FI98815C

FI98815C - Menetelmä uusien, farmakologisesti käyttökelpoisten bispilokarpiinihapon esterijohdannaisten valmistamiseksi

Info

Publication number: FI98815C
Application number: FI905930A
Authority: FI
Inventors: Esko Pohjala; Hannu Hanhijaervi; Tomi Jaervinen; Pekka Peura; Pekka Suhonen; Arto Urtti
Original assignee: Santen Oy
Priority date: 1990-11-30
Filing date: 1990-11-30
Publication date: 1997-08-25
Also published as: FI905930A0; FI905930A; ATE192144T1; NO931960D0; KR930703264A; SK52393A3; EP0559700A1; PL168715B1; WO1992009583A1; DE69132143T2; AU664958B2; EP0559700B1; LT3532B; JP3094232B2; LV10094A; AU8939891A; LTIP577A; NO931960L; JPH06504270A; HU9301569D0

Description

- 98815

Menetelmä uusien, farmakologisesti käyttökelpoisten bis-pilokarpiinihapon esterijohdannaisten valmistamiseksi 5 Tämä keksintö koskee menetelmää uusien, glaukooman hoidossa käyttökelpoisten pilokarpiinin prodrug-yhdisteiden, tarkemmin sanottuna bispilokarpiinihapon estereiden valmistamiseksi.

10 (+)-Pilokarpiini, (3S-cis)-3-etyylidihydro-4-[(1-metyyli- lH-imidatsol-5-yyli)metyyli]-2(3H)-furanoni, on glaukooman hoidossa käytettävä lääkeaine, joka alentaa silmänpainetta nopeuttamalla kammionesteen ulosvirtausta silmästä. Pilokarpiinin silmänpainetta alentava vaikutus 15 perustuu lääkeaineen silmän sädelihasta supistavaan vaikutukseen, jolloin kammionesteen ulosvirtauksen kannalta tärkeä etukammion kulma laajenee ja nesteen ulosvirtaus helpottuu.

20 Silmänpaineen lasku ei kuitenkaan ole pilokarpiinin ainoa vaikutus silmässä. Kun lääkeainepitoisuus on riittävän suuri, pilokarpiinin sädelihasta jännittävä vaikutus voimistuu ja aiheuttaa silmän mykiön (linssin) mukautumisen lähelle katsomista varten. Tällöin potilaan on vai- 25 keaa mukauttaa silmiään katsomaan kauemmaksi, mikä on potilaalle hankalaa. Pilokarpiini aiheuttaa myös silmän :: : värikehän eli iriksen supistumisen, jolloin silmän mus- • · · · • tuainen pienenee huomattavasti. Näiden lääkevaikutuksen • · · .·;·. kannalta tarpeettomien ja potilaalle kiusallisten sil- 30 mävaikutusten lisäksi pilokarpiini voi aiheuttaa sivuvai- . . kutuksia silmän ulkopuolella. Näitä vaikutuksia ovat mm.

• < *.*;.* syljen erityksen lisääntyminen ja sydämen harvalyöntisyys • · · ’ (bradykardia).

• · « 35 Useimmiten glaukoomapotilaat annostelevat pilokarpiinin paikallisesti silmätippoina. Näin annettuna pilokarpiinin ; \ annoksesta imeytyy silmään kuitenkin vain noin 1 % ja 98815 2 verenkiertoon noin 70 %. Pilokarpiinin vähäinen imeytyminen silmään johtuu kolmesta keskeisestä tekijästä: 1) tipan nopea huuhtoutuminen silmän pinnasta 2) pilokarpiinin nopea imeytyminen silmäluomien 5 sisäpinnan sidekalvon kautta verenkiertoon 3) pilokarpiinin huono kyky läpäistä silmän sarveiskalvo.

Pilokarpiini imeytyy silmään sarveiskalvon kautta. Sar-10 veiskalvossa se imeytyy ensin silmän pinnassa olevaan runsaasti solukalvojen lipidejä (rasvoja) sisältävään tiiviiseen epiteelikerrokseen. Pilokarpiini ei kuitenkaan ole kovin rasvaliukoinen, minkä takia se penetroituu suhteellisen vähän sarveiskalvon epiteeliin. Sarveiskal-15 von epiteeli toimii samalla pilokarpiinin imeytymistä rajoittavana kalvona ja varastona, joka luovuttaa pilo-karpiinia edelleen sarveiskalvon vesipitoisen stroman ja endoteelin kautta etukammion nesteeseen. Kammionesteestä pilokarpiini pääsee helposti vaikutuspaikkaansa sädeli-20 hakseen. Pilokarpiinin vaikutuksen kestoaikaa silmässä lyhentää huomattavasti sen osittainen muuttuminen tehot-tomaksi pilokarpiinihapoksi sekä pilokarpiinin nopea poistuminen silmästä kammionesteen kierron ja värikalvon verenkierron kautta.

25 : Silmään annostellun pilokarpiinin vähäinen imeytyminen silmän sisäosiin ja sen lyhyt vaikutusaika aiheuttavat • · · ·*.· * vaikeuksia lääkehoidossa. Jotta lääkkeen tehoa saataisiin parannettua ja sen vaikutusaikaa pidennettyä, joudutaan • · · 30 pilokarpiinia käyttämään suhteellisen suurina annoksina.

:'j*; Tämä johtaa siihen, että silmän kammionesteessä, värikal- \ vossa ja sädelihaksessa saavutetaan korkeita pilokarpii- nipitoisuuksia, jotka aiheuttavat voimakkaan mustuaisen supistumisen ja silmän mukautumisen lähietäisyydelle 35 katsomiseen. Pilokarpiiniannoksen nostaminen on lisäksi li . 98815 3 melko tehoton tapa pidentää lääkevaikutusta näin nopeasti silmästä erittyvällä lääkeaineella ja pilokarpiinitippoja annostellaankin 3-8 kertaa vuorokaudessa potilastapauksesta riippuen. Silmätippojen annostelu näin usein on 5 potilaan kannalta hankalaa varsinkin, kun silmasivuvaikutukset seuraavat aina tippojen annostelua. Suurten pilo-karpiiniannosten käyttö lisää myös verenkiertoon imeytyvän pilokarpiinin määrää, ja siten myös muiden sivuvaikutusten riskiä.

10

Edellämainittuja pilokarpiinin huonosta imeytymisestä johtuvia haittoja on koetettu ratkaista sarveiskalvon epiteeliin paremmin imeytyvillä pilokarpiinin prodrug-johdoksilla. Tällaisten johdosten on oltava pilokarpiinia 15 rasvaliukoisempia, jotta imeytymistä voitaisiin parantaa. Lisäksi niiden täytyy pilkkoutua mahdollisimman täydellisesti sarveiskalvon epiteelissä siten, että ne vapauttavat lääkkeellisestä tehokkaan pilokarpiinin ja tehot-taman pro-osan. Pilkkoutumisen määrä sarveiskalvossa 20 riippuu johdoksen viipymisajasta sarveiskalvon epiteelissä ja sen pilkkoutumisnopeudesta siellä. Johdoksen viipy- .· . misaika epiteelissä pitenee sen rasvaliukoisuuden kas- « « väessä ja sen diffuusiokertoimen pienentyessä.

. . 25 Pilokarpiinin prodrug-johdoksia on kehitetty tähän men- ft · · “I: nessä kaksi eri tyyppiä. Bodor on US-patentissa 4,061,722 • · '···’ kuvannut kvaternäärisiin ammoniumyhdisteisiin perustuvia • ·« V ·’ pilokarpiinin prodrugeja. Bundgaard et ai. on EP-patent- tihakemuksessa 0 106 541 kuvannut pilokarpiinihapon di-: 30 estereitä, joilla on saavutettu pilokarpiinia parempi ;***: silmäimeytyminen. Näihin pilokarpiinin diestereihin *. liittyy kuitenkin eräitä epäkohtia, kuten epätäydellinen pilkkoutuminen sarveiskalvossa, jonka seurauksena ehjää prodrugia kulkeutuu kammionesteeseen, jolloin prodrugilla 35 saavutettava hyöty jää vähäisemmäksi. Lisäksi diestereis- 98815 4 tä pilkkoutuu runsaasti epäedullisia sivutuotteita suhteessa varsinaiseen tehoaineeseen, pilokarpiiniin.

Tämän keksinnön kohteena on uusien bispilokarpiinihapon 5 estereiden eli bispilokarpaattien valmistus, joilla edellä mainitut epäkohdat voidaan pitkälti välttää tai ainakin minimoida. Niinpä keksinnön avulla saatavat prodrug-johdokset pilkkoutuvat rasvaliukoisuudeltaan vastaaviin Bundgaard et ai.'in prodrugeihin verrattaessa 10 vähintään yhtä nopeasti pilokarpiiniksi ja pro-osaksi ja ne edistävät pilokarpiinin sarveiskalvon läpäisevyyttä vähintään yhtä hyvin. Lisäksi bispilokarpaattijohdokset kuljettavat sarveiskalvoon yhden pro-osan kahta pilokar-piinimolekyyliä kohti, kun taas Bundgaard et ai'in mukai-15 set johdokset kuljettavat yhden pro-osan jokaista pilo-karpiinimolekyylia kohti. Bispilokarpaattijohdosten dif-fuusiokerroin sarveiskalvon epiteelissä on Bundgaard'in yhdisteitä pienempi, jonka takia vielä pilkkoutumattomat bispilokarpaattijohdokset viipyvät sarveiskalvon epitee-20 Iissä pitempään. Näin prodrugille jää enemmän aikaa pilkkoutua täydellisesti.

Keksintö antaa siten mahdollisuuden pitkäaikaiseen, • hitaaseen lääkeaineen vapautumiseen sarveiskalvosta 25 silmän sisäosiin, jolla voidaan tehokkaasti pidentää : pilokarpiinin vaikutuksen kestoaikaa ja myös pienentää }...: pilokarpiinin huippupitoisuuksia silmässä, mikä on tär- : : : keää edellä mainittujen sivuvaikutusten vähentämiseksi.

j ·* 30 Keksinnön mukaisesti valmistetulla uusilla pilokarpiinin • · · · .·”. prodrug-johdannaisilla, erityisesti bispilokarpiinihapon • · · estereillä eli bispilokarpaateilla, on yleinen kaava li 35 • 98815 5 -.9·-.ψψ, 5 „ „ J y. .or or· vSy ^ Y "·'”· ·*Ύ y "ca 0 0 0 0 (I") (1') jossa kaavassa 1' 10 0 Y on vety, -C-R, jossa R on C,-C10-alkyyli, C3-C7-sykloal- kyyli tai fenyyli- tai fenyylialempialkyyli, 0

II

Y' tarkoittaa vetyä tai ryhmää -C-R', jossa R' tarkoittaa 15 samaa kuin R, jolloin R' voi olla sama tai eri kuin R, ja A on C,-Ci0-alkyleeni tai ksylyleeni, tai. jossa kaavassa I" R ja R' tarkoittavat samaa kuin edellä, ja B tarkoittaa Ct-C,0-alkyleeniä, C2-C,0-alkenyleeniä tai 20 fenyleeniä, sekä sanottujen yhdisteiden happoadditiosuolat.

Edellä mainitun yleisen kaavan I yhteydessä on C,-Cw-alkyyli suora tai haarautunut, ja sisältää edullisesti 25 1-4 C-atomia, ollen esim. metyyli, etyyli, propyyli, 1 » 1 · isopropyyli tai butyyli, isobutyyli, sek-butyyli tai * · · *...· tert-butyyli, tai pentyyli, heksyyli, heptyyli, oktyyli, • ·« V ; nonyyli ja dekyyli.

• ;*· 30 Fenyylialempialkyyli sisältää alkyyliosassaan 1-6 C-ato- • * · v .’j*. mia, kuten bentsyylissä.

ί A tarkoittaa kaksiarvoisena Cj-C^-alkyleeni, vast. C2-C10- alkenyleeni tarkoittaa esim. metyleeniä, etyleeniä, 35 propyleeniä, butyleeniä, mutta myös pentyleeniä, hek- 6 - 98815 syleeniä, heptyleeniä, oktyleeniä, nonyleeniä, ja deky-leeniä, seka vastaavia tyydyttymättömiä kaksiarvoisia ryhmiä.

5 Kaavan I mukaisten yhdisteiden happoadditiosuoloja ovat erityisesti farmaseuttisesti hyväksyttävät additiosuolat myrkyttömien epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa. Esimerkkinä sopivista hapoista mainittakoon kloorivety-, bromivety-, rikki-, typpi-, fosfori- jne, 10 sekä orgaanisina happoina esimerkiksi etikka-, propioni-, steariini-, oksaali-, maloni-, meripihka-, glutaari-, adipiini-, maleiini-, fumaari-, omena-, viini-, sitruuna-, askorbiini-, bentsoe-, pamoe- tai sulfonihappo, kuten mesyyli- tai tosyylihappo.

15

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat siis pilokarpiinihapon dimeerisiä esterijohdoksia, dibispilo-karpaatteja, joita on kahta päätyyppiä edellä, yleisen kaavan yhteydessä mainittujen alaryhmien mukaisesti.

20

Erityisen edullisia yhdisteitä ovat kaavan 1' mukaiset • ♦ · * » · • 1 1 · • · % • · « · • · t • · • ‘ · • · i • · »♦· • » · t i 1 • · · 4 1 i - 98815 7 bispilokarpaatit, joissa Y ja Υ' ovat vety, ja erityisesti tällöin 0,0'-divety(1,4-, 1,3-, 1,2-ksylyleeni)- ja -(1,3-propyleeni)bispilokarpaatti.

5 Edullisiä kaavan 1' mukaisia diasyylibispilokarpaatteja ovat 0,0'-dipropionyyli-, 0,0'-dibutyryyli-, ja 0,0'-disyklopropyylikarbonyyli( 1,4-ksylyleeni )bispilokarpaatti.

Erityisen edullisia kaavan I" mukaisia yhdisteitä ovat 10 (dibentsyyli )bispilokarpaatit, erityisesti 0,0' -glutaryyli-(dibentsyyli Jbispilokarpaatti.

15

Keksinnön mukaisesti a) kaavan 1' mukaisen yhdisteen valmistamiseksi saatetaan pilokarpiinihappo, jonka kaava on 20 ch, \ 25 °=( \-oh : : : oh i«· · Ί» tai sen suola reagoimaan kaavan X-A-X' mukaisen yhdisteen ··# V · kanssa, jossa X ja X' ovat toisistaan riippumatta hydroksi, tai lähtevä ryhmä, esimerkiksi halogeeni, asyylioksi, tai : 30 alkyyli- tai aryylisulfonyylioksi, yhdisteen valmistamisek- si, jonka kaava (II) on ;;; e,*,. <“> 35

* * 0=/ \-OH

°\

A-O-Z-H

- 98815 8 joka haluttaessa muutetaan kaavan 1' mukaiseksi yhdisteeksi, jossa Y on eri kuin vety, saattamalla reagoimaan kaavan RC02H mukaisen hapon, ja, kun R on eri kuin R’, sen jälkeen kaavan R'C02H mukaisen hapon, tai näiden happojen funkti-5 onaalisten johdannaisten kanssa, ja mahdollisesti muutetaan saatu kaavan I mukainen yhdiste happoadditiosuolakseen, tai b) kaavan I" mukaisen yhdisteen valmistamiseksi saatetaan yhdiste, jonka kaava III vastaavasti III' on 10 CH, cH3 cA\y^O \ /

is 0=V^—0H 0=a\ ^0H

OR ja/tai OR1 III III' jossa R ja R' tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan dikarboksyylihapon kanssa, jonka kaava IV on 20 0 0

Il il

H0-C-B-C-0H IV

jossa B tarkoittaa samaa kuin edellä, tai sen difunktionaa-lisen happo johdannaisen kanssa, ja mahdollisesti muuutetaan 25 saatu kaavan I" mukainen yhdiste happoadditiosuolakseen.

• · • · · • · · • « · « .*··, Edellä mainituissa reaktioissa käytetään happojen funktio- « · ♦ .·: . naalisina johdannaisina edullisesti niiden halogenideja, anhydrideja, alkyyli- tai aryylisulfonaatteja. Reaktioväli- . . 30 aineena käytetään edullisesti näihin nähden inerttejä • · · liuottimia, kuten hiilivetyjä, halogenoituja hiilivetyjä, t i i *·* ’ eettereitä, ketoneja jne. Edullisia hiilivetyjä ovat aromaattiset hiilivedyt, kuten bentseeni ja alkyylibent-: seenit, kuten tolueeni ja ksyleeni. Tarkoitukseen soveltu- 35 via halogenoituja hiilivetyjä ovat esimerkiksi dikloo-; \ rimetaani, kloroformi ja klooribentseeni. Ketoneina mainittakoon asetoni, etyylimetyyliketöni ja isobutyylime- - 98815 9 tyyliketoni, eettereinä mainittakoon dietyylieetteri, di-isopropyylieetteri, dibutyylieetteri ja 1,4-dioksaani. Muita sopivia liuottimia ovat dimetyylisulfoksidi, dimetyy-liformamidi ja asetonitriili.

5

Reaktiolämpötila ei ole kriittinen vaan voi vaihdella esimerkiksi -10°C:sta liuottimen kiehumapisteeseen. Sopivasti käytetään huoneen lämpötilaa. Reaktioaika voi vaihdella laajoissa rajoissa ja on tavallisesti 12-72 10 tuntia, yleensä noin 24 tuntia. Reaktioissa on edullista käyttää mukana happoa sitovia apuaineita, kuten alkali- ja maa-alkalimetallikarbonaatteja tai orgaanisia emäksiä. Tarkoitukseen soveltuvia metallikarbonaatteja ovat natrium-karbonaatti ja kaliumkarbonaatti sekä orgaanisina emäksinä 15 pyridiini ja sen homologit, 4-(dimetyyliamino)pyridiini, kinoliini ja sen homologit, Ν,Ν-dimetyylianiliini ja trialkyyliamiinit, edullisesti trietyyliamiini. Edellä mainitut reaktiot voivat tapahtua joko homogeenisessa liuoksessa tai heterogeenisessa systeemissä, kuten PTC-20 olosuhteissa.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden esterisi-dokset voidaan muodostaa myös käyttämällä tunnettuja ve-denlohkaisureagensseja, kuten karbodi-imidejä. Eräissä ta-25 pauksissa voivat tulla kysymykseen myös tunnetut hapon ka- • · ·.{ f talysoimat esteröintireaktiot.

• « t • · . ; ; Farmaseuttiset valmisteet valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla käyttäen alalla tunnettuja 30 kantaja-aineita ja muita apuaineita. Kantaja-aineet voivat *11. olla esimerkiksi nesteitä, suspensioita tai emulsioita, tai • · « *. salvoja ja voiteita. Valmiste voi myös olla muodostettu kiinteäksi, silmään asetettavaksi lääkemuodoksi. Sopiva : annostusmuoto on esimerkiksi silmätippaliuos, joka sisältää 35 keksinnön mukaista yhdistettä sopivana konsentraationa, kuten 0,1-4 %, sopivaan pH-arvoon puskuroidussa tai hapolla tai emäksellä sopivaan pH-arvoon säädetyssä steriilissä 98815

1 O

vesiliuoksessa, ja jolloin yhdistettä mieluimmin käytetään vesiliukoisena happoadditiosuolamuodossa. Tätä halutun konsentraation omaavaa silmätippaliuosta annostetaan silmään, potilaan tilasta riippuen, edullisesti 1-3 kertaa 5 vuorokaudessa.

KOESELOSTUS

KOKEIDEN SUORITUS

10

Keksinnön mukaisia yhdisteitä on testattu seuraavissa kokeissa. EP-patenttihakemuksesta EP-0 106 541 tunnettuja pilokarpiinin diestereitä testattiin vastaavissa kokeissa samoissa olosuhteissa ja verrattiin keksinnön mukaisiin 15 bispilokarpaatteihin.

1) Yhdisteiden stabiilius

Koeyhdisteiden stabiilius testattiin puskurihydrolyyseil-20 lä. Puskurien ionivoimakkuus (μ) oli 0,5, käytetyt pH-arvot 4,2, 6,0, 7,4 ja 9,0 ja käytetyt lämpötilat 37°C, 50 °C, 60 eC ja 70 °C.

Kullekin tutkittavalle yhdisteelle saadun hajoamisvakion k : 25 (k = 2,303 x kk, jossa kk on sen kuvaajan kulmakerroin joka : esittää logaritmia jäljellä olevan esterin määrästä ajan ;*’*· funktiona) perusteella lasketut puoliintumisajat T^ (T^.

. =0,693/k) ko pH:n omaavassa puskuriliuoksessa on esitetty jäljempänä seuraavassa taulukossa I, jossa arvot koskevat 30 puoliintumisaikoja 37 eC:ssa.

« · · • · i • · · *. Taulukossa I esitetyt tulokset osoittavat että keksinnön mukaiset bispilokarpaatit ovat stabiilimpeja happamassa : liuoksessa kuin emäksisessä ja stabiilimpeja kuin EP- 35 patenttihakemuksen 0 106 541 diesterit.

‘ ' Johdosten säilyvyyttä erilaisissa säilytysolosuhteissa 11 98815 voidaan arvioida määrittämällä hajoamisvakiot eri lämpötiloissa ja laskemalla hajoamisvakio k halutussa lämpötilassa Arrheniuksen yhtälön (1) mukaisen kuvaajan yhtälöstä, jossa logk on esitetty [1/T]:n funktiona.

5

Log k = Log A - E,,_ xl (1)

2,303R T

10 Halutussa lämpötilassa saadusta hajoamisvakiosta (k) voidaan laskea säilymisaika t10t (t10x = 0,104/k) joka kuvaa aikaa, jonka aikana 10% lääkeaineesta on hajonnut. Esimer-kinluontoisesti mainittakoon esimerkiksi että Ο,Ο’-dipro-pionyyli( l,4-ksylyleeni)bispilokarpaatin t10X-aika 4 ®C:ssa 15 on lähes 500 vuorokautta.

2) Lipofiilisvvs

Yhdisteiden lipofiilisyys tutkittiin määrittämällä yhdis-20 teiden jakaantumiskertoimet (P) pH-arvossa 7,40. Määritykset suoritettiin oktanoli-puskuriseoksessa määrittämällä tutkittavan yhdisteen pitoisuus puskurifaasissa HPLC:llä. Hyvin lipofiilisten yhdisteiden jakaantumiskertoimet määritettiin sitävastoin käänteisfaasi (RP) nestekromato-25 grafin (HPLC) retentioajan perusteella (Beckamnn 116 pumppu • :1: ja 166 UV-detektori; Marathon autom. näytteensyöttäjä).

« · · • 1 • · · .’. . Tutkittujen yhdisteiden, pilokarpiinin ja keksinnön mukaisten bispilokarpaattien log P-arvot ja kapasitettite-30 kijät k' 22 ®C:ssa on esitetty jäljempänä seuraavassa taulukossa I. Tuloksista nähdään että keksinnön mukaiset » ♦ «.

*. 1 yhdisteet ovat huomattavasti lipofiilisempia kuin pilokar- piini.

i Λ 35 3) Entswmihvdrolwsi · Keksinnön mukaisten uusien bispilokarpaattien ja tunnet- 1 2 - 98815 tujen pilokarpiinihapon diestereiden entsyymihydrolyysin puoliintumisajat määritettiin plasma/puskuri pH 7,4-seoksessa (80%-20%) 37 eC:ssa. Tutkituille yhdisteille jäljellä olevan diesterin logaritmia ajan funktiona 5 esittävän kuvaajan perusteella määritetyt hajoamisvakiot (k) ja puoliintumisajat T% on esitetty jäljempänä seuraa-vassa taulukossa II.

Tuloksista voidaan nähdä että puskuriliuoksissa stabiili 10 koeyhdiste hajoaa entsyymin (esteraasi) vaikutuksesta 0,0'- divety-bispilokarpaattivälituotteeksi, joka spontaanisti hajoaa pH-arvossa 7,40 pilokarpiiniksi. Tästä johtuen bispilokarpaattivälituotteen · vaikutus pilokarpiinin muodostumisnopeuteen on hyvin merkittävä. Pilokarpiinin 15 muodostuminen oli lähes täydellistä huolimatta epimeroitu- mismahdollisuudesta välituotteessa. Muodostuneen isopilo-karpiinin määrä vaihteli 0-10%, sillä muodostunut pilokar-piini epimerisoitui myös, jos hydrolyysiaika oli erittäin pitkä.

20 4) Sarveiskalvopenetraatio

• I I

Pilokarpiinihydrokloridin ja sen edellä kuvattujen kokeiden perusteella lupaavimpien prodrug-johdannaisten sarveiskal-25 vopenetraatio tutkittiin diffuusiokammiossa, jossa seurat-j tiin yhdisteen kulkeutumista luovuttaj af aasista (epiteeli- :"*· puoli) sarveiskalvon läpi diffuusiokammion vastaanottaja- . puolelle (endoteelipuoli). Tutkimuksessa käytettiin kaniinin silmän sarveiskalvoa.

... 30

Dif fuusiokammioiden vastaanottajapuolelta otetuista *. näytteistä tutkittiin sekä prodrugin että vapautuneen lääkeaineen pitoisuus vastaanottaj af aasissa HPLC: 11a. Näin selvitettiin prodrugin pilkkoutumisnopeus sarveiskalvossa.

35

Permeabiliteettinopeudesta (pmol/min) lasketut permeabi- * ' liteettikertoimet (Papp, cm/s), niiden keskihajonnat (RSD) - 98815 13 ja kokeiden lukumäärä on annettu jäljempänä seuraavassa taulukossa 11.

Tuloksista nähdään että kummankin ryhmän yhdisteillä 5 voidaan parantaa huomattavasti pilokarpiinin permeabili-teettia. Tulokset osoittavat myös että pilokarpiinin esterit hajoavat sarveiskalvossa muodostaen pilokarpiinia ja että pilokarpiinihappoon liitetyillä ryhmillä voidaan säädellä prodrug-yhdisteen sarveiskalvopenetraatiota ja 10 ' pilokarpiinin muodosturaisnopeutta.

• 9 • t » • · · * * 4 « I » » * *» « * « » · * f Λ « * ^ · ( · • tr • b * • 1 ! 14 - 98815

•H

+> O

+J o <D CN a) <n •μ — en «3 (0 ‘μ a -h .

s ! i 8 I ^ W o μ ε 3 μ G CU C Ή (0 o o

(0 h O H

X k H H

(0 0) o

3 X

o O H -^1 σ' ·*# o μ ro m r·' <t> co μ μ

F S

IS o

(0 O' CO

m (S CO VO CO O'

m <# ^1· μ O O (N

in ts μ (N in co

Li Ό O ^ Λ X ^ — CO 1 3 ·** Ό lO r-1 (<) fv q, H VO CO CS Ό o "i (O cd vo in ij co in i -vji γ-h i—i $ 8 :1; 3 10 e 00 O' S VO in 5 vo S CO VO O' r\ o vo γη in o mi

. . , e CN S (N CO μ (N

: : -5 •H * * * ~1 • · · *1 »-μ . t i o ^

*· * 2 Q

» « ·

5 · (X

» ·.

• 4 *

‘ * · ·· -H

μ μ H

! Π fc -A £ t: : e » d>“\/ «- a~ ff 2, 5 =' ··· -Η·Ηυγο κμιιι>ια)ΐ -h v c μ ä v · a x: L a) o o > b ^ Λ Ή ε H μ H (0 μ μ Λ! μ «II! Ή μ >ι >ι g Λ> o M· i. ? μ >1 μ >< μ W ><

g ® Η ιη ' μ C >1 >1 μ C

: S4-’ ’Ηνο Ζ- Ύ tsoisojso D en CU o H >1 μ u en >ι μ ►d μ μ ° = μ a <D μ μ a 5¾ (ϋομαοο rt χ: cu r-. en t-ι co <u en jh . . εηϊη td Κ(οα>Χ)(οα in o in o μ μ cn 15 . 98815

r-l.-IHvO^fCSOJO' t> CO

ocncrivoc^ncoco co co .-iC'joJOJO'inin.-i σ> o COCOCOrHCOC-'-vOvO ooco vvvvvvvs V k.

OOOrHOOOO rHCS

HHHHHHHH H H

COrHCSCOO^t^O <N CO

inoin^vo^icjco co^i1 [NO'OJINOOC'-'OOO co

t-IO'OvOCOin.-IVO OO

SVVSSVVV V V

(SrHOJCNiHtHi—IO CO

O' rH

v v v oo ^ o ^ t>

T-H I—4 I—I tH i—I i—4 I—i (O

7Γ rHOinoo^.'d'O

.‘looo'inoincsjincs c^o

SrHrHCOOJt-IrHt-IC^jrCS'^ 3 El jr

Eh (S O' ^ vO .-1

C^-r'rHO'OC^COCO VOrH

COvOOC^lDHitrHrH rH (N

.H «H CS .H rH «H .H VO H t—I

• vDOOOOiCOvOO CO

LDCOrHOLnOO·^1 VOO

·'·'· (NCnCNOiOCOCSO O' es :.· (NC-JrH-^icO^f'-·'^ coco

...·· I

. : : +> i i i i i i >1 • · φ'^-Η-Η-Η-Η-Η'-'-Η I >1 ·.: -p-hccgcg-hc >i m ···· mca)a)Q)a)<DC<i) ηλ

.•‘·, -ΗΦΦΦΦΦΦΦΦ >, I

Ό φ Η Η «Η Η Η φ rH U) -Η ·& -Η

.. Χ!Η >ι >ι >ι >ι ί* Η >1 X * V

• · >>lHH+J(0+>>ia l4->rH+J

. (o — to Ρ >ι CO CO φ φ φ 3 h ν (0 -Η (0 Φ C0 X X Λ Λ Ο. Λ Ο. £Χ Η Ο, ω,*·ΗΙ·ΗΙ·ΗΙ-ΗΙ·ΗΙ·ΗΙ-ΗΙ-Η ^ Μ >ι k • · ·Η I 4->C04->CS4->t^4->O+Jin+J^4->CO+J -Η (0 >ι (0 ..: (0^+Jv+Jv+Jv4-»kPv+Js+Jv4J Η X C Ä ···· X . 1Ö Η (0 Η (0 Η (ΟτΗ (0 Η (0 .—i 10 Η (0 >ιΟΟΟ 3 H m .— φ.— (0 —- ί0 —- Π3 —(0 f0 (0 S Η Ή Η ·.·· ε^α>ια>ια>ιΩ<>ιΛ>ι&>ια>ια -μ -η α ·η >,M+j^4-»vc+j^4->i-i+>i-(4J^+Jh φ α o ex 3-Ρ(0φ(0φ(0φ(0Φ(0Φ(ΰφ(0φ(0 co co ei co οφλ:>λ;>λ;>λ:>λ;>λ;>λ:>λ; φ ·η α ·η C > Ο ·Η Ο Ή Ο *Η Ο Ή Ο Ή Ο Ή Ο "Η Ο -ΗΛ-ΗΛ c-jhohohohohtjhohoh ό ^ ό -Η Ό Ή I -Η 1 -H I ·Η I -rl I -H I -H I -H I -H I ·Η '" co-cx-cx-cx-a-cx-cx-cx-cx - e - e •iiocoocoocoocoocoocoocooco οφοφ Φ ν Ή *. Ή ^ Ή Ή ^ Ή ν Ή ·. Ή *. Ή *.φ**φ

ΧΟ£)0Α0Χ>0£)0£)0Χ)0£)0£) Ο Ή O rH

in ο in Ο

rH rH CH

ie - 98815 Γ'-γη ^ o oo o tn ·μ< cm vo oo o in in h oo in -h oo io oo tn VO co co O 00 ·μ« cr» -m» e** ·Μ< cm oo

^ v *> V v V V V V

<n in ro oo ^ •vt c^ »TM "ΗίΝΜίΝΓΊΓΊΜ •M» tn in σ\ oo oo <N t>- o

O VO H CM OO CT» -M1 00 O

O H O CT» O O CM H O

m o cm m» cm m» co t> o s v v v S V S V s int> M1 m in m in in o O- CT» τί» 00 00 00 00 O v oo H t> 00 00 OM Ti» I> o CO (Ovo H CO H O <D ^

CO

m * ° ts Ti» h is in s, , t" in in in in in yi •H 00 CM [> VO VO in -H (¾ u 3 Ö3 X o (0 1-3 M» in vo oo 0s* n ro h ^ ^ct»·^ oo »m ή -vf in i—i vo σ» «h Jj ~5 Ή 00 CM CM H Tf CTV H - o o' c

(0 II

n £ ’x . · 00 CM H H H n ... cr» co vo co Tj» Tj» co m : · σ» oo t> h h co m k. n • tn VO »I M» CO ^ 00 H -μ

Il I >i H ^ -rt 22 • .', ^"» ' ' H » I H -r-i .H Ή—jrn ^ h h >i μ h ^ μ 71 2

; , >»>1 G oi K μ >t K +J Jn S

: 22 <D*M <o K co <o 2 3 ... x Ti x ή φ i -ri -p <001 μ i<o 22 ιμιμιπ ^ μ c α μ c -ho. B £ ? · M* μ M» μ H >ι * μ O) PC <D ΌΡ ,-. *b - * <0 * <0 H H H ® λ 1(00) 43 —- <0 h H <0 H <0 >1 —' <0 ·Η Ti x A Ti Ti x ^ a ^ a S ίο h o. ό o o ή ό ho H j?

TlllMllOiil-dHtlVTlv· H Ό H —> rl >| H LjU

>» ·* >1 .* 5-ITJ.+J S .M H P H (3, H P H μ o O* 22

... >1 O >1 O O» v(0OOb*i<0>i<nH<0S<0HW M

·.. MHt-<HOH<001HPiHJPT*rib>i<0?T<0<0-r-( . c, '.*· >ιΗ<υ·ΓΗΗν--ο<μΗί:αΡ43>ιθ.οο<μ43 3 2

μ&Ηο.4«;τΗΡβο»·ΗΡ<ο^ορρν4ΐ»-ι^ 5 S

3ίο<οω>,Η<οωωΛ;<ομΗθ.<ο<ο<οο)Η 2 2 43·Η>·ΗΜ^Λ;43ΗΛίΛ:3Η·Η4ϊ;εΛ:ΡΗ e Η43·Η43-Η>ιΟ·Η433ΟΗ>ι'ΟΟ3Ο0)>ι ma,

Ch-o-^coh cd >1 to h m h μ >» m I Η I -H I o H I H I Η I 0) I H I -H I 03 v« m -ο-α-43Λ-α-θ4-μ-α-α»-μ mo oa30Q)OM03oa)ocoocowocooc: ,<1)'<1)ν<0Ητα)τ·Ητ<ΐ)ν-Ητ.Ην<1) τ-)>-ι 0Η0Η0Λί430Η043043043043043 ~ ~ in o in o

H rH CM

ιν 98815 C *0 o u Ό 2 H 5

<D E

X 2 o -¾ c

Ui 3

H

Φ vo vo vo in in vo G ^ - 0) c c 4->

•d -H C

o H ° C H ·Π w <D (0 $ J! 5 Ϊ§ΐ5 - --- -- - +J m m S cr> O oo ^ oo ro

® X ti. - V V s V

O) ", CN VO (O 00 CTi

4-> d HMM CM (N OI

-H « v—' — '—1 ·—- >—- —- H ?

Ή O Λ H

(0

<0 X

£ α rft »h n n in c·- cm ro

2 Oi ” H T* H CO M H

,Ρ (0 > ' VVV VV

Λ du g O H H H OO O

V»/

_v O G

(0 jr· o Ή

τ-> E"< E"^ jr· E (N] VO rH

—00 E-< — MCOMvOOODHM

,-v H (O Oi M H M M N H M

a* +> * ' (0 COtHvOvOOCSOtNtNCriCri o <#> inoc-'inocovoincocricr»

0(00 -p oococoinajHoioi^iinM

ποιώ . ^or-.cMcoooocMcMOO

Λ-rjw C OHOOOOOOOOO

(0 E iH vvvvvvvvvvv

> 3 β Ä E OOOOOOOOOOO

. (0 +> W v_ h G m E H (0

• 10 Ή E

o h ra

. Ό o <o -H

(0 3 rH rH

X G Oi : : : to

Ai . 0) V ..· -H I i i i i Λ i i i i .. Hr = = = =0= = = =

• · >ι I I I I I H I I I I

•p >i a: o) ra ή t>i -h

<D ^ 4-> HOI H

P K G >i H >i : „· ra ^ a) >i h : h λ o tn o Ό ra s ra . h .c -μ μ μ

·.· * H G > H G <D -H C

H -rl H -H -rl 0) E H -H (D

_ -rl H >i -rl H H JQ ί>ι H H Λ O O) ^ "HpiHi“lb“1T-|-rlp>lH£>1-rl

« <B pin HG>i>i>iPHC>i>iP

^ -P «VO >iO>sOOO>iO>iOO

D ra AO t^HPGmo>iHpmo

' ’ *H OH -POiQ)(Ö-PH+JQia)-PH

5 V. h 1 (DOh-pcaqjohca; :·· < -G HOrrtrap(OA<DimPGQ)i ..· E-ι t» &.ωΚβΟι>ΟΛ00(0Ο.>Χ1Γ0 in o tn o

H H CM

18 - 98815 VO VO 0\

/> /-s /<% >«—«S

CS O O «-I

•v V V V S

co ^ ^ 00 i-l oo oo co w *—· -— *— '—^ oo in in es oo ov o i-i oo in ^ ^ v k k O 00 OS 1H 1-1 co in i-ICN^r-vfOO-tfOOiOi-l ov vo i—i i—i i—i σν i—i rH es i—i es oocri'viootNOO'vir^ines c^oo^ioocyvooio^ooi-ios ooooiHt^ovc^eoo^-vioo c^rHiom^oomesoo

OrHOOOOOOOOO

*>*ι»»\^\ννννν ooooooooooo :'. , i — •H Ή

••I H I I H

•P tn >i · I ^ I ^ >i

(1) Hl I ?ί a H ^ -rl S

·· <1)1 >i >i >i C is H I H H H <0 ::* 4->>i ra h h otot* tn >1 h tn -p

«1 h * >i >1 Xl X 01 H >1 N NC

,···. h>i i ra ra p o λ: tn ra >·< ra o) ·.· 'ϋΜΗ^-ΗΛί-ΗΛί-ΗΛΗΙΗΟΗ.ρ 10 -P £>

XJJi-P^+JI-Pl-PJuiH-vi+J^^d P C H

.. > I PrH+J'vi-P'vi'-PHa * P | +J 0) C φ Ό . (0 w φ v <0 viOHCOi-SOj-viflJÄ 0) X5 w P > e Ή OJi-l (0 i— (0 H w n] i Q} τ| ,q h h

<D H CU H Qi ^ Oi ^ ΟιΡιΑΉ OiH ΟιΌ *H Ό H

ra ^ O >i P H pH P Οι'-'Η p'— p ^ H Ό H —' H >1 -H • - HH<U>i<OH<OH<OOH&«i<ÖH«ÖHPwpHP>iP

.*:* BJHÄCÄiNÄiHÄPC^iAiHJtfHPHPHPOP

**·· -*>iOOO>iO>iOa<DOO>iO>i<OH(Oi>H<OH<0 .*:·. 3 >< H H H PH PH 0 <D CO H >iH >i <0 S<0 <0 <0 <0 *.·· EPHaH>iH<DHHHPHc:HPOiSaoapoi

(DOiOapaHaji^icaHaidPOPPpmp crarapra3ra<ora>iH(i)ra^raP(i]a(0<0(0<ua} O<0HaHJ3H>Hra>,i3HJtf-H3JiiH^:EJiPJi ΟΗΧΙΗΛΗΛ-ΗΛΗΜΗΛΟΛΗΟΌΟΟΟαίΟ CO^O^O^fl^flXfl^ra^DlH (0HMSHPH : H 1 H I H I H I H I I I H I H I H I -H I H I H

ra-d-c-ä-c-Tf-a-c-a-a-a-a .χοφοφοωοωο vOa)OQ)oraoraomom

Φ vQ) ^Q) * φ * φ v H v(J) s φ v H V.H .. -H v-H

'.·.· «οηοηοηοηο^οηο^ηολολοοοχι m o in o Ή t—1 O-i 1 9 98815 5. Yhteenveto

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat osoittautuneet stabii-5 leiksi yhdisteiksi myös vesipohjaisissa liuoksissa ja mahdollistavat siten silmätippaformulaatioiden valmistamisen. On myös osoitettu että muuttamalla pilokarpiinihappoon liittyviä ryhmiä, johdoksen lipofiilisyyttä, entsymaattista hajoamista, sarveiskalvopenetraatiota ja siten 10 pilokarpiinin muodostumista silmässä voidaan säädellä helposti tarkoitusta vastaavaksi. Silmän esteraasientsyymit aloittavat bispilokarpaattien hydrolysoitumisen välituotteeksi, joka hajoaa spontaanisti pilokarpiiniksi.

15 Verrattaessa keksinnön mukaisia yhdisteitä EP-hakemuksen 0 106 541 mukaisiin yhdisteisiin, voidaan todeta että keksinnön mukaiset yhdisteet ovat kaikilla osa-alueilla vähintään yhtä hyvät kuin tunnetut yhdisteet. Merkittävä etu keksinnön mukaisilla yhdisteillä on kuitenkin se että 20 keksinnön mukaiset bispilokarpaatit tuottavat kaksi pilokarpiinimolekyyliä yhtä bispilokarpaattimolekyyliä kohti, josta puolestaan seuraa suhteessa vähemmän prodrug-rakenteesta irtoavia metaboliatuotteita, eritoten monokar-boksyylihappoja, aldehydejä jne, pilokarpiinimolekyyliä 25 kohti. Minimoimalla metaboliatuotteiden määrää voidaan • ;*- vähentää silmälääkkeistä aiheutuvaa silmän ärsytystä ja • · · » kirvelyä.

* · ·

Keksinnön mukaisilla yhdisteillä voidaan pilokarpiinin . 30 lääkehoidossa esiintyviä epäkohtia (huono biologinen hyväksikäytettävyys, systeemi- ja silmäsivuvaikutukset, • · * *·* ’ tiheä annostelu ja näistä johtuva potilaiden huono hoito- myötyvyys) pitkälti poistaa. Johtuen paremmasta sarveiskal-vopermeabiliteetista, keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan 35 annostella huomattavasti pienemmillä annoksilla ja annoste-; lukertoja/päivä voidaan vähentää, jolloin sivuvaikutukset ' '· vähenevät, potilaiden hoitomyötyvyys paranee ja glaukooma- 98815 20 potilaiden lääkehoito tehostuu.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä.

5

KÄYTETYT LAITTEET

Sulamispisteen määritys: Reichert Thermovar-laitteisto Taitekertoimen määritys: Atago Illuminator-laitteisto 10 pKa-arvon määritys: titraamalla johdos vesi-etanoliseokses-sa (50%-50%)

Massaspektrometri: VG 70-250SE

Mittausolosuhteet elektronipommitusionisaatiossa: elektronienergia: 70 eV (ellei toisin mainittu) 15 ionisaatiovirta: 500 μΑ

ionisaatiokammion lämpötila: 150 °C

näytteen asettimen lämpötila 30 °C => 500 °C 2-5 minuutissa resoluutio: 10 000 20

Thermospray-massaspektrometri: VG thermospray/plasmaspray VG Trio-2 quadropoli Beckmann 112 pumppu

Mittausolosuhteet thermospray-ionisaatiossa 25 optimoitu päivittäin ; NMR-spektrometri: Bruker AC 250/Aspect 3000 ll« * 1H/13C 5 mm dual probe , ;·, CD30D 20 mg/ml 6 ppm (tetrametyylisilaani=0) : 30 » * » • « · · • 4 · * · · • · · Λ 35 I, 0,0'-Divetvf1.4-ksvlvleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,4-ksylyleeni) 21

Esimerkki 1 988Ί5 5 a) Pilokarpiinihapon natriumsuola

Pilokarpiinihydrokloridia (3,92 g; 16,00 moolia) liuotettiin tislattuun veteen (4 ml) ja liuos jäähdytettiin noin 10 0 eC:seen. Liuokseen lisättiin 18 ml jääkylmää 2M Na0H:ta neljänä annoksena. Liuoksen annettiin seistä noin 0 °C:ssa tunnin ajan. Ylimääräisen Na0H:n neutraloimisen jälkeen 5 ml:11a IM HCl:ää, liuos haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin 60 ml:aan absoluuttista etanolia ja 15 sekoitettiin 10 minuuttia 60 °C:ssa. Jäähdyttämisen jälkeen 4 °C:seen, liukenematon NaCl poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 3,93 g natriumpilokarpaattia valkoisena, erittäin hygroskooppisena aineena.

20 b) 0,0'-Divety(1,4-ksylyleeni)bispilokarpaatti

Liuokseen, jossa oli 8,00 mmoolia (1987 mg) pilokarpiinihapon natriumsuolaa 60 ml:ssa dimetyylisulfoksidia, 25 lisättiin tipoittain 3,00 mmoolia a,a'-dikloori-p-ksy- • · • J ‘ leeniä (524 mg) dimetyylisulfoksidissa noin tunnin kulues- : sa. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 48-72 tun- tia, ja kaadettiin 100 ml:aan tislattua vettä. Seos uutet-tiin kahdella 100 ml:n erällä kloroformia. Yhdistetyt klo- • · 30 roformiuutteet pestiin 100 ml:11a tislattua vettä, 100 i · ml:11a 2 %:sta natriumbikarbonaattiliuosta ia 100 ml:11a • · · J • · · tislattua vettä. Kloroformiuutteet kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja kloroformi haihdutettiin alennetussa paineessa, ja saatu bispilokarpaatti kiteytettiin klorofor-35 mi/petrolieetteri-seoksesta, jolloin saatiin 770 mg (1,39 mmoolia) otsikon yhdistettä.

98815 22

Sul.p. 170-171 °C pKa = 6,25 k' = 0,8101 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): ei [M+ ]-5 piikkiä, 208 (19%), 207 (6%), 96 (42%), 95 (100%).

HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 555 [M+l] (12%), 417 (3%), 384 (4%), 347 (46%), 267 (10%), 250 (5%), 209 (100%).

NMR: 6 7,47 bs 2H, 7,39 s 4H, 6,69 bs 2H, 5,09 s 4H, 3,51 10 m 4H, 3,48 s 6H, 2,65 m 2H, 2,53 m 2H, 2,42 m 2H, 1,97 m 2H, 1,67 m 4H ja 0,84 t 6H.

Esimerkki 2 15 0.0-Dlvetv(1.3-ksvlvleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,3-ksylyleeni)

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta (1287 mg; 5,18 mmoolia) ja a,a'-dibromi-m-ksyleenistä (342 20 mg; 1,30 mmoolia) esimerkissä 1 kuvatulla menetelmällä. Saatu bispilokarpaatti kiteytettiin etyyliasetaatti/eet-teriseoksesta. Saanto oli 380 mg (0,69 mmoolia).

I 1

Sul.p. 116-117 °C 25 pKa = 6,30 i k' = 0,8291 i" HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): ei [M1]- piikkiä, 209 (11%), 208 (38%), 96 (44%), 95 (100%).

* HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): ; 30 555 [M+l] (7%), 417 (7%), 385 (8%), 347 (46%), 267 (9%), 250 (10%), 209 (100%).

NMR: δ 7,47 bs 2H, 7,44 bs 1H, 7,35 m 3H, 6,70 bs 2H, 5,09 bs 4H, 3,52 m 4H, 3,48 s 6H, 2,66 m 2H, 2,52 m 2H, 2,43 m i'j 2H, 1,97 m 2H, 1,67 m 4H ja 0,85 t 6H.

.·!·. 35 * « i » i l · O.O-Divetvf1.2-ksvlvleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,2-ksylyleeni) 23

Esimerkki 3 - 98815 5

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta (1166 mg; 4,70 mmoolia) ja α,α’-dibromi-o-ksyleenistä (310 mg; 1,18 mmoolia) esimerkissä 1 kuvatulla menetelmällä. Saatu bispilokarpaatti kiteytettiin etyyliasetaatti/petro-10 lieetteriseoksesta. Saanto oli 380 mg (0,69 mmoolia).

Sul.p. 62-64 eC pKa = 6,30 k' = 0,8291 15 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): ei [M*]-piikkiä, 208 (12%), 96 (19%), 95 (100%).

HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 555 [M+l] (11%), 417 (7%), 385 (8%), 347 (46%), 267 (9%), 250 (14%), 209 (100%).

20 NMR: δ 7,47 bs 2H, 7,34 m 4H, 6,70 bs 2H, 5,24 s 4H, 3,52 m 4H, 3,48 s 6H, 2,66 m 2H, 2,53 m 2H, 2,42 m 2H, 1,97 m 2H, 1,67 m 4H ja 0,85 t 6H.

' ' Esimerkki 4 25 ; O. O * -Divetv(1.7-heptvleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,7-heptyleeni) i • »

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta . . 30 (1994 mg; 8,03 mmoolia) ja 1,7-dibromiheptaanista (518 mg; *);.* 2,01 mmoolia) esimerkissä 1 selitetyn menetelmän mukaises- # · · '·’ * ti. Saatu bispilokarpaatti kiteytettiin kloroformi/petroli- eetteriseoksesta. Saanto 1050 mg (1,91 mmoolia).

t «

. . 35 Sul.p. 117-120 eC

Y\ pKa = 6,30 '· 1 k' = 1,1266 24 . 9881b HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 208 (16%), 96 (2%), 95 (100%).

HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 549 [M+l] (4%), 341 (16%), 267 (7%), 250 (5%), 209 (100- 5 %).

NMR: δ 7,50 bs 2H, 6,73 bs 2H, 4,05 t 4H, 3,59 s 6H, 3,53 m 4H, 2,72 m 2H, 2,50 m 2H, 2,47 m 2H, 1,99 m 2H, 1,68 m 4H, 1,64 bm 8H, 1,37 m 2H ja 0,88 t 6H.

10 Esimerkki 5 0.0 '-Divetv(1.6-heksvleeni )bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,6-heksyleeni) 15 Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta (1353 mg; 5,45 mmoolia) ja 1,6-dibromiheksaanista (499 mg; 2,04 mmoolia) esimerkissä 1 selitetyllä menetelmällä. Saatu bispilokarpaatti kiteytettiin kloroformi/petrolieetteri-seoksesta. Saanto oli 717 mg (1,34 mmoolia).

20

Sul.p. 115-118 eC pKa = 6,30 k' = 0,8924 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): ei [M*]-25 piikkiä, 208 (16%), 96 (24%), 95 (100%).

: HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): • i · ,'»·* 535 [M+l] (5%), 327 (26%), 267 (13%), 250 (7%), 209 (100- i %).

NMR: δ 7,49 bs 2H, 6,73 bs 2H, 4,05 t 4H, 3,60 s 6H, 3,53 30 m 4H, 2,72 m 2H, 2,51 m 2H, 2,47 m 2H, 1,99 m 2H, 1,67 m ··’· 5 4H, 1,65 m 4H, 1,41 m 4H ja 0,88 t 6H.

• · · • · · • · ♦ 35 - 98815 O.O'-DivetvC1.5-pentvleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,5-pentyleeni) 25

Esimerkki 6 5

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta (1051 mg; 4,23 mmoolia) ja 1,5-dibromipentaanista (244 mg; 1,06 mmoolia) esimerkissä 1 selitetyllä menetelmällä. Saatu bispilokarpaatti kiteytettiin etyyliasetaatti/petrolieet-10 teriseoksesta. Saanto oli 395 mg (0,75 mmoolia).

Sul.p. 84-87 eC pKa = 6,30 k' = 0,7532 15 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 209 (8%), 208 (9%), 96 (27%), 95 (100%).

HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 521 [M+l] (15%), 417 (6%), 351 (9%), 313 (73%), 267 (11%), 250 (12%), 209 (100%).

20 NMR: δ 7,50 bs 2H, 6,73 bs 2H, 4,07 t 4H, 3,60 s 6H, 3,55 m 4H, 2,73 m 2H, 2,52 m 2H, 2,48 m 2H, 1,99 ra 2H, 1,68 m 4H, 1,64 m 4H, 1,52 m 2H ja 0,89 t 6H.

Esimerkki 7 :·. 25 • · · : 0,0' -Divetv( 1.4-butvleeni)bispilokarpaatti j * · · [ (Kaava I': Y=Y'=H; A= 1,4-butyleeni) • ·.

• ·' : : :

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta 30 (1069 mg; 4,31 mmoolia) ja 1,4-dibromibutaanista (233 mg; :·ί · 1,08 mmoolia) esimerkissä 1 selitetyllä menetelmällä. Saatu • · · : * : bispilokarpaatti kiteytettiin kloroformi/eetteri/etyyli- asetaattiseoksesta. Saanto oli 185 mg (0,37 mmoolia).

35 Sul.p. 127-129 °C V.; pKa = 6,35 k' = 0,6582 98815 26 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 299 (21%), 267 (11%), 209 (20%), 208 (7%), 139 (49%), 96 (39%), 95 (100%).

HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 5 507 [M+l] (18%), 417 (6%), 337 (6%), 299 (66%), 267 (11%), 250 (11%), 209 (100%).

NMR: δ 7,50 bs 2H, 6,73 bs 2H, 4,08 t 4H, 3,60 s 6H, 3,54 m 4H, 2,73 m 2H, 2,52 m 2H, 2,47 m 2H, 2,00 m 2H, 1,81 m 4H, 1,68 m 4H ja 0,89 t 6H.

10

Esimerkki 8 0.01-Divetv(1.3-propyleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=H; A=l,3-propyleeni) 15

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon natriumsuolasta (1021 mg; 4,11 mmoolia) ja 1,3-dibromipropaanista (208 mg; 1,03 mmoolia) esimerkissä 1 selitetyllä menetelmällä. Saatu bispilokarpaatti kiteytettiin etyyliasetaatti/eetteriseok-20 sesta. Saanto oli 330 mg (0,70 mmoolia).

Sul.p. 71-73 °C pKa = 6,40 k' = 0,6139 25 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 303 : .·. (4%), 209 (46%), 208 (15%), 96 (27%), 95 (100%).

·*·. HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 493 [M+l] (25%), 417 (7%), 323 (9%), 285 (73%), 267 (9%), i : 250 (10%), 209 (100%).

30 NMR: 6 7,50 bs 2H, 6,72 bs 2H, 4,19 t 4H, 3,60 s 6H, 3,54 i.i . m 4H, 2,72 m 2H, 2,53 m 2H, 2,49 m 2H, 1,99 m 2H, 2,08 qv • · · : : : 2H, 1,68 m 4H ja 0,89 t 6H.

li 35 0.01-Diasetvvli(1.4-ksylvleeniIbispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=asetyyli, A=l,4-ksylyleeni; fumaraatti)

Esimerkki 9 27 98815 5

Seokseen, jossa oli 679 mg (1,22 mmoolia) 0,0'-divety(1,4-ksylyleeni)bispilokarpaattia (vrt. esimerkkiä 1) ja 2026 mg kaliumkarbonaattia (14,66 mmoolia) tolueenissa (150 ml), lisättiin tipoittain 767 mg (9,77 mmoolia) asetyyli-10 kloridia 30-40 tunnin kuluessa. Seosta sekoitettiin 40-72 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin 2%:nen natriumbikar-bonaattiliuos (150 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Kerrokset erotettiin ja tolueenifaasi pestiin kahdesti vedellä (2 x 150 ml), kuivattiin 15 kalsiumsulfaatilla (30 min) ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,0'-diasetyyli(1,4-ksylyleeni )bispilokarpaattia (vapaa emäs) öljynä (780 mg, 1,22 mmoolia). Öljy liuotettiin tolueeniin (20 ml) ja lisättiin fumaarihapon (425 mg, 3,66 mmoolia) 2-propanoliliuosta (10 20 ml). Suola seostettiin petrolieetterillä. Seoksen annettiin seistä yli yön minkä jälkeen 0,0'-diasetyyli(1,4-ksylyleeni )bispilokarpaatin fumaraatti eristettiin suodattamalla, jolloin saatiin 750 mg (0,76 mmoolia) fumaraat-tisuolaa.

25 • ♦ : n.20 = 1,5230 (vapaa emäs)

'··. Sul.p. 58-60 °C

-I* pK = 6,03 i : k' = 1,3987 30 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 638 ί·: · (M*·) (5%), 565 (3%), 458 (22%), 443 (19%), 387 (24%), 208 • · · (21%), 207 (45%), 96 (20%), 95 (100%).

HR-MS = molekyylipaino = 638,32739 (mitattu) [·' 35 638,33156 (laskettu) HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 28 9881b 677 (35%), 661 (21%), 639 [M+l] (100%), 469 (13%), 431 (50%), 389 (37%), 209 (55%).

NMR: δ 8,46 bs 2H, 7,41 s 4H, 7,19 bs 2H, 6,71 (fum.), 5,15 m 4H, 4,06 m 4H, 3,71 s 6H, 2,71 m 4H, 2,56 m 2H, 2,36 m 5 2H, 2,00 s 6H, 1,69 m 4H ja 0,86 t 6H.

Esimerkki 10 0,0' -DipropionwlK 1.4-ksvlvleeni)bispilokarpaatti 10 (Kaava I': Y=Y'=propionyyli; A=l,4-ksylyleeni; fumaraatti)

Yhdiste valmistettiin O, O' -divety( 1,4-ksylyleeni )bispilokar-;:paatista (473 mg; 0,85 mmoolia) (vrt. esimerkkiä 1) ja propionyylikloridista (631 mg; 6,82 mmoolia) esimerkissä 9 15 kuvatulla menetelmällä. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/to-. lueeni/petrolieetteriseoksesta. Saanto oli 730 mg (0,72 mmoolia).

nd20 = 1,5205 (vapaa emäs) 20 Sul.p. 86-89 eC pKa = 5,80 k' = 2,3038 HR-MS-spektri; m/e (suhteellinen intensiteetti): 666 (M*·) (5%), 472 (53%), 457 (45%), 401 (58%), 209 (14%), 208 .. 25 (13%), 207 (34%), 96 (43%), 95 (100%).

• « · j’'..* HR-MS = molekyylipaino = 666,35667 (mitattu) Γ 666,36296 (laskettu) t : .

30 HPLC-MS (therraospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): : 705 (46%), 689 (22%), 667 [M+l] (100%), 459 (18%), 404 : : : (11%), 351 (41%), 209 (80%).

NMR: δ 8, 39 bs 2H, 7,41 s 4H, 7,15 bs 2H, 6,72 (fum.), 5,15 m 4H, 4,07 m 4H, 3,69 s 6H, 2,71 m 4H, 2,55 m 2H, 2,36 35 m 2H, 2,30 q 4H, 1,69 m 4H, 1,08 t 6H, 0,86 t 6H.

Esimerkki 11 98815 29 0.0'-Dibutvrwlif1.4-ksvlvleeni)biSDllokarpaatti 5 (Kaava I': Y=Y'=butyryyli; A=l,4-ksylyleeni; fumaraatti)

Yhdiste valmistettiin 0,0'-divety(1,4-ksylyleeni Jbispiloka-rpaatista (431 mg; 0,78 mmoolia) (vrt. esimerkkiä 1) ja buturyylikloridistä (663 mg; 6,22 mmoolia) esimerkin 9 10 menetelmän mukaisesti. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/-tolueeni/petrolieetteriseoksesta. Saanto 800 mg (0,77 mmoolia).

nd20 = 1,5070 (vapaa emäs)

15 Sul.p. = 90-92 eC

pK. = 6,00 k' = 4,0127 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 694 (M4')-(3%), 486 (26%), 471 (14%), 415 (17%), 209 (15%), 208 20 (20%), 207 (37%), 96 (26%), 95 (100%).

HR-MS = molekyylipaino = 694,39378 (mitattu) 694,39415 (laskettu) 25 HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): • · : 732 (77%), 717 (36%), 695 [M+l] (100%), 525 (9%), 487 jll.* (13%), 455 (7%), 417 (14%), 297 (7%), 209 (28%).

;;· NMR: δ 8,51 bs 2H, 7,41 s 4H, 7,21 bs 2H, 6,71 (fum.), 5,15 m 4H, 4,07 m 4H, 3,72 s 6H, 2,72 m 4H, 2,55 m 2H, 2,36 m 30 2H, 2,27 t 4H, 1,69 m 4H, 1,59 m 4H, 0,91 t 6H ja 0,86 t : 6H.

• · · • · · 35 0,0*-Divalerwli(1,4-ksvlvleeni)bispilokarpaatti (Kaava I': Y=Y'=valeryyli; A=1,4-ksylyleeni; fumaraatti)

Esimerkki 12 30 98815 5

Yhdiste valmistettiin 0,0 ' -divety ( 1,4-ksylyleeni) bispilokarpaatista (395 mg; 0,71 mmoolia) (vrt. esimerkkiä 1) ja valeryyli-kloridista (685 mg; 5,68 mmoolia) esimerkissä 9 kuvatulla menetelmällä. Yhdiste kiteytettiin uudestaan 2-propanoli/-10 tolueeni/petrolieetteriseoksesta. Saanto oli 567 mg (0,53 mmoolia).

nd20 = 1,5080 (vapaa emäs)

Sul.p. = 84-86 °C

15 pKa = 6,00 k' = 7,3861 HR-MS-spektri; m/e (suhteellinen intensiteetti); 722 (M1·)-(9%), 500 (60%), 485 (31%), 429 (41%), 209 (14%), 208 (17%), 207 (34%), 96 (46%), 95 (100%).

20 HR-MS = molekyylipaino = 722,42308 (mitattu) 722,42546 (laskettu) HPLC-MS (thermospray); m/e (suhteellinen intensiteetti): 25 761 (86%), 745 (33%), 723 [M+l] (100%), 431 (16%), 362 .V (9%), 209 (35%).

•’ll/ NMR: δ 8,35 bs 2H, 7,41 s 4H, 7,13 bs 2H, 6,72 (fum. ), 5,15 ’;· m 4H, 4,07 m 4H, 3,69 s 6H, 2,70 m 4H, 2,55 m 2H, 2,36 m

1 2 2H, 2,29 t 4H, 1,69 m 4H, 1,55 m 4H, 1,33 m 4H, 0,91 t 6H

30 ja 0,86 t 6H.

• » • « · • « « · li 35 · · • » » 2 • » · 31 98815

Esimerkki 13 0,0' -Disvklopropvvlikarbonwli( 1.4-ksvlvleeni)bispilokar-paatti 5 (Kaava I': Y=Y’=syklopropyylikarbonyyli, A=l,4-ksylyleeni; fumaraatti)

Yhdiste valmistettiin O, O' -divety (1,4-ksylyleeni)bispilokar-paatista (547 mg; 0,99 mmoolia) (vrt. esimerkkiä 1) ja 10 syklopropyylikarbonyylikloridista (788 mg; 7,92 mmoolia) esimerkissä 9 selitetyn menetelmän mukaisesti. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/tolueeni/petrolieetteriseoksesta. Saanto 843 mg (0,81 mmoolia).

15 nd20 = 1,5290 (vapaa emäs)

Sul.p. = 73-75 eC

pKa = 6,00 k' = 2,4684 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 690 (M*)-20 (5%), 484 (36%), 469 (19%), 413 (30%), 209 (7%), 208 (16%), 207 (46%), 96 (30%), 95 (100%).

HR-MS = molekyylipaino = 690,36014 (mitattu) 690,36286 (laskettu) 25 • · . . HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): ;:i * 728 (89%), 713 (42%), 691 [M+l] (100%), 623 (12%), 521 (23- *;·♦ %), 480 (30%), 453 (32%), 415 (46%)* 209 (73%).

i : : NMR: 6 8,55 bs 2H, 7,41 s 4H, 7,24 bs 2H, 6,71 (fum.), 5,16 30 m 4H, 4,08 m 4H, 3,73 s 6H, 2,74 m 4H, 2,57 m 2H, 2,38 m ·.; ·’ 2H, 1,70 m 4H, 1,69 m 2H, 0,87 t 6H ja 0,86 m 8H.

• · · • t · 35 32 98815

Esimerkki 14 0.01-DibentsoyylK1.4-ksvlvleenl)blspilokarpaatti (Kaava I’: Y=Y'=bentsoyyli, A=1,4-ksylyleeni; fumaraatti) 5

Yhdiste valmistettiin 0,0' -divety( 1,4-ksylyleeni )bispiloka-rpaatista (486 mg; 0,88 mmoolia) (vrt. esimerkkiä 1) ja bentsoyylikloridista (990 mg; 7,04 mmoolia) esimerkissä 9 selitetyn menetelmän mukaisesti. Yhdiste kiteytettiin 2-10 propanoli/tolueeni/petrolieetteriseokesta. Saanto oli 464 mg (0,42 mmoolia).

nd20 = 1,5605 (vapaa emäs)

Sul.p. = 72-75 °C

15 pK. = 5,80 k' = 5,9304 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 762 (M*)- (1%), 243 (10%), 208 (15%), 207 (38%), 96 (26%), 95 (100- 20 %).

HR-MS = molekyylipaino = 762,36774 (mitattu) 762,36286 (laskettu) 25 HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): . V 785 (28%), 763 [M+l] (100%), 593 (16%), 555 (21%), 489 *::/ (7%), 451 (8%), 209 (42%).

'; · NMR: 6 8,41 bs 2H, 7,93 m 4H, 7,60 m 2H, 7,46 m 4H, 7,32 s 4H, 7, 20 bs 2H, 6,71 (fum.), 5, 07 m 4H, 4,32 m 4H, 3,71 30 s 6H, 2,82 m 4H, 2,65 m 2H, 2,53 m 2H, 1,75 m 4H ja 0,89 t L ? 6H.

• · · • · · 35

Esimerkki 15 33 98815 0,0' -Adipowlifdibentswll )bispilokarpaatti (Kaava I": R=R'=bentsyyli, B=1,4-butyleeni; fumaraatti) 5

Liuokseen, jossa oli 7,78 mmoolia (1932 mg) pilokar-piinihapon natriumsuolaa, jonka valmistus on esitetty esimerkissä 1, 60 ml:ssa dimetyylisulfoksidia, lisättiin ti-poittain 7,78 mmoolia bentsyylikloridia (985 mg) noin tun-10 nin sisällä. Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 48-72 tuntia,*ja kaadettiin 100 ml:aan tislattua vettä. Seos uutettiin kahdella 100 ml:n annoksella etyyliasetaattia. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin 150 ml:11a tislattua vettä, 150 ml:11a 2%:sta natriumbikarbonaatti-15 liuosta ja 150 ml:11a tislattua vettä. Etyyliasetaattiuutteet kuivattiin kalsiumsulfaatilla ja etyyliasetaatti haihdutettiin alennetussa paineessa pilokarpiinihapon bentsyyliesterin tuottamiseksi. Esteri kiteytettiin kloro-formi/petrolieetteriseoksesta, jolloin saatiin 1125 mg 20 (5,56 mmoolia) esteriä.

Sul.p. = 101-104 °C

pKa = 6,50 k' = 0,7658 ,, 25 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 208 • « (15%), 96 (45%), 95 (100%).

f i . HR-MS = molekyylipaino = ei M+*-piikkiä HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): ‘ 1 317 [M+l] (51%), 209 (100%) 30 NMR: 6 7,47 bs 1H, 7,33 m 5H, 6,69 bs 1H, 5,10 s 2H, 3,52 « , M , m 2H, 3,47 s 3H, 2,70 m 1H, 2,52 m 1H, 2,45 m 1H, 1,98 m ! * ? 1H, 1,70 m 2H ja 0,86 t 3H.

Seokseen, jossa on 406 mg (1,28 mmoolia) pilokarpiinihapon 35 bentsyyliesteriä ja 553 mg (3,00 mmoolia) kaliumkarbonaattia tolueenissa (40 ml) lisättiin tipoittain adipoyy-likloridia (108 mg; 0,59 mmoolia) noin 24 tunnin kuluessa.

34 98815

Liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa noin 48 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin 2 %:sta natriumbikarbonaattili-uosta (40 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Kerrokset erotettiin ja tolueenifaasi pestiin 5 kahdesti tislatulla vedellä (2 x 50 ml), kuivattiin kalsiumsulfaatilla (30 min) ja haihdutettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,0'-adipoyyli(dibentsyy-li)bispilokarpaatti (vapaa emäs) öljynä (324 mg; 0,44 mmoo-lia). Öljy liuotettiin tolueeniin (15 ml) ja lisättiin 10 fumaarihapon (153 mg; 1,32 mmoolia) 2-propanoliliuosta (5 ml). Suola seostettiin petrolieetterillä. Seoksen annettiin seistä yli yön jolloin saatiin 0,0'-adipoyyli(dibentsyy-li)bispilokarpaatin fumaraattia (327 mg; 0,30 mmoolia).

15 nd20 = 1,5340 (vapaa emäs)

Sul.p. = 98-100 eC

pK. = 6,00 k’ = 4,4810 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 742 (M**)-20 (5%), 741 (8%), 629 (39%), 625 (52%), 536 (75%), 535 (100%), 459 (69), 445 (43%), 357 (33%), 299 (45%), 209 (55%), 207 (64%), 95 (69%), 91 (56%).

HR-MS = molekyylipaino = 742,390380 (mitattu) . . 25 742,394150 (laskettu) • · # « • « • » · HPLC-MS (thermospray): ra/e (suhteellinen intensiteetti): t · 780 (75%), 765 (28%), 743 [M+l] (100%), 480 (8%), 445 (10%), 317 (23%), 209 (26%).

30 NMR: δ 8,36 bs 2H, 7,35 m 10H, 7,14 bs 2H, 6,72 (fum.), ;.· ; 5,14 m 4H, 4,07 m 4H, 3,65 s 6H, 2,68 m 4H, 254 m 2H, 2,34 ’-*** m 2H, 2,30 t 4H, 1,69 m 4H, 1,59 t 4H ja 0,87 t 6H.

35 35

Esimerkki 16 98815 0,0' -Glutarwli(dibentswli )bispilokarpaatti (Kaava I": R=R'=bentsyyli, B=l,3-propyleeni; fumaraatti) 5

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon bentsyyliesteristä (633 mg; 2,00 mmoolia) ja glutaryylikloridista (135 mg; 0,80 mmoolia) esimerkissä 15 selitetyn menetelmän mukaisesti. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/tolueeni/petro-10 lieetteriseoksesta. Saanto oli 477 mg (0,44 mmoolia).

nd20 = 1,5330 (vapaa emäs)

Sul.p. = 55-58 °C

pKa = 6,00 15 k’ - 3,7658 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 728 (M*)-(0,15%), 419 (8%), 343 (16%), 209 (12%), 208 (14%), 207 (45%), 96 (31%), 95 (76%), 91 (100%) 20 HR-MS = molekyylipaino = 728,3734740 (mitattu) 728,3785152 (laskettu) HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 729 [M+l] (36%), 431 (45%), 317 (35%), 209 (100%).

: 25 NMR: δ 8,47 bs 2H, 7,35 m 10H, 7,20 bs 2H, 6,71 (fum.), : 5,14 m 4H, 4,07 m 4H, 3,67 s 6H, 2,68 m 4H, 2,54 m 2H, 2,34 t 4H, 2,32 m 2H, 1,84 m 2H, 1,69 m 4H ja 0,87 t 6H.

• · · * · ·

Esimerkki 17 : . . 30 , ;· 0,0’-Sukkinyylifdibentsvvli)bispilokarpaatti • « · (Kaava I": R=R'=bentsyyli, B=etyleeni; fumaraatti )

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon bentsyyliesteristä 35 (633 mg; 2,00 mmoolia) ja sukkinyylikloridista (124 mg; : 0,80 mmoolia) esimerkissä 15 selitetyn menetelmän mukaises ti. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/tolueeni/petro- 98815 36 lieetteri-seoksesta. Saanto oli 402 mg (0,38 mmoolia).

nd20 = 1,5360 (vapaa emäs)

Sul.p. = 65-67 eC

5 pKa = 6,00 k' = 3,4557 HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 714 (M+)-(1%), 537 (10%), 415 (9%), 329 (11%), 208 (10%), 207 (31%), 96 (23%), 95 (94%), 91 (100%) 10 HR-MS = molekyylipaino = 714,3668980 (mitattu) 714,3628652 (laskettu) HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 15 751 (10%), 715 [M+l] (47%), 417 (32%), 317 (57%), 209 (100%).

NMR: 6 8,44 bs 2H, 7,35 m 10H, 7,17 bs 2H, 6,71 (fum.), 5,14 m 4h, 4,09 m 4H, 3,65 s 6H, 2,68 m 4H, 2,58 s 4H, 2,53 m 2H, 2,32 m 2H, 1,69 m 4H ja 0,86 t 6H.

20

Esimerkki 18 0,0' -Fumarowli(dibentswli )bispilokarpaatti (Kaava 1": R=R'=bentsyyli, B=etenyleeni; fumaraatti) 25 • · ·,·: Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon bentsyyliesteristä (633 mg; 2,00 mmoolia) ja fumaroyylikloridista (122 mg; : : 0,80 mmoolia) esimerkissä 15 selitetyn menetelmän mukaises ti. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/tolueeni/petrolieette-. 30 riseoksesta. Saanto oli 112 mg (0,11 mmoolia).

• · * · · nd20 = 1,5415 (vapaa emäs)

Sul.p. = 64-66 °C

.J pKa = 6,05 .·!·. 35 k' = 4,2785 ,·_ : HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 712 (M+ )- ' : (0,4%), 411 (41%), 407 (34%), 318 (56%), 317 (96%), 299 98815 37 (39%), 209 (67%), 207 (40%), 96 (47%), 95 (100%), 91 (62%).

HR-MS = molekyylipaino = 712,3462220 (mitattu) , 20 eV 5 712,3472151 (laskettu) HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti): 750 (40%), 733 (20%), 713 [M+l] (100%), 450 (15%), 413 (32-%), 317 (96%), 209 (42%).

10

Esimerkki 19 O. O1 -TereftalowlKdibentswli )bispilokarpaatti 15 (Kaava I": R=R'=bentsyyli, B=p-fenyleeni; fumaraatti)

Yhdiste valmistettiin pilokarpiinihapon bentsyyliesteristä (633 mg; 2,00 mmoolia) ja tereftaloyylikloridista (162 mg; 0,80 mmoolia) esimerkissä 15 selitetyn menetelmän mukaises-20 ti. Yhdiste kiteytettiin 2-propanoli/tolueeni/petro- lieetteriseoksesta. Saanto oli 370 mg (0,33 mmoolia).

nd20 = 1,5510 (vapaa emäs)

Sul.p. = 130-133 eC

: 25 pKa = 6,00 k' = 7,3354 * · 4 .· HR-MS-spektri: m/e (suhteellinen intensiteetti): 762 : (M*-)(l%), 208 (13%), 207 (46%), 96 (36%), 95 (100%), 91 (70%).

: *: 30 HR-MS = molekyylipaino = 762,3563840 (mitattu) • · · 762,3628652 (laskettu) HPLC-MS (thermospray): m/e (suhteellinen intensiteetti):763 [M+l] (82%), 465 (52%), 317 (97%), 267 (23%), 209 (100%).

35 NMR: 6 8,46 bs 2H, 8,05 s 4H, 7,32 m 10H, 7,24 bs 2H, 6,72 (fum.), 5,10 m 4H, 4,37 m 4H, 3,70 s 6H, 2,83 m 4H, 2,66 m 2H, 2,54 m 2H, 1,75 m 4H ja 0,91 t 6H.

Claims

38 98815

1. Menetelmä farmakologisesti käyttökelpoisten bispilo-karpiinihapon esterijohdannaisten valmistamiseksi, joiden 5 yleinen kaava on n... cy, Aä. o, „ V y V V 1. o J- ^<* 0R' βΑ/γ ^ Y '"»A εΛ>ιΓ Ύ "c,Hs o o o o (I") (I· ) 15 jossa kaavassa 1' O M Y on vety, -C-R, jossa R on Ci-C10-alkyyli, Cj-Cj-sykloal- kyyli tai fenyyli tai fenyylialempialkyyli, 0 11

20 Y· tarkoittaa vetyä tai ryhmää -C-R', jossa R1 tarkoittaa samaa kuin R, jolloin R' voi olla sama tai eri kuin R, ja A on C^-CiQ-alkyleeni tai ksylyleeni, tai, jossa kaavassa I" R ja R' tarkoittavat samaa kuin edellä, ja 25 B tarkoittaa C,-C10-alkyleeniä, C2-C10-alkenyleeniä tai • fenyleeniä, f·· . sekä sanottujen yhdisteiden happoadditiosuolojen valmis- . tamiseksi, tunnettu siitä, että « > | a) kaavan 1' mukaisen yhdisteen valmistamiseksi saatetaan 30 pilokarpiinihappo, jonka kaava on "·· CH, v · V Y3 0=/ '-OH OH li 98815 39 tai sen suola reagoimaan kaavan X-A-X' mukaisen yhdisteen kanssa, jossa X ja X' ovat toisistaan riippumatta hydrok-si, tai lähtevä ryhmä, esimerkiksi halogeeni, asyylioksi, tai alkyyli- tai aryylisulfonyylioksi, yhdisteen valmis-5 tamiseksi, jonka kaava (II) on c\;

10 CAy/~Ol <«> 0=/ '-on °\ A-O-Z-H 15 joka haluttaessa muutetaan kaavan 1' mukaiseksi yhdisteeksi, jossa Y on eri kuin vety, saattamalla reagoimaan kaavan RC02H mukaisen hapon, ja, kun R on eri kuin R', sen 20 jälkeen kaavan R'C02H mukaisen hapon, tai näiden happojen funktionaalisten johdannaisten kanssa, ja mahdollisesti muutetaan saatu kaavan 1' mukainen yhdiste happoadditio-suolakseen, tai 25 b) kaavan I” mukaisen yhdisteen valmistamiseksi saatetaan • yhdiste, jonka kaava III vast. Ill· on « 4 C C«3 ^ : : : \ . 30 CA\/^" *·* * o TT=/ '-011 0H OR ja/tai OR' III III' jossa R ja R' tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan dikarboksyylihapon kanssa, jonka kaava IV on 35 98815 40 O O HO-C-B-C-OH IV jossa B tarkoittaa samaa kuin edellä, 5 tai sen difunktionaalisen happojohdannaisen kanssa, ja mahdollisesti muuutetaan saatu kaavan I" mukainen yhdiste happoadditiosuolakseen.

2. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-10 n a t därav, att man framställer 0,0'-dipropionyl(l,4- xylyIen)bispilokarpat.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-10 t u siitä, että valmistetaan 0,01-dipropionyyli(1,4- ksylyleeni)bispilokarpaatti.

3. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att man framställer 0,0'-dibutyryl(l,4- 15 xylylen)bispilokarpat.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä että valmistetaan 0,0'-dibutyryyli(1,4-ksy- 15 lyleeni)bispilokarpaatti.

4. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att man framställer Ο,Ο'-dicyklopropylkar-bonyl(1,4-xylylen)bispilokarpat. 20

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 0,0'-disyklopropyylikar-bonyyli(1,4-ksylyleeni)bispilokarpaatti. 20

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 0,01-glutaryyli(di- : bentsyyli)bispilokarpaatti.

6. Patenttivaatimukset 1 mukainen menetelmä, tunnet- : t u siitä, että valmistetaan 0,0'-divety(l,6-heksylee- f· "·. ni) bispilokarpaatti. • · • m

30 Patentkrav • · · V * 1. Förfarande för framställning av farmakologiskt använd- bara esterderivat av bispilokarpinsyra med den allmänna formeln 35 41 98815 O ^ Os Ό Λλ Ον *-γ ! I I l i ^ 1 f “

5 O" S-· 0 0 ,0R OR' Y 'Χ*<5 cjHY Y Y ''CjHs oo o o (I" ) (I’) 1 1 10 i vilken formel 1' 0 (t Y är väte, -C-R, i vilken R är Cj-C,0-alkyl, Cj-C^-cykloal-kyl eller fenyl eller fenyllägrealkyl, 15 0 II Y' betecknar väte eller gruppen -C-R' , i vilken R' be-tecknar detsamma som R och R' kan vara samma eller olik R, och A är Cj-C10-alkylen, eller xylylen, eller. i vilken formel I" 20. och R' betecknar detsamma som ovan, och B betecknar C,-C10-alkylen, C2-C10-alkenylen eller feny-len, samt av nämnda föreningars syraadditionssalter, kännetecknat därav, att 25 a) för framställning av en förening med formeln 1' omsät- : .·. tes pilokarpinsyra med formeln » » · • · · • < I T CH, ‘ ' '* XN ; 30 c2hs\ /-4^ • · · / \ '-OH OH 35 42 98815 eller ett salt därav, med en förening med formeln X-A-X', i vilken X och X' är oberoende av varandra hydroxi eller en avgäende grupp, t.ex. halogen, acyloxi, eller alkyl-eller arylsulfonyloxi, för framstälining av en förening 5 med formeln (II) “v 10 <«) 0-'-OK °\ A-O-Z-ll 15 vilken, om sä önskas, överförs tili en förening med formeln I’, i vilken Y är skild frän väte, genom omsättning med en syra med formeln RC02H, och dä R är skild frän R’, därefter med en syra med formeln R'C02H, eller ett funk-tionellt derivat av dessa syror, och eventuellt överförs 20 en erhällen förening med formeln I tili sitt syraaddi-tionssalt, eller b) för framställning av en förening med formeln I" omsät-tes en förening med formeln III resp. III' 25 CH, CH : .·. V \ ::: ‘ν' £α\γλ3 30 0=\ '—0,1 0=\ '—0M *.·!'' 0R och/eller 0R' v‘ m m· i vilken R och R' betecknar detsamma som ovan, med en 35 dikarboxylsyra med formeln IV li 98815 43 O O •I II HO-C-B-C-OH (IV) i vilken B betecknar detsamma son ovan, eller med ett 5 difunktionellt syraderivat därav, och eventuellt överförs en erhällen förening med formeln I" tili sitt syraaddi-tionssalt.

5. Förfararnde enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att man framställer 0,0'-glutaryl(diben- : syl) bispilokarpat. 25

6. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck- . . n a t därav, att man framställer 0,0'-diväte(l,6-hexy- t · 1 Ien) bispilokarpat. i . * · ) · ( · · f · r • · · * ψ 1 * i • · ·