 2 % 5% 10% 14% 17% 20%
3. táblázat
SAM · 2HC1 H2SO4
Π maradék nedvesség 60 nap Bomlás 45 120 nap ”C-on, 180 nap ha eltelt 240 nap 360 nap
0,5 0,8% 30% 60% 80% 100% 100%
1 1 % 5% 10% 14% 17% 20%
1,5 1,5% _ 1,5% 3% 4,5% 5%
2 2 % 5% 10% 14% 17% 20%
a SAM-sók stabilitása akkor maximális, ha 5 savekvivalenst tartalmaznak. A 4 és 6 ekvivalensnyit tartalmazó sók stabilitása jó, míg az alacsonyabb savekvivalensszámú sóknak nincs gyakorlati hasznuk instabilitásuk miatt.
Az is kitűnik, hogy a stabilitás azonos jellegű, függetlenül az alkalmazott savtól, feltéve, hogy a sav pK<2,5.
4—6 savekvivalenst tartalmazó sókat pk>2,5 savakkal nem sikerült előállítani.
Stabilitási vizsgálatokat is végeztünk ugyanazzal a módszerrel a 3. és 4. példa szerint, liofilizációelősegítő anyag jelenlétében készített sókkal.
E meghatározások eredménye a következő 6. és
7. táblázatban látható. A nedvességtartalom nagyfokú csökkenése, amikor a liofilizálást egy elősegítő anyag jelenlétében végezzük, jól kitűnik, a sók ebből eredő össz-stabilitásával együtt, amely ezáltal elérhető.
6. táblázat
S-adenozil-metionin'5 HC1
Maradék nedvesség Lebomlás 45 ’C-on 360 nap után
Segédanyag nélkül liofilizálva Mannittal liofilizálva 1,5% 5%
(100 g SAM* + 120 g mannit Aerosil-lal liofilizálva 0,1%
1,100 g SAM* +100g Aerosil 0,2%
7. táblázat
S-adenozil-metionin'2,5 H2SO4
Maradék nedvesség Lebomlás 45 ’C-on 360 nap után
Segédanyag nélkül liofilizálva Mannittal liofilizálva 1,5% 5%
(100 g SAM* +120 g mannit Aerosil-lal liofilizálva 0,1% -
(100 g SAM* + 100 g Aerosil 0,2% —
A SAM-5 HC1 és SAM-2,5 H2SO4 sókat széleskörű farmakológiai screenelésnek vetettük alá, és minden esetben rendkívül érdekes aktivitást és toxicitási tulajdonságokat mutattak, amelyek függetlenek a SAM-hoz kötött aniontól. Megállapítottuk, hogy az új sók aktivitása lényegében a szervezetben felszabaduló SAM-ionnak azon képességé5
-5186108 tői függ, hogy metilcsoport donorként hat, mint számos transzmetiláz enzim természetes szubsztrátuma, amelyek a lipid, proteid és glukoproteid metabolizmus alapreakcióit katalizálják.
Az új sók fontossága tehát lényegében abban áll, hogy az S-adenozil-metionint abszolút stabillá teszik 45 °C-ig terjedő hőmérsékleteken, ezáltal lehetővé téve, hogy transzmetiláló aktivitását az emberi szervezetben 100%-ig kihasználják, olyan toxikus lebomlási termékek képződésének kockázata nélkül, amelyek negatívan befolyásolnák a SAM+ által aktivált biológiai folyamatokat.
Toxicitás
Meghatároztuk az akut toxicitást egérben, és a következő értékeket kaptuk mindkét sóra:
LDjo orálisan alkalmazva> 3 g/kg LDso intravénásán >1,1 g/kg
Tűrési és krónikus toxicitási vizsgálatokat végeztünk Wistar és Sprague-Dowley tenyésztésű patkányokon 20 mg/kg-ot adagolva a termékből naponta, 12 hónapon át. A kezelés végén különböző szervek és rendszerek nem mutattak patalógiás elváltozást.
Teratogén vizsgálatokat végeztünk nyulakon. A maximális terápiás adagnál tízszerte nagyobb sómennyiség adagolásánál sem tapasztaltunk teratigén hatást és az embrió vagy a magzat deformálódását.
200 mg/kg-ig terjedő intravénásán adott adagok sem okoznak pirogén tüneteket nyúlban.
Vénásan adagolva 40 mg/kg nyúlban és patkányban nem okoz változást a carotis-vérnyomásban, a szív és a légzés ritmusában, vagy az EKGban.
Intramuszkuláris injekció helyi tűrőképessége 30—60 napon át ismételt adagolásnál és a nyúl fülének külső szélén levő vénába adott intravénás injekciónál kitűnőnek bizonyult.
Farmakológia
Patkányokon végzett teljes kísérletsorozat azt mutatja, hogy az új sók mind lipid- és proteindús étrend által Handler szerint előidézett zsírmájban, mind akut alkoholmérgezés és egyéb toxikus anyagok által okozott zsírmájban jelentékeny védő és oldó hatást fejtenek ki, már 10 mg/kg SAM+ adagolásánál.
Patkányokon kísérleti úton pl. Triton S-sel előidézett hiperlipémiánál az új sók feltűnő hipolipémiás hatást mutattak, amely az alkalmazott adaghoz, vagyis 10 mg/kg-hoz viszonyítva (újra SAM+-ban kifejezve), sokkal erősebb, mint egyéb hipolipémiás aktivitású szernél.
Koleszterinben és fruktózban dús étrenddel a teroszklerotikussá tett csirkében az új termék parenterálisan adva 10 mg/kg-os adagokban csökkentette a vér koleszterinszintjét és előnyösen befolyásolta a kontrollcsoportban a mellkasi és hasi verőérrel és az agyalapi hajszálerekkel kapcsolatosan tapasztalt bántalmakat.
A foszfoiipid-metabolizmussal kapcsolatban kísérletileg azt találtuk, hogy a patkányok májszövetében megnőtt a foszfatidil-kolin mennyisége, változatlan májzstrosodás mellett. A foszfatidil-kolin mennyiség kifejezett növekedését megállapítottuk a vérben levő alfa-lipoproteinek rovására a béta/alfa lipoprotein-arány kísérleti változásával is.
Mindezek a vizsgálatok tisztán mutatják az új sók gyógyító hatására a lipid-anyagcsere változásaiban.
Egy további vizsgálatsorozat patkányokon kimutatta, hogy 1 mg/kg-os adagok a májban és az izomzatban felszaporítják a glikolén-tartalékot, ami kimutatható hisztokémiai módszerekkel és kvantitatív meghatározásokkal egyaránt. Alloxánnal előidézett kísérleti diabéteszben az inzulinmennyiség, amely a normál vércukorértékre való visszatéréshez szükséges, lényegesen csökkent 0,5 mg/kg SAM+-nak megfelelő adagok hatására.
Ez a vizsgálatsorozat bizonyítja a találmány szerinti új vegyületeknek a cukor-metabolizmusra kifejtett, határozottan pozitív hatását.
Végül, kísérletileg előidézett hipodiszproteinémiát kezeltünk 10 mg/kg-os SAM adagokkal. Azt találtuk, hogy az említett termék visszaállítja a proteinémia-összértéket a normálisra azáltal, hogy lényegesen növeli az albumin-szintet és ezzel kifejezett protein-anabolikus hatást mutat.
Ez és egyéb hasonló vizsgálatok bizonyítják az új termékek gyógyító hatását a protein-metabolizmus zavarainál.
Összefoglalva, az előbbiekben említett és sok más farmakológiai vizsgálat alapján, amelyek lehetővé tették, hogy az új sók az emberi szervezetre gyakorolt hatásait sokirányúan kipróbáljuk, az új termékek aktivitása klinikailag megalapozott a májgyógyászatban akut és krónikus májmérgezésnél, a neurológiában antidepresszánsként, és az oszteológiában reumatoid artritisz esetén.
Az embergyógyászat számos egyéb területén az aktivitás vizsgálata folyamatban van.
Az új sók adagolhatok orálisan, vagy intramuszkuláris vagy intravénás injekciók útján.
Egyéb lehetséges adagolásmódok: kúpok, szemcseppek vagy aeroszól formájában helyileg alkalmazva.

Claims (7)

1. Eljárás a (II) általános képletű S-adenozil-metionin (SAM) sók előállítására, ahol X egy 2,5nél alacsonyabb pK-jú farmakológiailag elfogadható sót képző erős szervetlen sav — a hidrogén-jodid és hidrogén-bromid kivételével — ekvivalens mennyisége, n pedig 4, 5 vagy 6, azzal jellemezve, hogy valamely SAM só vizes oldatát gyen-_ gén savas ioncserélő gyantával töltött oszlopon átengedve megtisztítjuk, a SAM-t kívánt HX sav vizes oldatával, előnyösen 0,1 n oldatával eluáljuk, az' eluátumhoz hozzáadjuk a kívánt sónak megfelelő, pontosan sztöchiometrikus mennyiségű savat, vagy adott esetben eltávolítjuk a savfölösleget, majd az oldatot koncentráljuk, és a sót liofilizáljuk.
-6186108
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a vizes SAM-oldat pH-ját 6—7 közé, előnyösen pH 6,5-re állítjuk be.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy eluálószerként 0,1 π HX savat alkal- 5 mázunk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sztöchiometrikus mennyiséghez hiányzó HX sav mennyiségét kereskedelmi minőségű koncentrált vizes oldat formájában hozzáadjuk 10 az eluátumhoz.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sztchiometrikus mennyiséghez képest fölös mennyiségű HX savat erősen bázisos ioncserélő gyantával távolítjuk el.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eluátumot 50 és 100 g/1 SAM-tartalon; közötti koncentrációjúra sűrítjük be.
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a liofilizálást közömbös anyag, előnyösen mannit vagy porított kovasav jelenlétében végezzük.
HU822725A 1981-08-24 1982-08-24 Process for producing stabile s-adenosylmethionine HU186108B (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT23603/81A IT1137892B (it) 1981-08-24 1981-08-24 Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU186108B true HU186108B (en) 1985-06-28

Family

ID=11208488

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU822725A HU186108B (en) 1981-08-24 1982-08-24 Process for producing stabile s-adenosylmethionine

Country Status (23)

Country Link
US (1) US4543408A (hu)
EP (1) EP0073376B2 (hu)
JP (1) JPS5843995A (hu)
AR (1) AR231453A1 (hu)
AT (1) ATE16394T1 (hu)
AU (1) AU552466B2 (hu)
CA (1) CA1201434A (hu)
CZ (1) CZ279834B6 (hu)
DD (1) DD210455A1 (hu)
DE (1) DE3267295D1 (hu)
DK (1) DK149861C (hu)
ES (1) ES8306371A1 (hu)
FI (1) FI72525C (hu)
GR (1) GR76862B (hu)
HU (1) HU186108B (hu)
IL (1) IL66584A0 (hu)
IT (1) IT1137892B (hu)
NO (1) NO153370C (hu)
NZ (1) NZ201679A (hu)
PL (1) PL137816B1 (hu)
PT (1) PT75454B (hu)
YU (1) YU42793B (hu)
ZA (1) ZA825971B (hu)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1169774B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Composizioni terapeutiche iniettabili contenenti sali stabili della s-adenosil-l-metionina
IT1169773B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina
IT1169772B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Composizioni terapeutiche per uso orale contenenti sali stabili della s-adenosil-l-metionina
JPS6279792A (ja) * 1985-10-04 1987-04-13 Showa Sangyo Kk 注射用原料結晶ぶどう糖の製造方法
FR2623396B1 (fr) * 1987-11-25 1990-03-30 Sanofi Sa Utilisation de l'ademetionine contre le vieillissement de la peau
US6492349B1 (en) 1993-03-31 2002-12-10 Nutramax Laboratories, Inc. Aminosugar and glycosaminoglycan composition for the treatment and repair of connective tissue
US6255295B1 (en) 1996-12-23 2001-07-03 Nutramax Laboratories, Inc. Aminosugar, glycosaminoglycan or glycosaminoglycan-like compounds, and s-adenosylmethionine composition for the protection, treatment, repair, and reduction of inflammation of connective tissue
IT1317920B1 (it) * 2000-10-20 2003-07-15 Univ Roma S-adenosilmetionina e suoi derivati per il trattamento e laprevenzione della malattia di alzheimer.
US6649753B2 (en) 2001-06-07 2003-11-18 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation
US20050272687A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-l-methionine
US20090012036A1 (en) * 2005-05-24 2009-01-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-L-methionine
EP2017331B1 (en) 2006-05-16 2015-04-01 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Method of producing s-adenosyl-l-methionine-containing dry yeast having excellent storage stability
KR101525263B1 (ko) 2007-01-25 2015-06-10 미츠비시 가스 가가쿠 가부시키가이샤 보존 안정성이 뛰어난 ｓ-아데노실-ｌ-메티오닌 함유 건조 효모의 제조 방법, 그 제조물 및 그 성형된 조성물
ITMI20071374A1 (it) * 2007-07-10 2009-01-11 Gnosis Spa Sali stabili di s-adenosilmetionina e processo per il loro ottenimento.
US20100004191A1 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Rolland F Hebert Compositions of S-adenosyl-L-methionine.
CN101481660B (zh) * 2009-01-20 2011-02-09 中国药科大学 一株高产腺苷蛋氨酸的菌种
US9534010B2 (en) 2013-01-16 2017-01-03 Hebert Sam-E Llc Stable indole-3-propionate salts of S-adenosyl-L-methionine

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2969353A (en) * 1957-02-06 1961-01-24 Merck & Co Inc Process for the preparation of "active methionine" and products obtained thereby
IE37913B1 (en) * 1972-08-02 1977-11-09 Bioresearch Sas Salt of s-adenosyl-l-methionine
JPS5320998B2 (hu) * 1974-06-13 1978-06-29
FR2275220A1 (fr) * 1974-06-21 1976-01-16 Merieux Inst Procede d'obtention de sels organiques de la s.adenosyl-l-methionine. nouveaux sels organiques obtenus des medicaments comprenant un ou plusieurs nouveaux sels obtenus
JPS516989A (en) * 1974-07-05 1976-01-20 Yamasa Shoyu Kk Ss adenoshiru ll echioninno seiseiho
AR221676A1 (es) * 1974-07-12 1981-03-13 Bioresearch Sas Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico
GB2001976B (en) * 1977-08-03 1982-03-10 Yamasa Shoyu Kk S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof
JPS5619879A (en) * 1979-07-25 1981-02-24 Showa Electric Wire & Cable Co Method of molding cable connector
GB2064523B (en) * 1979-12-04 1983-06-29 Kanegafuchi Chemical Ind Stable composition of s-adenosyl-l-methionine
JPS57192399A (en) * 1981-05-18 1982-11-26 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Composition containing s-adenosyl-l-methionine and its preparation

Also Published As

Publication number Publication date
AU552466B2 (en) 1986-06-05
IL66584A0 (en) 1982-12-31
ZA825971B (en) 1983-06-29
JPH0149274B2 (hu) 1989-10-24
NO153370B (no) 1985-11-25
PL137816B1 (en) 1986-07-31
EP0073376B1 (en) 1985-11-06
NO153370C (no) 1986-03-05
DD210455A1 (de) 1984-06-13
EP0073376B2 (en) 1989-07-26
CZ614282A3 (en) 1995-04-12
IT8123603A0 (it) 1981-08-24
FI822944L (fi) 1983-02-25
DK377282A (da) 1983-02-25
AU8740582A (en) 1983-03-03
NO822863L (no) 1983-02-25
GR76862B (hu) 1984-09-04
ES515191A0 (es) 1983-06-01
FI72525C (fi) 1987-06-08
CA1201434A (en) 1986-03-04
YU190882A (en) 1985-04-30
AR231453A1 (es) 1984-11-30
DE3267295D1 (en) 1985-12-12
ES8306371A1 (es) 1983-06-01
JPS5843995A (ja) 1983-03-14
DK149861B (da) 1986-10-13
PL238024A1 (en) 1983-05-09
FI72525B (fi) 1987-02-27
ATE16394T1 (de) 1985-11-15
CZ279834B6 (cs) 1995-07-12
PT75454A (en) 1982-09-01
EP0073376A1 (en) 1983-03-09
IT1137892B (it) 1986-09-10
YU42793B (en) 1988-12-31
FI822944A0 (fi) 1982-08-24
PT75454B (en) 1984-11-19
DK149861C (da) 1987-03-02
US4543408A (en) 1985-09-24
NZ201679A (en) 1986-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU186108B (en) Process for producing stabile s-adenosylmethionine
EP0072980B1 (en) Stable s-adenosylmethionine salts, the process for their preparation and therapeutic compositions which contain them as active principle
US3893999A (en) Salt of S-adenosil-L-methionine and process of preparation
US3954726A (en) Double salts of S-adenosil-L-methionine
US4057686A (en) Sulphonic acid salts of S-adenosilmethionine
IE48336B1 (en) Ornithine and arginine salts of branched chain keto acids
BRPI9810436B1 (pt) processo para a produção em larga escala de di (5&#39;-tetrafosfato de uridina) e sais do mesmo
SI8510811A8 (en) PROCESS FOR PREPARATION OF STABILE SULPHO-ADENOSYL-L-METHIONINIC (SAMe) SALTS
JPH0149276B2 (hu)
US4420432A (en) Crystalline salt of basic L-amino acid with L-malic acid and process for the preparation thereof
CN111635309B (zh) 一种新型解热镇痛药物及其制备方法和用途
TW593331B (en) Method for large-scale production of di(uridine 5&#39;)-tetraphosphate and salts thereof
US4028183A (en) Process of preparing double salts of S-adenosyl-L-methionine
JPH056557B2 (hu)
SU1433416A3 (ru) Способ получени S-аденозилметиониновых (САМ) солей
US4673534A (en) Carnitine salts particularly suitable for oral use
US20090012036A1 (en) Stable S-adenosyl-L-methionine
JPH0546360B2 (hu)
PL95666B1 (pl) Sposob wytwarzania nowych podwojnych soli s-adenozylo-alfa-metioniny
NO139523B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av doble salter av s-adenosil-l-methionin
JPS6256490A (ja) 高純度メチルコバラミンの製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: BIORESEARCH S.P.A., IT