DE69414622T2

DE69414622T2 - Streptogramine in gereinigte Form, ihre Herstellung und sie enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen

Info

Publication number: DE69414622T2
Application number: DE69414622T
Authority: DE
Inventors: Pascal F-91370 Verrieres-Le-Buisson Anger; Bertrand F-78220 Viroflay Bonnavaud; Alain F-94310 Orly Callet; Patrick F-94300 Vincennes Lefevre
Original assignee: Rhone Poulenc Rorer SA
Current assignee: Aventis Pharma SA
Priority date: 1993-02-17
Filing date: 1994-02-15
Publication date: 1999-06-17
Anticipated expiration: 2014-02-16
Also published as: EP0614910A1; CN1159197A; DK0614910T3; US5726151A; BR1101176A; IL121821A; WO1996005219A1; DE69414622D1; CZ285281B6; PL175016B1; EP0614910B1; AT406052B; MX9401171A; ATA30594A; IE80462B1; OA10400A; IE940144A1; PL175020B1; SG81198A1; HK1006500A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Streptogramine in gereinigter Form, die mindestens einen Vertreter der Gruppe B der Streptogramine enthalten, der mit mindestens einem im folgenden durch die allgemeine Formel (11) definierten "minoritären" Vertreter der Gruppe A der Streptogramine assoziiert ist.
Als eines der bekannten Streptogramine wurde Pristinamycin (RP 7293), ein antibakterieller Wirkstoff natürlichen Ursprungs, der von Streptomyces pristinaespiralis produziert wird, 1955 erstmals isoliert. Das unter dem Namen Pyostacin® vertriebene Pristinamycin besteht hauptsächlich aus Pristinamycin IA und Pristinamycin IIA.
Ein weiterer antibakterieller Wirkstoff aus der Klasse der Streptogramine, Virginiamycin, wurde mit Hilfe von Streptomyces virginiae, ATCC 13161 [Antibiotics and Chemotherapy 5, 632 (1955)] gewonnen. Virginiamycin (Staphylomycin®) besteht hauptsächlich aus den Faktoren S und M&sub1;.
In dem Patent US 3 325 359 wurden pharmazeutische Zusammensetzungen beschrieben, die antibiotische Substanzen enthalten, welche das Antibiotikum 899 bilden, nämlich die Faktoren S und M&sub1;.
In der Patentanmeldung FR 2 619 008 wurde die Verwendung von Vertretern der Gruppen A und B der Streptogramine zur Behandlung der Akne beschrieben.
Die natürlichen antibakteriellen Wirkstoffe aus der Klasse der Streptogramine bestehen aus einem Gemisch zweier Gruppen von Bestandteilen: Vertretern der Gruppe B und der Gruppe A der Streptogramine, wobei jede Gruppe eine ihr eigene antibakterielle Aktivität aufweist. Es wurde gezeigt, daß eine aus Vertretern beider Gruppen gebildete Assoziation eine synergistische Wirkung besitzt, die zu einer verstärkten bakteriostatischen und bakteriziden Aktivität sowie zu einer Erweiterung des Wirkungsspektrums führt.
In "Streptogramine als Modellsysteme für den Kationentransport durch Membranen, Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Mathematisch-Naturwissenschaftlichen Fakultät der Georg-August-Universität zu Göttingen, Göttingen 1979", in [Antibiotics III, 521 (1975)] und in "Antibiotics of the virginiamycin family, Inhibitors which contain synergistic components" [C. Cocito, Microbiological Reviews 145-98 (1979)] wurden Vertreter der Gruppen A und B der Streptogramine beschrieben. J. Preud'Homme, P. Tarridec und A. Belloc [Bull. Soc. Chim. Fr. 2, 585 (1968)] beschrieben ebenfalls natürliches Pristinamycin sowie die unterschiedlichen Bestandteile, aus denen dieses besteht.
Alle Versuche, Assoziationen von Streptograminen in gereinigter Form herzustellen, werden grundsätzlich unter Zuhilfenahme des Hauptvertreters der Gruppe A der Streptogramine [Pristinamycin IIA (PIIA)] durchgeführt, der als verantwortlich gilt für die Ursache der Aktivität und der synergistischen Wirkung. Darüber hinaus bestätigten Studien die Bedeutung dieses Vertreters der Streptogramine in Bezug auf einen verbesserten Synergismus: EP 506 561 (Seite 2).
All diesen Versuchen blieb jedoch der Erfolg versagt, zum einen aufgrund der Schwierigkeiten bei der industriellen Herstellung, insbesondere aber auch aufgrund der Tatsache, daß gereinigtes Pristinamycin IIA eine kristallisierte Verbindung ist, deren Bioverfügbarkeit sich als zu gering erwiesen hat, als daß sie als Wirkstoff für ein Arzneimittel in Betracht gezogen werden könnte.
Aus der Sicht der industriellen Herstellung solcher Produkte erlaubten die zur Verfügung stehenden Techniken bis zum gegenwärtigen Zeitpunkt weder die Herstellung eines Produkts mit genügend hohem Reinheitsgrad im präparativen Maßstab noch die Produktion von Chargen, die die Kriterien konstanter und reproduzierbarer Qualität hinreichend erfüllten, so daß die gesetzlichen Anforderungen für die Zulassung in einigen Ländern nicht erfüllt waren.
So weisen die industriellen Chargen von natürlichem Pristinamycin nach der Reinigung beispielsweise einen Anteil an Verunreinigungen auf, der bis zu 20% betragen kann. Die bis zum gegenwärtigen Zeitpunkt durchgeführten Reinigungsversuche führten grundsätzlich zu Mißerfolgen und sehr häufig zum Abbau der Vertreter einer der beiden Gruppen der Streptogramine, da es sich bei diesen um empfindliche Produkte handelt, bei denen zahlreiche Arbeitsschritte zur Öffnung der zyklischen Struktur oder zur Dehydratisierung der Vertreter der Gruppe A führen. Aufgrund dieser Tatsache war man viele Jahre der Ansicht, eine Erhöhung des Reinheitsgrades könne nicht erzielt werden. 1988 noch wurde die Reinigung als ein Problem betrachtet: [J. of Liq. Chromatography 11 (11), 2367 (1988)]. Ebenfalls im Jahre 1988 erklärten N. K. Sharma und M. J. O. Anteunis, die Trennung und die Reinigung der Bestandteile des Virginiamycins sei zwar für analytische Zwecke möglich, in Bezug auf die Herstellung der Produkte in Anbetracht der bestehenden Schwierigkeiten aber nicht in Betracht zu ziehen [Bull. Soc. Chim. Belg. 97 (3), 193 (1988)].
Infolge dieses Sachverhalts wurde der Vertrieb von Pristinamycin (Pyostacin®) schließlich auf bestimmte Länder, wie Frankreich und Belgien, beschränkt. Diese Beschränkung betraf auch das Virginiamycin (Staphylomycin®), das zur humanmedizinischen Anwendung nur in einer begrenzten Anzahl von Ländern vertrieben wird, sowie das Mikamycin (begrenzt auf Japan), dessen Vertrieb jetzt eingestellt worden ist. Somit führte die bestehende Situation dazu, daß bei einigen Bevölkerungsgruppen im Falle schwerer Infektionen mit grampositiven Kokken (insbesondere bei Infektionen mit gegen Methicillin resistenten Staphylokokken) oder im Falle von auf sexuellem Weg übertragbaren Krankheiten keine Behandlung durchgeführt werden konnte.
Auf dem Gebiet der antibakteriellen Wirkstoffe ist den praktizierenden Ärzten durchaus bekannt, daß sich nach der Verabreichung bestimmter Klassen von Antibiotika Allergien oder Resistenzen entwickeln können [The New England Journal of Medicine 324 (9), 601 (1991)]. In Krankenhäusern sind insbesondere zahlreiche resistente Stämme von Staphylococcus aureus bekannt. Aus diesem Grund ist es für den Mediziner von größtem Nutzen, ein breites Spektrum an chemisch verschiedenen Verbindungsklassen zur Verfügung zu haben, um die Behandlung dem individuellen Fall des zu behandelnden Kranken anpassen zu können. Die Folgen des nicht vorhandenen Vertriebs einer bestimmten Klasse von Antibiotika können sehr schwerwiegend oder sogar dramatisch sein, da die Situation eintreten kann, daß Kranke, die andere Klassen von Antibiotika nicht vertragen, nicht behandelt werden können.
So hatten die durchgeführten Reinigungsversuche stets die Beseitigung der minoritären Bestandteile der Streptogramine zum Ziel, da diese nicht als unverzichtbare Bestandteile, sondern vielmehr als Verunreinigungen betrachtet wurden.
Unter den Vertretern der Gruppe A der natürlichen Streptogramine stellt Pristinamycin IIB (PIIB) einen minoritären Vertreter dar, dessen Gewichtsanteil in natürlichem Pristinamycin weniger als 10% beträgt und meistens in der Größenordnung von 8% beziehungsweise in Virginiamycin sogar in der Größenordnung von 6% liegt.
Man fand nun heraus - und dies stellt auch den Gegenstand der vorliegenden Erfindung dar -, daß die Assoziation, die aus folgenden Bestandteilen besteht:
a) einem oder mehreren Vertretern der Gruppe B der Streptogramine der folgenden allgemeinen Formel:
in der:
- A&sub1; entweder ein Rest der folgenden allgemeinen Formel ist:
wobei in diesem Fall:
- R' ein Wasserstoffatom oder ein Hydroxylrest und Y ein Wasserstoffatom, ein Methylaminorest oder ein Dimethylaminorest ist,
- R ein Ethylrest ist oder, wenn R' ein Wasserstoffatom darstellt, auch einen Methylrest darstellen kann
und
- R&sub1; und R&sub2; jeweils ein Wasserstoffatom darstellen,
oder
- A&sub1; ein Rest der folgenden Formel ist:
wobei in diesem Fall:
- R ein Isobutylrest ist,
- R&sub1; ein Hydroxylrest und R&sub2; ein Methylrest ist
und
b) einem oder mehreren "minoritären" Vertretern der Gruppe A der Streptogramine der folgenden allgemeinen Formel:
in der R" ein Wasserstoffatom oder ein Methyl- oder Ethylrest ist,
aufgrund ihrer biologischen in vivo-Aktivität besonders vorteilhaft ist.
In der Tat weisen die erfindungsgemäßen Assoziationen eine deutlich höhere biologische in vivo-Aktivität auf als das natürliche Produkt (beispielsweise natürliches Virginiamycin oder natürliches Pristinamycin) und als Assoziationen, die den Hauptvertreter der Gruppe A der Streptogramine enthalten, und insbesondere ist ihre Bioverfügbarkeit vollkommen zufriedenstellend. Darüber hinaus können diese Assoziationen in großem Maßstab hergestellt werden.
Es ist damit möglich, ein gereinigtes und bioverfügbares Endprodukt mit guter Aktivität zu erhalten, das weniger als 6% Verunreinigungen enthält.
Das im folgenden mit Pristinamycin IIF (PIIF) bezeichnete Produkt der allgemeinen Formel (II), bei dem R" einen Ethylrest darstellt, und das im folgenden als Pristinamycin IIG (PIIG) bezeichnete Produkt der allgemeinen Formel (II), bei dem R" ein Wasserstoffatom darstellt, sind neue Produkte, die in ganz geringen Mengen vorkommende Vertreter der Streptogramine darstellen: ihr Gewichtsanteil im natürlich vorkommenden Produkt ist kleiner 0,5%.
Die erfindungsgemäßen Assoziationen werden vorteilhafterweise in einem Gewichtsverhältnis von 10/90 bis 90/10 und vorzugsweise von 20/80 bis 80/20 hergestellt. Sie liegen in Form eines physikalischen Gemischs der pulverförmigen Feststoffe, in Form eines Copräzipitats - dies stellt einen weiteren Aspekt der vorliegenden Erfindung dar - oder - gemäß eines dritten Aspekts der Erfindung - in Form eines Cokristallisats wie im folgenden beschrieben vor.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch gereinigte Formen, die aus einer cokristallisierten Assoziation mindestens eines Vertreters der Gruppe B der Streptogramine der allgemeinen Formel (I) und mindestens eines durch die allgemeine Formel (II) definierten Vertreters der Gruppe A der Streptogramine bestehen.
Die Cokristallisation erfolgt in einer konstanten Stöchiometrie von 1 mol eines beziehungsweise mehrerer Vertreter der Gruppe B der Streptogramine der allgemeinen Formel (I) auf 2 mol eines beziehungsweise mehrerer Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) [ist der Vertreter der Gruppe A der Streptogramine eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), in der A, die durch die Formel (Ia) dargestellte Struktur besitzt, so entspricht diese Stöchiometrie einem Gewichtsverhältnis von ungefähr 43-44/57-56].
Die erfindungsgemäße cokristallisierte Assoziation kann entweder als gereinigtes und stabiles antimikrobielles Mittel, das darüber hinaus auch eine verbesserte in vivo-Aktivität sowie eine gute Bioverfügbarkeit aufweist, oder als Mittel zur Reinigung eines minoritären Vertreters der Streptogramine, der der allgemeinen Formel (II) entspricht, verwendet werden.
In der Tat ist es nie gelungen, einen Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) durch Kristallisation zu reinigen; aufgrunddessen stellten die chromatographischen Methoden bis heute die einzige bekannte Möglichkeit zur Herstellung eines gereinigten Produkts aus der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) dar, und es bestand keine andere Möglichkeit zur Reinigung, die die Isolierung dieser Produkte in großen Mengen ermöglicht hätte.
Es wurde nun gezeigt, daß der Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) über das Zwischenprodukt der oben definierten cokristallisierten Assoziation in reiner Form erhalten werden kann. Ein rohes Gemisch, das mindestens 30% eines minoritären Vertreters der Gruppe A der Streptogramine entsprechend der allgemeinen Formel (II), gelöst in einem organischen Lösungsmittel, wie einem Keton (zum Beispiel Aceton, Methylethylketon oder Methylisobutylketon), einem Ester (zum Beispiel Ethylacetat, Isopropylacetat, Butylacetat oder Isobutylacetat), einem chlorierten Lösungsmittel (zum Beispiel Dichlormethan, Chloroform oder 1,2-Dichlorethan) oder einem Nitril (zum Beispiel Acetonitril), enthält und zu dem ein durch die allgemeine Formel (I) definierter Vertreter der Gruppe B der Streptogramine gegeben wird, ergibt eine cokristallisierte Verbindung in den oben definierten Mengenanteilen. Es versteht sich von selbst, daß die Menge der Verbindung der allgemeinen Formel (I), die zugegeben wird, so gewählt wird, daß die Endonzentration dieser Verbindung (die Konzentration nach der Cokristallisation) in dem Medium unterhalb ihrer Löslichkeitsgrenze liegt. Es versteht sich ebenfalls von selbst, daß veränderte Mengenanteile der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und der allgemeinen Formel (II) im Ausgangsmedium keine Veränderung der hergestellten cokristallisierten Verbindung zur Folge haben. Wird die so erhaltene cokristallisierte Assoziation in einem Lösungsmittel, wie beispielsweise Methylisobutylketon oder Dichlorethan, gelöst und säurebehandelt (zum Beispiel mit Schwefelsäure oder Chlorwasserstoffsäure), so kann aus dieser Assoziation durch anschließende Behandlung der organischen Phase mit einem Lösungsmittel, wie beispielsweise Hexan, der minoritäre Vertreter der Gruppe A der Streptogramine in gereinigter Form und frei von Resten des Vertreters der Gruppe B der Streptogramine hergestellt werden.
Die cokristallisierte Assoziation weist des weiteren den Vorteil einer stark erhöhten Stabilität, eines hohen Reinheitsgrads und insbesondere der Möglichkeit der leichten industriellen Herstellung auf.
Selbstverständlich kann diese Methode auch an die Herstellung von Cokristallisaten mit modifizierten Derivaten der natürlichen Vertreter der Gruppe B der Streptogramine angepaßt werden, und selbstverständlich gehören auch diese Cokristallisate ebenso wie die Herstellung minoritärer Vertreter der allgemeinen Formel (II) in gereinigter Form aus solchen Cokristallisaten zu der vorliegenden Erfindung.
Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung betrifft eine Assoziation von Pristinamycin IB (in dem, wie oben definiert, R ein Ethylrest ist und A&sub1; einen Rest der allgemeinen Formel (Ia) darstellt, in der Y einen Methylaminorest und R' ein Wasserstoffatom bezeichnet) oder von Virginiamycin S1 (in dem, wie oben definiert, R ein Ethylrest ist und A&sub1; einen Rest der allgemeinen Formel (Ia) darstellt, in der Y und R' Wasserstoffatome bezeichnen) oder aber eines Gemischs aus Virginiamycin S1 und Virginiamycin S4 (in dem, wie oben definiert, R ein Methylrest ist und A&sub1; dieselbe Bedeutung hat wie in Virginiamycin S1) mit Pristinamycin 12 (in dem, wie oben durch die allgemeine Formel (II) definiert, R" ein Methylrest ist), wobei diese Assoziation weniger als 6% und vorzugsweise weniger als 3% Verunreinigungen enthält.
Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung betrifft ein Streptogramin in gereinigter Form, das aus der Assoziation eines durch die allgemeine Formel (I) definierten Vertreters der Gruppe B der Streptogramine und eines Vertreters der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) besteht, wobei der Vertreter der Gruppe B der Streptogramine und der Vertreter der Gruppe A der Streptogramine in in dieser Assoziation einem konstanten molaren Verhältnis in der Größenordnung von 1/2 vorliegen.
Erfindungsgemäß können die neuen Assoziationen mindestens eines Vertreters der Gruppe B der Streptogramine der allgemeinen Formel (I) und mindestens eines Vertreters der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) beispielsweise durch Herstellung der cokristallisierten Verbindung wie oben definiert erhalten werden; die so erhaltene cokristallisierte Assoziation kann zur Herstellung einer Assoziation mit veränderten Mengenanteilen mit mindestens einem zuvor gereinigten Vertreter der Gruppe B der Streptogramine der allgemeinen Formel (I) oder mit mindestens einem zuvor gereinigten Vertreter der Gruppe A der allgemeinen Formel (II) assoziiert werden, wobei die betreffenden Mengen so gewählt werden, daß das gewünschte Mengenverhältnis resultiert, oder es kann auch der Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) (oder deren Gemisch) ausgehend von dem Cokristallisat gereinigt und dann im gewünschten Mengenverhältnis mit einem oder mehreren Vertretern der Gruppe B der allgemeinen Formel (I) gemischt werden. Eine weitere Möglichkeit zur Herstellung der erfindungsgemäßen Assoziationen besteht darin, den beziehungsweise die Vertreter der Gruppe B der Streptogramine sowie den beziehungsweise die Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) aus dem entsprechenden natürlichen Streptogramin zu isolieren und zu reinigen und die gereinigten Verbindungen schließlich im gewünschten Mengenverhältnis wie oben definiert zu mischen.
Die erfindungsgemäßen Assoziationen können auch im gewünschten Mengenverhältnis aus einer Lösung der Verbindungen der allgemeinen Formeln (I) und (II) [oder, alternativ hierzu, aus einer Lösung des Cokristallisats und einer der Verbindungen der allgemeinen Formeln (I) und (II)] in Methylisobutylketon, Aceton oder Dichlormethan copräzipitiert werden, indem diese Lösung in Hexan, Cyclohexan oder Wasser gegossen wird.
Die Herstellung und die Trennung der Vertreter der Gruppen A und B der Streptogramine erfolgt durch Fermentation und Isolierung der Bestandteile aus dem Nährboden nach beziehungsweise analog zu der Methode, die von J. Preud'homme et al. [Bull. Soc. Chim. Fr., vol. 2, 585 (1968)], in [Antibiot. & Chemother. 5, 632 (1955) oder 7, 606 (1957)], in [Chromtog. Sym., 2º Bruxelles, 181 (1962)], in [Antibiot. Ann., 728-784 (1954-55)], in dem Patent US 3 299 047 und in "Streptogramine als Modellsysteme für den Kationentransport durch Membranen, Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Mathematisch-Naturwissenschaftlichen Fakultät der Georg-August-Universität zu Göttingen, Göttingen 1979" beschrieben ist, oder aber wie in den folgenden Beispielen beschrieben. Insbesondere im Fall der Pristinamycine werden die Vertreter der Gruppe A und der Gruppe B der Streptogramine voneinander getrennt, indem das rohe Streptogramin in einem organischen Lösungsmittel, wie einem Acetat (zum Beispiel Ethylacetat) suspendiert wird, der Vertreter der Gruppe A als Rohprodukt abfiltriert oder abzentrifugiert wird und der Vertreter der Gruppe B mit einer wässerigen Säure extrahiert und anschließend mit Dichlormethan reextrahiert wird. Die Vertreter der Gruppe A und der Gruppe B können auch voneinander getrennt werden, indem eine saure Extraktion einer Lösung von rohem Streptogramin in Methylisobutylketon durchgeführt und der Vertreter der Gruppe B anschließend durch Extraktion aus der wässerigen Phase isoliert wird, während der Vertreter der Gruppe A durch Präzipitation aus der organischen Phase isoliert wird.
Nach ihrer Abtrennung kann die Reinigung der Vertreter der Gruppe B der Streptogramine durch Kristallisation in einem Alkohol, wie Ethanol, Methanol oder Isopropanol, in einem Acetat (zum Beispiel Isopropylacetat oder Butylacetat), in einem Keton (zum Beispiel Methylethylketon) oder in Acetonitril oder auch chromatographisch erfolgen. Die Reinigung der Vertreter der Gruppe A der allgemeinen Formel (II) kann chromatographisch durchgeführt werden, wobei als Fließmittel ein Acetonitril/Wasser- Gemisch verwendet wird.
Eine Alternative stellt die Herstellung der Vertreter der Gruppen A und B der Streptogramine der allgemeinen Formeln (II) beziehungsweise (I), wie in der französischen Patentanmeldung 2 689 518 beschrieben, durch getrennte Fermentation in folgenden Schritten dar:
(i) (fakultativ): Mutagenese an einem unselektiven, Streptogramine produzierenden Mikroorganismus sowie
(ii): Auswahl der selektiven Mikroorganismen.
Die unselektiven Mikroorganismen sind im allgemeinen Actinomycetes oder Pilze. Die Mikroorganismen, von denen bei dem Verfahren ausgegangen wird, sind insbesondere unselektive Mikroorganismen, die ein aus der folgenden Gruppe ausgewähltes Streptogramin produzieren: Pristinamycin, Virginiamycin, Mikamycin, Ostreogrycin, Viridogrisein, Vernamycin und Etamycin. Beispiele für solche unselektiven Mikroorganismen, die verwendet werden können, sind in der folgenden Tabelle aufgeführt.
Mikroorganismen Antibiotika
PILZE
Mikromonospora sp. Vernamycin
STREPTOMYCES
S. alborectus Virginiamycin
S. griseus (NRRL 2426) Viridogrisein
S. lavendulae Etamycin
S. lo densis (ATCC 11415) Vernamycin
S. mitakaensis (ATCC 15297) Mikamycin
S. ostreogriseus (ATCC 27455) Ostreogrycin
S. pristinaespiralis (ATCC 25486) Pristinamycin
S. virginiae (ATCC 13161) Virginiamycin
ACTINOMYCES
A. daghestanicus Etamycin
Die Herstellung wird insbesondere mit Mikroorganismen durchgeführt, die aus der folgenden Gruppe ausgewählt sind: Streptomyces alborectus, Streptomyces mitakaensis, Streptomyces pristinaespiralis, Streptomyces ostreogriseus und Streptomyces virginiae.
Der erste Schritt der Herstellung besteht darin, den unselektiven Mikroorganismus so zu verändern, daß seine Gesamtkapazität der Antibiotika-Produktion erhöht wird und/oder daß er nicht mehr als einen oder zwei Vertreter der Streptogramine synthetisiert. Dies kann durch genetische Veränderungen bewirkt werden (zum Beispiel durch Mutationen auf der Ebene von Genen, die die Struktur von an der Biosynthese beteiligten Enzymen bestimmen, oder auf der Ebene von Sequenzen, die die Expression solcher strukturbestimmenden Gene steuern) oder durch biochemische Veränderungen (Modifikation von post-Transkriptions- Mechanismen, Schädigung von Retroinhibierungsmechanismen usw.). Es werden verschiedene Möglichkeiten zur Mutagenese eingesetzt:
- physikalische Mittel: Röntgenstrahlen und UV-Strahlen,
- chemische Mittel: Alkylierungsmittel, wie Ethylmethansulfonat (EMS), N-Methyl-N'- nitro-N-nitrosoguanidin [Delic et al., Mutation Res. 9 (1970), 167-182] und 4-Nitrochinolein-1-oxid (NQO); bialkylierende Mittel und Interkalationsmittel,
- alle DNA-mutierenden Insertionsmittel, insbesondere Transposonen, integrative Plasmide, Phagen oder Prophagen, sowie
- Fusion von Protoplasten (Cohen, Nature 268 (1977), 171-174).
Diese Mittel, die einzeln oder kombiniert eingesetzt werden können, können auf die unselektiven Mikroorganismen im Zustand von Sporen, von gekeimten Sporen, Sporen im Keimzustand oder auf das Myzel angewendet werden. Die Herstellung kann auch mit Hilfe von (zufälligen oder gezielten) Veränderungen erfolgen, die ausgehend von unselektiven Mikroorganismen den Erhalt von Mikroorganismen ermöglichen, die zur selektiv Produktion eines Vertreters der Streptogramine befähigt sind.
Der zweite Schritt der Herstellung betrifft die Identifizierung und die Isolierung der selektiven Mikroorganismen. Dieser Schritt kann insbesondere mit Hilfe eines Sensibilitätstests gegenüber einem Keim durchgeführt werden. Es gibt verschiedene Keime, die eine spezifische Sensibilität gegenüber den Vertretern der Gruppe B oder den Vertretern der Gruppe A der Streptogramine aufweisen: Bacillus subtilis (ATCC 6633), Bacillus circulans, Bacillus cereus (Watanabe, J. Antibio. Ser. A XIII (1) (1960), 62) und C. xerosis (Watanabe, s.o.) weisen beispielsweise eine spezifische Sensibilität gegenüber den Vertretern der Gruppe B der Streptogramine auf; Streptococcus agalactiae B 96 (Antimicrob. Agents Chemother. 10 5 (1976), 795), Micrococcus luteus (Prikrylova, s. o.) und Sarcina lutea (ATCC 9341) weisen beispielsweise eine spezifische Sensibilität gegenüber den Vertretern der Gruppe A der Streptogramine auf. Es ist auch möglich, Keime mit spezifischer Sensibilität gegenüber einem Vertreter der Streptogramine künstlich herzustellen, indem in einen Keim, der eine Sensibilität gegenüber 2 Vertretern der Streptogramine aufweist, ein Resistenz-Gen gegenüber einem dieser beiden Streptogramine eingebaut wird. Einige dieser Gene wurden geklont (Le Goffic et al., J. Antibio. XXX (8), 665 (1977); Le Gofiic et al., Ann. Microbiol. Inst. Pasteur 128 B, 471 (1977); Solh et al., Path. Biol. 32 (5), 362, (1984). Solche Gene werden mit Hilfe klassischer molekularbiologischer Methoden in verschiedene Keime eingebaut. Der Schritt der Selektion kann auch durch einen ELISA-Test mit Hilfe von spezifischen Antikörpern der Vertreter der Gruppe A oder der Gruppe B der Streptogramine oder mit analytischen Techniken, wie der Chromatographie (Flüssigkeitschromatographie, Dünnschichtchromatographie usw.), erfolgen. Im Falle eines Sensibilitätstests gegenüber einem Keim ist es darüberhinaus empfehlenswert, die Selektion durch chromatographische Quantifizierung zu validieren.
Damit ist es entsprechend der Erfindung nun möglich, eine neue gereinigte Form von Streptograminen herzustellen, deren Gehalt an Verunreinigungen den gesetzlichen Erfordernissen für die Zulassung ebenso genügt wie die genaue Bestimmung und die Konstanz ihrer Zusammensetzung und die darüber hinaus eine verbesserte in-vivo-Aktivität sowie eine verbesserte Biodisponibilität und eine geringe Toxizität aufweist. Mit Hilfe der neuen Assoziation wird damit in zahlreichen Staaten das Fehlen einer Möglichkeit zur Behandlung mit antibakteriellen Substanzen dieser Klasse behoben werden können.
Die neue Assoziation eines Vertreters der Gruppe B der Streptogramine der allgemeinen Formel (I) und eines Vertreters der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) weist insbesondere gegenüber grampositiven Keimen eine besonders hohe in-vivo-Aktivität auf. An der Maus wurde ihre in-vivo-Aktivität gegenüber Staphylococcus aureus IP 8203 in Dosierungen von 30 bis 50 mg/kg (orale Verabreichung) nachgewiesen.
Als Beispiele sind im folgenden die DC&sub5;&sub0;-Werte (orale Verabreichung) verschiedener Assoziationen von Vertretern der Streptogramine der allgemeinen Formeln (I) und (II) bei experimenteller Infektion von Mäusen mit Staphylococcus aureus IP 8203 aufgeführt.
Die in der folgenden Tabelle I aufgeführten Assoziationen wurden durch Copräzipitation in Hexan aus einer Lösung der Vertreter der Streptogramine der allgemeinen Formeln (I) und (II) in Methylisobutylketon oder in Aceton erhalten.

Tabelle I

Assoziation Produkt (I)/Produkt (II): PI (Beispiel 1)/PIIB (Beispiel 18) DC&sub5;&sub0; p. o. [mg/kg]
10/90 44
20/80 32
30/70 30
70/30 30
80/20 30
90/10 50
Die in der folgenden Tabelle II aufgeführten Assoziationen sind cokristallisierte Produkte, die wie in den Beispielen beschrieben hergestellt wurden.

Tabelle II

cokristallisierte Assoziation Produkt (I)/Produkt (II) DC&sub5;&sub0; p. o. [mg/kg]
PI/PIIB (Beispiel 9) 38
PIA/PIIB (Beispiel 11) 28
PIB/PIIB (Beispiel 12) 32
PIC/PIIB (Beispiel 13) 36
PID/PIIB (Beispiel 14) 50
Faktor S/PIIB (Beispiel 15) 32
Faktor S1/PIIB (Beispiel 16) 50
Faktor S/PIIF (Beispiel 17) 50
Die in der folgenden Tabelle III beschriebenen Assoziationen Gegen jeweils in Form eines physikalischen Gemischs der pulverförmigen Feststoffe vor.

Tabelle III

Assoziation Produkt (I)/Produkt (II) DC&sub5;&sub0; p. o. [mg/kg]
PIA (Beispiel 1)/PIIB (Beispiel 18) 30/70 36
PIA (Beispiel 1)/PIIB (Beispiel 18) 50/50 40
Faktor S(Beispiel 5)/PIIB (Beispiel 18) 30/70 44
Des weiteren weist die neue Assoziation keine Toxizität auf bei der Maus treten bei einer Dosis von 150 mg/kg bei oraler Verabreichung (2 Gaben) keinerlei Zeichen für eine Toxizität auf.
Wird die cokristallisierte Assoziation als Mittel zur Reinigung des Streptogramin- Vertreters der allgemeinen Formel (II) eingesetzt, so kann dieser erfindungsgemäß durch saure Extraktion einer Lösung der cokristallisierten Verbindung in einem Keton (zum Beispiel Methylisobutylketon) und anschließende Isolierung des Vertreters der Gruppe A durch Präzipitation aus der organischen Phase hergestellt werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die vorliegende Erfindung, ohne sie jedoch zu beschränken.
In den folgenden Beispielen sind Prozentangaben als Gew.-% zu verstehen.

Abtrennung und Reinigung von Vertretern der Gruppe B:

Beispiel 1

30 kg Pristinamycin [Rohprodukt, Pristinamycin IA (PIA): 20,7%, Pristinamycin IB (PIB): 3,9%, Pristinamycin IC (PIC): 0,6%, Pristinamycin ID (PID): 0,3%, Pristinamycin IIB (PIIB): 8%, Pristinamycin IIA (PIIA): 45%, Pristinamycin IIF (PIIF): < 0,5% (nicht dosiert), Pristinamycin IIG (PIIG): < 0,5% (nicht dosiert)] werden in 210 l Ethylacetat suspendiert und 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Suspension wird filtriert, und das erhaltene Ethylacetat-Filtrat wird zweimal mit jeweils 20 l 1 N Schwefelsäure und anschließend mit 20 l destilliertem Wasser extrahiert. Die vereinigten wässerigen Phasen werden sechsmal mal mit jeweils 15 l Ethylacetat gewaschen, durch Zugabe von 30 l einer 10%-igen Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 7 eingestellt und dann dreimal mit jeweils 30 l Dichlormethan extrahiert. Die Dichlormethan-Phasen werden vereinigt und mit 10 l destilliertem Wasser gewaschen. Das Dichlormethan wird abdestilliert und durch 50 l Ethanol ersetzt. Das Gemisch wird nun unter Rückfluß 30 Minuten lang mit 0,8 kg Ruß L3S behandelt. Nach Filtrieren und zweimaligem Waschen mit jeweils 5 l Ethanol wird das Gemisch innerhalb von 15 Stunden auf 10ºC abgekühlt. Nachdem die Temperatur von 10ºC eine Stunde beibehalten wurde, wird die Suspension filtriert und dreimal mit jeweils
7 l Ethanol gewaschen. Nach Trocknen des Feststoffs bei 40ºC und unter vermindertem Druck erhält man 5,7 kg gereinigtes Pristinamycin I (im folgenden mit PI bezeichnet).
PI-Gehalt des Produkts: 96,8% (PIA: 81,1%, PIB: 12%, PIC: 2,6%, PID: 1,1%); Ausbeute an PIA: 74%.
1500 g des gereinigten PI werden in 9 l 1,2-Dichlorethan aufgenommen, anschließend werden 1,5 Äquivalente Bernsteinsäureanhydrid und 0,015 Äquivalente Dimethylaminopyridin zugegeben. Die Lösung wird 1 Woche bei einer Temperatur von 20ºC stehengelassen und dann auf eine Säule aufgegeben, die 10 kg Kieselgel (2045 um) enthält [Höhe der Säule: 1 m; Durchmesser: 20 cm]. Die Elution erfolgt durch 6-stündiges Perkolieren eines 1,2-Dichlorethan/Methanol-Gemischs bei einem Durchsatz von 18 l pro Stunde. Hierbei wird der Methanol-Gehalt des Fließmittels im Verlauf der Elution von 0 auf 4% erhöht (es wird Methanol verwendet, das einen Wassergehalt von 5% aufweist). Man erhält 47 Fraktionen zu je 2,4 l.
Die Fraktionen 5 bis 15 werden vereinigt, das 1,2-Dichlorethan wird abdestilliert und durch 5 l Ethanol ersetzt. Nach Kristallisation erhält man 365 g PIA, dessen Reinheitsgrad 99,8% beträgt.

Beispiel 2

Die Fraktionen 36 bis 39 der in Beispiel 1 beschriebenen chromatographischen Trennung werden vereinigt, das 1,2-Dichlorethan wird abdestilliert, und man erhält 210 g eines Feststoffs. 40 g dieses Feststoffs werden in 8 l Wasser, dem 8 ml 10 N Chlorwasserstoffsäure zugesetzt wurden, aufgenommen. Nach 3 Stunden bei 90ºC wird die Lösung mit Natriumhydrogencarbonat auf einen pH-Wert von 6,5 eingestellt. Die Lösung wird dreimal mit jeweils 1 l Ethylacetat extrahiert und der Extrakt zweimal mit jeweils 0,2 l Wasser gewaschen. Nach der Rußbehandlung wird das Ethylacetat abdestilliert und durch 600 ml Ethanol ersetzt. Nach Umkristallisation erhält man 20 g PIB, dessen Reinheitsgrad 97% beträgt.

Beispiel 3

Die Fraktionen 22 bis 26 der in Beispiel 1 beschriebenen chromatographischen Trennung werden vereinigt, das 1,2-Dichlorethan wird abdestilliert, und man erhält 139 g eines Feststoffs. Dieser Feststoff wird in der geringstmöglichen Menge an 1,2-Dichlorethan aufgenommen und auf eine Kieselgelsäule aufgegeben. Die Elution erfolgt durch 6- stündiges Perkolieren eines 1,2-Dichlorethan/Methanol-Gemischs bei einem Durchsatz von 18 l pro Stunde; hierbei wird der Methanol-Gehalt des Fließmittels im Verlauf der Elution von 0 auf 5% erhöht (es wird Methanol verwendet, das einen Wassergehalt von 5% aufweist). Man erhält 48 Fraktionen zu je 2,4 l. Die Fraktionen 38 bis 43 werden bis zur Trockene eingeengt und der Feststoff in 300 ml Ethanol aufgenommen. Nach Umkristallisation erhält man 22 g PI, dessen PIC-Gehalt 40% beträgt. Durch sukzessive chromatographische Trennungen über einer Kieselgelsäule (20-45 um) mit Perkolieren eines Dichlormethan/Methanol-Gemisches (98/2 v/v) als Fließmittel werden 5 g eines Feststoffs erhalten, der nach Schütteln mit Methylisobutylketon und Umkristallisation aus Ethanol einen PIC-Gehalt von 95% aufweist.

Beispiel 4

1000 g PI, das wie im obigen Beispiel 1 beschrieben hergestellt wurde, werden in der geringstmöglichen Menge an Chloroform gelöst und durch sukzessive Fraktionierung über einer Kieselgelsäule (20-45 um) gereinigt. Nach Elution mit Chloroform, das einen Methanol-Gehalt von 2 bis 5% aufweist, erhält man ein Produkt, das bis zur Trockene eingeengt wird. Dieses Produkt wird nun durch 2 aufeinanderfolgende Läufe über Diaion®- Harz, das mit einem Acetonitril/Wasser-Gemisch (60/40 v/v) perkoliert wird, chromatographisch getrennt. Die Fraktionen werden chromatographisch geprüft. Die Pa enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und bis zur Trockene eingeengt. Man erhält so ungefähr 3 g Produkt, das einen PID-Gehalt von 60% aufweist. Ein zusätzlicher Reinigungsschritt erfolgt durch Gegenstrom-Chromatographie unter Verwendung des folgenden Lösungsmittelgemischs: Methylisobutylketon/Aceton/Ameisensäure (40/20/40 v/v/v). Durch Einengen der PID enthaltenden Fraktionen bis zur Trockene erhält man 1 g eines Feststoffs, dessen PID-Gehalt 95% beträgt.

Beispiel 5

400 g Staphylomycin® (in Form von Tabletten - Ausgangs-Zusammensetzung: Virginiamycin S1 (S1): 3,4%, Virginiamycin S4 (S4): 0,9%) werden in 4 l Wasser gegeben.
Die Tabletten werden durch 15-minütiges Rühren bei 20ºC aufgelöst. Man gibt 1 l Dichlormethan zu und rührt wiederum 1 Stunde. Die Dichlormethan-Phase wird nun dekantiert und filtriert und dann innerhalb von 30 Minuten unter Rühren in 5 l Hexan gegossen. Nach 1 Stunde Rühren wird die Suspension filtriert, und man erhält einen Feststoff, der dreimal mit jeweils 250 ml Hexan gewaschen wird. Nach dem Trocknen erhält man 52 g eines Feststoffs, der in 370 ml Ethylacetat suspendiert wird. Es wird zweimal nacheinander jeweils 18 Stunden lang bei 20ºC geschüttelt. Das Filtrat jedes Schüttelvorgangs wird bis zur Trockene eingeengt und dann unter Rückfluß in 850 ml Methanol gelöst. Nach allmählicher Temperaturabsenkung auf -20ºC innerhalb von 16 Stunden erhält man durch Filtrieren einen Feststoff, der mit einer kleinen Menge Methanol gewaschen wird. Nach Trocknen des Feststoffs bei 35ºC und unter vermindertem Druck erhält man 9 g Faktor S (Virginiamycin S).
Virginiamycin-Gehalt des Produkts: 96% (S1: 75,4%, S4: 20,6%). Ausbeute an Faktor S1: (Virginiamycin S1): 50%.

Beispiel 6

1 g des Faktors S. der wie im obigen Beispiel 5 beschrieben hergestellt wurde, wird in Acetonitril gelöst (125 mg Faktor S/ml Acetonitril) und in 4 Arbeitsschritten über einer Nukleosil SC8®-Säule (Höhe: 25 cm, äußerer Durchmesser: 2,54 cm) chromatographisch gereinigt, indem jeweils ein Volumen von 2 ml auf die Säule aufgegeben und mit einem Wasser/Acetonitril-Gemisch (60/40 v/v) bei einem Durchsatz von 7,5 ml pro Minute eluiert wird. Man erhält jeweils ein Volumen von 120 ml, das heißt insgesamt 480 ml, in denen der Faktor S1 enthalten ist. Die chromatographische Trennung wird zur Behandlung der Gesamtmenge an Faktors S (1 g) viermal wiederholt. Man erhält so ein Volumen von ungefähr 500 ml, in dem der Faktor S1 enthalten ist. Das Acetonitril wird am Rotationsverdampfer entfernt. Die wässerige Phase wird dreimal mit jeweils 50 ml Dichlormethan extrahiert. Die Dichlormethan-Phasen werden vereinigt, mit 50 ml destilliertem Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Dichlormethan wird am Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck (5 mm Hg) entfernt. Man erhält so 0,67 g des Faktors S1, dessen Reinheitsgrad 99,6% beträgt.

Herstellung von Vertretern der Gruppe A der Streptogramine in Form von Rohprodukten

Beispiel 7

500 g Pristinamycin [Rohprodukt, Pristinamycin IA (PIA): 20,7%, Pristinamycin IB (PIB): 3,9%, Pristinamycin IC (PIC): 0,6%, Pristinamycin ID (Pa): 0,3%, Pristinamycin IIB (PIIB): 8%, Pristinamycin IIA (PIIA): 45%] werden in 50 l Methylisobutylketon gelöst. Diese Lösung wird fünfmal mit einer wässerigen Phase, die jeweils aus 2,5 l Wasser und 2,5 l 1 N Schwefelsäure besteht, extrahiert und dann dreimal mit jeweils 10 l Wasser gewaschen. Das Methylisobutylketon wird nun mit 7,5 l einer wässerigen Natriumhydrogencarbonatlösung (35 g NaHCO&sub3;/l) behandelt und anschließend mit 5 l Wasser gewaschen. Die wässerige Phase wird jeweils mit der organischen Phase gemischt, dekantiert und entfernt.
Die erhaltene organische Phase wird mit 750 g Aluminiumoxid versetzt, filtriert, bis zum Erhalt eines Volumens von ungefähr 4 l eingeengt und im fünffachen Volumen an Hexan aufgenommen. Das erhaltene Präzipitat wird abfiltriert und getrocknet. Man erhält 300 g eines Produkts, das in 1 l Isopropanol suspendiert wird. Nach 45-minütigem Rühren bei 55ºC wird bei 4ºC abfiltriert. Die Mutterlaugen der Filtration werden bis zur Trockene eingeengt, in 500 ml Methylisobutylketon aufgenommen und mit dem fünffachen Volumen an Hexan versetzt. Das Präzipitat wird abfiltriert, mit Hexan gewaschen und bei 40ºC und unter vermindertem Druck getrocknet. Man erhält 69 g rohes PIIB, das 36% PIIB und 6% PIIA, aber kein PIA mehr enthält.

Beispiel 8

60 g PIIB (Rohprodukt), das wie im obigen Beispiel 7 beschrieben hergestellt wurde, werden in mehreren Arbeitsschritten über einer Nucleosil 5C8®-Säule chromatographisch gereinigt (Durchmesser der Säule: 5 cm, Höhe: 30 cm), die mit einem Wasser/Acetonitril- Gemisch (60/40) als Fließmittel perkoliert wird. Man erhält so 250 mg Pristinamycin IIF (PIIF).

Herstellung eines cokristallisierten Produkts:

Für die folgenden Beispiele wurde gezeigt, daß sich das Röntgendiffraktionsspektrum des cokristallisierten Produkts von demjenigen des als Einzelsubstanz im gleichen Lösungsmittel kristallisierten Vertreters der Gruppe B der Streptogramine (sofern dieser existiert) unterscheidet.

Beispiel 9

Das unter Beispiel 7 erhaltene rohe PIIB wird in 190 ml Aceton gelöst. Man gibt 33 g gereinigtes PI (PIA: 81,1%, PIB: 12%, PIC: 2,6%, PID: 1,1%) zu. Nach 17-stündigem Rühren bei 20ºC erhält man eine Suspension, die bei 4ºC filtriert wird. Das Produkt wird gewaschen und getrocknet. Nach Umkristallisation aus 1 l Aceton pro 100 g Produkt erhält man 10 g Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG 55% und dessen Gehalt an PIA + PIB + PIC + PID 43% beträgt.

Beispiel 10

250 mg gereinigtes PIIB, das wie im folgenden Beispiel 18 beschrieben hergestellt wurde, werden in 17 ml Ethylacetat gelöst. Man gibt 300 mg gereinigtes PI (PIA: 81,1%, PIB: 12%, PIC: 2,6%, PID: 1,1%) zu. Nach 20-stündigem Rühren bei 20ºC, Abfiltrieren, Waschen und Trocknen erhält man 125 mg Produkt in Form von weißen Kristallen.
Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG: 56%, davon 54% PIIB. Gehalt an PIA + PIB + PIC + PID: 43%.

Beispiel 11

560 mg reines PIIB, das wie im folgenden Beispiel 18 beschrieben hergestellt wurde, werden in 5 ml Aceton gelöst. Man gibt 480 mg PIA (eines Reinheitsgrads von 99,8%) zu, rührt 20 Stunden bei 20ºC und filtriert die Suspension. Nach Waschen mit 1 ml Aceton und 30-stündigem Trocknen bei 40ºC und unter vermindertem Druck (< 1 kPa) erhält man 590 mg Produkt in Form von weißen Kristallen.
Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG: 56%, davon 54% PIIB. Gehalt an PIA: 43%.
Die Mutterlaugen der vorangehenden Kristallisation werden vereinigt, und man gibt erneut 560 mg PIIB zu. Das Massenverhältnis PIIB/PIA beträgt nun ungefähr 4. Nach 20- stündigem Rühren, Abfiltrieren, Waschen und Trocknen erhält man 195 mg Produkt in Form von reinen Kristallen, die dieselbe Zusammensetzung aufweisen wie die Kristalle der 1. Kristallisation.

Beispiel 12

Es wird wie unter Beispiel 11 vorgegangen, jedoch werden anstelle von PIA 480 mg PIB (Reinheitsgrad 97%) eingesetzt. Man erhält 820 mg Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG 56% (davon 54% PIIB) und dessen Gehalt an PIB 43% beträgt.

Beispiel 13

Es wird wie unter Beispiel 11 vorgegangen, jedoch werden 680 mg PIIB und 580 mg PIC (Reinheitsgrad 95%) in 4 ml Aceton eingesetzt. Man erhält 315 mg Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG 57% (davon 55% PIIB) und dessen Gehalt an PI 42% (davon 37% PIC) beträgt.

Beispiel 14

Es wird wie unter Beispiel 11 vorgegangen, jedoch werden anstelle von PIA 480 mg Pa (Reinheitsgrad 95%) eingesetzt. Man erhält 475 mg Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG 55% (davon 53% PIIB) und dessen Gehalt an PID 39% beträgt.

Beispiel 15

Es wird wie unter Beispiel 11 vorgegangen, jedoch werden 450 mg PIIB und 380 mg Faktor S (S1 : 75,4%, 54 : 20,6%) in 4 ml Aceton eingesetzt. Man erhält 550 mg Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG 58% (davon 56% PIIB) und dessen Gehalt an Faktor S 41% (davon 37% S1) beträgt.

Beispiel 16

Es wird wie unter Beispiel 11 vorgegangen, jedoch werden anstelle von PIA 480 mg des Faktors S1 eingesetzt. Man erhält 750 mg Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG 58% (davon 54% PIIB) und dessen Gehalt an Faktor S1 41% beträgt.

Beispiel 17

Es wird wie unter Beispiel 11 vorgegangen, jedoch werden 224 mg PIIF und 192 mg des Faktors S in 2 ml Aceton eingesetzt. Man erhält 220 mg Produkt in Form von weißen Kristallen, dessen Gehalt an PIIF 55% und dessen Gehalt an Faktor S 39% (davon 31% S1 und 5% S4) beträgt.

Röntgendiffraktionsspektren der Produkte der Beispiele 9 bis 17

In der folgenden Tabelle IV sind die relativen Intensitäten der Hauptlinien aufgeführt. Die Röntgendiffraktionsspektren wurden mit einem Philips PW 1700-Diffraktometer mit Kobalt-Antikathode aufgenommen. Der Vergleichswert 100 gilt für die Linie bei 15,8 A. Die relativen Werte werden durch Abmessen der Höhe der Linie unter Berücksichtigung einer kontinuierlichen Basislinie abgeschätzt. Tabelle IV
Die Röntgendiffraktionsspektren sind für alle cokristallisierten Produkte ähnlich (die den Hauptlinien entsprechenden Gitterabstände unterscheiden sich nur unwesentlich).

Reinigung eines Vertreters der Gruppe A der Streatogramine:

Beispiel 18

9,3 g des unter Beispiel 9 erhaltenen Produkts werden in 490 ml Methylisobutylketon gelöst. Diese Lösung wird zweimal mit jeweils 370 ml wässeriger 0,5 N Schwefelsäure extrahiert und dann zweimal mit jeweils 150 ml Wasser gewaschen. Die organische Phase wird nun bis zum Erhalt eines Volumens von ungefähr 80 ml eingeengt und dann auf das fünffache Volumen an Hexan gegossen. Das erhaltene Präzipitat wird gewaschen, abfiltriert und getrocknet. Zur Entfernung des Methylisobutylketons wird das Präzipitat nun in Aceton aufgenommen (100 g Präzipitat/1 Aceton), auf das zehnfache Volumen an Hexan gegossen, gewaschen und getrocknet. Man erhält 3,5 g eines Produkts, das das gereinigte PIIB, aber kein PI mehr enthält.
Gehalt an PIIB + PIIF + PIIG: ungefähr 95%, davon 92% PIIB.
Die vorliegende Erfindung betrifft ferner pharmazeutische Zusammensetzungen, die in der Humanmedizin wie in der Veterinärmedizin verwendet werden können und die als Wirkstoff die neue gereinigte Assoziation von Streptograminen, welche aus mindestens einem Vertreter der Gruppe B der Streptogramine in Assoziation mit dem Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der allgemeinen Formel (II) besteht, in reiner Form oder in Gegenwart eines oder mehrerer kompatibler und pharmazeutisch akzeptabler Verdünnungsmittel oder Zusatzstoffe enthalten. Diese Zusammensetzungen können auf oralem oder topischem Weg verabreicht werden. Sie können die erfindungsgemäßen Assoziationen in Form eines physikalischen Gemisches der pulverförmigen Feststoffe, eines Copräzipitats oder eines Cokristallisats enthalten.
Als Zusammensetzungen für die orale Verabreichung können Tabletten, Kapseln, Pillen, Lyophilisatpulver oder Granulate verwendet werden. In diesen Zusammensetzungen kann der erfindungsgemäße Wirkstoff mit einem oder mehreren inerten Verdünnungsmitteln oder Hilfsstoffen, wie Saccharose, Lactose oder Stärke, gemischt sein. Diese Zusammensetzungen können neben den Verdünnungsmitteln noch weitere Substanzen enthalten, so zum Beispiel ein Gleitmittel, wie Magnesiumstearat.
Die Zusammensetzungen zur topischen Verabreichung können beispielsweise Cremes, Salben oder Lotionen sein.
Zur therapeutischen Anwendung beim Menschen wie bei Tieren sind die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen besonders nützlich für die Behandlung von Infektionen bakteriellen Ursprungs, insbesondere von schweren Infektionen mit grampositiven Kokken: Staphylokokken-Infektionen (insbesondere Infektionen mit Methicillinresistenten Staphylokokken), Streptokokken-Infektionen (insbesondere Infektionen mit Penicillin- und Makroliden-resistenten Pneumokokken); sie sind ferner von besonderem Nutzen für die Behandlung von Infektionen mit Haemophilus, Moraxella catarrhalis, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumoniae und Ureaplasma urealyticum.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können insbesondere zur Behandlung von Infektionen der oberen und der unteren Atemwege (so zum Beispiel zur Behandlung pulmonarer Infektionen), zur Behandlung von Infektionen der Haut, zur Langzeitbehandlung von Infektionen der Knochen und der Gelenke, zur Behandlung oder zur Prophylaxe der Endokarditis im Rahmen der Dental- und der urologischen Chirurgie, zur Behandlung von auf sexuellem Wege übertragbaren Krankheiten, zur Behandlung opportunistischer bakterieller und parasitärer Infektionen, die im Rahmen von AIDS erfolgen, und zur Prophylaxe bei vorhandenem Risiko einer Staphylokokken-Infektion bei immungeschwächten Patienten eingesetzt werden.
Im allgemeinen wird der Arzt die Dosierung, die er für die geeignetste hält, in Abhängigkeit vom Alter, Gewicht und der Schwere der Infektion sowie anderen, der zu behandelnden Infektion eigenen Faktoren bestimmen. Die Dosierung für Erwachsene liegt bei oraler Verabreichung im allgemeinen im Bereich von 0,4 bis 3,5 g Wirkstoff pro Tag, verteilt auf 2 bis 3 Gaben.
Die folgenden Beispiele erläutern die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, ohne sie jedoch zu beschränken.

Beispiel A

Mit Hilfe der üblichen Techniken werden lichtundurchlässige Kapseln einer Dosierung von 250 mg der cokristallisierten PIB/PIIB-Assoziation hergestellt.

Beispiel B

Mit Hilfe der üblichen Techniken werden lichtundurchlässige Kapseln einer Dosierung von 250 mg der cokristallisierten Faktor 5/PIIB-Assoziation hergestellt.

Beispiel C

Mit Hilfe der üblichen Techniken werden lichtundurchlässige Tabletten einer Dosierung von 384 mg Wirkstoffhergestellt, die folgende Zusammensetzung aufweisen:
- PIB/PIIB (45%/55%) 384 mg
- Hydroxypropylmethylcellulose 25 mg
- Magnesiumstearat 35 mg
- kolloidales Kieselgel 14 mg
- Stärke ad 700 mg

Beispiel D

Mit Hilfe der üblichen Techniken werden lichtundurchlässige Tabletten einer Dosierung von 384 mg Wirkstoff hergestellt, wobei der Wirkstoff die folgende Zusammensetzung aufweist:
- Faktor S/PIIB (45%/55%) 384 mg
- Hydroxypropylmethylcellulose 25 mg
- Magnesiumstearat 35 mg
- kolloidales Kieselgel 14 mg
- Stärke ad 700 mg

Claims

1. Streptogramine in gereinigter Form, dadurch gekennzeichnet, daß sie aus der Assoziation

eines oder mehrerer Vertreter der Gruppe B der Streptogramine der folgenden allgemeinen Formel:

in der:

- A&sub1; entweder ein Rest der folgenden allgemeinen Formel ist:

oder

wobei in diesem Fall:

- R' ein Wasserstoffatom oder ein Hydroxylrest und Y ein Wasserstoffatom, ein Methylaminorest oder ein Dimethylaminorest ist,

- R ein Ethylrest ist oder, wenn R' ein Wasserstoffatom darstellt, auch einen Methylrest darstellen kann und

- R&sub1; und R&sub2; jeweils ein Wasserstoffatom darstellen,

oder

- A&sub1; ein Rest der folgenden Formel ist:

wobei in diesem Fall:

- R ein Isobutylrest ist,

- R&sub1; ein Hydroxylrest und R&sub2; ein Methylrest ist

und

eines oder mehrerer minoritärer Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der folgenden allgemeinen Formel:

in der R" ein Wasserstoffatom oder ein Methyl- oder Ethylrest ist,

in Form eines Cokristallisats, eines Copräzipitats oder eines physikalischen Gemischs der pulverförmigen Feststoffe bestehen.

2. Streptogramine in gereinigter Form nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie weniger als 6% Verunreinigungen enthalten.

3. Streptogramine in gereinigter Form nach einem der Ansprüche 1 und 2, bestehend aus einer Assoziation eines oder mehrerer Vertreter der Gruppe B der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert und eines oder mehrerer minoritärer Vertreter der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert in einem Gewichtsverhältnis von 10/90 bis 90/10 in Form eines Copräzipitats oder eines physikalischen Gemischs der pulverförmigen Feststoffe.

4. Streptogramine in gereinigter Form nach einem der Ansprüche 1 bis 3, bestehend aus einer Assoziation eines oder mehrerer Vertreter der Gruppe B der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert und eines oder mehrerer minoritärer Vertreter der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert in einem Gewichtsverhältnis von 20/80 bis 80/20 in Form eines Copräzipitats oder eines physikalischen Gemischs der pulverförmigen Feststoffe.

5. Streptogramine in gereinigter Form nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es sich hierbei um eine cokristallisierte Verbindung eines oder mehrerer Vertreter der Gruppe B der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert und eines oder mehrerer minoritärer Vertreter der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert in einem Molverhältnis in der Größenordnung von 1/2 handelt.

6. Verwendung einer cokristallisierten Verbindung nach Anspruch 5 zur Herstellung von Streptograminen in gereinigter Form nach einem der Ansprüche 1 bis 4.

7. Verwendung einer cokristallisierten Verbindung nach Anspruch 5 zur Reinigung eines minoritären Vertreters der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert.

8. Verfahren zur Herstellung von Streptograminen in gereinigter Form nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß der beziehungsweise die Vertreter der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert mit dem beziehungsweise den Vertretern der Gruppe B der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert cokristallisiert werden und die erhaltene cokristalliserte Verbindung erforderlichenfalls anschließend mit dem beziehungsweise den geeigneten Vertretern der Gruppe A oder B assoziiert werden, um eine Assoziation im gewünschten Mengenverhältnis zu erhalten.

9. Verfahren zur Reinigung eines minoritären Vertreters der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert, dadurch gekennzeichnet, daß eine cokristallisierte Verbindung dieses Bestandteils mit einem oder mehreren Vertretern der Gruppe B der Streptogramine hergestellt wird und anschließend der beziehungsweise die Streptogramine der Gruppe B durch eine Behandlung in saurem Milieu entfernt werden.

10. Vertreter der Gruppe A der Streptogramine in gereinigter Form wie in Anspruch 1 definiert, sofern dieser über eine cokristallisierte Verbindung nach Anspruch 5 als Zwischenprodukt erhalten wird.

11. Vertreter der Gruppe A der Streptogramine der folgenden allgemeinen Formel:

in der R" ein Wasserstoffatom oder ein Ethylrest ist.

12. Verwendung eines oder mehrerer minoritärer Vertreter der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert zur Herstellung von Cokristallisaten mit einem oder mehreren Vertretern der Gruppe B der Streptogramine oder deren Derivaten.

13. Cokristallisierte Verbindungen, bestehend aus einem oder mehreren Vertretern der Gruppe B der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert oder deren Derivaten und einem oder mehreren minoritären Vertretern der Gruppe A der Streptogramine wie in Anspruch 1 definiert.

14. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, daß sie Streptogramine in gereinigter Form nach einem der Ansprüche 1 bis 5 in reiner Form oder in Gegenwart eines beliebigen geeigneten und pharmazeutisch akzeptablen Verdünnungsmittels oder Zusatzstoffs enthält.