CZ285541B6

CZ285541B6 - Purifikovaná forma streptograminů, způsob její přípravy a farmaceutické kompozice tuto formu obsahující

Info

Publication number: CZ285541B6
Application number: CZ94326A
Authority: CZ
Inventors: Pascal Anger; Bertrand Bonnavaud; Alain Callet; Patrick Lefevre
Original assignee: Rhone-Poulenc Rorer S. A.
Priority date: 1993-02-17
Filing date: 1994-02-15
Publication date: 1999-09-15
Also published as: JPH06298664A; ZA941024B; CZ32694A3; BE1006554A3; PL302250A1; NO940533D0; PT101460B; IL108641A; FR2701709B1; FR2701709A1; ES2081763A1; GB9403057D0; GB2275269A; FI111009B; CA2115807A1; AU5510094A; GR940100078A; ITMI940192A0; AU678785B2; IT1269214B

Abstract

Purifikovaná forma streptograminů tvořené kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů obecného vzorce I, ve kterém A.sub.1 .sub..n.znamená skupiny obecného vzorce Ia nebo vzorce Ia', kde R' znamená atom vodíku nebo hydroxy-skupinu a Y znamená atom vodíku, methylaminovou skupinu nebo dimethylaminovou skupinu, R znamená ethylovou skupinu nebo v případě, že R' znamená atom vodíku, R může také znamenat methylovou skupinu, a R.sub.1 .n.a R.sub.2 .n.znamenají atom vodíku, nebo také A.sub.1 .n.znamená skupinu vzorce Ib, R znamená isobutylovou skupinu a R.sub.1 .n.znamená hydroxy-skupinu a R.sub.2 .n.znamená methylovou skupinu, a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů obecného vzorce II, ve kterém R'' znamená atom vodíku nebo methyklovou skupinu nebo ethylovou skupinu, ve stavu kokrystalizátoru, koprecitátu nebo fyzikální směsi prášku.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká purifikované formy streptograminů, obsahující alespoň jednu složku skupiny B streptograminů sdruženou s alespoň jednou „minoritní“ složkou skupiny A, která je dále definována obecným vzorcem II.

Dosavadní stav techniky

Ze známých streptograminů byl pristinamycin (RP 7293), který je antibakteriální účinnou látkou přírodního původu, produkovanou mikroorganismem Streptomyces pristinaespiralis, poprvé izolován v roce 1955. Tento pristinamycin, který je komerčně dostupný pod označením Pyostacine^R, je v podstatě tvořen pristinamycinem LA a pristinamycinem IIA.

Další antibakteriálně účinná látka ze skupiny straptograminů virginiamycin byl připraven z mikroorganismu Streptomyces virginiae, ATCC 13161 /Antibiotics and Chemotherapy, 5, 632 (1955)/. Uvedený virginiamycin (Staphylomycine^R) je v podstatě tvořen faktorem S a faktorem M],

V patentu US 3 325 359 jsou popsané farmaceutické kompozice, obsahující antibiotické látky, tvořící antibiotikum 899: faktor S a faktor Ml.

V patentu RF 2 619 008 je popsáno použití složek skupiny A a skupiny B pro léčení akné.

Antibakteriálně účinné látky přírodního původu skupiny streptograminů jsou tvořeny směsí dvou skupin složek, tj. směsí složek skupiny B a složek skupiny A, přičemž každá z těchto skupin má vlastní antibakteriální účinnost. Bylo prokázáno, že kombinace, tvořená oběma skupinami těchto složek, vyvolává synergii účinku, přičemž důsledkem této synergie je bakteriostatická účinnost, zesílení baktericidního účinku a rozšíření spektra účinnosti.

V Streptogramine ais Modelsysteme tur den Kationentransport durch Membranen, issertation zur Erlangung des Doktargrades der Mathematisch-Naturwissenschaftlichen Facultát der GeorgAugust Universitat zu Gottingen, Góttingen 1979, v Antibiotics III, 521 (1975) a v Antibiotics of the virginiamycin family, Inhibitors which contain synergistic component, C. Cocito, Microbiological Reviews, 145-98 (1979) jsou popsané složky skupiny A a skupiny B straptograminů. Přírodní pristinamycin, jakož i jednotlivé složky, které ho tvoří, byly rovněž popsané J. PreuďHomme-m, P. Tarridec-em a A. Belloc-em v Bull. Soc. Chim. Fr., 2, 585 (1968).

Všechny pokusy připravit purifikovanou kombinaci straptograminů vždy zahrnovaly majoritní složku skupiny A /pristinamycin IIA (PIIA)/, o které se předpokládá, že je zodpovědná za uvedenou účinnost a synergii účinku. Ostatně existují studie, ve kterých se dochází k závěru, že pro vyvolání nejlepšího synergického účinkuje nejdůležitější právě tato složka.

Nicméně tyto pokusy připravit purifikovanou účinnou kombinaci straptograminů nebyly nikdy korunovány úspěchem, a to jednak vzhledem k těžkostem, ke kteiým dochází při její průmyslové výrobě, a zejména vzhledem ktomu, že purifíkovaný pristinamycin IIA je krystalickým produktem, o kterém bylo zjištěno, že jeho dostupnost pro biologický organismus je příliš omezená na to, aby s ním mohlo být počítáno jako s účinnou látkou léčiva.

-1 CZ 285541 B6

Z hlediska průmyslové přípravy takových produktů neumožňují techniky, které jsou až dosud k dispozici, získat v preparativním měřítku dostatečně purifikovanou formu a produkci dostatečně stálých a reprodukovatelných kvalitních šarží, která by splňovala zákonné požadavky registračního řízení v některých zemích.

Jako příklad lze uvést, že průmyslové šarže přírodního pristinamycinu obsahují po purifikaci množství nečistot, které může dosahovat až 20 %. Až dosud provedené pokusy vyčistit tento produkt se vždy setkaly s neúspěchem nebo měly často za následek degradaci některého ze skupin složek vzhledem k tomu, že se jedná o křehké produkty, u kterých mohou purifikační operace způsobit otevření cyklické struktury nebo dehydrataci složek skupiny A. Vzhledem k těmto skutečnostem panuje již mnoho led přesvědčení, že již nebude dosaženo dalšího zlepšení stupně čistoty uvedených šarží. Ještě v roce 1988 byla purifikace uvedených šarží stále považována za problém (o tom viz. J. of Liq. Chromatography, 11(11), 2367 (1988). Rovněž v roce 1988 uvedli N.K. Sharma a M.J.O. Anteunis, že také separace a purifikace složek virginiamycinu jsou možné pouze pro analytické účely, avšak nerealizovatelné jsou možné pouze pro analytické účely, avšak nerealizovatelné pro výrobu těchto produktů, a to vzhledem k použitím, se kterými se při separaci a purifikaci těchto složek setkali (Bull. Soc. Chim. Gelg., 97 (3) 193 (1988).

V důsledku této situace byla komerční využitelnost pristinamycinu (Pyostacine^R) definitivně omezena pouze na některé země, jakými jsou Francie a Belgie. Stejně je tomu v případě virginiamycinu (Staphylomycine^R), který je komerčně využíván pouze v omezeném počtu zemí, a to pokud jde o humánní medicínu, jakož i v případě mikamycinu, jehož komerční využitelnost (omezená na Japonsko) je v současné době pozastavena. Pro určitou část lidské populace to má tudíž za následek, že je zbavena možnosti léčení těžkých infekcí, způsobených grampozitivními kroky (zejména infekcí, způsobených stafylokoky, rezistentními na methicillin) nebo léčení nemocí, přenosných sexuálním stykem.

V oblasti antibakteriálně účinných látek praktičtí lékaři velmi dobře znají, že po podání některých skupin antibiotik může dojít k alergiím nebo rezistencím na podávaná antibiotika /The New England Joumal of Medicine, 324 (9), 601 (1991)/. V klinické praxi jsou zejména známé četné rezistantní kmeny mikroorganismu Staphylococcus aureus. Vzhledem ktomu je pro praktického lékaře velmi důležité mít k dispozici široké spektrum chemicky odlišných skupin antibiotik, aby bylo možné přizpůsobit léčení konkrétní léčené nemoci. Nemožnost komerční využitelnosti uvedené skupiny antibakteriálně účinných látek může mít velmi vážné, ba i dramatické následky, poněvadž zbavuje možnosti léčení těchto pacientů, které nesnáší ostatní skupiny antibiotik.

Provedené purifikační pokusy měly takto vždy za cíl odstranit minoritní složky straptograminů, neboť tyto minoritní složky jsou považované za postradatelné a spíše za nečistoty.

Z těchto minoritních složek skupiny A přírodních streptograminů představuje pristinamycin IIB (PIIB) minoritní složku, jejíž hmotnostní obsah je nižší než 10 % hmotnosti, vztaženo na celkovou hmotnost přírodního pristinamycinu, zatímco ve virginiamycinu je jeho obsah nejčastěji roven asi 8 % hmotnosti nebo dokonce asi 6 % hmotnosti.

Podstata vynálezu

Nyní bylo nově zjištěno, že toto zjištění tvoří podstatu vynálezu, že kombinace, tvořená jednou nebo několika složkami skupiny B a jednou nebo několika minoritními složkami skupiny A, je obzvláště zajímavá vzhledem k její biologické účinnosti.

Předmětem vynálezu je proto purifikovaná forma straptograminů, jejíž podstata spočívá v tom, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů obecného vzorce I

-2CZ 285541 B6

₅ (la), (ia')₎ ve kterém R¹ znamená atom vodíku nebo hydroxy-skupinu a Y znamená atom vodíku, methylaminovou skupinu nebo dimethylaminovou skupinu,

R znamená ethylovou skupinu, nebo v případě, že R¹ znamená atom vodíku, potom R může rovněž znamenat methylovou skupinu a

Ri a R₂ znamenají atom vodíku, nebo také

Ai znamená skupinu vzorce

(Ib),

-3CZ 285541 B6

R znamená izobutylovou skupinu, a

R, znamená hydroxy-skupinu a R₂ znamená methylovou skupinu, a jednou nebo několika minoritními složkami skupiny A obecného vzorce II

(II), ve kterém R znamená atom vodíku nebo methylovou nebo ethylovou skupinu, ve vzájemném hmotnostním poměru 10:90 až 90:10, ve stavu kokrystalizátu, koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků, přičemž tato purifikovaná směs streptograminů obsahuje méně než 6 % hmot, doprovodných nečistot.

Předmětem vynálezu je dále purifikovaná forma straptograminů, jejíž podstata spočívá v tom, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupin B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů, definovaných výše, ve vzájemném hmotnostním poměru 10:90 až 90:10 a ve stavu koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.

Předmětem vynálezu je rovněž purifikovaná forma streptograminů, jejíž podstata spočívá v tom, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů, definovaných výše, ve vzájemném hmotnostním poměru 20:80 až 80:20 a ve stavu koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.

Předmětem vynálezu je také purifikovaná forma streptograminů, jejíž podstata spočívá v tom, že se jedná o společně vykrystalizovanou směs jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů, definovaných výše, v molámím poměru 1/2.

Předmětem vynálezu je také způsob přípravy purifikované formy streptograminů podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že se v organickém rozpouštědle, jakým je keton, ester, chlorované rozpouštědlo nebo nitril, společně vykrystalizuje surový produkt minoritních složek skupiny A streptograminů obecného vzorce II, obsahující alespoň 30 % hmotn. alespoň jedné minoritní složky skupiny A streptograminů, a složky nebo složky skupiny B streptograminů obecného vzorce I, přičemž použité množství složky nebo složek skupiny B streptograminů obecného vzorce I je zvoleno tak, že zbytková koncentrace této složky nebo těchto složek po společné krystalizaci je nižší než rozpustnost této složky nebo těchto složek v rozpouštědle, použitém ke společné krystalizaci, načež se případně buď k získané purifikované směsi streptograminů ve formě koprecipitátu přidá složka nebo složky skupiny A nebo B streptograminů k dosažení purifikované směsi streptograminů, obsahující složku nebo složky skupiny A a B streptograminů v požadovaném poměru, nebo se získaný koprecipitát nebo složka nebo složky skupiny A streptograminů, izolované z tohoto koprecipitátu, použijí pro přípravu purifikované směsi streptograminů ve formě koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.

Předmětem vynálezu je konečně farmaceutická kompozice, jejíž podstata spočívá v tom, že obsahuje puntíkovanou formu streptograminů, která je uvedena výše, v čistém stavu nebo

-4CZ 285541 B6 v přítomnosti libovolného kompatibilního a farmaceuticky přijatelného ředidla nebo libovolné kompatibilní a farmaceuticky přijatelné přísady.

Kombinace podle vynálezu vykazují ve srovnání s přírodním produktem (jakým je například přírodní virginiamycin nebo přírodní pristinamycin) a s kombinacemi, ve kterých se výrazně uplatňuje majoritní složka skupiny A, výrazně vyšší biologický účinek in vivo a kromě toho mají zcela uspokojivou biodisponibilitu (dosažitelnost pro organismus). Kromě toho mohou být tyto kombinace připraveny ve velkém měřítku.

Takto je možné získat purifíkovanou a biodisponovatelnou formu finálního produktu, který má dobrou úroveň účinku a který obsahuje méně než 6 % nečistot.

Produkt obecného vzorce II, ve kterém R znamená ethylovou skupinu a který je dále nazýván pristinamycin IIF (PIIF), a produkt obecného vzorce Π, ve kterém R znamená atom vodíku a který je dále nazýván pristinamycin IIG (PIIG), jsou nové produkty, které tvoří velmi minoritní složky streptograminů, přičemž jejich hmotnostní obsah v šaržích přírodního produktu je nižší než 0,5 %.

Kombinace podle vynálezu jsou výhodně připraveny v poměrech od 10/90 do 90/10 (hmotnostně) nebo výhodně v poměrech od 20/80 do 80/20. Vyskytují se ve stavu fyzikální směsi prášků nebo také, a to tvoří další znak vynálezu, ve stavu kopresipitátu anebo podle třetího znaku vynálezu ve stavu kokrystalizátu, který je definován dále.

Vynález se také týká purifíkovaných forem, tvořených kombinacemi, získanými společnou krystalizací alespoň jedné složky skupiny B obecného vzorce I a alespoň jedné složky skupiny A, definované obecným vzorcem II.

Společná krystalizace se provádí při zachování konstantní stechiometrie 1 molu složky nebo složek obecného vzorce I a 2 molů složky nebo složek skupiny A obecného vzorce II (tato stechiometrie odpovídá vzájemnému hmotnostnímu poměru asi 43-44/57-56 v případě, kdy složkou A je produkt obecného vzorce I, ve kterém A] má strukturu Ia).

Společně vykrystalizovaná kombinace podle vynálezu může být alternativně použita jako purifikované a stabilní antimikrobiální činidlo, které má rovněž zlepšenou účinnost in vivo, jakož i dobrou biodisponibilitu, nebo také jako purifíkační prostředek minoritní složky streptograminů, odpovídající obecnému vzorce II.

Ve skutečnosti nebylo doposud nikdy možné purifikovat složku skupiny A obecného vzorce II krystalizací. Až dosud byly známé pro přípravu purifikovaného produktu skupiny A obecného vzorce II pouze chromatografické metody, přičemž dosud nebyl znám žádný purifíkační postup, který byl umožňoval izolaci těchto produktů ve velkém měřítku.

Nyní bylo prokázáno, že složka skupiny A obecného vzorce II může být získána v čistém stavu postupu zahrnujícím přípravu výše uvedené společně vykrystalizované kombinace. Přitom se postupuje tak, že surová směs, obsahující alespoň 30 % minoritní složky skupiny A, odpovídající obecnému vzorce II, se uvede do roztoku v organickém rozpouštědle, jakým je keton (aceton, methylethylketon, methylizobutylketon a podobně), ester (například ethylacetát, izopropylacetát, butylacetát a izobutylacetát), chlorované rozpouštědlo (methylen chlorid, chloroform, 1,2dichlorethan a podobně) nebo nitril (například acetonitril), načež se přidá složka skupiny B, definovaná obecným vzorce I, načež se krystalizací získá společně vykrystalizovaná kombinace s výše uvedeným poměrem složek. Je samozřejmé, že množství zavedené sloučeniny obecného vzorce I se vhodně zvolí tak, aby raziduální koncentrace tohoto produktu (po společné krystalizací) byla nižší, než je jeho rozpustnost v uvedeném prostředí. Je rovněž samozřejmé, že variace ve vzájemných obsazích výchozího prostředí vzhledem k produktu obecného vzorce II a

-5CZ 285541 B6 vzhledem k produktu obecného vzorce I nezpůsobí modifikaci získané společně vykrystalizované kombinace. Takto získaná společně vykrystalizovaná kombinace, uvedená do roztoku v rozpouštědle, jakým je například methylizobutylketon nebo dichlorethan, a uvedená do styku s kyselým prostředím (například kyselina sírová nebo kyselina chlorovodíková) umožňuje po 5 zpracování organické fáze rozpouštědlem, jakým je například hexan, získat purifikovanou minoritní složku skupiny A, která je prosta složky skupiny B.

Výhodou této společně vykrystalizované kombinace je výrazně zvýšená stabilita, zvýšená čistota a zejména skutečnost, že umožňuje snadnou industrializaci.

Je také samozřejmé, že tato metoda může být také přizpůsobena pro přípravu kokrystalizátů s modifikovanými deriváty přírodních složek skupiny B streptograminů a že takové kokrystalizáty rovněž spadají do rozsahu vynálezu. Stejně tak do rozsahu vynálezu spadá příprava purifikovaných forem minoritních složek obecného vzorce II z těchto kokrystalizátů.

Výhodné provedení vynálezu zahrnuje kombinaci pristinamycinu IB (tak, jak byl definován výše, když A] znamená radikál obecného vzorce Ia, ve kterém znamená methylaminovou skupinu a R' znamená atom vodíku, a R znamená ethylovou skupinou) nebo virginiamycinu S1 (tak, jak byl definován výše, když Aj znamená skupinu obecného vzorce Ia, ve kterém Y a R' znamenají 20 atomy vodíku, a R znamená ethylovou skupinu) nebo směsi virginiamycinu S1 a virginiamycinu

S4 (tak, jak byl definován výše, když A] je definován jako pro virginiamycin S1 a R znamená methylovou skupinu) s pristinamycinem IIB (tak, jak byl definován výše obecným vzorcem II, ve kterém R znamená methylovou skupinu), která obsahuje méně něž 6 % nečistot, výhodně méně než 3 % nečistot.

Výhodné provedení způsobu podle vynálezu rovněž zahrnuje purifikovaný streptogramin, tvořený kombinací složky skupiny B streptograminů, definované obecným vzorcem I, a složky skupiny A obecného vzorce II, obsahující složky skupin B a A v konstantním molámím poměru asi 1/2.

Nové kombinace alespoň jedné složky B streptograminů obecného vzorce I a alespoň jedné složky skupiny A obecného vzorce II mohou být podle vynálezu získány například přípravou výše definované společně vykrystalizované kombinace. Jestliže má být získána kombinace s různými obsahy složek, potom může být k takto připravené společně vykrystalizované 35 sloučenině přidána alespoň jedna ze složek obecného vzorce I nebo alespoň jedna ze složek skupiny A obecného vzorce II, které byly předběžně purifikovány, a to ve vhodném množství k dosažení požadovaného poměru složek, nebo může být také složka skupiny A obecného vzorce II (nebo jejich směs) purifikována z kokiystalizátu a potom smíšena v požadovaném poměru s jednou nebo několika složkami skupiny B obecného vzorce I. Alternativně mohou být 40 kombinace podle vynálezu připraveny po izolaci složky nebo složek skupiny B a složky skupiny

A obecného vzorce II zodpovídajícího přírodního streptograminů purifikací každé z těchto složek a potom smíšením purifikovaných složek v požadovaných poměrech, které byly definovány výše.

Kombinace podle vynálezu mohou být rovněž společně vysráženy v požadovaných poměrech z roztoku složek obecného vzorce I a II (nebo alternativně z roztoku kokrystalizátů a jedné ze složek obecného vzorce I nebo II) v methyl izobuty(ketonu, acetonu nebo methylenchloridu, nalitého do hexanu, cyklohexanu nebo vody.

Příprava a separace složek skupin A a B se provádí fermentací a izolací složek z fermentačního rmutu metodou, popsanou J. Preuďhommem a kol. v Bull. Soc. Chim. Fr., sv. 2, 585 (1968), v Antibiolg. And. Chemother., 5, 632 (1955) nebo 7, 606 (19577, v Chromatog. Sym., 2° Brusel, 181 (1962), v Antibiot. Ann., 728-784 (1955-55), v patentu US 3 299 047 nebo v Streptogramine ais Modelsysteme fur den Kationentransport durch membranen, Dissertation zur Erlangung des

-6CZ 285541 B6

Doktorgrades der Matematisch-Naturwissenschaftlichen Facultat der Georg-August Universitat zu Góttingen, Gottingen 1979 nebo postupy, které jsou analogické s těmito postupy anebo postupy, popsanými v dále uvedených příkladech. Obzvláště v případě pristinamycinů se separace složek skupiny A a B provádí suspendováním surového streptograminu v organickém rozpouštědle, jakým je acetát (například ethylacetát), následným odfiltrováním nebo odstředěním surové složky skupiny A a extrakcí této složky skupiny B v kyselém vodném prostředí a následnou reextrakcí v chlormethylenovém prostředí. Separace složek skupin A a B může být rovněž provedena kyselou extrakcí roztoku surového streptograminu v methylizobutylketonu a potom izolací extrakcí složky skupiny B z vodné fáze a izolací složky skupiny A precipitací z organické fáze.

Po separaci purifikace složek skupiny B streptograminů může být provedena krystal izací v alkoholu, jakým je například ethanol, methanol nebo izopropanol, v acetátu (například v izopropylacetátu nebo butylacetátu), v ketonu (například v methylenhylketonu) nebo v acetonitrilu, nebo chromatograficky. Purifikace složek skupiny A obecného vzorce II může být provedena chromatograficky za použití eluční soustavy, tvořené směsí acetonitrilu a vody.

Alternativně se příprava složek skupin A a B obecného vzorce II, resp. I provádí postupem, popsaným ve francouzském patentu 2 689 518 a spočívajícím ve fermentaci, rozdělené do následujících stupňů:

- první stupeň (fakultativní), mutageneze na neselektivním produkčním mikroorganismu streptograminů, a

- druhý stupeň, selekce selektivních mikroorganismů.

Neselektivními mikroorganismy jsou obecně Actinomycetes a houby. Výchozími mikroorganismy, které jsou použitelné při tomto způsobu, jsou zejména neselektivní produkční mikroorganismy streptograminu, zvoleného z množiny, zahrnující pristinamycin, virginiamycin, mukamycin, ostreogrycin, viridogrisein, vemamycin a etamycin. Příklady použitelných neselektivních mikroorganismů jsou uvedeny v následující tabulce 1.

Tabulka 1

Mikroorganismy

Houby

Micromonospora sp.

Streptomyces

Streptomyces alborestus

Streptomyces griseus (NRRL2426)

Streptomyces lodensis (ATCC11415)

Streptomyces mitakaensis (ATCC15297)

Streptomyces ostreogriseus (ATCC27455)

Streptomyces pristinaespiralis (ATCC25486)

Streptomyces virginiae (ATCC13161)

Actinomyces

Actinomyces deghestanicus

Antibiotika vemamycin virginiamycin viridogrisein vemamycin mikamycin ostreogrycin pristinamycin virginiamycin etamycin

-7CZ 285541 B6

Uvedená příprava se zejména provádí za použití mikroorganismů, zvolených z množiny, zahrnující Streptomyces alborectus, Streptomyces mitakaensis, Streptomyces pristinaespiralis, Streptomyces ostreogriseus a Streptomyces virginiae.

První stupeň přípravy spočívá v modifikaci neselektivního mikroorganismu v tom smyslu, aby se zvýšila jeho globální schopnost produkovat antibiotikum nebo/a aby syntetizoval pouze jednu z obou složek streptograminů. Toho může být dosaženo genetickou modifikací (mutace v úrovni genů pro strukturu enzymů implikovaných v biosyntéze nebo v úrovni sekvencí, umožňujících expresi takových strukturních genů nebo podobně) nebo biochemickou modifikací (modifikace post-translačního mechanismu, alterace retroinhibičního mechanismu a podobně). Za tím účelem se používají různé mutagenezní nástroje:

- fyzikální činidla: rentgenové paprsky, ultrafialové paprsky, nebo

- chemická činidla: alkylační činidla, jakými jsou například:

ethylmethansulfonát (EMS), N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidin (Delic a kol., Mutation Res. 9 (1970) 167-182) nebo 4-nitrochinolin-l-oxid (NQO), bialkylační činidla, interkalační činidla, nebo

- libovolný systém mutační inzerce do DNA a zejména transposony, integrační plazmidy, fágy nebo profágy, nebo také

- fúze protoplastů (Cohen, Nátuře 268 (1977) 171-174).

Tyto nástroje (samotné nebo v kombinaci) mohou být aplikovány na selektivní mikroorganismy ve stavu spor, vyklíčených nebo klíčících spor nebo na mycelium. Tato příprava může také využívat manipulací (náhodných nebo řízených), umožňujících získat mikroorganismy, schopné selektivně produkovat jednu složku streptograminů z neselektivních mikroorganismů.

Druhý stupeň přípravy se týká identifikace a izolace selektivních mikroorganismů. Tento stupeň může být uskutečněn zejména použitím testu citlivosti vůči určitému mikrobu. Existují různé mikroby, které jsou specificky senzitivní a složky skupiny A nebo na složky skupiny B streptograminů: například Bacillus subtilis (ATCC663), Bacillus circulans, Bacillus cereus (Watanabe, J. Antibio. Ser.A XIII (1) (1960) 62), nebo C. xeroxis (citovaný Watanabe), které jsou specificky senzitivní na složky skupiny B, zatímco Streptococcus agalactiae B96 (Antimicrob, Agents Chemother. 10 (5) (1976) 795), Micrococcus luteus (citovaná Přikrylová) nebo Sarcina lutea (ATCC9341) jsou specificky citlivé na složky skupiny A. Rovněž je možné uměle připravit mikroby specificky senzitivní na některou složku streptograminů, a to inzercí do mikrobu senzitivního na obě složky streptograminů genu s rezistancí vůči jedné z těchto složek. Některé z těchto genů již byly klonovány (Le Goffic a kol., J. Antibiol. XXX(8), 665 (1977); Le Goffíc a kol., Ann. Microbiol. Inst. Pasteur 128B, 471 (1977); Solh a kol., Path. Biol. 32(5), 362 (194), a takové geny se do jednotlivých mikrobů zavádí klasickými postupy molekulární biologie. Selekční stupeň může být rovněž proveden testem ELIA za použití specifických protilátek složek A nebo B, nebo také analytickými postupy, jakými jsou chromatografie (kapalinová chromatografie, chromatografie na tenké vrstvě a podobně). V případě testu citlivosti vůči mikrobu je navíc výhodné vyhodnotit selekci chromatografíckým stanovením.

V rámci vynálezu je takto možné v průmyslovém měřítku získat novou purifikovanou formu streptograminů, jejíž obsah nečistot a definice a stálost složení odpovídá zákonným požadavkům pro registrační řízení a která má vyšší účinnost in vivo, zlepšenou biodisponovatelnost a nižší toxicitu. Tato nová kombinace takto v četných zemích umožní na rozdíl od minulé doby léčení za použití antibakteriálně účinných látek této skupiny sloučenin.

-8CZ 285541 B6

Nová kombinace složky skupiny B streptograminů obecného vzorce I a složky skupiny A streptograminů obecného vzorce II vykazuje obzvláště zajímavou účinnost in vivo vůči gram-pozitivním mikrobům. Bylo prokázáno, že in vivo u myší má vůči mikroorganismu Staphylococcus aureus IP 8203 účinnost při perorálních dávkách od 30 do 50 mg/kg.

Dále jsou pro ilustraci uvedeny hodnoty DC₅₀ při perorální aplikaci několika kombinací složek obecných vzorců I a II myším, které byly experimentálně infikovány mikroorganismem Staphylococcus aureus IP 8203.

V následující tabulce 2 jsou uvedeny studované kombinace, které byly připraveny společnou koprecipitací hexanem z roztoku složek obecných vzorců I a II v methyliozobutylketonu nebo v acetonu.

Tabulka 2

Kombinace produkt I/produkt II PI (příklad 1/PIIB (příklad 18)

DC₅₀ (mg/kg) p.o.

10/90	44
20/80	32
30/70	30
70/30	30
80/20	30
90/10	50

V následující tabulce 3 jsou ilustrovány kombinace společně vykrystalizovaných produktů, připravené postupy, popsanými v příkladech.

Tabulka 3

Kombinace společně vykrystalizovaných: produkt I/produkt II

DC₅₀ (mg/kg) p.o.

PI/PIIB (příklad 9)	38
PIA/PIB (příklad 11)	28
ΡΙΒ/ΡΠΒ (příklad 12)	32
PIC/PIB (příklad 13)	36
PIB/PIIB (příklad 14)	50
Faktor S/PIIB (příklad 15)	32
Faktor Sl/IIB (příklad 16)	50
Příklad S/PIIF (příklad 17)	50

V následující tabulce 4 je popsána kombinace, která je připravena ve formě fyzikální směsi prášků.

-9CZ 285541 B6

Tabulka 4

Kombinace produktu I/produkt II

DC_S0 (mg/kg) p.o.

PIA (příklad 1)/PIIB (příklad 18)

30/70

PIA (příklad 1)/PIIB (příklad 18)

50/50

Faktor S (příklad 5)/PIIB (příklad 18)

30/70

Navíc není nová kombinace toxická: při perorální dávce 150 mg/kg (2 podání) nelze u myší pozorovat žádnou známku toxicity.

Když se v rámci vynálezu společně vykrystalizovaná kombinace použije jako purifikační prostředek složky obecného vzorce II, může být tato získána kyselou extrakcí roztoku společně vykrystalizované sloučeniny v ketonu (například methylizobutylketon) a potom izolací extrakcí složky skupiny A vysrážením z organické fáze.

V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí konkrétních příkladů jeho provedení, které mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují předmět vynálezu, který je jednoznačně vymezen formulací patentových nároků. V těchto příkladech jsou obsahy uvedeny ve hmotnostních procentech.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 kg surového pristinamycinu /pristinamycin LA (PIA): 20,7 %, pristinamycin IB (PIB): 3,9 %, pristinamycin IC (PIC): 0,6 %, pristinamycin ID (PID): 0,3 %, pristinamycin IIB (PIIB): 8 %, pristinamycin IIA (PILA): 45 %, pristinamycin IIF (PUF): méně než 0,5 % nestanoven), pristinamycin IIG (PIIG): méně než 0,5% (nestanoven)/ se suspenduje ve 210 litrech ethylacetátu a míchá po dobu 15 hodin při okolní teplotě. Suspenze se zfiltruje a ethylacetátový filtrát se dvakrát extrahuje 20 litry 1N kyseliny sírové a potom 20 litry destilované vody. Sloučené vodné fáze se 6 krát promytí 15 litry ethylacetátu, načež se jejich pH nastaví na hodnotu 7 přidáním 30 litrů 10% hydrogenuhličitanu sodného a potom se extrahují třikrát 30 litry methylenchloridu. Methylenchloridové fáze se sloučí a promyjí 10 litry destilované vody. Methylenchlorid se potom oddestiluje a nahradí 50 litry ethanolu. Směs se potom zahřívá kvaru pod zpětným chladičem v přítomnosti 0,8 kg aktivního uhlí L3S po dobu 30 minut. Po filtraci a dvojnásobném promytí 5 litry ethanolu se směs ochladí v průběhu 15 hodin až na teplotu 10 °C. Po jedné hodině na teplotě 10 °C se suspenze zfiltruje a třikrát promyje 7 litry ethanolu. Po vysušení pevného podílu při teplotě 40 °C za sníženého tlaku se získá 5,7 kg purifikovaného pristinamycinu I (dále je nazýván PI).

Čistota: 96,8 % (PIA: 81,1 %, PIB: 12 %, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %); Výtěžek vztažený na PIA: 74 %.

1500 g purifikovaného PI se vyjme 9 litry, 1,2-dichlorethanu, načež se přidá 1,5 ekvivalentu anhydridu kyseliny jantarové a 0,015 ekvivalentu dimethylaminopyridinu. Získaný roztok se udržuje po dobu jednoho týdne při teplotě 20 °C, načež se zavede do kolony, obsahující 10 kg silikagelu (20 až 45 pm, výška sloupce: 1 m a průměr sloupce: 20 cm). Eluce se provádí

-10CZ 285541 B6 perkolací směsi 1,2-dichlorethanu a methanolu po dobu 6 hodin při průtoku 18 litrů za hodinu. Obsah methanolu (obsah vody 5 %) se zvyšuje v průběhu chromatografie z 0 na 4 %. Jímá se 47 frakcí o objemu 2,4 litru.

Frakce 5 až 15 se sloučí, 1,2-dichlorethan se odpaří a nahradí 5 litry ethanolu. Po krystalizaci se získá 365 g PIA o čistotě 99,8 %.

Příklad 2

Frakce 36 až 39, jímané při chromatografii, popsané v příkladu 1, se sloučí a 1,2-dichlorethan se oddestiluje, přičemž se takto získá 210 g pevného podílu. 40 g tohoto pevného podílu se vyjme 8 litry vody, ke které se přidá 90 cm³ 10N kyseliny chlorovodíkové. Po třech hodinách zahřívání na teplotu 90 °C se roztok neutralizuje na hodnotu pH 6,5 přidáním hydrogenuhličitanu sodného. Roztok se extrahuje třikrát 1 litrem ethylacetátu a získaný extrakt se dvakrát promyje 0,2 litru vody. Po zpracování aktivním uhlím se odpaří ethylacetát a nahradí se 600 cm³ ethanolu. Po rekrystalizaci se získá 20 g PIB o čistotě 97 %.

Příklad 3

Frakce 22 až 26, jímané při chromatografii, popsané v příkladu 1, se sloučí a 1,2-dichlorethan se odpaří, přičemž se získá 139 g pevného produktu. Tento pevný produkt se vyjme minimálním množstvím 1,2-dichlorethanu a směs se zavede na sloupec silikagelu. Eluce se provádí perkolací směsi 1,2-dichlorethanu a methanolu po dobu 6 hodin při průtoku 18 litru za hodinu. Obsah methanolu (obsah vody 5 %) se v průběhu chromatografie zvýší z 0 na 5 %. Jímá se 48 frakcí o objemu 2,4 litru. Frakce 38 až 43 se odpaří a pevný zbytek se vyjme 300 cm³ ethanolu. Po rekrystalizaci se získá 22 g PI, obsahující 40 % PIC. Následné chromatografie na silikagelu (20 až 45 pm) za použití eluční soustavy, tvořené směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 98/2, poskytnou 5 g pevného produktu, který po vytřepání do methylizobutylketonu a rekrystalizaci z ethanolu má obsah PIC rovný 95 %.

Příklad 4

1000 g PI, získaného postupem, popsaným v příkladu 1, se rozpustí v minimálním množství chloroformu a purifikuje v následných frakcích na sloupci silikagelu (20 až 45 pm). Po eluci chloroformem, obsahujícím 2 až 5 % methanolu, se získá produkt, který se zahustí k suchu. Tento produkt se potom purifikuje dvěma následnými průchody sloupcem pryskyřice Diaion^R, perkolovaným směsí acetonitrilu a vody v objemovém poměru 60/40. Frakce jsou monitorované chromatograficky. Frakce, obsahující PID, se sloučí a zahustí k suchu. Takto se získají asi 3 g produktu, obsahující 60 % PID. Dodatečná purifikace se provádí protiproudou chromatografii za použití směsi rozpouštědel, tvořené methylizobutylketonem, acetonem a kyselinou mravenčí v objemovém poměru 40/2/40. Po koncentraci k suchu frakcí, obsahujících PID, se získá 1 g pevného produktu, obsahujícího 95 % PID.

Příklad 5

400 g Staphylomycinu^R (ve formě tablet - výchozí složení: virginiamycin S1 (Sl): 3,4%, virginiamycin S4 (S4): 0,9 %) se zavede do 4 litrů vody.

-11 CZ 285541 B6

Tablety se dezintegrují mícháním po dobu 15 minut při teplotě 20 °C. Přidá se 1 litr methylenchlorid a v míchání se pokračuje ještě po dobu jedné hodiny. Methylenchloridová fáze se potom dekantuje a zfiltruje, načež se v průběhu 30 minut nalije do 5 litrů míchaného hexanu. Pojednohodinovém míchání se suspenze zfiltruje, přičemž se jímá pevný podíl, který se třikrát promyje 250 cm³ hexanu. Po vysušení se získá 52 g pevného produktu, který se suspenduje ve 370 cm³ethylacetátu. Potom se provedou dvě následná intenzivní míchání při teplotě 20 °C v délce 10 hodin. Filtrát odpovídající každému zobou míchání se zahustí k suchu, načež se rozpustí v 850 cm³ methanolu, zahřívaného na teplotu varu pod zpětným chladičem. Po postupném snížení teploty až na -20 °C v průběhu 16 hodin se filtrací izoluje pevný podíl, který se promyje malým množstvím methanolu. Po vysušení pevného podílu při teplotě 35 °C a za sníženého tlaku se získá 9 g faktoru S (virginiamycin S).

Čistota: 96 % (Sl: 75,4 %, S4: 20,6 %).

Výtěžek vztažený na faktor Sl (virginiamycin Sl): 50 %.

Příklad 6 g faktoru S, získaného postupem, popsaným v příkladu 5, se převede do roztoku v acetonitrilu v množství, odpovídajícím koncentraci 125 mg/cm³ a purifikuje ve 4 operacích chromatografií na sloupci produktu Nucleosil 15C8^R (výška sloupce 25 cm a průměr sloupce 2,54 cm) za nástřiku cm³ a při použití eluční soustavy, tvořené směsí vody a acetonitrilu v objemovém poměru 60/40 a průtoku 7,5 cm³ za minutu. V každém případě se jímá 120 cm³ eluátu, obsahujícího faktor Sl, což je celkem 480 cm³. Chromatografie se opakuje čtyřikrát, aby se zpracoval celkem 1 g faktoru S. Takto se jímá objem asi 500 cm³, obsahující faktor Sl. Acetonitril se odstraní v rotační odparce. Vodná fáze se třikrát extrahuje 50 cm³ dichlormethanu. Methylenchloridové fáze se sloučí, promyjí 50 cm³ destilované vody, vysuší nad síranem sodným a zfiltrují. Dichlormethan se odstraní v rotační odparce za sníženého tlaku (665 Pa). Takto se získá 0,67 g faktoru S1 s čistotou 99,6 %.

Příprava surových složek skupiny A

Příklad 7

500 g surového pristinamycinu /pristinamycin IA (PIA): 20,7 %, pristinamycin IB (PIB): 3,9 %, pristinamycin IC (PIC): 0,6 %, pristinamycin ID (PID): 0,3 %, pristinamycin IIB (PIIB): 8 %, pristinamycin IIA (PILA): 45 %/ se uvede do roztoku v 50 litrech methylizobutylketonu. Tento roztok se pětkrát extrahuje vodnou fází, tvořenou 2,5 litru vody a 2,5 litru 1N kyseliny sírové a potom promyje třikrát 10 litry vody. Methylizobutylketon se potom zpracuje 7,5 litru vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného o koncentraci 35 g/1 a potom promyje 5 litry vody. Pokaždé se vodná fáze smísí s organickou fází, dekantuje a oddělí.

Získaná organická fáze se uvede do styku se 750 g oxidu hlinitého, zfiltruje, zahustí až na objem asi 4 litrů a vyjme 5 objemy hexanu. Vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší. Získá se 300 g produktu, který se suspenduje v 1 litru izopropanolu. Po míchání při teplotě 55 °C po dobu 45 minut se suspenze zfiltruje při teplotě 4 °C. Filtrační matečné louhy se zahustí k suchu, vyjmou 500 cm³ methylizobutylketonu, do kterého se nalije 5 objemů hexanu. Sraženina se odfiltruje, promyje hexanem a vysuší za sníženého tlaku při teplotě 40 °C. Získá se 69 g surového PIIB, obsahujícího 36 % PIIB a 6 % PIIA a neobsahujícího již PIA.

- 12CZ 285541 B6

Příklad 8 g surového PIIB získaného v předcházejícím příkladu 7, se purifikuje v několika operacích chromatografícky na sloupci produktu nucleosil5C8^R (průměr sloupce 5 cm, výška sloupce 30 cm) za použití eluční soustavy, tvořené směsí vody a acetonitrilu v objemovém poměru 60/40. Takto se získá 250 mg pristinamycinu UF (PIIF).

V následujících příkladech bylo prokázáno, že difrakční rentgenové spektrum společně vykrystalizovaného produktu je odlišné od spektra složky skupiny B, která vykrystalizovala samotná ve stejném rozpouštědle, pokud tato složka existuje.

Příklad 9

Produkt PIIB v surovém stavu, získaný v předcházejícím příkladu 7, se rozpustí ve 190 cm³acetonu. K získanému roztoku se přidá 33 g purifikovaného PI (PIA: 81,1 %, PIB: 12%, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %). Po 17 hodinách míchání při teplotě 20 °C se získá suspenze, která se zfiltruje při teplotě 4 °C. Produkt se promyje a vysuší. Po rekrystalizaci z acetonu, obsahujícího 100 g produktu v jednom litru acetonu, se získá 10 g bílých krystalů, obsahujících 55 % PIIB+PIIF +PIIG a 43 % PIA+PIB+PIC+PID.

Příklad 10

250 mg purifikovaného PIIB, získaného postupem, popsaným v příkladu 18, se rozpustí v 17 cm³ethylacetátu. K získanému roztoku se přidá 300 mg purifikovaného PI (PIA: 81,1 %, PIB: 12 %, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %). Po 20 hodinách míchání při teplotě 20 °C, filtraci, promytí a vysušení se získá 125 mg bílých krystalů.

Obsah PIIB+PIIF+PIIG: 56 %, z toho obsah PIIB: 54 %.

Obsah PIA+PIB+PIC+PID: 43 %.

Příklad 11

500 mg PIIB v čistém stavu, získaného postupem, popsaným v příkladu 18, se rozpustí v 5 cm³acetonu. K roztoku se přidá 480 mg PIA (čistota: 99,8 %). Směs se míchá po dobu 20 hodin při teplotě 20 °C, načež se zfiltruje. Po promytá 1 cm³ acetonu a vysušení po dobu 30 hodin při teplotě 40 °C za sníženého tlaku (nižší než 1 kPa) se získá 590 mg bílých krystalů.

Obsah: PIIB+PIIF+PIIG: 56 %, z toho obsah PIIB: 54 %.

Obsah PIA: 43 %.

Matečný louh z předcházející krystalizace se vyjme a doplní novou šarží 560 mg PIIB. Hmotnostní poměr PIIB/PIA je blízký 4. Po 20 hodinách míchání, filtraci, promytí a vysušení se získá 195 mg krystalů, jejichž čistota a složení jsou stejné jako čistota a složení krystalů, pocházejících z prvního zpracování.

Příklad 12

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, avšak s tím, že se PIA nahradí 480 mg PIB (čistota 97 %), přičemž se získá 820 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG činí 56 % (z toho obsah PIIB = 54 %) a jejichž obsah PIB činí 43 %.

- 13CZ 285541 B6

Příklad 13

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, přičemž se za použití 680 mg PIIB a 850 mg PIC (čistota 95 %) ve 4 cm³ acetonu získá 315 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG činí 57 % (z toho obsah PIIB = 55 %) a jejichž obsah PI činí 42 % (z toho obsah PIC činí 37 %).

Příklad 14

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, avšak s výjimkou spočívající vtom, že se PIA nahradí 480 mg PID (čistota 95 %), přičemž se získá 475 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+ PIIG činí 55 % (z toho obsah PIIB činí 53 %) a jejichž obsah PID činí 39 %.

Příklad 15

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, přičemž se za použití 450 mg ΡΠΒ a 380 mg faktoru S (Sl: 75,4%, S4: 20,6%) ve 4 cm³ acetonu získá 550 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG činí 58 % (z toho obsah PIIB činí 56 %) a jejichž obsah faktoru S činí 41 % (z toho obsah Sl činí 37 %).

Příklad 16

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, avšak s výjimkou spočívající vtom, že se PIA nahradí 480 mg faktoru Sl, přičemž se získá 750 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG činí 58 % (z toho obsah PIIB činí 54 %) a jejichž obsah faktoru Sl ční 41 %.

Příklad 17

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, přičemž se za použití 224 mg PUF a 192 mg faktoru S ve 2 cm³ acetonu získá 220 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIF činí 55 % a jejichž obsah faktoru S činí 39 % (z toho 31 % faktoru Sl a 5 % faktoru S4).

Rentgenové difrakční diagramy produktů z příkladů 9 až 17

V následující tabulce 5 jsou uvedeny relativní intenzity základních čar. Tyto rentgenové difrakční diagramy byly změřeny difraktometrem Philips PW1700 s kobaltovou antikatodou. Referenční hodnota 100 je přiřazena čáře při 15,8.1O'¹⁰ m. Uvedené relativní hodnoty čar se stanoví změřením výšky každé čáry po odečtení kontinuálního pozadí.

Tabulka 5

Interplanámí vzdálenost	Produkt z příkladu:
(Á)	Př.9	Př. 11	Př. 12	Př. 13	Př. 14	Př. 15	Př. 16	Př. 17
15,8	100	100	100	100	100	100	100	100
11,8	40	34	35	32	43	28	36	21
10,3	69	52	63	65	50	70	80	87
9,7	38	45	47	44	43	40	49	45

- 14CZ 285541 B6

Tabulka 5 - pokračování

Interplanámí vzdálenost	Produkt z příkladu:
6,4	44	41	51	41	37	40	51	39
6,1	38	41	40	38	43	30	40	35
5,9	75	64	70	63	67	74	89	71
5,8	38	39	47	49	50	44	54	35
5,2	92	75	79	71	70	70	91	81
5,0	67	59	60	60	57	54	69	52
4,7	50	43	53	49	47	50	40	42

Uvedené rentgenové difrakční diagramy jsou obdobné pro libovolné společně vykrystalizované produkty (interplanámí vzdálenosti hlavních čas se výrazně neliší).

Purifikace složky slupiny A

Příklad 18

9,3 g produktu, získaného v příkladu 9, se rozpustí ve 490 cm³ methylizobutylketonu. Tento roztok se extrahuje dvakrát 370 cm³ vodného roztoku (0,5 N) kyseliny sírové, načež se dvakrát promyje 150 cm³ vody. Organická fáze se potom zahustí až na objem asi 80 cm³ a takto zahuštěný podíl se nalije do 5 objemů hexanu. Vyloučená sraženina se promyje, zfiltruje a vysuší. Za účelem eliminace methylizobutylketonu se produkt vyjme acetonem k dosažení koncentrace 100 g/1, roztok se nalije do 10 objemů hexanu, promyje a vysuší. Získá se 3,5 g produktu, obsahujícího purifikovaný PIIB, který již neobsahuje PI.

Obsah PIIB+PIIF+PIIG: asi 95 %, z toho obsah PIIB: 92 %.

Vynález se rovněž týká farmaceutických kompozic, použitelných v humánní nebo veterinární medicíně, které jako účinnou látku obsahují novou purifikovanou kombinaci streptograminu, obsahující alespoň jednu složku skupiny B streptograminů sdruženou se složkou skupiny A obecného vzorce II v čistém stavu nebo v přítomnosti jednoho nebo několika kompatibilních a farmaceuticky přijatelných ředidel nebo přísad. Tyto kompozice mohou být použity perorálně nebo topicky. Mohou obsahovat kombinace podle vynálezu ve stavu fyzikální směsi prášků, koprecipitátu nebo kokrystalizátu.

Jako kompozice pro perorální podání mohou být použity tablety, želatinové tobolky, pilulky, prášky získané lyofilizací nebo granule. V těchto kompozicích může být účinná látka podle vynálezu smíšena s jedním nebo několika inertními ředidly nebo přísadami, jakými jsou sacharóza, laktóza nebo škrob. Tyto kompozice mohou rovněž obsahovat jiné látky než ředidla, například mazivo, jako například stearát hořečnatý.

Kompozice pro topické použití mohou být například krémy, pomády nebo lotiony.

V rámci humánní nebo veterinární terapie jsou kompozice podle vynálezu obzvláště použitelné pro léčení infekcí bakteriálního původu, zejména infekcí, způsobených gram-pozitivními koky: infekce stafylokoky (zejména infekce stafylokoky, rezistantními na methicillin), infekce streptokoky (zejména pneumokoky, rezistentními na penicilín a makrolidy). Tyto kompozice jsou rovněž vhodné pro léčeni infekcí, způsobených mikroorganismy Hemophilus, Moraxella catarrhalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumoniae, Ureaplasma urealyticum.

-15CZ 285541 B6

Kompozice podle vynálezu mohou být použity zejména pro léčení infekcí horního a dolního dýchacího traktu (například pro léčení plicních infekcí), při léčení kožních infekcí, při dlouhodobém léčení kostních a kloubních infekcí, při léčení nebo profylaxi endokarditidy v zubní a urinámí chirurgii, při léčení nemocí přenosných sexuálním stykem, jakož i při léčení bakteriálních a parazitních infekcí, doprovázejících AIDS, a při profylaxi rizika stafylokokové infekce i pacientů s potlačenou imunitní odezvou.

Obvykle budou podávané dávky účinných látek podle vynálezu stanoveny ošetřujícím lékařem, přičemž tyto dávky budou záviset na věku, hmotnosti, stupni zasažení infekcí a na ostatních charakteristických faktorech léčeného pacienta. Obecně se budou tyto dávky pohybovat mezi 0,4 a 3,5 g účinné látky, přičemž tyto dávky jsou vztažené na perorální podání dvou nebo tří dílčích dávek denně dospělému pacientu.

Následující příklady ilustrují neomezujícím způsobem kompozice podle vynálezu.

Příklad A

Obvyklými technikami se připraví neprůhledné želatinové tobolky, obsahující 250 mg společně vykrystalizované kombinace PIB/PIIB.

Příklad B

Obvyklými technikami se připraví neprůhledné želatinové tobolky, obsahující 250 mg společně vykrystalizované kombinace faktor S/PIIB.

Příklad C

Obvyklými technikami se připraví tablety, obsahující 384 mg účinné látky a mající následující

složení:
PIB/PIIB (45%/55%)		384 mg
Hydroxypropylmethylcelulóza		25 g
Staerát hořečnatý		35 mg
Koloidní silika		14 mg
Škrob	doplnit na	700 mg

Příklad D

Obvyklými technikami se připraví tablety, obsahující 384 mg účinné látky a mající následující složení:

Faktor S/PIIB (45%/45%) 384mg

Hydroxypropylmethylcelulóza 25mg

Stearát hořečnatý 35mg

Koloidní silika 14mg

Škrob doplnit na 700 mg.

Claims

1. Purifikovaná směs streptograminů, vyznačená tím, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů obecného vzorce I ve kterém bud’

A] znamená skupinu obecného vzorce Ia nebo Ia' (Ia), ve kterém R' znamená atom vodíku nebo hydroxy-skupinu a

Y znamená atom vodíku, methylaminovou skupinu nebo dimethylaminovou skupinu,

R znamená ethylovou skupinu, nebo v případě, kdy R' znamená atom vodíku, R může také znamenat methylovou skupinu a

Ri a R₂ znamenají atom vodíku, nebo

A] znamená skupinu vzorce Ib

R znamená izobutylovou skupinu,

Ri znamená hydroxy-skupinu a

R2 znamená methylovou skupinu, a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů obecného vzorce II ve kterém R znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu, ve vzájemném hmotnostním poměru 10:90 až 90:10, ve stavu kokrystalizátu, koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků, přičemž tato purifikovaná směs streptograminů obsahuje méně než 6 % hmotn. doprovodných nečistot.

2. Purifikovaná směs streptograminů podle nároku 1, vyznačená tím, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů, definovaných v nároku 1, ve vzájemném hmotnostním poměru 10:90 až 90:10 a ve stavu koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.

3. Purifikovaná směs streptograminů podle nároku 1 nebo 2, vyznačená tím, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů, definovaných v nároku 1, ve vzájemném hmotnostním poměru 20:80 až 80:20 a ve stavu koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.

4. Purifikovaná směs streptograminů podle nároku 1 nebo 2, vyznačená tím, že se jedná o společně vykrystalizovanou směs jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů, definovaných v nároku 1, v molámím poměru 1:2.

-18CZ 285541 B6

5. Způsob přípravy purifikované směsi streptograminů podle některého z nároků 1 až 4, vyznačený tím, že se v organickém rozpouštědle, jakým je keton, ester, chlorované rozpouštědlo nebo nitril, společně vykrystalizuje surový produkt minoritních složek skupiny A streptograminů obecného vzorce II, obsahující alespoň 30 % hmotn. alespoň jedné minoritní složky skupiny A streptograminů, a složka nebo složky skupiny B streptograminů obecného vzorce I, přičemž použité množství složky nebo složek skupiny B streptograminů obecného vzorce I je zvoleno tak, že zbytková koncentrace této složky nebo těchto složek po společné krystalizaci je nižší než rozpustnost této složky nebo těchto složek v rozpouštědle, použitém ke společné krystalizaci, načež se případně buď k získané purifikované směsi streptograminů ve formě koprecipitátu přidá složka nebo složky skupiny A nebo B streptograminů k dosažení purifikované směsi streptograminů, obsahující složku nebo složky skupiny A a B streptograminů v požadovaném poměru, nebo se získaný koprecipitát nebo složka nebo složky skupiny A streptograminů, izolované z tohoto koprecipitátu, použijí pro přípravu purifikované směsi streptograminů ve formě koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.

6. Farmaceutická kompozice, vyznačená tím, že obsahuje purifikovanou formu streptograminů podle některého z nároků 1 až 4 v čistém stavu nebo v přítomnosti libovolného kompatibilního a farmaceuticky přijatelného ředidla nebo libovolné kompatibilní a farmaceuticky přijatelné přísady.