CZ279834B6 - Stálé soli S-adenosylmethioninu a způsob jejich výroby - Google Patents

Stálé soli S-adenosylmethioninu a způsob jejich výroby Download PDF

Info

Publication number
CZ279834B6
CZ279834B6 CS826142A CS614282A CZ279834B6 CZ 279834 B6 CZ279834 B6 CZ 279834B6 CS 826142 A CS826142 A CS 826142A CS 614282 A CS614282 A CS 614282A CZ 279834 B6 CZ279834 B6 CZ 279834B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
adenosylmethionine
acid
salts
sam
solution
Prior art date
Application number
CS826142A
Other languages
English (en)
Inventor
Federico Gennari
Original Assignee
Bioresearch S.P.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=11208488&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ279834(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Bioresearch S.P.A. filed Critical Bioresearch S.P.A.
Publication of CZ614282A3 publication Critical patent/CZ614282A3/cs
Publication of CZ279834B6 publication Critical patent/CZ279834B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/26—Psychostimulants, e.g. nicotine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Řešení se týká nových stálých solí adenosylmethioninu, které jsou stálé i při vyšších teplotách po prakticky neomezenou dobu. Soli odpovídají obecnému vzorci I, v němž X znamená zbytek kyseliny chlorovodíkové, sírové nebo fosforečné a n znamená celé číslo 5 nebo 6. Řešení se rovněž týká způsobu výroby uvedených solí, které je možno použít zejména k ochraně jaterní tkáně u akutních i chronických intoxinací jater, při změnách metabolismu lipidů, poruchách metabolismu bílkovin a u rheumatické arthritidy. ŕ

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nové skupiny solí S-adenosylmethioninu SAM, které jsou vysoce stabilní při zvýšených teplotách, a to po prakticky nedefinovatelnou dobu.
Dosavadní stav techniky
Je známo, že S-adenosylmethionin je přírodním produktem, přítomným ve všech živých organismech, ve kterých je aktivně syntetizován specifickým enzymem. S-adenosylmethionin má strukturu vzorce
S-adenosylmethionin se zúčastňuje celé řady metabolických procesů, které mají pro lidský organismus základní důležitost, takže nedostatek uvedené látky je základem chybné funkce celé řady orgánů.
I když biologická důležitost uvedeného produktu je známa již několik desítek let, je možnost jeho zkoušek a jeho použití k léčebným účelům možné až v posledních letech vzhledem k velké •nestabilitě uvedené látky při teplotách, převyšujících 0 °C.
Teprve v roce 1975 připravila firma Bioresearch soli SAM, které mají dostatečnou stálost; při teplotě 25 “C (US patentový spis č. 3 893 999), a pak také hěkteré soli, které mají dostatečnou stálost při teplotě 45 °C'·' [US patentový spis č. 3 954 726 (1976) a US patentový spis č. 4; 057 686 (1977)].
Přesněji uvedeno, popisuj^ US patentový spis č. 3 893 999 (1975) tri-p-toluensulfonát SAM, US patentový spis č. 3 954 726 (1976) popisuje disulfát-di-p-jtoluensulfonát SAM a US patentový spis č. 4 057 686 (1977) popisuje skupinu solí, kterou je možno uvést jako SAM.4RSO3H, nebo jako SAM.3RSO3H, kde RSO3H udává ekvivalent sulfonové kyseliny, · který může být zčásti nahrazen ekvivalenty kyseliny sírové.
Ve výše uvedených patentových spisech se uvádí, že není možné vysvětlit důvod, proč pouze určité soli, v těchto spisech
-ICZ 279834 B6 obsažené, jsou stálé. V případě, že byly připraveny některé další soli (jmenovitě monohydrochlorid nebo sulfát), měly tyto soli omezenou časovou stálost při teplotě 4 °C. Nelze ani vysvětlit příčinu, proč tri-p-toluensulfonát je stabilní pouze do teploty 25 °C, kdežto disulfát-di-p-toluensulfonát je stabilní až do teploty 45 °C.
Nyní bylo zcela neočekávaně zjištěno, že stálé soli SAM je možno připravit tak, že se připraví sůl SAM se 4 až 6 moly silné anorganické kyseliny s pH menším než 2,5.
Při ještě přesnějším zkoumání se zjistilo, že v případě solí SAM s kyselinou, jejíž pH je menší než 2,5, mají maximální stabilitu soli, obsahující 5 molů kyseliny. Soli, které obsahují 4 nebo 6 molů kyseliny, mají stále ještě dobrou stálost, tato stálost je však zřetelně nižší.
Soli, obsahující 1 až 3 moly kyseliny jsou absolutně nepřijatelné pro léčebné použití vzhledem k tomu, že u nich dochází ke značnému rozkladu.
Je nutno použitelné v zdůraznit, že vzhledem k tomu, že lidském lékařství, je přítomnost degradačního produktu k odpovídající ztrátě vytvářej i schopnost metabolity, interferovat nepřijatelná, a to účinnosti, ale také které jsou mírně nové soli jsou malého množství proto, že vede , že se a které mají i nejen zejména proto toxické s biologickými pochody.
Bylo rovněž zjištěno, že stabilita nových solí SAM je přímo ovlivněna polaritou prostředí, zejména množstvím přítomné vlhkosti a že by tedy vlhkost měla mít hodnotu blízkou nule.
Z kyselin, které mají pH nižší než 2,5, je ve skutečnosti možno využít jen některé kyseliny, které tento požadavek splňují vzhledem k tomu, že kyselina dusičná a kyselina chloristá jsou vzhledem ke své toxicitě k léčebným účelům nepoužitelné a kyselinu bromovodíkovou a jodovodíkovou rovněž není možno použít vzhledem k tomu, že způsobují demetylaci SAM.
.Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří nové stálé soli S-adenosylmethioninu SAM obecného vzorce I
-2CZ 279834 B6 kde
X znamená zbytek kyseliny chlorovodíkové, sírové nebo fosforečné a n znamená celé číslo 5 nebo 6.
Podstatu vynálezu tvoří rovněž způsob výroby uvedených solí, který spočívá v tom, že se koncentrovaný roztok surové soli S-adenosylmethioninu čistí na koloně slabě kyselé iontoměničové pryskyřice, S-adenosylmethionin, se eluuje zředěným vodným roztokem příslušné kyseliny HX, kde X má uvedený význam, k eluátu se přidá množství kyseliny, nutné k dosažení stechiometrického množství, odpovídajícího požadované soli, roztok se zahustí, a vysoce čistá sůl se izoluje lyofilizací.
Ve skutečnosti bylo nalezeno, že X může být ekvivalent HC1, H2SO4 nebo H3PO4, nebot HNO3 a HC1O4 jsou kyseliny, které jsou; vzhledem ke své toxicitě terapeuticky nepoužitelné a HBr a HJ nelze použít, neboť způsobují demetylaci SAM.
Kyseliny, které lze použít pro přípravu nových solí podle vynálezu, mají následující hodnoty pH:
HC1: pH < 0,5
H2SO4: pH < 0,5 (1. stupeň); pH = 1,92 (2. stupeň)
H3PO4: pH = 2,12 (1. stupeň)
Přesněji, nové soli podle předloženého vynálezu tvoří produkty následujících skupin:
1)
CHCH-CH~CH I I OH OH
4X
-3CZ 279834 B6
2)
3)
COO
6X kde X je Cl”, 1/2(SO4~”), nebo H2PO4”.
Nové soli jsou velmi dobře použitelné v řadě oborů lidské terapie, například při obraně jater, jak bude uvedeno níže.
Sloučeniny podle vynálezu se připravují postupem, sestávájí-cím z následujících základních stupňů, které jsou rozhodující pro získání produktu absolutně konstantní a reprodukovatelné farmaceutické čistoty.
a) Koncentrovaný vodný roztok surové SAM soli se připraví jakoukoli známou metodou.
b) Roztok se čistí chromatografií na koloně slabě kyselé iontoměničové pryskyřice.
c) Zředěným vodným roztokem požadované kyseliny se eluuje SAM.
d) Titrací eluátu a úpravou množství kyseliny se připraví přesný stechiometrický poměr kyseliny k SAM.
e) Eluát se zahustí.
f) Provede se lyofilizace.
Vodný roztok, připravený ve stupni a), může obsahovat jakoukoli rozpustnou SAM sůl, neboť se anion eliminuje v následujícím stupni na koloně a tudíž neovlivní zbytek postupu. Obecné při
-4CZ 279834 B6 normálních postupech koncentrace a extrakce SAM z droždí, obsahuje roztok SAM+ iont a S04 iont.
Ve všech případech pH roztoku se upraví na hodnotu mezi 6 a 7, s výhodou 6,5.
Chromatografické čištění ve stupni b) se provádí s výhodou na Amberlitu IRC50, nebo Amberlitu CG50.
Eluce ve stupni c) se s výhodou provádí O,1N vodným roztokem požadované kyseliny.
Při titraci eluátu, stupeň d), se zjistí, že množství přítomných ekvivalentů je menší než požadované množství (4, 5 nebo 6) a tak se běžné pak přidá množství kyseliny, které odpovídá přesně nedostatku a to ve formě koncentrovaného obchodního vodného roztoku. V případě, že se zjistí přebytek kyseliny, pak se tato odstraní zpracováním roztoku se silně bázickou iontoměničovou pryskyřicí v OH“ formě, například s Amberlitem IRA-4O3_.
Ve stupni e) se eluát zahustí na optimální hodnotu pro následující lyofilizaci, to je na hodnotu 50 až 100 g na litr, s výhodou asi 70 g/1.
Konečná lyofilizace se provádí běžně známými metodami a získá se perfektně krystalizující sůl 100% čistoty.
Jestliže se lyofylizace provádí v přítomnosti vhodné inertní látky, získá se produkt s menší zbylou vlhkostí, který je tak stabilnější.
Dále bylo nalezeno, že pro přípravu solí, které se mají použít pro injikovatelné farmaceutické formy, má se lyofilizace provádět v přítomnosti manitolu. Jestliže se však nové soli mají použít pro přípravu tablet pro orální použití, má se lyofilizace provádět v přítomnosti práškové kyseliny křemičité.
Pro bližší objasnění slouží následující příklady, které •uvádějí praktické způsoby přípravy, umožňující snazší reprodukovatelnost nových produktů.
Příklad 1
K 900 kg kvasnic, obohacených S-adenosylmethioninem (6,88 g/kg) postupem podle Schlenka (Enzymologia 29, 283, (1965), se přidá při teplotě místnosti 110 1 etylacetátu a 110 1 vody.
Po 30 minutovém intenzivním míchání se přidá 500 1 0,35N kyseliny sírové a v míchání se pokračuje dalších 90 minut.
Směs se přefiltruje a zbytek na filtru se promyje vodou.
Získá se tak 1 400 1 roztoku, obsahujícího 4,40 g/1 S-adenosyl methioninu, který je ekvivalentní 99,5 % množství, přítomného ve výchozím materiálu.
-5CZ 279834 B6
K roztoku se za míchání přidá 23 kg kyseliny pikrolonové v 250 ml metyletylketonu.
Směs se nechá stát přes noc, sraženina se oddělí centrifugací a promyje vodou.
Sraženina se rozpustí za míchání při teplotě místnosti v 62 litrech IN roztoku kyseliny sírové v metanolu.
Po odfiltrování stop nerozpustného materiálu se k roztoku přidá 500 litrů acetonu.
Jakmile se sraženina úplně usadí, roztok se dekantuje a nerozpustný zbytek se promyje malým množstvím acetonu.
Sraženina se rozpustí v 800 1 destilované vody, přidají se 2 kg aktivního uhlí pro odbarvení roztoku a směs se přefiltruje.
Připraví se kolona 200 1 Amberlitu IRC 50 v H+ formě a opatrně se promyje destilovanou vodou.
K výše připravenému vodnému roztoku se za míchání přidá 4,8 kg ledové kyseliny octové, načež se přidává 2N roztok NaOH, až se získá roztok pH 6,5.
Roztok se prolije kolonou rychlostí 400 1/hodinu, která se udržuje konstantní během celého postupu.
Postupně se kolonou prolévá 200 1 destilované vody, 1 600 1 0,lM kyseliny octové a dále 200 1 destilované vody.
S-adenosylmethionin se eluuje 400 1 0,lN kyseliny sírové. 400 1 eluátu, získaného tímto způsobem, obsahuje asi 4 kg S-adenosylmethioninu a zahustí se pak ve vakuu na asi 60 ml.
Přidá se 0,5 kg aktivního uhlí a směs se přefiltruje. Roztok se titruje.
Přidává se koncentrovaná kyselina sírová, až se získá molárjií poměr H2SO4 k S-adenosylmethioninu 2,5:1 a roztok se pak lyofilizuje.
Získá se 6,5 kg produktu následujícího složení: S-adenosylmethionin 61 % H2SO4 37,5 %, H2o 1,5 %.
Sůl je krystalická, až do množství 20 % je rozpustná ve vodě: za vzniku bezbarvého roztoku, je však nerozpustná v běžných organických rozpouštědlech.
Chromatografií na tenké vrstvě postupem podle Anal. Biochem 4, 16-28 (1971) bylo nalezeno, že produkt je prostý jakékoli nečistoty.
V tabulce 7 jsou shrnuta analytická data, která jsou, v souladu se sloučeninou vzorce C15H22N6°5S ’ 2/5H2SO4 . 0,5H20.
-6CZ 279834 B6
Nová sloučenina byla také identifikována enzymatickou metodou, založenou na enzymatické metylaci nikotinamidu a guanidinoctové kyseliny S-adenosylmethioninem (G. L. Cantoni, J. Biol. Chem. 189, 745 (1951); G. De La Hoba, B. A. Jameison, s. L. Mudde, Η. H. Richards, J. Am. Chem. Soc. 81, 3975 (1959)).
Postup se opakuje stejným způsobem, ale před lyofilizaci se přidá kyselina sírová v množství, které odpovídá molárnímu poměru 3:1 vzhledem k S-adenosylmethioninu. Získá se tak sůl S-adenosylmethioninu SAM.3H2S04.0,7H2O, jejíž analytická data jsou uvedena v tabulce 7.
Analogickým způsobem, ale snížením molárního poměru H2SO4/SAM před lyofilizaci na 2:1 se získá sůl S-adenosylmethioninu, odpovídající §AM.2H2S04.0,4H20, jejíž analytická data jsou shrnuta v tabulce 7.
Příklad 2
11,5 kg kyseliny pikrolonové se rozpustí v 100 ml izobuty1alkoholu a přidá se k 700 litrům roztoku, získaného lysí buněk kvasnic za použití stejného výchozího materiálu a metody, jaké byly popsány v příkladu 1.
Směs se nechá stát přes nos a vzniklá sraženina se oddělí centrifugací.
Za míchání při teplotě místnosti se sraženina rozpustí v 31 litrech 1N roztoku kyseliny sírové v etanolu.
Po odfiltrování malého množství nerozpustného materiálu se k roztoku přidá 250 litrů dietyléteru.
Reakční směs se nechá stát, směs se filtruje a pevné podíly se promyjí malým množstvím éteru, načež se vysuší ve vakuu.
Pevný podíl se rozpustí v 400 1 vody, přidá se 1 kg aktivního uhlí pro odbarvení, načež se směs filtruje.
Přidá se ledová kyselina octová, pH se upraví na 6,5 a roztok se prolije kolonou Amberlitu IRC 50, postupem popsaným v příkladu 1.
S-adenosylmethionin se chlorovodíkové.
z kolony eluuje 200 1 0,lN kyseliny
Eluát se zahustí ve vakuu na objem 0,25 kg aktivního uhlí a směs se filtruje, a koncentrovaná kyselina chlorovodíková se množství, aby se získal molární poměr HC1/SAM lyofilizuje.
litrů, přidá se Roztok se titruje přidává v takovém 5:1. Roztok se pak
Získá se 2,8 kg produktu následujícího složení: SAM+ 67,6 %; HC1 30,9 %; H2O 1,5 %.
7CZ 279834 B6
Sůl má krystalický vzhled a je rozpustná v množství větším než 20 % ve vodě za vzniku bezbarvého roztoku. Je špatně rozpustný v běžných organických rozpouštědlech.
Chromatografie na tenké vrstvě postupem podle příkladu 1 ukazuje, že sloučenina je prosta jakýchkoli nečistot.
Analytická data jsou uvedena v tabulce 7 a souhlasí s produktem vzorce C15H22N6°5S ‘ 5HC1·
Nová sloučenina byla také identifikována enzymatickou metodou, popsanou v příkladu 1.
Postupem, popsaným v příkladu 1, je možné získat soli s různým obsahem kyseliny a to
SAM . 4HC1 . 0,4H2O
SAM . 6HC1 . 0,7H20 jejichž analytické údaje jsou uvedeny v tabulce 7.
Příklad 3
Opakuje se postup, popsaný v příkladu 1, ale k roztoku se před lyofilizací přidá 4,75 kg nepyrogenního manitolu. Roztok se pak lyofilizuje běžným způsobem.
Přidání manitolu, jako činidla podporujícího lyofilizací, umožňuje získání produktu, jehož zbytková vlhkost je menší než 0,1 %.
Produkt, získaný tímto způsobem, je vhodný pro přípravu injikovatelných farmaceutických forem.
-Příklad 4
Provede se postup podle příkladu 1. K roztoku před lyofilizací se přidají 4 kg Aerosilu (práškovaná kyselina křemičitá) a vzniklá koloidní suspenze se lyofilizuje.
Přidání Aerosilu jako činidla, usnadňujícího lyofilizací, umožňuje přípravu produktu, jehož zbytková vlhkost je 0,2 %.
Produkt, získaný tímto způsobem, je vhodný pro převedení na tablety, vhodné pro orální aplikaci.
Příklad 5
Provede se postup podle příkladu 2, ale S-adenosylmethionin se eluuje O,1M roztokem kyseliny fosforečné místo O,1N kyseliny chlorovodíkové.
-8CZ 279834 B6
Před lyofilizací se přidá dostatečné množství koncentrované kyseliny fosforečné, aby se získal molární poměr H3PO4/SAM 5:1.
Získá se 4,26 kg produktu následujícího složení
SAM+ 44,4 %; H3PO4 54,6 %; H20 1 %.
Analytické údaje jsou shrnuté v tabulce 7 a souhlasí s produktem vzorce C15H22N6°5S * 5H3PO4 · θ/5Η2Ο.
Chromatografie na tenké vrstvě postupem podle příkladu 1 ukazuje, že sloučenina je prostá jakýchkoli nečistot.
Nová sloučenina byla také identifikována enzymatickou metodou, popsanou v příkladu 1.
Postupem podle příkladu 1 je možné získat soli s různým obsahem kyseliny, zejména soli
SAM . 4H3PO4 . 0,4H2O
SAM . 6H3PO4 . 0,7H2O jejichž analytické údaje jsou shrnuté v tabulce 7.
Tabulka 7
sůl sumární vzorec % N * S * SAM EH 256 mm (6N 02SO4)
vypočteno nalezeno vypočteno nale- zeno vypočteno nalezeno
SAM.2H2SO4.0,4H2O C15B26N6°13S3,0'4B2° 13,98 14,00 15,97 16,01 66,2 66,3 243
SAM.2,5H2SO4.0,5H2O C15b27n6°15S3,5‘0'5b2° 12,28 12,86 17,18 17,15 61,0 60,9 223
£AM.3H2SO4.0,7H2O C15B28N6O17S4,0'7B2° 11,91 11,89 18,16 18,05 56,5 56,4 207
SAM.4HC1.0,4H2O c15b26n6°5SC14-°'4b2° 15,25 15,55 5,81 5,93 72,2 72,4 264
SAM.5HC1.0,5H2O ('15Β27^6θ5ΒΤ‘0/ ΒΒ2θ 14,26 14,24 5,43 5,44 67,6 67,6 247
SAM.6HCL0,7H2O C15B28N6°5SC16í0'7B2° 13,33 13,15 5,08 5,03 63,2 63,1 231
SAM.4H3PO4.0,4H2O C15b34N6O21SP4'°'4B2O 10,53 10,54 4,01 4,03 50,0 49,9 176
SAM.5H3PO4.0,5H2O C1SH37BS02SSP5.0,5H20 9,35 9,33 3,56 3,55 44,4 44,4 156
SAM.6H3P04.0,7H20 c15b40n6°29sp6“°'7b2° 8,04 8,38 3,2 3,2 39,9 39,9 140
Testy stability byly provedeny u soli, připravených popsaným způsobem tak, že se produkt udržoval v sušárně při kontrolované teplotě 45 °C a byla stanovována zbylá sůl po určité době. Testy
-9“ byly prováděny ve srovnání se solemi SAM.nHCl, kde n = 1,2 a 3, připravenými známou metodou (USA patent č. 2 969 353) a ve srovnání se solemi SAM.nH2SO4, kde n = 0,5, 1 a 1,5, připravenými rovněž známou metodou (DE patent č.1803978).
Následující uvedené době. tabulky uváděj i procenta rozložené soli po
Tabulka 1
SAM.n HC1
Degradace při 45 °C po
n zbytková 60 120 180 240 360
vlhkost dnech dnech dnech dnech dnech
1 0,2 % 100 % 100 % 100 % 100 % 100 %
2 0,5 % 80 % 100 % 100 % 100 % 100 %
3 0,8 % 30 % 60 % 80 % 100 % 100 %
4 1 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
5 1,5 % - 1,5 % 3 % 4,5 % 5 %
6 2 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
Tabulka 2
SAM.NH2SO4 Degradace při 45°C po
n zbytková vlhkost 60 dnech 120 dnech 180 dnech 240 dnech 360 dnech
0,5 0,2 % 100 % 100 % 100 % 100 % 100 %
1 0,5 % 80 % 100 % 100 % 100 % 100 %
1,5 0,8 % 30 % 60 % 80 % 100 % 100 %
2 1 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
2,5 1,5 % - 1,5 % 3 % 4,5 % 5 %
3 2 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
-10CZ 279834 B6
Tabulka 3
SAM.1,5 H2SO4.nHCl
Degradace při 45 °C
n zbytková 60 120 180 240 360
vlhkost dnech dnech dnech dnech dnech
1 1 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
2 1,5 % - 1,5 % 3 % 4,5 % 5 %
3 2 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
Tabulka 4
SAM.2HCl.nH2SO4
Degradace při 45 °C po
n zbytková 60 120 180 240 360
vlhkost dnech dnech dnech dnech dnech
0,5 0,8 % 30 % 60 % 80 % 100 % 100 %
1 1 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
1,5 1,5 % - 1,5 % 3 % 4,5 % 5 %
2 2 % 5 % 10 % 14 % 17 % 20 %
Zbylá procenta S-adenosylmethioninu po uvedené době byla stanovena novou metodou, popsanou dále, která zajišťovala maximální přesnost měření tím, že umožňuje úplné oddělení S-adenosylmethioninu od všech možných degradačních produktů.
Z tohoto hlediska bylo nalezeno, že při použití dosavadních metod, založených na dělení na analytické koloně Dowex 50 (Schlenk a De Palma, J. Biol. Chem. 229 (1957)) je oddělení S-adenosylmethioninu od určitých degradačních produktů a zejména od metylthioadenosinu neúplné a tudíž vedlo k chybě při výpočtu stability S-adenosylmethioninu a údaje stability byly udávány lepší než ve skutečnosti byly.
Současná metoda pro stanovení S-adenosylmethioninu je založena na použití vysokotlaké kapalinové chromatografie.
Použité analytické podmínky jsou:
- kolona PARTISIL 10 SCX - 2,5 x 250 mm
- eluční roztok O,1M formiát amonný pH 4, obsahující 20 % metanolu pro vysokotlakou kapalinovou chromatografii
- průtok 1 ml/minuta
-11CZ 279834 B6
Retenční čas S-adenosylmethioninu asi 400 sekund.
Z údajů, uvedených v tabulkách 1, 2, 3 a 4, je patrné, že soli S-adenosylmethioninu jsou maximálně stabilní, jestliže obsahují 5 ekvivalentů kyseliny. Soli se 4 a 6 ekvivalenty jsou také dobře stabilní, zatímco soli s nižším počtem ekvivalentů kyselin nemají praktické upotřebení, protože jsou nestabilní.
Dále je patrné, že stabilita solí je nezávislá na typu použité kyseliny, za předpokladu, že kyselina má pH < 2,5.
Nelze připravit soli s kyselinami s pH > 2,5, které obsahují až 6 akvivalentů kyseliny.
Testy stability byly také prováděny stejným způsobem u solí, připravených v přítomnosti činidla, usnadňujícího lyofilizaci, postupem podle příkladů 3 a 4.
Výsledky těchto: testů jsou uvedeny v následujících tabulkách a 6. Drastické snížení obsahu vlhkosti při lyofilizaci, prováděné v přítomnosti činidla, usnadňujícího lyofilizaci, ovlivňuje celkovou stabilitu solí, připravených tímto způsobem.
Tabulka 5
S-adenosylmethionin . 5HC1 zbytková degradace při 45 °C vlhkost po 360 dnech lyofilizace bez činidla
1,5 %
lyofilizace s manitolem (100 g SAM+ + 120 g manitolu) 0,1 % lyofilizace s aerosilem (100 g SAM+ + 100 g aerosilu) 0,2 %
Tabulka 6
S-adenosylmethionin.2,5H2SO4 zbytková degradace při 45 °C vlhkost po 360 dnech lyofilizace bez činidla 1,5 % 5 % lyofilizace s manitolem (100 g SAM+ + 120 g manitolu) 0,1 % lyofilizace s aerosilem (100 g SAM+ + 100 g aerosilu) 0,2 %
-12CZ 279834 B6
Soli S- adenosylmethioninu. 5HC1 a S-adenosylmethioninu. 2,5H2SO4 byly testovány širokou řadou farmakologických testů a ve všech případech vykazovaly vysoké zajímavé charakteristiky aktivity a toxicity, které jsou nezávislé na aniontu, vázaném na S-adenosylmethionin. Bylo nalezeno, že aktivita nových solí závisí v podstatě na kapacitě SAM+ iontu, uvolňovaného v organismu, aby sloužil jako donor metylskupin jako přírodní substrát velké řady transmetylázových enzymů, které katalýzují základní reakce metabolismu lipidů, proteinů a sacharidů.
Důležitost nových solí je pak odvozena v podstatě z faktu, že S-adenosylmethionin je absolutně stabilní při teplotách až do 45 °C, což umožňuje, že jeho transmetylační aktivita v lidském organismu je využívána na 100 %, aniž by bylo riziko tvorby degradačních produktů, které negativně ovlivňují biologické pochody, aktivované SAM+.
Toxicita
Byla stanovena akutní toxicita u myší. Pro obě soli byly nalezeny následující hodnoty:
LD50 při orální aplikaci > 3 g/kg
LD50 při intravenózní aplikaci 1,1 g/kg
Testy tolerance a chronické toxicity byly provedeny na krysách kmenu Wistar a Sprague-Dowley, tak, že se jim po 12 měsíců aplikuje 20 mg/kg produktu za den. Po skončení pokusu nevykazovaly různé orgány a systémy žádné patologické změny.
Tetratogenní testy byly provedeny u králíků. Jestliže se soli aplikují v desetinásobném množství maximálních terapeutických dávek, nebyl nalezen žádný tetratogenní nebo zhoubný účinek na embrya, nebo uhynutí embrya.
Intrevenózní aplikované dávky až do 200 mg/kg nevyvolávaly pyrogenní známky u králíků.
Aplikace 40 mg/kg do žíly králíků a krys nezpůsobily žádné změny tlaku v hrdelní tepně, srdeční a dýchací frekvenci, nebo při elektrokardiografickém záznamu.
Místní snášenlivost při injekcích do svalů i po aplikacích, opakovaných 30 až 60 dnů a intrevenózní injekci do okrajových žil vnějších uší králíků byla vynikající.
Farmakologie
Série testů, provedená u krys, ukazuje, že nové soli vykazují velmi značný ochranný a regenerační účinek u jaterní steatózy, vyvolané hyperlipidickou a hyperproteinovou dietou podle Handlera a u steatózy, vyvolané akutní alkoholickou intoxikací a intoxikací jinými toxickými činidly již při aplikačních dávkách 10 mg/kg kationtu soli S-adenosyl-methioninu.
-13CZ 279834 B6
Při experimentální hyperlipemii u krys, například vyvolané Tritonem S, bylo nalezeno, že nové soli mají značný hypolipemický účinek, který vzhledem k použité dávce (to je 10 mg/kg kationtů soli S-adenosylmethioninu) je intenzivnější, než jaký vykazují ostatní preparáty s hypolipemickým účinkem.
U kuřat s aterosklerózou, vyvolanou dietou s obohaceným cholesterolem a fruktózou, se při parenterální aplikaci nového produktu v dávce 10 mg/kg snížila cholesterolomie a zlepšily se ve srovnání s kontrolními zvířaty nežádoucí změny na hrudníkové a konečníkové aortě a na malých cévách mozku.
S ohledem na metabolismus fosfolipidů bylo experimentálně nalezeno, že dochází ke zvýšení množství fostatidylcholinu v jaterní tkáni krys s nekompenzovanou steatózou. Při experimentálních změnách, ‘vyvolaných poměry β/α-lipoproteinů, byl nalezen jasný přírůstek fosfatidylcholinu vzhledem ke krevním a-lipoproteinům.
Veškeré tyto testy jasně dokazují léčebný účinek nových solí při změnách metabolismu lipidů.
Další série testů, provedených u krys ukazuje, že aplikace 1 mg/kg vyvolává akumulaci rezerv glykogenů v jaterní a svalové hladině, jak bylo dokázáno histochemickými stanoveními. U pokusné diabetes, sníženo množství inzulínu, nutné na normální hladinu již po
0,5 mg/kg kationtů soli S-adenosylmethioninu.
a kvantitativními vyvolané alloxanem, bylo značné pro snížení glykemických hodnot aplikaci dávky, ekvivalentní
Tato série testů ukazuje jasný pozitivní účinek nových sloučenin podle vynálezu na metabolismus cukrů.
Konečně krysy s experimentálně vyvolanou hypodisproteinemií byly léčeny dávkami 10 mg/kg S-adenosylmethioninu. Bylo nalezeno, že produkt podle vynálezu vrací hodnoty protienomie na normální hodnoty, dochází ke značnému zvýšení hladiny albuminu, což ukazuje na značnou anabolickou aktivitu.
Tyto a ostatní podobné testy prokazují léčebný účinek nových produktů při špatné funkci metabolismu proteinů.
Celkově na podkladě výše uvedených farmakologických testů a mnoha jiných, které stanovují aktivitu nových solí ve všech hladinách lidského organismu, aktivita nových sloučenin byla klinicky stanovena v hepatologii v případě chronických a akutních entoxikací jater, v neurologii jako antidepresivní činidlo a v osteologii v případě reumatické artritidy.
Účinek v řadě dalších oblastí lidské terapie se dále studuje.
Nové soli se mohou aplikovat orálně, intramuskulárně nebo intrevenózně.
Dalšími možnými aplikačními formami jsou čípky, roztoky pro oční aplikaci, aerosoly nebo preparáty pro topickou aplikaci.

Claims (9)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Stálé soli S-adenosylmethioninu SAM obecného vzorce I kde
    X znamená zbytek kyseliny chlorovodíkové, sírové nebo fosforečné a n znamená celé číslo 5 nebo 6.
  2. 2. Způsob výroby stálých solí S-adenosylmethioninu obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se tím, že se koncentrovaný roztok surové soli S-adenosylmethioninu čistí na koloně slabě kyselé iontoměničové pryskyřice, S-adenosylmethionin se eluuje zředěným vodným roztokem příslušné kyseliny HX, kde X má v nároku 1 uvedený význam, k eluátu se přidá množství kyseliny, nutné k dosažení stechiometrického množství odpovídajícího požadované soli, roztok se zahustí a vysoce čistá sůl se izoluje lyofilizací.
    ,
  3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím., že pH vodného roztoku S-adenosylmethioninu se upraví na hodnotu 6 až 7, s výhodou 6,5.
  4. 4. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tí m, že se jako slabě kyselá iontoměničová pryskyřice užije zesítěný polymer kyseliny akrylové nebo metakrylové s divinylberrzenem.
  5. 5. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že roztok kyseliny HX, užitý pro eluci, má koncentraci 0,1
  6. 6. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že nedostatek kyseliny ΧΗ vzhledem ke stechiometrickému množství se upraví přidáním koncentrovaného vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové, sírové nebo fosforečné k eluátu.
  7. 7. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tí m, že případný přebytek kyseliny v eluátu vzhledem ke stechiomet-15CZ 279834 B6 rickému množství se odstraní silně bazickou pryskyřicí.
  8. 8. Způsob podle nároku 2, vyznačující že se eluát zahustí na hodnotu v rozmezí S-adenosylmethioninu.
  9. 9. Způsob podle nároku 2, vyznačující že se lyofilizace provádí v přítomnosti inertní dou manitolu nebo práškové kyseliny křemičité.
CS826142A 1981-08-24 1982-08-23 Stálé soli S-adenosylmethioninu a způsob jejich výroby CZ279834B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT23603/81A IT1137892B (it) 1981-08-24 1981-08-24 Sali stabili della s-adenosilmetionina,processo per la loro preparazione e composizioni terapeutiche che li comprendono come principio attivo

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ614282A3 CZ614282A3 (en) 1995-04-12
CZ279834B6 true CZ279834B6 (cs) 1995-07-12

Family

ID=11208488

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS826142A CZ279834B6 (cs) 1981-08-24 1982-08-23 Stálé soli S-adenosylmethioninu a způsob jejich výroby

Country Status (23)

Country Link
US (1) US4543408A (cs)
EP (1) EP0073376B2 (cs)
JP (1) JPS5843995A (cs)
AR (1) AR231453A1 (cs)
AT (1) ATE16394T1 (cs)
AU (1) AU552466B2 (cs)
CA (1) CA1201434A (cs)
CZ (1) CZ279834B6 (cs)
DD (1) DD210455A1 (cs)
DE (1) DE3267295D1 (cs)
DK (1) DK149861C (cs)
ES (1) ES8306371A1 (cs)
FI (1) FI72525C (cs)
GR (1) GR76862B (cs)
HU (1) HU186108B (cs)
IL (1) IL66584A0 (cs)
IT (1) IT1137892B (cs)
NO (1) NO153370C (cs)
NZ (1) NZ201679A (cs)
PL (1) PL137816B1 (cs)
PT (1) PT75454B (cs)
YU (1) YU42793B (cs)
ZA (1) ZA825971B (cs)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1169774B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Composizioni terapeutiche iniettabili contenenti sali stabili della s-adenosil-l-metionina
IT1169773B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Processo per la produzione di sali stabili della solfo-adenosil-l-metionina
IT1169772B (it) * 1983-08-24 1987-06-03 Bioresearch Spa Composizioni terapeutiche per uso orale contenenti sali stabili della s-adenosil-l-metionina
JPS6279792A (ja) * 1985-10-04 1987-04-13 Showa Sangyo Kk 注射用原料結晶ぶどう糖の製造方法
FR2623396B1 (fr) * 1987-11-25 1990-03-30 Sanofi Sa Utilisation de l'ademetionine contre le vieillissement de la peau
US6492349B1 (en) 1993-03-31 2002-12-10 Nutramax Laboratories, Inc. Aminosugar and glycosaminoglycan composition for the treatment and repair of connective tissue
US6255295B1 (en) 1996-12-23 2001-07-03 Nutramax Laboratories, Inc. Aminosugar, glycosaminoglycan or glycosaminoglycan-like compounds, and s-adenosylmethionine composition for the protection, treatment, repair, and reduction of inflammation of connective tissue
IT1317920B1 (it) * 2000-10-20 2003-07-15 Univ Roma S-adenosilmetionina e suoi derivati per il trattamento e laprevenzione della malattia di alzheimer.
US6649753B2 (en) 2001-06-07 2003-11-18 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd. Stable salts of S-adenosyl-L-methionine (SAMe) and the process for their preparation
US20050272687A1 (en) * 2004-06-08 2005-12-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-l-methionine
US20090012036A1 (en) * 2005-05-24 2009-01-08 Hebert Rolland F Stable S-adenosyl-L-methionine
EP2017331B1 (en) 2006-05-16 2015-04-01 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Method of producing s-adenosyl-l-methionine-containing dry yeast having excellent storage stability
AU2008208325B2 (en) 2007-01-25 2013-02-07 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Method for production of dry yeast containing S-adenosyl-L-methionine and having excellent storage stability, product produced by the method, and molded composition of the dry yeast
ITMI20071374A1 (it) * 2007-07-10 2009-01-11 Gnosis Spa Sali stabili di s-adenosilmetionina e processo per il loro ottenimento.
US20100004191A1 (en) * 2008-07-01 2010-01-07 Rolland F Hebert Compositions of S-adenosyl-L-methionine.
CN101481660B (zh) * 2009-01-20 2011-02-09 中国药科大学 一株高产腺苷蛋氨酸的菌种
US9534010B2 (en) 2013-01-16 2017-01-03 Hebert Sam-E Llc Stable indole-3-propionate salts of S-adenosyl-L-methionine

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2969353A (en) * 1957-02-06 1961-01-24 Merck & Co Inc Process for the preparation of "active methionine" and products obtained thereby
IE37913B1 (en) * 1972-08-02 1977-11-09 Bioresearch Sas Salt of s-adenosyl-l-methionine
JPS5320998B2 (cs) * 1974-06-13 1978-06-29
FR2275220A1 (fr) * 1974-06-21 1976-01-16 Merieux Inst Procede d'obtention de sels organiques de la s.adenosyl-l-methionine. nouveaux sels organiques obtenus des medicaments comprenant un ou plusieurs nouveaux sels obtenus
JPS516989A (en) * 1974-07-05 1976-01-20 Yamasa Shoyu Kk Ss adenoshiru ll echioninno seiseiho
AR221676A1 (es) * 1974-07-12 1981-03-13 Bioresearch Sas Procedimiento para la preparacion de sales estables sulfonicas y/o sulfuricas de la s-adenosil-l-metionina,particularmente utiles como donadores especificos de metilo para las reacciones bioquimicas de transferencia del grupo ch3;asi como tambien las reacciones fundamentales en el metabolismo lipilico,protilico y glucidico
GB2001976B (en) * 1977-08-03 1982-03-10 Yamasa Shoyu Kk S-adenosyl-l-methionine compositions and production thereof
JPS5619879A (en) * 1979-07-25 1981-02-24 Showa Electric Wire & Cable Co Method of molding cable connector
GB2064523B (en) * 1979-12-04 1983-06-29 Kanegafuchi Chemical Ind Stable composition of s-adenosyl-l-methionine
JPS57192399A (en) * 1981-05-18 1982-11-26 Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd Composition containing s-adenosyl-l-methionine and its preparation

Also Published As

Publication number Publication date
FI72525C (fi) 1987-06-08
ES515191A0 (es) 1983-06-01
IT8123603A0 (it) 1981-08-24
IT1137892B (it) 1986-09-10
FI822944A0 (fi) 1982-08-24
DK149861B (da) 1986-10-13
JPS5843995A (ja) 1983-03-14
EP0073376B2 (en) 1989-07-26
HU186108B (en) 1985-06-28
FI822944L (fi) 1983-02-25
JPH0149274B2 (cs) 1989-10-24
ES8306371A1 (es) 1983-06-01
EP0073376A1 (en) 1983-03-09
NO822863L (no) 1983-02-25
CZ614282A3 (en) 1995-04-12
PT75454B (en) 1984-11-19
EP0073376B1 (en) 1985-11-06
IL66584A0 (en) 1982-12-31
AR231453A1 (es) 1984-11-30
US4543408A (en) 1985-09-24
GR76862B (cs) 1984-09-04
PL238024A1 (en) 1983-05-09
FI72525B (fi) 1987-02-27
NZ201679A (en) 1986-04-11
YU190882A (en) 1985-04-30
DK377282A (da) 1983-02-25
CA1201434A (en) 1986-03-04
ZA825971B (en) 1983-06-29
NO153370B (no) 1985-11-25
DK149861C (da) 1987-03-02
NO153370C (no) 1986-03-05
ATE16394T1 (de) 1985-11-15
PT75454A (en) 1982-09-01
PL137816B1 (en) 1986-07-31
AU8740582A (en) 1983-03-03
DE3267295D1 (en) 1985-12-12
YU42793B (en) 1988-12-31
DD210455A1 (de) 1984-06-13
AU552466B2 (en) 1986-06-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0072980B1 (en) Stable s-adenosylmethionine salts, the process for their preparation and therapeutic compositions which contain them as active principle
CZ279834B6 (cs) Stálé soli S-adenosylmethioninu a způsob jejich výroby
US3954726A (en) Double salts of S-adenosil-L-methionine
US3893999A (en) Salt of S-adenosil-L-methionine and process of preparation
US4057686A (en) Sulphonic acid salts of S-adenosilmethionine
JP2628853B2 (ja) 薬剤組成物
JPH0149276B2 (cs)
US4028183A (en) Process of preparing double salts of S-adenosyl-L-methionine
JPS5817167B2 (ja) 抗ウイルス作用を有する医薬組成物
SU1433416A3 (ru) Способ получени S-аденозилметиониновых (САМ) солей
JP2005508970A (ja) 抗糖尿病性の２−置換−５’−ｏ−（１−ボラノトリホスフェート）アデノシン誘導体
NO139523B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av doble salter av s-adenosil-l-methionin
WO1985000747A1 (en) Use of selenium-containing compounds for negating the toxic effects of gold compounds used in the treatment of rheumatoid arthritis, and a novel selenium-containing gold compound and use thereof as an anti-rheumatoid arthritis medicine
Drain et al. FURTHER STUDIES ON SOME ESTERS OF 4‐AMINOSALICYCLIC ACID
JPS6256490A (ja) 高純度メチルコバラミンの製造方法
PL95666B1 (pl) Sposob wytwarzania nowych podwojnych soli s-adenozylo-alfa-metioniny