FI90551B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen sialosyyliglyseridin valmistamiseksi - Google Patents

Description

1 90551

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen sialosyyligly-seridin valmistamiseksi

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää terapeutti-5 sesti käyttökelpoisen sialosyyliglyseridin valmistamiseksi, jonka kaava on (I) OH COOR2 ______ 10 cl ° / n HO / / — OR3 (1)

OH

15 jossa R2 on alempi alkyyli tai alkalimetalli, R3 on vety tai -CO(CH2)bCH3, R4 on -CO(CH2)nCH3 ja m ja n ovat kumpikin lukuja 0-30.

Monet sairaudet, jotka johtuvat hermostojärjestel-mään liittyvistä vaurioista, ovat vaikeasti hoidettavia.

20 Näihin sairauksiin tarkoitettuja lääkkeitä ei ole paljon. Tällä hetkellä käytetään kliinisesti gangliosidia (tava-ramerkkinimi: Cronassial. Katso JP-patentti, käsittelemätön julkaistu hakemus (jota tästä eteenpäin merkitään "J.P. K0KAI":na) nro 52-34912), joka on luonnollinen gli- 25 kolipidi, ja Mecobalaminia (vitamiinityyppinen aine).

Kuitenkaan näiden teho ei ole riittävä ja siksi tarve tehokkaamman lääkityksen kehittämiseksi on suuri.

Perinpohjaisten tutkimusten, joiden tarkoituksena oli täyttää edellä mainittu vaatimus, jälkeen patentinha- 30 kijat ovat kehittäneet sialosyyliglyserolipidejä, joilla on yleinen kaava OR1 COOR2 ΧΚ’^Λ^.........

35 1 / °ι R 0 / / —OC H _ .

AcNH\A-7\ / n 2n+1 / —OC H„ , 1 , n 2n+l OR1 2 90551 jossa R1 on vetyatomi tai CH3CO-, R2 on alkalimetalli, vety-atomi tai alempi alkyyliryhmä, ja n on luku 1 - 30, ja jotka ovat käyttökelpoisia lääkkeinä hoidettaessa hermo-sairauksia (katso JP-patenttihakemus nro 62-283491).

5 Yleisesti luonnollisten yhdisteiden esterisidosten määrä on suurempi kuin eetterisidosten määrä. Sialosyyli-glyserolipideissä on kuitenkin eetterisidoksia glyserolin 1-asemassa ja 2-asemassa. Siten nämä yhdisteet eivät aina ole riittävän yhteen sopivia kehon elävien aineiden kansio sa, eivätkä ne ole aina loistavia antigeeni-vasta-aine -reaktion kannalta. Lisäksi, koska näissä yhdisteissä on eetterisidoksia, on vaikea valita sopiva suojaryhmä, kun näitä yhdisteitä valmistetaan. Siten edellä kuvatuista syistä johtuen niitä ei voida valmistaa helposti.

15 Esillä olevan keksinnön kohteena on tarjota uusi yhdiste, joka on käyttökelpoinen lääkkeeksi hermostosai-rauksiin ja joka sopii erinomaisesti yhteen elävien kehon kappaleiden kanssa ja jota voidaan valmistaa helposti.

Edellä kuvatun keksinnön kohteen saamiseksi suori-20 tettujen perinpohjaisten tutkimusten jälkeen keksijät ovat havainneet, että mainittu uusi yhdiste voidaan saada liittämällä esterisidos sialiinihappoa sisältävän lipidijoh-dannaisen glyseroliosan 1- tai 2-asemaan. Esillä oleva keksintö perustuu tähän havaintoon.

25 Esillä olevan keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi on tunnusomaista, että (a) poistetaan monohalogeeniasetyyliryhmä yhdisteestä, jolla on kaava (II) 30 OR5 COOR6 R50\/V7---η R50 / / —OR3 (II) 35 acnh^^^/ I 4 OR5 3 90551 jossa R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on XCH2CO-, jossa X on halogeeniatomi, ja R6 on vetyatomi tai alempi alkyyli, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (III) 5 OH “°r7 ——°-7Λ"0Ί ho' / / — 0R (III)

AcNH / / 4

io ^ / " 0R

OH

jossa R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä ja R7:llä on merkitys alempi alkyyli, tai 15 (b) kaavan (III) mukainen yhdiste käsitellään alka- lisen vesiliuoksen kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R2 on alkalimetalli.

Esillä olevaa keksintöä kuvataan seuraavaksi yksityiskohtaisemmin.

20 Kaavassa (I) oleva alkalimetalli R2 on edullisesti natrium, ja alempi alkyyliryhmä on edullisesti metyyli-ryhmä .

Kaavassa (I) olevat m ja n ovat kumpikin edullisesti 6 - 20, erityisesti 14 - 16.

25 Tämän keksinnön mukaista menetelmää selostetaan seuraavaksi viitaten seuraavaan reaktionkaavioon (I): 4 90551 ΓΊ rn a: ΰ ΰ 5 J - -- O G a o o // 8 8 //.1 i 10 5 \ ^ —

= ^ c? - --LJ ^ «D

\ o Λ ' - . CD ^ n rn „ a sc g U U ,-<5 EC =¥. s (N £4 ------s.

H H S V / ° o O / L$ ~ :,0 > I—I—I - ν~--3Γ ~ e (0 ' ~ a \ ^ jc <0 ^ “ S.-,-\ur >1

« V '3 3 H

-*\ -H

y.\ Ή >1 >Ί 4-1 :<0 φ ε w x: <0 >i •HP P -H Ο -H 0 >1 I—I >i M w

O -P

c c

S 0 II

5 ε xi 3—11 11 o rij £ // u m

// S

So / /--= -r

I-1-1 " ~ <D

o ~ \ > -P

£ ö-r-4. S -H

\ -S ii -H

„) CD ^ 5 90551 n n m x a:

X U O

CJ E c

—· CN CN

oi x a: x υ u ~ o o 0 o u 8 c ° O I 1 1

1 *-> I

I I / St o l> '11' m \ a \ ^ m

5c *> g> ί S

CN Ö CN

x J x

CJ N (J

o S o

U O M

^ ? I 3 « ° _ «ο —i—i y a i—1—1 -h o 8 =-ί\ a « i o* S Φ tl·! s T" -φ tö - , §/ (0 ^ I n = Ö.

' .; | 3

. o C

δ ; I 1 1

O

... SK ^

O

s 7

/ M E

t_b^ : 33 n

^ \ X X

/ U i H H

3 \Φ~φ - 8 8- a-r-^^r r-5-8 ~ > - · =5 .> O ' 6 90551

Yhdiste (2) valmistetaan esteröimällä yhdiste (1) happohalogenidin, jolla on seuraava kaava: CH3( CH2 )nCOX 5 jossa n on luku, joka on 0 - 30 ja X on halogeeniatomi, kuten tetradekanoyylikloridin kanssa, tarvittaessa ter-tiäärisen emäksen, kuten trietyyliamiinin läsnä ollessa, liuottimessa, kuten vedettömässä pyridiinissä, dikloori-10 metaanissa, dikloorietaanissa, THF:ssa, etyyliasetaatissa, DMF:ssa tai kloroformissa, lämpötilassa, joka on 0 -80 °C, esimerkiksi huoneen lämpötilassa, reaktion kestäessä noin kuudesta tunnista yhteen viikkoon. Happokloridin alkyyliosassa voi olla haara. Voidaan käyttää myös happo-15 halogenidien seosta. Saannon kannalta X on edullisesti klooriatomi. Yhdiste (1) on kaupallisesti saatavissa ja sen valmistusmenetelmä on myös hyvin tunnettu. Vaikka yhdisteen (1 ) bentsyyliryhmä voidaan korvata monella eri substituentilla, bentsyyliryhmä on kuitenkin edullisin 20 saantoa ajatellen.

Yhdiste (3) muodostetaan eliminoimalla bentsyyliryhmä yhdisteestä (2). Tässä vaiheessa bentsyyliryhmä eliminoidaan siten, että yhdistettä (2) käsitellään katalyytin, kuten Pd-C:n (palladoitu aktiivihiili) läsnä ollessa, 25 liuottimessa, kuten etyyliasetaatissa, metanolissa, etanolissa, THF:ssa tai etikkahapossa, vetyhöyryssä, lämpötilassa, joka on 0 - 40 °C, esimerkiksi huoneen lämpötilassa, ja käsittely kestää viidestä tunnista viiteen päivään.

Yhdiste (4) valmistetaan N-asetyylineuramiinihapos-30 ta (sialiinihappo). Lähtöaineena käytettävä sialiinihappo ja menetelmä yhdisteen (4) valmistamiseksi sialiinihaposta tunnetaan hyvin. Yhdiste (4) per se on myös hyvin tunnettu yhdiste ja sitä on kaupallisesti saatavissa.

Yhdiste (5) voidaan valmistaa saattamalla yhdiste 35 (4) reagoimaan monohalogenoidun vedettömän etikkahapon,

U

7 90551 kuten monokloorietikkahapon kanssa. Reaktio suoritetaan yleensä vedettömissä olosuhteissa. Liuottimena DMF on edullinen. Lämpötila on -10 °C - 40 °C, tavallisesti se on noin huoneen lämpötila. Reaktioaika on yleensä noin yhdes-5 tä tunnista kolmeen päivään.

Yhdiste (6) voidaan valmistaa saattamalla yhdiste (5) reagoimaan kaasumaisen vetyhalogenidin kanssa liuot-timessa, samanaikaisesti jäissä jäähdyttäen. Käyttökelpoisia liuottimia ovat asetyylihalogenidit, kuten asetyyli- 10 kloridi, sekä dikloorietaani ja dikloorimetaani. Vetyhalo-genidi on edullisesti kaasumainen vetykloridihappo. Kun reaktio on kyllästetty kaasumaisella vetyhalogenidilla, sen annetaan jatkua -20 °C - 30 °C:ssa noin viidestä tunnista viiteen päivään.

15 Yhdiste (7) voidaan valmistaa saattamalla yhdiste (3) reagoimaan yhdisteen (6) kanssa katalyytin, kuten elo-hopea(11 )bromidin tai elohopea(II)syanidin kanssa, liuot-timessa, kutendikloorimetaanissa, dikloorietaanissa, DMF:ssa, asetonitriilissä, CH3N02:ssa tai THF:ssa, lämpö-20 tilassa, joka on -10 °C - 50 °C, ja reaktio kestää esimerkiksi 30 minuutista 10 tuntiin. Saannon kannalta yhdisteen (6) X-ryhmä on edullisesti klooriatomi ja karboksylaatin R-ryhmä on edullisesti metyyliryhmä.

Näin valmistettu yhdiste (7) on seoksena, jossa on 25 yhdisteen o-tyyppiä ja B-tyyppiä.

Näin valmistettu yhdiste (7) saatetaan sitten reagoimaan tiourean tai vastaavan yhdisteen kanssa monohalo-genoidun asetyyliryhmän eliminoimiseksi, ja näin saadaan seos, jossa on yhdistettä (8) ja (9), ts. seos, jossa on 30 a-tyypin yhdistettä ja β-tyypin yhdistettä. Liuotin on pyridiini, etanoli, metanoli, THF tai vastaava liuotin. Lämpötila on 30 - 100 °C, edullisesti noin huoneenlämpö-tila. Reaktioaika on 10 minuutista kolmeen päivään, erityisen edullisesti se on 30 minuutista yhteen päivään.

8 90551

Yhdisteitä (8) ja (9) käsitellään alkalimetallihyd-roksidilla, kuten NaOH:lla, liuottimessa, kuten THF:ssa, yhdisteiden (10) ja (11) valmistamiseksi, tässä järjestyksessä. Reaktio suoritetaan tavallisesti jäissä jäähdyt-5 täen. Reaktioaika on noin 10 minuutista kahteen päivään, esimerkiksi noin 30 minuutista yhteen päivään.

Seuraavat esimerkit valaisevat lisää esillä olevaa keksintöä.

Esimerkki 1 10 Yhdisteen (2) valmistus (m ja n ovat 12)

Bn03 BnO- 2 “ 0H CH3(CH2)12COC£(M:246,82) - OCO(CH2)12CH3 15 1 0H kuivassa pyridiinissä LOCO(CH2)χ2CH3 C.. -H.. .. 0, 10 11 3 C38H66°5 (M:602'91> (1) (2) 3-0-bentsyyli- 1,2-di-0-tetradekano- 20 Sn-glyseroli yyli-3-O-bentsyyli-

Sn-glyseroli 4,30 g (17,4 mmol) tetradekanoyylikloridia lisät-•j tiin 20 ml:aan liuosta, jossa oli 1,27 g (6,98 mmol) yh- : : 25 distettä (1) vedettömässä pyridiinissä, ja seosta sekoi- tettiin huoneen lämpötilassa kolme päivää. Liuotin tislattiin pois ja reaktioneste liuotettiin 300 ml:aan etyyli--·*. asetaattia. Liuos pestiin 0,1 N HCl-liuoksella, kylläisel lä natriumvetykarbonaattiliuoksella ja suolaliuoksella, ja 30 sitten se kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin ja näin saatiin 6,2 g öljyistä tuotetta. Tuote puhdistettiin silikageelikolonnikromatogra-fiällä (400 g Kieselgel 60:tä (Merck Co:n tuote), heksaa-ni/etyylieetterisuhde = 20:1 - 10:1), ja näin saatiin 3,88 . *. 35 g (6,44 mmol) yhdistettä (2). Saanto: 92,2 %.

u 9 90551

Yhdisteen (2) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- raavat: 500 MHz, 1H-NMR, CDC13,TMS, δ 0,879 (3H, t, J=7,0Hz CHg) 5 0,883 (3H, t, J=7,0Hz Cä3) 1,254 (40H, m, CH2 x 20) 1,600 (4H, m, CS2'3’ x 2) 2,275 (2H, t, J=7,7Hz CH2-2') 2,317 (2H, t, J=7,5Hz C^-2') 10 3,578 (1H, dd, J=ll,6, 5,1Hz H-3) 3,602 (1H, dd, J=ll,6, 5,1Hz H’-3) 4,190 (1H, dd, J=ll,9, 6,4Hz H-l) 4,344 (1H, dd, J-11,9, 39Hz H'-l) 4,538 (2H, dd, J = 20,5, 12,1Hz φ-CH^ ) 15 5,239 (1H, m, Cg-2)

Esimerkki 2

Yhdisteen (3) valmistus (m ja n ovat 12) 20

BnO -i HO —| 3 — 0C0 (CH2) , 2CH3 -»· 2 — OCU (C-H2) , 2CH3 . : —OCO (CH2) , 3CH3 , *—OCO (CHa) , aCH3 25 CaaHeeOs (Ms 602,91) C3>H 6 o O S (m:512 ,79) ( 2 ) ( 3 ) 1,2-di-O-tetradekanoyyli-Sn-glyseroli 30 3,08 g (5,10 mmol) yhdistettä (2) liuotettiin 40 ml:aan etyyliasetaattia. 300 mg 10-%:sta palladoitua aktiivihiiltä lisättiin liuokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa vetyatmosfäärissä kaksi päivää. Reak-tioseos suodatettiin seliitin läpi. Jäännös pestiin kloro-35 formilla. Suodos yhdistettiin pesuliuoksen kanssa. Liuotin 10 90551 haihdutettiin. Syntynyt jäännös uudelleenkiteytettiin pet-rolieetteristä, jolloin saatiin 2,51 g (4,89 mmol) yhdistettä (3). Saanto: 95,9 %.

Yhdisteen (3) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- 5 raavat:

500 MHz, 1H-NMR, CDClg, TMS

0,880 (6H, t, J=7,0Hz CHg x 2) 1,271 (40H, m, Cg2 x 20) 1,613 (4H, m, q^"3' x 2) 10 2,044 (1H, m, HO) 2,322 (2H, t, J=7,5Hz C^-2') 2,344 (2H, t, J=7,5Hz 0^-2') 3,729 (2H, d, J=4,4Hz CH2~3) 4,236 (1H, dd, J=l,9, 5,7Hz H-l) 15 4,319 (1H, dd, J=ll,9, 4,6Hz H'-l) 5,082 (2H, m, H-2)

Esimerkki 3

Yhdisteen (5) valmistus (R on Me) 20 flH DMCA (OH) ' OH I f10 ΠH Ϊ U7 yn ° / cooMe : »

OH 0HCA

(4) (5) 30 Metyyli-(5-asetamidi-2,4,7,8-penta-O-klooriasetyy- li-3,5-dideoksi-ö-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosyy- li)onaatti 5,13 g (15,87 mmol) yhdistettä (4) liuotettiin 50 ml:aan vedetöntä DMF:a. 1,53 g (19,04 mmol) natriumvety-35 karbonaattia ja 20,35 g (119,00 mmol) vedetöntä monokloo- 11 90 551 rietikkahappoa lisättiin liuokseen ja seosta sekoitettiin argonatmosfäärissä huoneen lämpötilassa kuusi tuntia. Reaktioseos kaadettiin jääveteen. Liukenematon tuote kerättiin talteen suodattamalla ja liuotettiin 500 ml:aan 5 kloroformia. Liuos pestiin suolaliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutettiin. Syntynyt jäännös puhdistettiin Si02-kolonnikromatografiällä (Wako Gel C-300, CHCl3/MeOH = 50:1), jolloin saatiin 4,8 g penta- ja tetramonoklooriasetyyliä, yhdistettä (5). Saan-10 to: 43,9 %.

Yhdistettä (5) käytettiin seuraavassa vaiheessa puhdistamatta.

Esimerkki 4

Yhdisteen (6) valmistus (R on Me, X on Cl) 15

}MCA (010 A FA

OMC/U- OMCA 0i!Ci (5) (6> 25 Metyyli-(5-asetamidi-4,7,8,9-tetra-O-klooriasetyy- li-2-kloori-2,3,5-trideoksi-6-D-glysero-D-galakto-2-nonu-lopyranosyyli)onaatti 1,80 g yhdistettä (5) liuotettiin 30 ml:aan ase-tyylikloridia. Liuos kyllästettiin vetykloridikaasulla 30 jäähdyttäen samanaikaisesti jäissä, ja sitä sekoitettiin kaksi päivää suljetussa astiassa huoneen lämpötilassa. Liuotin tislattiin pois ja jäännös tislattiin atseotroop-pisesti tolueenin kanssa kolme kertaa, jolloin saatiin 1,6 g yhdistettä (6). Saanto: 94,7 %.

12 90 551

Esimerkki 5

Yhdisteen (7) valmistus (R on Me, m ja n ovat 12) MCA Hfl

5 i* L

JL r-OCOiCH,) ,,CH, 0—/Vnn<i. 0C0(CH,) i,CHj ÖJICA / / C005,e -L3 ) ci,H«.0.CM?SH 70'

AcNH \/ / ~ " ' ' *

OMCA

(6) 10

MCA

[öGMe

AcV»\/ L

Ηκιχαυ,,αι, °'!CA ^OCO(CHj) ,,CH, 15 ( 7) 3-0-[metyyli -[(5-asetamidi-4,7,8,9-tetra-O-kloo-riasetyyli-3,5-dideoksi-a- tai 8-D-glysero-D-galakto-2-nonulopyranosyyli)onaatti]-1,2-di-O-tetradekanoyyli-Sn-20 glyseroli

Seosta, jossa oli 2,5 g molekyyliseuloja 4A, 1,24 g (4,89 mmol) elohopea (11) syanidia ja 1,76 g (4,89 mmol) elohopea(II)bromidia kloroformissa, sekoitettiin 15 minuuttia huoneen lämpötilassa. Sitten suspensioon lisät-25 tiin 2,03 g (3,95 mmol) yhdistettä (3) ja seosta sekoitettiin argonatmosfäärissä huoneenlämpötilassa kaksi tuntia.

Reaktioseos jäähdytettiin jäissä. 15 ml liuosta, jossa oli 1,60 g (2,47 mmol) yhdistettä (6) vedettömässä CHCl3:ssa, lisättiin reaktioseokseen, jota sekoitettiin 30 huoneenlämpötilassa 45 tuntia ja sitten 50 °C:ssa vielä kaksi tuntia. Reaktioseos suodatettiin seliitin läpi. Suo-dos yhdistettiin pesuveden kanssa ja liuotin haihdutettiin tyhjössä. 5,1 g näin saatua jäännöstä kromatografoi-tiin silikageelin läpi (230 g Wako Gel C-300, CHCl3/:EtOH 35 = 100:1), jolloin saatiin 1,92 g seosta, jossa oli a-tyy- ti 13 90551 pin ja β-tyypin yhdistettä (7) sekä epäpuhtauksia. Koska yhdiste (7) oli epästabiili määritettäessä sen fysikaalisia ominaisuuksia (NMR), MCA-ryhmät poistettiin ja yhdisteiden (8) ja (9) fysikaaliset ominaisuudet määritettiin.

5 Tutkittaessa yhdistettä (7) TLC:ssä, havaittiin seuraavat täplät:

Re; β-tyyppinen yhdiste 0,78 (CHCl3/MeOH = 40:1, Merck HPTLC) a-tyyppinen yhdiste 0,58 (CHCl3/MeOH = 40:1, 10 Merck HPTLF)

Esimerkki 6

Yhdisteiden (8) ja (9) valmistus (R on Me, m ja n ovat 12) oSca / / ~] OCO(CHi) i jCHj OMCA -OCD(CHi),jCH, (7) 20 -OCIKCH.J.sCH,

HjC(CHj) , jOCO "

UI

25 cuoMe 0)1 ( 8 ) C,,11,.0.,N (M: 818,07) 30 3-0-[metyyli-(5-asetamidi-3,5-dideoksi-B-D-glysero- D-galakto-l-nonylopyranosyyli )onaatti] -1,2-di-O-tetrade-kanoyyli-Sn-glyseroli (8) 14 9G 551

UH

miJ ]ÖUMe y^i o -I Uh / / 5 AcN,l\/^^V -OCOOOuCH, 0” *-ΟϋΟΟ,),,[Η, (9) 3-0- [metyyli-( 5-asetamidi-3, 5-dideoksi-a-D-glysero-10 D-galakto-2-nonylopyranosyyli )onaatti] -1,2-di-O-tetrade-okanoyyli-Sn-glyseroli (9) 1,74 g (1,55 mmol) yhdistettä (7) liuotettiin 20 ml:aan EtOH:a. 0,94 g (12,35 mmol) tioureaa ja 4 ml pyri-diiniä lisättiin liuokseen, jota sekoitettiin huoneen läm-15 pötilassa neljä tuntia ja sitten kuumentaen 55 °C:ssa yksi tunti. Liuotin haihdutettiin ja jäännökseen lisättiin CHCl3:a ja se suodatettiin liukenemattoman materiaalin poistamiseksi. Liuotin haihdutettiin suodoksesta ja jäännös kromatografoitiin silikageelin läpi (Wake Gel C-300, 20 CHClj/MeOH = 10:1), jolloin saatiin 45,3 mg β-tyypin yhdistettä (8), 111,5 mg a-tyypin yhdistettä (9) ja 402,0 mg seosta, jossa oli β-tyypin yhdistettä (8) ja a-tyypin yhdistettä (9).

Saanto: seos, jossa oli β-tyypin yhdistettä (8) ja 25 a-tyypin yhdistettä (9): 44,0 %

Yhdisteen (8) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- raavat:

Rf: 0,47 (CHCl3/MeOH = 10:1, Merck HPTLC) 500 MHz, 1H-NMR, CDClg, TMS, 6 30 0,880 (6H, t, J=7,0Hz Cg3 x 2) 1,256 (40H, m, CH3 x 20) 1,600 (4H, m, CÖ2-3, X 2) 1,792 (1H, t, J=12,1Hz H-3a ax) 2,090 (3H, S, Cg3CONH) 35 2,350 (4H, m, c\±2~2' x 2) 2,479 (1H, dd, J=13,2, 4,8Hz H-3a eq) is 90551 3,783 (3H, S, COOCHg) 4,238 (1H, dd, J-12,1, 5,5Hz H-l) 4,319 (1H, dd, J=12,1 4,6Hz H'-l) 6.260 (1H, leveä, CHgCONp) 5

Yhdisteen (9) fysikaaliset ominaisuudet olivat seu- raavat:

Rf: 0,44 (CHCl3/MeOH = 10:1, Merck HPTLC)

500 MHz, 1H-NMR, CDClg, TMS

10 0,880 (6H, t, J=7,0Hz Cg2 x 2) 1.260 (40H, m, Cgg x 20) 1,590 (4H, m, CS2-3' x 2) 1,855 (1H, t, J=12,3Hz H-3a ax) 2,058 (3H, S, CH3CONH-) 15 2,300 (2H, t, J=7,2Hz C^2~2') 2,315 (2H, t, J=7,2Hz CM2-2') 2,744 (1H, dd, J=13,0, 4,6Hz H-3a eq) 3,635 (1H, ddd, J=10,3, 4,8Hz H-4a) 3,853 (3H, S, COOC|i3) 20 4,106 (1H, dd, J=12,l, 6,6Hz H-l) 4,287 (1H, dd, J=12,l, 3,7Hz H'-l) 5,145 (1H, m, H-2) 6,231 (1H, d, J=7,3Hz CHgCONg)

Esimerkki 7 25 Yhdisteen (10) valmistus (M on Na, m ja n ovat 12) -OCO(CHj) ,,CHS -- OCO(Cllj) ,,αΐ3 H3C(CII3) ,,0C0- lUC(CII3). 2OCO-

[ _J fN

30 \ I N-NaOII --- A

6^T^°/cme — elrT^D/cma

AcNII\/-7^-V AcN,l\i>r^^/

UI! OH

<8 ) (10) 35 3-0-[natrium-(5-asetamidi-3,5-dideoksi-B-D-glysero- D-galakto-2-nonulopyranosyyli )onaatti] -1,2-di-O-tetradeka- noyyli-Sn-glyseroli 16 90551 28,0 mg (0,03 mmol) yhdistettä (8) liuotettiin 0,5 ml:aan THF:a ja 0,5 ml:aan vettä. Liuokseen lisättiin 30 μΐ (0,03 mmol) 1 N Na0H:a samanaikaisesti jäähdyttäen, ja seosta sekoitettiin yksi tunti. Reaktioseos neutraloi-5 tiin pH-arvoon 8 Amberlite IRC-50:llä ja se suodatettiin. Hartsi pestiin vedellä. Suodos yhdistettiin pesuliuoksen kanssa ja seos puhdistettiin pylväskromatografiällä (Yama-mura Kagaku Kenkyujo ODS 60 A 60/200 seula, kehitysliuot-timet: H20 ja MeOH). Metanolipitoiset fraktiot otettiin 10 talteen ja haihdutettiin kuiviin. Sitten jäännös lyofi-lisoitiin, jolloin saatiin 2,1 mg (0,0025 mmol) valkoista jauhemaista yhdistettä (10) (saanto: 8,3 %).

Yhdisteen (10) fysikaaliset ominaisuudet olivat seuraavat: 15 Rf: 0,23 (CHCl3/MeOH/AcOH = 10:2:0,3, Merck HPTLC) 500 MHz, 1H-NMR, CDC13 + CDgOD (1:1), TMS 0,889 (6H, t, J=7,0Hz CM3 x 2) 1,300 (40H, m, CH2 x 20) 1,650 (4H, m, CÖ2'3' x 2) 20 2,040 (3H, S, C^CONH) 5,200 (1H, m, H-2)

Esimerkki 8

Yhdisteen (11) valmistus (M on Na, m ja n ovat 12) 25

P DU

nn P00Me COONa

Hr-1 ÖH / / IN NaOII, Oli / /

AcNll^r-^y — ocotcH,) ,acii3 30 0H *— 0C0(CH>) ,,CH3 Oli L OCOiCHj) , aCH3 O) (11) 3-0- [natrium- ( 5-asetamidi-3,5-dideoksi-a-D-glysero-D-galakto-2-nonylopyranosyyli)onaatti-l,2-di-0-tetrade-35 kanoyyli-Sn-glyseroli

B

17 90551 25,0 mg (0,03 mmol) yhdistettä (9) liuotettiin 1 ml:aan THF:a ja 0,5 ml:aan vettä. Liuokseen lisättiin 30 μΐ (0,03 mmol) 1 N NaOH:a samanaikaisesti jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin yksi tunti. Reaktioseos neutraloitiin 5 pH-arvoon 8 Amberlite IRC-50:llä ja se suodatettiin. Hartsi pestiin vedellä. Suodos yhdistettiin pesuliuoksen kanssa ja seos puhdistettiin pylväskromatografiällä (Yamamura Kagaku Kenkyujo ODS 60 A 60/200 seula, kehitysliuokset: H20 ja MeOH). Metanolipitoiset fraktiot otettiin talteen, 10 liuotin haihdutettiin ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 5,9 mg (0,007 mmol) valkoista jauhemaista yhdistettä (11) (saanto: 23,2 %).

Yhdisteen (11) fysikaaliset tiedot olivat seuraavat:

Rf: 0,12 (CHClg/MeOH/AcOH = 10:2:0,3, Merck HPTLC)

15 500 MHz, 1H-NMR, CDC13 + CD30D (1:1) TMS

0,889 (6H, t, J=7,0Hz CH3 x 2) 1,300 (40H, m, CH2 x 20) 1,650 (4H, m, cl2-3' x 2) 2,033 (3H, S, CH3CONH) 20 2,300 (4H, m, CH2-2' x 2) 2,822 (1H, m, H-3a eq) 4,170 (1H, m, H-2)

Claims (2)

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen sia-losyyliglyseridin valmistamiseksi, jonka kaava on (I) 5 2 OH COOR HÖ / — OR3 (I) AcNH\ / ^— /

10. OR4 OH jossa R2 on alempi alkyyli tai alkalimetalli, R3 on vety tai -CO(CH2)nCH3, R4 on -CO(CH2)nCH3 ja m ja n ovat kumpikin 15 lukuja 0 - 30, tunnettu siitä, että (a) poistetaan monohalogeeniasetyyliryhmä yhdisteestä, jolla on kaava (II) OR5 COOR6 20. f S R °N/yp^ 0^0η R5 o' / / — OR3 (II) AcNH \ / 4 — OR 25 0r5 jossa R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, R5 on XCH2C0-, jossa X on halogeeniatomi, ja R6, on vetyatomi tai alempi alkyyli, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (III)

30 COOR7 OH Z' -— οΛ^°-\ άο / / _or3 I111' AcNH ^ / 4 35 ^4^/ - OR OH il 19 90 551 jossa R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä ja R7:llä on merkitys alempi alkyyli, tai (b) kaavan (III) mukainen yhdiste käsitellään alka-lisen vesiliuoksen kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mu-5 kainen yhdiste, jossa R2 on alkalimetalli.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n n e t t u siitä, että m ja n ovat kumpikin lukuja 6 - 20. 20 90551 Patervtkrav