FR2701709A1

FR2701709A1 - Forme purifiée de streptograminés, sa préparation et les compositions pharmaceutiques qui la contiennent.

Info

Publication number: FR2701709A1
Application number: FR9301787A
Authority: FR
Inventors: Anger Pascal; Bonnavaud Bertrand; Callet Alain; Lefevre Patrick
Original assignee: Rhone Poulenc Rorer SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 1993-02-17
Filing date: 1993-02-17
Publication date: 1994-08-26
Anticipated expiration: 2013-02-17
Also published as: JPH06298664A; ZA941024B; CZ32694A3; BE1006554A3; PL302250A1; NO940533D0; PT101460B; IL108641A; FR2701709B1; ES2081763A1; GB9403057D0; GB2275269A; FI111009B; CA2115807A1; AU5510094A; GR940100078A; ITMI940192A0; AU678785B2; IT1269214B; SK18494A3

Abstract

Forme purifiée de streptogramines constituée d'une association d'au moins une composante du groupe B des streptogramines, de formule générale (I) dans laquelle: A1 est un radical de formule générale (1) et (2) pour lequel R' est H ou OH et Y est H, un radical méthylamino ou un radical diméthylamino R est un radical éthyle ou lorsque R' est H, R peut également représenter -CH3 , et R1 et R2 sont H, ou bien, A1 est un radical de formule (3) R est un radical isobutyle, et R1 est OH et R2 est -CH3 et d'au moins une composante minoritaire du groupe A des streptogramines, de formule générale (II) dans laquelle R" est H ou un radical méthyle ou éthyle. (CF DESSIN DANS BOPI) (CF DESSIN DANS BOPI) (CF DESSIN DANS BOPI) (CF DESSIN DANS BOPI)

Description

FORME PURIFIEE DE STREPTOGRAMINES, SA PREPARATION ET LES COMPOSITIONS

PHARMACEUTIQUES QUI LA CONTIENNENT

La présente invention concerne une forme purifiée de streptogramines comprenant au moins une composante du groupe B des streptogramines associée à au moins une composante du groupe A définie ci-après par

la formule générale (II).

Parmi les streptogramines connues, la pristinamycine (RP 7293), antibactérien d'origine naturelle produit par Streptomyces

pristinaespiralis a été isolée pour la première fois en 1955.

Un autre antibactérien de la classe des streptogramines: la virgi-

niamycine, a été préparé à partir de Streptomyces virginiae,

ATCC 13161 lAntibiotics and Chemotherapy, 5, 632 ( 1955)l.

Dans le brevet US 3 325 359 ont été décrites des compositions pharmaceutiques comprenant des substances antibiotiques constituant

l'antibiotique 899: facteur S et facteur M 1.

Les antibactériens de la classe des streptogramines sont constitués d'une association de 2 groupes de composants: composantes du groupe

B et composantes du groupe A, chaque groupe ayant une activité anti-

bactérienne propre L'association des composantes des 2 groupes pro-

voque une synergie d'action qui résulte dans une activité bactério-

statique et bactéricide accrue et dans l'élargissement du spectre d'activité. Dans Streptogramine als Modelsysteme fur den Kationentransport durch

Membranen, Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Mathema-

tisch-Naturwissenschaftlichen Facultât der Georg-August Universitât zu G 3 ttingen, Gôttingen 1979, dans Antibiotics III, 521 ( 1975) et dans Antibiotics of the virginiamycin family, Inhibitors which contain synergistic components, C Cocito, Microbiological Reviews, -98 ( 1979) ont été décrites des composantes des groupes A et B des

streptogramines J Preud'Homme, P Tarridec, et A Belloc, Bull.

Soc Chim Fr, 2, 585 ( 1968) ont également décrit la pristinamycine

naturelle ainsi que les différentes composantes qui la constituent.

Parmi les composantes du groupe A, la pristinamycine IIB (PIIB) est une composante minoritaire dont la proportion en poids est inférieure à 10 %, le plus souvent de ltordre de 8 %. Jusqu'à présent, les techniques à disposition n'avaient pas permis d'obtenir, en quantité industrielle, une forme suffisamment purifiée

et la production de lots de qualité suffisamment constante et repro-

ductible pour répondre aux exigences des législations de certains

pays en matière d'enregistrement.

A titre d'exemple, les lots industriels de pristinamycine naturelle

contiennent après purification, une quantité d'impuretés pouvant at-

teindre 20 % Les essais de purification mis en oeuvre jusqu'à pré-

sent ont systématiquement abouti à des échecs et bien souvent à la dégradation de l'un des groupes de composants du fait qu'il s'agit de produits fragiles pour lesquels de nombreuses opérations aboutissent

à l'ouverture de la structure cyclisée De ce fait, pendant de nom-

breuses années il a été considéré qu'une amélioration du degré de pureté ne pouvait pas être atteinte En 1988, la purification était encore considérée comme un problème: J of Liq Chromatography,

11 ( 11), 2367 ( 1988).

En conséquence de cette situation, la commercialisation de la pristi-

namycine (Pyostacine ') a été définitivement limitée à certains pays

comme la France et la Belgique Il en a été de même pour la virginia-

mycine (Staphylomycine ) commercialisée seulement dans un nombre limité de pays en ce qui concerne la médecine humaine, ainsi que pour

la mikamycine dont la commercialisation (limitée au Japon) est main-

tenant arrêtée Ceci a donc abouti pour certaines populations, à la privation d'un traitement dans le cas d'infections graves à cocci gram positif (notamment les infections à staphylococci résistant à la méthicilline) ou d'un traitement dans le cas de maladies sexuellement transmissibles. Dans le domaine des antibactériens, il est bien connu des praticiens

que des allergies ou des résistances peuvent se développer après ad-

ministration de certaines classes d'antibiotiques lThe New England Journal of Medicine, 32,4 ( 9), 601 ( 1991)l En milieu hospitalier on connait notamment de nombreuses souches résistantes de Staphylococcus aureus C'est pourquoi il est extrêmement utile pour le médecin d'avoir à sa disposition un large éventail de classes chimiquement

différentes de manière à pouvoir adapter le traitement au cas parti-

culier du malade à traiter La conséquence de l'absence de commercia-

lisation d'une classe déterminée peut être très grave, voire drama-

tique puisqu'elle peut résulter dans la privation de traitement chez

des malades ne tolérant pas les autres classes d'antibiotiques.

Les essais de purification mis en oeuvre avaient toujours eu pour but

d'éliminer les composantes minoritaires des streptogramines, celles-

ci étant considérées comme non indispensables.

Il a été trouvé, et c'est ce qui fait l'objet de la présente inven-

tion, que des associations d'au moins une composante du groupe B, de formule générale: Os CH 3 A 1 (I) dans laquelle: Ai est un radical de formule générale: Rl ou Y

O NIER'

O O u -NH OH O O (Ia) pour lequel R' est un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy et Y

est un atome d'hydrogène, un radical méthylamino ou un radical di-

méthylamino, R est un radical éthyle ou lorsque R' représente un R peut également représenter un radical méthyle, et atome d'hydrogène R 1 et R 2 représentent un atome d'hydrogène ou bien, A 1 est un radical de formule: CH CH 3 CH 3 CH 3 (Ib)

O CH 3

R est un radical isobutyle, et R 1 est un radical hydroxy et R 2 est un radical méthyle, et d'au moins une composante minoritaire du groupe A, de formule générale: (Ia')

O N H O O

NHXN O

H 3 C C 3 O

O (II)

H 3 C N

dans laquelle R" est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle ou

éthyle, ont une action biologique in vivo supérieure à celle du pro-

duit naturel (par exemple la virginiamycine naturelle ou la pristinamycine naturelle) et peuvent être maintenant préparés à une

échelle importante.

Il est ainsi possible d'accéder à une forme purifiée contenant moins

de 6 % d'impuretés.

Le produit de formule générale (II) pour lequel R" est un radical éthyle ci-après appelé pristinamycine IIF (PIIF) et le produit de

formule générale (II) pour lequel R" est un atome d'hydrogène ci-

après appelé pristinamycine IIG (PIIG) sont des produits nouveaux qui constituent des composantes minoritaires des streptogramines dont la

proportion en poids est inférieure à 0,5 %.

Les associations selon l'invention sont avantageusement préparées dans des proportions de 10/90 à 90/10 (en poids) ou de préférence dans la proportion relative 20/80 à 80/20 Elles peuvent se présenter à l'état de mélange physique des poudres, à l'état de coprécipité ou

de cocristallisat tel que défini ci-après.

Un mode préféré de réalisation de l'invention concerne une associa-

tion de pristinamycine IB (telle que définie ci-dessus lorsque Ai représente un radical de formule générale (Ia) pour lequel Y est un

radical méthylamino et R' est un atome d'hydrogène, et R est un radi-

cal éthyle) ou de virginiamycine Si (telle que définie ci-dessus lorsque Ai représente un radical de formule générale (Ia) pour lequel Y et R' sont des atomes d'hydrogène, et R est un radical éthyle) ou d'un mélange de virginiamycine Si et de virginiamycine 54 (telle que définie ci-dessus lorsque Ai est défini comme pour la virginiamycine Si et R est un radical méthyle) avec la pristinamycine IIB (telle que définie ci- dessus par la formule générale (II) dans laquelle R" est méthyle) et contenant moins de 6 % d'impuretés et de préférence moins

de 3 % d'impuretés-

Un mode préféré de réalisation de l'invention concerne également une streptogramine purifiée constituée de l'association d'une composante du groupe B des streptogramines définie par la formule générale (I) et d'une composante du groupe A de formule générale (II) contenant une proportion relative des composantes des groupes B et A dans un

rapport molaire constant de l'ordre de 1/2.

La présente invention concerne aussi les formes purifiées constituées

par l'association cocristallisée de composantes du groupe B de for-

mule générale (I) avec les composantes du groupe A de formule géné-

rale (II).

La cocristallisation s'effectue dans la stoechiométrie constante de 1 mole de composantes de formule générale (I) avec 2 moles de composantes du groupe A de formule générale (II) lcette

stoechiométrie correspondant à la proportion relative d'environ 43-

44/57-56 en poids dans le cas o la composante A est un produit de

formule générale (I) pour lequel Ai est de structure (Ia)l.

Jusqu'à présent il n'avait jamais été possible d'obtenir les compo-

santes du groupe A de formule générale (II) à l'état cristallisé; de ce fait, seules des méthodes chromatographiques étaient connues pour préparer un produit purifié du groupe A de formule générale (II), et

aucun moyen de purification n'était connu jusqu'à présent pour per-

mettre d'isoler ces produits en quantités importantes.

Il a maintenant été montré que la composante du groupe A de formule générale (II) en solution dans un solvant organique tel qu'une cétone (acétone, méthyléthylcétone, méthylisobutylcétone par exemple), un ester (acétate d'éthyle, acétate d'isopropyle, acétate de butyle,

acétate d'isobutyle par exemple), un solvant chloré (chlorure de mé-

thylène, chloroforme, dichloro-1,2 éthane par exemple), ou un nitrile

(acétonitrile par exemple), donne un composé cocristallisé en pré-

sence d'une composante du groupe B définie par la formule générale (I) Il est entendu que le composé cocristallisé est identique quelle que soient les teneurs respectives du milieu initial en produit de

formule générale (II) et en produit de formule générale (I).

Cette association cocristallisée présente l'avantage d'une stabilité fortement accrue, d'une pureté élevée et surtout de permettre une

industrialisation aisée-

Ainsi la nouvelle association cocristallisée selon l'invention peut être utilisée alternativement comme agent antimicrobien purifié et

possédant une activité in vivo améliorée, ou comme moyen de purifica-

tion de la composante de formule générale (II).

Selon l'invention, les nouvelles associations d'au moins une compo-

sante du groupe B des streptogramines de formule générale (I) et d'au moins une composante du groupe A de formule générale (II) peuvent

être obtenues par préparation d'un composé cocristallisé tel que dé-

fini ci-dessus, suivie éventuellement de l'association avec au moins une des composantes de formule générale (I) ou avec une composante du

groupe A de formule générale (II) préalablement purifiées et en quan-

tité convenable pour obtenir les proportions souhaitées.

Alternativement les associations selon l'invention peuvent être pré-

parées après isolement de la(des) composante(s) du groupe B et de la

composante du groupe A de formule générale (II) à partir de la strep-

togramine naturelle correspondante, par purification de chacune de ces composantes, puis mélange des composantes purifiées, dans les

proportions souhaitées telles que définies précédemment.

Les associations selon l'invention peuvent également être coprécipi-

tées dans les proportions souhaitées, à partir d'une solution des composantes de formule générale (I) et (II) lou alternativement d'une solution du cocristallisat et de l'une des composantes de formule générale (I) ou (II)l dans la méthylisobutylcétone ou dans l'acétone,

versée dans l'hexane ou le cyclohexane.

La préparation et la séparation des composantes des groupes A et B est effectuée par fermentation et isolement des constituants à partir du môut de fermentation selon ou par analogie avec la méthode décrite par J Preud'homme et coll, Bull Soc Chim Fr, vol 2, 585 ( 1968), dans Antibiot & Chemother, 5, 632 ( 1955) ou 7, 606 ( 1957), dans Chromatog Sym, 2 Bruxelles, 181 ( 1962), dans Antibiot Ann, 728 784 ( 1954-55), dans le brevet US 3 299 047 ou dans Streptogramine als Modelsysteme fiir den Kationentransport durch Membranen, Dissertation

zur Erlangung des Doktorgrades der Mathematisch-Naturwissenschaft-

lichen Facultât der Georg-August Universitât zu G 5 ttingen, Gbttingen 1979 ou comme décrit ci-après dans les exemples Notamment dans le cas des pristinamycines, la séparation des composantes des groupes A et B est effectuée par mise en suspension de la streptogramine brute dans un solvant organique comme un acétate (acétate d'éthyle par exemple) suivie de la filtration ou de la centrifugation de la composante brute du groupe A, et de l'extraction de la composante du groupe B en milieu acide aqueux suivie d'une réextraction en milieu chlorométhylènique La séparation des composantes des groupes A et B peut également être effectuée par extraction acide d'une solution de streptogramine brute dans la méthylisobutylcétone, puis isolement par extraction de la composante du groupe B à partir de la phase aqueuse et isolement de la composante du groupe A par précipitation à partir

de la phase organique.

Après séparation, la purification des composantes du groupes B des streptogramines peut être mise en oeuvre par cristallisation dans un

alcool tel que l'éthanol, le méthanol ou l'isopropanol, dans un acé-

tate (acétate d'isopropyle ou acétate de butyle par exemple), dans une cétone (méthyléthylcétone par exemple) ou dans l'acétonitrile ou par chromatographie La purification des composantes du groupe A de formule générale (II) peut être effectuée par chromatographie en

éluant par un mélange acétonitrile-eau.

Alternativement la préparation des composantes des groupes A et B respectivement de formule générale (II) et (I) est effectuée comme décrit dans la demande de brevet français 92 03939, par fermentation séparée selon les étapes suivantes: première étape (facultative), mutagénèse sur un microorganisme producteur de streptogramines non- sélectif, et,

deuxième étape, sélection des microorganismes sélectifs.

Les microorganismes non-sélectifs sont généralement des Actinomycètes et des champignons Les microorganismes de départ utilisables dans le procédé sont notamment des microorganismes producteurs non-sélectifs d'une streptogramine choisie parmi le groupe comprenant la pristinamycine, la virginiamycine, la mikamycine, l'ostréogrycine, la viridogriséine, la vernamycine et l'étamycine A titre d'exemple, des

microorganismes non-sélectifs pouvant être employés sont cités ci-

après dans le tableau.

MICROORGANISMES

CHAMPIGNONS

Micromonospora sp.

STREPTOMYCES

S alborectus S.griseus (NRRL 2426) S.lavendulae S.loïdensis (ATCC 11415) S.mitakaensis (ATCC 15297) S.ostreogriseus (ATCC 27455) S. pristinaespiralis

(ATCC 25486)

S.virginiae (ATCC 13161)

ACTINOMYCES

A.daghestanicus

ANTIBIOTIQUES

vernamycine virginiamycine viridogriséine étamycine vernamycine mikamycine ostréogrycine pristinamycine virginiamycine etamycine Plus particulièrement, la préparation est mise en oeuvre à partir de microorganismes choisis parmi Streptomyces alborectus, Streptomyces

mitakaensis, Streptomyces pristinaespiralis, Streptomyces ostreogri-

séus et Streptomyces virginiae.

La première étape de la préparation consiste à modifier le microorga-

nisme non-sélectif, de manière à augmenter ses capacités globales de production d'antibiotique, et/ou à ce qu'il ne synthétise qu'une seule des 2 composantes des streptogramines Ceci peut être obtenu par modifications génétiques (mutation au niveau de gènes de struc- ture d'enzymes impliquées dans la voie de biosynthèse, ou au niveau des séquences permettant l'expression de tels gènes de structure par

exemple) ou biochimiques (modification d'un mécanisme post-traduc-

tionnel, altération d'un mécanisme de rétroinhibition etc) Diffé-

rents outils de mutagénèse sont utilisés: des agents physiques: rayons X, rayons Ultra Violet; ou,

des agents chimiques: des agents alkylants tels que l'éthylmétha-

nesulfonate (EMS), la N-méthyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (Delic et ai Mutation Res 9 ( 1970) 167-182), ou la 4-nitroquinoléine-1-oxyde (NQO); des agents bialkylants; des agents intercalants; ou, tout système d'insertion mutationnel sur l'ADN, et en particulier

les transposons, les plasmides intégratifs, les phages ou les pro-

phages; ou encore,

la fusion de protoplastes (Cohen, Nature 268 ( 1977) 171-174).

Ces outils (seuls ou en combinaison) peuvent être appliqués sur les microorganismes non-sélectifs à l'état de spores, de spores germées ou en cours de germination ou sur mycélium La préparation peut aussi faire appel à des manipulations (au hasard ou dirigées) permettant d'obtenir des microorganismes capables de produire sélectivement une

composante des streptogramines à partir de microorganismes non-sélec-

tifs. La seconde étape de la préparation concerne l'identification et

l'isolement des microorganismes sélectifs Cette étape peut être réa-

lisée notamment au moyen d'un test de sensibilité vis-à-vis d'un germe Différents germes sensibles spécifiquement aux composantes du groupe A ou à celles du groupe B des streptogramines existent: par exemple Bacillus subtilis (ATCC 6633), Bacillus circulans, Bacillus cereus (Watanabe, J Antibio Ser A XIII( 1) ( 1960) 62), ou C xerosis (Watanabe précitée) qui sont sensibles spécifiquement aux composantes

du groupe B; Streptococcus agalactiae B 96 (Antimicrob Agents Chemo-

ther 10 ( 5) ( 1976) 795), Micrococcus luteus (Prikrylova précitée) ou

Sarcina lutea (ATCC 9341) qui sont sensibles spécifiquement aux compo-

santes du groupe A Il est aussi possible de préparer artificielle-

ment des germes sensibles spécifiquement à une composante des strep-

togramines en insérant, dans un germe sensible aux 2 composantes des

streptogramines, un gène de résistance à l'une d'entre-elles Cer-

tains de ces gènes ont été clonés (Le Goffic et al, J Antibio.

XXX( 8), 665 ( 1977); Le Goffic et al, Ann Microbiol Inst Pasteur 128 B, 471 ( 1977); Solh et al, Path Biol 32 ( 5), 362, ( 1984), de tels gènes sont introduits dans différents germes par des techniques

classiques de biologie moléculaire L'étape de sélection peut égale-

ment être effectuée par test ELISA au moyen d'anticorps spécifiques des composantes A ou B, ou encore par des techniques analytiques

telles que la chromatographie (chromatographie liquide, chromatogra-

phie sur couche mince, etc) Dans le cas d'un test de sensibilité

vis-à-vis d'un germe, il est en outre préférable de valider la sélec-

tion par dosage chromatographique.

Ainsi, selon l'invention il est maintenant possible d'obtenir en quantité industrielle, un nouvelle forme purifiée de streptogramine dont le taux d'impuretés, la définition et la constance de la composition est conforme aux exigences des législations sur l'enregistrement et qui possède de surcroît une activité in vivo améliorée La nouvelle association pourra ainsi pallier à l'absence de traitement par un antibactérien de cette classe dans de nombreux

pays.

La nouvelle association d'une composante du groupe B des streptogra-

mines de formule générale (I) et d'une composante du groupe A des streptogramines de formule générale (II) présente une activité in

vivo particulièrement intéressante notamment sur les germes à Gram-

positif In vivo, chez la souris elle s'est montrée active sur Sta-

phylococcus aureus IP 8203 à des doses de 30 à 50 mg/kg par voie orale. A titre d'exemple la DC 50 par voie orale de plusieurs associations des composantes de formule générale (I) et (II), dans l'infection

expérimentale de la souris à Staphylococcus aureus IP 8203, sont don-

nées ci-après.

Dans le tableau I ci-après, les associations étudiées sont préparées

par précipitation dans l'hexane, à partir d'une solution des compo-

santes de formule générale (I) et (II) dans la méthylisobutylcétone ou dans l'acétone:

Tableau I

Dans le tableau II ci-après les associations décrites sont des pro-

duits cocristallisés préparés comme décrits dans les exemples.

Association produit (I) /produit (II):DC 50 (mg/kg) p o.

Pl (exemple 1)/PIIB (exemple 14)

/90 44

/80 32

/70 30

/30 30

/20 30

/10 50

Tableau II

Dans le tableau III ci-après l'association décrite est préparée sous

forme d'un mélange physique des poudres.

Tableau III

De plus la nouvelle association ne présente pas de toxicité: aucun signe de toxicité ne se manifeste chez la souris à la dose de 150

mg/kg par voie orale ( 2 administrations).

Association

produit (I) /produit (II) cocristallisé DC 50 (mg/kg) p o.

PI/PIIB (exemple 7) 38 PIA/PIIB (exemple 9) 28 PIB/PIIB (exemple 10) 32 PIC/PIIB (exemple 11) 36 PID/PIIB (exemple 12) 50 Facteur S/PIIB (exemple 13) 32 Association

produit (I) /produit (II) DC 50 (mg/kg) p o.

PIA/PIIB 30/70 36

Selon l'invention, lorsque l'association cocristallisée est utilisée comme moyen de purification de la composante de formule générale (II), celle-ci peut être obtenue par extraction acide d'une solution du composé cocristallisé dans une cétone (méthylisobutylcétone par exemple), puis isolement par extraction de la composante du groupe A

par précipitation à partir de la phase organique.

Les exemples suivants donnés à titre non limitatif illustrent la pré-

sente invention.

Dans les exemples qui suivent il est entendu que les titres sont don-

nés en % en poids.

SEPARATTON y PURIFICATON DR COMPOSA VS Dn G'ROUPE B Exemiple 1 kg de pristinamycine brute lpristinamycine IA (PIA): 20,7 %, pristinamycine IB (PIB): 3,9 %, pristinamycine IC (PIC): 0,6 %, pristinamycine ID (PID): 0,3 %, pristinamycine IIB (PIIB): 8 %, pristinamycine IIA (PIIA): 45 %, pristinamycine IIF (PIIF): < 0,5 % (non dosé), pristinamycine IIG (PIIG): < 0,5 % (non dosé)l sont mis en suspension dans 210 litres d'acétate d'éthyle et agités pendant 15

heures à température ambiante La suspension est filtrée et le fil-

trat acétate d'éthyle recueilli est extrait par 2 fois 20 litres d'acide sulfurique 1 N puis 20 litres d'eau distillée Les phases aqueuses réunies sont lavées par 6 fois 15 litres d'acétate d'éthyle, puis ajustées à p H 7 par addition de 30 litres d'une solution à 10 %

de bicarbonate de sodium et extraites par 3 fois 30 litres de chlo-

rure de méthylène Les phases chlorométhylèniques sont réunies et lavées par 10 litres d'eau distillée Le chlorure de méthylène est ensuite distillé et remplacé par 50 litres d'éthanol Le mélange est

alors traité au reflux par 0,8 kg de noir L 3 S pendant 30 minutes.

Après filtration et lavage par 2 fois 5 litres d'éthanol, le mélange est refroidi jusqu'à 10 C en 15 heures Après maintien une heure à

C, la suspension est filtrée et lavée par 3 fois 7 litres d'étha-

nol Après séchage du solide à 40 C sous pression réduite, on obtient , 7 kg de pristinamycine I purifiée (ci-après appelée PI). Titre: 96,8 % (PIA: 81,1 %, PIB: 12 %, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %);

Rendement en PIA: 74 %.

1500 g de Pl purifiée sont repris par 9 litres de dichloro-1,2 éthane puis additionnés de 1,5 équivalent d'anhydride succinique et de 0,015 équivalent de diméthylaminopyridine La solution est maintenue 1 se- maine à 20 C, puis introduite sur une colonne contenant 10 kg de

silice ( 20-45 pm) lhauteur de la colonne: 1 m; diamètre: 20 cml.

L'élution est effectuée par percolation d'un mélange dichloro-

1,2 éthane/méthanol à un débit de 18 litres/heure pendant 6 heures; le pourcentage de méthanol (à 5 % de teneur en eau) est augmenté de O à 4 % au cours de la chromatographie 47 fractions de 2,4 litres sont récupérées. Les fractions 5 à 15 sont réunies, le dichloro-1,2 éthane est évaporé et remplacé par 5 litres d'éthanol Après cristallisation, on obtient

365 g de PIA titrant 99,8 %.

Exemp)le 2 Les fractions 36 à 39 de la chromatographie décrite à l'exemple 1 sont réunies, et le dichloro-1,2 éthane est distillé; 210 g de solide sont ainsi obtenus 40 g de ce solide est repris par 8 litres d'eau auquel sont ajouté 8 cm 3 d'acide chlorhydrique 10 N Après 3 heures à

C, on neutralise la solution à p H 6,5 avec de l'hydrogéno-car-

bonate de sodium La solution est extraite par 3 fois 1 litre d'acé-

tate d'éthyle, et l'extrait lavé par 2 fois 0,2 litre d'eau Apres traitement au noir, l'acétate d'éthyle est évaporé, et remplacé par 600 cm 3 d'éthanol Après recristallisation, on obtient 20 g de PIB

titrant 97 %.

Exemple 3

Les fractions 22 à 26 de la chromatographie décrite à l'exemple 1 sont réunies, et le dichloro-1,2 éthane est distillé; 139 g de solide

sont ainsi obtenus Ce solide est repris par un minimum de dichloro-

1,2 éthane, et introduit sur une colonne de silice L'élution est effectuée par percolation d'un mélange dichloro-1,2 éthane/méthanol à

un débit de 18 litres/heure pendant 6 heures; le pourcentage de mé-

thanol (à 5 % de teneur en eau) est augmenté de O à 5 % au cours de la chromatographie 48 fractions de 2,4 litres sont récupérées Les fractions 38 à 43 sont évaporées et le solide repris par 300 cm 3 d'éthanol Après recristallisation, on obtient 22 g de Pl à 40 % de

PIC Des chromatographies successives sur silice ( 20-45 pm) avec per-

colation par un éluant chlorure de méthylène/méthanol ( 98/2 en vo-

lumes) permettent d'obtenir 5 g d'un solide qui, après battage à la méthyl-isobutylcétone et recristallisation dans l'éthanol, titre 95 %

en PIC.

Exemiple 4 1000 g de Pl obtenus comme décrit précédemment à l'exemple 1, sont

mis en solution dans le minimum de chloroforme et purifiés par frac-

* tions successives sur colonne de silice ( 20-45 pm) Après élution par du chloroforme contenant 2 à 5 % de méthanol, on obtient un produit

qui est concentré à sec Ce produit est ensuite purifié par 2 pas-

sages successifs sur colonne de résine Diaion percolées avec un mélange acétonitrile/eau ( 60/40 en volumes) Les fractions sont contr 6 ôlées par chromatographie Les fractions contenant la PID sont réunies et concentrées à sec On obtient ainsi, environ 3 g de produit titrant 60 % en PID Une purification complémentaire est effectuée par chromatographie à contre-courant en utilisant le mélange de solvants méthylisobutylcétone/acétone/acide formique ( 40/2/40 en volumes) La concentration à sec des fractions contenant

la PID permet d'obtenir 1 g d'un solide titrant 95 % de PID.

Exemple 5

400 g de Staphylomycine (sous forme de comprimés composition ini-

tiale: virginiamycine 51 (Sl): 3,4 %, virginiamycine 54 ( 54): 0,9 %)

sont introduits dans 4 litres d'eau. Les comprimés sont désagrégés par agitation pendant 15 minutes à C On

ajoute 1 litre de chlorure de méthylène et on poursuit l'agitation pendant 1 heure La phase chlorométhylènique est ensuite décantée et filtrée, puis versée en 30 minutes dans un volume de 5

litres d'hexane agité Après 1 heures d'agitation, on filtre la sus-

pension et on recueille un solide qui est lavé par 3 fois 250 cm 3 d'hexane Après séchage, on récupère 52 g de solide qui est mis en suspension dans 370 cm 3 d'acétate d'éthyle 2 battages successifs à 20 C et d'une durée de 18 heures sont réalisés Le filtrat correspondant à chaque battage est porté à sec, puis dissous dans 850 cm 3 de méthanol au reflux Après descente progressive de la température jusqu'à -20 C en 16 heures, on recueille par filtration un solide qui est lavé par une petite quantité de méthanol Après séchage du solide à 35 C sous pression réduite, on obtient 9 g de

facteur S (virginiamycine S).

Titre: 96 % ( 51: 75,4 %, 54: 20,6 %).

Rendement en facteur Sl (virginyamycine Sl): 50 % PREPRPARTTON DRE COMPOSA Nr ES B Rg TES r U ROU Pe A:

Exemple 6

500 g de pristinamycine brute lpristinamycine IA (PIA): 20,7 %, pristinamycine IB (PIB): 3,9 %, pristinamycine IC (PIC): 0,6 %, pristinamycine ID (PID): 0,3 %, pristinamycine IIB (PIIB): 8 %, pristinamycine IIA (PIIA): 45 %l sont mis en solution dans 50 litres de méthylisobutylcétone Cette solution est extraite 5 fois par une

phase aqueuse composée de 2,5 litres d'eau et 2,5 litres d'acide sul-

furique 1 N, puis lavée par 3 fois 10 litres d'eau La méthylisobu-

tylcétone est ensuite traitée par 7,5 litres d'une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 35 g/litre, puis lavée par 5 litres d'eau A chaque fois, la phase aqueuse est mélangée avec la phase

organique, décantée et séparée.

La phase organique obtenue est mise en contact avec 750 g d'alumine, filtrée, concentrée jusqu'à un volume de 4 litres environ et reprise par 5 volumes d'hexane Le précipité obtenu est filtré et séché On obtient 300 g de produit que l'on met en suspension dans 1 litre d'isopropanol Après agitation à 55 C pendant 45 minutes, on filtre à 4 C Les eaux-mères de filtration sont concentrées à sec, reprises par 500 cm 3 de méthylisobutylcétone sur lesquels on verse 5 volumes d'hexane Le précipité est filtré, lavé à l'hexane et séché à 40 C sous pression réduite On obtient 69 g de PIIB brute contenant 36 %

de PIIB, 6 % de PIIA et ne contenant plus de PIA.

PREPARAION D'TUN PRODUIT COCRTSTA l TS Dans les exemples qui suivent, il a été démontré que le spectre de diffraction X du produit cocristallisé est différent du spectre de la

composante du groupe B cristallisée seule dans le même solvant, lors-

qu'elle existe.

Exemple 7

La PIIB brute obtenue précédemment à l'exemple 6 est mise en solution dans 190 cm 3 d'acétone On ajoute 33 g de Pl purifiée (PIA: 81,1 %, PIB: 12 %, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %) Apres 17 heures d'agitation à C, on obtient une suspension qui est filtrée à 4 C Le produit est lavé et séché Apres une recristallisation à 100 g/l dans l'acétone, on obtient 10 g de cristaux blancs dont le titre en PIIB+PIIF+PIIG

est 55 % et le titre en PIA+PIB+PIC+PID est 43 %.

Exemp)le 8 250 mg de PIIB purifiée, obtenue comme décrit ci-après à l'exemple 14, sont mis en solution dans 17 cm 3 d'acétate d'éthyle On ajoute 300 mg de Pl purifiée (PIA: 81,1 %, PIB: 12 %, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %) Apres 20 heures d'agitation à 20 C, filtration, lavage et

séchage, on obtient 125 mg de de cristaux blancs.

Titre en PIIB+PIIF+PIIG: 56 %; dont PIIB 54 %.

Titre en PIA+PIB+PIC+PID: 43 %.

Exemple 9

560 mg de PIIB pure obtenus comme décrit ci-après à l'exemple 14, sont mis en solution dans 5 cm 3 d'acétone On ajoute 480 mg de PIA

(titre 99,8 %) On agite 20 heures à 20 C et filtre la suspension.

Apres lavage par 1 cm 3 d'acétone et séchage pendant 30 heures à 40 C

sous pression réduite (< 1 k Pa), on obtient 590 mg de cristaux blancs.

Titre en PIIB+PIIF+PIIG: 56 %; dont PIIB 54 %.

Titre en PIA: 43 %.

Les eaux mères de la cristallisation précédente sont reprises et ad-

ditionnées d'une nouvelle charge de 560 mg de PIIB Le rapport PIIB/PIA est alors voisin de 4 Après 20 heures d'agitation, filtra- tion, lavage et séchage, on obtient 195 mg de cristaux de pureté et

de composition identiques à celles des cristaux issus du 1 er jet.

Exemple 10

En opérant comme décrit ci-dessus à l'exemple 9 mais en remplaçant la PIA par 480 mg de PIB (titre 97 %) on obtient 820 mg de cristaux blancs dont le titre en PIIB+PIIF+PIIG est 56 %; dont PIIB 54 % et

le titre en PIB est 43 %.

Exemple 1 1

En opérant comme décrit ci-dessus à l'exemple 9 mais en engageant 680

mg de PIIB et 580 mg de PIC (titre 95 %) dans 4 cm 3 d'acétone on ob-

tient 315 mg de cristaux blancs dont le titre en PIIB+PIIF+PIIG est

57 %; dont PIIB 55 % et le titre en Pl est 42 % (dont 37 % de PIC).

Exemple 12

En opérant comme décrit ci-dessus à l'exemple 9 mais en remplaçant la PIA par 480 mg de PID (titre 95 %) on obtient 475 mg de cristaux blancs dont le titre en PIIB+PIIF+PIIG est 55 %; dont PIIB 53 % et

le titre en PID est 39 %.

Exemiple 13-

En opérant comme décrit ci-dessus à l'exemple 9 mais en engageant 450 mg de PIIB et 380 mg de facteur S (Sl: 75,4 %, 54: 20,6 %) dans 4 cm 3 d'acétone on obtient 550 mg de cristaux blancs dont le titre en PIIB+ PIIF+PIIG est 58 %; dont PIIB 56 % et le titre en facteur S est

41 % (dont 37 % de Sl).

Diagrammes de diffraction X des produits des exemples 7 à 13: Dans le tableau IV ci-après sont données les intensités relatives des raies principales Les diagrammes de diffraction X sont effectués sur diffractomètre Phillips PW 1700 à anticathode de cobalt La référence a 100 est donnée pour la-raie à 15,8 A Les valeurs relatives sont

estimées par la mesure de la hauteur de la raie, fond continu déduit.

Tableau IV

ndistance Produit de l'exemple interrêticulaire À(A) Ez 7 |Ex 9 Ex 10 Ex 11 Ex 12 Ex 13

,8 100 100 100 100 100 100

11,8 40 34 35 32 43 28

,3 69 52 63 65 50 70

9,7 38 45 47 44 43 40

6,4 44 41 51 41 37 40

6,1 38 41 40 38 43 30

,9 75 64 70 63 67 74

,8 38 39 47 49 50 44

,2 92 75 79 71 70 70

,0 67 59 60 60 57 54

4,7 50 43 53 49 47 50

Les diagrammes de diffraction X sont similaires quel que soit le produit cocristallisé (les distances interréticulaires des raies

principales ne sont pas significativement différentes).

PîRTFTCAT To N N Q'u COM Pos E Du I rourp A

Exemple 14 -

9,3 g du produit obtenu à l'exemple 7 sont dissous dans 490 cm 3 de méthylisobutylcétone Cette solution est extraite deux fois par 370 cm 3 d'une solution aqueuse d'acide sulfurique 0,5 N puis lavée

par deux fois 150 cm 3 d'eau La phase organique est ensuite concen-

trée jusqu'à un volume de 80 cm 3 environ que l'on verse sur 5 volumes

d'hexane Le précipité obtenu est lavé, filtré et séché Pour élimi-

ner la méthylisobutylcétone, il est ensuite repris à 100 g/l dans l'acétone, versé sur 10 volumes d'hexane, lavé et séché On obtient 3,5 g d'un produit contenant la PIIB purifiée et ne contenant plus de PI.

Titre PIIB+PIIF+PIIG: environ 95 % dont 92 % de PIIB.

La présente invention concerne également les compositions pharmaceu-

tiques utilisables en médecine humaine ou vétérinaire qui contiennent

comme produit actif la nouvelle association purifiée de streptogra-

mine comprenant au moins une composante du groupe B des streptogra-

mines associée à la composante du groupe A de formule générale (Il), à l'état pur ou en présence d'un ou plusieurs diluants ou adjuvants

compatibles et pharmaceutiquement acceptables Ces compositions peu-

vent être utilisées par voie orale ou topique.

Comme compositions pour administration orale, peuvent être utilisés des comprimés, des gélules, des pilules, des poudres des lyophilisats

ou des granulés Dans ces compositions, le produit actif selon l'in-

vention peut être mélangé à un ou plusieurs diluants ou adjuvants inertes, tels que saccharose, lactose ou amidon Ces compositions peuvent également comprendre des substances autres que les diluants,

par exemple un lubrifiant tel que le stéarate de magnésium.

Les compositions pour administration topique peuvent être par exemple

des crèmes, des pommades, ou des lotions.

En thérapeutique humaine ou vétérinaire, les compositions selon l'in-

vention sont particulièrement utiles dans le traitement des infec-

tions d'origine bactérienne notamment les infections graves à cocci Grampositif: infections à staphylocoques (notamment les infections

à staphylocoque résistant à la méthicilline), infections à strepto-

coques (notamment sur les pneumocoques résistants à la pénicilline et aux macrolides); ils sont aussi particulièrement utiles dans le

traitement des infections à Hemophilus, Moraxella catarrhalis, Neis-

seria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Myco-

plasma pneumoniae, Ureaplasma urealyticum.

Les compositions selon l'invention peuvent être employées notamment dans le traitement des infections respiratoires hautes et basses (par exemple traitement des infections pulmonaires), dans le traitement

des infections cutanées, dans le traitement à long terme des infec-

tions osseuses ou articulaires, dans le traitement ou la prophylaxie

de l'endocardite en chirurgie dentaire et urinaire, dans le traite-

ment des maladies sexuellement transmisibles, ainsi que dans le trai-

tement des infections opportunistes bactériennes et parasitaires sur-

venant dans le SIDA et en prophylaxie du risque staphylococcique chez l'immunodéprimé.

D'une façon générale, le médecin déterminera la posologie qu'il es-

time la plus appropriée en fonction de l'âge, du poids, du degré de

l'infection et des autres facteurs propres au sujet à traiter Géné-

ralement, les doses sont comprises entre 0,4 et 3,5 g de produit ac-

tif en 2 ou 3 prises par jour, par voie orale pour un adulte.

Les exemples suivants, donnés à titre non limitatif, illustrent des compositions selon l'invention

Exemple A

On prépare selon les techniques habituelles des gélules opaques do-

sées à 250 mg de l'association PIB/PIIB cocristallisée.

Exem-ple B.

On prépare selon les techniques habituelles des gélules opaques do-

sées à 250 mg de l'association Facteur S/PIIB cocristallisé.

Exemiple C On prépare selon les techniques habituelles des comprimés dosés à 384 mg de produit actif, ayant la composition suivante: PIB/PIIB ( 45 %/55 %) 384 mg Hydroxypropylméthylcellulose 25 mg Stéarate de magnésium 35 mg Silice colloïdale 14 mg Amidon qsp 700 mg

Exemple D

On prépare selon les techniques habituelles des comprimés dosés à 384 mg de produit actif, ayant la composition suivante: Facteur S/PIIB ( 45 %/55 %) 384 mg Hydroxypropylméthylcellulose 25 mg Stéarate de magnésium 35 mg Silice colloïdale 14 mg Amidon qsp 700 mg

Claims

REVENDICATIONS 1 Une forme purifiée de streptogramines caractérisée en ce qu'elle est constituée d'une association d'au moins une composante du groupe B des streptogramines, de formule générale: CH 3 R 1 O O N N CH 3 f AI 1 H JR O O N R 2 N dans laquelle: A 1 est un radical de formule générale: ou O / N(CH 3) 2 0 NH OH 0 pour lequel R' est un atome d'hydrogène ou un radical hydroxy et Y est un atome d'hydrogène, un radical méthylamino ou un radical dimé- thylamino, R est un radical éthyle ou lorsque R' représente un atome d'hydrogène R peut également représenter méthyle, et R 1 et R 2 représentent un atome d'hydrogène ou bien, A 1 est un radical de formule: 0 N,CH 3 Il CH INH H CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 0 CH 3 R est un radical isobutyle, et R 1 est un radical hydroxy et R 2 est un radical méthyle, et d'une composante minoritaire du groupe A des streptogramines, de formule générale: o O H 3 C- H 3 C V R" dans laquelle R" est un atome d'hydrogène ou un radical méthyle ou éthyle. 2 Une forme purifiée de streptogramines selon la revendication 1 caractérisée en ce qu'elle contient moins de 6 % d'impuretés. 3 Une forme purifiée de streptogramines selon la revendication 1 ou 2, constituée d'un mélange dans des proportions de 10/90 à 90/10 (en poids), respectivement d'au moins une composante du groupe B des streptogramines et d'une composante minoritaire du groupe A des streptogramines telles que définies dans la revendication 1. 4 Une forme purifiée de streptogramines selon l'une des revendica- tions 1 à 3, constituée d'un mélange 20/80 à 80/20 (en poids) respec- tivement d'au moins une composante du groupe B des streptogramines et d'une composante minoritaire du groupe A des streptogramines telles que définies dans la revendication 1. Une forme purifiée de streptogramines selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce qu'il s'agit d'un composé cocristallisé d'une composante du groupe B des streptogramines et d'une composante minoritaire du groupe A des streptogramines telles que définies dans la revendication 1. 6 Utilisation d'un composé cocristallisé selon la revendication 5 pour la préparation d'une forme purifiée de streptogramines selon l'une des revendications 1 à 4. 7 Utilisation d'un composé cocristallisé selon la revendication 5 pour la purification d'une composante minoritaire du groupe A des streptogramines telle que définie dans la revendication 1. 8 Un procédé de préparation d'une forme purifiée de streptogra- mines selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on cocristallise la composante du groupe A des streptogramines, avec une composante du groupe B des streptogramines telles que défi- nies dans la revendication 1, puis le cas échéant associe le composé cocristallisé obtenu avec la (ou les) composante(s) convenable(s) pour obtenir une association dans les-proportions souhaitées. 9 Un procédé de purification de la composante du groupe A des streptogramines selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on prépare un composé cocristallisé de cette composante avec une composante du groupe B des streptogramines telle que définie dans la revendication 1. Une composante purifiée du groupe A des streptogramines telle que définie dans la revendication 1, lorsqu'elle est obtenue par l'intermédiaire d'un composé cocristallisé selon la revendication 5. 11 Une composante du groupe A des streptogramines de formule géné- rale: o O H 3 C, H 3 C, R" dans laquelle R" est un atome d'hydrogène ou un radical éthyle. 12 Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle contient une forme purifiée de streptogramines selon l'une des revendications

1 à 5, à l'état pur ou en présence de tout diluant ou adjuvant compa-

tible et pharmaceutiquement acceptable.