FI91764B - Analogiamenetelmä asyylideoksiribonukleosidijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Analogiamenetelmä asyylideoksiribonukleosidijohdannaisten valmistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI91764B
FI91764B FI893100A FI893100A FI91764B FI 91764 B FI91764 B FI 91764B FI 893100 A FI893100 A FI 893100A FI 893100 A FI893100 A FI 893100A FI 91764 B FI91764 B FI 91764B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
acid
acyl
derivatives
deoxyribonucleosides
carbon atoms
Prior art date
Application number
FI893100A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI893100A (fi
FI893100A0 (fi
FI91764C (fi
Inventor
Borstel Reid Warren Von
Michael Kevin Bamat
Original Assignee
Pro Neuron Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pro Neuron Inc filed Critical Pro Neuron Inc
Publication of FI893100A publication Critical patent/FI893100A/fi
Publication of FI893100A0 publication Critical patent/FI893100A0/fi
Priority to FI941245A priority Critical patent/FI97891C/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI91764B publication Critical patent/FI91764B/fi
Publication of FI91764C publication Critical patent/FI91764C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A61K31/708—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid having oxo groups directly attached to the purine ring system, e.g. guanosine, guanylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

91764
ANALOGIAMENETELMÄ AS Y YLI DEOKSIRIBONUKLEOS IDI JOHDANNAISTEN VALMISTAMISEKSI
Tämä hakemus on continuation-in-part samaan aikaan vireillä olevalle US-hakemukselle sarjanumeroltaan 115.923, jätetty 28.10.1987.
Keksinnön alue Tämä keksintö koskee yleisesti deoksiribonukleosidien asyyli-johdannaisia ja näiden johdannaisten käyttöä eksogeenisten deoksiribonukleosidien toimittamiseen eläinkudokseen. Tarkemmin tämä keksintö koskee 21-deoksiadenosiinin, 2'-deoksigua-nosiinin, 21-deoksisytidiinin ja 2'-deoksitymidiinin asyyli-johdannaisia ja näiden uusien johdannaisten käyttämistä deoksiribonukleosidien toimittamiseen eläinkudokseen ja siten tukemaan solujen aineenvaihduntatoimintoja. Vielä tarkemmin tämä keksintö koskee uusien asyylijohdannaisten käyttöä estämään erilaisia fysiologisia ja patologisia tiloja solukudok-sessa, joita ovat säteilyn, auringonvalon, mutageenien, haavojen ja muiden olosuhteiden aiheuttama vaurio.
Keksinnön tausta
Periaatteessa on olemassa kaksi mahdollista kemiallista tai biokemiallista lähestymistapaa ionoivan säteilyn organismeihin suuntautuvien haitallisten vaikutusten vähentämiseksi: • (1) vähentää ensimmäistä vauriota biologisiin rakenteisiin, ja (2) parantaa tai kiihdyttää elpymistä.
Tunnetaan joukko yhdisteitä, jotka antava jonkin verran suojaa ionoivalta säteilyltä, kun niitä on läsnä kehossa säteilyn aikana. Nämä yhdisteet ovat tyypillisesti antioksidantti-en tai vapaiden radikaalien poistajia, jotka inaktivoivat säteilyn aikana muodostuneita reaktiivisia kemiallisia aineita ennen kuin ne voivat vahingoittaa tärkeitä biologisia rakenteita. Erinomaisia esimerkkejä säteilyltä suojäävistä 2 91764 yhdisteistä ovat kysteamiini, 2-beeta-aminoetyyli-isotiouro-nium-Br-HBr (AET) ja S-2-(3-aminopropyyliamino)etyylifosforo-tiohappo (WR-2721). Koska nämä yhdisteet täytyy viedä organismiin ennen säteilyä tai sen aikana, ne eivät ilmeisestikään ole hyödyllisiä tilanteissa, jolloin tapahtuu odottamaton tai satunnainen altistus. Lisäksi nämä yhdisteet ovat myrkyllisiä ihmisille.
Pääasialliset mahdollisuudet tehokkaaseen kemialliseen terapiaan organismeissa, jotka ovat joutuneet säteilylle alttiiksi, ovat: (1) organismissa olevien yksittäisten solujen korjautumisen ja elpymisen edistäminen, tai (2) eloon jääneiden runkosolujen lisääntymisen kiihdyttäminen tai nopeuttaminen.
Luuydin ja suoliepiteeli ovat kudosten joukossa kaikkein herkimpiä säteilyvauriolle; pyrittäessä edistämään elpymistä säteilystä on keskityttävä runkosoluihin näissä kudoksissa.
On olemassa useita aineita, jotka voivat parantaa säteilytet-tyjen nisäkkäiden eloonjäämistä, annettaessa säteilytyksen . jälkeen. Näitä ovat hiivapohjäinen polysakkaridi Glucan, ja polypeptidisytokiinit kuten Interleukin-1, Granulocyte-Colony Stimulating Factor ja Granulocyte/Macrophage-Colony Stimulating Factor; kaikki näistä aineista parantavat luuytimen runkosolujen lisääntymistä tai jakautumista. Niiden tehokkuus on kuitenkin kohtalainen, ne tuottavat annosvähennysfaktoreiksi alle 1,1, kun niitä annetaan sen jälkeen, kun säteilytys on jo tapahtunut, ja niiden käyttöä vaikeuttavat sivuvaikutukset. Lisäksi ne ovat kaikki makromolekyylejä, joita voidaan antaa vain parenteraalisesti.
Tarvetta esiintyy yhdisteistä, jotka tehokkaasti edistävät toipumista annettaessa ionoivalle säteilylle altistumisen 3 91 764 jälkeen ja joilla on tärkeitä farmaseuttisia ominaisuuksia, kuten myrkyttömyys ja aktiivisuus oraalisen antamisen jälkeen. Nämä aineet olisivat hyödyllisiä silloin, kun altistutaan satunnaisesti ionoivalle säteilylle, ja myös syövän sädehoidon yhteydessä, jolloin edistetään normaalikudoksen toipumista säteilystä. Nämä aineet voivat myös parantaa toipumista tiettyjen kemiallisen vaurion muodoista, esim. luuytimen vähentyminen joko satunnaisesti tai terapeuttisesti altistuttaessa yhdisteille, kuten syklofosfamidi tai busulfaa-ni, joita molempia käytetään syövän kemoterapiassa.
On osoitettu, että eksogeenisen deoksiribonukleiinihapon (DNA) antaminen koe-eläimilie ionoivalle säteilylle altistumisen jälkeen voi johtaa parantuneeseen eloonjäämiseen ja toiminnan toipumiseen. Kanazir et ai.. Bull. Inst. Nuc. Sei. "Boris Kidrich" 9:145-153 (1959); Wilczok, T., et ai., Int.
J. Rad. Biol. 9:201-211 (1965); Golba, S-, et ai., Int. Rad. Biol. 13:261-268 (1967); US-patentti nro 3 803 116.
Tutkimukset soluviljelmissä in vitro antavat olettaa, että varsinaisia parantavia aineita ovat deoksiribonukleosidit, DNA:n entsymaattisen hajoamisen tulokset. Petrovic, D., et ai., Int. J. Rad. Biol. 18:243-258 (1970). Depolymeroitu DNA tai deoksiribonukleosidit olivat kuitenkin eläimille annettu- • na tehottomia estämään eloonjäämistä tai toipumista säteilyn jälkeen. Kanazir et ai., Bull. Inst. Nuc. Sei. "Boris Kid-rich" 9:145-153 (1959). On syytä uskoa, että tämä ilmeinen ristiriita johtuu deoksiribonukleosidien nopeasta katabolias-ta in vivo plasmassa ja eri elimissä olevien entsyymien vaikutuksesta. Niinpä kun deoksiribonukleosideja on annettu jyrsijöille, kudokset altistuvat tehokkaille annoksille alle viidessä minuutissa. Beltz et ai., Bioch. Biophys. Acta. 297:258-267 (1973). Soluviljelmissä havaittiin optimaalinen eloonjääminen säteilytyksen jälkeen, kun deoksiribonukleosi-deja oli viljelmän kasvatusalustassa läsnä ainakin kolme tuntia. Kun DNA:ta annetaan oarenteraalisesti, se luultavasti • · asteittain depolymeroituu, jolloin vapaatdeoksiribonukleosi-dit saadaan paremmin vapautumaan verenkiertoon.
4 91764
Nisäkkään kudoksessa saattaa olla muita fysiologisia tai patologisia tiloja, jolloin eksogeenisten deoksiribonukleosi-dien toimittamisella voi olla terapeuttista käyttöä. Newman et ai., Am. J. Physiol. 164:251-253 (1951) esittävät tutkimuksen, jossa rotille on suoritettu osittainen maksanpoisto. Maksan regeneroitumista seurattiin 11 päivää. DNA:11a hoidettujen rottien maksat regeneroituivat merkittävästi nopeammin kuin hoitamattomien eläinten maksat. On todennäköistä, että deoksiribonukleosidit olivat varsinaiset vaikuttavat aineet tässä tutkimuksessa, koska DNA on suuri molekyyli, jota nisä-kässolut eivät tehokkaasti ota vastaan. Ihon haavoihin levitetyn DNA:n on samoin todettu kiihdyttävän joitakin tekijöitä paranemisprosessissa, esim. jyväiskudoksen muodostumista. Dumont, Ann. Surg. 150:799-807 (1959); Marshak et ai., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 58:62-63 (1945); Nicolau et ai., Der Hautartzt 17:512-515 (1966). Yane and Kitano, US-patentti 4 656 896, esittävät parenteraalisesti annetun DNA:n hyödyllisten vaikutusten ilmenemisen hoidettaessa mahahaavoja rotissa.
On todennäköistä, että näissä esimerkeissä DNA:n vaikutus johtui sen asteittaisesta hajoamisesta, joka johti deoksi-ribonukleosidien vapautumiseen pitempänä ajanjaksona. DNA ei kuitenkaan ole sopiva farmaseuttinen aine annettavaksi ihmisille, ei oraalisesti eikä parenteraalisesti. Oraalisesti annettaessa DNA:sta vapautuneet nukleosidit pääasiallisesti hajoaisivat entsyymien vaikutuksesta suoliontelossa, suolen seinämissä, plasmassa ja maksassa, ennemmin kuin olisivat kudosten saatavissa. Ongelmia parenteraalisesti annetun DNA:n tapauksessa ovat mahdollinen antigeenisyys (tilan pahentuminen kiinnittyvien proteiinien vaikutuksesta, joita on vaikea poistaa uuton aikana), epäyhtenäisyys annosten välillä, ja mahdolliset ei-toivotut vaikutukset, jotka eivät johdu nuk-leosidien vapautumisesta, esim. lymfosyyteistä vapautuvan interferonin lisääntyminen, joka on kaksisäikeisen nukleiinihapon tunnettu vaikutus.
Deoksiribonukleosidien antamisen on tähän mennessä päätelty kumoavan deoksiribonukleotidien ilmeisiä puutteita 5 91764 (esim. tymidiinin antaminen metotreksaatin, antineoplastisen, tymidiinin nukleotidin biosynteesiä inhiboivan aineen, aiheuttaman myrkyllisyyden kumoamiseksi; deoksisytidiinin antaminen arabinosyylisytosiinin myrkyllisyyden kumoamiseksi, tai ihmisissä, joilla on puutteita tietyistä entsyymeistä (esim. puriininukleosidifosforylaasi), jotka johtavat lopulta huonontuneeseen deoksiribonukleotidisynteesiin). Tymidiinin antamista on myös pidetty antineoplastisena hoitona, koska suurilla konsentraatioilla tymidiinillä on sytostaattisia tai sytotoksisia ominaisuuksia.
Tässä esitetty keksintö liittyy kuitenkin sen asian käsittämiseen, että odottamattomia hyödyllisiä vaikutuksia voi esiintyä, kun annetaan deoksiribonukleosidiseosten supra-fysiologisia määriä sillä tavalla, että ne ovat kudosten saatavilla pitkitetyn ajan; tämä päämäärä voidaan parhaiten saavuttaa käyttämällä keksinnön mukaisia deoksiribonukleosidi-johdannaisia.
Keksinnön päämäärät
Samalla kun DNArn ja/tai deoksiribonukleosidien toimittamisen strategia fysiologisesti tai patologisesti vahingoittuneeseen kudokseen on käsitetty, on alalla tähän mennessä epäonnistuttu tarjoamaan tyydyttäviä menetelmiä toimittaa deoksiribonuk-leosideja riittävän korkeita ja luotettavia määriä in vivo, jotta saadaan menestyksellisesti hoidettua patologisia ja fysiologisia tiloja ja edistämään eläinsolujen paranemista ja eloonjäämistä. Lisäksi vaikka on kehitetty erilaisia yhdisteitä, jotka suojaavat eläimiä joiltakin ionoivan säteilyn tai kemiallisten mutageenien vaikutuksilta, on kudoksiin riittävän pitkänä aikana annetuilla deoksiribonukleosidei11a suurin kliininen teho tällaisen vaurion altistuksen jälkeisessä hoidossa. Tämän strategian kliininen toteuttaminen kuitenkin odottaa tyydyttävien ja mukavien menetelmien kehittä-... mistä deoksiribonukleosidien sopivien määrien toimittamiseksi kudoksiin in vivo. Deoksiribonukleosidien kapasiteetin täydellinen hyväksyminen ja kliininen toteuttaminen edistämään 6 91764 haavojen paranemista tai kudoksen korjautumista odottaa samoin tyydyttävien menetelmien kehittämistä niiden toimittamiseksi kudoksiin in vivo.
Niinpä tämän keksinnön ensisijainen tarkoitus on identifioida farmaseuttisesti hyväksyttäviä yhdisteitä, joita voidaan käyttää toimittamaan farmakologisesti tehokkaita määriä deoksiribonukleosideja tai niiden vastaavia johdannaisia eläinkudokseen.
Tämän keksinnön tarkoituksena on lisäksi tarjota käyttöön deoksiribonukleosidijohdannaisten ryhmä, joita voidaan tehokkaasti antaa oraalisesti tai parenteraalisesti, joilla on minimaalinen myrkyllisyys, ja joita voidaan antaa eläimille ja ihmisille tehokkaasti edistämään solujen korjautumista lukuisissa fysiologisissa ja patologisissa tiloissa, ja edistämään eläimen eloonjäämistä annettaessa sen jälkeen kun altistus säteilylle on tapahtunut.
Tämän keksinnön vielä eräs ja asiaankuuluva tarkoitus on tarjota käyttöön 2'-deoksiadenosiinin, 21-deoksiguanosiinin, 2'-deoksisytidiinin ja 2'-deoksitymidiinin tietyt johdannaiset, jotka eläimille annettuna toimittavat kyseiset deoksi-ribonukleosidit eläinkudokseen.
Tämän keksinnön asiaankuuluva tarkoitus on olennaisesti parantaa 2'-deoksiadenosiinin, 21-deoksiguanosiinin, 2'-deoksisytidiinin ja 21-deoksitymidiinin biologista saatavuutta lisäämällä näiden deoksiribonukleosidien kulkeutumista maha-suolistoalueen ja muiden biologisten membraanien poikki.
Tämän keksinnön vielä eräs ja spesifisempi tarkoitus on tarjota käyttöön deoksiribonukleosidijohdannaisten ryhmä erilaisten maksan, luiden, ihon, veriopillisten ja muiden patologisten ja fysiologisten tilojen hoitoon.
Tämän keksinnön vielä eräs tarkoitus on tarjota käyttöön deoksiribonukleosidijohdannaisia ja menetelmiä käyttää näitä 7 91764 johdannaisia, jotka ovat turvallisia, halpoja, ja jotka kiihdyttävät normaaleja solun regeneroitumis- ja paranemisproses-se ja .
Keksinnölle on tunnusomaista se, mitä on esitetty patenttivaatimuksissa.
Nämä ja keksinnön muut päämäärät saavutetaan antamalla 2'-deoksiadenosiinin, 21-deoksiguanosiinin, 2'-deoksisytidiinin ja 21-deoksitymidiinin tiettyjä asyylijohdannaisia. Näitä asyylijohdannaisia voidaan käyttää ehkäisemään tai hoitamaan säteilyn, auringonvalon ja mutageenien aiheuttamia soluvaurioita, lisäämään haavojen paranemista, tai korjaamaan vaurioituneita kudoksia, ja hoidettaessa muita fysiologisia ja patologisia kudosten tiloja.
Vaikka tekniikan tasossa esitetään joitakin asyloituja deok-siribonukleosidien johdannaisia, niiden substituentit (esim. pivaloaatti, isobutyraatti, bentsoaatti tai adamantoaatti) valittiin niiden ominaisuuksien takia, joiden vuoksi niitä voidaan hyödyntää suojaryhminä kemiallisessa synteesissä (esim. oligonukleotidien synteesissä), eivätkä ne ole yleensä sopivia eläimille annettaviksi. Tässä esitetyt uudet yhdisteet ovat edullisia, koska niiden substituentit ovat myrkyttömiä. Niillä on minimaalinen haittavaikutus organismiin, .· johon niitä annetaan ja ne voidaan valita siten, että saadaan halutut farmaseuttiset ja farmakologiset ominaisuudet ilman yletöntä tutkimista.
Joidenkin antineoplastisten ja virusvastaisten nukleosidi-analogien asyloituja johdannaisia on käytetty näiden sytotok-. sisten aineiden esilääkkeinä. Hyvin erilaisia biokemiallisia ja fysiologisia kysymyksiä liittyy kuitenkin myrkyllisten nukleosidianalogien terapeuttisen indeksin parantamiseen verrattaessa myrkyttömien deoksiribonukleosidien toimittamiseen sopivina määrinä ja yhdistelminä parantamaan kudosten parantumista tai regeneroitumista, kuten tässä keksinnössä.
8 91764
Keksinnön pääasiallinen näkökohta on sen käsittäminen, että de-oksiribonukleosidien asyylijohdannaisilla, erityisesti kun kahden tai useamman deoksiribonukleosidin johdannaiset on yhdistetty, on odottamattomia terapeuttisia ominaisuuksia. Tämä ilmenee tiedoista, jotka koskevat säteilytettyjen hiirten eloonjäämistä. Keksintö käsittää myös johdannaisten uudet luokat, jotka ovat erityisen haluttuja sekä tehokkuuden että turvallisuuden suhteen.
Laajasti esitettynä ovat 2'-deoksiadenosiinin asyylijohdannaiset seuraavan kaavan (I) mukaisia.
NHR
I II CH
HC C / (I) N--r
)R H
jossa R on vety tai muun aineenvaihduntatuotteen kuin asetyylin asyyliradikaali, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai sen farmaseuttisesti sopiva suola.
2'-Deoksiadenosiinin edullisia asyylijohdannaisia ovat ne, joilla on kaava (I) nh2 N C ^
I II CH
HC /
RjOCHj o (1) H_y
ORj H
jossa Ri ja R2 on H tai asyyliryhmä, joka johtuu karboksyyliha-posta, joka on valittu yhdestä tai useammasta seuraavan ryhmän aineesta: pyruviinihappo, maitohappo, enolipyruviinihappo, aminohappo, rasvahappo, joka on muu kuin etikkahappo, lipoiinihap-po, nikotiinihappo, pantoteenihappo, meripihkahappo, fumaari-happo, p-aminobentsoehappo, beetahydroks ivoihappo, li 91764 9 orotiinihappo ja karnitiini, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai sen farmaseuttisesti sopiva suola. Keksinnön piiriin ei kuitenkaan kuulu kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa R2 on johdettu leusiinista.
Laajasti esitettynä ovat 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisia ne kaavan (II) mukaiset yhdisteet, o
II
HN C
I II CH
RHN-c C / — ^ίΓ ROCHj 0 (II)
)R H
joissa R on vety tai muun aineenvaihduntatuotteen' kuin asetyy-lin asyyliradikaali, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai sen farmaseuttisesti sopiva suola.
Edullisia 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisia ovat kaavan (II) mukaiset yhdisteet, o
II
HN C v
I II CH
h2n-c c / r1och^ o (II) y-
OR, H
joissa Rx ja R2 ovat H tai asyyliryhmä, joka on johdettu karbok-syylihaposta, joka valitaan yhdestä tai useammasta seuraavan ryhmän aineesta: pyruviinihappo, maitohappo, enolipyruviinihap-po, aminohappo, muu rasvahappo kuin etikkahappo, lipoiinihappo, nikotiinihappo, pantoteenihappo, meripihkahappo, fumaarihappo, p-aminobentsoehappo, beetahydroksivoihappo, orotiinihappo ja karnitiini, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai sen farmaseuttisesti sopiva suola. Keksinnön piiriin ei kuitenkaan kuulu kaavan (II) mukaiset yhdisteet, joissa Rx ja R2 ovat molemmat johdettuja butyryylistä.
10 91 764
Laajasti esitettynä ovat 21-deoksisytidiinin asyylijohdannaisia ne kaavan (lii) mukaiset yhdisteet
NHR
N^C ''CH
i n
0=C CH
VH ιγ h\ 1 l/ h { Γ dii)
OR H
joissa R on vety tai muun aineenvaihduntatuotteen kuin ase-tyylin asyyliradikaali, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
Edullisia 2 *-deoksisytidiinin asyylijohdannaisia ovat ne kaavan (III) yhdisteet,
NHR
N^C ^CH
I n
0=C CH
ROCHj \ H H/
H
OR H (HI) joissa R on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu karboksyyli-haposta, joka on valittu yhdestä tai useammasta seuraavan ryhmän aineesta: pyruviinihappo, maitohappo, enolipyruviini-happo, aminohappo, muu rasvahappo kuin etikkahappo, lipoiini-happo, nikotiinihappo, pantoteenihappo, meripihkahappo, fu-maarihappo, p-aminobentsoehappo, beetahydroksibutyyrihappo, orotiinihappo ja karnitiini, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
Laajasti esitettynä ovat 2‘-deoksitymidiinin asyylijohdannaiset niitä kaavan (IV) yhdisteitä, “ 91764 o n hn^C"c-ch, 1 "
0=C CH
\n/ roch2 / o \_____ “V—f “ ,ivi
OR H
joissa R on vety tai muun aineenvaihduntatuotteen kuin rasvahapon, jossa on vähemmän kuin viisi hiiliatomia, asyyliradi-kaali, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
2'-deoksitymidiinin edullisia asyylijohdannaisia ovat ne kaavan (IV) yhdisteet, o HN C-CHj
I II
0=C CH
\h h) OR H (IV) joissa R on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu karboksyyli-haposta, joka on valittu yhdestä tai useammasta seuraavan ryhmän mukaisesta aineesta: pyruviinihappo, maitohappo, eno-lipyruviinihappo, aminohappo, rasvahappo, joka sisältää 5 hiiliatomia tai enemmän, lipoiinihappo, nikotiinihappo, pan-toteenihappo, meripihkahappo, fumaarihappo, p-aminobentsoe-happo, beetahydroksivoihappo, orotiinihaopo ja karnitiini, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi R-substituentti ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
l2 91764 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaisia voivat olla myös ne kaavan (V) yhdisteet, o R"N^ VC-CHi i n
0=C CH
R"OCHj a frJ ,V1 • joissa R” on vety tai aineenvaihduntatuotteen asyyliradikaa- li, sillä edellytyksellä, että R" typessä ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
Edullisia 21-deoksitymidiinin asyylijohdannaisia ovat ne kaavan (V) yhdisteet, o R"N^ ^C-CHj I >1 0=C CH R'
\H V
iiV^^y h or" h (V) joissa R" on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu karboksyyli-haposta, joka on valittu yhdestä tai useammasta seuraavan ryhmän aineesta: pyruviinihappo, maitohappo, enolipyruviini-happo, aminohappo, rasvahappo, lipoiinihappo, nikotiiriihappo, pantoteenihappo, meripihkahappo, fumaarihappo, p-aminobent-soehappo, beetahydroksivoihappo, orotiinihappo ja karnitiini, sillä edellytyksellä, että R" typessä ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
Il 13 91 764
Keksintö koskee myös kaavojen I-IV yhdisteitä, joissa riboo-siosa on monoasyloitu 3'- tai 5'-asemassa rasvahappojohdannaisella ja käsittää yhdisteiden I-IV 3',5'-diasyloidut johdannaiset, joissa ainakin yksi tällainen substituentti on johdettu rasvahaposta, jossa on 5 hiiliatomia tai enemmän.
21-deoksiadenosiinin, 21-deoksiguanosiinin, 2'-deoksisytidii-nin ja 21-deoksitymidiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaavat I, II, III ja V, ovat mielellään substituoituja 3-22 hiiliatomia sisältävän karboksyylihapon asyylijohdannaisella .
Silloin kun minkä tahansa kaavan I-V mukaisten yhdisteiden • asyylijohdannaiset ovat substituoituja aminohaposta johtuval la asyyliryhmällä, on aminohappo mielellään valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, isoleusiinista, fenyylialaniinista, tyrosiinis-ta, proliinista, hydroksiproliinista, seriinistä, treoniinis-ta, kysteiinistä, kystiinistä, metioniinista, tryptofäänistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysii-nistä, histidiinistä, ornitiinista ja hydroksilysiinistä.
Keksinnön edullisissa toteutusmuodoissa käytetään seosta ainakin kahdesta 2'-deoksiadenosiinin, 21-deoksiguanosiinin, 2'-deoksisytidiinin ja 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaisesta. Mainitut koostumukset sisältävät vaikuttavan määrän kumpaakin ainakin kahdesta yhdisteestä, jotka on valittu ainakin kahdesta yhdisteryhmästä, joilla on kaavat 9 nhk4 hk^C-c-\\
I I II CH
<ic\ RjHN-C. C /
I II CH
H%n/C\n/ R.OCH^/O^^ ROCH^ 0 v_jj/« or2 h (I) <«) 14 91 764 NHRj ? 'c R3N^C"c-ch3 CH ' h o-'c Ja ''V' X.M/
RjOCHj o R>°ch3 l/ \ \r yi —t h Ί T 0Rt "
OR, H
(III) (^) joissa R^, R2 ja R3 ovat samoja tai erilaisia ja kukin on H tai asyyliryhmä, joka onjohdettu karboksyylihaposta, sillä • edellytyksellä, että ainakin yksi mainituista substituenteis- ta R^, R2-ja R3 kussakin mainitussa yhdisteryhmässä ei ole vety, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suolat. Edullisessa toteutusmuodossa R]_, R2 ja R3 ovat samoja tai erilaisia ja kukin on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu karboksyylihaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat aminohappo, haarautumaton rasvahappo,joka sisältää 2-22 hiiliatomia, dikarboksyylihappo, joka sisältää 3-22 hiilatomia ja mahdollisesti substituoitu bentsoyyli- tai heterosyklinen aromaattinen karboksyylihappo, joka on olennaisesti myrkytön. Edullisia valinnaisesti substituoituja bentsoyyli- tai heterosyk-lisiä karboksyylihappoja ovat nikotiinihappo ja p-aminobent-soehappo.
Toisessa keksinnön edullisessa toteutusmuodossa käytetään koostumusta, joka käsittää seoksen vaikuttavasta määrästä ainakin kolmea yhdistettä, jotka on valittu ainakin kolmesta yhdisteryhmästä, joilla on kaavat I-IV, kuten edellä on esitetty. Vielä eräässä muussa edullisessa toteutusmuodossa käytetään koostumusta, joka käsittää seoksen vaikuttavasta määrästä ainakin neljää yhdistettä valittuna ainakin neljästä yhdisteryhmästä, joilla on kaavat I-IV, kuten edellä on esitetty.
Oleellisia lisäetuja voidaan saada, erityisesti silloin, kun keksinnön koostumuksia käytetään parantamaan säteilyn vaikutuksia, jos säteilyltä suojaava yhdiste on yhdessä yhden tai li 15 91 764 useamman asyylideoksiribonukleosidin kanssa. Säteilyltä suo-jaavia yhdisteitä voidaan valita ryhmästä, johon kuuluvat WR-2721, NAC, DDC, kysteamiini, 2-merkaptoetanoli, merkapto-etyyliamiiniditiotreitoli, glutationi, 2-merkaptoetaanisul-fonihappo, WR-1065, nikotiiniamidi, 5-hydroksitryptamiini, 2-beeta-aminoetyyli-isotiouronium-Br-HBr, glukaanit, GLP/B04, GLP/B05, OK-432, Biostim, PSK, Lentinan, Schizophyllan, Rhodexman, Levan, Mannozym, MVE-2, MNR, MMZ, IL-1, TNF, kateenkorvafaktori TF-5, glutationiperoksidaasi, superoksidi-dismutaasi, katalaasi, glutationireduktaasi, glutationitrans-·· ferääsi, seleeni, CdCl2» MnCl2, Zn-asetaatti, A-vitamiini, beetakaroteeni, prostaglandiinit, tokoferoli, metyleenisini-nen ja PABA.
Keksintö koskee myös farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät yhden tai useamman uuden deoksiribonukleosidin yhdessä farmaseuttisesti sopivan kantajan kanssa. Lisäksi tunnettuja 21-deoksiadenosiinin, 2'-deoksiguanosiinin, 2'-deoksisytidiinin ja 2'-deoksitymidiinin asetyylijohdannaisia sekä tymidiinin rasvahappojohdannaisia, joissa asyyliryhmä sisältää 3 tai 4 hiiliatomia, voidaan käyttää keksinnön farmaseuttisissa koostumuksissa yksinään, yhdessä toistensa kanssa tai yhdessä yhden tai useamman uuden koostumuksen kanssa. Koostumus voi edelleen sisältää kuvatun kaltaisen * säteilyltä suojaavan yhdisteen. Koostumukset voivat olla nesteen, suspension, tabletin, rakeiden, injektoitavan liuoksen, paikallisesti käytettävän liuoksen tai peräpuikkojen muodossa.
Ihovoide voidaan edullisesti valmistaa yhdistämällä vaikuttava määrä yhtä tai useampaa keksinnön asyylideoksiribonukleo-sidia yhdessä sopivan kantajan kanssa. Tälläinen ihovoide sisältää edullisesti 0,1-5 painoprosenttia deoksiribonukleosi-deja ja haluttaessa säteilyltä suojaavan yhdisteen.
Keksinnön farmaseuttiset koostumukset voivat käsittää myös biologisesti erodoituvat mikrokapselit, jolloin mikrokapselit on edullisesti valittu ryhmästä, johon kuuluvat polylaktaatti 16 91 764 tai laktaatti-glykolaatti-kopolymeerit.
Uskotaan, että eksogeenisten deoksiribonukleosidien toimittaminen eläinkudokseen voidaan tehokkaasti saada aikaan antamalla eläimelle vaikuttava määrä kaavojen I-V mukaista de-oksiribonukleosidin asyylijohdannaista. Lisäämällä eksogeenisten deoksiribonukleosidien toimitusta ja siten lisäämällä niiden biologista saatavuutta, saattaa olla mahdollista hoitaa eläinkudoksen fysiologisia tai patologisia tiloja tukemalla olennaisesti niiden aineenvaihduntatoimintoja. Olematta sidottuna teoriaan voi keksintö toimia myös lisäämällä nuk-leosidianaboliittien, esim. nukleotidien tai nukleotideistä johtuvien kofaktorien biologista saatavuutta. Nukleosidien antaminen sinänsä nostaa niiden biologista saatavuutta, mutta johtuen nopeasta solujen ulkopuolisesta aineenvaihdunnasta, tämä ei ehkä johda solujen nukleotiditasojen pitempiaikaiseen koholla pysymiseen. Alemmilla nukleosiditasoilla solut ottavat ja käyttävät ne nopeasti hyväkseen, kun taas korkeammilla tasoilla tapahtuu kyllästyminen ja ylimäärä hajoaa. Keksinnön uskotaan toimivan tarjottaessa nukleosideja jatkuvasti pienempinä määrinä.
Spesifiset olosuhteet, jolloin etuja voidaan saavuttaa keksinnön yhdisteitä, koostumuksia ja menetelmiä käyttämällä, ’ ovat tilanteet, jolloin on hyödyllistä parantaa DNA:n kuntoa tai parantaa runkosolujen jakautumista ja lisäkasvua. Tällaisia olosuhteita ovat erityisesti: (l) ionoivasta tai ultra violettisäteilystä johtuvan vaurion hoitaminen tai ehkäisy; (2) punasolujen muodostumisen parantaminen silloin kun luuytimen toiminta on alentunut ionoivan säteilyn, kemiallisen vaurion (esim. syövän- tai virustenvastaisten hoitojen sivuvaikutukset), tai sairauden johdosta; ja (3) erilaisten vaurioituneiden kudosten uudistumisen ja korjautumisen kiihdyttäminen, esim. haavojen ja palovammojen parantumisessa, tai vaurioituneen maksakudoksen uudistumisen edistämisessä. Hoidettaessa kaikkia näitä tiloja keksinnönmukaista yhdistettä, lisäkantajien, säteilyltä suojaavien yhdisteiden ja muiden apuaineiden kanssa tai ilman niitä, annetaan eläimelle, » 91764 erityisesti ihmiselle.
Asyloitujen johdannaisten antaminen tarjoaa tiettyjä etuja verrattuna ei-johdettuihin yhdisteisiin. Asyylisubstituentit voidaan valita nostamaan nukleosidin lipofiilisyyttä, jolloin parannetaan sen kulkeutumista maha-suolialueesta verenkiertoon. Asyloidut johdannaiset ovat tehokkaita oraalisesti annettaessa ja voidaan käyttää paikallisesti joissakin tilanteissa. Asyloidut johdannaiset ovat resistenttejä nukleosidi-deaminaasien ja nukleosidifosforylaasien katabolismille suolistossa, maksassa, muissa elimissä ja verenkierrossa. Niinpä keksinnön asyloitujen johdannaisten antaminen, joko oraalisesti, parenteraalisesti tai paikallisesti, mahdollistaa toivottujen yhdistelmien ja deoksiribonukleosidien jatkuvan toimittamisen eläimen kudoksiin, koska asyylisubstituentit siirtyvät asteittain entsyymien (esteraasit ja peptidaasit) vaikutuksesta plasmaan ja kudoksiin luovuttaen vapaita deoksi-ribonukleosideja kaiken aikaa.
Piirrosten kuvaus
Kuva 1 on graafinen esitys, joka kuvaa deoksiribonukleosidien hajoamisnopeutta plasmassa. Seuraavia lyhennyksiä on käytetty: 9 dT = 2'-deoksitymidiini dC = 2'-deoksisytidiini dG = 2'-deoksiguanosiini dA = 21-deoksiadenosiini
Kuva 2 on graafinen esitys, joka kuvaa deoksiadenosiinin nopeata aineenvaihduntaa ja adenosiinijohdannaisten asteittaista deasyloitumista (deoksiadenosiinin saamiseksi) plasmassa.
Kuva 3 on graafinen esitys, joka kuvaa deoksiadenosiinijohdannaisten nopeaa aineenvaihduntaa (deoksiadenosiinin saamiseksi) maksauutteessa.
18 91 764
Kuva 4 on graafinen esitys, joka kuvaa plasman tymidiinikon-sentraatioita tymidiinin tai di-O-asetyylitymidiinin antamisen jälkeen rotille.
Edullisten toteutusmuotojen kuvaus "Aineenvaihduntatuote" on kemiallinen yhdiste, joka on muodostunut aineenvaihduntareaktion vaikutuksesta tai osallistuu sellaiseen. Tämän hakemuksen yhteydessä aineenvaihduntatuotteita eivät ole vain karboksyylihapot, joiden tiedetään syntetisoituvan ihmisen kehossa, vaan myös luonnossa esiintyvät (mutta ehkä syntetisoidut pikemmin kuin uutetut) karboksyylihapot, jotka saattaisivat olla johdettuja muista eläin- tai kasvilähteistä. Rajoittavia kriteereitä ovat, että yhdisteen tulisi olla olennaisesti myrkytön ja biologisesti yhteensopiva, ja sen tulisi helposti päästä aineenvaihduntateihin in vivo, niin ettei ehdotetuilla annoksilla pitkäaikaisenkaan kulutuksen aikana esiinny olennaisesti yhtään myrkyllisyyttä. On edullista, että yhdisteet muuttuvat aineenvaihdunnassa pikemmin kuin että erittyvät sellaisenaan (tai konjugoituvat myrkynpoistoreaktioissa), koska karboksyylihappojen pitoisuus munuaisissa voi johtaa ei-toivottuun liialliseen happamuuteen. Siksi sellaiset karboksyylihapot, jotka normaalisti tai helposti osallistuvat välittävään, kataboliseen tai anaboli-. seen aineenvaihduntaan, ovat edullisia substituentteja.
Termi "farmaseuttisesti sopivat suolat" tarkoittaa suoloja deosiribonukleosidijohdannaisten farmaseuttisesti sopivien happoadditiosuolojamuodostavien happojen kanssa, joita ovat, mutta ei näihin rajoittuen, rikki-, vetykloridi- tai fosfori- hapot .
Termi "annetaan yhdessä" merkitsee, että ainakin kahta keksinnön asyloitua johdannaista annetaan sinä aikana, jolloin farmakologisen aktiivisuuden vastaavat ajat ovat limittäin.
"Asyylijohdannaiset" tarkoittaa 2'-deoksiribonukleosidin johdannaisia, joissa karboksyy1ihaposta johtuva olennaisesti 19 91 764 myrkytön orgaaninen asyylisubstituentti on liittynyt yhteen tai useampaan deoksiribonukleosidin riboosiosan vapaaseen hydroksyyliryhmään esterisidoksella ja/tai jossa tällainen substituentti on liittynyt primääriseen tai sekundääriseen amiiniin deoksisytidiinin tai deoksitymidiinin pyrimidiini-renkaassa, tai deoksiadenosiinin tai deoksiguanosiinin purii-nirenkaassa, amidisidoksella. Tällaiset asyylisubstituentit johtuvat karboksyylihapoista, joita ovat, mutta ei niihin rajoittuen, yhdisteet ryhmästä, johon kuuluvat maitohappo, aminohappo, rasvahappo, nikotiinihappo, dikarboksyylihapot, jD-aminobentsoehappo ja orotiinihappo. Edullisia asyylisubs-tituentteja ovat yhdisteet, joita normaalisti on läsnä kehossa, joko ruokavaliosta saatuina aineina tai väliaineenvaih-duntatuotteina, jotka ovat olennaisesti myrkyttömiä, kun ne lohkaistaan deoksiribonukleosidista in vivo.
"Aminohapot" käsittävät, mutta ei näihin rajoittuen, glysii-nin, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, isoleu-siinista, fenyylialaniinista, tyrosiinista, proliinista, hyd-roksiproliinista, seriinistä, treoniinista, kysteiinistä, kystiinistä, metioniinista, tryptofäänistä, asparagiinihapos-ta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinis-tä, ornitiinista, hydroksilysiinistä, karnitiinista ja muista luonnossa esiintyvistä aminohapoista.
"Rasvahapot" ovat alifaattisia karboksyylihappoja, joissa on 2-22 hiiliatomia. Tällaiset rasvahapot voivat olla tyydyttyneitä, osittain tyydyttyneitä tai monityydyttymättömiä.
"Dikarboksyylihapot" ovat rasvahappoja, joissa on toinen kar-boksyylihapposubstituentti.
Edullisia 2'-deoksiribonukleosidien asyylijohdannaisia kuljetuksen lisäämiseksi biologisten membraanien poikki ovat ne, jotka ovat lipofii1isempiä kuin emonukleosidit. Yleensä lipo-fiilisillä asyylinukleosidijohdannaisilla on asyylisubsti-’* tuentteja, jotka ovat polaarittomia (paitsi karboksylaatti- ryhmä). Lipofiilisiä asyylisubstituentteja ovat erityisesti 20 9 1 7 6 4 ryhmät, jotka johtuvat 2-22 hiiliatomia sisältävistä rasvahapoista. Alan ammattimies voi standarditekniikkaa käyttäen määrittää, onko tietty asyylisubstituoitu nukleosidijohdannainen lipofiilisempi kuin ei-johdannaisnukleosidi, s.o. vertaamalla vesi-oktanoliseoksissa määritettyjä jakautumisker-toimia.
Kun asyloitu nukleosidijohdannainen on kulkeutunut maha-suoli-alueelta verenkiertoon, tai muiden biologisten membraa-nien poikki, asyylisubstituentit lohkaistaan plasma- ja kudosesteraasien (tai amidaasien) avulla, jolloin syntyy vapaita nukleosideja. Edullisia keksinnön asyyliryhmiä ovat luonnossa esiintyvät aineenvaihdunnan tuotteet, tai ovat yhdisteet, jotka helposti pääsevät välillisen aineenvaihdunnan tiehyeisiin. Niinpä ne ovat vain vähän myrkyllisiä vapau-tuessaan in vivo endogeenisten esteraasien tai amidaasien vaikutuksesta.
On myös mahdollista valmistaa asyylinukleosidijohdannaisia, jotka sisältävät sekä polaarisia että polaarittomia asyyli-substituentteja. Polaarinen asyyliryhmä hidastaa nukleosidi-johdannaisen kulkua maha-suoli-alueelta, mahdollistaen näin yhdisteen pitempikestoisen toimituksen verenkiertoon yksittäisen annoksen jälkeen. Polaarinen ryhmä voidaan lohkaista • estereaasien, amidaasien tai peptidaasien vaikutuksella, joi ta on läsnä suolialueella, jolloin saadaan nukleosidi, jolla on polaariton asyylisubstituentti, joka voi sitten tehokkaasti siirtyä verenkiertoon. Polaariset asyylisubstituentit voi alan ammattimies valita ilman kohtuutonta kokeilua sellaiseksi, joka lohkeaa nopeammin kuin polaarittomat asyylisubstituentit. Edullisia tällaisia substituentteja ovat emäksiset aminohapot (lysiini tai arginiini), happamat aminohapot (glutamaatti tai aspartaatti), tai dikarboksyylihapot.
Parenteraaliseen injektioon voidaan edullisesti käyttää myös . asyylijohdannaisia, joissa on polaarisia substituentteja, ja > · · jotka sen vuoksi ovat vesiliukoisia ja silti resistenttejä ennenaikaiselle hajoamiselle tai eliminaatiolle.
21 91764
Keksinnön edullisia yhdisteitä Edullisia keksinnön yhdisteitä ovat (1) 2'-deoksiadenosiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaava NHR,
Ac-"\\
I II CH
HC /
RiOCHj o
H
ORj jossa Rj^, R2 ja R3 voivat olla samoja tai erilaisia ja kukin on vety tai asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia , (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso- , leusiinista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinistä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että (i) kaikki ryhmistä R^, R2 ja R3 eivät ole H, ja (ii) silloin kun R3 ei ole H, voivat Rl ja/tai R2 myös olla ' ; asetyyli, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola; 22 91 764 (2) 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaava o ii
HN C I II CH
R^N-C C / r1och2 o \f_3/'
OR, H
jossa , R2 ja R3 voivat olla samoja tai erilaisia ja kukin on vety tai asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia , (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso-leusiinista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinistä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että (i) kaikki ryhmistä R3, R2 ja R3 eivät ole H, ja (ii) silloin kun R3 ei ole H, voivat Ri ja/tai R2 myös olla asetyyli, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola; (3) 2‘-deoksisytidiinin asyylijohdannaisia, joilLa on kaava NHR, i 3
N^^CH
I II
0=C CH
\h h/
H H
OR, H
li 23 9 1 7 6 4 jossa Ri, R2 ja R3 voivat olla samoja tai erilaisia ja kukin on vety tai asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso-leusiinista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinistä, treoniinistä, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että (i) kaikki ryhmistä Rj_, R2 ja R3 eivät ole H, ja (ii) silloin kun R3 ei ole H, voivat Rj ja/tai R2 myös olla asetyyli, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola; (4) 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaava o a
/C
RjN C-CH3
I II
0=C CH
R1°CHj
OR, H
jossa Ri asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-15 tai 17-22 hiiliatomia, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso-leusiinista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista.
24 91 764 seriinistä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, ja R2 ja R3 ovat H, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola; (5) 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaava 0
RjN C-CHj
I II
0=C CH
\N/
RjOCHj^^q
OR, H
jossa R| on H, R2 on asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-13 tai 15-22 hiiliatomia, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso-leusiinista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinistä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, ja R3 on H, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola; (6) 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaava 0
RjN'' vc-ch3
I II
0=C CH
»\|_γ*
OR, H
:: 25 9 1 7 6 4 jossa Rl ja R2 voivat olla samoja tai erilaisia ja kumpikin on asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 5-22 hiiliatomia , (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso-leusiinista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinistä, seriinistä, treoniinistä, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, ja R3 on H, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola; ja (7) 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaiset, joilla on kaava 0
RjN^ C-CH3
I II
0=C CH
\H V
ORj H
jossa Ri ja R2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on asyyliryhmä, joka johtuu (a) haarautumattoraasta rasvahaposta, jossa on 2-22 hiiliatomia , (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat glysiini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, iso-leusiinista, ty rosiinista, proliinista, hydroksioroliinista, seriinistä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiimhaposta, glutamiinihaposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai 26 91764 (d) dik.arbok.syylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, ja R3 on asyyliryhmä, joka johtuu valinnaisesti substituoidusta bentsoyyli- tai heterosyklisestä karboksyylihaposta, joka on olennaisesti myrkytön, tai niiden farmaseuttisesti sopiva suola.
Edullisia 2'-deoksiadenosiinin asyylijohdannaisia ovat ne, joissa Ri on asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia, R2 on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia, ja R3 on H tai asyyliryhmä, joka johtuu aminohaposta, jossa on hapan tai emäksinen sivuketju.
Edullisia 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisia ovat ne, joissa Ri on asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia, R2 on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia tai aminohaposta, jossa on hapan tai emäksinen sivuketju, ja R3 on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu aminohaposta, jossa on hapan tai emäksinen sivuketju.
Edullisia 21-deoksisytidiinin asyylijohdannaisia ovat ne, joissa Ri on asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta . . rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia, R2 on H tai asyyli ryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia, ja R3 on H tai asyyliryhmä, joka on johdettu aminohaposta, jossa on hapan tai emäksinen sivuket-ju.
Edullisia 2'-deoksitymidiinin (4) asyylijohdannaisia ovat ne, joissa Ri on asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-15 hiiliatomia.
Edullisia 2'-deoks1tymidiin 1 n (5) asyy1ijohdannais ia ovat ne, joissa R2 on asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomas-**' ta rasvahaposta, jossa on 16 hiiliatomia.
Edullisia 2'-deoksitymidiinin (6) asyylijohdannaisia ovat ne, 27 91 764 joissa ja R2 samoja tai erilaisia ja kumpikin on asyyli-ryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia.
Edullisia 2'-deoksitymidiinin (7) asyylijohdannaisia ovat ne, joissa Ri ja R2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on asyyliryhmä, joka on johdettu haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 6-16 hiiliatomia ja R3 on asyyliryhmä, joka johtuu nikotiinihaposta, bentsoehaposta tai para-aminobent-soehaposta.
Terapeuttiset käytöt
Keksinnön lipofiiliset asyylideoksiribonukleosidijohdannaiset ovat käyttökelpoisia lisäämään deoksiribonukleosidien kuljetusta biologisten membraanien, mukaanlukien mahasuolialue eläimissä, kautta, ja näin nostamaan deoksiribonukleosidien biologista saatavuutta. Ensisijaisia näiden eläinten joukossa ovat ihmiset; keksinnön ei kuitenkaan ole tarkoitettu olevan siten rajoitettu, ja keksinnön alueeseen kuuluu kaikkien eläinten hoitaminen, jotka saattavat kokea hyödyllisen vaikutuksen keksinnön asyylideoksiribonukleosidien antamisesta.
Tämän keksinnön koostumuksia voidaan antaa eläimelle joko . . ennen säteilylle, auringonvalolle tai mutageeneille altistu mista tai sen jälkeen. Deoksiribonukleosidien asyylijohdan-naismuoto antaa oraalisesti tehokkaan keinon tarjota deoksi-ribonukleosideja kudoksiin. Mäitä johdannaisia voidaan antaa myös parenteraalisesti tai paikallisesti. Johdannaisia antamalla vältetään mahasuoliston, maksan ja plasman entsyymien vaikutuksesta tapahtuva nopea aineenvaihdunta.
Kuten kuvassa 1 on esitetty, vapaa deoksiguanosiini (dG) ja deoksiadenos 1 ini (dA) hajoavat plasmassa äärettömän nopeasti.
Deoksiadenosiinin, 5'-O-asetyylidsoksiadenosiinin ja 5'-O-va- leryylideoksiadenosimin kohtalot plasmassa on esitetty kuvassa 2. Kutakin näistä yhdisteistä lisättiin rotan 28 91 764 erillisiin plasmaeriin, jotka alkuperäiseltä konsentraatiol-taan olivat 20-mikromolaaris ia. Plasmasta otettiin näytteitä eri ajankohtina, ja halutut yhdisteet tutkittiin nestekroma-tografiällä.
Deoksiadenosiini (dA) on hyvin nopeasti hajoavaa plasmassa, kadoten 10 minuutissa. Tämän yhdisteen antaminen eläin- tai ihmiskohteelle tekisi deoksiadenosiinin kudosten saatavaksi hyvin lyhyeksi ajanjaksoksi.
5'-O-deoksiadenosiini ja 5'-O-valeryylideoksiadenosiini de-asyloituvat kuitenkin plasmassa (muodostaen deoksiadenosii-nia) useiden tuntien aikana. Siksi jommankumman näistä yhdisteistä antaminen johtaisi deoksiadenosiinin pidempään saatavuuteen kudoksissa.
Deoksiadenosiinin, 5'-O-asetyylideoksiadenosiinin ja 5'-0-va-leryylideoksiadenosiinin kohtalot maksauutteessa on esitetty kuvassa 3. Kutakin näistä yhdisteistä lisättiin erillisiin eriin rotan maksan vesiuutetta, jotka alkuperäiseltä konsent-raatioltaan olivat 20-mikromolaarisiä. Uutteesta otettiin näytteitä eri ajankohtina, ja halutut yhdisteet tutkittiin nestekromatogra fia 1la.
• Deoksiadenosiini (dA) hajoaa äärettömän nopeasti plasmassa, kadoten 1 minuutissa. Alkuperäinen hajoamistuote on deoksi-inosiini, joka ei ole suoraan kudosten hyväksikäytettävissä. Deoksiadenosiinin antaminen sinänsä eläin- tai ihmiskohteelle saattaisi deoksiadenosiinin kudosten saataville vain hyvin lyhyeksi ajaksi.
5'-0-asetyy1ideoksiadenos i ini ja 5'-0-valeryylideoksladeno-siini kuitenkin deasyloituvat maksauutteessa (muodostaen deoksiadenosiinia) oitemmässä kuin 1 tunnin ajassa. Siksi näistä yhdisteistä jommankumman antaminen johtaisi deoksi- . adenosiinin pitempiaikaiseen saatavuuteen maksaan tai ituihin • · elimiin.
li 29 91764
Niinpä voidaan valita seos useista erilaisista kunkin deoksi-ribonukleosidin asyylijohdannaisista annetuksi annokseksi, jotta saadaan optimaalinen biologinen saatavuus. Koostumus, joka sisältää 3',5'-diasetyyli-2'-deoksisytidiiniä ja 5'-pal-mitoyyli-2'-deoksisytidiiniä (ja muiden deoksiribonukleosidi-en vastaavia johdannaisia) antaa pitempiaikaisen nukleosidien biologisen saatavuuden yksittäisellä annoksella kuin kunkin nukleosidin yksittäisen asyylijohdannaisen antaminen tekee. Niinpä yllä kuvatun seoksen antamisen jälkeen asetyloitu yhdiste deasetyloituu suhteellisen nopeasti, jolloin saadaan vapaa deoksisytidiini (tai muut halutut deoksiribonukleosi-dit) pian antamisen jälkeen. 5'-palmitoyylijohdannainen ase-tyloituu hitaammin, jolloin saadaan enemmän vapaata deoksisytidiiniä sen jälkeen, kun 3’,51-diasetyyli-21-deoksisytidiini on muuttunut kudoksien aineenvaihdunnassa.
Asyylideoksiribonukleosidikoostumus voidaan muodostaa osaksi aurinkovoidetta, joka voidaan levittää ennen auringonvalolle altistumista tai sen jälkeen. Aurinkovoide voi myös sisältää yhden tai useamman aurinkosuoja-aineen, kuten PABA, PABA:n esterit, tai muut ei-PABA:a sisältävät kemialliset aurinko-suodattimet. Asyylideoksinukleotidit absorboituvat ihoon ja siirtyvät soluihin. Sitten asyylideoksiribonukleosidit lohkeavat kudosten esteraasien vaikutuksesta, jolloin syntyy vapaita deoksiribonukleosideja määrinä, jotka ovat tehokkaita korjaamaan auringonvalon aiheuttamia vahinkoja. Asyylideoksi-ribonukleosidikoostumusten ja auringonsuoja-aineiden, kuten PA3A:n, yhdistelmä tarjoaa maksimaalisen suojan iholle auringolta .
Keksinnön asyylideoksiribonukleosidikoostunuksia voidaan myös käyttää parantamaan joitakin ikääntymisen vaikutuksia antamalla deoksiribonukleosidien korkea ja pitkitetty taso nostamaan luonnollisen DNAm korjautumisprosesseja soluissa, hoitaen näin luonnollisesti ilmenevää DNA:han kohdistuneen vau-. non progressiivista akkumuloitumista, joka ilmenee iän kart tuessa. Koostumukset ikääntymisen vaikutusten hoitamiseen tai parantamiseen voidaan antaa paikallisesti, ihovoiteen muodossa, tai voidaan antaa oraalisesti tai parenteraalisesti.
30 91 764
On muitakin olosuhteita kuin säteilyvauriot, joissa eksogee-nisilla deoksiribonukleosidei11a tai niiden johdannaisilla on käyttökelpoisia terapeuttisia sovellutuksia.
Deoksiribonukleiinihappoa on käytetty kiihdyttämään haavojen arpeutumista tai parantumista, ja myös kiihdyttämään maksan regeneroitumista koe-eläimissä. On todennäköistä, että näissä tilanteissa, sekä sellaisissa tilanteissa, jolloin DNA:ta käytetään edistämään eläinten eloonjäämistä säteilyn jälkeen, DNA toimii varastosäilönä deoksiribonukleosideille, joka asteittain vapauttaa deoksiribonukleotidit ja deoksiribo-nukleosidit entsymaattisen hajoamisen aikana.
Asyloitujen deoksiribonukleosidien antaminen, kuten tässä on kuvattu, on menetelmä toimittaa deoksiribonukleosideja kudoksiin, joka on edullista vieraan DNA:n antamiselle tarkoituksiin nopeuttaa haavojen paranemista tai kudosten uusiutumista. Paitsi DNA, myös asyloidut deoksiribonukleosidit ovat tehokkaita oraalisen antamisen jälkeen; ne ovat myös ei-anti-geenisia ja ovat paljon helpompia puhdistaa kuin DNA.
Tämän keksinnön koostumusta voidaan antaa myös lisäämään vaurioituneen kudoksen paranemista. Tällaisia vaurioituneita kudoksia ovat ihohaavat (esim. pistohaavat, repeytymiset, hankautumiset, jne.), palanut kudos (iho jne.), sairas tai vaurioitunut maksa (maksan leikkaus- ja muut haavat, tai kirroosin tai diabeteksen vuoksi, jne.), vaurioitunut sydänlihas (esim. parempi arpimuodostus sydänlihasinfarktin jälkeen) ja vaurioitunut luuydin (esim. sädehoidon tai kemotera-peuttisen hoidon jälkeen).
Kun on tarkoituksena hoitaa ihon haavoja tai palamisia, voidaan koostumuksia käyttää paikallisesti osana iholotionia tai -voidetta, tai osana biologisesti erodoituvaa polymeeriä.
Edullisia asyylisubstituenttiryhmiä 2'-deoksiadenosiinin, 2'-deoksisytidiinin, 2‘-deoksiguanosiinin ja tymidiinin deoksiriboosirenkaan hydroksyy1iryhmille ovat rasvahapot, 3i 91764 joissa on 6-16 hiiliatomia, tai dikarboksyylihapot, joissa on 4-6 hiiliatomia, esim. meripihka-, glutaari- tai adipiini-hapot. Edullisia substituentteja deoksisytidiinin, deoksi-adenosiinin ja deoksiguanosiinin eksosyklisiin aminoryhmiin ovat aminohapot, joissa on emäksisiä sivuketjuja, esim. ly-siini tai arginiini. Edullisia substituentteja tymidiinin tymiinirenkaan sekundääriseen amiiniin ovat nikotiinihappo tai para-aminobentsoehappo.
Edullisia deoksiadenosiinijohdannaisia ovat N6-lysyyli-5'-palmitoyylideoksiadenosiini, 5'-palmitoyyliadenosiini, N^- lysyyli-51-dodekanoyylideoksiadenosiini, 51-dodekanoyyliade-nosiini ja N^-lysyyli-3',5'-diasetyylideoksiadenosiini.
Edullisia deoksiguanosiinijohdannaisia ovat N2-lysyyli-51 -palmitoyylideoksiguanosiini, 5'-dodekanoyylideoksiguanosiini ja N2-lysyyli-3',5‘-diasetyylideoksiguanosiini.
Edullisia deoksisytidiinijohdannaisia ovat N^-lysyyli-5'-palmitoyylideoksisytidiini, 5'-palmitoyylideoksisytidiini, N^-lysyyli-5'-dodekanoyylideoksisytidiini, 5'-dodekanoyyli-deoksisytidiini ja N^-lysyyli-31,5'-asetyylideoksisytidiini.
Edullisia tymidiinijohdannaisia ovat N3-nikotinoyyli-5'-pal-. mitoyylitymidiini, 5'-palmitoyylitymidiini, N^-nikotinoyyli- 51-dodekanoyylitymidiini, 5'-dodekanoyylitymidiini ja N3-ni-kotinoyyli-3',5'-asetyylitymidiini.
Keksinnön piiriin kuuluvia koostumuksia ovat ne, jotka sisältävät deoksiribonukleosidien asyylijohdannaisten seoksia tehokkaina määrinä saavuttamaan haluttu tarkoitus. Nämä koostumukset voivat sisältää 0-50 mooliprosenttia deoksisytidiinin asyylijohdannaista, 0-50 mooliprosenttia deoksiguanosiinin asyylijohdannaista, 0-50 mooliprosenttia deoksitymidiinin asyy 11johdannaista ja 0-50 mooliprosenttia deoksiadenosiinin asyylijohdannaista, sillä edellytyksellä, että asyy1ideoksi-ribonukleosidien kokonaispitoisuus on korkeitaan 100 mooliprosenttia .
32 91 764
Edullinen koostumus sisältää 25 mooliprosenttia deoksisyti-diinin asyylijohdannaista, 25 mooliprosenttia deoksiguanosii-nin asyylijohdannaista, 25 mooliprosenttia deoksitymidiinin asyylijohdannaista ja 25 mooliprosenttia deoksiadenosiinin asyylijohdannaista.
Säteilyn aiheuttamisen soluvaurioiden tai auringonpolttamien hoitamiseksi tai haavojen parantumisen lisäämiseksi edullisia annostuksia ovat seuraavien määrien kanssa ekvivalentit asyyli johdannaisten määrät: 10-1000 mg 2'-deoksiadenosiinia, 10-1000 mg 21-deoksiguanosiinia, 10-1000 mg 21-deoksisytidiiniä ja 10-1000 mg 2'-deoksitymidiiniä. Koostumus voi esimerkiksi sisältää 13-1330 mg 3*,5 *-diasetyyli-2’-deoksiadenosiinia, 13-1310 mg 33'-diasetyyli-2'-deoksiguanosiinia, 14-1370 mg 31,51-diasetyyli-2'-deoksisytidiiniä ja 14-1350 mg 3',5'-di-asetyyli-21-deoksitymidiiniä. Kuten alalla ymmärretään, näitä annostuksia laskettaessa tarkoitetaan 21-deoksiribonukleosi-din ekvivalenttista määrää yksin, s.o. asyylisubstituentti ja happoadditio-osa mistä hyvänsä farmaseuttisesti sopivasta suolasta eivät sisälly tähän laskuun.
Aurinkovoiteeseen voidaan lisätä 0,1-5 paino-% ylläolevia koostumuksia. Yleensä tätä tarkoitusta varten on asyylijohdannainen vapaiden asyylideoksiribonukleosidien muodossa eikä ‘ farmaseuttisesti sopivina suoloina.
On joitakin tilanteita, jolloin on hyödyllistä toimittaa yksittäinen deoksiribonukleosidi kudoksiin, esim. deoksisyti-diini hoidettaessa antineoplastisen lääkkeen arabinosyyli-sytosiinin aiheuttamaa myrkyllisyyttä, tai tymidiini hoidettaessa metotreksaatin aiheuttamaa myrkyllisyyttä. Näissä tapauksissa voidaan antaa yksittäisen deoksiribonukleosidin asyylijohdannaisia.
Valmistusmenetelmiä
Kun halutan asyylijohdannaisen happolähteessä on ryhmiä, jotka häiritsevät asyloitumisreaktioita, esim. hydroksyyli-ja aminoryhmiä, nämä ryhmät voidaan estää suojarvhmillä, • · 33 9 1 7 6 4 esim. t-butyylidimetyylisilyylieetterit tai t-BOC-ryhmät, vastaavasti, ennen anhydridin valmistusta. Esimerkiksi maitohappo voidaan muuttaa 2-t-butyylidimetyylisiloksipropioni-hapoksi t-butyylidimetyylikloorisilaanilla, jonka jälkeen suoritetaan saadun silyyliesterin hydrolyysi emäksen vesi-liuoksella. Anhydridi voidaan muodostaa antamalla suojatun hapon reagoida DCC:n kanssa. Aminohapoilla voidaan standardi-menetelmiä käyttäen valmistaa N-t-BOC-johdannainen, joka sitten muutetaan anhydridiksi DCC:llä. Hapoilla, jotka sisältävät useamman kuin yhden karboksylaattiryhmän (esim. meripihka-, fumaari- tai adipiinihappo), halutun dikarboksyylihapon happoanhydridin annetaan reagoida 2'-deoksiribonukleosidin kanssa pyridiinissä.
3',51-diasyylideoksitymidiin voidaan valmistaa menetelmien mukaan, jotka on esitetty julkaisussa Nishizawa et ai., Biochem. Pharmacol. 1_4:1605 (1965), käsittelemällä deoksi-tymidiiniä 2,1 ekvivalentilla halutun asyyliyhdisteen happo-anhydridiä pyridiinissä, jonka jälkeen lämmitetään 80-85°C:ssa ainakin yksi tunti. Vaihtoehtoisesti voidaan deoksitymidiiniä käsitellä 2,1 ekvivalentilla happokloridia pyridiinissä huoneenlämmössä. (Katso esimerkki 1.)
Deoksitymidiinin 51-hydroksyyliryhmä voidaan selektiivisesti asyloida 1 ekvivalentilla halutun asyyliyhdisteen happoanhyd-ridiä pyridiinissä, joka lämmitetään 80-85°C:een, Nishazawa et ai.:n mukaan. Vaihtoehtoisesti happokloridin (1 ekvivalentti) voidaan antaa reagoida deoksitymidiinin kanssa pyridiinissä ja DMF:ssä huoneenlämmössä Baker et al.:n mukaan J. Med. Chem. 21:1218 (1978). (Katso esimerkki 2).
Deoksitymidiinin 31-hydroksyyliryhmä voidaan selektiivisesti asyloida muodostamalla selektiivisesti 51-0-t-butyylidimetyy-lisilyylijohdannainen 1,2 ekvivalentilla _t-butyylidimetyyli-kloorisilaania DMF:ssä, joka sisältää imidatsolia, jonka jälkeen 3'-hydroksyy1iryhmä asyloidaan sopivalla happoanhydri-dillä, ja suoritetaan 5'-t-butyy1idimetyylisilyylieetterin lohkaiseminen Baker et ai.:n mukaan. (Katso esimerkki 3.) 34 91 764 3 1 ,51-diasyylideoksisytidiini voidaan valmsitaa Gish et ai.:n soveltaman menetelmän mukaan, J. Med. Chem. 14:1159 (1971), käsittelemällä deoksisytidiinihydrokloridia 2,1 ekvivalentilla sopivaa happokloridia DMF:ssä. (Katso esimerkki 5.)
Deoksisytidiinin 51-hydroksiryhmä voidaan selektiivisesti asyloida käsittelemällä deoksisytidiinihydrokloridia 1,1 ekvivalentilla sopivaa happoanhydridiä DMF:ssä. Gish et ai. (Katso esimerkki 6.)
Deoksiadenosiinin 3',51-diasyylijohdannainen voidaan valmistaa käsittelemällä 2,1 ekvivalentilla sopivaa happokloridia DMF:ssä. (Sovellettu Gish et al.rsta, katso esimerkki 7.)
Deoksiadenosiinin 51-hydroksyyliryhmä voidaan selektiivisesti asyloida käsittelemällä deoksiaddenosiinihydrokloridia 1,1 ekvivalentilla haluttua happokloridia DMF:ssä. (Sovellettu Gish et al.csta, katso esimerkki 8.) 3',5'-diasyyli-2'-deoksiguanosiini voidaan valmistaa käsittelemällä deoksiguanosiinihydrokloridia 2,1 ekvivalentilla sopivaa happokloridia DMF:ssä. (Sovellettu Gish et al.:sta, katso esimerkki 9.)
Deoksiguanosiinin 5'-hydroksyyliryhmä voidaan selektiivisesti asyloida käsittelemällä deoksiguanosiinihydrokloridia 1,1 ekvivalentilla sopivaa happokloridia DMFrssä. (Sovellettu Gish et al.rsta, katso esimerkki 10.)
Aminohapot voidaan liittää deoksiadenosiinin, deoksisytidiinin ja deoksiguanosiinin (tai niiden 3‘- tai 51-asyylijohdannaisten) eksosyklisiin aminoryhmiin standardimenetelmillä käyttäen disykloheksyy1ikärbodi-imidiä. (Katso esimerkki 11.) \’äitä esyyliyhdisteitä voidaan antaa jatkuvasti eläimelle, jolla jn riski altistua joko säteilylle, auringonvalolle tai kemiallisille mutageenei1le. Keksinnön asyylikoostumuksia voidaan myös antaa säteilylle, auringonvalolle tai i 35 91 764 kemiallisille mutageeneille altistuksen jälkeen tai haavan syntymisen jälkeen lisäämään DNA:n korjautumista ja näin parantamaan vauriota ja edistämään eläimen eloonjäämistä. Edullisesti voidaan keksinnön koostumuksia antaa ennen tai jälkeen sädehoidon tai kemoterapian parantamaan hoidon ei-toivottuja sivuvaikutuksia.
Keksinnön asyylikoostumuksia voidaan myös antaa yhdessä muiden säteilyltä suojaavien yhdisteiden kanssa, kuten ovat WR-2721, NAC, DDC, kysteamiini, 2-merkaptoetanoli, merkapto-etyyliamiini, ditiotreitoli, glutationi, 2-merkaptoetaanisul-fonihappo, WR-1065, nikotiiniamidi, 5-hydroksitryptamiini, 2-beeta-aminoetyyli-isotiouronium-Br-HBr, glukaanit, GLP/B04, GLP/B05, OK-432, Biostim, PSK, Lentinan, Schizophyllan, Rhodexman, Levan, Mannozym, MVE-2, MNR, MMZ, IL-2, TNF, kateenkorvafaktori TF-5, glutationiperoksidaasi, superoksidi-dismutaasi, katalaasi, glutationireduktaasi, glutationitrans-feraasi, seleeni, CdCl2# MnCl2» Zn-asetaatti, A-vitamiini, beeta-karoteeni, prostaglandiinit, tokoferoli ja metyleeni-sininen. Näiden suojayhdisteiden antaminen yhdessä keksinnön asyylijohdannaisten kanssa antaa suuremman suojan kuin jos asyylijohdannaisia tai muita aineita annettaisiin yksinään.
Farmakologisesti aktiiviset asyylijohdannaiset voidaan yhdistää sopivien farmaseuttisesti soveltuvien kantajien kanssa, jotka sisältävät täyteaineita ja apuaineita, jotka helpottavat vaikuttavien yhdisteiden valmistusta. Nämä voidaan antaa tabletteina, rakeina, kapseleina ja peräpuikkoina. Koostumukset voidaan antaa oraalisesti, rektaalisesti, vaginan kautta, tai vapauttaa suun limakalvon kautta, ja niitä voidaan käyttää liuosmuodossa injektoimalla, oraalisesti tai paikallisesti. Koostumukset voivat sisältää noin 0,1-99 %, edullisesti noin 50-90% vaikuttavaa yhdistettä tai yhdisteitä, yhdessä täyteaine(id)en kanssa.
Tämän keksinnön farmaseuttiset valmisteet valmistetaan taval- la, joka on sinänsä tunnettu, esimerkiksi tavanomaisella sekoitus-, granulointi-, rakeistus-, liuotus- tai « 36 91 764 lyofilisointimenetelmillä. Niinpä farmaseuttiset valmisteet oraalisesti käytettäväksi voidaan saada yhdistämällä vaikuttava yhdiste tai yhdisteet kiinteiden täyteaineiden kanssa, mahdollisesti jauhamalla saatu seos ja valmistamalla granu-laattiseos sen jälkeen, kun on lisätty sopivia apuaineita, jos halutaan tai jos on tarpeen, jolloin sadaan tablettien tai rakeiden ytimet.
Sopivia täyteaineita ovat täyteaineet (fillers), kuten sokerit, esim. laktoosi, sakkaroosi, mannitoli tai sorbitoli, selluloosavalmisteet ja/tai kalsiumfosfaatit, esimerkiksi trikalsiumfosfaatti tai kalsiumvetyfosfaatti, sekä sideaineet, kuten tärkkelyspasta, käyttäen esimerkiksi maissitärk-kelystä, vehnätärkkelystä, riisitärkkelystä tai perunatärkkelystä, gelatiinia, tragakanttia, metyyliselluloosaa, hydrok-sipropyylimetyylise1luloosaa, natriumkarboksimetyyliselluloosaa ja/tai polyvinyylipyrrolidonia.
Apuaineita ovat ennen kaikkea juoksevuutta säätelevät aineet ja liukastusaineet, esimerkiksi piidioksidi, talkki, stearii-nihappo tai sen suolat, kuten magnesiumstearaatti tai kal-siumstearaatti, ja/tai polyetyleeniglykoli. Rakeiden ytimet tarjotaan käyttöön varustettuna sopivilla päällyksillä, jotka haluttaessa ovat resistenttejä mahanesteille. Tähän tarkoitukseen voidaan käyttää konsentroituja sokeriliuoksia, jotka valinnaisesti voivat sisältää arabikumia, talkkia, polyvinyylipyrrolidonia, polyetyleeniglykolia ja/tai titaanidioksidia, kiillottavia liuoksia ja sopivia orgaanisia liuottimia tai 1 iuotinseoksia. Jos on tarkoitus valmistaa päällysteet resistenteiksi mahaneste i L le, käytetään sopivien se 1luloosavalmis-teiden, kuten asetyy1isei1uloosaftalaatin tai hydrokslpropyy-1imetyy1iselluloosaftalaatin liuoksia. Väriaineita tai pigmenttejä voidaan lisätä tablettien tai rakeiden pinnoitteisiin esimerkiksi identifiointiin tai yhdisteannostuksien erilaisten yhdistelmien karakterisointiin.
Muita farmaseuttisia valmisteita, joita voidaan käyttää oraalisesti, ovat gelatiinista valmistetut • ' 37 91 764 ns. "push-fit"-kapselit, sekä pehmeästi suljetut kapselit, jotka on valmistettu gelatiinista ja plastisoijasta, kuten glyserolista tai sorbitolista. "Push-fit"-kapselit sisältävät vaikuttavan yhdisteen (yhdisteet) rakeiden muodossa, sekoitettuna mahdollisesti täyteaineiden, kuten laktoosin, sideaineiden, kuten tärkkelysten ja/tai liukastusaineiden, kuten talkin tai magnesiumstearaatin, ja mahdollisesti stabiloijien kanssa. Pehmeissä kapseleissa vaikuttavat aineet on edullisesti liuotettu tai suspendoitu sopiviin nesteisiin, kuten rasvaöljyt, nestemäinen parafiini tai polyetyleeniglykolit. Lisäksi voidaan lisätä stabiloijia.
Mahdollisia farmaseuttisia valmisteita, joita voidaan käyttää rektaalisesti, ovat esimerkiksi peräpuikot, jotka koostuvat vaikuttavien aineiden yhdistelmästä peräpuikkopohjassa. Sopivia peräpuikkopohjia ovat esimerkiksi luonnon tai synteettiset triglyseridit, parafiinihiilivedyt, polyetyleeniglykolit tai korkemmat alkanolit. Lisäksi on myös mahdollista käyttää gelatiinista olevia rektaalikapseleita, jotka koostuvat vaikuttavien yhdisteiden yhdistelmästä pohjan kanssa. Mahdollisia pohjamateriaaleja ovat esimerkiksi nestemäiset triglyse-ridit, polyetyleeniglykolit tai parafiinihiilivedyt.
Sopivia koostumuksia parenteraalisesti annettavaksi ovat f- vesiliukoisessa muodossa olevien vaikuttavien yhdisteiden, esimerkiksi vesiliukoisten suolojen, vesiliuokset. Lisäksi voidaan antaa vaikuttavien yhdisteiden suspensioita sopivina öljymäisinä injektiosuspensioina. Sopivia 1ipofii1isiä liuottimia tai kantoaineita ovat rasvaöljyt, esimerkiksi seesami-öljy, tai synteettiset rasvahappoesterit, esimerkiksi etyyli-* oleaatti tai triglyseridit. Vesipitoiset injektiosuspensiot voivat sisältää aineita, jotka nostavat suspension viskositeettia, kuten esimerkiksi natriumkarboksimetyyliselluloosa, sorbitoli ja/tai dekstraani. Valinnaisesti suspensio voi sisältää myös stabiloijia.
Asyylideoksiribonukleosidit voivat olla muodostettu osaksi ihovoidetta tai aurinkovoidetta paikallisesti annettavaksi.
3fl 91764
Sopivia koostumuksia paikallisesti annettavaksi ovat sopivat öljysuspensiot tai liuokset. Sopivia lioofiilisiä liuottimia tai kantoaineita ovat rasvaöljyt, esimerkiksi seesamiöljy tai kookosöljy, tai synteettiset ra svahappoes te r i t, esimerkiksi etyylioleaatti tai triglyseridit. Näitä paikallisesti käytettäviä valmisteita voidaan käyttää hoidettaessa vaurioitunutta kudosta, kuten ihon haavat tai palovammat, tai hoitamaan tai ehkäisemään auringonvalon aiheuttamia soluvaurioita (aurin-gonpolttamat).
Kun on tarkoitus nopeuttaa haavojen paranemista, voidaan tämän keksinnön koostumukset muodostaa osaksi haavan peitteitä, tai lisätä biologisesti erodoituviin mikrokapseleihin paikallisesti annettaviksi. Tällaiset mikrokapselit voivat sisältää esimerkiksi polylaktaattia tai laktaatti-glykolaatti-kopoly-meerejä. Katso Weise, D.L. et ai., Drug Carriers in Biology and Medicine, Gregoriadis, G. et al., Academic Press, NY s. 237-270 (1979).
Seuraavat esimerkit ovat tämän keksinnön menetelmiä ja koostumuksia valaisevia, mutta eivät sitä rajoittavia. Muut sopivat muunnokset ja sovellutukset erilaisista tiloista ja parametreistä, jotka normaalisti kuuluvat kliiniseen terapiaan ja jotka ovat alan ammattimiehelle ilmeisiä, kuuluvat tämän kek- • · sinnön henkeen ja piiriin.
Esimerkkejä menetelmistä valmistaa tämän keksinnön yhdisteitä
Esimerkki 1: 3',51-diasyy1i-2'-deoksitymidiinin valmistus .. Happoanhydr ideistä : 2‘-Deoksitymidiini Liuotetaan vedettömään pyridiiniin huoneenlämmössä. 2,1 mooliekvlvalenttia halutun asyyliyhdisteen happoanhydridiä (esim. etikkahappoanhydridi, laktaattianhyd-ridi, voihappoanhydridi, jne.) lisätään sitten. Reaktioseos kuumennetaan sitten 30-85°C:een 1-4 tunniksi, jäähdytetään, • · i kaadetaan jääveteen ja esterit otetaan talteen uuttamalla kloroformilla tai samanlaisella 1iuottimellä. Kloroformi 39 91 764 pestään sitten jääkylmällä 0,01 N rikkihapolla, 1% natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja lopuksi vedellä. Natriumsulfaa-tilla kuivaamisen jälkeen kloroformi haihdutetaan ja jäännös-öljylle tai kiteille suoritetaan kromatografia (sovellettu julkaisusta Nishizawa et ai., Biochem. Pharmacol. 14;1605 (1965) ) .
Happoklorideista:
Vedettömään pyridiiniin liuotettuun 2'-deoksitymidiiniin lisätään 5°C:ssa 2,1 mooliekvivalenttia halutun asyyliyhdis-teen happokloridia (esim. palmitoyylikloridi, asetyyliklori-di, jne.). Seosta pidetään huoneenlämmössä yön yli, lisätään jääveteen ja jatkokäsitellään kuten edellä on esitetty (sovellutus Nishizawasta).
Esimerkki 2: 51-Asyyli-21-deoksitymidiinin valmistus
Vedettömään pyriidiinin liuotettuun 2'-deoksitymidiiniin lisätään huoneenlämmössä 1,0 mooliekvivalenttia halutun asyyliyhdisteen happoanhydridiä. Reaktio kuumennetaan sitten suunnilleen lämpötilaan 80-85°C useiksi tunneiksi, jäähdytetään, kaadetaan jääveteen, ja esterit otetaan talteen uuttamalla kloroformilla tai samanlaisella liuottimena. Kloro-: formi pestään sitten jääkylmällä 0,01 N rikkihapolla, 1% nat riumbikarbonaatin vesiliuoksella ja lopuksi vedellä. Natrium-sulfaatilla kuivaamisen jälkeen kloroformi haihdutetaan ja jäännösöljy1 le tai kiteille suoritetaan kromatografia. Päätuote, joka kromatografialla eristetään, on 51-substituoitu .. esteri (sovellettu Nishizawa et al.:sta).
Vaihtoehtoisesti voidaan suorittaa selektiivisesti deoksitymidiinin 5'-asylointi suspendoimalla 2'-deoksitymidiini pyridiinin ja N,N-dimetyyliformamidin seokseen, joka on jäähdytetty 0°C:ksi jäähauteessa. 1,0 mooliekvivalenttia halutun asyy 1 iyhdisteen happokloridia lisätään pisaroittain seokseen, jota sekoitetaan 9°C:ssa 12-24 tuntia. Vettä lisätään sitten pysäyttämään reaktio, ja liuottimet haihdutetaan in vacuo 40 9 1 7 6 4 50°C:ssa. Jäännös liuotetaan metanoliin ja puhdistetaan kro-matografiällä silikageelillä (sovellettu julkaisusta Baker et ai. J. Med. Chem. 21:1218 (1978)).
Esimerkki 3: 31-Asyyli-21-deoksitymidiinin valmistus
Sekoitettuun suspensioon, jossa on 2'-deoksitymidiiniä kuivassa Ν,Ν-dimetyyliformamidissa, lisätään 2,4 mooliekviva-lenttia imidatsolia ja sen jälkeen 1,2 mooliekvivalenttia t-butyylidimetyylikloorisilaania. Seosta sekoitetaan kosteudelta suojaten huoneenlämmössä 20 tuntia, jolloin liuotin poistetaan 50°C:ssa in vacuo. Jäännös liuotetaan 15 mlraan etyyliasetaattia, pestään ja haihdutetaan, jolloin saadaan siirappi, josta saadaan kiteyttämällä kuumasta kloroformista ja lisäämällä heksaania, kunnes tulee opalisoivaksi, 5‘-(t-butyylidimetyylsilyyli)-21-deoksitymidiini.
5'-(t-Butyylimetyylisilyyli)-2'-deoksitymidiinin sekoitettuun suspensioon kuivassa pyridiinissä, joka on jäähdytetty 0°C:een, lisätään 1,1 mooliekvivalenttia halutun asyyliyhdis-teen sopivaa happoanhydridiä, ja seosta sekoitetaan kosteudelta suojaten 20 tuntia 0-5°C:ssa, jolloin reaktio päätetään lisäämällä muutama ml vettä. Liuotin haihdutetaan ja jäännös uutetaan ja haihdutetaan, jolloin saadaan paksu, kirkas sii-: rappi, joka sitten kuivataan iri vacuo 25°C:ssa.
t. -Butyylimetyylisilyyliryhmä poistetaan jääetikalla ja tetra-butyyliammoniumfluoridillä tetrahydrofuraanissa, jolloin saadaan haluttu 31-asyyli-2'-deoksitymidiinijohdannainen (sovellettu Baker et al.rsta).
Esimerkki 4: N^-Asyvli-2'-deoksitymidiinin valmistus
Pyrimidiinirenkaan 3-asemassa olevan sekundäärisen amiinin asylointi suoritetaan antamalla 3',5'-diasyylideoksitymidii-nin reagoida 1,1 raooliekvivalentin kanssa halutun asyylisubs-tituencin happokloridia aproottisessa liuottimessa (kuten eetteri, dioksaani, kloroformi, etyyliasetaatti, 41 91764 asetonitriili, pyridiini, dimetyyliformamidi, ja vastaavat) siten, että läsnä on 1-5 mooliekvivalenttia orgaanista emästä (erityisesti aromaattiset amiinit, kuten pyridiini, trialkyy-liamiinit tai Ν,Ν-dialkyylianiliinit) (sovellettu Fuji et ai.:n US-patentista nro 4 425 335). Asyylisubstituentti sekundäärisessä amiinissa voi olla sama tai erilainen kuin on riboosiosan hydroksyyliryhmissä.
Esimerkki 5: 31,51-Diasyyli-21-deoksisytidiinin valmistus 2-Deoksisytidiinihydrokloridi liuotetaan N,N-dimetyyliform-amidiin. 2,1 mooliekvivalenttia halutun asyylisubstituentin happokloridia lisätään ja seosta sekoitetaan yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos konsentroidaan in vacuo öljyksi ja tri-turoidaan etyyliasetaatin ja dietyylieetterin tai samanlaisten liuottimien seoksella. Öljy trituroidaan sitten IN nat-riumvetykarbonaatilla. Kiteinen kiinteä aine kerätään, pestään vedellä, kuivataan ja uudelleenkiteytetään (sovellettu Gish et al.rsta, J. Med. Chem. 14:1159 (1971)).
Esimerkki 6: 51-Asyyli-2*-deoksisytidiinin valmistus 2-Deoksisytidiinihydrokloridi liuotetaan N,N-dimetyyliform-amidiin. 1,1 mooliekvivalenttia halutun asyylisubstituentin ·: happokloridia lisätään, ja seosta sekoitetaan yön yli huo neenlämmössä. Reaktioseos konsentroidaan in vacuo öljyksi ja trituroidaan etyyliasetaatin ja dietyylieetterin tai samanlaisten liuottimien seoksella. Öljy trituroidaan sitten IN natriumvetykarbonaati1la. Kiteinen kiinteä aine kerätään, pestään vedellä, kuivataan ja uudelleenkiteytetään (sovellet-.· tu Gish et al.rsta).
Esimerkki 7: 31,51-Diasyyli-21-deoksiadenosiinin valmistus 2'-Deoksiadenosiini liuotetaan N,N-dimetyy1iformamidiin ja pyridiir.iin (1:1). 2,1 mooliekvivalenttia halutun asyylisubstituentin happokloridia lisätään ja seosta sekoitetaan yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos konsentroidaan in vacuo öljyksi ja trituroidaan etyyliasetaatin ja dietyylieetterin tai 42 9 1 7 6 4 samanlaisten liuottimien seoksella. Öljy trituroidaan sitten IN natriumvetykarbonaatilla. Kiteinen kiinteä aine kerätään, pestään vedellä, kuivataan ja uudelleenkiteytetään.
Esimerkki 8: 5'-Asyyli-21-deoksiadenosiinin valmistus 2'-Deoksiadenosiini liuotetaan N,N-dimetyyliformamidiin ja pyridiiniin (1:1). 1,1 mooliekvivalenttia halutun asyylisubs-tituentin happokloridia lisätään ja seosta sekoitetaan huoneenlämmössä yön yli. Reaktioseos konsentroidaan in vacuo öljyksi ja trituroidaan etyyliasetaatin ja dietyylieetterin tai samanlaisten liuottimien seoksella. Öljy trituroidaan sitten IN natriumvetykarbonaatilla. Kiteinen kiinteä aine kerätään, pestään vedellä, kuivataan ja uudelleenkiteytetään.
Esimerkki 9: 3 *,5'-Diasyyli-2'-deoksiguanosiinin valmistus 2'-Deoksiguanosiini liuotetaan N,N-dimetyyliformamidiin ja pyridiiniin (1:1). 2,1 mooliekvivalenttia halutun asyylisubs-tituentin happokloridia lisätään ja seosta sekoitetaan yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos konsentroidaan in vacuo öljyksi ja trituroidaan etyyliasetaatin ja dietyylieetterin tai samanlaisten liuottimien seoksella. Öljy trituroidaan sitten IN natriumvetykarbonaatilla. Kiteinen kiinteä aine kerätään, * · pestään vedellä, kuivataan ja uudelleenkiteytetään.
Esimerkki 10: 5'-Asyyli-21-deoksiguanosiinin valmistus 2'-Deoksiguanosiini liuotetaan N,N-dimetyyliformamidiin ja .. pyridiiniin (1:1). 1,1 mooliekvivalenttia halutun asyylisubs- tituentin happokloridia lisätään ja seosta sekoitetaan yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos konsentroidaan in vacuo öljyksi ja trituroidaan etyyliasetaatin ja dietyylieetterin tai samanlaisten liuottimien seoksella. Öljy trituroidaan sitten IN natriumvetykarbonaatilla. Kiteinen kiinteä aine kerätään, pestään vedellä, kuivataan ja uudelleenkiteytetään (sovellet- • · · tu Gish et al.:sta).
43 91 764
Esimerkki 11; N-lysyyli-51-O-palmitoyylideoksisytidiinin synteesi 51-O-palmitoyylideoksisytidiini syntetisoidaan antamalla deoksisytidiinihydrokloridin reagoida 1,1 ekvivalentin kanssa palmitoyylikloridia kuivassa dimetyyliformamidissa.
14 g 51-O-palmitoyylideoksisytidiiniä liuotetaan 100ml:aan dimetyyliasetamidia, 1 mooliekvivalentti di-tert-butoksikar-bonyylilysiiniä lisätään, ja seos jäähdytetään jäähauteessa. 1,2 mooliekvivalenttia (7,4 g) disykloheksyylikarbodi-imidiä lisätään ja seosta sekoitetaan 4°C:ssa 90 tuntia. Sakka (di-sykloheksyyliurea) poistetaan suodattamalla. Suodokseen lisätään 100 ml vettä, ja sen jälkeen 1 litra etyyliasetaattia. N^-(di-N-tert-butoksikarbonyylilysyyli)-51-O-palmitoyylideoks isytidiini erotetaan reagoimattomista reagensseista kromato-grafiällä silikageelillä. t-Butoksikarbonyylin suojaryhmät poistetaan standardimenetelmillä käsittelemällä hapolla, kuten trifluorietikkahapolla.
Samoin voidaan deoksisytidiinin, deoksiadenosiinin tai de-oksiguanosiinin 5'-0-asyyli- tai 3',5'-O-diasyylijohdannaisiin liittää lysiini tai arginiini niiden eksosyklisiin primäärisiin aminoryhmiin disykloheksyylikarbodi-imidillä.
Esimerkkejä nukleosidien suojaamisesta
Entsymaattiselta hajoamiselta asyloimalla
Deoksiribonukleosidit hajoavat nopeasti sen jälkeen kun niitä on annettu eläimille. Jos on tarkoitus menestyksellisesti hyödyntää asyloitujen nukleosidien suorittama nukleosidien toimitus kudoksiin, on ehdottoman välttämätöntä, että asy-loinnin tulisi ehkäistä nukleosidiosan hajoaminen entsyymien vaikutuksesta, jotka normaalisti hajottavat nukleosideja. Jokaisella päädeoksiribonukleosidi11a on niiden hajoamisen ensimmäiseen vaiheeseen osallisena erilainen entsyymi. Deoksiadenosiinin hajoamisen ensimmäinen vaihe on deaminoituminen, 44 91764 jota katalysoi adenosiinideaminaasi. Tymidiiniä katalysoi aluksi tymidiinifosforylaasi; deoksiguanosiinia puriininuk-leosidifosforylaasi ja deoksisytidiiniä hajottaa deoksisyti-diinideaminaasi.
Esimerkki 17
Kunkin deoksiribonukleosidin tai niiden asyloitujen johdannaisten liuoksia (100 mikromolaarisia fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa) inkuboitiin 37°C:ssa kunkin neljän entsyymin kanssa: adenosiinideaminaasi (ADA), sytidiinideaminaasi (CDA), puriininukleosidifosforylaasi (PNP) ja tymidiinifosforylaasi (TP). Yhdisteiden entsymaattinen hajoaminen määritettiin HPLCrllä.
Taulukko 1: Deoksiribonukleosidien suojaaminen 5'-0-asyloin-nilla hajoamisen alkuvaiheita katalysoivilta entsyymeiltä _Entsyymi_
Yhdiste_ADA CDA PNP TP
deoksiadenosiini +--- 3',5'-di-O-asetyylideoksiadenosiini - 5’-O-palmitoyylideoksiadenosiini - • < deoksisytidiini -+-- 31,5'-di-O-asetyy1ideoksisytidiini - 5'-O-palmitoyylideoksisytidiini - deoksiguanosiini + • · 3',5'-di-O-asetyylideoksiguanosiLni - 5'-O-palmitoyylideoksiguanosiini - tymidiini - - - + 3',5‘-di-O-asetyylitymidiini - 51-O-valeryylitymidiini - 5'-O-oktanoyylitymidiini - - 5'-O-palmitoyylitymidiini - - - 5 ' -O-valeryyl itymidiini__ -_-_-_p 45 9 1 7 6 4 + osoittaa, että yhdiste oli substraatti entsyymille.
- osoittaa, että yhdiste ei ollut substraatti entsyymille.
Nämä tiedot osoittavat, että deoksiribonukleosidien 5'-O-asy-lointi suojaa niitä entsyymeiltä, jotka katalysoivat niiden hajoamisen alkuvaiheita. Niinpä asyloitujen nukleosidien nuk-leosidiosa pysyy ehjänä in vivo, kunnes deasyloituminen tapahtuu .
Esimerkkejä asyloitujen deoksiribonukleosidien deasyloitumi-sesta maksauutteessa
Asyloituja deoksiribonukleosideja inkuboitiin rotan maksauut-teiden kanssa tarkoituksena arvioida johdannaisten entsymaat-tisen deasyloitumisen suhteellisia nopeuksia erilaisten subs-tituenttien kanssa, ja määrittää deasyloituvatko eri nukleo-sidit, joilla on samat substituentit, samoilla nopeuksilla. Keksinnön johdannaisten deasylointi in vivo johtaa emänukleo-sidien vapautumiseen, joita solut sitten voivat käyttää hyväkseen .
Esimerkki 12
Kokonaiset rotan maksat homogenoitiin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen (10 ml grammaa kohti maksaa) ja sentrifugoi-tiin. Supernatantti laimennettiin lopulliseen konsentraatioon 50 ml puskuria grammaa kohti maksaa, ja asyloitujen deoksiribonukleosidien varastoliuoksia lisättiin niin, että yhdisteet olivat konsentraatioltaan 100-mikromolaarisiä. 100 mikrolit- ran erät poistettiin periodisesti ja niistä määritettiin * HPLC:llä ajan funktiona muodostuneiden vapaiden nukleosidien määrät. 1 •l « 91764
Taulukko 2
Vapautuneet nukleosidit (nmol/ml) _tuntia_
Yhdiste_1 2 3 8 24 3',5'-di-O-asetyylideoksiadenosiini 26 39 57 31.51- di-O-asetyylideoksisytidiini 25 40 50 31.51- di-O-asetyylideoksiguanosiini 23 43 63 31,5'-di-O-asetyylitymidiini 19 40 63 51-O-valeryylitymidiini 47 95 98 51-O-oktanoyylitymidiini 74 84 96 51-O-asetyylideoksiadenosiini 48 51-0-valeryylideoksiadenosiini 65 N-asetyylideoksisytidiini 0000 N-valeryylideoksiguanosiini 0000 N-palmitoyylideoksiguanosiini 0000 5'-O-palmitoyylideoksiadenosiini 5 16 5'-O-palmitoyylideoksisytidiini 4 15 5'-O-palmitoyylideoksiguanosiini 3 14 ’1 5'-O-palmitoyylitymidiini 4 14 Nämä tiedot osoittavat, että maksauutteissa kunkin neljän deoksiribonukleosidin di-o-asetyylijohdannaiset deasyloituvat hyvin samanlaisilla nopeuksilla. Tämä pitää paikkansa myös 5'-O-palmitoyylijohdannaisille, vaikka palmitoyylisubstituen-tit lohkeavat paljon hitaammin kuin asetaattiryhmät. Tämä antaa aiheen olettaa, että O-substituoitujen deoksiribonukleo— sidien deasyloitumisen nopeus on ensisijaisesti asyylisubsti-tuentin luonteen funktio, eikä sen nukleosidin, johon se on liittynyt. Tämä on tärkeätä keksinnön toteutuksessa, koska • · jotkut terapeuttiset vaikutukset saadaan vain kun annetaan yhdessä useamman kuin yhden nukleosidin johdannaista. On edullista, jos erilaisten nukleosidien deasyloituminen 47 91 764 terapeuttisessa seoksessa tapahtuu samanlaisilla nopeuksilla in vivo, koska nukleosidien optimaaliset suhteet tulevat kudoksiin samanaikaisesti. Suuri vaihtelu deasyloitumisno-peuksissa lyhyillä ketjuilla (asyyli) substituoiduilla nuk-leosideilla verrattuna pitkäketjuisilla (palmitoyyli) rasvahapoilla substituoituihin antaa mahdollisuuden valikoida asyylisubstituentit deasyloitumisen nopeuksien mukaan (tai nukleosidin toimituksen mukaan), joita vaaditaan eri tilanteissa. Keskipitkät rasvahapposubstituentit (esim. valeryyli tai oktanoyyli) lohkeavat nopeammin kuin lyhyemmät (asetaat-ti) tai pitemmät (palmitaatti) substituentit.
Tässä samassa maksauutteessa deoksiribonukleosidit sinänsä hajoavat nopeasti, esim. deoksiadenosiini 100-mikromolaarise-na konsentraationa on kokonaan hajonnut, aluksi deaminoitumi-sella inosiinin muodostamiseksi, 2 minuutin kuluessa. Niinpä voidaan ymmärtää, että antamisen jälkeen tämän keksinnön O-asyloidut deoksiribonukleosidit vapautuvat asteittain, ja tarjoavat kudoksille vapaita nukleosideja pitemmän ajan verrattuna nukleosidien saatavuuden lyhytaikaisuuteen silloin, kun on annettu emänukleosideja itsessään. Deoksisytidiinin pyrimidiinirenkaan tai deoksiguanosiinin puriinirenkaiden primäärisiin amiineihin liittyneitä rasvahappoja eivät maksan entsyymit poista kohtuullisella nopeudella.
Esimerkkejä asyloitujen nukleosidien antamisesta oraalisesti
Tarkoituksena määrittää deoksiribonukleosidien toimitus sen jälkeen, kun asyloituja nukleosideja on annettu oraalisesti, mitattiin plasman tymidiinitasot, kun oli annettu oraalisesti joko 3',5'-di-O-asetyylitymidiiniä tai itse tymidiiniä.
Esimerkki 13
Urospuolisiin F344-rottiin (350 g) istutettiin pysyvät kaula-suonikatetrit verinäytteiden ottamiseksi, ja niiden annettiin toipua kaksi päivää. Perusverinäyte otettiin, ja sitten annettiin 0,7 millimoolia tymidiiniä tai 48 91 764 3',51-di-O-asetyylitymidiiniä (DAT) letkun kautta. Verinäytteet otettiin 0,5, 1, 2 ja 4 tuntia antamisen jälkeen, sent-rifugoitiin ja supernatantti (plasma) deproteinisoitiin meta-nolilla. Tymidiinin konsentraatio plasmanäytteissä määritettiin HPLC:llä määrittämällä UV-absorbanssi.
Plasma oli tymidiinin peruskonsentraatioltaan 1-mikromolaa-rista. Kun tymidiiniä oli annettu oraalisesti, plasman tymi-diinitasot saavuttivat maksimiltaan 9-mikromolaarisen kon-sentraation tunnin antamisen jälkeen ja palautuivat peruskon-sentraatioihin 4 tunnissa. Sitä vastoin, kun annetiin oraalisesti ekvimolaarinen annos 3',5'-di-O-asetyylitymidiiniä, plasman tymidiinikonsentraatiot saavuttivat maksimissaan 80 mikromolaarisuuden 30 minuutissa ja olivat perusarvojen yläpuolella vielä neljä tuntia antamisen jälkeen. Niinpä di-O-asetyylitymidiinin oraalisella antamisella voidaan viedä paljon suuremmat määrät tymidiiniä kudoksiin (pidempänä kestoai-kana) kuin antamalla ei-johdettua nukleosidia, kuten kuvassa 4 on esitetty, jossa näkyy graafinen esitys vertailutiedoista .
Esimerkkejä kliinisestä antamisesta Altistus säteilylle
Kolme tilannetta, jolloin deoksiribonukleosidien asyylijoh-dannaiset voivat olla kliinisesti käyttökelpoisia hoidettaessa säteilyvaurioita, ovat 1) vahingossa tapahtunut altistus ionoivalle säteilylle, kuten ydinonnettomuudessa; 2) altistus röntgensäteilylle röntgenkuvauksessa; ja 3) syövän sädehoito.
Ensimmäisessä tapauksessa asyylideoksiribonukleosidijohdannaisia tulisi antaa koostumuksena, joka sopii parenteraali-sesti injektoitavaksi, jonka jälkeen annetaan oraalisesti useita kertoja päivässä annoksia, jotka ovat suuruudeltaan 0,5-2 grammaa kutakin neljää päädeoksiribonukleosidia. on *' oleellista, että kaikkien nukleosidien johdannaisia annetaan yhdessä.
« 91764
Toisessa tapauksessa, röntgensädealtistuksessa diagnostisen röntgenkuvauksen aikana, asyylideoksiribonukleosidijohdannaisia annetaan oraalisesti ennen ja jälkeen altistuksen.
Kolmannessa tapauksessa, syövän sädehoidon aikana, asyyliri-bonukleosidijohdannaiset ovat erityisen käyttökelpoisia säilytettäessä luuytimen toimintaa sen jälkeen, kun se on ei-toivotusti, mutta välttämättömästi vähentynyt säteilytyksen aikana. Lisäksi koostumuksissa, jotka on suunniteltu selektiivisesti toimittamaan nukleosidit normaaliin, mutta ei neo-plastisiin kudoksiin, asyylinukleosidijohdannaiset parantavat sädehoidon terapeuttista indeksiä (tehokkuuden suhde myrkyllisyyteen) . Samanlaisia deoksiribonukleosidijohdannaisten annoksia voidaan myös käyttää hoitamaan luuytimen vähentymistä, jonka on aiheuttanut antineoplastinen tai virustenvastai-nen kemoterapia.
Seuraava esimerkki esittää keksinnön etuja hoidettaessa sä-teilytettyjä hiiriä.
Menetelmät
Balb/c+ hiiret altistettiin gammasäteilylle (koboltti 60) an-nosnopeudella 7,3 rad/min. Kenttä mitattiin kahdesti Fricken .. annosmittarilla kentän yhdenmukaisuuden ja annoksen vakioi suuden varmistamiseksi kullekin hiirelle. 15 hiiren ryhmät saivat kokonaisannokset gammasäteilyä 675, 700, 725 ja 750 R.
Hiiret jaettiin neljään hoitoryhmään (5 hiirtä kullakin säteilyannoksella), joista kukin sai erilaisen säteilynjälkeisen hoidon:
Ryhmä 1: 0,9% suolaliuos (vertailuryhmä);
Ryhmä 2: Deoksiribonukleosidien seos (ekvimoUarinen seos deoksiadenosiinista, deoksiguanosiinista, deoksi-sytidiinistä ja tymidiinistä); '* Ryhmä 3: Seos deoksiadenosiinin, decksiguanosiinin, deoksi- sytidiinin ja tymidiinin 3,51-di-O-palmitoyyli- 50 91 764 johdannaisista, ekvimolaarisena ei-johdettujen nukleosidien annosten kanssa.
Ryhmä 4: Seos tymidiinin 5'-O-asetyylijohdannaisista (tutkittu ainoastaan annoksella 750 R).
Nukleosidit tai di-O-asetyylijohdannaiset annettiin injektoimalla vatsaontelon sisään (8 mikromoolia/0,2 ml fysiologista suolaliuosta kolme kertaa päivittäin (joka 8. tunti) 4 päivän ajan, aloittaen 30 minuuttia säteilytyksen jälkeen). Vertailuryhmän hiiret saivat injektiot, joissa oli 0,2 ml fysiologista suolaliuosta saman aikataulun mukaisesti. Hiirille, jotka saivat 5'-O-palmitoyylinukleosidijohdannaisia, annettiin 8 mikromoolia vain kerran päivässä 4 päivän ajan sätei-lytyksen jälkeen; niinpä ne saivat vain kolmasosan siitä nukleosidien molaarisesta määrästä, joka annettiin hiirille, jotka saivat joko ei-johdettuja tai asetyloituja nukleosi-de ja.
Kuolleisuutta seuratiin päivittäin 30 päivän ajan.
Tulokset ja niiden tarkastelu LD 50/30 (säteilyannos, joka tuotti 50% kuolleisuuden 30 päivässä säteilytyksen jälkeen) tässä hiirikannassa on suunnil-··. leen 650 R. Tutkituilla säteilyannoksilla kuolema tapahtui, jos ollenkaan, 12-20 päivää säteilytyksen jälkeen, mikä on luonteenomaista kuolettavalle säteilynjälkeiselle luuydinvau-riolle.
A.lhaisimmalla tässä kokeessa tutkitulla säteilyannoksella (675 R) vain 20% suolaliuoksella hoidetuista vertailuhiiristä jäi eloon; yksikään vertailueläin ei jäänyt eloon millään korkeammalla säteilyannoksella (taulukko 1). Deoksiribonuk-leosidien antaminen säteilyn jälkeen ei merkittävästi parantanut eloonjäämistä verrattuna vertailuryhmän hiiriin. Sitä vastoin eläimet, jotka hoidettiin di-O-asetyylideoksiribonuk-leosiderLla säteilyn jälkeen, setvisivät säteilyannoksista, jotka olivat kuolettavia eläimille, joille oli annettu joko 91764 deoksiribonukleosideja tai suolaliuosta (700 R - 750 R). Hiiret, joita hoidettiin 51-O-palmitoyylideoksiribonukleosidei1-la, selvisivät myös säteilyannoksista, jotka olivat kuolettavia hoitamattomille hiirille (750 R). On ilmeistä, että pal-mitoyylijohdannaiset (8 mikromoolia annettuna kerran päivässä) ovat ainakin yhtä tehokkaita parantamaan säteilytettyjen hiirten eloonjäämistä kuin kolminkertainen annos di-O-asetyy-linukleosideja (8 mikromoolia annettuna kolmesti päivässä).
Aineet, jotka parantavat eloonjäämistä annettuna säteilyn jälkeen, tekevät sen parantamalla eloonjäävien punasoluja muodostavien runkosolujen lisääntymistä ja jakautumista. On sen vuoksi ilmeistä, että keksinnön nukleosidijohdannaiset ovat käyttökelpoisia luuytimen parantamisen muissa tilanteissa, kuten sellaisissa, jotka ilmenevät hoidon jälkeen tietyillä antineoplastisilla aineilla.
Taulukko 3 Hiirten prosenttinen määrä, jotka olivat elossa 30 päivän kuluttua potentiaalisesti kuolettavan gammasäteilyn jälkeen Säteilyannos (R)_ 675 700 725 750
Hoito_Eloonjäämis-% 30 päivän jälkeen suolaliuos (vertailu) 20 0 0 0 deoksiribonukleosidit 40 0 0 0 di-O-asetyylideoksiribo- nukleosidit 100 100 100 80 51-O-palmitoyyli- deoksiribonukleos idit_-_-_-_100__
Hiiret hoidettiin luetelluilla aineilla gammasäteilyn jälkeen kuten tekstissä on kuvattu._
Haavojen parantaminen
Edistettäessä ihon haavojen parantumista (joko kirurgisten avaamisten tai tapaturmaisten haavojen), on parasta käyttää asyylideoksiribonukleosidijohdannaisia paikallisesti, joko » · 52 9 1 7 6 4 lääkevoiteessa, biologisesti hajoavissa mikrokapseleissa tai lisättynä haavapeitteisiin. Paikallisesti vaikuttavaa antibioottia voidaan antaa samalla. Mooliekvivalenttinen määrä 2-20 mg sisältävän kaikkia neljää päädeoksiribonukleosidia sisältävän seoksen kanssa tulisi käyttää neliösentille haavan pinta-alaa, tai 1-10 mg cm:ä kohti suoraa leikkaushaavaa. Haavan paranemisen aikaisimpien vaiheiden alkamista kiihdytetään erityisesti.
Maksan uudistuminen
Deoksiribonukleosidien asyylijohdannaiset ovat käyttökelpoisia edistettäessä vaurioituneen tai sairaan maksan uudistumista, erityisesti kiihdyttämään uudelleenkasvua sen jälkeen kun osa maksasta on kirurgisesti poistettu. Tässä tapauksessa johdannaisten antaminen oraalisesti on edullista, annoksina, jotka ovat molaarisesti ekvivalentteja 0,2-2 gramman kanssa kutakin nukleosidia. On tärkeätä, että kaikkien neljän pää-deoksiribonukleosidin johdannaisia annetaan yhdessä.

Claims (4)

53 91 764
1. Analogiamenetelmä sellaisen lääkeaineena käyttökelpoisen 2'-deoksiadenosiinin asyylijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava NHj ,Ac-\\ I II CH HC / R,OCH2 o ^J/H ORj H jossa R2 ja R2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on vety tai asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat gly-siini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, isoleusii-nista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinis-tä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiini-haposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, sillä edellytyksellä, ettei R2 ole johdettu leusiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että eivät molemmat ryhmistä Rx ja R2 ole H, tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoisen suolan valmistamiseksi tunnettu siitä, että 2'-deoksiadenosiini saatetaan reagoimaan asyloivan aineen kanssa.
2. Analogiamenetelmä sellaisen lääkeaineena käyttökelpoisen 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava 54 91 764
0 II HN^ '^C'"”" ^ I II CH h2n-c c / ^N7 r,och2 o _ \0/! ORj H jossa Rx ja R2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on vety tai asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, etteivät Rx ja R2 molemmat ole johdettuja butyryylistä, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat gly-siini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, isoleusii-nista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinis-tä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiini-haposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että eivät molemmat ryhmistä Rx ja R2 ole H, tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoisen suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 2'-deoksiguanosiini saatetaan reagoimaan asyloivan aineen kanssa.
3. Analogiamenetelmä sellaisen lääkeaineena käyttökelpoisen 2'-deoksisytidiinin asyylijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava nh2 vf '"CH I II 0=C CH \N/ RjOCH, 0 \ H H/ H H or2 h 55 91 764 jossa Rx ja R2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on vety tai asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat gly-siini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, isoleusii-nista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinis-tä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiini-haposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, sillä edellytyksellä, että eivät molemmat ryhmistä Rx ja R2 ole H, tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoisen suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 2'-deoksisytidiini saatetaan reagoimaan asyloivan aineen kanssa.
4. Analogiamenetelmä sellaisen lääkeaineena käyttökelpoisen 2'-deoksitymidiinin asyylijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava o R,N C-CHj I II ' 0=C CH RiOCHj o * OR, H . jossa Rj on asyyliryhmä, joka on johdettu (a) haarautumattomasta rasvahaposta, jossa on 18-22 hiiliatomia, (b) aminohaposta, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat gly-siini, L-muodot alaniinista, valiinista, leusiinista, isoleusii-nista, tyrosiinista, proliinista, hydroksiproliinista, seriinis-tä, treoniinista, kysteiinistä, asparagiinihaposta, glutamiini-haposta, arginiinista, lysiinistä, histidiinistä, karnitiinista ja ornitiinista, 91764 (c) nikotiinihaposta, tai (d) dikarboksyylihaposta, jossa on 3-22 hiiliatomia, ja R2 ja R3 ovat H, tai sen farmaseuttisesti käyttökelpoisen suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 2'-deoksitymidiini saatetaan reagoimaan asyloivan aineen kanssa.
FI893100A 1987-10-28 1989-06-26 Analogiamenetelmä asyylideoksiribonukleosidijohdannaisten valmistamiseksi FI91764C (fi)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI941245A FI97891C (fi) 1987-10-28 1994-03-16 Menetelmä 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisten valmistamiseksi

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11592387A 1987-10-28 1987-10-28
US11592387 1987-10-28
US8803824 1988-10-27
PCT/US1988/003824 WO1989003838A1 (en) 1987-10-28 1988-10-27 Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI893100A FI893100A (fi) 1989-06-26
FI893100A0 FI893100A0 (fi) 1989-06-26
FI91764B true FI91764B (fi) 1994-04-29
FI91764C FI91764C (fi) 1994-08-10

Family

ID=22364166

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI893100A FI91764C (fi) 1987-10-28 1989-06-26 Analogiamenetelmä asyylideoksiribonukleosidijohdannaisten valmistamiseksi
FI941245A FI97891C (fi) 1987-10-28 1994-03-16 Menetelmä 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisten valmistamiseksi

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI941245A FI97891C (fi) 1987-10-28 1994-03-16 Menetelmä 2'-deoksiguanosiinin asyylijohdannaisten valmistamiseksi

Country Status (15)

Country Link
US (1) US6020320A (fi)
EP (2) EP0712629B1 (fi)
JP (2) JP2637534B2 (fi)
KR (1) KR890701609A (fi)
AT (2) ATE243039T1 (fi)
CA (1) CA1329932C (fi)
DE (2) DE3855513T2 (fi)
DK (1) DK174400B1 (fi)
FI (2) FI91764C (fi)
HK (1) HK1004854A1 (fi)
IL (1) IL88204A (fi)
IN (1) IN167609B (fi)
NO (1) NO174392C (fi)
WO (1) WO1989003838A1 (fi)
ZA (1) ZA888083B (fi)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6329350B1 (en) * 1987-10-28 2001-12-11 Pro-Neuron, Inc. Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
US7776838B1 (en) 1987-10-28 2010-08-17 Wellstat Therapeutics Corporation Treatment of chemotherapeutic agent and antiviral agent toxicity with acylated pyrimidine nucleosides
US5691320A (en) * 1987-10-28 1997-11-25 Pro-Neuron, Inc. Acylated pyrimidine nucleosides for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
US6060459A (en) 1987-10-28 2000-05-09 Pro-Neuron, Inc. Enhancing blood cell count with oxypurine nucleosides
US5736531A (en) * 1987-10-28 1998-04-07 Pro-Neuron, Inc. Compositions of chemotherapeutic agent or antiviral agent with acylated pyrimidine nucleosides
US5968914A (en) * 1987-10-28 1999-10-19 Pro-Neuron, Inc. Treatment of chemotherapeutic agent and antiviral agent toxicity with acylated pyrimidine nucleosides
US5470838A (en) 1987-10-28 1995-11-28 Pro-Neuron, Inc. Method of delivering exogenous uridine or cytidine using acylated uridine or cytidine
US6743782B1 (en) * 1987-10-28 2004-06-01 Wellstat Therapeutics Corporation Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof
IE980216A1 (en) * 1989-04-17 2000-02-23 Scotia Holdings Plc Anti-virals
AU663309C (en) * 1991-02-08 2002-08-08 Pro-Neuron, Inc. Oxypurine nucleosides and their congeners, and acyl derivatives thereof, for improvement of hematopoiesis
ATE205850T1 (de) * 1991-07-05 2001-10-15 Pro Neuron Inc Behandlung der toxischen wirkung von chemotherapeutischen und antiviralen wirkstoffen mit acylierten pyrimidinnukleosiden
GB2260319B (en) * 1991-10-07 1995-12-06 Norsk Hydro As Acyl derivatives of nucleosides and nucleoside analogues having anti-viral activity
CA2150940C (en) * 1992-12-08 2007-08-21 Reid Warren Von Borstel Pyrimidine nucleotide precursors for treatment of systemic inflammation and inflammatory hepatitis
US5641758A (en) * 1993-11-10 1997-06-24 Kluge; Michael Cytarabine derivatives, the preparation and use thereof
CN101066276A (zh) 1994-07-01 2007-11-07 威尔斯塔特医疗公司 用于治疗全身性炎症和炎性肝炎的嘧啶核苷酸前体
EP0882734B1 (en) * 1997-06-02 2009-08-26 F. Hoffmann-La Roche Ag 5'-Deoxy-cytidine derivatives
US20020006913A1 (en) * 1997-11-04 2002-01-17 Von Borstel Reid W. Antimutagenic compositions for treatment and prevention of photodamage to skin
AU2090099A (en) * 1997-12-16 1999-07-05 William Darwin Garner Reduction of uv induced skin cancer by topical amines
DK2415776T3 (en) 1998-08-10 2016-07-04 Novartis Ag Beta-L-2'-deoxy nucleosides for the treatment of Hepatitis B
US6444652B1 (en) 1998-08-10 2002-09-03 Novirio Pharmaceuticals Limited β-L-2'-deoxy-nucleosides for the treatment of hepatitis B
KR100879559B1 (ko) 1999-02-23 2009-01-22 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 미토콘드리아 장애의 치료 또는 예방용 제약조성물
US6576619B2 (en) * 1999-05-24 2003-06-10 Cv Therapeutics, Inc. Orally active A1 adenosine receptor agonists
US6787526B1 (en) 2000-05-26 2004-09-07 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating hepatitis delta virus infection with β-L-2′-deoxy-nucleosides
US6875751B2 (en) 2000-06-15 2005-04-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′-prodrugs of 2′-deoxy-β-L-nucleosides
DE10117615A1 (de) * 2001-04-07 2002-10-10 Max Delbrueck Centrum Verwendung von Nucleosiden, Nucleobasen und deren Derivaten zur verbesserten Gewinnung von adulten Stammzellen
TWI244393B (en) 2002-08-06 2005-12-01 Idenix Pharmaceuticals Inc Crystalline and amorphous forms of beta-L-2'-deoxythymidine
BR0314259A (pt) 2002-09-13 2005-07-26 Idenix Cayman Ltd ß-l-2'-desoxinucleosìdeos para o tratamento de cepas de hbv resistentes e terapias combinadas
WO2009045655A2 (en) 2007-08-16 2009-04-09 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Compositions containing purine nucleosides and manganese and their uses
US8642602B2 (en) 2009-02-04 2014-02-04 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Method of inhibiting fibrogenesis and treating fibrotic disease
CA2797716C (en) 2010-04-29 2018-09-11 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. Compositions containing purine and pyrimidine nucleosides, peptides, and manganese and their uses
US9446064B2 (en) 2013-03-14 2016-09-20 Epizyme, Inc. Combination therapy for treating cancer
AU2021202658A1 (en) 2021-04-28 2022-11-17 Fondazione Telethon Gene therapy

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3847898A (en) * 1969-05-27 1974-11-12 Upjohn Co N4-trihaloethoxy carbonyl arabino-furanosyl cytosine 5'-esters
US3585188A (en) * 1969-06-16 1971-06-15 Takeda Chemical Industries Ltd Process for producing 2'-deoxyuridine
DE1941942A1 (de) * 1969-08-18 1971-03-04 Sylven Bengt Prof Dr Neues pharmazeutisches Mittel
FR2096712A1 (en) * 1970-06-29 1972-02-25 Giraux Georges Steroid/b group vitamin compsns - for prevention and treatment of skin-photosensitivity disorders
US3894000A (en) * 1971-01-27 1975-07-08 Upjohn Co Ara-cytidine derivatives and process of preparation
US3975367A (en) * 1971-06-08 1976-08-17 The Upjohn Company Arabinofuranosyl N4 -aminoacyl cytosine containing compounds
DE2147094A1 (de) * 1971-09-21 1973-04-05 Robugen Gmbh Virostatisch wirksames arzneimittel
US3991045A (en) * 1973-05-30 1976-11-09 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha N4 -acylarabinonucleosides
US4048432A (en) * 1976-05-17 1977-09-13 Parke, Davis & Company 9-(3,5-Di-O-acyl-β-D-arabinofuranosyl)adenine compounds and method for their production
FR2358155A1 (fr) * 1976-07-15 1978-02-10 Lapinet Eugene Composition pour le traitement et la prevention de l'irritation et de l'inflammation de la peau, de l'oeil et des muqueuses
US4675189A (en) * 1980-11-18 1987-06-23 Syntex (U.S.A.) Inc. Microencapsulation of water soluble active polypeptides
JPS5791994A (en) * 1980-11-26 1982-06-08 Fuji Kagaku Kogyo Kk 5'-o-(n-alkylcarbamoylalanyl)-5-fluorouridine and its preparation
DE3100478A1 (de) 1981-01-09 1982-08-12 Dr. Thilo & Co GmbH, 8021 Sauerlach 5'ester von pyrimidinnucleosiden mit antiviraler wirksamkeit, verfahren zur herstellung und daraus hergestellte arzneimittel
JPS57156418A (en) * 1981-03-19 1982-09-27 Sumitomo Chem Co Ltd Carcinostatic
JPS5849315A (ja) * 1981-09-18 1983-03-23 Mitsui Pharmaceut Inc 抗腫瘍剤
JPS58167589A (ja) * 1982-03-26 1983-10-03 Nissan Chem Ind Ltd ピラゾ−ル誘導体、その製法および該誘導体を含有する除草剤
JPS58167598A (ja) * 1982-03-29 1983-10-03 Tanabe Seiyaku Co Ltd アデノシン誘導体及びその製法
FR2536278A1 (fr) * 1982-11-18 1984-05-25 Dupont Michele Nouvelle composition therapeutique utile notamment pour la cicatrisation des plaies
DE3319282A1 (de) * 1983-05-27 1984-11-29 Gödecke AG, 1000 Berlin Verwendung von adenosin bei der behandlung von herpes
JPS59219235A (ja) * 1983-05-30 1984-12-10 Mitsui Toatsu Chem Inc 消化性潰瘍用剤
EP0151189B1 (en) * 1983-07-20 1990-01-31 Teijin Limited Antineoplastic agent
JPS6028929A (ja) * 1983-07-28 1985-02-14 Hokuriku Seiyaku Co Ltd ２’−デオキシグアノシンを有効成分とする消化性潰瘍治療剤
JPS6064907A (ja) * 1983-09-17 1985-04-13 Risuburan Prod:Kk 水性ゲル状化粧料
JPS60126220A (ja) * 1983-12-09 1985-07-05 Otsuka Pharmaceut Factory Inc 核酸成分組成物
FR2556727B1 (fr) * 1983-12-19 1990-01-19 Biostabilex Labo Pharma Nouvelles compositions therapeutiques a base d'adn a haut poids moleculaire et leur procede de preparation
JPS60174797A (ja) 1984-02-21 1985-09-09 Funai Corp Ν−アロイルチミジン誘導体ならびに抗腫瘍活性物質の毒性低下剤
AU593271B2 (en) * 1985-07-22 1990-02-08 Teijin Limited Antiviral treatments
US4762823A (en) * 1985-10-16 1988-08-09 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleosides of 5-monofluoromethyluracil and 5-difluoromethyluracil
DE3751974T2 (de) * 1986-09-22 1997-04-10 Janssen Pharmaceutica Nv Serotonin-Antagonisten zur Behandlung von Wunden
US4758533A (en) * 1987-09-22 1988-07-19 Xmr Inc. Laser planarization of nonrefractory metal during integrated circuit fabrication
US5246708A (en) * 1987-10-28 1993-09-21 Pro-Neuron, Inc. Methods for promoting wound healing with deoxyribonucleosides
JP2638949B2 (ja) * 1988-07-06 1997-08-06 トヨタ自動車株式会社 誘導電導機の制御方法
JPH0628929A (ja) * 1992-07-09 1994-02-04 Fujikura Ltd 絶縁電線
JPH0634913A (ja) * 1992-07-15 1994-02-10 Oki Electric Ind Co Ltd 密着イメージセンサの光学構成方法
JP3251060B2 (ja) * 1992-08-18 2002-01-28 電気化学工業株式会社 窒化珪素粉末
JPH06123917A (ja) * 1992-08-24 1994-05-06 Fuji Photo Film Co Ltd 写真作製装置
JP3454951B2 (ja) * 1994-12-12 2003-10-06 株式会社半導体エネルギー研究所 半導体装置の作製方法

Also Published As

Publication number Publication date
ZA888083B (en) 1990-06-27
FI941245A (fi) 1994-03-16
NO892642D0 (no) 1989-06-26
EP0712629A1 (en) 1996-05-22
DE3856557D1 (de) 2003-07-24
FI893100A (fi) 1989-06-26
ATE142221T1 (de) 1996-09-15
EP0355131A4 (en) 1990-12-05
IN167609B (fi) 1990-11-24
FI97891B (fi) 1996-11-29
DK318089D0 (da) 1989-06-27
FI893100A0 (fi) 1989-06-26
US6020320A (en) 2000-02-01
DE3855513D1 (de) 1996-10-10
DE3856557T2 (de) 2004-06-03
DK318089A (da) 1989-08-28
DK174400B1 (da) 2003-02-10
FI91764C (fi) 1994-08-10
CA1329932C (en) 1994-05-31
FI97891C (fi) 1997-03-10
EP0355131B1 (en) 1996-09-04
JPH07267981A (ja) 1995-10-17
IL88204A (en) 1996-06-18
EP0355131A1 (en) 1990-02-28
EP0712629B1 (en) 2003-06-18
JP2637534B2 (ja) 1997-08-06
ATE243039T1 (de) 2003-07-15
WO1989003838A1 (en) 1989-05-05
JP2764014B2 (ja) 1998-06-11
IL88204A0 (en) 1989-06-30
NO174392B (no) 1994-01-17
KR890701609A (ko) 1989-12-21
JPH02500373A (ja) 1990-02-08
FI941245A0 (fi) 1994-03-16
NO892642L (no) 1989-08-24
NO174392C (no) 1994-04-27
DE3855513T2 (de) 1997-01-09
HK1004854A1 (en) 1998-12-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI91764B (fi) Analogiamenetelmä asyylideoksiribonukleosidijohdannaisten valmistamiseksi
CA1321994C (en) Acylated uridine and cytidine and uses thereof
KR100309194B1 (ko) 항바이러스화합물
US5470838A (en) Method of delivering exogenous uridine or cytidine using acylated uridine or cytidine
US6297222B1 (en) Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof
EP0352477B1 (en) Use of adenosine 5&#39;-phosphat in the treatment of cancer cachexia
HU229480B1 (en) Nucleoside analogs with carboxamidine modified monocyclic base
KR20100102092A (ko) 아자시티딘 유사체 및 이들의 용도
US6348451B1 (en) Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof
US20050272687A1 (en) Stable S-adenosyl-l-methionine
US6743782B1 (en) Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof
KR930003495B1 (ko) 아실 데옥시리보뉴클레오시드 유도체 및 그의 사용
US7169765B1 (en) Acyl deoxyribonucleoside derivatives and uses thereof
KR920007395B1 (ko) 아실 데옥시리보뉴클레오시드 유도체 및 그의 사용
US20030144244A1 (en) Stable compositions of S-adenosyl-l-methionine with dextran
ES2798435T3 (es) Método para preparar nicotinoil ribósidos y nicotinamida beta-ribósido

Legal Events

Date Code Title Description
BB Publication of examined application
FG Patent granted

Owner name: PRO-NEURON, INC.

MA Patent expired