DE60003586T2

DE60003586T2 - Antibiotische azalid-zusammensetzungen

Info

Publication number: DE60003586T2
Application number: DE60003586T
Authority: DE
Inventors: Wayne Alan Eastern Point Road Groton BOETTNER
Original assignee: Pfizer Products Inc
Current assignee: Pfizer Products Inc
Priority date: 2000-01-27
Filing date: 2000-11-30
Publication date: 2004-01-08
Anticipated expiration: 2020-12-01
Also published as: AR039387A2; US6667393B2; JP2006282676A; BR0017013A2; WO2001055158A1; BRPI0017013B1; ZA200205958B; AU779748C; PA8509801A1; ES2199884T3; DK1250343T3; EP1250343A1; DE60003586D1; TWI318880B; ATE243703T1; TNSN01017A1; US20030073825A1; PE20011050A1; AR030045A1; BRPI0017013B8

Description

Hintergrund der Erfindung
Diese Erfindung betrifft pharmazeutische Zusammensetzungen, die ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren und einer antibiotischen Azalid-Verbindung umfassen, und Verfahren zum Herstellen derselben. Diese Erfindung betrifft weiterhin stabilisierte Formen der vorstehend erwähnten Zusammensetzungen und Verfahren zum Stabilisieren derselben. Diese Erfindung betrifft weiterhin Verfahren zum Behandeln eines Säugers, umfassend Verabreichen einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung an den Säuger bei Bedarf einer solchen Behandlung.
Über antibiotische Macrolidmittel, die gegen eine breite Vielzahl von bakteriellen und Protozoen-Infektionen bei Säugern, Fisch und Vögeln wirksam sind, wurde bereits berichtet (siehe beispielsweise Internationale Patentveröffentlichungen WO 98/56802 und WO 99/12552). Diese Verbindungen haben im Allgemeinen einen macrocyclischen Lactonring von 12 bis 22 Kohlenstoffatomen, an die ein oder mehrere Zuckereinheiten gebunden sind. Macrolid-Antibiotika wirken auf die 50S-Ribosomal-Untereinheit zum Inhibieren der Proteinsynthese in Mikroorganismen. Beispiele für Macrolid-Antibiotika schließen Lincomycin, Azithromycin, das ein Derivat von Erythromycin A ist, und andere Azalidverbindungen ein.
Die Entwicklung von pharmazeutischen Zusammensetzungen, die Azalidverbindungen als Wirkstoff enthalten, stellt eine wesentliche Herausforderung dar. Einige Azalide sind in der Lage, in Lösung zu isomerisieren. Folglich war die Herstellung einer reproduzierbaren antibiotischen Zusammensetzung, die ein einzelnes Isomer oder ein festgelegtes Verhältnis von Isomeren umfasst, schwierig. Zweitens kann sich eine Zusammensetzung, die eine festgelegte Menge eines bestimmten Azalidisomers enthält, über die Zeit ändern. Drittens werden der Lactosering und Zucker von Azaliden auch in schwach sauren oder basischen pH-Umgebungen leicht hydrolysiert, was die Wirkung und Lebensdauer einer antibiotischen Zusammensetzung senkt.
Folglich ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, antibiotische Zusammensetzungen und Verfahren zum Herstellen derselben bereitzustellen, die die vorstehend erwähnten Nachteile überwinden.
Zitieren von irgendwelchen Druckschriften hierin ist nicht so aufzufassen, dass solche Druckschriften als Stand der Technik zur vorliegenden Erfindung angegeben sind.
Kurzdarstellung der Erfindung
In einer ersten Ausführungsform betrifft die vorliegende Erfindung eine Zusammensetzung, umfassend

(a) die Verbindung der Formel I
bzw. die Verbindung der Formel II
in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% zu etwa 10% ± 4%; (b) Wasser und (c) eine oder mehrere Säuren, die in einer Gesamtkonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegen.

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Gewinnen einer Zusammensetzung, umfassend: (a) die Verbindung der Formel I und die Verbindung der Formel II in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%;(b) Wasser und (c) eine oder mehrere Säuren, die in einer Gesamtkonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegen, umfassend den Schritt des Erhitzens auf eine Temperatur von etwa 50°C bis etwa 90°C eines Gemisches, umfassend: (a) die Verbindung der Formel I, (b) Wasser und (c) eine oder mehrere Säuren in einer Gesamtmenge im Bereich von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches. In einer bevorzugten Ausführungsform liegt der pH-Wert des Gemisches von etwa 5,0 bis etwa 8,0 und bevorzugter etwa 5,0 bis etwa 6,0.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Behandeln einer bakteriellen oder Protozoen-Infektion bei einem Säuger, umfassend Verabreichen an den Säuger bei Bedarf einer solchen Behandlung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Zusammensetzung, umfassend: (a) die Verbindung der Formel I und die Verbindung der Formel II in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%; (b) Wasser und (c) eine oder mehrere Säuren, die bei einer Gesamtkonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegen. In einer bevorzugten Ausführungsform liegt der pH-Wert des Gemisches im Bereich von etwa 5,0 bis etwa 8,0 und bevorzugter etwa 5,0 bis etwa 6,0. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist die bakterielle oder Protozoen-Infektion ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus respiratorischen Erkrankungen beim Rind, respiratorischen Erkrankungen beim Schwein, Pneumonie, Coccidiosis, Anaplasmosis und infektiöser Keratinitis.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Zusammensetzung, umfassend: (a) ein Gemisch umfassend: (i) die Verbindung der Formel (I) und die Verbindung der Formel (II) in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%; (ii) Wasser und (iii) eine oder mehrere Säuren bei einer Gesamt konzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches und (b) ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel in einer Gesamtmenge von etwa 250 bis etwa 750 mg pro ml der Zusammensetzung.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Gewinnen einer Zusammensetzung, umfassend: (a) ein Gemisch umfassend: (i) die Verbindung der Formel (I) und die Verbindung der Formel (II) in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%; (ii) Wasser und (iii) eine oder mehrere Säuren bei einer Gesamtkonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches und (b) ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel in einer Gesamtmenge von etwa 250 bis etwa 750 mg pro ml der Zusammensetzung, umfassend den Schritt des Zugebens zu dem Gemisch von einem oder mehreren mit Wasser mischbaren Co-Lösungsmitteln in einer Gesamtmenge von etwa 250 bis etwa 750 mg/ml der Zusammensetzung.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zum Gewinnen einer Zusammensetzung, umfassend: (a) ein erstes Gemisch umfassend: (i) die Verbindung der Formel (I) und die Verbindung der Formel (II) in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%; (ii) Wasser und (iii) eine oder mehrere Säuren bei einer Gesamtkonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches und (b) ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel in einer Gesamtmenge von etwa 250 bis etwa 750 mg pro ml der Zusammensetzung, umfassend den Schritt des Erhitzens auf eine Temperatur von etwa 50°C bis etwa 90°C eines Gemisches, umfassend die Verbindung der Formel I, Wasser und eine oder mehrere Säuren in einer Menge im Bereich von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches, wobei ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel vor, während oder nach dem Erhitzungsschritt in einer Menge von etwa 250 bis etwa 750 mg/ml der Zusammensetzung zugegeben werden.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Bewahren der Strukturintegrität der Verbindung der Formel I oder der Verbindung der Formel II, umfassend den Schritt der Bildung einer Zusammensetzung durch Zugeben von einem oder mehreren mit Wasser mischbaren Co-Lösungsmitteln zu einem Gemisch, umfassend: (a) die Verbindung der Formel I und die Verbindung der Formel II, (b) Wasser und (c) eine oder mehrere Säuren, die in einer Gesamtmenge von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches vorliegen, wobei die Menge an zugegebenem, mit Wasser mischbarem Co-Lösungsmittel etwa 250 bis etwa 750 mg/ml der Zusammensetzung ist.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Behandeln einer bakteriellen oder Protozoen-Infektion bei einem Säuger, umfassend Verabreichen an den Säuger bei Bedarf einer solchen Behandlung einer wirksamen Menge einer Zusammensetzung, umfassend: (a) ein Gemisch, umfassend (i) die Verbindung der Formel (I) und die Verbindung der Formel (II) in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%; (ii) Wasser und (iii) eine oder mehrere Säuren bei einer Gesamtkonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml des Gemisches und (b) ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel in einer Gesamtmenge von etwa 250 bis etwa 750 mg pro ml der Zusammensetzung.
In einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen sind die eine oder mehrere Säuren aus der Gruppe, bestehend aus Essigsäure, Benzolsulfonsäure, Zitronensäure, Bromwasserstoffsäure, Chlorwasserstoffsäure, D- und L-Milchsäure, Methansulfonsäure, Phosphorsäure, Bernsteinsäure, Schwefelsäure, D- und L-Weinsäure, p-Toluolsulfonsäure, Adipinsäure, Asparaginsäure, Kampfersulfonsäure, 1,2-Ethandisulfonsäure, Laurylsulfonsäure, Glucoheptonsäure, Gluconsäure, 3-Hydroxy-2-naphthoesäure, 1-Hydroxy-2-naphthoesäure, 2-Hydroxyethan-sulfonsäure, Äpfelsäure, Schleimsäure, Salpetersäure, Naphthalinsulfonsäure, Palmitinsäure, D-Glucarsäure, Stearinsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Fumarsäure, Benzoesäure, Cholsäure, Ethansulfonsäure, Glucuronsäure, Glutaminsäure, Hippursäure, Lactobionsäure, Lysinsäure, Mandelsäure, Napadisylsäure, Nicotinsäure, Polygalacturonsäure, Salicylsäu re, Sulfosalicylsäure, Tryptophansäure und Gemischen davon, ausgewählt.
In einer bevorzugten Ausführungsform davon ist die eine oder mehrere Säuren Zitronensäure. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform davon sind die eine oder mehrere Säuren Zitronensäure und Chlorwasserstoffsäure. In einer bevorzugteren Ausführungsform davon liegt die Zitronensäure in einer Menge von 0,02 mMol bis etwa 0,3 mMol pro ml der Zusammensetzung vor und die Chlorwasserstoffsäure liegt in einer zum Erzielen eines pH-Werts der Zusammensetzung von etwa 5 bis etwa 6 ausreichenden Menge vor.
In einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen sind das eine oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Ethanol, Isopropanol, Diethylenglycolmonomethylether, Diethylenglycolbutylether, Diethylenglycolmonoethylether, Diethylenglycoldibutylether, Polyethylenglycol-300, Polyethylenglycol-400, Propylenglycol, Glycerin, 2-Pyrrolidon, N-Methyl-2-pyrrolidon, Glycerinformal, Dimethylsulfoxid, Sebacinsäuredibutylester, Polysorbat 80 und Gemischen davon, ausgewählt.
In einer bevorzugten Ausführungsform davon ist das eine oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel Propylenglycol. In einer bevorzugten Ausführungsform liegt das Propylenglycol in einer Menge von etwa 450 bis etwa 550 mg/ml der Zusammensetzung vor.
In einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen umfasst die Zusammensetzung weiterhin ein oder mehrere Antioxidanzien in einer Menge von etwa 0,01 mg bis etwa 10 mg/ml der Zusammensetzung. In einer bevorzugten Ausführungsform davon ist das eine oder mehrere Antioxidanzien aus der Gruppe, bestehend aus Natriumbisulfit, Natriumsulfit, Natriummetabisulfit, Natriumthiosulfat, Natriumformaldehydsulfoxylat, L-Ascorbinsäure, D-Erythroascorbinsäure, Acetylcystein, Cystein, Monothioglycerin, Thioglycolsäure, Thiomilchsäure, Thioharnstoff, Dithiothreitol, Dithioerythreitol, Glutathion, Ascorbylpalmitat, butyliertem Hydroxyanisol, bu tyliertem Hydroxytoluol, Nordihydroguajaretsäure, Gallussäurepropylester, α-Tocopherol und Gemischen davon, ausgewählt. In einer bevorzugteren Ausführungsform davon ist das eine oder mehrere Antioxidanzien Monothioglycerin. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform davon liegt Monothioglycerin in einer Menge von etwa 4 mg/ml bis etwa 6 mg/ml der Zusammensetzung vor.
In einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen liegt die Konzentration des ersten Gemisches (von Verbindung I und Verbindung II) in der Zusammensetzung im Bereich von etwa 50 mg/ml bis etwa 200 mg/ml. In einer bevorzugten Ausführungsform davon liegt die Konzentration des ersten Gemisches in der Zusammensetzung im Bereich von etwa 90 mg/ml bis etwa 110 mg/ml.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der erfindungsgemäßen Zusammensetzung liegt Zitronensäure in einer Menge von etwa 0,02 mMol bis etwa 0,3 mMol pro ml der Zusammensetzung vor, und die Chlorwasserstoffsäure liegt in einer Menge vor, die ausreichend ist, um einen Zusammensetzungs-pH-Wert von etwa 5 bis etwa 6 zu erreichen, wobei Propylenglycol in einer Menge von etwa 450 bis etwa 550 mg/ml der Zusammensetzung vorliegt, und worin Monothioglycerin in einer Menge von etwa 4 mg/ml bis etwa 6 mg/ml der Zusammensetzung vorliegt.
Diese Erfindung betrifft auch eine Verbindung der Formel

oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon,
worin R¹ OH oder

darstellt und worin R² H oder CH₃ darstellt.
Die vorliegende Erfindung kann vollständiger mit Bezug auf die genauere Beschreibung und erläuternde Beispiele, die als beispielhafte, nicht begrenzende Ausführungsformen der Erfindung vorgesehen sind, verstanden werden.
Beschreibung der Erfindung im Einzelnen
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf pharmazeutische Zusammensetzungen, umfassend Isomer I und Isomer II (insgesamt die „Azalid-Isomeren") in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bis etwa 10% ± 4%. Der chemische Name von Isomer I ist (2R,3S,4R,5R,8R,l0R,11R,12S,13S,14R)-13-((2,6-Di-desoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-4-C-((propylamino)-methyl)-α-L-ribohexopyranosyl)oxy-2-ethyl-3,4,10-trihydroxy-3,5,8,10,12,14-hexamethyl-11-((3,4,6-tridesoxy-3-(dimethylamino)-β-D-xylohexopyranosyl)oxy)-1-oxa-6-azacyclopentadecan-15-on. Der chemische Name von Isomer II ist (3R,6R,8R,9R,l0S,11S,12R)-11-((2,6-Didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-4-C-((propylamino)methyl-α-L-ribo-hexopyranosyl)oxy)-2-((1R,2R)-1,2-dihydroxy-l-methylbutyl)-8-hydroxy-3,6,8,10,12-pentamethyl-9-((3,4,6-tridesoxy-3-(dimethylamino)-β-D-xylohexopyranosyl)oxy)1-oxa-4-azacyclotridecan-l3-on. Isomer I kann aus einer Translactonisierungsreaktion von Isomer II gebildet werden. Gleichfalls kann Isomer II aus einer Translactonisierungsform von Isomer I gebildet werden. Verfahren zum Gewinnen von Isomer II werden in der Internationalen Veröffentlichung Nr. WO 98/56802, hierin durch Hinweis einbezogen, offenbart. Verfahren zum Gewinnen von Isomer II sind nachstehend in offenbartem Beispiel 1. Die Azalid-Isomeren sind wirksame antibiotische Mittel. Ohne durch jegliche Theorie gebunden sein zu wollen, basiert die Erfindung zum Teil auf dem überraschenden Befund der Anmelder, dass eine Zusammensetzung, die Isomer I und Isomer II in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bis etwa 10% ± 4% umfasst, schnell unter Verwendung der hierin offenbarten Verfahren unabhängig von dem Ausgangsverhältnis der Azalidisomeren erhalten werden kann. Obwohl nicht absolut sicher, nehmen die Anmelder an, dass das Verhältnis von Isomer I zu Isomer II etwa 90% ± 4% bis etwa 10% ± 4% ein Gleichgewichtsgemisch von Azalidisomeren ausmacht. Folglich bezieht sich wie hierin verwendet der Begriff „Gleichgewichtsgemisch von Isomeren" auf ein Gemisch von Isomer I und Isomer II in einem Verhältnis von etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%. Eine ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren umfassende antibiotische Zusammensetzung kann konsistent hergestellt werden und liefert einen Standard zum Testen oder Verbraucheranwendung. Somit ist eine Zusammensetzung, die ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren umfasst, stark erwünscht.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zum Herstellen einer Zusammensetzung, die ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren umfasst. In einer Ausführungsform wird das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren aus einer Lösung von im Wesentlichen reinem Isomer I erhalten. Mit wie hierin verwendet „im Wesentlichen rein" ist, sofern nicht anders ausgewiesen, mit einer Reinheit von mindestens 97% gemeint. In einer weiteren Ausführungsform wird das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren aus einer Lösung erhalten, die ein Gemisch von Isomer I und Isomer II umfasst. Im Allgemeinen wird das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren durch Erhitzen einer Wasserlösung von Isomer I, vorzugsweise im Wesentlichen reinem Isomer I oder einem Gemisch von Isomer I und Isomer II in Gegenwart von einer oder mehreren Säuren erzeugt. In einer bevorzugten Ausführungsform wird eine Wasserlösung von Isomer I und eine oder mehrere Säuren auf eine Temperatur von zwi schen etwa 50°C bis etwa 90°C, vorzugsweise etwa 60°C bis etwa 80°C, für etwa 0,5 bis etwa 24 Stunden, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 10 Stunden, bei einem pH-Wert von etwa 5,0 bis etwa 8,0, vorzugsweise etwa 6,0 bis etwa 8,0, erhitzt. Besonders bevorzugt wird eine Lösung von Isomer I und Isomer II auf eine Temperatur zwischen etwa 65°C bis etwa 75°C für etwa 1 bis etwa 8 Stunden bei einem pH-Wert von etwa 6,5 bis etwa 7,5 in Gegenwart von einer oder mehreren Säuren erhitzt. Die Konzentration von Isomer I oder dem Gemisch von Isomer I und Isomer II, das ins Gleichgewicht zu bringen ist, kann von etwa 50 mg/ml bis etwa 500 mg/ml, bevorzugter etwa 100 mg/ml bis etwa 300 mg/ml und besonders bevorzugt etwa 225 mg/ml bis etwa 275 mg/ml Lösung variieren.
Geeignete Säuren, die zum Gewinnen des Gleichgewichtsgemisches von Isomeren verwendbar sind, schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Essigsäure, Benzolsulfonsäure, Zitronensäure, Bromwasserstoffsäure, Chlorwasserstoffsäure, D- und L-Milchsäure, Methansulfonsäure, Phosphorsäure, Bernsteinsäure, Schwefelsäure, D- und L-Weinsäure, p-Toluolsulfonsäure, Adipinsäure, Asparaginsäure, Kampfersulfonsäure, 1,2-Ethandisulfonsäure, Laurylsulfonsäure, Glucoheptonsäure, Gluconsäure, 3-Hydroxy-2-naphthoesäure, 1-Hydroxy-2-naphthoesäure, 2-Hydroxyethan-sulfonsäure, Äpfelsäure, Schleimsäure, Salpetersäure, Naphthalinsulfonsäure, Palmitinsäure, D-Glucarsäure, Stearinsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Fumarsäure, Benzoesäure, Cholsäure, Ethansulfonsäure, Glucuronsäure, Glutaminsäure, Hippursäure, Lactobionsäure, Lysinsäure, Mandelsäure, Napadisylsäure, Nicotinsäure, Polygalacturonsäure, Salicylsäure, Sulfosalicylsäure, Tryptophansäure und Gemischen davon. Vorzugsweise sind die eine oder mehrere Säuren Zitronensäure und Chlorwasserstoffsäure. Falls vorliegend, liegt Zitronensäure bei einer Konzentration von etwa 0,02 mMol bis etwa 0,3 mMol pro ml Lösung vor. In einer Ausführungsform wird eine Säurekonzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol/ml Lösung verwendet. Ohne durch irgendeine Theorie festgelegt sein zu wollen, nehmen die Anmelder an, dass das durch die Zugabe einer Säure zu einer Lösung von Isomer I gebildete Salz einen Puffereffekt ergibt, weil die Azalidisomere selbst als eine Base wirken. Somit wird der Fachmann erkennen, dass die Menge an für den gewünschten pH-Wert erforderlichen Säure gemäß der verwendeten Säure schwanken wird und dass, um einen pH-Wert innerhalb des gewünschten Bereichs zu halten, zusätzliche Säure und/oder eine Base zu der Lösung von Säure und Isomer I oder Gemisch von Isomer I und Isomer II gegeben werden können. Geeignete Basen schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Alkalimetallhydroxide und -carbonate, Alkalimetallbicarbonate und Erdalkalimetallhydroxide und -carbonate. Natriumhydroxid und Kaliumhydroxid sind bevorzugt. Die vorstehend beschriebenen Säuren und Basen werden zweckmäßigerweise in Form ihrer wässrigen Lösungen verwendet.
Zusammensetzungen, die ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren (die „ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen") umfassen, sind zum Berandeln einer bakteriellen oder Protozoeninfektion bei einem Säuger verwendbar. Die ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen sind auch als Zwischenprodukte für die Bildung von stabilisierten ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen verwendbar.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin stabilisierte ins Gleichgewicht gebrachte Zusammensetzungen und Verfahren zur Stabilisierung derselben, umfassend Verdünnen der ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen mit einem oder mehreren mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln („Co-Lösungsmittel"). Das Co-Lösungsmittel beeinflusst nicht wesentlich das Verhältnis von Isomer I und Isomer II in den ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen und konserviert tatsächlich ihre Strukturintegrität. „Bewahren der Strukturintegrität" von Isomer I oder Isomer II, wie hierin verwendet, schließt ein, ist jedoch nicht begrenzt auf Verzögern von ihrer Hydrolysegeschwindigkeit von beispielsweise Descladinoseazalid, und Verzögen von deren Nebenproduktbildungsgeschwindigkeit von beispielsweise einem Formaldehyd und einem Acetaldehydinsertionsprodukt, das nachstehend definiert wird. Ohne durch irgendeine Theorie festgelegt sein zu wol-len, nehmen die Anmelder an, dass Verdünnung mit Co-Lösungsmittel die Stabilität der Azalidisomeren verbessert. Darüber hinaus kann aufgrund des Vorliegens von Co-Lösungsmittel beliebiger Schmerz, der bei Injektion der stabilisierten, ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen erfahren wird, geringer sein, als man bei einer Injektion einer nicht derartig stabilisierten, ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzung erfahren würde. Für das Stabilisieren der ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen verwendbare Co-Lösungsmittel schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Al-kohole, wie Ethanol und Isopropanol; Glycolether, wie Diethylenglycolmonomethylether, Diethylenglycolbutylether, Diethylenglycolmonomethylether und Diethylenglycoldibutylether; Polyethylenglycole, wie Polyethylenglycol-300 und Polyethylenglycol-400; Glycole, wie Propylenglycol („PG") und Glycerin; Pyrrolidone, wie 2-Pyrrolidon und N-Methyl-2-pyrrolidon; Glycerinformal; Dimethylsulfoxid; Sebacinsäuredibutylester; Polyethylensorbitanester, wie Polysorbat 80; und Gemische davon. Vorzugsweise schließen für das Stabilisieren der ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen in injizierbare Lösungen verwendbare Co-Lösungsmittel ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Ethanol, Polyethylenglycole, wie Polyethylenglycol-300 und Polyethylenglycol-400; Glycole, wie Propylenglycol und Glycerin; Pyrrolidone, wie 2-Pyrrolidon und N-Methyl-2-pyrrolidon, Glycerinformal; Dimethylsulfoxid, Polyoxyethylensorbitanester, wie Polysorbat-80 und Gemische davon; bevorzugter Glycerinformal, N-Methyl-2-pyrrolidon und Propylenglycol und besonders bevorzugt Propylenglycol. In einer Ausführungsform wird das Co-Lösungsmittel in einer Menge von etwa 250 bis etwa 750 mg/ml der pharmazeutischen Zusammensetzungen zum Stabilisieren derselben verwendet. In einer bevorzugten Ausführungsform werden etwa 400 bis etwa 600 mg des Co-Lösungsmittels pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzungen verwendet. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform werden etwa 450 bis etwa 550 mg des Co-Lösungsmittels pro ml der therapeutischen Zusammensetzungen angewendet.
In einer Ausführungsform werden ein oder mehrere Co-Lösungsmittel zu Isomer I oder zu einem Gemisch von Isomer I und Isomer II vor der Gleichgewichtseinstellung gegeben. In diesem Fall wird das erhaltene Gemisch auf eine Temperatur zwischen etwa 50°C und etwa 90°C, vorzugsweise etwa 60°C bis etwa 80°C, für etwa 0,5 bis etwa 24 Stunden, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 10 Stunden, bei einem pH-Wert von etwa 5,0 bis etwa 8,0, vorzugsweise bei einem pH-Wert von etwa 6,0 bis etwa 8,0 gegeben. In einer bevorzugten Ausführungsform wird Gleichgewichtseinstellung der Azalidisomeren in Abwesenheit von Co-Lösungsmittel ausgeführt, das zu den ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen, nachdem sie auf etwa Raumtemperatur gekühlt wurden, gegeben wird.
Nach der Zugabe des Co-Lösungsmittels kann der pH-Wert der erhaltenen Lösung zum. weiteren Verbessern der Stabilität der Zusammensetzung erneut eingestellt werden. Der pH-Wert wird durch dem Fachmann bekannte Verfahren, wie beispielsweise durch Zugeben einer Menge von Säure oder Base, wie vorstehend beschrieben, beispielsweise als eine 10%ige (Gewicht/Gewicht) Stammlösung und Messen des pH-Werts der erhaltenen Lösung unter Verwendung von beispielsweise einem pH-Messgerät eingestellt. In einer Ausführungsform wird der pH-Wert der erhaltenen Lösung, falls erforderlich, auf etwa 4,5 bis etwa 7,5, vorzugsweise etwa 5,0 bis etwa 6,0, besonders bevorzugt etwa 5,2 bis etwa 5,6, eingestellt.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin pharmazeutische Zusammensetzungen, die ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren, Wasser, einer oder mehreren Säuren und einem oder mehreren mit Wasser mischbaren Co-Lösungsmitteln umfassen. Die Menge der Azalidisomeren in den pharmazeutischen Zusammensetzungen liegt im Bereich von etwa 50 mg Azalidisomeren pro ml pharmazeutischer Zusammensetzung bis etwa 200 mg Azalidisomeren pro ml pharmazeutischer Zusammensetzung. Vorzugsweise umfassen die pharmazeutischen Zusammensetzungen et wa 75 mg bis etwa 150 mg, bevorzugter etwa 90 bis etwa 110 mg der Azalidisomeren pro ml pharmazeutischer Zusammensetzung.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können weiterhin ein oder mehrere Antioxidanzien umfassen. Antioxidanzien verzögern die Geschwindigkeit von oder verhindern den oxidativen Zerfall der pharmazeutischen Zusammensetzungen. Geeignete Antioxidanzien schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Natriumbisulfit, Natriumsulfit, Natriummetabisulfit, Natriumthiosulfat, Natriumformaldehydsulfoxylat, L-Ascorbinsäure, d-Erythroascorbinsäure, Acetylcystein, Cystein, Monothioglycerin („MTG"), Thioglycolsäure, Thioessigsäure, Thioharnstoff, Dithiothreitol, Dithioerythreitol, Glutathion, Palmitinsäureascorbylester, butyliertes Hydroxyanisol, butyliertes Hydroxytoluol, Nordihydroguajaretsäure, Gallussäure, Propylester, α-Tocopherol und Gemische davon. Der Fachmann wird erkennen, dass die Menge an Antioxidanz gemäß dem verwendeten Antioxidanz schwanken wird. In einer bevorzugten Ausführungsform liegt das Antioxidanz, falls vorliegend, in einer Menge von etwa 0,01 mg bis etwa 10 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung vor. In einer bevorzugteren Ausführungsform ist das Antioxidanz Monothioglycerin und liegt in einer Menge von etwa 1 mg bis etwa 8 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung vor. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist das Antioxidanz Monothioglycerin und liegt in einer Menge von etwa 4 mg bis etwa 6 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung vor.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen umfassen gegebenenfalls ein oder mehrere Konservierungsmittel. Konservierungsmittel sind zum Verzögern der Geschwindigkeit von oder zum Verhindern der Proliferation von Mikroorganismen, insbesondere wenn die pharmazeutischen Zusammensetzungen Luft ausgesetzt sind, verwendbar. Verwendbare Konservierungsmittel sind: wirksam gegen ein breites Spektrum von Mikroorganismen, physikalisch, chemisch und mikrobiologisch stabil über die Lebensdauer der pharmazeutischen Zusammensetzungen, nicht toxisch, hinreichend löslich, kompatibel mit anderen Komponen ten der Zusammensetzung und annehmbar bezüglich Geschmack und Geruch. Geeignete Konservierungsmittel schließen ein, sind jedoch nicht begrenzt auf Benzalkoniumchlorid, Benzethoniumchlorid, Benzoesäure, Benzylalkohol, Methylparaben, Ethylparaben, Propylparaben, Butylparaben, Natriumbenzoat, Phenol und Gemische davon. In einer bevorzugten Ausführungsform sind der eine oder mehrere Konservierungsstoffe ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Benzylalkohol, Methylparaben, Propylparaben, einer Kombination von Methylparaben/Propylparaben und Phenol. Falls vorliegend, liegen der eine oder mehrere Konservierungsmittel in einer Menge von etwa 0,01 bis etwa 10 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzungen vor. Vorzugsweise ist der eine oder die mehreren Konservierungsmittel Phenol und liegt in einer Menge von etwa 2,0 bis etwa 5,0 mg pro ml, bevorzugter etwa 2,0 bis etwa 3,0 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzungen vor. Der Fachmann wird erkennen, dass die Menge an in den vorliegenden Zusammensetzungen verwendetem Konservierungsmittel von dem ausgewählten Konservierungsmittel abhängen wird, und dass einige Konservierungsmittel bei niederen Konzentrationen, auch geringer als etwa 0,01 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzungen, verwendet werden können.
In einer bevorzugten Ausführungsform haben die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen einen pH-Wert von etwa 5,0 bis etwa 7,0 und umfassen: (1) ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren in einer Menge von etwa 50 mg bis etwa 200 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung; (2) Zitronensäure in einer Konzentration von etwa 0,02 mMol bis etwa 0,3 mMol pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung und gegebenenfalls eine Menge von Chlorwasserstoffsäure, die wirksam ist, um den pH-Bereich zu erreichen; (3) Propylenglycol in einer Menge von etwa 250 bis etwa 750 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung; (4) Monothioglycerin in einer Menge von etwa 1 mg bis etwa 15 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung und (5) Wasser in einer Menge von et wa 100 bis etwa 750 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung.
In einer bevorzugteren Ausführungsform haben die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen einen pH-Wert von etwa 5,0 bis etwa 6,0 und umfassen: (1) ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren in einer Menge von etwa 75 mg bis etwa 150 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung; (2) Zitronensäure in einer Menge von etwa 0,05 mMol bis etwa 0,15 mMol pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung und gegebenenfalls eine Menge von Chlorwasserstoffsäure, die wirksam ist, um den pH-Bereich zu erreichen; (3) Propylenglycol in einer Menge von etwa 400 bis etwa 600 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung; (4) Monothioglycerin in einer Menge von etwa 1 mg bis etwa 8 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung und (5) Wasser in einer Menge von etwa 250 bis etwa 550 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform haben die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen einen pH-Wert von etwa 5,2 bis etwa 5,6 und umfassen: (1) ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren in einer Menge von etwa 90 mg bis etwa 110 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung; (2) Zitronensäure in einer Menge von etwa 0,075 mMol bis etwa 0,125 mMol pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung und eine Menge von Chlorwasserstoffsäure, die wirksam ist, um den pH-Bereich zu erreichen; (3) Propylenglycol in einer Menge von etwa 450 bis etwa 550 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung; (4) Monothioglycerin in einer Menge von etwa 4 mg bis etwa 6 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung und (5) Wasser in einer Menge von etwa 300 bis etwa 500 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können wie nachstehend hergestellt werden: Reagenzien werden in ein Edelstahl- oder Glas-ausgekleidetes, ummanteltes Gefäß gegebenenfalls mit Stickstoffbedeckung gegeben. Wasser zur Injektion wird zu dem Reaktionsgefäß gegeben und das Rühren wird begonnen. Jede zusätzliche Komponente wird, während das Ge misch kontinuierlich gerührt wird, zugesetzt. Säure wird in einer Konzentration von etwa 0,02 mMol bis etwa 0,5 mMol pro ml Wasser zugegeben und auflösen lassen. Eine wässrige Lösung einer Säure, beispielsweise eine 10%ige (Gewicht/Gewicht) wässrige Lösung von Chlorwasserstoffsäure, wird gegebenenfalls zum Einstellen des pH-Werts auf einen gewünschten Bereich zugesetzt und die Lösung wird vermischt. An diesem Punkt wird Isomer I oder ein Gemisch von Isomer I und Isomer II zu dem Wasser-und-Säure-Gemisch langsam und in kleinen Mengen zum Vermeiden von Klumpenbildung gegeben. Isomer I oder ein Gemisch von Isomer I und Isomer II wird auflösen lassen und der pH-Wert der erhaltenen Lösung wird gemessen. In einer Ausführungsform ist die Konzentration von Isomer I oder dem Gemisch von Isomer I und Isomer II etwa 50 mg bis etwa 500 mg pro ml, vorzugsweise etwa 100 bis etwa 300 mg/ml und besonders bevorzugt etwa 225 bis etwa 275 mg/ml der erhaltenen Lösung. Die Lösung wird dann auf eine Temperatur von etwa 70°C ± 10°C erhitzt und wird bei dieser Temperatur, bis ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren erhalten wird, gehalten. Verfahren zum Bestimmen, dass ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren erhalten wurde, schließen Gelchromatographie, Dünnschichtchromatographie und Hochleistungsflüssigchromatographie ein. Im Allgemeinen wird unter Verwendung der hierin beschriebenen Bedingungen ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren in etwa 1 bis etwa 8 Stunden erhalten. Ist das Gleichgewichtsgemisch der Isomeren einmal erhalten, wird die sich ergebende Lösung auf etwa 25°C ± 10°C gekühlt. Diese Lösung kann als eine pharmazeutische Zusammensetzung verwendet werden. Vorzugsweise wird Co-Lösungsmittel in einer Menge von etwa 250 bis etwa 750 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung zugegeben. Das Antioxidanz wird gegebenenfalls in einer Menge von etwa 0,01 mg bis etwa 10 mg/ml der pharmazeutischen Zusammensetzung zugegeben. Falls vorliegend, wird Konservierungsmittel in einer Menge von etwa 0,01 bis etwa 10 mg pro ml der pharmazeutischen Zusammensetzung zugegeben und der pH-Wert wird auf etwa 5,0 bis etwa 8,0, vorzugsweise etwa 5,0 bis etwa 6,0 durch Zugeben von Säure und/oder Base, beispielsweise als eine 10%ige (Gewicht/Gewicht) wässrige Lösung oder in fester Form eingestellt. Das erhaltene Gemisch wird zu einem gewünschten Volumen verdünnt. In einer Ausführungsform ist die Endkonzentration des Gleichgewichtsgemisches von Isomeren etwa 50 mg bis etwa 200 mg, vorzugsweise etwa 75 mg bis etwa 150 mg und besonders bevorzugt etwa 90 mg bis etwa 110 mg pro ml der erhaltenen pharmazeutischen Zusammensetzung.
Die erhaltenen Zusammensetzungen werden vorzugsweise, beispielsweise mittels Durchleiten der Zusammensetzungen durch ein Vorfilter, bzw. ein 5- bis 10-μm-Filter, und dann durch ein 0,2-μm-Endsterilisationsfilter, das vorher sterilisiert wurde, sterilisiert. Das Sterilisationsfilter wird durch Feuchtigkeitswärmeautoklavenbehandlung für 60 Minuten bei 121°C sterilisiert und wird hinsichtlich seiner Integrität bzw. Unversehrtheit unter Verwendung eines Druckhalteverfahrens vor der Sterilisation und nach Produktfiltration getestet. Die sterile Lösung wird zu geeigneten Behältern, beispielsweise Glasfläschchen, gegeben, die bei 250°C für 240 Minuten in einem Trockenwärmetunnel sterilisiert und depyrogenisiert werden. Der Behälterkopfraum wird mit einem Inertgas, beispielsweise Argon oder vorzugsweise Stickstoff, gespült. Die Behälter werden mit Stopfen verschlossen, die durch Waschen depyrogenisiert und durch Feuchtwärmeautoklavenbehandlung für 60 Minuten bei 121°C sterilisiert sind. Die Behälter werden dann versiegelt. Der Fachmann wird erkennen, dass geringe Modifizierungen der vorstehend genannten Maßnahmen verwendet werden können, um sterile Zusammensetzungen herzustellen.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin Verfahren zum Behandeln eines Säugers, umfassend Verabreichen an einen Säuger bei Bedarf einer solchen Behandlung einer pharmazeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung. Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen können zum Behandeln von Infektionen durch Gram-positive Bakterien, Gram-negative Bakterien, Protozoen und Mycoplasma, einschließlich, jedoch nicht begrenzt auf Actinobacillus pleuropneumonia, Pasteurella multocida, Pasteurella haemolytica, H. parasuis, B. bronchiseptica, S. choleraesuis, S. pilo, Moraxella bovis, H. somnus, M. bovis, Eimeria zuernii, Eimeria bovis, A. marginale, M. hyopneumoniae, Lawsonia intracellularis und Staphylococcus, Salmonellen, Chlamydien, Coccidia, Cryptosporidia, E. coli, Haemophilus, Neospora und Streptococcus-Spezies, verwendet werden.
Der wie hierin verwendete Begriff „Behandlung" schließt, sofern nicht anders ausgewiesen, die Behandlung oder Verhinderung einer bakteriellen Infektion oder Protozoen-Infektion, wie durch das erfindungsgemäße Verfahren bereitgestellt, ein.
Wie hierin verwendet, schließen, sofern nicht anders ausgewiesen, die Begriffe „bakterielle Infektion(en)" und „Protozoen-Infektion(en)" bakterielle Infektionen und Protozoen-Infektionen ein, die bei Säugern, Fisch und Vögeln auftreten, sowie Störungen, die bakterielle Infektionen und Protozoen-Infektionen betreffen, die durch Verabreichen von Antibiotika, wie den erfindungsgemäßen behandelt oder verhindert werden können, ein. Solche bakteriellen Infektionen und Protozoen-Infektionen und Störungen, die solche Infektionen betreffen, schließen die nachstehenden ein: Pneumonie, Otitis media, Sinusitis, Bronchitis, Tonsilitis und Mastoiditis, bedingt durch Infektion durch Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus oder Peptostreptococcus spp.; Pharyngitis, Rheumatisches Fieber und Glumerulonephritis, bedingt durch Infektionen durch Streptococcus pyogenes, Gruppen C und G Streptococci, Clostridium diptheriae oder Actinobacillus haemolyticum; Darmtraktinfektionen, bedingt durch Infektionen durch Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae oder Chlamydia pneumoniae; unkomplizierte Haut- und Weichgewebsinfektionen, Abszesse und Osteomyelitis und Puerperalfieber, bedingt durch Infektion durch Staphylococcus aureus, Coagulase-positive Staphylococci (d. h. S. epidermidis, S. hemolyticus etc.), Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, Streptococcal Gruppen G-F (Minute-Kolonie Streptococci), Viridans streptococci, Corynebakterium minutissimum, Clostridium spp. oder Bartonella henselae; unkomplizierte akute Harntraktinfektionen, bedingt durch Infektion durch Staphylococcus saprophyticus oder Enterococcus spp.; Urethritis und Cervicitis; und sexuell übermittelte Erkrankungen, bedingt durch Infektion durch Chlamydia trachomatis, Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, Ureaplasma urealyticum oder Neiserria gonorrheae; toxische Krankheiten, bedingt durch Infektion durch S. aureus (Nahrungsmittelvergiftungs- und toxisches Schock-Syndrom) oder Gruppen A, B und C Streptococci; Geschwüre, bedingt durch Infektion durch Helicobacter pylori; systemische Febrilsyndrome, bedingt durch Infektion durch Borrelia recurrentis; Lyme-Erkrankung, bedingt durch Infektion durch Borrelia burgdorferi; Conjunctivitis; Keratitis und Dacrocystitis, bedingt durch Infektion durch Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, S. aureus, S. pneumoniae, S. pyogenes, H. influenza oder Listeria spp.; disseminiertes Mycobacterium avium-Komplex (MAC)-Erkrankung, bedingt durch Infektion durch Mycobacterium avium oder Mycobacterium intracellulare; Gastroenteritis, bedingt durch Infektion durch Campylobacter jejuni; Intestinalprotozoa, bedingt durch Infektion durch Gryptosporidium spp.; odontogene Infektion, bedingt durch Infektion durch Viridans streptococci; persistenter Husten, bedingt durch Infektion von Bordetella pertussis; Gasgangräne, bedingt durch Infektion durch Clostridium perfringens oder Bacteroides spp. und Arteriosklerose, bedingt durch Infektion durch Helicobacter pylori oder Chlamydia pneumoniae. Bakterielle Infektion und Protozoeninfektionen und Störungen, die durch solche Infektionen bedingt sind, die bei Tieren behandelt oder verhindert werden können, schließen die Nachstehenden ein: respiratorische Erkrankung beim Rind, bedingt durch Infektion durch P. haem., P. multocida, Mycoplasma bovis oder Bordetella spp.; enterische Erkrankung beim Rind, bedingt durch Infektion durch E. coli oder Protozoa (d.h. Coccidia, Cryptosporidia etc.); Milchviehmastitis, bedingt durch Infektion durch Staph. aureus, Strep. uberis, Strep. agalactiae, Strep. dysgalactiae, Klebsiella spp.; Corynebacterium oder Enterococcus spp.; respiratorische Erkrankung beim Schwein, bedingt durch Infektion durch A. pleuro., P. multocida oder Mycoplasma spp.; enterische Erkrankung beim Schwein, bedingt durch Infektion durch E. coli, Lawsonia intracellularis, Salmonellen oder Serpulina hyodyisinteriae; Rinderklauenfäule, bedingt durch Infektion durch Fusobacterium spp.; Rindermetritis, bedingt durch Infektion durch E. coli; Rinderhaarwarzen (cow hairy warts), bedingt durch Infektion durch Fusobacterium necrophorum oder Bacteroides nodosus; epidemische Konjunktivitis bei Rindern, bedingt durch Infektion durch Moraxella bovis; Verkalben bei Rindern, bedingt durch Infektion durch Protozoa (d. h. Neosporium); Harntraktinfektionen bei Hunden und Katzen, bedingt durch Infektion durch E. coli; Haut- und Weichgewebsinfektionen bei Hunden und Katzen, bedingt durch Infektion durch Staph. epidermidis, Staph. intermedius, coagulase neg. Staph. oder P. multocida, und Dental- oder Mundinfektionen bei Hunden und Katzen, bedingt durch Infektionen durch Alcaligenes spp.; Bacteroides spp.; Clostridium spp.; Enterobacter spp.; Eubacterium, Peptostreptococcus, Porphyromonas oder Prevotella. Andere bakterielle Infektionen und Protozoen-Infektionen und Störungen, die durch solche Infektionen bedingt sind, die gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren behandelt oder verhindert werden können, werden in J. P. Sanford et al., „The Sanford Guide To Antimicrobial Therapy", 26. Ausgabe (Antimicrobial Therapy, Inc., 1996) angeführt.
Die antibakterielle und Antiprotozoenwirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen gegen bakterielle und Protozoenpathogene wird durch die Fähigkeit der Verbindungen gezeigt, das Wachstum von definierten Stämmen von humanen oder Tierpathogenen zu inhibieren.
Assay I

Assay I, nachstehend beschrieben, wendet herkömmliche Methodologie und Interpretationskriterien an und ist aufgebaut, um die Richtung der chemischen Modifizierungen bereitzustellen, die zu Verbindungen führen können, die definierte Mechanismen von Macrolidbeständigkeit umgehen. In Assay I wird eine Charge von Bakterienstämmen angeordnet, um eine Vielzahl von pathogenen Zielspezies, einschließlich Vertreter von Macrolid-resistenten Mechanismen, die charakterisiert wurden, einzuschließen. Die Verwendung von dieser Charge ermöglicht die chemische Struktur/Wirkungsbeziehung bezüglich Stärke, Wirkungsspektrum und Strukturelemente oder Modifizierungen, die notwendig sein können, um Resistenzmechanismen einzuschätzen, zu bestimmen. Bakterielle Pathogene, die eine Screeningmenge umfassen, werden in der nachstehenden Tabelle gezeigt. In vielen Fällen sind sowohl der Makrolid-anfällige Elternstamm als auch der Macrolid-resistente Stamm, der davon abgeleitet ist, verfügbar, um eine genauere Bewertung der Fähigkeiten der Verbindungen, den Resistenzmechanismus zu umgehen, bereitzustellen. Stämme, die das Gen mit der Bezeichnung ermA/ermB/ermC enthalten, sind gegen Macrolide-, Lincosamide- und Streptogramin-B-Antibiotika aufgrund der Modifizierungen (Methylierung) von 23S-rRNA-Molekülen durch eine Erm-Methylase beständig, wodurch im Allgemeinen das Binden von allen drei Strukturklassen verhindert wird. Zwei Arten von Macrolidefflux wurden beschrieben; msrA kodiert eine Komponente eines Effluxsystems in Staphylococci, das den Eintritt von Macroliden und Streptograminen verhindert, während mefA/E ein Transmembranprotein kodiert, das nur Efflux von Macroliden zuzulassen scheint. Inaktivierung von Macrolidantibiotika kann stattfinden und kann durch entweder eine Phosphorylierung des 2N-Hydroxyls (mph) oder durch Spaltung des macrocyclischen Lactons (Esterase) vermittelt werden. Die Stämme können unter Verwendung von herkömmlicher Polymerasekettenreaktion (PCR)-Technologie und/oder durch Sequenzieren der Resistenzdeterminante charakterisiert werden. Die Verwendung von PCR-Technologie in dieser Anmeldung wird in J. Sutcliffe et al. „Detection Of Erythromycin-Resistant Determinants By PCR", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 40(11), 2562-2566 (1996), beschrieben. Das Assay wird auf Mikrofiltertabletts ausgeführt und wird gemäß dem Leistungsstandard für Antimicrobial Disk Susceptibility Tests - Sechste Ausgabe; Erwiesener Standard, veröffentlicht durch The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)-Richtlinien interpretiert, wobei die minimale Inhibitorkonzentration (MIC) zum Vergleichen der Stämme verwendet wird. Das Gleichgewichtsgemisch von Azalidisomeren wird anfänglich in Dimethylsulfoxid (DMSO) als eine 40 mg/ml-Stammlösung gelöst.

Stammkennzeichnung	Macrolidbeständigkeitsmechanismus (Mechanismen)
Staphylococcus aureus 1116	anfälliger Stamm
Staphylococcus aureus 1117	ermB
Staphylococcus aureus 0052	anfälliger Stamm
Staphylococcus aureus 1120	ermC
Staphylococcus aureus 1032	msrA, mph, Esterase
Staphylococcus hemolyticus 1006	msrA, mph
Streptococcus pyogenes 0203	anfälliger Stamm
Streptococcus pyogenes 1079	ermB
Streptococcus pyogenes 1062	anfälliger Stamm
Streptococcus pyogenes 1061	ermB
Streptococcus pyogenes 1064	ermB
Streptococcus agalactiae 1024	anfälliger Stamm
Streptococcus agalactiae 1023	ermB
Streptococcus pneumoniae 1016	anfällig
Streptococcus pneumoniae 1046	ermB
Streptococcus pneumoniae 1095	ermB
Streptococcus pneumoniae 1175	mefE
Streptococcus pneumoniae 0085	anfällig
Haemophilus influenzae 0131	anfällig
Moraxella catarrhalis 0040	anfällig
Moraxella catarrhalis 1055	Erythromicin-Zwischenproduktresistenz
Escherichia coli 0266	anfällig

Assay II wird zum Test auf Wirkung gegen Pasteurella multocida verwendet und Assay III wird zum Test auf Wirkung gegen Pasteurella haemolytica verwendet.
Assay II
Dieses Assay basiert auf dem Flüssigkeitsverbindungsverfahren in Mikroliterformat. Eine Einzelkolonie von P. multocida (Stamm 59A067) wird in 5 ml Hirn-Herz-Infusions(BHI)- Brühe inokuliert. Das Gleichgewichtsgemisch von Azalidisomeren wird durch Solubilisieren von 1 mg des Gemisches in 125 μl Dimethylsulfoxid (DMSO) hergestellt. Verdünnungen des Gleichgewichtsgemisches von Azalidisomeren werden unter Verwendung von nicht inokulierter BHI-Brühe hergestellt. Die Konzentrationen des Gleichgewichtsgemisches von verwendeten Azalidisomeren liegen im Bereich von 200 μg/ml bis 0,098 μg/ml durch zweifache serielle Verdünnungen. Die P. multocida-inokulierte BHI wird mit nicht inokulierter BHI-Brühe zur Erzeugung einer 10⁴-Zellensuspension pro 200 μl verdünnt. Die BHI-Zellsuspensionen werden bezüglich serieller Verdünnungen des Gleichgewichtsgemisches von Azalidisomeren vermischt und 18 Stunden bei 37°C inkubiert. Die minimale Inhibitorkonzentration (MIC) ist gleich der Konzentration des Gemisches, das 100% Inhibierung des Wachstums von P. multocida, wie durch Vergleich mit einer nicht inokulierten Kontrolle bestimmt, zeigt.
Assay III
Dieses Assay basiert auf dem Agar-Verdünnungsverfahren unter Verwendung eines Steers-Replikators. Zwei bis fünf Kolonien, isoliert aus einer Agarplatte, werden in BHI-Brühe inokuliert und über Nacht bei 37°C unter Schütteln (200 U/min) inkubiert. Am nächsten Morgen werden 300 μl der voll-ständig gewachsenen P. haemolytica-Vorkultur in 3 ml frischer BHI-Brühe inokuliert und bei 37°C unter Schütteln (200 U/min) inkubiert. Die geeigneten Mengen des Gleichgewichtsgemisches von Azalidisomeren werden in Ethanol gelöst und eine Reihe von seriellen Zweifachverdünnungen werden hergestellt. Zwei ml der entsprechenden seriellen Verdünnung werden mit 18 ml des geschmolzenen BHI-Agars vermischt und verfestigt. Wenn die inokulierte P. haemolytica-Kultur 0,5 McFarland-Standarddichte erreicht, werden etwa 5 μl der P. haemolytica-Kultur auf BHI-Agarplatten, enthaltend die verschiedenen Konzentrationen des Gleichgewichtsgemisches von Azalidisomeren, unter Verwendung eines Steers-Replikators inokuliert und 18 Stunden bei 37°C inkubiert. Die Anfangskonzentrationen des Gemisches liegen im Bereich von 100 bis 200 μg/ml. Die MIC ist gleich der Konzentration des Gemisches, das 100% Inhibierung des Wachstums von P. haemolytica, wie durch Vergleich mit einer nicht inokulierten Kontrolle bestimmt, zeigt.
Besonders bevorzugt wird das Mikroverdünnungsassay unter Verwendung von basisch eingestellter Müller-Hinton-Brühe, gemäß NCCLS-Richtlinie M31-A, Band 19, Nr. 11, „Performance standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests for bacteria isolated from animals", Juni 1999 (ISBN 1-56238-377-9), welche hierin durch Hinweis einbezogen ist, ausgeführt. Dieses Assay kann verwendet werden, um die MIC einer Verbindung gegen Brühe P. haemolytica und P. multocida zu bestimmen. Zum Beispiel wurde das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren gemäß diesem Standard gegen P. haemolytica (ATCC 14003) getestet und eine MIC von 1 μg/ml gefunden. Wenn das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren gemäß diesem Standard gegen P. multocida (ATCC 43137) getestet wurde, wurde die MIC mit 1 μg/ml gefunden.
Assay IV
Die In-vivo-Wirksamkeit der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen kann durch herkömmliche Tierschutzuntersuchungen, die dem Fachmann gut bekannt sind, gewöhnlich an der Maus ausgeführt, bestimmt werden.
Mäuse werden in Käfigen (l0 pro Käfig) bis zu ihrer Ankunft gehalten und für ein Minimum von 48 Stunden vor der Verwendung akklimatisieren lassen. Die Tiere werden mit 0,5 ml einer 3 × 10³-CFU/ml-bakteriellen Suspension (P. multocida-Stamm 59A006) intraperitoneal inokuliert. Jeder Versuch hat mindestens drei nicht medikamentierte Kontrollgruppen einschließlich eine infizierte mit 0,1 Reaktionsdosis und zwei infizierte mit 1 × Reaktionsdosis; wobei auch eine 10 × Reaktionsdatengruppe verwendet werden kann. Im Allgemeinen können alle Mäuse in einer gegebenenen Studie innerhalb 30-90 Minuten exponiert werden, insbesondere wenn eine Wiederho lungsspritze (wie eine Cornwall-7-Spritze) zum Verabreichen der Exposition verwendet wird. 30 Minuten, nachdem die Exposition begonnen hatte, wird die erste pharmazeutische Zusammensetzungsbehandlung gegeben. Es kann notwendig sein, dass eine zweite Person das Dosieren der pharmazeutischen Zusammensetzung beginnt, wenn alle Tiere am Ende von 30 Minuten nicht exponiert wurden. Die Verabreichungswege sind subkutane oder orale Dosen. Subkutane Dosen werden in die lockere Haut am Rücken des Nackens verabreicht, wohingegen orale Dosen mithilfe einer Zuführungsnadel dosiert werden. In beiden Fällen wird ein Volumen von 0,2 ml pro Maus verwendet. Die Zusammensetzungen werden 30 Minuten, 4 Stunden und 24 Stunden nach Exposition verabreicht. Eine Kontrollzusammensetzung von bekannter Wirksamkeit, verabreicht durch den gleichen Weg, wird in jedem Test eingeschlossen. Tiere werden täglich beobachtet und die Anzahl an Überlebenden in jeder Gruppe wird aufgezeichnet. Die Beobachtung des P.-multocida-Modells wird 96 Stunden (4 Tage) nach Exposition fortgesetzt.
Die PD₅₀ ist eine berechnete Dosis, bei der die getestete pharmazeutische Zusammensetzung 50% einer Gruppe von Mäusen vor dem Tod aufgrund von bakterieller Infektion schützt, welche in Abwesenheit der Behandlung letal sein würde.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen zeigen antibakterielle Wirksamkeit in einem der vorstehend beschriebenen Assays, insbesondere in Assay IV.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen können zum Behandeln von Menschen, Rindern, Pferden, Schaf, Schwein, Ziegen, Kaninchen, Katzen, Hunden und anderen Säugern bei Bedarf solcher Behandlung verwendet werden. Insbesondere können die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen zum Behandeln von u. a. Rinderatemwegserkrankung, Schweineatemwegserkrankung, Pneumonie, Pasteurellose, Coccidiose, Anaplasmose und infektiöser Keratinitis verwendet werden. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können durch orale, intramuskuläre, intravenöse, subkutane, intraokulare, parenterale, örtliche, intravaginale oder rektale Wege verabreicht werden. Zur Verabreichung an Rinder, Schwein oder andere Haustiere können die pharmazeutischen Zusammensetzungen im Futter oder oral als eine Trankzusammensetzung verabreicht werden. Vorzugsweise werden die pharmazeutischen Zusammensetzungen intramuskulär, intravenös oder subkutan injiziert. In einer bevorzugten Ausführungsform werden die pharmazeutischen Zusammensetzungen in Dosierungen im Bereich von etwa 0,5 mg des Gleichgewichtsgemischs von Isomeren pro kg Körpergewicht pro Tag (mg/kg/Tag) bis etwa 20 mg/kg/Tag verabreicht. In einer bevorzugteren Ausführungsform werden die pharmazeutischen Zusammensetzungen in Dosierungen im Bereich von etwa 1 mg/kg/Tag bis etwa 10 mg/kg/Tag verabreicht. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform werden die pharmazeutischen Zusammensetzungen in Dosierungen im Bereich von etwa 1,25 mg/kg/Tag bis etwa 5,0 mg/kg/Tag verabreicht. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können bis zu einige Male pro Tag für etwa 1 bis etwa 15 Tage, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 5 Tage, verabreicht werden und, falls geeignet, wiederholt werden. Der Fachmann wird leicht erkennen, dass Variationen in Dosierungen in Abhängigkeit von der Art, Gewicht und Zustand des zu behandelnden Patienten, seiner individuellen Reaktion auf die pharmazeutischen Zusammensetzungen und den besonderen ausgewählten Verabreichungsweg auftreten können. In einigen Fällen können Dosierungsspiegel unter der unteren Grenze der vorstehend erwähnten Bereiche therapeutisch wirksam sein, während in anderen Fällen noch größere Dosen angewendet werden können, ohne Verursachen von schädlichen Nebenwirkungen, vorausgesetzt, dass solche größeren Dosen zuerst in verschiedene kleine Dosen zur Verabreichung über den Tag geteilt werden.
Die nachstehenden Beispiele erläutern weiterhin die Zusammensetzungen und Verfahren der vorliegenden Erfindung. Es sollte selbstverständlich sein, dass die vorliegende Erfindung nicht auf die speziellen Einzelheiten der nachstehend bereitgestellten Beispiele begrenzt sind.
Beispiel 1
Synthese von Isomer II. Zu einem 2-l-Erlenmeyer-Kol-ben wurde Desmethylazithromycin (190,5 g, 259,2 mMol), Methylenchlorid (572 ml) und Magnesiumsulfat (38 g) gegeben. Das Gemisch wurde 10 Minuten gerührt, dann in einen 5-l-Rundkolben filtriert. Weiteres Methylenchlorid (2285 ml) wurde zugegeben und die Lösung auf 0-5°C gekühlt. CBZ-Cl (58,4 ml) (CBZ-Cl = Chlorameisensäurebenzylester) wurde dann innerhalb 10 Minuten zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei ≈ 0°C für 6 h gerührt, dann bei Umgebungstemperatur über Nacht. HPLC-Analyse wies das Vorliegen von restlichem Ausgangsmaterial aus, sodass die Reaktion erneut auf ≈ 0°C gekühlt wurde und zusätzlicher CBZ-Cl (19,5 ml) in einer einzelnen Portion zugegeben wurde. Das Reaktionsgemisch wurde bei 0°C 5,5 h, dann bei Umgebungstemperatur 2,5 h gerührt. DC wies eine vollständige Reaktion aus. Die Reaktion wurde mit gesättigtem wässrigen Natriumbicarbonat (953 ml) gestoppt und die Phasen getrennt. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, dann filtriert und auf konzentriert unter Bereitstellung der Verbindung der Formel (III):
Zu einem 5-l-Rundkolben, enthaltend die Verbindung der Formel (III) (225,3 g) in Methylenchlorid (901 ml) und DMSO (450 ml), wurde bei –65°C Trifluoressigsäureanhydrid (82,4 ml) gegeben. Die Temperatur wurde bei –60°C während der Zugabe gehalten, welche in 9 Minuten vollständig war. Die Reaktion wurde bei –65 bis –70°C für 20 Minuten gerührt. Die Reaktion wurde mit Triethylamin (145 ml) gestoppt, dann bei –60° bis –65°C für 20 Minuten gerührt. Zum Reaktionsgemisch wurde dann Wasser (1127 ml) innerhalb 3 Minuten gegeben, wobei an dem Punkt die Temperatur auf –2°C stieg. Das Reaktionsgemisch wurde 10 Minuten gerührt und die Phasen wurden abtrennen lassen. Die organische Phase wurde mit Wasser (675 ml), dann mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (675 ml) gewaschen. Die organische Phase wurde über Magnesiumsulfat getrocknet, dann filtriert und die organischen Lösungsmittel durch Destillation entfernt. MTBE wurde zugegeben und destilliert, um alle Spuren von Methylenchlorid und DMSO zu entfernen. Weiteres MTBE wurde zu einem Gesamtvolumen von 3380 ml zugegeben. Dibenzoyl-D-weinsäuremonohydrat (87,8 g) in MTBE (1126 ml) wurde unter Bildung einer dicken Aufschlämmung zugegeben. Das Gemisch wurde unter Rückfluss erhitzt und über Nacht gerührt. Nach Kühlen auf Umgebungstemperatur wurden die Feststoffe auf einem Büchner-Trichter gesammelt und mit MTBE gespült. Die Feststoffe wurden in einem Trockenofen bei 40°C getrocknet unter Bereitstellung von 258,3 g des Dibenzoyltartratsalzes der Verbindung der Formel (IV):
Zu einem 3-l-Rundkolben wurden Methylenchlorid (800 ml) und das Dibenzoyltartratsalz der Verbindung der Formel (IV) (188 g) gegeben. Wasser (400 ml) und Kaliumcarbonat (45,5 g) wurden zugegeben und das Gemisch wurde 5 Minuten bei Umgebungstemperatur gerührt. Die organische Phase wurde abgetrennt, dann mit Wasser (250 ml) gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Trocknungsmittel wurde durch Filtration entfernt und die erhaltene Lösung unter einem Stickstoffstrom zu einem Endvolumen von 623 ml eingedampft unter Bereitstellung eines freien Basenketons.
Zu einem 5-l-Rundkolben wurden THF (623 ml) und Trimethylsulfoniumbromid (74,7 g) gegeben. Die erhaltene Aufschlämmung wurde auf –10°C gekühlt und Kalium-tert-butoxid (54,4 g) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 10 Minuten bei –10°C gerührt, dann innerhalb 5 Minuten auf –70°C gekühlt. Eine Lösung des freien Basenketons wurde innerhalb 11 Minuten zugegeben unter Halten der Temperatur zwischen –60 und –65°C. HPLC wies aus, dass die Reaktion nach 90 Minuten vollständig war. Die Reaktion wurde bei –60°C unter Verwendung einer Lösung von Ammoniumchlorid (315 g) in Wasser (1800 ml) gestoppt. Die Temperatur stieg auf –5°C während des Stoppens. Das Reaktionsgemisch wurde auf 5-10°C erwärmt und die Phasen getrennt. Die organische Phase wurde über Natriumsulfat getrocknet, dann filtriert und aufkonzentriert unter Bereitstellung der Verbindung der Formel (V) (117,4 g) als ein gelber Schaum. HPLC wies eine Reinheit von 61,4% durch Peak-Fläche aus.
Zu einer Lösung der Verbindung der Formel (V) (275 g, 312 mMol) in trockenem Methanol (2,75 l) wurde Kaliumjodid (518 g, 3,12 Mol) und n-Propylamin (250 ml, 3,04 Mol) gegeben. Das Gemisch wurde über Nacht bei 45°C gerührt. DC wies eine vollständige Reaktion aus. Das Reaktionsgemisch wurde an einem Rotationsverdampfer aufkonzentriert und der Rückstand zwischen Wasser (2,5 l) und Methylenchlorid (2,5 l) verteilt. Der pH-Wert der wässrigen Phase wurde unter Verwendung von 3 N wässriger HCl auf 6,7 eingestellt. Die Extraktion wurde ein weiteres Mal wiederholt. Die vereinigten wässrigen Phasen wurden mit frischem Methylenchlorid (1,5 l) vereinigt und der pH-Wert der wässrigen Phase unter Verwendung von festem Kali umcarbonat auf 8,5 eingestellt. Die Phasen wurden getrennt und die wässrige Phase zweimal mit weiterem Methylenchlorid erneut extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, dann filtriert. Das Filtrat wurde in einem Rotationsverdampfer aufkonzentriert unter Bereitstellung eines beigen Schaums (230 g). Reinigung des Schaums wurde an einer Aufschlämmungs-gepackten Kieselgelsäule unter Verwendung von 19/3 (Volumen/Volumen) Hexane-Diethylamin als die mobile Phase bewirkt. Auf diese Weise lieferten 125 g Rohprodukt 72 g Isomer I als einen weißen, amorphen Schaum.
Isomer I wurde in Acetonitril (0,5 l) bei Umgebungstemperatur gelöst. Desionisiertes Wasser (1 l) wurde danach hinzugegeben, was Ausfällung veranlasste. Weiteres Acetonitril (0,5 l) wurde dann zugegeben unter Bereitstellung einer homogenen Lösung, die bei Umgebungstemperatur 30 h gerührt wurde. HPLC-Analyse wies die Bildung einer neuen Komponente aus, die ≈ 20% Gesamtpeakfläche umfasste.
Das organische Lösungsmittel wurde an einem Rotationsverdampfer entfernt. Kaliumcarbonat (30 g) wurde zu dem wässrigen Rückstand gegeben, gefolgt von Methylenchlorid (0,3 l). Das Gemisch wurde geschüttelt und die untere organische Phase entfernt. Zwei weitere Extraktionen (2 × 0,3 l) wurden auch ausgeführt. Vereinigte organische Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, dann filtriert und die erhaltene Lösung zu einem trockenen Schaum (≈ 10 g) aufkonzentriert.
Das erhaltene Gemisch von Isomer I und Isomer II wurde in einem Gemisch von Methylenchlorid und 19/3 (Volumen/Volumen) Hexane-Diethylamin gelöst und auf eine Aufschlämmungs-gepackten Kieselgelsäule aufgegeben, dann mit dem 19/3-System eluiert. Das Elutionsmittel wurde auf 19/6 Hexane-Diethylamin in Fraktion 56 umgestellt. Fraktion 9-17 wurden vereinigt und aufkonzentriert zu einem trockenen Schaum, der nur nicht umgesetztes Ausgangsmaterial enthielt. Fraktionen 52-72 wurden vereinigt und aufkonzentriert und enthielten Isomer II (79% rein lt. HPLC).
Beispiel 2
Nachstehende Tabelle 1 zeigt die Wirkung des pH-Werts, Temperatur, Säuretyp und Konzentration von Isomer I auf die Gleichgewichtsreaktionsgeschwindigkeit und auf die Anteile von Hauptverunreinigungen nach dem Gleichgewicht. Wiederholte Versuche (Daten nicht gezeigt) zeigten die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse. Das Gleichgewichtsverhältnis von Isomeren I und II (etwa 90% ± 4% bzw. etwa 10% ± 4%) stimmten mit allen Versuchen überein. Analyse der Daten wies aus, dass pH-Wert und Temperatur eine wesentliche Wirkung auf die für das Gleichgewicht erforderliche Zeit aufweisen. Ohne durch irgendeine Theorie festgelegt sein zu wollen, ergibt Senkung der Gleichgewichtstemperaturen oder Senkung von pH-Werten im Allgemeinen im Wesentlichen längere Gleichgewichtszeiten. Die Gleichgewichtszeit kann auch u. a. von der Konzentration des Ausgangsmaterials und der Art und Konzentration der angewendeten Säure abhängen. Isomer I wurde bei einer Konzentration von bis zu etwa 300 mg/ml Verbrauch auf eine Temperatur von etwa 40°C bis etwa 80°C in Gegenwart von einer oder mehreren Säuren bei einer Konzentration von etwa 0,2 mMol bis etwa 1,0 mMol pro ml Gemisch und mit einer ausreichenden Menge Chlorwasserstoffsäure erhitzt, um einen pH-Wert von etwa 6, 5 bis etwa 7, 5 für bis zu etwa 20 Stunden zu erreichen, um ein Gleichgewichtsgemisch von Isomeren zu erzeugen, das etwa 95% bis 98% rein ist. Die kinetischen Gleichgewichtsparameter und Verunreinigungsanteile des Gleichgewichts von Azalidisomeren I und II wurden als eine Funktion des pH-Werts, Gleichgewichtstemperatur, Art der Säure und Isomer-I-Konzentration bestimmt und werden in Tabelle 1 angeführt. Bekannte Verfahren, einschließlich Hochleistungsflüssigchromatographie („HPLC"), kernmagnetische Resonanzspektroskopie („NMR"), Gaschromatocraphie („GC"), Massenspektrometrie („MS"), Flüssigchromatographie/Massenspektrometrie(„LC/MS"), GC/MS und Dünnschichtchromatographie („DC"), können verwendet werden, um die Verunreinigungen zu identifizie ren. „DS" bezieht sich auf Isomer I vor Gleichgewichtseinstellung und gehört zum Vergleich eingeschlossen.
Gleichgewichtsgemische von Isomeren wurden hergestellt und wie nachstehend bewertet. 40 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 1A-11A hergestellt und jede Lösung wurde in 1 ml aliquote Menge vor dem Erhitzen geteilt, um das Gleichgewicht bei verschiedenen Zeitpunkten leichter zu verfolgen. 20 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 12B-24B hergestellt und jede Lösung wurde in 0,7 ml aliquote Mengen vor dem Erhitzen geteilt. 100 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 25C-28C hergestellt, 200 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 29C-30C hergestellt und das Gleichgewicht wurde von 0,5 ml aliquote Mengen, die aus den Lösungen entfernt wurden, verfolgt. 60 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 31D-33D und 35D-41D hergestellt, 170 ml Lösung wurden in Versuch 34D hergestellt und das Gleichgewicht wurde von 0,5 ml aliquoten Mengen, die den Lösungen entnommen wurden, verfolgt. 7200 ml bis 54000 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 42E-46E hergestellt, die Gleichgewichtseinstellung wurde durch Entfernen von 2 ml bis 5 ml aliquoten Mengen aus den Lösungen verfolgt. 35 ml bis 50 ml Lösung wurden in jedem der Versuche 47F-50G hergestellt und jede Lösung wurde in 1 ml aliquote Mengen vor dem Erhitzen geteilt. Wasser wurde zu dem geeigneten Behälter gegeben, gefolgt von der Art und Menge der in Spalte 4 von Tabelle 1 angeführten Säure. Der Begriff „qs" des vorhergehenden Säuretyps bezieht sich auf eine Menge der Säure, die ausreichend ist, um den in Spalte 2 angeführten pH-Wert zu erreichen. Wenn 0,1 M Zitronen- oder Weinsäure verwendet wird, wurde auch Chlorwasserstoffsäure in einer ausreichenden Menge zugegeben, um den in Spalte 2 angeführten pH-Wert zu erhalten. Wenn eine Säurekonzentration in Spalte 4 angeführt ist (beispielsweise „0,1 M Zitronensäure"), ist dies die Konzentration der Säure in einer Lösung mit einem Gleichgewichtsgemisch von Isomer I und Isomer II, die bei einer Konzentration von 100 mg/ml vorliegen. Das Gemisch von Wasser und Säure wurde gerührt, bis die gesamte Säure gelöst war (etwa 5 Minuten oder weniger für kleinere Volumen und etwa 20 Minuten für größere Volumen). Isomer I wurde langsam und in kleinen Portionen zugegeben, um Verklumpen zu vermeiden, und das erhaltene Gemisch wurde bis zur Auflösung heftig gerührt (weniger als 30 Minuten für kleinere Volumen und etwa 60 bis 120 Minuten für größere Volumen). Nach Auflösung von Isomer I wurde der pH-Wert der erhaltenen Lösung gemessen. Wenn der pH-Wert unterhalb des in Spalte 2 aufgeführten pH-Werts war, wurde er auf den in Spalte 2 angeführten pH-Wert mit 10%igem Natriumhydroxid erhöht. Wenn der pH-Wert höher als der in Spalte 2 angeführte pH-Wert war, wurde er mit der/den geeigneten Säure(n) gesenkt. Für jeden Versuch wurde die Lösung auf eine Temperatur, die in Spalte 3 angeführt war, erhitzt, bis ein Gleichgewichtsgemisch der Isomeren erhalten wurde, wie durch eines der nachstehend beschriebenen HPLC-Assays bestimmt. In einigen Versuchen wurden die Gemische für einen Zeitraum länger als der für die Gleichgewichtseinstellung erforderliche erhitzt (Prozentsätze größer als 100% in Spalte 8), um die Wirkungen des verlängerten Er hitzens auf den Verunreinigungsgrad zu bestimmen.
Um die Gleichgewichtseinstellung der Azalidisomeren zu verfolgen, wurden die aliquoten Reaktionsgemischmengen durch HPLC bei verschiedenen Zeiten während der Gleichgewichtseinstellung bestimmt. Für die Mehrheit der in Tabelle 1 gezeigten Äquilibrierungsversuche wurden aliquote Mengen mit 40 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 6,0) zu einer Konzentration von ungefähr 0,5 mg Azalidisomeren pro ml Gesamtprobenvolumen verdünnt, und Chromatographie unter Verwendung einer Asahipak ODP-50, 5 μm, 250 × 4,0 mm Säule (40% Acetonitril/35% Methanol/25% 40 mM Kaliumphosphat, pH 8,5 mobile Phase, Fließgeschwindigkeit 0,7 ml/min, Raumtemperatur) an einem HP 1090 Flüssigchromatographen, ausgestattet mit einem äußeren Applied Biosystems 783A programmierbaren Absorptionsdetektor, unterzogen. Die Peaks wurden durch Verfolgen von Ultraviolettabsorption bei 210 nm nachgewiesen. Für die verbleibenden in Tabelle 1 gezeigten Äquilibrierungsversuche (Versuche 31D- 46E) wurden aliquote Mengen mit 20% Acetonitril/50% Methanol/30% 50 mM Kaliumphosphat (pH 5,5) zu einer Konzentration von 1,0 mg Azalidisomeren pro ml Gesamtprobenvolumen verdünnt und Chromatographie unter Verwendung einer YMC Pro-Pack C₁₈, 3 μm, 50 × 2,0 mm Säule (20% Acetonitril/50% Methanol/30% 50 mM Kaliumphosphat, pH 7,0 mobile Phase, Fließgeschwindigkeit 0,5 ml/min, Raumtemperatur) an einer HP 1090 Liquid Chromatograph mit innerem UV-Detektor unterzogen. Die Peaks wurden durch Verfolgen von Ultraviolettabsorption bei 210 nm nachgewiesen. Relative Mengen von Isomer I und Isomer II wurden durch Nehmen des Verhältnisses von deren relativen Chromatogramm-Peakflächen bestimmt. Unter den vorstehenden HPLC-Bedingungen hatte Isomer I eine Retentionszeit von ungefähr 13-23 Minuten und Isomer II hatte eine relative Retentionszeit („RRT") von ungefähr 0,8-0,9. Mit „RRT" bedeutet eine Retentionszeit, bezogen auf jene von Isomer I unter den vorstehend beschriebenen HPLC-Bedingungen.
Die Reinheit von ins Gleichgewicht gebrachten Proben in Tabelle 1 wurde unter Verwendung von HPLC gemäß einem von drei Verfahren bestimmt. In Versuch 1A-24B, 38F und 50G wurden aliquote Mengen mit 25 mM Kaliumphosphatpuffer (pH 5,5) auf eine Konzentration von 1,25 mg Azalidisomeren pro ml Gesamtprobenvolumen verdünnt und unter Verwendung einer Eclipse XDB-C₈-Säule, 5 μm, 250 × 4,6 mm (22% Acetonitril/58% Methanol/20% 25 mM Kaliumphosphat, pH 8,0 mobile Phase, Fließgeschwindigkeit 0,6 ml/min, Raumtemperatur) an einem Waters Alliance 2690 Trennmodul mit dem amperometrischen Detektor BAS CC-5/LC-4C bewertet. Die Peaks wurden elektrochemisch mit einer Elektrode bei +0,70 V, einer zweiten Elektrode bei +0,88 V und einem Bereich von 0,5 μA nachgewiesen. In Versuchen 25C-41D wurden aliquote Mengen mit 50 mM Zitronensäure (pH 5,5) zu einer Konzentration von 0,25 mg Azalidisomeren pro ml des gesamten Probenvolumens verdünnt und unter Verwendung einer YMC Pro-Pack C₁₈, 3 μm, 150 × 4,6 mm Säule (70% Methanol/30% 50 mM Phosphat, pH 7,0, mobile Phase, Fließgeschwindigkeit 1 ml/min, Raumtemperatur) an dem Waters- Alliance-System bestimmt. Die Peaks wurden elektrochemisch mit nur einer Elektrode bei +0,90 V nachgewiesen. In Versuchen 42E-43E wurden aliquote Mengen mit 50 mM Zitronensäure (pH 5,5) zu einer Konzentration von 0,25 mg Azalidisomeren pro ml des gesamten Probenvolumens verdünnt und unter Verwendung einer YMC Pro-Pack C₁₈, 3 μm, 150 × 4,6 mm Säule (70% Methanol/30% 50 mM Phosphat, pH 7,0, mobile Phase, Fließgeschwindigkeit 1 ml/min, Raumtemperatur) an einem HP 1090-Liquid Chromatograph mit BAS CC-5/LC-4C amperometrischem Detektor bewertet. Die Peaks wurden elektrochemisch mit nur einer Elektrode bei +0,90 V nachgewiesen. Der Prozentsatz des Gleichgewichtsgemisches von Isomeren (Spalte 9) und Verunreinigungen (Spalte 10), bezogen auf die bewertete Probe, wurden unter Verwendung der Flächen unter den Peaks in den Chromatogrammen bestimmt. Einige der nachgewiesenen Verunreinigungen waren: ein Descladinoseazalid (sein RRT ist ungefähr 0,26 an einer Eclipse-XDB-C₈-Säule), ein Acetaldehydinsertionsprodukt (sein RRT ist ungefähr 1,75 an einer Eclipse-XDB-C8-Säule) und ein Formaldehydinsertionsprodukt (sein RRT ist ungefähr 1,6 an einer Eclipse-XDB-C₈-Säule).
Das Descladinoseazalid hat die Struktur:
Das Acetaldehydinsertionsprodukt hat die Struktur:
Das Formaldehydinsertionsprodukt hat die Struktur:
Das Descladinoseazalid, das Acetaldehydinsertionsprodukt und das Formaldehydinsertionsprodukt und pharmazeutisch verträgliche Salze davon haben antibiotische Eigenschaften und sind als antibiotische Mittel verwendbar.
Die Versuche von Gruppen A und B (ausgewiesen durch den Buchstaben, der der Versuchszahl folgt) in Tabelle 1 wurden zum Bestimmen der Wirkungen von pH-Wert, Temperatur, Art der Säure, Konzentration der Säure und Isomer-I-Konzentration bei der Gleichgewichtseinstellung ausgeführt. Die Versuche von Gruppe C in Tabelle 1 erläutern die Wirkungen von pH-Wert und Temperatur auf die Gleichgewichtseinstellung. Die Versuche von Gruppe D in Tabelle 1 erläutern die Wirkungen von pH-Wert, Temperatur und Säurekonzentration auf die Gleichgewichtseinstellung. Die Versuche von Gruppe E in Tabelle 1 erläutern ein bevorzugtes Verfahren der Gleichgewichtseinstel-lung, d. h. einen pH-Wert von etwa 7,0, eine Gleichgewichtstemperatur von etwa 70°C und eine Isomer-I-Konzentration von etwa 250 mg/ml. Versuche in Gruppe F testeten die Wirkungen von veränderten Säuren und Gleichgewichtseinstellungstempera turen und Versuch G wurde in Gegenwart von 50% Propylenglycol-Co-Lösungsmittel ausgeführt.
Die Ergebnisse von diesen Versuchen weisen aus, dass auch unter einer Vielzahl von Bedingungen die Gleichgewichtseinstellung von Azalidisomeren konsistent zur Bildung von etwa 90% ± 4% Isomer I und etwa 10% ± 4% Isomer II führen. Die Gleichgewichtseinstellungstemperatur und pH-Wert schienen die größte Wirkung auf die Gleichgewichtsgeschwindigkeit zu haben, wobei höhere Temperaturen im Allgemeinen zu schnelleren Geschwindigkeiten auch mit höheren Konzentratio nen von Isomer I führen. In den meisten Fällen jedoch ergaben längere Gleichgewichtseinstellungszeiten höhere Konzentration von Verunreinigungen und deshalb sind optimale Gleichgewichtsbedingungen jene, die zu relativ hohen Gleichgewichtsgeschwindigkeiten führen, d. h. die das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren in 1-3 Stunden bilden.
Tabelle 1
Beispiel 3
Die Stabilität der ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen, die bei 50°C für 12 Wochen gelagert und mit dem Co-Lösungsmittel stabilisiert wurden, werden in nachstehender Tabelle 2 gezeigt. Die Ergebnisse weisen aus, dass die kein Co-Lösungsmittel enthaltenden Zusammensetzungen wesentlich weniger stabil sind als Zusammensetzungen, die Co-Lösungsmittel in einer Menge von etwa 250 bis etwa 500 mg/ml der Zusammensetzung (Versuche 1A-11B) enthalten. Zusammensetzungen mit einem pH-Wert von etwa 5,4 und enthaltend Propylenglycol („PG") in einer Menge von etwa 450 bis etwa 550 mg/ml der Zusammensetzung, sind die stabilsten. Andere Co-Lösungsmittel können zum Stabilisieren der Zusammensetzungen (Versuche 1E-2E) verwendet werden, jedoch ist Propylenglycol bevorzugt. Wie in Tabelle 2 gezeigt, hängt die Stabilität vom pH-Wert ab und kann auch von der Art und Menge der verwendeten Säure und der Konzentration des ins Gleichgewicht gebrachten Gemisches von Isomeren abhängen.
Diese Zusammensetzungen wurden wie nachstehend hergestellt. Nach Erhitzen auf die gewünschte Temperatur (Spalte 2) und ins Gleichgewicht bringen lassen des Gemisches von Wasser, Säure und Isomer I für einen in Spalte 3 gezeigten Zeitraum wurden die Gleichgewichtsgemische der Isomeren auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Wenn die Gemische Raumtemperatur erreicht hatten, wurde die geeignete Menge des gewünschten Co-Lösungsmittels zugegeben (Spalte 6). Der Prozentsatz an in Spalte 6 gezeigtem Co-Lösungsmittel ist ein Gewicht: Volumen-Prozentsatz (beispielsweise 50% PG ist 500 mg Propylenglycol pro ml pharmazeutischer Zusammensetzung). Wenn ein Antioxidanz oder ein Konservierungsmittel verwendet wurde, wurden die geeigneten Mengen zugegeben (Spalten 8 und 9). Der pH-Wert der Lösung wurde gemessen und auf den Wert in Spalte 5 durch Zugeben von einer oder mehreren Säuren und/oder 10% Gewicht/Gewicht Natriumhydroxid eingestellt. Die Volumen der erhaltenen Lösungen wurden dann durch Zugeben von Wasser eingestellt. Die Zusammensetzungen wurden durch ein 0,2-μm-Sterilisationsfilter filtriert. Die Fläschchen wurden in einen Laminarabzug abgefüllt und der Kopfraum des Fläschchens wurde mit einem geeigneten Gasgemisch (Spalte 10) vor dem Verschließen gespült.
Die Gleichgewichtseinstellung und Reinheit wurden unter Verwendung von HPLC wie vorstehend in Beispiel 2 beschrieben verfolgt. Die Stabilität von stabilisierten, ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen, die in Glasfläschchen verschlossen sind, wurde nach Lagerung für 12 Wochen bei 50°C bestimmt. Die Wirkungen der Konzentration auf das Gleichgewichtsgemisch von Isomeren, pH-Wert, Co-Lösungsmittelmenge und Art, Art und Konzentration von Säure, Exposition an die Luft, Vorliegen von Konservierungsmitteln und Vorliegen von Antioxidanzien wurden verfolgt. Die Ergebnisse werden in Tabelle 2 gezeigt.
Versuche 1A-3A wurden ausgeführt, um die Wirkung von Gleichgewichtsgemischkonzentration auf die Stabilität zu verfolgen. Versuche 2A, 6A und 7A wurden zum Verfolgen der Wirkung von pH-Wert auf Stabilität ausgeführt. Versuche 2A, 4A und 5A zeigen die Wirkung der Co-Lösungsmittelmenge auf die Stabilität und Versuche 3A und 8A zeigen die Wirkung der Anwendung von Zitronensäure allein im Gegensatz zu Gemischen von Zitronensäure und Phosphorsäure unter Gewinnung eines sauren pH-Werts. Versuche 1B-11B zeigen die Wirkungen von pH-Wert und Propylenglycol(„PG)-Co-Lösungsmittel auf die Stabilität. Versuche 1C und 2C zeigen die Wirkung unter Verwendung von Weinsäure allein im Gegensatz zu einem Gemisch von Weinsäure und Chlorwasserstoffsäure zum Gewinnen eines sauren pH-Werts. Versuche 9B-11B und 3C zeigen die Wirkungen eines Konservierungsmittels auf die Stabilität des Gemisches und Versuche 9B-11B, 4C und 5C zeigen die Wirkung eines Antioxidanz auf Stabilität des Gemisches. Versuche 6C und 7C zeigen die Wirkungen unter Verwendung eines Gemisches von Weinsäure und Chlorwasserstoffsäure oder eines Gemisches von Zitronensäure und Chlorwasserstoffsäure auf die Stabilität. Versuche 1D-12D zeigen die Wirkungen unterschiedlicher Mengen von Monothio glycerin („MTG") antioxidanz und verschiedenen Graden der Sauerstoffexposition auf die Stabilität. Versuche 4D-6D und 13D-18D zeigen die Wirkungen des pH-Werts auf die Zusammensetzung und Säurekonzentration auf die Stabilität.
Die Ergebnisse dieser Versuche weisen aus, dass nach Lagerung für 12 Wochen bei 50°C die ins Gleichgewicht gebrachten Zusammensetzungen, die mindestens 50% Propylenglycol enthielten und einen pH-Wert im Bereich von etwa 5,2 bis etwa 5,5 aufwiesen, mehr als 93% der Anfangskonzentration des Gleichgewichtsgemisches der Isomeren beibehalten. Der höchste Anteil von Verunreinigungen wurde als eine Zusammensetzung ohne Co-Lösungsmittel (Versuch 4A) gefunden. Folglich begrenzt das Vorliegen von Co-Lösungsmittel überraschenderweise und unerwartet die Menge an Verunreinigungen. Hohe Anteile von Verunreinigungen wurden nach 12 Wochen in Zusammensetzungen mit weniger als 40% Co-Lösungsmittel und einem pH-Wert von weniger als 5,0 gefunden. Die Konzentration der Säure beeinflusst auch die Stabilität der pharmazeutischen Zusammensetzungen. Zusammensetzungen mit relativ niedrigen Säurekonzentrationen (etwa 20 mM) und einem pH-Wert von etwa 5,4 zeigen die größte Stabilität nach Lagerung. Jedoch ergeben niedrige Säurekonzentrationen niedrige Pufferstärke, was zum Fluktuieren des pH-Werts führt und unter anderen Zeit- oder Temperaturbedingungen zu einem relativ hohen Verunreinigungsgrad führen kann.
Tabelle 2
Beispiel 4
Zweiundfünfzig Liter einer injizierbaren pharmazeutischen Zusammensetzung, enthaltend 100 mg Gleichgewichtsgemisch von Isomeren pro ml Zusammensetzung, wurden wie nachstehend hergestellt. 16,584 kg Wasser zur Injektion (USP-Qualität), gelöst mit Stickstoff (NF-Qualität), wurden zu einem Edelstahlcompoundierungsgefäß gegeben und das Rühren wurde begonnen. Stickstoff wurde auch verwendet als eine Bedeckung, um die Sauerstoffaussetzung der Lösung in dem Compoun dierungsgefäß während der Herstellung zu vermindern. Ungefähr 1 kg wasserfreie Zitronensäure (USP-Qualität) wurde zu dem Wasser gegeben und das erhaltene Gemisch wurde gerührt, bis die Säure gelöst war. 1,511 kg einer 10%igen (Gewicht/Gewicht) Lösung von Chlorwasserstoffsäure (NF-Qualität) in Wasser (USP-Qualität) wurden anschließend zu dem Gemisch gegeben. 5,357 kg eines Gemisches, enthaltend ungefähr 97% Isomer I und Isomer II (in einem Verhältnis von etwa 99 : 1) und 3% von einer oder mehreren Verunreinigungen wurden langsam zu dem unter Rühren gehaltenen Gemisch gegeben und auflösen lassen. Der pH-Wert der erhaltenen Lösung wurde auf 7,0 ± 0,5 durch Zugeben von 0,224 kg einer 10%igen (Gewicht/Gewicht) Lösung Chlorwasserstoffsäure in Wasser eingestellt. Die Gleichgewichtseinstellung von Isomeren I und II wurde durch Erhitzen der Lösung auf 70°C ± 10°C für 105 Minuten bewirkt. War die Gleichgewichtseinstellung einmal vollständig, wie unter Verwendung von HPLC bestimmt, wurde die Lösung auf 25°C ± 10°C abkühlen lassen und 26,00 kg Propylenglycol (USP-Qualität) wurden zu dem unter Rühren gehaltenen Gemisch gegeben. Nachdem das Propylenglycol vollständig eingemischt war, wurden 0,26 kg Monothioglycerin (NF-Qualität) zu der Lösung gegeben und der pH-Wert wurde erneut auf 5,4 ± 0,3 durch Zugeben von 2,349 kg l0%iger (Gewicht/Gewicht) Chlorwasserstoffsäure in Wasser eingestellt. Das Endvolumen wurde auf 52,015 Liter durch Zugeben von 1,843 kg Wasser eingestellt. Die erhaltene Zusammensetzung enthielt 100 mg des Gleichgewichtsgemisches von Isomeren pro ml Zusammensetzung, 500 mg pro ml Propylenglycol, Zitronensäure bei einer Konzentration von 0,1 M und Monothioglycerin bei einer Konzentration von 5 mg/ml der Zusammensetzung.
Die Zusammensetzung wurde durch ein 6-μm-Vorfilter filtriert und dann durch ein 0,2-μm-Endsterilisationsfilter, welches durch Feuchtwärme-Autoklavenbehandlung für 60 Minuten bei 121°C sterilisiert wurde und auf Vollständigkeit unter Verwendung des Druckhalteverfahrens sowohl vor Sterilisation als auch nach Filtration getestet wurde. 20 ml Flint-Typ-I-Serumglasfläschchen (Wheaton Science Products, Millville, New Jersey) wurden sterilisiert und in einem trockenen Wärmetunnel bei 250°C für 240 Minuten depyrogenisiert. 20 m 4432/50 graue Chlorbutyl-silikonisierte Stopfen (The West Company, Lionville, PA) wurden durch Waschen depyrogenisiert und wurden durch Feuchtwärme-Autoklavenbehandlung für 60 Minuten bei 121°C sterilisiert. Jedes von 2,525 Fläschchen wurde unter sterilen Bedingungen mit 20 ml der erhaltenen Zusammensetzung +0,6 ml Überfüllung (20,6 ml/Fläschchen = 2,06 g/Fläschchen Einheit Stärke von pharmazeutischer Zusammensetzung bei 100 mg/ml Gleichgewichtsgemisch von Isomeren, bezogen auf eine tatsächliche Arzneimittelsubstanzmengenstärke von 97,1%), die Fläschchenkopfräume wurden mit Stickstoff gespült und die Fläschchen wurden mit den Stopfen und Versiegelungen (20 mm Aluminiumversiegelungen, Produkt # 5120-1125, The West Company, Lionville, PA) verschlossen.
Die vorliegende Erfindung ist nicht im Umfang durch die speziellen Ausführungsformen, die in den Beispielen offenbart wurden, begrenzt, welche als Erläuterungen für einige Aspekte der Erfindung vorgesehen sind. Jegliche Ausführungsformen sind funktionell äquivalent innerhalb des Umfangs dieser Erfindung. Tatsächlich werden verschiedene Modifizierungen der Erfindung, zusätzlich zu jenen hierin gezeigten und beschriebenen, für den Fachmann ersichtlich und sollen in die beigefügten Ansprüche fallen.
Alle hierin offenbarten Literaturstellen sind durch Hinweis hierin in ihrer Gesamtheit einbezogen.

Claims

Zusammensetzung, umfassend: (a) die Verbindung der Formel I
bzw. die Verbindung der Formel II
in einem Verhältnis von 90% ± 4% zu 10% ± 4%; (b) Wasser und (c) eine oder mehrere Säuren, die in einer Gesamtkonzentration von 0,2 mMol bis 1,0 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegen.
Zusammensetzung, umfassend: (a) ein erstes Gemisch von: (i) der Verbindung der Formel (I):
bzw. der Verbindung der Formel (II):
in einem Verhältnis von 90% ± 4% zu 10% ± 4%; (ii) Wasser und (iii) eine oder mehrere Säuren, die in einer Gesamtkonzentration von 0,2 mMol bis 1,0 mMol pro ml des ersten Gemisches vorliegen, und (b) ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel, die in einer Menge von 250 bis 750 mg pro ml der Zusammensetzung vorliegen.
Zusammensetzung nach Anspruch 2, worin die Konzentration des ersten Gemisches in der Zusammensetzung im Bereich von 50 mg/ml bis 200 mg/ml liegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 3, worin die Konzentration des ersten Gemisches der Zusammensetzung im Bereich von 90 mg/ml bis 110 mg/ml liegt.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 2 bis 4, worin das eine oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel aus der Gruppe, bestehend aus Ethanol, Isopropanol, Diethylenglycolmonomethylether, Diethylenglycolbutylether, Diethylenglycolmonoethylether, Diethylenglycoldibutylether, Polyethylenglycol-300, Polyethylenglycol-400, Propylenglycol, Glycerin, 2-Pyrrolidon, N-Methyl-2-pyrrolidon, Glycerinformal, Dimethylsulfoxid, Sebacinsäuredibutylester, Polysorbat 80 und Gemischen davon, ausgewählt sind.
Zusammensetzung nach Anspruch 5, worin das eine oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel Propylenglycol ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 6, worin das Propylenglycol in einer Menge von 450 bis 550 mg/ml der Zusammensetzung vorliegt.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, worin die eine oder mehrere Säuren aus der Gruppe, bestehend aus Essigsäure, Benzolsulfonsäure, Zitronensäure, Bromwasserstoffsäure, Chlorwasserstoffsäure, D- und L-Milchsäure, Methansulfonsäure, Phosphorsäure, Bernsteinsäure, Schwefelsäure, D- und L-Weinsäure, p-Toluolsulfonsäure, Adipinsäure, Asparaginsäure, Kampfersulfonsäure, 1,2-Ethandisulfonsäure, Laurylsulfonsäure, Glucoheptonsäure, Gluconsäure, 3-Hydroxy-2-naphthoesäure, 1-Hydroxy-2-naphthoesäure, 2-Hydroxyethansulfonsäure, Äpfelsäure, Schleimsäure, Salpetersäure, Naphthalinsulfonsäure, Palmitinsäure, D-Glucarsäure, Stearinsäure, Maleinsäure, Malonsäure, Fumarsäure, Benzoesäure, Cholsäure, Ethansulfonsäure, Glucuronsäure, Glutaminsäure, Hippursäure, Lactobionsäure, Lysinsäure, Mandelsäure, Napadisylsäure, Nicotinsäure, Polygalacturonsäure, Salicylsäure, Sulfosalicylsäure, Tryptophansäure und Gemischen davon, ausgewählt sind.
Zusammensetzung nach Anspruch 8, worin die eine oder mehrere Säuren Zitronensäure ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 9, worin Zitronensäure in einer Menge von 0,02 mMol bis 0,3 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegt.
Zusammensetzung nach Anspruch 10, worin die eine oder mehrere Säuren Zitronensäure und Chlorwasserstoffsäure sind.
Zusammensetzung nach Anspruch 11, worin Zitronensäure in einer Menge von 0,02 mMol bis 0,3 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegt und die Chlorwasserstoffsäure in einer Menge vorliegt, die ausreichend ist, um eine Zusammensetzung vom pH-Wert 5 bis 6 zu erreichen.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, die weiterhin ein oder mehrere Antioxidanzien, die in einer Menge von 0,01 mg bis 10 mg pro ml der Zusammensetzung vorliegen, umfasst.
Zusammensetzung nach Anspruch 13, worin das eine oder mehrere Antioxidanzien aus der Gruppe, bestehend aus Natriumbisulfit, Natriumsulfit, Natriummetabisulfit, Natriumthiosulfat, Natriumformaldehydsulfoxylat, L-Ascorbinsäure, D-Erythroascorbinsäure, Acetylcystein, Cystein, Monothioglycerin, Thioglycolsäure, Thiomilchsäure, Thioharnstoff, Dithiothreitol, Dithioerythreitol, Glutathion, Ascorbylpalmitat, butyliertem Hydroxyanisol, butyliertem Hydroxytoluol, Nordihydroguajaretsäure, Gallussäurepropylester, α-Tocopherol und Gemischen davon, ausgewählt sind.
Zusammensetzung nach Anspruch 14, worin das eine oder mehrere Antioxidanzien Monothioglycerin ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 15, worin Monothioglycerin in einer Menge von 4 mg/ml bis 6 mg/ml der Zusammensetzung vorliegt.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 2 bis 4, worin die eine oder mehrere Säuren Zitronensäure in einer Menge von 0,02 mMol bis 0,3 mMol pro ml der Zusammensetzung vorliegt und Chlorwasserstoffsäure in einer ausreichenden Menge vorliegt, um einen pH-Wert der Zusammensetzung von 5 bis 6 zu erreichen, worin das eine oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel Propylenglycol in einer Menge von 450 bis 550 mg pro ml der Zusammensetzung ist, weiterhin umfassend Monothioglycerin in einer Menge von 4 mg bis 6 mg pro ml der Zusammensetzung.
Verwendung einer Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 17 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer bakteriellen oder Protozoneninfektion bei einem Säuger.
Verwendung nach Anspruch 18, worin die bakterielle oder Protozoneninfektion ausgewählt ist aus Luftwegserkrankung beim Rind, Luftwegserkrankung beim Schwein, Pneumonie, Coccidiose, Anaplasmose und infektiöser Keratinitis.
Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung nach Anspruch 1, umfassend den Schritt des Erhitzens auf eine Temperatur von 50°C bis 90°C eines Gemisches, umfassend: (a) die Verbindung der Formel (I), (b) Wasser, und (c) eine oder mehrere Säuren in einer Menge im Bereich von 0,2 mMol bis 1,0 mMol pro ml des Gemisches, wobei der pH-Wert des Gemisches im Bereich von 5 bis 8 liegt.
Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung nach Anspruch 2, umfassend den Schritt des Erhitzens auf eine Temperatur von 50°C bis 90°C eines Gemisches, umfassend (a) die Verbindung der Formel (I); (b) Wasser; und (c) eine oder mehrere Säuren in einer Menge im Bereich von 0,2 mMol bis 1,0 mMol pro ml des Gemisches, wobei ein oder mehrere mit Wasser mischbare Co-Lösungsmittel vor, während oder nach dem Erhitzungsschritt in einer Menge von 250 bis 750 mg pro ml der Zusammensetzung zugegeben werden.
Verbindung der Formel:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon, worin R¹
darstellt und worin R₂ H oder CH₃ darstellt.